PHAN KIM NGOC (Chu bién) TAAL ain OlOmem SOL CR>) IN} CONG NGHE PT SLO ke On ea aaPHAN KIM NGQC (Chi bién) PHAM VAN PHUC - TRUGNG BINH CONG NGHE TE BAO G6c NHA XUAT BAN GIAO DUC VIET NAMLOI NHA xUAT BAN Hoivang t6i ki nigm 50 nam than lip Nha xudt bin Gido duc (1957 — 2007) va 30 nam thanh lap Nha xudt bin Gido duc tai TP. Hé Chi Minh (1979 - 2009), trong thd gian gan day, ben canh viéc xudt bin, phat hanh kip thai, déng b6 sich ‘ido Khoa va cdc logi sch tham khéo phyc vy gido dyc phé thong, Nha xust ban Gido duc con ch trong t6 chifc bién soan, xudt ban cdc bd sch tham khao ldn, cé gid tri khoa hoc va thyc tién cao, mang y nghia chinh tri, vin hod, gido duc sau sde, duge trinh bay va in n dep, goi | sach tham khdo dic bigt. Loai sch nay duge xudt ban nhim dap ung nhu cdu hoc tap, nghién cau, gidng day cia hoc sinh, sinh vién, nghién edu sinh, gido vién phé théng, ging vién dai hoc, cao dang, day nghé, cin bd nghién cau, cin b6 quan Ii giso duc va déng dio ban doc, g6p phn nang cao chat lugng gido duc, dan trl x8 h0i trong thoi ki méi, gilt gin, “xay ding va phat wién nén vin hod Viét Nam tién tién, dam da bin sdc dn tc” theo tinh than Nghi quy8t HOi nghi Trung uong 5 cia Ban Chép hanh Trung Luong Dang khoa IX, ting budc dua gido duc Viet Nam hoa nhép vai thé gigi. Tham gia bién soan mang sch tham khao dc biét Id cdc nha khoa hoc, cée nha gido, nha quan Ii gidi, nhiéu kink nghiém thug cdc linh isc kha nhau, cé uy tin dBi véi ddc gid trong va ngoai nude. Cudn Céng nghé t& bao géic md quy déc gid dang c6 trong tay fa mét trong nhang cuéin sch thubc mang séch tham khio dic biét Cong nghg té bao g6c la cudn sich chuyén sau vé 1é bio go: du tién duoc xuit ban bang Tiéng Viet. Sach dugc bién soan nhim gép phan phyc vy cho viéc gidng day, nghién cdu, hoc tap va tham khéo cia gido vién va dong dio hoc sinh, sinh vién, hoc vién cing tat cd nhng ai quan tim dén linh vc nay. Noi dung sich duge chia thanh 6 phin = Phdn 1 : Bai cutong vé té bao gc : gidi thigu vé lich si phat hidn té' bao g6c cing nhurcée khdi nigm co ban, su phan loai va gol ten cic 1é bao g6c ~ Phan 2: TE bao g6c phi : gidi thigu mot cich chi tiét va cu thé vé cic khia canh dac tinh, tiém nang cia té' bao gdc phdi cing nhu nguén va phifong phap thu han té 30 géc phéi. phan 3: Té bao géc truting thanh : gidi thigu dac tinh sinh hoc, phuong phip thu nhan, tang sinh va tiém nang Ung dung cia hdu hét cac t€ bao géc truding thanh trong co thé nhut 16 bao go than kinh, ria gidéc mac, tuy xuong, da, gan, phi, tim, mau cubng (6, cubng 160...— Phan 4 : Ligu phdp t& bao g6c : gidi thiéu vé nhung chién luge va phuong phap trong vig digu tri, t8i 120 mt 6 m6 co quan trong co thé nhut md thén kinh, tim mach, da, tuyén tuy, xuong va bénh ty mid... ~ Phan 5 : Bo quan té bao g6c : gidi thigu v8 cdc phuong phap bio quin té bao géic. Tir nhing thanh tu vé bio quin té bao géc va nhung ting dung ca nb trong y hoc, ngan hang t6 bao géc va ngan hang mau cudng r6n ra dai. Nguyen tic xy dung va hoat dong cia cic ngan hang nay dugc trinh bay trong phn nay. ~ Phin 6 : Bao Ii trong nghién cau va ung dung té bao g0c. Viéc nghién ctu va ung dung té bio g6c I mot vin dé ¢6 litn quan dén céc quy dinh dao Ii va phap It, Do do, viéc nghién cu va Ung dung nguén t& bao nay, dac biét té bao g6c hoi, cin thyc hign ding va tanh céc vi pham vé dao Ii va phap Il, Phin nay cht _g6m 1 chuong gidi thigu vé cdc yéu t6 dao Ii trong ting thao tac thu nhan, nubi cy va sit dung 16 bao géc. Xin tran trong gidi thigu Cong nghé t€ bio g6c voi quy ban doc. NHA XUAT BAN GIAO DUC.LOI NOI DAU TE bao g6c (Stem cell) dang duge céng déng xa hoi va cde nha khoa hoc quan 14m dic bigt. V6i niém hi vong to in, déng d80 céng chang dang doi theo nhiing két «qua ma céc nha khoa hoc trong va ngoai nue da dat dugc trong Finh jc nghién eC, \ing dung t€ bao g6c. Tin te vé nhiing dot phi, tién bo mdi, vé nhing thanh tuo ong nghién cfu t€ bao g6c khdng cht xudt hign trén cdc tap chi khoa hoc chuyén sau, ma con xudt hign tan céc bdo hang ngay, trén ti vi, dai phat than, internet... Ngudi ta ban thdo, tranh ludn vé bao géc khéng chl trong céc phdng nghién ctu, moi nguti cing thong tin cho ahau, tho lusr sbi ndi vé té bao a6 tai Lig higp quéc, trén phé tai chinh Walt, trong nhigu phién hop cia chinh phd, quéc hoi. Gi8i thuding Nobel nam 2007 duge tra0 cho 3 nha khoa hoc : Mario Capecchi, Matin Evans va Oliver Smithies la niisng nguti c6 lién quan mst thiét vai linh wwe té bao gc. Cho dén nay ching ta cb thé khing dinh dién mao té bao géc cé hing dac diém chinh nhu sau ‘Te bao géc 14 nhang 1 bao 6 tiém nang phat trign, ty lam mai va biét hos thanh nhiéu loai té bao binh thug khéc cBa ca thé, ching c6 thé bi d4p, thay thé cc tf bao bi chét hoac bi benh, ‘© Te bao gic tao nén mat lin wc Khoa hoc rSt dae bidt, eft chuyén sau nhung lién quan dén hau hét cdc tinh vue y sinh hoc : Hinh wwe may di bgt dé ty lau hung cchi mdi phat trién manh gan day ; t& bao g6c la van 4é If lugn sinh hac nhung 6 td ting dung rong lén ; nghién edu té bao géc doi hoi phdi dau tu nhigu tién bac, sile lyc, nhung hia hen nhiéu loi nhuan. ‘+ Nghién cau bao géc khdng chT 18 nghién cau vé sinh hge 1 bao, vige nghién iu nay phai két hap véi nghién ett sinh hoc phan td, ki nghé di truyén (genetic engineering), thao tdc t€ bao, chuyén gen... Nghién cutu «€ bao géc cong dang ket hap vai nhiing nghien cht vé ki nghé m6 (tissue engineering). ‘+ Tinh Ging dung cia t& bao gic ngay cang rd ret. Buéc déu da cé mot s6 benh nhan bj ligt tuy s6ng, tidy dutng, ding mach vanh, ung thu... duge diéw tei cé ét qua khd quan bing cong ngh¢ 16 bdo gée. # Nhidu chuyén gia vé té bao géc hi vong s@ c6 mot dyn té bao géc toan cu theo kidu dy an b6 gen ngasi (Human genome project) ma da duge thye hign thanh cong.© Viet Nam, mot s6' cdc nha khoa hoc da va dang bit tay vao nghién cit té bao 6c. Mot s6 nom nghién cau if bao gée da hink thanh. BO Khoa hoc Cong nghé da quan tm dén finh vse nay va du tu cho céc nghién cu. Mac di két qua nghién cou cn khigm tén nhuing hi vong trong tuonglai gin, cc nha kho hoc Vigt Nar cé thé dat urge nhiing thanh tyu quan trong, dc biét a trong cng dung diéu tr mot s6 bénh Cac sich chuyén dé va thong tin v6 18 bio géic & nude ta ebm rt han ché. Tréa tay cba ban doc 18 quyén sich “Cong nghé té bio géc” du tién 8 Viet Nam. Nh8 nghién cou Phan Kim Ngoc ciing véi cic déng nghiép tré tudi voi nhigt huyét vi cB péing, via nghién edu thyc hin nhidu 68 131 ve té bdo g6c vila tich luy kin thie dé bién soan quyén sich nay. Bay 13 quyén sich 6 ndi dung nghiém we hong phi, khé toan dign va chuyen siu, Céc téc gid khdng cht dé cép dén khai nig, If ude sinh hoc té bao yc, ma cdn cung ep céc ki thuat co bin vé thu nhén, niuBi cd, bigt hod t€ bao gée. Céc téc gid cing dé cap dé céc linh wie Ung dung, hang vn dé vé dao difc c6 lién quan khi nghién edu va Ung dung té bio g6c Hi vong quyén sich nay sé duge cic nha khoa hoc, sinh vién, cdc nha hoach dinh chinh sich, doanh nhan va dong dio ban doc don nhan Ban doc dang c6 trés tay “Cong nghé té bao gic". Xin hay doc, va ban sé thay nhiéu diéu bé fch, If thé, ding thoi cing s& phat hién nhing thiéu sét v8 nei dung ‘cong nhu hinh thie aia sch va gop y, trao di wai cc tac gid dé khi ti ban, sch ‘sé hodn thign hon, Rét mong duge gop ¥ va trao di “Thanh phé H8 Chi Minh, thang 9 nam 2008 GS.TS. TRUONG BINH KIET (Tnttng Bai hoc Y ~ Duge TP. Hé Chi Minh)Phan 1: DAI CUONG VE TE BAO GOCChuong 1 VALNET VE VIEC NGHIEN COU VA UNG DUNG TE BAO GOC 1. G NUGC NGOAI Vao gitta thé ki XIX, nhiéu nba khoa hoc thuc nghi@m 6 Chau Au da nhan thay ring, mot s0'té bao dong vat va vai cae tac dOng nao 46, ching c6 thé tao ra logit bao khdc trong suét qué trinh phat trién ctia minh. Vao nhitng nam dAu ciia thé ki XX, té bao géc (stem cell) that su dau tién duge kham phé khi ngudi ta nhan thay mét sé t& bao da c6 thé tao ra cae t& bao mau. Lich sit khoa hoc t6 bao géc gan lién vai tién trinh cao nghién citu vé té bao ge 4 ngudi va 6 dong vat. Dyfa vao tidm nang biét hod (differentiation potency) da dang ciia 16 bio, céc nha nghién ottu da chia té bao géc thanh mét s6 loai khdc nhau, trong dé dude dé cp nhiéu hon Ja dang té bao géc toan nang (totipotent), ching c6 nhiéu trong giai doan phat triém phoi sém. Vai té bao géc toan nang, mdi té bao ban dau cé thé hinh thanh han mét co thé hon chinh. Trong khi d6, céc t& bao gée c6 ft tiém nding hon thing duge thu nbn tai Iép té bao sink kh6i bén trong (Inner Cells Mass ICM) ciia phi & giai doan phdi nang (blastocyst), chting duge goi la té’ bao géc (phéi) van nang (pluripotent stem cell). Cac té bao néi trén co thé biét hod 46 hinh thanh ra bat ki loai t8 bao ¢6 chitc nang sinh If nao d6, c6 trong gan 250 loai tf bao ma mot eo thé con ngudi da trudng thanh cé thé c6. Lép duang bao 4 (trophoblast) Mank trong suét (Zona pellucida) Khéi té bao ben trong nner CellsMass_ICM) Minh 1.1, Phéi ngudi giai dan blastocyst (5 naay tu6i) ft tiém nding hon nita [a cac té bao géic da nang (multipotent), chiing chi c6 kha nang biét hod thanh mot s6 loai t6 bao c6 chitc nang sinh Ii nao 86. Cac 16 bao géc da nang c6 thé duoc thu nhn tit nhiéu nguén khéc nhau : mé thai,10 Phén 1 : Bai cuana vé 16 680 gée cudng rn va co thé trudng thanh... Mac di c6 gidi han vé kha nang biét hod, nhutng gan day, loai té bao nay cfing 4a duge y sinh hoc tap trung khai théc, va qua dé da dita vao ting dung rét thanh cong trong nhiéu liéu phép dua vao té bao géc (ligu phap té bao géc — stem cell therapy). Mot dau &n néi bat tla qué trinh nghién cau ting dung té bao géc la cdy ghép tuy xudng, théng qua viée sit dung cdc té bao géc truéng thanh. Vao thai ki ddu cita nhiing nam 1900, céc bac st da tiém tu} xuong vao bénh nhan anemia va leukemia. Mac di liéu phdp nay tic bay gid c6 vé chufa thanh cong trén ngudi, nhung céc két qua trong phdng thi nghiém da cho théy chudt khiém Khuyét tuy xuong c6 thé dugc héi phuc, khi ngudi ta truyén vao mau cia chting mot higng tuy xueng dugc thu nhan tit mot con chudt khdc lanh Kin. Diéu nay khién cdc nha nghién cttu tin tudng ling, ho cé thé sé thanh cng khi thu nhan. tuy xuong ti mot ngudi nay dé cdy ghép vao co thé ngudi khéc (déng ghép ~ homograft). Véi nhiéu né lyc, mét vai ca cy ghép sém da duge tién hanh & Phép, sau khi bénh nbn bj tai nan chiéu xa vao cudi nhiing ndm 1950. Tuy nhién vigc tién hanh céc ca cay ghép néi trén & ngudi di khong duge trién khai trén dién réng, khi ma céc nha nghién ctu d Phap bat dau phat hién ra mét s6 van dé bat Igi nghiém trong trong co ché midn dich cia ngui bénh. Ding thé, vao nam 1988, Jean Dausset lan dau tién phat hién cdc khéng nguyén tuong hgp té chitc mé d ngu’i (Major Histocompatibility Complex_ MHC). Sau nay, nhitng protein MHG da duge thay tén tai trén bé mat cia hau hét cdc t€ bao trong co thé trudng thanh, cho dit truéc dé (va ca hic nay), ngudi ta van thudng goi ching la khéng nguyén té bao bach cdu ngudi (Human Leukocyte Antigen HLA). Céc phan tit khdng nguyén ndi trén 8 tao cho hé mién dich cita co thé mot khé mang xdc dinh : céi nao 1a cla co thé va céi nao khong phai cla co thé. Bat cat khi nao, ca thé khong nhdn dién ra khang nguyén trén mang té bao 1a ciia ban thén th) chinh co thé s& tao ra cée phan tui khdng thé, va cdc chat hé tro khdc dé tiéu huy chinh cdc té bao “la” dé. Viee cély ghép tuy xucng gitta cdc tré sinh doi cling triing thuting dim bdo an toan han vé suf tuong hgp céc HLA gitfa ngutti cho va ngudi nhan, dé La loai cay ghép thudn Igi dau tién & ngudi. Dén nhing nam 1960, cdc bée st da c6 nhitng higu biét khé ro rang vé su tuong hgp HLA, tir dé ho cé thé tién hanh cdc ca cy ghép kha thi, gitta nhimg anh em rut khong phai sinh d6i. Nam 1973, mt nhém bac si Mn dau tién da tién hanh cy ghép tuy xvong gitta nhiing ngu®i khong cé quan hé ho hang, tuy nhién dang cy ghép nay phdi sau bay lan mdi thanh cong, Cée té bao géic cing cdn dude phét hién thong qua viéc phan tich mot kigu ung thu goi 1a teratocarcinoma. Nam 1964, cée nha nghién cifu thong bo ring, cdc té bao dan trong khdi teratocarcinoma cé thé duge tach ra, va ching van gitt duge trang thdi khong biét hod trong sudt qué trinh nudi cy in vitro. Nhitng kiéu té bdo géc nay dude biét 1a té b oma phdi, hay té bao ECChuong 1. Vai nét vé vide nghién cau va ung dung t6 bao adc u (Embryonic Carcinoma). Céc nghién citu sau nay con cho thay céc t& bao mam. (germ call) 6 ph6i (Embryonic Germ cell EG) cling c6 thé duge nudi xy va kich thich, hon nia, ching cling cé khd nang biét hod han ché thanh mot s6 kidu té bao nao dé véi nhiéu chitc nang sinh If khéc nhau. Nam 1981, cdc té bao gée phOi (Embryonic Stem cells ES) ciia dong vat 6 vi lin déu tién da duge thu nh4n tit phoi chudt béi hai nhém nghién extu hoan toan déc lap nhau : mOt nh6m cia Martin Evans va Matthew Kaufman, nhom con Igi do Gail R. Martin phy tréch. Cing ldn dau tien, Gail R. Martin da goi nhitng té bao may 1a "t6 bao géc phoi” Vao nhiing nim 1990, vie cay ghép tuy xudng da bat dau duge tién hanh mot cdch rong rai. Cho dén nay, kr thuat néi trén da gat hai nhiéu thanh céng mi man v6i hon 16 000 bénh nhén leukemia va khiém khuy&t min dich. R6 rang, liéu phép té bao géc sé con hia hen nhiéu ting dung to 1én hon thé. Nhding té bao g6c tring thanh mac di “vin liéng c6 thua chi kém em” nhung cling 66 nhiing tiém nang dng dung rat 16n trong nhidu link vue Khéc mhau, Ching da duge ching minh cé kha nang biét hod thanh nhiéu kiéu té bao ¢6 chitc nang khéc nhu t& gg martin Evans bao gan, bidu bi, xing, gide mac... Nhiing t6 bao nay ob ‘Wobe! 2007) thé rat hitu ich trong viéc sifa chita m6, cd quan bi tn thudng mot cach tric tiép cho chinh bénh nhan. Hinh 1.2, Vao gitfa nim 1998, James Thompson (thude Hai hoc Wisconsin - Madison ciia Mi) da téch dude té bao géc phoi ngudi ti lép ICM ctia giai dan phoi sdm, va Ong da phat trign ching thanh dong té bao gc phoi nguéti dau tien, Trong cing nam nay, John Gearhart ai hoc Johns Hopkins cia Mi) thu nhan céc t bao mém tir t& bao trong mo sinh duc (Primodial germ cell PGC). Céc dong 1€ bao géc van nang da duge phat trién tit cd hai nguén noi trén. Nhitng phdi nang sit dung cha céc nghién citu té bao géc nguvi da duge tha nhan chit yeu tiv cae quy trinh thy tinh trong éng nghiém (In vitro fertilization IVF). ‘Thang 3/2001, céc nha khoa hoc da thu nhan dude céc t6 bao géc ti tuy xudng chudt, sau 46 tiém ching vao tim chudt (da bi gay tén thysng). Tai cée vj trf nay, cdc t& bao géc bat dau bigt hod va phét trién thanh nhitng cd tim méi dé thay thé. Hon nifa, nhom té bao géc nay cdn di chuyén vao sdu hon dé sn xudt ra céc t® bao mach mau cn thiét, nhiue cung cé‘p mau cho chinh cae cd tim mdi duge hinh thanh. G thi nghiém néi tréx, trung binh sau 9 ngay, cdc té bao co mdi da cé mat trong 68% phén cd tim bj hv hai. Thanh cong nay vugt qué su mong dgi cia cac nha khoa hoc. Gio sif Francis Collins, thanh vién cia nhém nghiéa ctuthuéc Vién Nghién citu Quéc gia (Mi) vé gen ngudi cho biét: “Nghiéi ciftu nay mé ra hi vong cho mot ngay nao dé, ching ta o6 thé Khoi phyc dugc nhiing co tim da bi thuong tén sau mot con dau tim”. Tuy nhién, hién mdi c6 khodng 40% trigng hop thanh cOng trong trj ligu. Gée nha khoa hoc hi vong ring, nhting thit nghiém lam sang trén ngudi cé thé dugc bat dan rong hon trong vong vai ba nam tdi. Hon nita, thanh cOng nay cing difa tdi hi vong rang, nhitng te bao géc con 6 thé duge lay tit cdc déng vat khac ngoai phdi ngudi, mot van dé rat nhay cam vé dao If, dang gay tranh cai trong dit udn. Tap chf Tissue Engineering s6 thang 4/2001 da cho biét, nhém chuyén gia phdu thuat chinh hinh thudc Dai hoc Pittsburgh (Mi) tién hanh rit ma va dich ti hng, mong va bung... cia bénh nhan trong mot s6 ca mé hit ma. Sau dé, céc sinh phém nay dugc lam sach va xit If bling enzyme. Két qué cho thay rat dang nggc nhién : chi khoang 0,24 kg md da cé thé cung cap tdi 50 ~ 100 triu 16 bao c6 tinh nang tvong ty nhu té bao géc. Nhitng t8 bao thu duge néi trén da c6 thé phat trién binh thuting trong xuong, md, sun va co... ctia céc mo d cd thé trudng thanh. Hién ngudi ta dang thif nghiém trén chudt nham nghién ctu kha nang sit dung ching dé tao m6 xutong va m6 mo ciia ngudi. Tién st Marc Hedrick, Dai hoc Pittsburgh cho biét : “Ma ngudi la nguén cung cp té bao goc Ii tudng, vi né vita dé kiém Iai vita ré, dy 1a chua ké cdc tdc dung khéc trong thém mr”, Hinh 1.3, GS James Thompson Ngay 30/11/2001, hai nhém nghién cttu doc lap tuyén b6 Ldn dau tién da bigt hod thanh cOng t6 bao g6c phdi nguéti thanh céc t6 bao nao (neuron). Day 1a mét bude nhay vot, o6 ¥ nghia 1dn trong viéc tim kiém céc ligu phap nham chita tri nhitng tn thvong vé hé thdn kinh. Hai nhém nghién citu n6i trén da sit dung nhitng ki thuat khéc nhau, nhung vn cho cling mt két qua. Trong ca hai cOng trinh, cdc t@ bao géc phéi déu dude nudi trén mot bé mat dac biét va ching duge tiép xtic véi cdc loai phan tt tin hidu (nhan t6 sinh truténg) khdc nhau, tit d6 ching biét hod thanh té bao nao. Tiép theo, ngudi ta da céy cdc 16 bio nay vao no chudt. Trong nghién etfu dau tién, nhém cdc nha khoa hoc tai bénh vign Dai hoc Hadassah é Jerusalem (Israel) da bién céc 16 bao géc thanh té bao nao chi trong 6 tudn. Sau dé, ho céy chting vao nao chuét so sinh. Céc té bao nay da bidt hod thanh ba loai té bao nao khdc nhau : 6 bao hinh sao, t bao thn kinh d@m it gai va céc neuron trudng thanh. Nhém thi hai do Su-Chun Zhang va cOng si tai trung tém Waisman, Dai hoc Wisconsin, bang Madison (Mi) thuc hién cing 6 duge céc thanh cong tuong ty.Chuong 1. Vai nét v6 vibe nghien clu va ing dung t6 bao g6c 13 Vao nam 2003, cdc nha nghién citu 6 Vién Whitehead tuyén bé, ho dé thanh céng trong vide sit dung céc té bao g6c phoi biét hod thanh céc té bao don b9i (n), 46 chinh 1a céc giao tit (gamete). Ho thily ring, céc té bao géc phoi bat ddu biét hod thanh cac té bao mdm phdi va sau dé chting tiép tuc bi6t hod 48 cho ra cac 16 bao dein bOi. Khi duge tiém vao tring, nhiing tf bao dan boi néi trén sé két hgp b6 gen vdi tritng, sau d6 ching tiép toc phat trién thanh cc ph6i blastocyst in vitro hoan chinh. ‘Thang 4/2004, céc nha khoa hoc Australia di phat hién ra m6 rang sita cing la mét nguén cung cép té bao gic quy gid, mét ngay nao dé, ching sé duge y hoc sit dung 46 chia tsi nhitng cain bénhhiém ngheo, hay sita chita céc bd phan quan trong trong co thé ngudi. Cac nha khoa hoc thudc Vién Hanson, Bénh vién Hoang gia Adelaide cdn cho biét thém, tuy rang sita c6 ngudn t& bao g6c rat phong phi va viéc khai théc ching cing dé dang hon nhiéu so vai vide chiét xuét, phan lap tir phdi hay bao thai ~ mOt vain dé dang tranh cai, lién quan d€n dao dic sinh hoe. Ngay 19/5/2004, ngan hang té bao géc phdi thai déu tién trén thé gidi chinh thtte dugc khai trudng tai Hertfordshire (Anh). Ban dau, ngan hang nay chi liu git hai dong t6 bao g6c phOi cia ngudi, sau d6 ching diye céc nhom nghién citu thugc Dai hoc London va Trung tam Sy sdng 6 Newcastle tiép tue phat trién. ‘Théng 8/2004, mot hudng di mdi trong vide didu trj bénh tiéu dugng 4 hé mé khi céc nha khoa hoc tai Dai hoc Toronto (Canada) da phat hign nguén cic té bao géc trong tuyén tuy ciia chudt. TS bao g6c c6 thé phat trién thanh té bao chic nang ¢6 kha nang san xuét insulin. Theo Simon Smukler, tru@ng nhém nghién cifu, cc nha khoa hoc d@ danh nhiéu thai gian va cong stic dé tim kiém té bao gc d céc dao tuy. RO ring vidc phat hién ra cdc t6 bao g6c c6 trong tuy cia ngudi trudng thanh sé rat c6 ¥ nghia trong tong lai, dac biét vdi cdc bénh nhan tiéu dung type 1. Hinn 1.4. ‘Théng 9/2004, céc nha Khoa hoc da nghién citu Gs Mario A, Capecchi trén m6t nhém bénh vé mat goi 1a bénh sdc t6 vong (Nobel 2007) mac (céc té bao vong mac theo thoi gian bj thodi hod), bénh nay lam giam thj luc va thém chi gay mud. TH1¢ 8 ngutdi mac bénh nay 1a 1/3500, va rét ti6e, hién y hoc chita c6 li¢u phép chita tri mao t ra hits hin, Martin Friedlander thudc Vién Nghién cu Scripps (tai La Jolla), Califonia va cs da khai théc mot dong té bao géc tit tuy sOng chudt trudng thanh, sau d6 ho tiém ching vao mat chudt mdi sinh méc bénh vong mac. K6t qua la cdc 16 bao géc nay d8 gittp ngin chan su thodi hod mat cia chudt. Géc nha khoa hoc nhn thay t6 bao géc dé hinh thanh nén cdc t bao hinh nén (loai té bao4 Phan 1: Bai euong vé té bao ade gitip nhan biét mau s&c va tao thi gide tét & dong vat c6 vi). Mat cla nhing con chudt duge chia tri da cdm nh4n ditgc anh séng chiéu vao, trong khi dé, nhiing con chudt khéc déi chiing khong dude chifa tri bang phudng phap néi trén thi ching hoan tean bj ma, Thang 12/2004, lan dau tién cdc nha khoa hoe da phyc hai dude kha nang van déng, di lai cho Hwang Mi-Soon, mét ngudi khéng may bj bai liét trong. suét 20 nam trie dé, Mot ki tich y hoc da didn ra sau khi ho ding té bao géc lay ti mau day r6n dé phuc héi day than kinh cét sdng bi tén thudng cia bénh nhén néi trén. Céc nha nghién ciu tai Dai hoc Chosun da tach (6 bao g6c tiy mau day rén ngay sau khi thai nhi chao d¥i, $6 16 bao géc nay duige bao quan trong hé thong lanh su va diige xi i, nu6i nhan sinh khéi trong mot thai gian, Sau dé, chiing duge ti¢m vao b6 phan bj tén thdng trén day thdn kinh cOt séng cia bénh nhén. Mét thai gian khéng lau. diéu ki diéu da xay ra : ngui phy nit nay da Aéi phuc khé nang vén déng, chi di lai nhanh ahen dén khdng nge. Vao thang 3/2005, nhiéu nha khoa hoc Mf da tim thay mQt ngudn té bao g6c rét phong phi, dé chinh 1a céc nang téc cia ngudi trudng thanb. Lau nay, viéc khai thac nguén té bao g6c vdn dugc xem la con nhiéu chudng ngai, dac bigt la van dé dao dite xung quanh viée ngui ta phai lay t& bao g6c tt phoi ngudi, Téc von moc ra tit cdc nang, va té bao nang duidc hinh thanh tis mot toi té bao géc nm ngay bén canh nang. Mét sé nghién cttu da ggi ¥ ding lowi té bao g6c nay dé tri bénh h6i. Phat hign mdi nhat vé té bao géc nang téc la kha nang cé thé phat trién chting thanh c4c té bao than kinh, Yasuyuki Amoh, Dai hoe California cho biét cdc t€ bao géc nay c6 thé sé duge ding trong didu tr} cdc bénh vé than kinh trong tuong lai. Amoh va cong sif cdn cho biét thém cac t& bao géc tit nang cua léng cing moc g4n mém cia chudt da tiét ra mot chat dugc goi la nestin- day chinh 1a nhan t6 théng tin, mot higu lénh “sai khii bude té bao géc phat trién thanh neuron. Khi cay ghép céc té bao géc nang toc néi trén vao phia dudi da chudt, ching da phét trign thugn Igi thanb cdc té bao than kinh. Kh6ng nhitng thé, chiing cdn trd thanh céc t& bao da, t6 bao co tron va ca té bao melanocyte.. Dén théng 10/2005, hai phuong phdp du6i day da dude thyc hign thanh cong trén chuét thf nghiém khién cé¢ nha nghién cifu lac quan rang, cdc quy trinh nay c6 thé sém duge 4p dung dé tai tao cdc té bao va mé cia con ngutti. Trong cdng trinh dau tién dugc cng bé chi tiét trén tap chi Nature, céc nha Khoa hoc tai Vién Cong nghé Massachusetts da tfc ché hoot dong cia gen Cdx2 & phoi chudt. Vide lam nay lam ngan can qué trinh hinh tharh mot ldp té bao duige goi 1a trophectoderm (duéng bao), va vi vay ngin khéng cho phdi bam vao thanh td cung va cuéi cing, phéi dy khong thé tré thanh nhitng déng vat sng. Cdc nha nghién cifu da khdng dinh ring, da vay céc phi nay van c6 thé song va sn wudt nhtng té bao géc binh thuting.Chuiong 1. Vai nét vé vibe nghién clu va ung dung 16 bdo g6e 16 G céng tinh thit bai, céc nha khoa hoc da tién hanh mét nghién cifu thong qua sinh sdn dé thu nhaén té bao giéng phoi. Phuong phap nay gidng véi quy trinh sinh thiét phdi phuc vu chan dodn di truyén giai doan tién lam té va duge tién hanh trén chudt. Bau tién, ngudi ta sinh thiét dé thu nhan mdt té bao don tit phoi (phan cdn Iai ciia phoi duge cy vao tit cung cho phat wién thanb cA thé mdi binh thudng). TS bao thu nhan néi trén dugc tang sinh, tif dé sén xudt ra nhiéu té bao g6c. Young Chung, mét trong nhftng ngudi phy tréch dy 4n cho bit: “Nhitng 1é bao g6c duge san xudt theo cach n6i trén v6 kha nang tao ra moi t@ bao trong co thé, KE gg Giver Smithios cd té bao than kinh, té bao xudng va té bao tim..". Ca (Nobel 2007) hai nh6m nghién ctu néi trén déu khang dinh : nhong ki thuat thi nghiém 4 chugt han ton, cé thé ap dung thudn Igi trén ngudi trong mot tuong lai gén. ‘Thang 04/2007, nhém nghién ctu thudc Bénh vién Harefield (Anh) lin dau tién da phat trién duge m6, mét phan ctia tréi tim nguédii tir té bao géc, Cac cudc thit nghiém trén dong vat du kién dugc tidn hanh trong nam nay va sit thanh cOng ciia ching s@ m@ ra kha nang sit dung m6 thay thé trong cdc ca gidi phdu céy ghép cho ngutti bi bénh tim cé 18 chi trong vong vai ba nam téi day. Theo t Guardian, nhém nghién citu (do bac st phdu thuat tim M.Yacoub ding du) da trich xudt té bao géc tit tuy xuiong va nudi dudng ching thanh t® bao van tim. Sau dé chiing duge dat vao nhiting “kung” Yam bling collagen, tit 46 hinh thnh tron ven mo van tim, Céc nha nghién ctu d Anh nhén thy van tim ma hg phat trién dugc c6 thé hoat dong binh thutmg, ging nhu nhiing van tim nigutti thife thy, Ngudi ta dang hi vong su sdc ring, o6 thé ché tao thanh cong ‘mot tréi tim ngu@i hoan chinh va khde manh tit 16 bao g6c, chi sau khoang 10 nam nia. Hinh 1.5, ‘Thang 05/2007, nit bac st Cinzia Marchese, mot chuyén gia vé bénh Ii hoc lam sang va cong nghé sinh hoc, thuéc Bai hoc University Sapienza d Rome, da cOng bé tao ra céc mé 4m dao bang té bao géc trong phong thi nghiém a8 cay ghép cho nhitng phy nit khong ¢6 4m do, Phat biéu vdi bao cht, Marchese cho biét, cugc phdu thuat déu tién ghép mo am dao da dutge thuc hién thanh cOng véi mét phu nit 28 madi vao ném 2006, Neudi phy nd nay dude ghép mot ménh nhé niém mac é bd phdn sinh dyc va sau d6, cc mo niém mec duge hinh thanh va phét trién thanh mot 4m dao lanh mank, Ba nhdn manh “Didu ma ching t6i lam la ldy mot mau sinh thiét khodng 0,5 cm tit ngi ma am dao sé hinh thanh, sau d6 ding mot enzyme phaa gidi mdu sinh thiét nay va dé céc t& bao géc ty sin sinh ra nhiing mo niém mac méi”, Cinzia Marchese con cho biét them phéi cd khodng 15 ngay dé c6 duge mot lép mo dui day, dam bao cy ghép cho bénh nhén.16 v6 16 bao gb Thang 6/2007, cdc té bao géc lay tit tuy xudng dan ng c6 thé duge diéu chinh thanh nhitng yéu t6 twang ty nu tinh trang chua trudng thanh. Phat hidn trén 8 md ra hudng méi cho viée didu tri vO sinh nam c6 hieu qua hon. “Mue tidu cita ching toi la thtic déy céc té bao tién tinh tring nay phat trién than tinh tring trudng thank, va diéu d6 sé con phai mat 3 - 5 nam thi nghiém nifa”, Karim Nayernia, truéng nhém nghién citu tai Dai hoc Gottingen (CHLB Diic) phat biéu. Truéc day, Nayernia da nudi céc té bao tinh tring ty tuy xuong chu6t va sit dung chiing dé thu tinh cho tring. Nghién ctu nay da tao ra nhiing con chudt sng, Néu phutong phép n6i trén thanh cong, ching c6 thé mang lai kha nang lam cha cho nhitng ngudi din éng v6 sinh, ma céc phwong phép tri kigu trudc dé da khong dem lai higu qua. MOt nghién citu méi day cia céc nha khoa hoc MI (théng 9/2007) cho thay rang, tinh hoan cla nam gidi cé thé san sinh v6 sé té bao géc — day von la nhiing ‘6 bao tién tinh tring chia thudn thuc, ching c6 thé sé duge sit dung dé chita tri nhiéu loai bénh. Shahin Rafii va cOng sy thudc Dai hoc Y khoa Weill Cornell 4 New York (M1) hi vong ring, céc té bao loai nay c6 thé déng vai trd ging nhu céc té bao g6c duge tao ra tit phOi ngudi. Céc thi nghiém thu 16 bao géc dang nay da thanh cOng trén chudt va céc nha khoa hoc dang xtc tin nhiing thi nghiém tuong ty trén ngudi. Cac tac gid clia cong trinh nay con cho biét thém : “Tat nhién la van con khéng it khé khan, chting toi phai o6 gang tim ra nhitng té bao g6c nhu thé & con nguai, va déng thai phai khém pha duge co ché ciia vige té bao géc ciia tinh hoan tré vé trang thai té bao géc cia phéi”. Theo Seandel, viéc khai théc nguén té bao géc dang phéi tif tinh hoan la mot inh vye nghién cxtu ting dung rét thye té, vi tinh hoan 1a cd quan sdn xudt ra tinh tring va khi tinh tring gap tritng chin thi viée thu tinh s8 xdy ra, phdi dugc hinh thanh, tit d6 tao nén mét co thé c6 day dii céc bé phan hoan chinh, lanh manh, Vao cuSi nim 2007, hai cng trinh dic sde gin nhif duge déng thoi cong bé (online) ciia cée nha khoa hoc Nhat (Shinya Yamanaka) va MI (James Thompson), vé viéc tao ra céc dong té bao géc phdi hoan toan méi (mot cach goi dai thé 1a té bao gée nhan tao — Artificial stem cell). Ching chinh la cée Té& bao géc van nang cdm ting (induced Pluripotent Stem cells iPS cells) : day a mot thuat nga méi dé chi cdc té bao gc van nang duge tao ra nhd cdm ting bing c4ch chuyén 4 gen kich hoat (thong qua céc vector virus) vao t6 bao Hin 1.8. soma, va qua dé, céc gen la bat ching phai tai thiét lap GS Shinya Yamanaka chung trinh (Epigenetic reprogramming) dé tgo ra loai t6 bao c6 dic tinh gidng vdi té bao géc thu nhan & phdi va chting hon han céc dang t@ bao gc truing thanh.Chong 1. Vai nét vé vige nghién cuu va _Ung-dung t6 bao gBe 17 V6i muc dich va ¥ nghia tuang ty, vao cudi nim 2008, cng ti Stem Cell Sciences plc (AIM : STEM, ASX : STC) da cng bé trén tap chi PloS Biology mot ki thuat méi do Austin Smith va cOng sy (Bai hoc Cambridge) thyte hién, nhlim ti thiét lap chiteng trinh té bao géc dong vat c6 va thanh 16 bao géc van nang cdm ting (iPS cells). 6 cng trinh nay, cdc nha khoa hoc chi stt dung 2 gen chuyén (thay vi 4 gen nhu trudc day), Tién xa hon, nhém nghién citu cia GS Rudolf Jaenisch (Phdng thi nghiém Whitehead Member Rudolf Jaenisch) tién hanh thao téc dé chuyén chi mot gen, ho cling cho két qua tucng ty. Tuy higu sudt chita mI man, nhimg dé ti nay @4 gop ca 4 gen vao lam mét nhém, diéu nay gitip han ché viée sit dung qué nhiéu virus (theo PNAS, online between December 15 and December 19 “Reprogramming of murine and human somatic cells using a single polycistronic. vector”) M6t c6ng trinh gfn day (Tap chi Cell 6/2/2009), cho thay Hans R. Schéler va cOng sit da tao té bao iPS thanh cong bing cach chuyén mot gen doc lap (Oct-4) vao té bao gc than kinh, Vi té bao chi cin chuyén 1 nhan t6 nén goi la té bao g6c van nang cdr ting 1 nhén t6, viét tat la 1F iPS (1 factor induced pluripotent stem cell). Day la mot phat hign méi rat c6 ¥ nghia : 1F iPS ging hoan toan té bao 6c phi in vitro va in vivo. N6 c6 thé biét hoa thanh 16 bao g6c than kinh, 16 bao co tim, té bao dong mam sinh duc in vitro... ‘Theo Popular Science 10/2008, mOt cong trinh doc déo khéc cing duge cOng b6 trong nam 2008 (Tap chf Nature Medecine) : tdi tao qua tim cia chudt bang t6 bao géc do Todd McAllister va cong sy, thugc cong ti ki thugt té bao Gytdgraft tai California tién hank. Cong trinh nay mang lai niém vui én cho nhiing bénh nhan tim mach va da duge cdc bac si, céc nha bénh hoc dénh gid cao vé kha néing ting dung. ‘Nguti phu nit Clombia xinh dep, Claudia Castillo 30 tuéi a di vao lich sit khoa hoc té bao géc khi chi 1a bénh nhén dau tién duge t4i tao mot co quan ndi tang hoan chinh (khf quan) bang té bao géc cia chinh minh. Tap chi y hoc The Lancet ra ngay 19/11/2008 cho biét, nhiing théng sau phdu thuat (tai Bénh vién Barcelona, Tay Ban Nha), site khée cia Castilla didn bién khé tt. Chi néi : r “Toi timg 1a mot phu ni bénb tat, gi day toi da cé thé sng m6t cudc séng binh thing”. Céng trinh mang tinh —Hinh 1.7. Bénh nhan dot phé nay duge thyc hién bdi nhém nhiéu nha khoahgc Claudia Castilo. cia Anh, Y, Tay Ban Nha do bac si Paolo Macchiarini, tru@ng khoa Phu thuat nguc dé xudt. ‘2keTEBAOGOG18 Bee Phin 1 -Oai cucng vé té bao ge Nhiing ca phau thuat kiéu nay sé phé bién han trong tong lai, mé ra co Gi cho nhiing nguéi cé nhu cdu thay néi tang ma khéng phi lo ngai vé nguy cg théi ghép. Cac nha khoa hoc con dé cAp dén kha nang thay thé nbitng co quan phitc tap hon nhw tim, gan, than... Hai binh nhan khac (mét nguéi Dite va mot ngudi Mi), hién dang cha dé duge ghép khi quan, song sé ngudi sé duge citu sng trong tung lai co thé 1é (tc 1A nha khoa hoc TE bao géc. dén hang ngan. 1 Theo Time/ Science Daily, trong s& cc sv kién khoa hoc cong nghé néi bat ctla nim 2008 cdn c6 céc cong trink : tao neuron tit té bao gc trudng thank do cdc nha khoa hoc thudc hai trutng dai hoc Harvard va Colombia (M1) thu hign thanh cong. Nghién cfu nay 6 tinh bude ngoat trong y hoc, giip chifa tri higu qua cho nguti mde bénh Lou Gehrig (ALS - bonh lam té ligt hé than kinh trung wong) trong tuong lai. Can bénh veo xuong sdng 6 tré so sinh kha phé bién, nhat la vai bé gai, trung binh, cif 1000 tré em thi cd ti 3 - 5 tr mac phai, Can bénh nay thuéng dé lai nhiing hau qua rat ldn, c6 thé tac déng dén tim, phdi. Moi day cae nha Khoa hoc da tm ra phuang phép cho higu qua rat cao : sit dung t6 bao géc tu than thu tix xuong tay dé diéu tri. Ngay 23/1/2009, td Medical News Today dua tin co quan FDA (Food and Drug Administration) cba Mi da chap nhén cap gidy phép cho viéc thit nghiém sit dung té bao g&c phéi ngudi trong tri liéu, Céng ti Geron Corporation sé thyc hién thit nghiém nay trén 8 — 10 bénh nhan tén thong cét séng khéng thé di lai dugc. Mi bénh nhén s@ dude tiém céc té bao géc phdi trong hai tudn. Day 1a mét su kién dac biét Cac nha Khoa hoc MT dang trong dgi nhiéu han @ Téng thong Barack Obama, néu nhu 6ng mé rong han nifa cdc diéu luat lién quan dén vige kich Ie nghién cifu té bao géc phdi, nhiim dua vao tri ligu tai qudc gia nay. (6m tt mét sO thanh tu nghién cite va dng dung té bao géc trén & gidi nhut sau ~- Vao nhang nam 1960, Joseph Altman va Gopal Das dé dua ra cdc bling ching vé sy phat trién nhang té bao than kinh mdi d ngudi trudng thanh, cdc tac gid d8 nghj coi dé 1a su hogt dong cia chinh céc 16 bao géc trong mé nao. — Nam 1963, Mc. Culloch va Till da mé td sit hién dién ctia mét loai té bao Khu tr trong tuy xuong chudt, dac diém cla té bao nay 1a ching 6 kha nang ty lam méi. - Nam 1968, tién hanh cdy ghép thanh cong tuy xutong gitta cdc anh chi em ruét trong diéu tri bénh SCID. - Nam 1978, cdc té bao géc tao mau lén déu tién dugc phat hién co trong mdu cudng rn ngudi zacTeRAOGOCChuang 1. Vai nétvé vibe nghiée cuu va Ung dung a) bao - Nam 1961, cdc 18 bao géc phéi chudt duge thu nhgn tit Idp sinh khéi ben trong bdi Martin Evans, Matt Kaufman, va Gail 8. Martin. Gail Martin da goi cdc té bao dé la “TE bac géc phdi” (Embryonic Stem Call). - Nam 1992, cdc té bao géc thdn kinh nguai duge nubi cdy in vitro thanh céng. - Nom 1997, bénh Leukemia duigc biét bdt nguén tit cdc té bao géc tao méu, va qua dé, Ién du tién ngudi ta dua ra bang ching truc tip vé té bao g6c ung thi. Nam 1998, lén dau tién, James Thomson va céng su (Dai hoc Wisconsin - Madison) da thu nhgn dugc dong té bao géc phéi ngudi. ~ Véo nhitng nam 2000, nhiéu cong trinh vé tinh mém déo cia t& bao gée truéng thanh dé dude béo cdo. - Nam 2001, lén dau tién, cdc nhé khoa hoc tai Advanced Cell Technology da nhén ban thanh cong phdi ngudi (190 phdi giai doan 4 ~ 6 1€ bao), nham mue dich khai thdc té bao géc phéi, ting dung trong tri ~ Nam 2003, Songtao Shi (Vién NIH) phat hign nguén té bao gdc trudng thinh mdi ¢6 trong rang sita cita tré om = Nam 2004 - 2005, nha nghién ctu Han Quoc, Hwang Woo-Suk tuyén bo dé tao ra mét vai dang té bao géc phéi ngudi tif cdc tring nguti chua thy tink. Tuy nhién, sau nay, két qué néi trén ctia Sng bi phil nhan = Nam 2005, céc nha nghién cit & Bai hoc Kingston (Anh) da tuyén b6 phat hién trong mdu cudng rén mét loai té bao géc giéng té bao géc phéi, ching duge thu nhdn va goi la ede té bao CBEs (Cord-Blood-derived Embryonic-like stem cells), Nhém nghién citu nay cing dé thanh cong khi tht nghiém bi@t hod cde t& bao géc néi trén thanh cdc té bao cé chife nang sinh li trudng thanh. - Thdng 7/2005, Phan Toan Thang tai Dai hoc Quéc gia Singapore da phdt hién ra mét ngudn té bao géc mdi, thu nhén ti mang lét cia day rén nguei. TE bao géc tit ngudn nay cé khd nang ting dung cao trong diéu tzj cdc bénh nh béng, loét khé Idah, loét tiéu duong. - Thang 8/2006, tap chi Gell cong bé Kazutoshi Takahashi va Shinya Yamanaka da cém ting cdc nguyén bao soi trudng thanh va nguyén bao soi 6 phéi chuét, bang cdc nhan t6 xdc dinh thanh cdc té bao géc van nang, goi la cée 8 bao géc van néng cém ting (induced pluripotent stem cell_ iPS). = Thang 10/2006, cdc nha khoa hoc Anh da tao ra té’ bdo gan déu tién cdc t8 bao géc mau cudng rén. = Thang 1/2007, cdc nha khoa hoc & Dai hoc Wake Forset (ding ddu la Anthony Atala) va Bai hoc Harvard bdo cdo phat hién indt kiéu té bao g6c mdi c6 trong dich 6i, ching khdc vdi té bao géc phéi, co thé sit dung chting trong nghién cttu va liéu phép.7 Phan 1 Dai cuong vé té bac ~ Théng 6/2007, cdc nghién citu duge béo cdo bdi ba nhém khéc nhau cho thay cdc t& bao da binh thudng co thé tdi thiét lap chuong trink thank cde té bao giai doan phéi d chuét. Trong cing thdng nay, Shoukhrat Mitalipov bio cdo thanh cong trong viée tao ra dong 16 bao géc link trudng, thong qua ki thudt chuyén nhan té bao sinh dudng. - Thang 10/2007, Mario Gapecchi, Martin Evans va Oliver Smithies da nhGn gidi thuéng Nobel vé y sinh hoc cho cdc thank tyu nghién citu vé té bao g6c phéi trén chudt, khi sit dung chién /egc nhdm muc tiéu gen (gene targeting} dé cudi cing, tao ra cdc ed thé con bién déi di trayén mong mudi. - Thang 11/2007 : cdm ting té bao géc van ndng te nguyén bao soi ngudi trudng thanh bang cdc nhdn t6 xdc dink cha Shinya Yamanaka va cong swt (Tap chi Cell). Cang thai diém nay James Thompson va céng sy, Dai hoc Wisconsin (Tap chi Science) tao ra “dong 6 bao géc van nang dugc cém ting tit té bao soma cha nguai”, - Thang 2/2008, Tap chi KT thudt Sinh hoc Tu nhién thong bio nhém nghién ctu cia Emmanuel Bactge, thuée hang Novocell (San Diego, Hoa Ki), bién di té bao géc phéi ngudi thanh té bao sdn xudét insulin, cdc té bao nay dé duge thit nghiém diéu trj tiéu duéng cé khd thi trén mé hinh chudt bénh Ui. = Trong nam 2008, mét loat cdc céng trinh vé iPS duge cong bd, cdc thénh tyu nay md ra hudng ting dung mdi, hiéu qué va it dung cham tdi deo Hi sinh hoc. ~ Cuéi ndm 2008, bénh nhén déu tién trén thé gidi duoc diéu tri thanh cong bang cong nghé cdy ghép mé hodn chinh tir té' bao géc ma khéng lo ngai bj thai loai PRONG NUGC Chi trong vong vai nam tiép can va nghién cifu ving dung, vdi su of géng Ién lao, cdc nha khoa hoe, c&c bac si, nha quan Ii, céc bénh vién, cd quan thong tn bao chf va cA céc doanh nghiép Vit Nam, it nhiéu da chung site phac ra ddi nét chdm pha vé mét nén cong nghé mdi, hién dai va co thé day nang Iuc phat trién, ving dung tai nuéc ta. Von duge coi 18 mot trong c4c huéng nghién cifu mai nhon, ndy sinh tir trong long cia mét nén Cong nghé Sinh hoc non txé, Cong nghé té bao géc hién nhién cing 43 chém duge xa hoi quan tam, mac du s¥ quan tam ay mdi chi bat dau, cing nhut méi 4 mét mite dé nhat djnh. Ngay 22/12/2006, tai Trung Dai hoc Y ~ Dude Tp. Hd Chi Minh, dui sit chii tri cia GS Pham Manh Hing va GS Truong Dinh Kiét, cudc h6i théo dau tién vé té bao g&c 4 Vidt Nam da dién ra s6i néi, véi suf c6 mat cla gan 100 nha khoa hoc trén cd nude. Véi tiéu dé “TS bao géc — tiém nang va tingChuong 1. Vai nét v6 vige nghien eiu va_ung dung té bao a6e at dung tai Viét Nam", hoi nghj dé thé hien quyét tam cao trong vige phat trién cong nghé té bao géc & mi6c ta, Viée ghép t€ bao tao méu tug xutdng cho bénh nhan bi bénh bach cau dong tuy duge thyc hién Jn dau tien 4 Vigt Nam vao thang 7/1995, va ghép té bao g6c tad méu ngoai vi didu tx} bénh nhan bj bach cdu cap dong tuy cfing dé thanh céng tai Trung tam ‘Truyén mau va Huyét hoc, Tp. Hé Chi Minh. Cho téi nay, viée ghép té bao géc tao mau tit mau cudng r6n hién da cho két qua kha quan & Thanh ph Hé Chi Minh, ‘Hué va Ha Ndi. GS Trin Van Bé. la ngudi dau tién 6 Viet Nam sit dung thanh cOng té bao g6c diéu tri bénh trén ngwdi. V6i phutong phép ghép tuj xuung, té bao g6c méu ngoai vi va mau cudng rén, ‘Trung tam Truyén mau va Huyét hoe Tp. Hé Chi Minh (nay la Bénh vign Truyén mau ~ Huyét hoc) da la don vi tién phong trong viée sit Hinh 1.8, GS Truong Dinh Kiét (trai) GS Pham Man Hang (phi) Hinh 1.8. TS.BS L8 Van Béng (nq ng6i) dung té bao géc diéu tri cdc bénh vé mau, dac biét la ung thi mau. Bénh vién ‘Truyén mau — Huyét hoc Tp. Hd Chi Minh cling la co sd dau tién 6 Viet Nam thiét lap ngén hang méu cudng rén. Voi mot doi ngii hing h4u ede chuyén gia gidi, Bénh vién Truyén mu ~ Huyét hoc Tp. Hé Chi Minh 6 vai tro nin mot ngon cd vé cOng nghé té bao géc, dac biét trong linh vuc ting dung tri ligu. Nam 1996, Vién Bong Quéc gia, Hoc vién Quan y da thanh cOng trong vide cay ghép t6 bao sitng (keratinocyte), tiép thu va ting dung ki thugt nudi cay to bao sgi (nguyén bao sgi ~ fibroblast} ciia ngusi. Tron cdc co sd 46, Hoc vién da tién tdi tiép nh4n va phét trién cng nghé tao mo (trong dé ©6 vide lam da nhdn tgo), va dan tin téi cong nghé tao cdc cd quan phuc va cho ghép m6, tang.22 a Phin 1 : Bai cusng vé 6 bao g6o Tai Hoc vién Quan y, TS Lé Van Dong la mot trong 86 céc chuyén gia déng gép tich cc vao vie phat trién cong nghé t@ bao géc tai Vidn n6i ridng, va Viet Nam néi chung. Véi vai trd Truéng phong ‘Th{ nghiém Protein & Proteomics, Trung tam Nghién cttu Ung dyng Sinh — Y - Dude hoc cla Hoe vién Quan y, Ong tham gia dé tai cap Nha nude “Xay dung ngén hang t6 bao géc day rn khu vuc Mién Nam va ting dung diéu tri bénh & ngudi” voi tu cach 1a Phé Chii nhigm. Trong 46, TS Le Van Bong Hinh 1.10. dam duong phu tréch céc limh vyc chuyén mén cia GS Nguyén Mong Hong dt An xy dying Ngan hang Té bao géc day rén tai C6ng ti C3 phan Hod Duge phdém Mekophar Tp. H6 Chi Minh, Dé tai dang tién hanh c6 higu qua viée tsp quan chuyén giao cOng nghé phan lap va Inu gitt té bao géc tgo méu tit mau day rn, va té bao gOc mang day ron. Déng thdi, dé tai con té chifc va thuc hign céc nghién citu biét hod va ting dung té bao géc trong nghién citu phat trién thude, danh gia téc dung cita thuéc va ting dung té bao géc vao diéu trj tron ngudi. Vao nim. 2004 — 2005, céc nghién ctfu tiép cén t6 bao géc phdi d dong vat di dau bai nhém nghién citu cia GS Nguyén Mong Hing (Trudng Dai hoc KHTN, DHQG Ha NOi) véi cong tinh “Tao ga Ac tidm khdm Luong phugng bang vi tiém 16 bao gc phOi”. Cée nha khoa hoc da thu nhan céc té bao géc phoi cia ga Luang phugng (€& duigc thu tinh), sau d6 tiém ching vao tring chifa dia phoi ctia ga Ac tiém. K@t qua 1a nhiing con ga khdm (chimaera) da ra di mang trong co thé chting hai loai té bao (cia gh Luong phugng va cia ga Ac tiém). Vé ben ngoai, chiing la céc con ga Ac tiém co 1eng mau Lung phucng. Sau d6 m6t nam, GS Nguyén Mong Hing tip tuc thanh cong trong viéc sit dung céc té bao géc thu nhén ti phoi chudt dé didu tri chudt bi chiéu xa. ‘Thong thuting, chudt nhét bj chiéu xq véi liéu 900R sé chét nhanh chi trong 6 ngay. Nhung nhd viéc tiém té bao géc phoi vao tinh mach dudi chudt, cac con chugt nay da 6 thé sng dén 1 thang. Truéc d6, nh6m nghién cttu cing da phan lap va nudi cffy tang sinh té bao g6c phéi chuét trong thdi gian rat dai (4 tudn). Cang cdn nhan manh rang GS Nguy&n Mong Hing la nha khoa hoc Vigt Nam dau tién thyc hign thanh cong ki thugt nhn ban (cloning) dong vat bién nhi@t (c4 chach) vao nam 1977 (Tap cht Nature), tai Cong hoa Lién bang Nga (Lién X6 cai). Cling nghién cttu huéng té bao géc phdi dong vat cdn c6 cdc nha khoa hoc thudc Vign Cong nghé Sinh hoc, Trung tam Khoa hoc va Cong nghé Quéc gia. Day 1a mét trong céc nhém nghién citu manh do TS Bai Xuan Nguyén thanh lap va da thyc hign ca cay phOi dong vat dau tién & Viet Nam vao nam 1978‘Chuang 1. Vai nét v6 vige nghién ctu va dng dyng 18 bao gbc 23 Sau khi tét nghiép tién si (PhD) tai Dai hoc Piere et Marie Curie (Paris), ong tap trung vao cdc nghién ctu chuyén giao cong ngh@ phOi vat nudi vao Vigt Nam v6i tu cach thanh vién cia HOi PhOi Quée té. Hign TS Bui Xuan Nguyén chi nhiém nhiéu dé tai va dy an hgp téc quéc t& vé nghién citu va phat trién céng nghé phéi, cong nghé nhdn ban vé tinh, cing ee 11. eae heote nhu cong nghd tebao g6c trong bao tén da a ds Goat Slate frre a Nati dang sinb hoe, ting dung trong chin nudi, trong y sinh. Céc nha nghién citundi trén da thanh jesse cOng trong viéc nhan bin phOi Sao la, Pe mot dong vat qui hiém, Nam 1998, nhom gas nghién cttu da gittlai mot s6 mut baotir m6t con Sao la duge kiém lam Vudn Quéc gia Bach Ma cau khéi nhitng nguti sin trom, KhOng tim duge Sao la céi dé thu nhan tring, ho da lay tring ba, tach nhan va cffy 6 baa Sao la vao triing réng. Day 1a mOt séng tgo cia TS Bhi Xuan Nguyen, va Ong da thanh cong. Qua qué trinh sang loc, kich thich, cdc tring ghép néi trén da phat trién thanh phot. Nhém nghién ctu da tao ra nhiéu phOi Sao la nhan ban va dong lanh chting d -196°C trong céc binh chia nitd long. Trong tucng lai, Vién Cong nghé Sinh hoc cdn bao tén nhiéu nguén gen quy hiém khde, thong qua céng ngbé nay. GS Nguyén Van Thuan, mOt nha khoa hoc Vigt Nam gidi, hién éng lam viéc tai PTN Genomic Reprogramming, thudc Trung tam Cong nghé Sinh hoc va Phat trién, Vién Li Hoé Nh4n Ban (RIKEN-CBD). Ong cing da cé nhiéu cOng trinh n6i tiéng vé cong nghé té bao géc, dac biét vé khia canh biét hod 16 bao g6c. Genomic Reprogramming, hiéu nghia thes tiéng Viét 1a “tai thiét 14p chong trinh bo gen da dude bidt hoa”, day chfnh 1a mt co ché ciia t bao 6 tinh “chia khod van néing” cho céng nghé té bao géc. Thong thuding, mot té bao g6c duge biét hod thanh mot logi té bao nao dé (nhw té bao da, gan, tim, thén kinh...), va chting chi tao ra dting loai t6 bao dé ma th6i. Nhung ngay nay, ngudi ta da bist mot i baa dit da biét hod, chting van c6 thé t4i thiét lap chung trinh (reprogramming), dé ti dé quay trd Iai thanh nhting té bao g6c. Huéng nghién citu nay rat hép dan cac nha khoa hoc va céc nha dao li sinh hye, béi nguvi ta sé khong cn phai sit dung phoi ngudi, hay phdi nhan ban Hinh 1.12. GS Nguyén Van Thuan24 Phdn 1: Bai cuong v6 16 bao g6e ciia ngui dé tao ra cAc té bao géc. Ngoai cOng téc nghién 38 Nguyn Van ‘Thudn cdn Ja gido suf thinh gidng tai cac Bai hoc Kobe, Dai hoc Kinki. Ong con Ja Chi tich Diéu hanh Hiép héi Cong nghé Sinh hoc Sinh sn céc nue A Chau (ARB). Trong céc nam qua, GS. TS. Nguyén Van Thuan con cé trong tréch phan ‘ign cho nhiéu tap chi khoa hoc quéc t ¢6 uy tin cao : Biology of Reproduction (Mi), Reproduction (Mi), Theriogenology (Mi), The Journal of Reproduction and Development (Nhat). GS. Nguyén Van Thuan lu6én quan tam vide phat trién céng nghé té bao géc trong nutéc, thong qua cdc hgp tac, tut vain va cdc héi nghi, 6ng da trd gitip cho khong {t cdc phing th nghiém tit Nam tdi Bac. Nam 2005, mOt cong trinh xudt sic, gay phan chan céc nha khoa hgc trén thé gidi: aguén 16 ban goo mdi due GS Phan Toan Thang phat hign tir mang l6t day cuéng rn da hifa hen nhiéu ting dung trong tri liéu. Viée thu nhan ngudn t& bao géc nay cé nhiéu thudn Idi + khong vi pham y dite, khong gay tén thuong cho cd me va con trong qué trinh thu gitt day r6n, Do quy trinh thu nhan, liu git bao quan dong lanh dé dang, nén té bao géc mang day Hoh 1.13.68 Phan Toan Théng "0 Tt thudn loi va hiéu qua khi sit dung (anh chyp tai PIN TE bdo géo, «cing dé diéu tri cho gia dink va ban than DH KHTN TPHOM, 7/2008) trong tuong lai (nhut mt loai bdo hiém), vai céc logi bénh nint : béng, tn thuong da, gay xudng, teo cd, tén thing sun va gan, liét tuj, tiéu dudng, nhdi mau es tim, tai bién mach mau nao, Parkinson... va tham chi c6 thé ding cho thé mi, Ki thugt nudi cay céc t8 bao gée mang day r6n khong qué t6n kém, ft phite tap nén cao nuéc dang phat trién 66 thé sém 4p dung cong nghé nay. GS Phan Todn Théng hién dang gidng day va nghién cttu tai Dai hoc Quoc gia Singapore, Ong la nha nghién cifu Ién, 66 tm c@ quéc t& v8 t& bao géc, mot nha khoa hoc Viét Nam tai nang, dugc céc déng nghiép va cOng lun telu mén goi la “ngudi cat gid’ mén qua cita si s6ng”. Trong nhiéu ném qua, GS Phan Toan Thing da dé lai nhiéu d&u an cho nén cOng nghé té bao g5c trong nuéc, thong qua cdc chuong trinh try gitip dao tao, chuyén giao céng nghé va hé trg céc chuong trinh nghién citu lén. ‘Theo ghi nhén ciia céc nha khoa hoc va cong lun, ‘TS.BS Tran Céng Toai la nha khoa hoc dau tién 6 Vigt Nam thanh cng viéc diéu trj cho bénh nhan mat bing | " 16 bao g6c ty than. Cong trinh thao tac in vitro va ting Han 1.14 dung té bao g6c ngudi dau tién ndi trén dugc tién hanh —_TS.8S Tr4n Céng ToaiChuang 1 Vai nét vé viéc nghién cuu va Ung dung 8 bao ge 25 trong n6i dung cila mét dé tai nghién catu cép thanh phé (Tp. Hé Chf Minh) va duge thc hign tai Bénh vign Mat Tp. Hé Chi Minh, Dé tai nay cé su két hop gitfa Trung tam Pao tao BAi dudng Cén bd Y té Tp. Hd Chi Minh, Trudng Dai hoc Khoa hoc Tu nhién, Dai hoc Quéc gia ~ Tp. Hé Chf Minh va Bénh vién. Mat Tp. Hé Chi Minh. Dui su hé trg chuyén mén cia ThS.BS Diép Hau Thang, ca ghép té bao goc giéc mac dau tién dién ra thanh cong ngay 19/9/2007, do TS.BS Tran Céng Toai trye tiép tién hanh. Bénh nhén bi ching bénh Steven Johnson, cin dude diéu tri bénh If biéu mé giée mac, bing phuong phap sit dung té bao gc ty thin, TS.BS Trdn Cong Toai da thu nhén cdc té bao géc tit niém mac xoang miéng eke chinh bénh nhan, Cac té bao dude kiém tra, thao tac va nhdn sinh khi sau d6 duge cay ghép trd lai cho bénh nhén. Cac nha chuyén m6n da dénh gid cao diém méc quan trong nay. Vén duge dao tao co ban tai nhidu teung tam Ién trén thé gidi, TS.BS Trén Céng Toai trd thanh mot trong s6 c4¢ nha khoa hoc ft di khai sinh ra nén cong nghé té bao gc tai Viét Nam, Voi tai nang, su cdn m4n va tinh nghiém tic, TS.BS Tran Géng Toai da cd nhidu dé tai khoa hoc gid tri, duge céng bé trong va ngoai nuée, déc biét nhing dé tai nay da duge ing dung tryc tiép, c6 higu qua wén bénh nhan. Nhém nghién cifa cia TS.BS. Tran Céng Toai, thuéc Trung tam Dao tao Bai dung Can bd Y té Tp. Hé Chi Minh (nay la Trung Dai hoc ¥ Pham Ngoc Thach Tp. Hé Chi Minh) dugc t6 chic tt, gdm nhing c4n bé gidi, nang dong va da gat hai duge nhiéu thanh cOng trong nghién citu té bao géc va ting dung. Ngay 20/4/2007, GS.BS Nguyén Thi Ngoc Phugng - Téng gidm déc cong ti Ngoc Tam (nguyén Giém déc Bénh vién Phy san Ti Da, Tp. Hé Chi Minh) da Ki két hgp téc vi t6 chic CryoCord (Malaysia) dé x4y dung Ngan hang liu tra’ Té bao gic tai Bénh vién thudc cong ti Ngoc Tam, Tp. Hé Chf Minh. Trong tudng lai, khi ngan hang di vao hoat dong sé cé nhiéu loai té bao géc dugc nghién catu, tng dung trong didu tr} bénh, trong dé t6 bao géc tit mau cudng ron 1a loai due tng dung nhiéu nhat, nhu : digu tri cdc bénh Ii vé mau, tim mach, than kinh, cOt sOng, tigu dutng... Mau té bao géc mau cudng roin Int trit (léy tir méu cudng rén lic sinh om bé) s@ duge tiém truyén vao co thé nguvi, sau dé ty n6 6 thé tim dén co quan bj tén thuong gitip hdi phuc. MekoStem la Ngén hang Té bao gc do Cong ti Cé phan Hod Duge phém Mekophar (Tp. H8 Chf Minh) x4y dung va da di vao van hank (khai trong ngay 15/2/2009), Ngan hang sé hoat déng véi muc dich “Vi stic khoé cia con ban, gia dinh ban va cong déng”. Sf ra di cila MekoStem 1a két qua clia dé tai déc lap c&p Nha nutc “Nghién city xdy dung ngéa hang té bao géc day r6n khu vue Mién Nam va ting dung diéu trj bénh d ngudi”, due 86 Khoa hoc26 Phin 1 :Bai cuong v6 t@ bao 96 va Céng nghé giao cho Céng ti Cé phn Hod Ditgc phém Mekopher chit tri, phéi hop véi Hoc vién Quan y va mét s6 don vi khéc trong cd muéc thyc hién. MekoStem sé thu thap, phan lép, béo quan, biét hoa va cung cap cdc té bao g6c tao méu tit mau day rén va cdc t& bao goc biéu mé va té bao géc trung m6 ti mang lét day én, MekoStem sit dung cong nghé duigc chuyén giao truc tiép va déc quyén tir nha phét minh 1a Céng ti CellResearch Corporation (Singapore). La mot ngén hang chinh quy va hién dai theo tiéu chun quéc 16, MekoStem cung cp dich vu thu thap, xif If va bao quan lau dai té bao gc day rén cho céc sdn phu c6 yéu cdu va trd phi cho dich vy may vi tang lai site khod cia bé. Céc té bao gOc lay ra tir day réin cita bé 6 thé ding ngay dé chita mét s6 bénh va thuang tat hiém nghéo cho thanh vién trong gia dinh, hodc ai 46 trong cng déng cé céc chi s6' sinh bye phu hap. Con nhiéu co sd nghién catu va tri ligu khdc, véi déi nga céc béc si, chuyén gia gidi dugc dao tao co ban tai nude ngoai da c6 hudng tiép can higu qua véi cOng nghé t& bao g6c trong thit nghiém va trj ligu lam sang nhu Dai hoc ¥ - Dude Tp. Hé Chi Minh, Bénh vién Da khoa Hué, Vién Huyét hoc ~ Truyén mau Trung uong, Bénh vién Trung udng Quan d6i 108, Quan Y Vién 103, hay Bénh vign Nhi Trung wong véi nhém nghién citu cha GS Nguyén Thu Ha... MOt trong cdc c6ng trinh gay &n tugng gan day (2008) 4 Viét Nam la chuyén gia cila Bai hoc Y Ha Noi phdi hdp véi Dai hoc Y Tokyo (Nhat Ban), sit dung t6 bao g6c tri ligu thanh cOng vic tai tao hé mach. Vien Tim mach Quéc gia 1a don vj manh vé nghién cttu ting dung cong nghé té bao géc. Cac nha khoa hgc cita Vidn da dua ki thuat sit dung té bao géc vao thit nghiém diéu tri bénh nhdi mau co tim trén nhiéu bénh nhén vdi k6t qua rat kha quan. Cac t& bao géc nay da dugc thu nhan ti tu} xuong cha chinh bénh nhéa, sau d6 chting dugc dita vao déng mach vanh. Két qué tuong 446i an toan, chuta 6 téc dung phy va bién chting gi nang nd qua 6 théng theo doi, Tat ca bénh nhan déu cai thign sfc co bép cila co tim lén 8 15%. Nhém nghién citu cia Truting Dai hoc Y Ha NOi da cha tri dé tai nghion cttu khoa hgc cap nha nude ; “Nghién cu phat trién va dng dung cong nghé 1 bdo gée dé didu tri mot sé bank tim mach, co quan tao mau va thi giée 6 ngudi”. Day la dé tai c&p Nha nuéc dau tién vé tg dung té bao géc do GS Dé Doan Lgi lam chit nhiém, cdc GS Ta Thanh Van va Nguyén Ngoc Hing 1a phé cho nhiém. BE tai gém c6 06 dé tai nhénh, két hgp hai hod gitta nghién citu co ban va nghién cttu ting dung, do vay da tép hgp duge cdc nha nghién cvtu c6 uy tin trong inh vyc lam sang va phdng thi nghiém. Sén phém cia dé tai khaChuong 1. Vai nét v6 vide nghién city va Ung dung t6 bao g6e 27 da dang, gdm céc quy trinh khoa hoc nhu : quy trinh nhan biét, phan lap, bao quan va nudi cdy ; quy trinh biét hod t& bao géc tiv cdc ngudn géc khéc nhau thanh cdc té bao dich khéc nhau ; quy trinh tao bénh If va diéu tr] thi nghiém wn dong vat thyc nghiém va quy trinh didu trj thit nghiém trén ngudi. Dé tai con dat ra myc tidu cu thé vé so htong cdc tim bidu mo giée mac duige tao ra, s6 truding hgp bénh nhan mat, bénh méu va bénh tim mach duge diéu tri. Day la mot dé tai vdi nOi dung va quy m6 nghién citu 1én, lién quan dén nhiéu lin vuc khéc nhau, qua dé toat lén st phdi hgp, hgp tac nhip nhang gitta céc nha khoa hoe, cé¢ eo quan. Yao déu nim 2009, céc nhém nghién citu cfia GS L¢ Nam va GS Lé Hau Trac (Vign Bing Quéc gia) dé mang 46 tin vui lén : cdc nha khoa hoc cia Vign vita nghién cifu va ting dung thank cOng cong ngh@ té bao géc trong co ché tai tao da, qua 46 diéu tri cho bénh nhan bj vat loét khé lanh. Ba c6 gin 300 bénh nhan bj cée vét thing man tinh d& duige diéu tri bing cong nghé nay voi ti 1g Khdi la 98%. Vidn Béng Quéc gia da cé ké hoach sé chuyn giao cong nghd méi nay va thudng mai hod céc san phdm nudi ed tit t6 bao géc, didu nay rat 6 ¥ nghTa trong viéc phét trién thj truding y sinh & Vidt Nam, dac biét la phat trién nén cng nghé té bao g6c nuéc nha. Trong mét diéu kign duge coi 1a chin mudi, nganh Cong nghé Sinh hoc cia Trutng Bai hoe Khoa hoc Tu nhién, Dai hoc Qué gia TP. Hé Chf Minh da ra déivao nam 1996 va tuyén sinh khod dau tién nam 1999, Céc “Kiéin tric su” cla nganh mii nhon nay, GS Pham Thanh H6 va GS Trin Linh Thuéc da thé hién tam nhin cé tinh chién luge ding d4n. Nho vay, di chi méi mudi nam xy dyng va phat trién, nganh Cong nghé Sinh hoc cia Hint 1.15, ‘Trung Dai hoc Khoa hoc Ty nhién ~ Dai hoc Quéc gia TP. @S Pham Thanh HS 448 Che Minh da nhanh chéng trd thanh mét trong sO céc don vi magnh trén ca muse, Khong chi 6 higu qua trong dao tao, ma cé trong cdc hoat dong nghién citu khoa hoc cong ngh@ va ing dung, trong d6 c6 cOng nghé 16 bao 6c. GS Pham Thanh H6 cdn 1a “ngudn cdm hitng” cho st bing né cong nghé t& bao géc cia nganh hoc nay tai Tring. “Van su khdi ddu nan” déu didn ra tai Phong Thi nghiém Cong nghé Sinh hoc phan tit, voi sy inh dao va khich 1é tich cuc cia Truéng phdng ~ Hinh 1.16 GS Tran Linh Thu6e, GS Trdn Linh Thuée28 Phin: Bei cusng vé t6 bao gdc ‘Tai Thanh pho H6 Chf Minh va khu vue pia Nam, GS Lé Xuan Cuong duge coi 1a chuyén gia ddu nganh ciia hung cong nghé té bao déng vat. Ong ciing la ngudi c6 nhiéu dong gop tich cyc vao viée xdy dyng nganh cong nghé sinh hoc dong vat ciia nhiéu tru’ng dai hoc 6 phia Nam. Ngay 13/10/2007, mot Hdi déng Khoa hoc dude thanh lap (GS Pham Manh Hing lam Chit tich Hoi déng) 4a thém dinh cdc céng trinh bude dau nghién ciiu vé te bao g6c cia Truving Dai hoc Khoa hoc Ty nhién — Dai Hinh 1.17. hoc Quéc gia TP. Hd Chi Minh. Trén eo sd dy, Phong GS.Lé Xuan Cuong ‘Thi nghiém T6 bao géc dau tién 4 Viet Nam ra déi tai ‘Trudng Dai hoc Khoa hoc Ty nhién ~ Dai hoc Quéc gia TP. H6 Chi Minh, véi tén goi chinh thite “Phong Thi Nghiém Nghién ctu va Ung dung Té bao géc”. Hinh 1.18. Céc nha khoa hoc TS bao gd tré tu6i— mot thé hg mdi da hhinh than (Phong thi nghigm Té bao g6c, Trudng Bai hoc Khoa hoc Tu mhién ~ Bai hoc Quéc gia TP. H6 Chi Minh)Chuong 2 : TE BAO GOC : DINH NGHIA VA PHAN LOAI Su sOng cia mot dong vat da bao duge bat ddu bang i bao géc, vay t& bao géc 6 thé duge coi 1a mdm s6ng cita mot co thé. TS bao phan chia tao ra nhiéu thé hé con chau, trong co thé, mdi con chau sé thyc hién mét chite naing sinh If khéc nhau trong hoat d6ng séng cia minh, ké ca viéc duy tri ndi giéng. Tinh chat ma m6t hay nhiéu té bao ban d4u phan chia, tao ra cdc té bao cut cing c6 chite nang sinh If goi la tiém nang hay khd ndng (potential). Té bao cang c6 tiém nang cao thi ching cang c6 thé tao ra nhidu kiéu té bao khac nhau. Nhitng té bao cé tiém nang thép hon chi cé thé tao ra mét vai kiéu 18 bao chitc nang nhét dinh. Véi nhiing té bao khong tiém nang, chting khong phan chia, khéng tao ra bat ki té bao nao khéc, tuy nhién, cdc té bao nay van 6 chitc nang hoat dong séng chwyén biét trong m6, vi dy té bao héng cau van chuyén khi 6xi, cacbonic ; té bao than kinh (neurone) dam trach sy dan truyén. xung dién, va t& bao co c6 chife nang co gidn.. Khi m6t té bao cé tiém nang bién déi, nham tao thanh cac té bao 6 chitc nang goi la qud trinh bigt hod hay su biét hod (differentiation), chang han céc t6 bao géc tao mau, qua nguyén phan tao t& bao héng cdu. Qué trinh mot té bao 66 chit nang, sau d6 dudi téc dng cia mot nhan t6 no 46, ching c6 thé thay déi cain ban kiéu hinh dé thuc hién mot chitc nang khéc duge goi la su phan biét hod, hay biét hod nguge (dedifferentiation). Gan day, mot s6 t& ‘bao géc trudng thanh cho théy “tinh mém déo” (plasticity), nghia la t bao gic chuyén biét ciia mot mé nao dé c6 thé biét hod thanh té bao cita m6 khéc goi la “chuyén biét hod” (transdifferentiation), chang han té bao g6c tao mau c6 thé duge tac dgng dé biét hod thanh té bao cd tim... mot mé méi hoan toan Khdc véi m6 mau ban dau. ‘Thudt ngit “té bao gc" (stem cell) doi khi cing duge cae nha khoa hoc sit dung mét cach khong nhét thiét chat ché, dic biét trong céc trufing hgp ma ho cho ring khong bat bude phai m6 ta cée marker chuyén biét cita t6 bao g6c, hay chi cn suf xéc nhan tinh g6c cita té bao thong qua con duting transcriptome. Chang han, dé 1a cée nghién ctu nhaim chitng minh khé nang ty lam méi va bidt hod cia nhimng té bao nhat dinh nao dé (dugc goi té bao géc) vila trong ca thé (in vivo), vita trong phing thi nghigm (in vitro). N6u ching thé hién céc dac tinh ridng biét th) ¢6 thé mac nhién thita nhan dé 1a té bao g6c.30 Phan 1 : Bai euong vé té bao ade 1. DINH NGHIA ‘TS bao gc 1a nhitng té bao khdng (hoac chua) chuyén hod trong mé sng, ching cé kha n&ng trd thanh céc té bao chuyén hod vdi cdc chitc phan sinh I. Trong diéu kién in vivo hay in vitro, mBi té bao géc c6 thé ty lam mdi véi cdc tinh nang riéng biét mai. Chang han, céc té bao géc tuy xuang hodn toan chia duge chuyén hod, ching cé thé biét hoa thanh cdc té bao mau chuyén hod (chang han té bao bach cau, té bao héng cA: va nhitng kiéu té bao mdi nay 06 cdc chite nang chuyén biét, nhu kha nang sdn xudt khdng thé, van chuyén céc chat khi.. ma trudc dé 16 bao gc khong hé cd. Do dé, mét kiéu té bao xuat than c6 ngudn gic tit mot té bao khéc, thi té bao khac dé cting 6 thé dude goi la “te bao go Wau hét moi qué tinh sita chita mé trong déng vat c6 vii Ia cdc sit kidn déc lap, nh&m khit bigt hod (hay biét hod ngudc), boi da c6 st hoat hod eda cc t6 bao géc tin than truéc d6. Theo dinh nghia thi té bao tién than 18 mot dang trung gian gidta té bao géc va t bao biét hod. Tuy nhién, mét so dong vat 6 xutong sug cé thé tai sinh céc phan co thé bi mét thong qua sy khit biét hoa cc t6 bao da chuyén hod, thanh céc té bao tién than (t6 bao co chat). Nhing té bao dude khit biét hod nay, sau dé sé tang sinh va hinh thanh céc té bao chuyén hoa méi cia e¢ quan li sinh. Mot s6 déng vat khong xuong séng nhu Planarian flatworm va thuy ttc o6 thé tdi sinh rnb nhanh va chinh xéc Ngay nay, té bao géc duoc tach va thu nhan tit rat nhiéu ngudn (phdi giai doan tién lam t6, thai, ca thé trudng thanh, sinh phdm phy sén...). Dudi cdc diéu kién hign tai, nhiing té bao géc chia biét hod c6 thé van nang (cé kha nang biét hod thanh cac té bao tit ba 14 phoi), hay da nang (chi o6 kha nang bit hod thanh mét sé c6 gidi han nhat dinh cdc té bao chuyén hod). V6i mét dinh nghia nghiém khdc nhét, mgt té bao géc dai hoi it nhét phai c6 hai dgc tinh duwdi day: = Tinh ty lam mdi (self-renewal): té bao 46 c6 kha nang tién hanh mot sO lugng ldn chu ki phan bao nguy6n nhiém, ma vdn duy tri trang thai khong biét hod, = Tinh tiém nang khéng gidi han (unlimited potency): t& bao 46 c6 kha nang biét hod thanh bat ki kiéu té bao trudng thanh nao. Trén thuc té, dac tinh nay chi ding véi cdc té bao géc toan nang, hodc van nang, tuy nhién mot W@ bao gic da nang (hay té bao tién than) eang nhidu khi duge goi la té bao gic. . Nhang dic tinh ni uén c6 thé duge chiing minh in vitro bing cach stt dung cac phutong phép dic thi nhat dinh, chang han thi nghiém suf phat sinh tap doan (Clonogenic assay). Tuy nhién, can hu § rang, chinh cdc diéu kién nudi cy in vitro cing ¢6 thé lim thay déi dac tinh cia té bao, khién n6 sé “cut xit” theo cdch tuang ty abut in vivo,Chuong 2. Té bao gSc : Binh nghia va phan loat 31 Mot eéich khai quat ring, cdc dinh nghia vé t6 bao g6e néi trén chil yéu dya vao su biéu inh trang hoat dong cia té bao, khong chai trong cc dac tha phan tt. Bai dude quan tam @ khfa canh ing dung trong Iinh vyc y sinh nhiéu hon, do vay H6i nghi Quéc té dau tién vé TS bao géc (da didn ra tit ngay 28 dén 30/10/2003 tai Singapore) da phat biu dai y: "Diém dac biét nhat d té bao Boe la chting khdng dude lap chutong trinh tif trudc, va do vay chiing 6 kha nang phat trién thanh bat ki loai ti trudng thanh nao ma mét c¢ thé cén... Muc dich cudi cing cia vide nghién citu 1é bao géc 1 dem lai hi vong cho nhitng ngudi khéng may méc phai céc chitng bénh nan y. I. PHAN LOAL Véi cdc téc gid khdc nhau, c6 thé 6 nhiing cdch phn loai khéc nhau. Vao thi diém nam 2005 tré va truéc, ngu&i ta thuding chia té bao géc thanh hai dang ca ban: tf bao géc phos (phan lap tit phdi) va té bao géc trudng thanh (gm cac t6 bao géc cia cd thé trudng thanh va cha nha ni). Nhung trong céc nam 2005 ~ 2007, nhidu téc gid da chinh thitc thita nhan loai té bao géc nha nhi la m6t nhém riéng biét. Mac di: khong phai la té bao g6c phi, nhung rd rang vé gidi phu hoc, cdc té bao géc nha nhi khong dugc khai théc trong mot cd thé trudng thanh. Hon nia, tiém nang “g6c” cita ching cfing Ién han cde té bao g6c trudng thanh. chva ké cdc ki thuat thu nhén, thao tac chting cing c6 diém khéc Mét 86 téc gid khdc lai chia té bao géc thanh bén loai, bao gém: 16 bao géc ph6i, 1é bao géc thai, té bao géc cudng rn va té bao géc trudng thanh. Nhung vao thai diém hién tai (1/2008), sau khi két qué cdc céng trinh cia Shinya Yamanaka (Bai hoc Kyoto cila Nhét) va James Thompson (Dai hoc Wisconsin cia Mt) dugc cong bé chinh thite, ciing nhu thuyét té bao géc ung thu duge nhiéu nghién citu thém djnh, céc tac gid cia cuén séch nay tiép tuc phat trién va dé nghi mét cach phan loai khdc — chia té bao géc thanh nim nhém chink ~ Té bao gc ph6i (thu nhén ti phoi giai dogn én lam té — Blastocyst). ~ T6 bao géc nha nbi (thu nhgn ti thai, m6 cudng r6n, méu ci nhau thai, dich 6i, mang lét day ron...) ing r6n, — Té bao gc trudng thanh (thu nhdn tit co thé trudng thanh). § bao géc van néng cam ting (Induced Pluripotent Stem cell iPS), c6 thé tam hiéu la té bao gée phoi nhén tao hay té bao géc nhén igo, ching cé tiém nang nhu la cdc t& bao géc phdi (loai té bao géc da dude tao ra do cé su thao tac in vitro trén chinh b6 gene da biét hod chiic nang ciia ching), ~ Té bao gc ung thu (Cancer St kh6i u va ching chi cé trong céc khéi v. Cell_CSC), duge coi 1a nguén géc cha32 Phan 1 :Dav cong vé t6 bao 6c Tit nam nhom phan loai 1dn n6i trén, ngutsi ta cé thé chia thanh cdc nhém nhé hay nhém phy. Mot sO nha nghién ott nghT rang, cdc té bao géc trang thanh va thai nhi cé thé cing lién quan dén cdc tf bao géc phoi. Twang tt, mOt vai t bao géc dude quan sat trong co thé trudng thank cé thé mang dac diém “tan dit” cia t& bao géc phoi, ching duge tao ra dé biét hod thanh cac cd quan dang phat trién, hay dudc cat git tai nhiing “6” (niche) té bao géc trong co quan (nai ma chiing sé dude sit dung cho viée sita chifa khi m6 bj tén thuong), Tét nhién ngoai trif cdc 18 bao géc ung thu, bai chite nang ciia ching la tao ra mé bénh, Té bao géc (Th géc) Nha nhi Trung thank if | fr | $ 3 s & 3 > & og = 3 § & 2 B 2 ep 4 Ros | a aos 5 Soy & a / 2 ® Lo | ee E Thgéc Tb Tb Th 3 = 2 Tb Tb 3 phot géc mam géc wp 8 = sinh sinh = morula phdi phoi thai § tinh tring 2 5 Tuy Trung Gan Biéu Than Tao Da Mat mé mé kinh mév day [] Tiy xuong Gan Tay xuong Mau ngoai vi Hinn 2.1. Met s6 i bdo géc 11.1. Té bao g6e phéi Té bao géc phéi dude thu nh4n tric tiép tir phdi (embryo) cia ngudi va dong vat cé vi, ching cé tiém nang biét hod lén nh&t. Nhém nay gém cdc té bao duge thu nhan ti lép sinh khéi ben trong (ICM), céc té bao mat trong ciaChuang 2.78 bho g6e : Binh nghia va phan toal 33 16p dudng bao trophoblast, cdc té bao mam sinh duc (EG) va gan day, nguasi ta con tién banh thu nhan cae t6 bao géc tit ph6i sém (trudc blastocyst). Trén thye 18, khi dé cap dén thuat ngit té bao géc phoi (embryonic stem cell_ES), nhiéu ngudi “gan ghép” né thanh t& bao géc phdi duge thu nhén tit lép ICM. ‘Ti d6, nhidu tai liu ngdm hiéu rang, té bao géc thu nhén tit lép ICM mdi 1a té bao g6c phoi. Hon nua, trong céc 1 bho géc thu nhan tir phoi, nguén té bao g6c thu nhén tit ICM hau nhu quan trong nhét, béi n6 dugc hiéu ré nhat do da 06 nbiéu nghién cttw vé né nhat. Trong cudn s4ch nay, thudt ngit té bao géc phdi nham chi truc tiép cdc té bio g6e dstac thu nhan tit lép ICM cia phoi giai doan ph6i nang (blastocyst). ‘Can lu ¢ sit khéc biét sau: cdc t6 bao mdm sinh dyc (EG) duge thu nhan @ giai doan phét trién muén cia phoi {8 ngudi phdi khodng 6 tudn tuéi), trong khi d6, céc té bao géc phdi dugc thu nhan @ giai doan phOi nang (phdi chia Yam t6 trong tit cung). Hau hét céc té bao thu nh4n tif phdi 1a cae té bao g6c van naéng (pluripotential), chiing duigc dinh nghia la nhiing tf bao phai thod man ba dién kién + (2) Khi ching duge tiém vao khoang cia phoi {8 giai doan phdi nang), nhém 16 bao ngoai lai nay sé tao nén dang phoi kham. (2) Khi ding duge tiém dudi da, hay duéi v6 than cia dong vat song (chang han chudt hay d6ng vét c6 vi khéc), céc té bao nay s8 hinh thanh kh6i u quai. (3) Khi nhan cac tac nhén kéch thich phi hgp, chting c6 kha nang bigt hod thanh céc kiéu té bao c6 nguén géc phat trién tit ba 14 phdi. Dya vao cae tinh chat trén, ngudi ta co thé kiém tra tinh van nang cia cc t8 bao, Ngay nay, nhé sy phat trién mot s6 kT thuat, céc cong cu kiém chting phan tit dia va DNA, RNA hay protein, ngudi ta dé dang xéc dinh céc marker cia 16 bao géc. Hinh 2.2. TE bao 96c pho! ngudi dang phat tién trén ldp feeder sATEBAOGOC34 a | Phan 1 : Bai cuong v6 16 bao g6c Nguén ph6i cho thu nhén té bao géc hién tai chit yéu c6 tit cng nghé IVF hay ICSI. Bang mot trong hai Ki thudt nay, tit céc tinh tring va tring, nhidu phing thf nghiém c6 thé tao ra phdi mOt céch chi dng. Phoi dutge nudi, th va thu nh§n té bao g6c é giai doan can thiét. Ngo&i nguén trén, mt sé trung tam, phong thf nghiém trén thé gidi phat trién cac ngudn té bao géc tit phoi chuyén nhn, chuyén gen, hay ph6i tao dng hogc nhan ban. Bay 1a hudng di moi dé tao nguén té bao géc phdi sit dung trong diéu tri bénh. 11.2. T@ bao gée nhii nhi TS bao g6c nho nhi thudng duge thu nhan tix cc m6 cba thai ba, hay céc phn phy cia thai nhi sau khi sinh. Céc nguén dé thu nh4n té bao ge nhii nhi 6 thé gém mau day ron, day rén (mang lot quanh mach mau, 1ép Wharton's jelly, mang 16t day r6n), nude 6i, mo nhau thai, méu nhau thai. 6 cée mé ciia thai bd, ngudi ta c6 thé thu nhan nhiéu kiéu té bao tién than, céc té bao g6c da nang. Chang han, cé thé thu nh4n té bao géc than kinh, cdc (6 bao tidn than than kinh ti ndo etia thai bé. Nhin chung, céc t6 bao g6c ti nguén nay cé tiém nang tng dung lén trong cdy ghép diéu trj bénh. Tuy nhién, vn dé dao Ii ludn la cn trd 16n nat. f Co xitong J » 4 Té bao ma net f. >... ue Hinh 2.3. Sy bi8t hod cia 16 bao g6c trudng thanh sB-TEBAOGOCChuang 2. Té bao géc “Binh nghia vil phan loa 35 Ngudn té bao géc thu tiv nhing phén bé sau khi sinh nhu mau day rén, day rdn, nude i hay nhav thai chi yéu 1a cdc té bao géc tao mau va céc té bao géc trung mo, Ngudn té bao gic tit mau cuéng rén da dude phat hign tuong déi lau va da tng dung ctu séng hang trigu ngutii bénh trén khdp thé gi Tuong ty té bao géc thu nhén tit co thé trudng thanh, céc té bao gd nhi nhi thuting cé tiém nang biét hod d mite dé da nang, hay vai tiém nang, hoac a cdc té bao tién than, Nhiing té bao géc nay duge xdc dinh khOng thé c6 ba dac tinh cia té bao g6c phdi nhw da néi @ trén. Chfnh vi dac diém han ché nay ma niu tac gid da xp céc 18 bao g6c nha nhi chung nhém phan loai vdi cdc té bao géc 6 cd thé trudng thanh. 11.3. Té bao géc truéng thanh Té bao géc trudng thank la céc té bao duge thu nhén tit co thé trudng thank, Khéi niém truéng thanh day chi c6 § nghia tuong déi, bai 18 t bao géc thu nh4n tit mot dita trd (sa sinh) cing duge goi 1a té bao géc truéng thanh, Ngay cang nhidu 6 t€ bao géc tring thanh duge xac dinh. Céc kién thife vé vi tri cla cdc 6 té bao géc d cac cd quan, mé da gilip chi ra céch thu nhan va sit dung ching trong didu trj bénh. Trong céc 6 té bao géc trudng thanh, 6 té bao gc tuj xuong dude quan tam va biét r5 hon cd. Da tit lau, tuy xudng duge xac dinh la noi cu ngu cia nhiéu té bao gc tao mau. Dé 1a ngudn té bao gée quan trong trong co ché digu hoa so lugng té bao mau, chting duge dim bao cAn bling trong svét qué trink s6ng cia co thé. Ngoai te bao géc tao mau, tuy xuong con duge biét nh 1a mdt trong céc mé cé chia ngudn 16 bao gée trung mé. Ngudn té bao nay cé tinh mém déo cao, chting cé thé biét hod, hay chuyén bidt hod thanh nhidu kiéu té bao chife nang khéc nhau. 4,1 © gée nhén tao (té bao gc van nang cam ting) Day 1A loai té bao géc do chinh con nguiii tao ra (Artificial stem cell), nh ki thuét thao tac gen. Thuat ngif chinh xdc dé chi loai té bao nay 1a “té bao gdc van nang cam img” {Induced Pluripotent Stem cell iPS). Vé nguyén ti ‘b&t ki té bao sinh dudng (somatic cell) nao déu cé thé tr thanh iPS, nha ching dugc cdm ting bang phvong phap chuyén gene in vitro, thong qua mét vector retrovirus. Khi duge Kich hoat, cc té bao sink dung sé khdi dong co ché tdi thiGt lap chugng trinh bd gene hay sy khit biét hod (epigenetic reprograming, de-differentiation). Cong ludn dé té ra hé hdi dén nhan sy ra di cia loai té Lao gc nay. CO thé tam higu la té’ bao gdc phdi nhén tao hay té bao géc nn tao, ching cO tidm nang nhu Ja céc té bao g6c phdi (loai té bao géc da dugc tao ra do oé sv thao (4c in vitro trén chfnh b6 gene da bidt hoa chic nang ciia ching).36 Phin 1 Bai cuong vé té bao gée Khdi niém vé té bao géc nhén tao duge hinh thanh tit hai cng trinh gay chén dong, cing céng bé online ngay 20/11/2007, ~ "Cam tng t& bao géc von nang tit nguyén bdo soi nguei truing thanh bang cdc nhan 16 xéc dinh” cha gido su Nhat Shinya Yamanaka va cong sit- Bai hoc Kyoto cia Nhat (Tap chi Cell) — "Dong té bao g6c van nang duge cdm ting tit tf bao soma ngudi” cila gido st Mi James Thompson va c6ng su ~ Dai hoc Wisconsin cia MI (Tap chi Science) ~ Khdng vi pham dao li va php If (khdng can tring hay phdi ngudi) — Cac dac tinh sinh hoc tuong duang vdi té bao géc phai thuting (kh nding tang sinh v6 han va kha nang biét hod). — Dé dang thu nhan (cé thé tao ra tit bat ki mé nao dé cila cu thé) - Thao tdc dé dang, ft tin thai gian. ~ Khong can higng mau [én trén bénh nhan. ~ Cay ghép khéng gay phan ting mién dich. RO rang, ching c6 uu diém hon hdn té bao géc phdi va t& bao gdc trudng thanh. Trén thie té, nhitng té baa da biét hoé dude cam ting thanh cac té bao gc mang tinh chat ciba té bdo géc phoi da nghién citu trudc dé rat lau bang céc ki thuat khéc nhu stt dung dich chiét hay dung hgp té bao. Su ra dvi cia ki thudt chuyén gon cam ting dé tai thiét lap chwtong trinh da bé sung mét phuong phép méi vao cong nghé tdi thiét lap chuong trinh té bao dich néi chung va chuyén té bao da biét hod thanh 115, Té bao géc ung thy Nhiéu nghién catu tién hanh trong vai thdp nién qua cho thy eéc dac tinh ‘hé théng té bao géc, hogc cdc dac tinh té bao géc chuyén biét, hay ca hai da it nhidu cé sit lién quan dén mot sO dang ung th ngudi in thé Cac bao phat sinh khéi u tuong déi hiém, va c6 nhidu khde biet dude x4c dinh trong ung thy ciia hé théng tao méu, nao va vi. Céc t8 bao kigu nay ¢6 kha nang ty lam mdi, va dé dang phét trién thanh bat ki té bao nao cia quan thé 6 bao khéi u, chting c6 kha nang tang sinh, hd trd sit tang sinh tiép tuc ciia quan thé té bao dc tinh. Céc dac tinh cia té bao phat sinh Khdi u cling c6 hai dac tinh song hanh véi hai dac tinh cia t6 bao géc binh thifting. Cac té bao khdi u vai céc dae tinh va chitc nang nay, dutgc goi la t bao g6c ung thi (cancer stem cell). TS bao géc ung thut kh6ng phai la thut ngif mdi, vao ndm 1978, da cé mét bing sang ché vé cac bioassay dé phat hién céc t& bao géc ung thu.Cuong 2 Té wa 96 : Binh nghia va phan 37 Cac t8 bao géc ung thu duge tao ra béi cdc dét big tit cdc té bao géc binh, thuting. Tuy nhién, mt vai ddng cho thay rng té bao géc ung thi ciing tao za ti cdc 16 bao tién than bj dét bign. Céc té bao tién than nay (cing cdn goi la céc t6 bao khuéch dai chuyén ~ TAC) c6 thé cé kha n&ing khuéch dai, nhung ching thudng khong c6 kha nang ty lam mdi nhut mét té bao gée. Dé trd thanh 16 bao géc ung thy, mét t& bao tién thén phdi cé sv tich tu cdc dot bién gay nén sy lap Jai, tao dac tinh ty lam méi, Tuy nhién, cic khéi nigm ban ddu vé té bao géc ung thy c6 thé dude trinh, bay khéc nhau trong cdc céng trinh khéc nhau, Chang han, cé ngudi cho rang. cdc t& bao géc ung thu chinh 1a ngudn géc eda tat cA cdc té bao de tinh trong mét khéi u so khdi, chting cé thé hgp thanh mot nhém nhé céc té bao khang thuéc, dap ting lai hod lig phép, hay ching sé gay ra sy di can xa... IM. GOI TEN IIL1, Theo tiém nang biét hod ‘TS bdo trting dug thy tinh goi la té bao todn nang (totipotent), hay té bao fodn thé (ting Latin: totus). Ching c6 tiém nang cao nhét va nhiéu nhat 48 o6 thé trd thanh tét ca cao té bao ctia co thé, O d6ng vat 6 vd trudng thanh (bao gdm ca ngudi), cé ching hon 200 loai té bao thudc céc nhém: té bao than kinh (neuron), té bao ca (myocyte), t& bao biéu mé (epithelial), t@ bao mau, té bao tao xutong (osteocyte) va 1é bao sun (chondrocyte)... Nhing té bao khéc, ban cing phét trién tir phéi, nhuing khong hgp abat tao co thé gbm : ma ngoai phéi, nhau, day rn, Cac dang trén dude tao ra tit mt t6 bao toan nang. Nhitng t6 bao d giai doan ph6i sém dén giai doan blastomere cing c6 tinh toan nang va cling 6 thé tao ra mét co thé hoan chinh. Hau hét céc nha khoa hoe sit dung tit da nang (pluripotent), o6 ngudi goi 1a van nding (tiéng Latin: plures), dé mo ta té bao g6c khi ching cé kha nang bigt hod thanh cdc t6 bao xust stf tit ba lép phoi : rung bi, n6i bl va ngoai bi. Tat cA céc logi té bao chuyén biét tao thanh c¢ thé déu biét hod tif mot trong ba ldp nay. Theo Vién Site khde Quéc gia cila Mi, té bao géc da nang la nhiing t& bao biét hod thanh hau hét cdc mé cia mot cd thé, trong khi dé té bao géc toan nang cé kha nang biét hod khong gidi han ‘Thuat ngi te bao géc da nang (multipotential stem coll) ding dé chi nhiing té bao c6 kha nang biét hod thanh nhigu té bao khdc. Tuy nhi@n, né cdn duge st dung dé chi nhiing té bao géc thu nhgn ti cd thé trugng thanh. Néi céch Khédc, t& bao géc da nang thu nhan tit co thé truding thanh duge goi 18 nhing multipotential stem cell; trong khi 46, nhiing 1@ bao g6c da nang dugc thu nhén ti phdi sdm, goi la nhiing pluripotential stem cell. Mét s6 téc gid cho rang hai thudt ngi nay hoan toan giéng nhau, chiing déu mé ta nhing té bao c6 kha nang biét hod thanh nhiéu kiéu té bao khde nhau.Phdn 1 Bai cuong vé 1é a0 gee Bang 2.1. Tén goi té bao géc theo tiém nang bigt hod Tén goi té bao Vi dy Sd kiéu t€ bao bigt hod bidt hod Toan nang — | Tat ca Hap tit (triéng Tat cd nhiing té bao (Totipotent) duige thu tinh) trong ca thé hay blastomere Van nang Tat ca, trit Nhiing té bao thu | Nhting té bao thu (Pluripotent) | nhitng té bao | nhan tty 16p ICM __| nh4n tit ba lép phoi mang phéi Ba nang Nhiédu TE bao géc Té bao co tim, co, (Multipotent) tao mau xuong, té bao gan va (Hematopoietic | tat cd té bao méu cell) vai tiém nang | M6t vai TS bao tuy 5 kidu té bao mau (Oligopotent) (Myeolid) héng cau, monocyte, macrophage, eosinophil, neutrophil Bén tiém nang | Bon TE bao tién than | Té bao syn, té bao (Quadripotent) trung m6 md, té bao dém, té bao hinh thank xuang Ba tiém nang | Ba ‘TS bao tién than | Hai kiéu té bao than (Tripotent) thdn kinh dém | kin hinh sao va than kinh dém it gai Hai tiém nang | Hai TS bao cachét | Té bao Lympho B (Bipotent) hai tiém nang ty’ =| va Macrophage gan thai chudt Dan nang Mot Ca chat duang | Dung bao (Unipotent) bao (Mast cell precursor) Khéngtitm — | Khong Nhiing té bao da | Khong phan chia nang biét hod hoan ton (héng cau...)39 1IL2. Theo vi tri thu nl 6 bin: gv phoi (Embryonic stem cell_ES) dug thu nhén ti giai doan phdi nang (blastocyst), chting l& khéi céc t6 bao bén trong, con goi la Jdp sinh khdi bén trong (inner mass cell_ICM) cia phéi nang. T& bao gc phéi cé kha nang phan chia v6 han trong nui cay va biét hod thanh céc té bao khée nhau ti! ba 16p ph6i. Do vay, day 1a nhém té bao van nang (pluripotential stem cell). Té bao mdm (t& bao géc sinh duc; Embryonic germ cell_EG) dugc thu nhén ff nh sinh duc (genital ridge), chting c6 tinh van nang (pluripotent). Cac EG 6 mot sO khac biét so vai té bao ES. C6 ¥ kién cho ring, té bao mam duge goi theo kiéu t@ bao biét hod, nghta la ching sé biét hod thanh céc té bao sink. duc, chit khéng goi theo noi thu nhéz. That vay, ching dude thu nhdn tai vi tri la tién than cila cd quan sinh dyc sau nay, Té bao go ung thy biéu mé phdi (Embryonic carcinoma_BC) cé ban chat gidng nhut cdc 1 bao géc phi, ching dugc thu nhan dau tién tit khéi u trong tinh hoan va budng tring & mét s6 ching chudt. EC cé thé biét hod thanh nhiéa kiéu té bao khac. 18 bao trading thdnh Wa loai té bao chua chuyén hod, chting dugc tim thay d hau hét nhitng mé chuyén biét trong ca thé trudng thanh (trong tuy xutong, mau, giée mac, vong mac, tuy rang, gan, da, da day va tuy..). Céc t& bao nay cé thé tu ddi méi va biét hod thanh nhiing té bao chuyén biét. Mét thudt ngit khéc cling duge ding, chdng han té bao géc tuj xuong la nhitng té bao g6c thu nhan tit tuy xudng ILL.3. Theo kiéu t& bao biét hod Té bac g duge goi tén theo kidu biét hod ciia nd: té bao géc co tim s@ biét hod thanh 16 bao co tim, 14 bdo goc xueng bist hod thanh té bao nung... Cé thé gap céc thuat ngit kidu nay trong nhiéu bai bao, tai liéu.. Nhung m6t sé nguéi cho rang vdi nhiing té bao gc chi tao ra mét hay vai té bao (nhut cach goi trén), chi 1a nhiing té bao tién than (progenitor cell), hay co chat (precursor cell). Theo dé, cdc 1é bao nay khong la té bao géc bai chiing chi biét hod, ma khong fy’ Jam mdi (renewal), c6 nghia 1a chula dui diéu kién “g6ic”. Cac 4 kién khéc Jai cho ring, t6 bao tién than la té bao ft tiém nang (nhiéu tiém nang, vai tiém nang..), nhung né van duc goi la t& bao géc.Chuong 3 TE BAO GSC VA TIEM NANG ONG DUNG Sy hién dién bat ngi, day kinh ngac ctia t& bao géc da gi cho moi ngudi nghi tdi nhitng ting dung to 1dn cia ching trong nhiéu linh wfc, dic biét 1a trong y sinh hoc. Ro rang, v6i nhiing kha nang ki la von c6 cia minh, té bao g6c sé la nguyén ligu thn ki, da nang cho nhiéu muc dich sit dung khéc nhau. Chang han, trong diéu kién in vitro, véi t6c 49 phan chia nhanh, lién tuc, v6i khd nang ty lam mdi, té bao géc ditde xem 1 nha may sin xudt cdc loai duge: pham, hoac la m6 hinh cho nhidu thit nghiém khoa hoc. 1. CAY GHEP TE BAO GOC Liéu phép thay thé té bao dude xem nhv la mét céch chifa tri tiém nang cho céc bénh khé chifa trudc day. Thong qua liu phép té bao géc, nhitng cain bénh nan y dang duge thit nghiém tri ligu higu qua, kha thi hon trong thap nién vita qua, Mot s6 thanh cOng dang chit § 1a lidu phdp tdi tao gidc mac, hod céc sin phém t6 bao géc cing sn sing duigc thing mai hod cho muc dich thay thé da va sun. Da c6 nhitng tién bo mai trong viéc sit dung té bao 6c thay thé dao twy, sit thytgng mai hoé cia li¢u phap méu cudng rén va tiém nang thu nh§n sé lugng ldn céc té bao tit nguén phdi, thai va co thé trudng thanh. Nhiing thanh twu néi trén gitip ngudi ta hi vong ring, té bao goc 6 thé phutong thfc chita tri higu qué cho rét nhiéu bénh, bao gém cac bénh tim mach, cdc khiém khuyét tich tra lysosome va céc kh6i u di cin. Tiém nang cilia W bao gée da dat tdi su thutong mai hod va nay sinh céc mi quan tam khéc trong linh vyc nay. 1.1. Cay ghép té bao géc phoi Diéu trj bang cay ghép té bao ES ngudi cfing da duge ghi nhan 6 nhiéu bénh, chang han Parkinson, tiéu dung, cac chan thuong cOt sng, suf suy thoi dong té bao purkinje (degeneration), loan dudng co Duchemne’s, bénh tim va sy{ tao xuiong... Tuy nhién, dé diéu tr} cho mdi loai bénh, t& bao BS cia nguds phai duge diéu khién dé bi¢t hod thanh cae té bao 66 chite nang chuyén biét, truéc khi ching due cay ghép, Cac nghién cttu ndi trén chi gidi han d mot so phong thi nghiém c6 gidy phép tién hanh thao tdc té bao ES ngudi.Chuang 3. Té bao géc va tiém nang ung dung. 4 chuong trink g Chuyén nhan = vy Té bao than kink OD Tai thiét lap Phat trién blastocyst in vitro Ls Thu nhén va khuyéch dai ES ie Té bao than kinh ~ Z Té bao tim ao Té bao woe than kink fee nS TE bao ge mau Hint 3.1. Chidn luge ghép t& bao géc Mot thudin Igi cia vide sit dung té bao ES so v6i t& bao gc trudng thanh 1a kha nang tang sinh in vitro v6 han va khd nang vé thé biét hoa véi phé rong cée loai t& bao, thong qua diéu khién. Cac ES dutge cély ghép c6 thé tn tai, hgp nhat va c6 chifc nang trong co thé nh4n. Bat Igi tiém an cia ES trong cay ghép la ching cé xu hung cam (ng, hinh thanh khéi u (teratomas), da 1a u Janh tinh. Tuy nhién, ES kh6ng biét hod cdm ting teratomas nén sif hinh thanh Kh6l u c6 thé tranh dude bing each di cbuy6n té bao khong biét hoa trudc khi cay ghép, hay dua ra co ché vi ngung hoat dong nghia la chan vao té bao ES gon “ty gidt” (suicide) dé ching c6 thé khdi sy qué trinh chét té bao. Gac t@ bao ES ngudi sé thudn Igi cho mye dich eéy ghép hon, néu ching Khong phan ing thai loai mién djch, Hién nay, min dich hoc cia té bao ES ngutdi chia dugc nghién eifu chi tiét nén khong bit duigc ES c6 thé gay dép ting mién dich thé nao. Nhin chung, di truyén hoc mién dich ca mot té bao phy thude sy bidu bién céc khang nguyén tuong hyp mé (Major Histocompatibitity Comple_MHG) cho phop co thé phan biét 16 bao cita minh v6i m6 ngoai lai. Kha nang thai logi min djch cia t# bao ES ngudi c6 thé trénh duge bang kr thuat di truyén. Phuong phép nay duigc thyc hign bling Ki thudt chuyén nhan 16 bao sinh dudng, tite dua nhan cia mét té bao nguiii shan (chang han da) vao triing da loai nhan. Tritng duigc nudi in vitro dén blastocyst, t8 bao ES dude thu nhén tit lép ICM, va chting duge diéu khién dé biét hod thanh kiéu té bdo42 Phdn 1 :Bai cuang vé te bao ge mong muGn. Két qua la tao ra nhiing t6 bao géc ES, hay co quan phi hgp m6, ching gin nhy thich ting vdi chung trinh mién dich cia ngwasi cho nan té bao sinh dung, va cing chinh 1a ngutii nhan co quan cély ghép. Mé, ca quan cé thé duge tao tit ES olla ngudi, day 1a tidm néing quan trong nhat. 1.2. Cay ghép té bao géc trudng thanh C6 thé sti dung té bao géc truding thanh cho cdy ghép khi ching @ dang t& bao g6c, hay dang té bao da biét hod tiv té bao gic trudng thanh. Khi cay ghép cdc té bao géc, chting phai dude thu nhan va lam gidu thdng qua nudi cdy, hay cdc phyong phdp khéc dé sau dé dua vao co thé bénh nhan. Trong co thé benh nhén, céc té bao géc nay s@ bidt hod va khoi phuc lai nhitng tn thuang, mat mat trong bénh nhén. Cac qui trinh c&y ghép mau cudng r6n, cy ghép tuy xuong, cy ghép ria giéc mac... déu thuge dang nay. Cay ghép céc t6 bao da biét hod 1a sy bd d&p cdc t6 bao chuyén hoa chic nang vao m6, co quan bj tén thuong, lam thiéu lugng cdc t bao chuyén hod chite nang. Vi du, su huj hoai cdc té bao tiét insulin trong tuy lam gidm mttc insulin trong mau, gay bénh tiéu dung; chita tri bénh nay cAn bé sung céc 6 bao chuyén hod tiét insulin, Bé lam duge vide nay, dau tién céc té bao géc dude thu nhgn, o6 thé tix tu} xudng, mau cudng rén va chuyén biét hod thank céc té bao tiét insulin ; sau dé tin hanh ey cdc tf bao da chuyén hod chitc nang nay vao m6 tuy cila bénh nban. Viéc cay ghép cdc té bao g6c trudng thanh thuding la di ghép hon ty ghép: do a6, mot han ché cia phuong ph4p nay 1A khi fin hanh edn phai sit dung céc thudc gay tte ché mién dich hay chiéu xa, lam gidm dép ting thai loai ciia cd thé chi vdi té bao ghép. Dén nay, cély ghép céc té bao géc trudng thanh da gét hai nhiéu thank cong to Ién, dac biét 1a cay ghép cdc 18 bao géc tao mau tif tuy xuong, hay mau cudng rn. ll. CONG NGHE MO VA CAY GHEP CO QUAN Cong nghé mé la vige sit dung céc té bao chuyén biét cd quan dé nudi cay trén mot gian gido (scaffold) ex vivo. Cong nghé mé dugc phan biét vdi “sy tai sinh mé cé hé trd”, trong d6, céc gian gido dugc thiét ké dé lam tang cusng suf tai sinh don d6c cac t6 bao cut tnd tai vi tri cay ghép nd. Néu khéng dé cap én tinh hitu dung lam sdng, thi viéc sit dung tiém nang théng qua thidt ké thi nghiém cia ede chién luge céng nghé mé 1a v6 tan. Chang han pham vi tir tdi sinh tién lam sang ca sy thay thé van tim, dén su cu tric ex vivo cia céc sOng mai, dén sit thay thé cd quan nhu bang quang.Chuong 8. TE bao géc va tiém nang tng dung 43 Bang danh sch cdc m6 véi tiém nding dvfgc thiét ké dang cit dai ra mot cach déu dan. Didu nay chitng té su tién b6 trong cdc nghién citu té bao géc, va suf nhan dién ra dac tinh sinh hoc duy nhét cia chting, mac di khong phai tat cd déu Ja liéu phép dya vao té bao gc, bai ching cdn lién quan dén su cau tric mé (hode ex vivo hodc in vivo). Cac nghién cifu pilot trong nhiéu hé thdng khac nhau da dinh hu6éng nhing vién cdnh tuyét vai cho cong nghe md dita vao té baa géc. Hidn tai, nhitng md tgo ra bling céch sit dung t bao g6c cé mot pham vi da dang: tit cdc bd mat biéu bi (da, giéc mac va céc mang nhdy), dén céc mo xudng, Nhitng hé théng nay khdc biét trong téc d6 ty lam mdi va cau tric vat li, day 1a yéu té quyét dinh quan trong cua cdc nd luc, nhAm thiét lap céc m6. sit dung t bao géc. Sit danh gié cia nhtng tinh da dang c6 hiiu cia céc he thong co quan va cac t6 bao g6c cing ngudn, la odin thiét cho sy phat trién cia cc chién luge thich hgp, khi can thiép vAo céc linh vite chuyén biét nay. Hai ting chung cilia céc té bao géc dé thay nhét trong cong nghé mé la tai tao da cé lién quan dén su hinh thanh cAu tric cia céc phién hai chiéu, thi hai la sy hinh thanh xuong, ign quan dén qué trinh tdi cu tric cita cdc cau trac bén trong dang ba chiéu. Cong nghé da vi nhing bé mat khac =a Nubi té bao fibroblast lén scaffold Su tang sink trong didu kign ex vivo dé duy tri “holoclone” (qudn thé 16 bao gic) Vét bing mat da hodn toan Hinh 3.2. Su tai tao da trong khdng gian 2 chiéu Tytghép da bang céch nudi cde té bao sitng trong cdc diéu ign thich hop khong chi tao ra mét phién biéu bi, ma con duy tri quan thé té bao géc (holoclone).44 7 = vin 1 : Bai cvong ve té bao ase Su phuc héi vinh vin cia mé duge xéc dinh bai su ty lam méi lién tuc cia cdc té bao goc. Qué trinh tao méu cung cp mot so dé tét nhat cia h théing (va co ché) hy lm méi, phy thodc vao t6 bao gée. Sut khac biét gitta mot cap bac cilia cdc té bao tién than tao mau, vai cée kha nang khac nhau dé tt lam méi, chi 14 mét ngan nhé trong chuong trinh cba cdc té bao géc. Dé cé dude sf phuc héi hoan toan va vinh cifu cia qué trinh tao méu (chang han sau khi chiéu xa lidu gay chét), thi cd ché ty lam méi cé vai tro chinh yéu va chiing dién ra trong mot thai ki rét dai. Tuong ty nhu vay. cdc t6 bao tién than hién dién trong nudi ediy siing cling duge x6p c&p dé, va dust cdc didu kign tao dong khéc nhau, chiing hinh than céc kiéu tap doan khéc nhau (holoclone, meroclone va paraclone). Qua dé chiing t6 cdc sing a3 c6 sy khdc ahau ding ké trong kha nang ty lam mdi ciia minh dé biét hod, tao ra biéu bi Chi cdc holocione 1a sin phém thyc sy cita té bao géc, bdi kha nang nhin ban khéc thutng cita chiing (trén 140 ldn nhan déi). Holoclone khong gidng nhu cdc quan thé meroclone (mét quan thé ila cdc té bao khuéch dai chuyén), hay cdc paraclone (quan thé edc 16 bao gid yéu, hay cdc té bao tién than dang biét hoa). V8 nguyén t4c, mét quan thé té bao nhé, nhung tinh sach dé tao ra holocione la rét can thiét cho sy ghép bidu bi tsi sinh, Gan day, viée xdc dinh, céc marker t& bao géc sing cé thé cung cp mot cOng cu méi cho chién hige nay, rét c6 trién vorg cho viéc tdi tao mo biéu bi. Vide tu ghép da duge tién hanh bing cach nudi cay céc té bao sitng tao ra phign biéu bi, sau d6 cy phién nay cing véi nén cae ca chat gidng mé lién ket thich hgp. Sau khi ca cy ghép dau tién thanh céng, kT thuat nay cho két qua khéc nhau trong nhiéu tru’ng hp cély ghép tiép theo. Cac diéu kién tht nghiém cé thé gay mat hét céc ngan tao ra holoclone trong nudi céy té bao, didu nay wong tu vdi su mat mét tig phdn clla cdc ngan té bao géc biéu bi thuding xy ra trong diéu kién in vivo (chdng han trong sudt qué trinh gia di). Su duy tri hay mét di cla cdc té bao géc thuc st trong quan thé té bao sing in vitro c6 téc dng quan trong trong qué trinh tao mé do ban chat cia vat mang, hay chat sit dung cho nudi cay, cay ghép, va diéu nay cé thé gidp tinh todn truée cho nhitng tn suet that bai trong thuc hanh lam sang cy ghép, Sy thanh cOng (trong thi gian dai hay ngéin) cha viée cy ghép cha da phu thudc vio viée gitt duge céc té bao géc trong manh ghép. Mot thi thach ki thuat c6 tinh chuyén biét trong su phuc hdi cia cdc bé mat biéu chita cic diéu kign nudi cay va vat mang, 3 ché ching phai duc thiét ké sao cho cé kha nang dac biét, duy tri duge mét ngén té bao géc thich hap trong manh ghép dugc ché tao néi trén. Su phu thudc cla céc bé mat biéu mo tren céc ngan té bao géc lien quan cang can duge chit ¥ hon nia, khi ngudi ta sit dung thanh cng mang 6i dé thu nhén, nuéi céy t8 bao gic trong tdi tao md gide mac.vang 3. TE bao gée va tiém nang ing dung 45 Cong nghé ma xuong Gac té bao géc xuang (skeletal stem cell_SSC) cling dutse biét dén ohu 1a "Ao g6c nén tuj xuong, hay té bao géc trung mé 6 trong mot nhém phy céc 16 bao géc bam dinh duge cba tu} xuang, va ching c6 thé tang sinh dai han trong nudi cay. ‘Trong m6 hinh cdy ghép lac vi, t&t cd cdc mo chinh thay cé d trong xutong, nhy mét cd quan (xiang, sun, md va céc té bao adn hd trd tao mau dén dude hinh thanh. SSC sau khi duc thu nhan, khi nuéi cay phdi két hgp ching vdi céc gid thé thich hgp trudc khi cay ghép. Sy két hop néi trén nh&m cung cap mot gidn gido khdng gian ba chiéu, ghip mang lvéi mach mau cé thé duge thiét lap, va cdc 16 bao géc tién thn cay ghép c6 thé bidt hoa, tit dé hinh thanh ed quan tu} xuang/xudng. Céc vat ligu thich hgp da duge tao ra va chugn hod, gém céc hydroxyapatite/tricalcium phosphate téng hap, céc polyglycolic va polylactic acid. Hau hét, ching rat higu qua trong sy hé trg tai tao xuong, hoge mot minh hoac két hgp véi cdc nhan té tang trudng, nhu nhan t6 tao hinh thé xuigng (BMP), Trong quy trinh don gian nhét cho tai c&u tric xuong, SSC duge tach ra tit mét thé tich gidi han cia tuy xtong, sau dé chting dugc tang sinh ex vivo, dita cdc té bao nay vao gid thé thfch hop va cy ghép cuc bd. Quy trinh nay cé két qua t6t trong vidc sta chifa cdc khiém khuyét nghiém trong ma 4 a6, mé khong thé tu sita chita bdi cdc té bao con lai trong mé ngan can. Chién luge thit hai dan dén su tai tao in vivo hoan toan cia céc flap xuong tao mach trén cd sd hinh dang mong mudn. trufdc khi sit dung cho cay ghép cuc bé. Trong céc thi nghiém nay, SSC duc trai vao gid thé thich hdp va cay vao vj tri khong pha xing xung quanh mét tinh mach va déng mach; dé chiing tao ra mét doan xudng cé mach méu, kich thuéc va hinh dang da dusc tinh todn trude, thong qua céu tric hinh hoc cla gid thé.46 Phin 1 : Dal cuong vé té bao géc TE bao gée xumg Y Tang sinh ex vivo e523 y Bam vio ede tiéu phan 2 ' hydroxyapatite /tricaleium Phosphate Cay in vivo vao ede khiém khusyét doan xttomg Hinh 3.3. Ce mé xuang trong khéng gian ba chiéu dugc tee ti 16 bao 6c Trong su tdi tao xuong, sit tang sinh ex vivo ca cdc té bao géc xiang thu tit tuy xuong va su bém dink vae cdc gian gido ba chiéu, nh cdc gée hydroxyapatite/tricalcium phosphate 1a rdt can thiét. Composite nay cé thé duoc ody vao céc khiém khuyét mat doan va sé tdi tao mot edu tric khong gian thich hgp in vivo. TI. LIEU PHAP GEN Ligu phdp gen c6 thé dugc phat huy bing cach sit dung t bao géc bién d6i di truyén nhut mot vector mang gen chuyén. Hai khiém khuyét Ién cita liu php gen la: (2) Céc riii ro do hé théng mang gen c6 thé gay ra. (2) Sy dép ting thai logi mién dich. Sit dung té bdo g6c dua gen vao cd thé, theo If thuyét s@ khde phuc hai khé khan trén, béi chting 1a ciia ban than (my stem cell), nghfa 1 thu nhén té bao sinh dvt@ng truing thanh cila co thé ding dé cho nhén, nhan nay dude chuyén vao té bao trimg loai bd nhén va sau dé t6 bao nay sé phat trién tao thanh phdi mdi. G giai doan phdi nang, céc té bao gdc Iép ICM duge thu nhan, chiing duge goi 1a cac my stem coll (myES).Chuong 8. T6 bao gBc va tiém nang Ung dung 47 Kh6ng gidng nhut hé théng mang gen cita virus tiém &n nhidu riti ro, cc myES hau nhu an toan, do bé gen 1a cita cd thé chi va vi vay, cdc té bao nay kh6 bj thai loai. T€ bao sinh duong Y Bénh di truyén Bonk ung thu Benh mién dich Tuong hop MHC Hinh 3.4. Chién luge oling 18 bao 6c trong lieu phap gen IV. KIM NGHIEM HOA CHAT Cac t& bao duge sit dung cho phét hign thudc, hay doc chat thuting duge thu ohgn tit céc m6 non, tit khdi u lanb tinh, hay nhiing té bao bién ddi di truyén. Nhung nhitng té bao dong vat c6 vi non van bi gidi han vé thi gian s6ng khi nudi cay, nén anh hudng dén ting dung trong cdc ki thuat sang loc. Nhiing té bao thu nhan tit kh6i u hay bién déi di truyén (4é tré thanh ung thu) 86 thich hgp cho sang loc va céc thi nghiém thi cp. Tuy nhién, do nhiing té ‘bao nay bat thuding vé di trayén, do 46 nhiing két lvan dya trén chitc nang gen bj han ché. TS bao géc c6 nhiéu thugn Igi han so di nhiing té bao dé, ching la nhitng té bao binh thing vé di truyén, déng nhét trong quan thé, nén c6 thé nudi cy va duy tri trong mot thi gian dai. Do vay, ting dung té bao géc dong vat c6 vi mé ra ligu phép méi trong céc thit nghiém dya trén té bao, Nhiing nim gan day, céc té bao gée dude sy quan tam ngay cang tang béi su thanh cOng ctia né trong céc ting dung y sinh to Idn. Céc té bao gic c6 kha niing ty lim mdi chinh n6; nghfa 1a ching tiép tuc duge nudi cay trong trang thai khOng biét hod, tao ra nhitng té bao chuyén hod cia cd thé nhut tim, gan, mach mau, tuy... Do 46, té bao gc la cOng cu quan trong cho sy phat trién céc hé théng m6 hinh in vitro thit nghi@m thudc va hod chat, ngoai ra ching cdn c6 tiém nang dy doan truéc déc tinh trong co thé ngudi.48 Phan 1 : Bai cuong v6 16 bao gic Cac té bao géc tring thanh thu nhan tit céc nguén khéc nhau nhu tuy xulong va nhau thai cé thé c6 tiém nang tao ra cdc mé hinh thich hgp cho doc tinh 1én tim, gan, lén bo gen, va cc sang lgc dc tinh trong sinh sin. Ngoai ra, céc t6 bao g6c thu nhn ti phoi nhu ES hay EG cing cé tiém nding [dn trong thtt nghiém déc tinh. V. BIEN BOI GEN DONG VAT Sy xéc 4p dc tinh cia céc t® bao géc phoi da nang (ES) la méc quan trong trong nghién cifu sinh hoc phat trién va sinh hoc phan tit. Cac t bao ES duge thu nhén tit lép sinh khéi té bao bén trong (ICM) ciia phdi nang va khuéch dai khong biét hoa, ching tham gia vao qué trinh hinh thanh cita bat ki cd quan nao trong cd thé, ké ca bd phan sinh duc. Bay la mot trong céc phuang, php thutng ding dé tao thé khdm, C6 thé chuyén gen bang cach bién déi di truyén cac té bao géc. Cac phuong phap thuding duoc ding: chuyén NST, lai té bao, dung hop vi tiém t& bao, chuyén DNA bing calcium phosphate, vi tiém DNA, stt dung retrovirus vector va dién khoan.. Cac té bao g6e phdi @ giai doan 16 - 32 18 bao duge sit dung dé bién nap gen bing cach nhiém véi vector virus, Sau khi chon ra cde t bao da duige bién nap gen chuyén, tién hanh dua chting vao ph6i khéc 8 giai doan phoi nang 3 tgo ra dng vat chuyén gon thé km. Ti 16 cc phOi sng sau thao téc kha cao (80%), trong 46 c6 90% biéu hién tinh trang eiia gen chuyén. Tiép 46, nguei ta tin hanh lai tao qua céc dai, 4é thu duge dong vat déng hgp tit vé cac tinh, trang mong mudn da duge chuyén truéc 46. Tink tring Phoi nang Chuét me nhan 79 > ran® Céc gen muc tidu , dua vao té bao g6e {ove kham \ ao™. AY bidn déi gen Hinh 3.5. Chuyén gen théng qua t8 bao ase ph!bao gte va ver ndag Ung dung 48 VL BIEU TRI BENH TU MIEN Benh ty mién dude biét la két qua tir sit hoat hod sai lac cia hd théng mién dich, thong qua sy két hgp cia céc nhan t6 méi trudng va di truyén vdi nhau, dan tdi sy that bai trong céc co ché duy tri tinh khang mién dich. Trong 86 cae bénh whan da dude diéu tri bang ttc ché su viém, sét théng qua mién dich, mac di trong hdu hét cdc trudng hdp, khong thanh e6ng trong pha ofp tinh chuyén biét, C6 rét it thanh céng dat dude vdi cac bénh ty mién nién, hay thai loai cy ghép cd quan, mac di van tiép tuc de ché ign dich. C6 nhiéu cd ché viém va min dich lién quan, bao gém cae con duting huy dong, cic phn tY quan trong (nhitng phan ti nay 1a nhan tO hoai tit khdi u (TNF) va cdc phan ti o,8, integrin 6 lymphocyte). Viéc phong toa ca cdc phan ti n6i trén cho két qua t6t, mang lai ich lgi lam sing & céc bénh tu mién khéc nhau, nhung viéc kim ham ching qué mite, ddn dén sy khéng trong mot théi gian dai thi chua dat duge. Citta is bn by nun bing céch ghéip t@ bio géc tay man Gan 800 bénh nhén khp thé gigi da nhén c&y ghép HSCT nhw la chifa tri cho bénh tu mién, 624 bénh nhan (596 ty ghép) duge dé nghi trong nhém céy ghép tuy xuong va méu Chau Au (EBMT), trong di ligu Lién higp Chau Au chéing bénh thap khdp (EULAR), va trong Dang k{ Cay ghép tuy xuong Quoc téd Mi. Buse cy ghép phé bin nhat la bénh xd citng rai réc (multiple sclerosis_MS), bgnh xd ciing toan than (systemic sclorosis_SSC), viém da khép (rheumatoid arthritis RA), luput dé hg théng (Systemic lupus erythematosus_SLE), bénh Crobn... Ca sd cba vide cay ghép nay la cdc t& bao chite ning mién dich ting thanh nhan dién nhang té bao ciia chin co thé 1a khong phdi cia cd thé, ci 16 bao n6i trén sé bj tiéu huy bang cc thudc gay we ché mién dich manh hay chiéu xa; sau dé co thé duge cay ghép cdc té bao géc tao mau mdi, Nhiéu nghién cxfu cho thay vide sit dung céc tac nhan tidu huy nay con tiéu dist cd hé théng tao méu tao ra cdc té bao hoat dong sai lac. Khi cy cdc té bao Boe tao mau mdi vao, cdc té bao nay sé lam té va khdi phyc lai hé théng tao mau, hé thing t& bao mién dich cia cg thé. Céc té bao méi nay dugc hi vong la khéng nhén dién va dao thai thé chi, Nhiéu thi nghiém diéu tr bing phuong phdp bénh tt mién dat thanh cong cao. bidu bid m dich trong bénh ti mién bang ote té hao ade ins Cac 16 bao g6c trung mé (mesenchymal stem cell_MSC) khdng kich thich min dich in vitro. Ching khéng cdm ting suf tng sinh cdc té bao lymphocyte khj déng nudi cily véi cdc t& bao lymphocyte cing nguén. Chung cing khong phai la muc tiéu cho cdc té bao lymphocyte gay déc, hay céc té bao NK mismatch ligand KIR. swcreanocoe50 CA cae t6 bao lympho CD4* va CD8* déu gén vao céc MSC, ching tao su gia tang 4i hyc giip cdc té bao T hoat hod. Vai phan ti bam dink biéu hién ¢ cdc MSC can thiét cho su tuong tdc véi té bao T. Cac phan tt bam dinh té bao thanh mach 1, ICAM-2 va khng nguyén két hap chife nang lympho 3 (LFA 3), hién dign trén céc té bao MSC khéng kich thich, trong khi dé sy biéu hién cia ICAM -1 1a cam ting. Céc két qua in vitro cho thay MSG c6 nhitng dac tinh ti ché mién dich. Céc té bao MSC ngudi va khi déu ché, gam nhém tte ché sif tang sinh cac té bao lymphocyte trong nudi cy hén hgp (MLC), hay cdm ting vi céc mitogen trong kiéu phy thudc vao liéu lugng. Sy tte ché c6 thé cting thong qua cdc cd ché khac nhau phy thudc vao sy kich thfch céc té bao T. Chang han, MSG gia tang su phién ma va sy dich ma cia IL-2 va cdc receptor IL-2 hoa tan trong MLC, trong khi dé c4c mic d6 phién ma va dich ma sé gidm, néu MSC hién dian gitta céc lymphocyte duge kich thich mitegen. Tuong tu, sit phu thuéc vao dong hoc ciia MSC cé thé tang cuting hay tic ch& IL-10 trong MLC. Mot anh huéng tc ché mign dich cla MSC in vivo lén dau tién duge dé nghj trong mo hinh khi dau ché, nai ¢6 sy dung hgp céc thé cho ex vivo, hay déi téc thtt ba MSC lam tré qué trinh thai logi cla cdy ghép da khéng tong thich mién dich. MSC cing o6 thé diéu hoa xudi cdc co ché viém phi cdm ting bleomycin va suf x0 hod trong mé hinh chugt. MSC chap nhén mét hinh thai ging biéu m6. Su dép ting phu thudc vao thai gian diéu trj MSC (cang sém cang t6t) va bi dao nguide khi bj xif Ii IL-2, eée nha khoa hoc cho ring, cd ché nay biéu thi cila tinh di ting hon 1a qué trinh apoptosis, Tuy ahién, trong mé hinh chuét bénh viém khép thi khong thay cai thién dugc bénh khi tiém MSC vao. Cée MSC sau khi tang sinh sé duge tiém truy€n trong mét so nghién ctu vé phase I. Khéng quan sat thay céc su kién d6i lp nhanh trong suét qué trinh tiém (hay sau khi tiém) truyén MSC, va khéng ghi nhan dugc su hinh thanh cdc mé lac vj dugc. Sau khi tiém treyén, MSC van gid lai trong hé tudn hoan khong qué 1 gid. Mac da sy kham té bao nén khé duge thiét lap, nhung MSC cay ghép dude phat hién trong vai m6 4 mitc ti 18 thép. Loi ich ligu phép tiém truyén MSC nay 6 ché cé su san xudt cuc bé cla c4c nhAn t6 tang trudng va chuén bi tte ché mién dich tam théi, Nhiéu ngudi dé nghj rang, anh huding cia vic ché mién dich bing MSC in vivo tét hon su phét trién ciia tinh khéng binh thudng. ae-reBa0Goc51 Vil. PRONG NGHIEN CUU Cac té bdo géc phdi ngudi cé thé cho phép nghién ctfu qua trinh, thai diém dinh buéng biét hod cla té bao thanh cdc dong chinh cia co thé, cing i@c cae dang nay djnh hu6ng thanh nhiing bd ph4n thé so clia céc mé va cd quan ra sao, hoac bang cach nao 46, ac t€ bao bén trong nhitng bo phan thé so nay duge biét hod thanh vé s6 cac loai t& bao chic nang, lam nén ang cho mét co thé nguii trudng thanh, Nhing kién thite c6 duge sé 1c dong dén nhiéu linh vyc, vi du vé sinh hoc ung thu (phat sinh ung thu hign gia duge hidu 1a do su r6i loan trong tién trinh phat trién binh thuting). Gid tri céc kién thitc cia té bao HES s@ gia ting su hiéu biét nguyén nhan cia cdc sai s6t trong sinh sdn, vi thé sé dua dén mot hung ding 4é kh&c phuc. Céo nghién citu vé mét sé bénh cia ngudi bj han ché rét 1én bai sy thiéu thén cdc mau in vitro. Mét s6 virus phét sinh bénh [virus gay thiéu mién dich va virus viém gan siéu vi C) chi phat trién trong té bao ngui va tinh tinh. Cac 18 bao géc phdi cé thé cung c&p céc dang té bao va mé, thhic déy nhanh viéc nghién ctu bénh,Chudng 4 TINH VAN NANG VA SU TU LAM MOI I. TINH VAN NANG VA SU TU LAM MGI 1.1. Tinh van nang ‘Thudt ngt van nang (pluripotent) duting nhu dé chi cde t6 bao géc thu nhan 6 phéi nh BS, BC va EG. MOt t6 bao g6c c4 tinh van ning 1a té bao cé. tiém nang biét hod thanh tat ca cdc t@ bao ciia ba 14 phdi (ngoai bi, trung bi va ndi bi). N6i cach khéc, chting biét héa duge thamh tat ca céc té bao ciia co thé, trit phan phu ngoai pb6i (nhw nhau thai va cuéng rén). Hinh 4.1. Thdm dinh tinh van nang cla 16 bao 6c (a) Thé phdi hinh thanh do cdc 18 bao géc két hgp Iai véi nhau khi trong méi trudng khong o6 LIF hay Idp feeder; (b) Lit edt mé ctia kh6i u quai (teratomacarcinoma) cho thdy sy hinh thanh nhiéu kiéu té bao khde nhau; (c) Chuét khém duigc tao ra bang céch tiém té bao géc vao phéi nang. (Nguén: Robin Lovell Badge, The future of stem cell research).Chuong 4. Tinh van, Dé xéc dinh tinh van nang cia mét t& bao géc, ngoai vide sit dung céc marker phén tit, ngudi ta thu@ing phai thic hién ba thi nghiém sau = Ti6n hanh tiém cac 18 bao gc dé vao khoang phéi, giai doan phdi nang ctia mot lodi/gidng khéc. Néu la t& bao géc van ndng, ching sé sét nhdp vdi céc té bao ICM cia phdi nhan thanh mot Khoi va'tit dé gita chiing s@ c6 su “phan céng” biét hod cho nhau. Két qué la nhing *& bao tiém vao sé tham gia vao viéc hinh thanh céc co quan, bd phén ciia co thé khi sinh ra, goi 1a su kham va co thé ¢6 sy Kham nay goi la thé khdm (chimera). Trong thé kham, cdc t& bao cé nguén géc tit cic phéi khéc nhau nhung hoat déng mét céch déng bé, thong nhét; ca thé khdm van thuc hién duge céc chitc nang cia sv s6ng. Trong sy khém trén, ngudi ta quan tam truéc hét dén khém sinh duc con goi la kham dong sinh, day 1a hién tugng té bao cho tham gia vao qué trinh hinh thanh giao tt ctia c4 thé khdm (c4 thé nhén). Trong vai trugng hgp, mot thai c6 thé dude tao ra tit cde t6 bao géc van nang nay. Tuy nhién, cdc t& bao gc van nang khéng thé hinh thanh nhau thai, vi trén thyc t6 cdc té bao nhau thai xudt phat ti’ mét ngudn khéc, Déy la thi nghiém cho thay r6 tinh van nding cia céc t6 bao géc. Tuy nhién, phudng phap nay khong duge phép sit dung 4 nguai. ~ Thi nghiém thi hai 1a tign hanh tiém céc té bao géc ting vién van nang vao tinh hoan. duéi da, hay vé thén cia déng vat khiém khuyét mi&n dich (ahu chudt SCID). Néw cé tinh van nang, sau khi tiém, ban than ching sé hinh thanh cdc khdi u quai (teratoma) chita cdc m6 khéc nhau xudt phat tif cd ba lé phi, Mét so cau tric nhut de day, cae t6 bao co, xuong, than kinh va téc hinh thanh, nhung ching duge s4p xp mot c&ch rt r6i loan. ~ Thi nghiém thit ba la céc té bao géic 46 c6 kha nang bigt hod in vitro. Sy bigt hod ty phat 98 xay ra khi nu6i trong m6i trudng khong cé lép feeder, hay nhan té tc ché bénh bach cau (LIF). Chung sé hinh thanh nhiing lim té bao chita day dich goi la thé phoi (Embryonic body_EB). Néu cdc thé ph6i bam vao dia nudi, ching sé bigt hod thanh nhidu kidu mé va céc khdi u. 1.2. Sy ty lam méi Kha nang bt lam mdi va biét hod la hai dac tinh quan trong ola cdc té bao géc. Sy tu lam méi c6 thé duge dinh nghia la qué trinh tao ra nhting ban sao cdc té bao géc, thong qua qud trinh nguyén phan, vé nghfa la it nhét mot té bao chj em cé thé duge tao ra van gid dac tinh cing véi kha nang ty lam mdi va bigt hod. Trong tinh ty lam mdi, sy phan chia t€ bao aéi xing c6 thé tao ra hai t& bao géc; sut phan chia khong 46i xiing c6 thé tao ra mot té bao géc, ho&c la mot U8 bao biét hod, hay mét t& bao géc vdi kha nang biét hod cé gidi han. Sy ty 1am méi bai qué trinh phan chia déi xitng thudng dugc quan sat @ céc t& bao g6c nhat thd (transient stem coll), ching xudt hién trong qué trinh phat trién84 cia phéi giai doan sém dé gia tang kich thuéc cd thé. Trdi lai, sy tu lam mdi di qué trinh phan chia khong Adi xting 6 thé théy 6 cdc té bao géc trong phéi @ giai doan phat trién mun va trong cé thé trudng than dé duy tri can bang n6i m6. ES la cc té bao van nang thu nhan tif cdc phdi tién lam t6, Cac dong ES dau tién duge thiét lap tit céc ICM ciia phoi chudt giai doan phéi nang vao nam 1981, béi Gail Martin, efing nhvt bai Martin Evans va Matthew Kaufman. Cac té bao géc van nang bi chuyén ddi trong suét qua trinh phat sinh ph6i; do dé kha nang thu nhan céc 1 bao ES trong qué trinh phat trién s6 rt khé Khan. Trong trudng hgp phat trién cia chudt, quan thé t bao gé¢ van nang dau tién dugc tim thay la ICM, ching dugc thu nhan bang vigc tach bé céc lép dudng bao (trophoblast) trong qué trinh hinh thanh phéi nang tai 3.5 dpc. Tai 4.5 dpe, lp ndi bi sd khai cé thé dugc quan sét tai bé mat cia ICM va van gitt quan thé 18 bao van nang, chiing dugc bao phi béi ndi bi sa khai (duge xéc dinh la epiblast). Sau khi lam t6, cdc té bao epiblast bat dau tang sinh nhanh va gia tang kich thudéc. Tai 6 dpc, syf chét theo chung trink hod cila cdc 16 bao loai bd phan trung tam cia epiblast, két qua 1a hinh thanh Idp dan biéu bi hod cdc té bao gc van nang (dugc goi 1a ngoai bi so khai). Ngoai bt so khai di vao qué trinh biét hod thanh céc t& bao lép mdm phoi trong suét qué trinh phéi vi hod, va né 1A cdc 16 bao bi mat di tinh van nang. Sau 7 dpc, chi cae té bao mém tai ranh sinh duc duy tri dudc tinh van nang tim tang, va tit 46, c6 thé thiét lap dude cdc té bao mam phéi (embryonic germ cell) in vitro ~ nh béo cdo cia Yasuhisa Matsui va cong sv (1991). Céc té bao ES khéng tuong dugng vdi cdc té bao géc van nang tai ICM, mac dit chting duge thu nhén true tiép tit ICM. Cac t6 bao géc van nang ICM phn chia ch4m. Trong phéi nang mudn, théi gisn tang sinh gép déi cla céc 18 bao ICM duge wéc tinh 1a 96 gid hay dai hon. Trong khi 46, cdc té bao ES chuét phat trién nhanh hon, ching cé théi gian gap déi a 12 dén 14 gid. Su phat trién nhanh cia cdc té bao van nang duge quan sat chi trong epiblast sau khi phoi lam t6, va né cé thé khdi sf bai cdc tin hidu tir ndi bi so khai va ngoai bi ngoai phdi. Thai gian gap doi cia chting tai phOi $ dpc la 11 Jén 12 gid, gan nhut bang vdi céc té bao ES, va né dat 4 dén 5 gid vao ngay 6 dpe. Céc té bao ES hau nhu tuong ty vai cdc té bao géc van nang trong epiblast vao ngay 5 dpc. Kiéu biéu hién cila cdc gen marker chuyén biét trang théi cing cho phép dé nghj ring : cdc té bao ES hdu nhy tong ty v6i epiblast gitta 4,75 dn 5,0 dpc. 1. GAC NHAN TO ANH HUGNG Kién thie vé 18 bao géc dén nay (2008) c6 thé khéi quét: cic yeu t6 diéu Khign su duy tr trang thai khong biét hod cla cde té bao géc phoi duge xép vao hai nhém chinh, céc vé™ #4 bén ngoai (extrinsic factor) va céc yéu té bén trong (intrinsic factor.9 4. Tinh van nang va su tu lam mot 55 TL, Cac ye =o té bén ngoai Nhan t uc ché bénh bach cau (Leukemia inhibitary factor - LIF) Khi cdc dong té bao ES chuét (mES) duge thu nhén du tién vao nhiing nam dau thap nién 1980, ching duge khuéch dai bing vigc déng nudi cay v4i lép té bao feeder. Phutang phdp nay dude thita hudng tit quy trinh nudi céy cdc té bao EC. Chinh cdc 18 bao feeder hd tra cdc ES thong qua vide tidt mot tin higu lam ngan can su biét hod. Sau nay, ngudi ta da tién hanh nudi té bao ES véi méi trudng da nudi céc té bao feeder (m6i truBng diéu kién: conditional media_CM), nh&m tan dung nhitng chat ma 16 bao feeder tiét vao moi trudng trong qué trinh chuyén hod. Nhidu nghién cfu san d6 da x4c dinh nhan té quan trong dé la LIF. LIF, a duge téng hgp, sdn xudt 4é bé sung vao mdi trudng nudi nhy 1a mét phutong phép méi, thay thé cho viéc déng nudi cy (co-culture) (Smith va céng su, 1988; Williams va cOng stf, 1988), LIF thu6c ho cytokine kiéu interleukin 6 (IL-6) (Rose-John, 2002). Ho nay kich thich té bao thong qua cdc receptor gp130; gp130 lam vigc 6 dang heterodimer cing véi mt receptor chuyén biét ligand (nhu LIF-R). gp130 duige bidu hign trong tat ca cdc té bao cia cs thé, trong khi d6 cév: tigu phan chu biét ligand chi biéu hién d nhiing té bao chuyén biét."Ngoai LIF, cda hai nhan. td khdc '& oncostatin M (OSM) va ciliary neutrophic factor (CNF) (cing thuc ho cytokine IL-6) c6 thé si dung trong CM. Su hoat hod nhén t6 gp130 dan dén sy hoat hod cia tyrosine kinase két hgp Janus (Janus associated tyrosine kinase_JAK), céc protein chuyén tin hiéu (signal transducer protein) va céc protein hoat hod phién ma (activator of transcription protein_STAT), cing nhy sf chuyén vi cia ching dén nhén, gén vao DNA va sau dé hoat hog phién ma. Kha nang LIF ngan can sy biét hoa cia cdc mES phy thudc vao su hoat hoa cia STATS. Ding thdi, suf hoat hod ciia STATS (ngay ca khi LIF vdng mat) cling cé kha nding lam t bao tang sink (Matsuda va cong sf, 1999). Hon niga, ngoai viée hoat hod STATS, LIF cing cdm ting cdc tin higu khéc. nhit lam hoat hod ERK (extracellular receptor kinase) (Burdon va céng sv, 1999). Khi ERK hoat hod sé kich thich su biét hod, do dé, su cn bang gitta trang thdi hoat hoa STATS va ERK sé quyét dinh sé phan cia t€ hao ES, hoac phan chia binh thutng, hoac biét hod. Rd rang, céc tfn higu kiém soat sit hoat hod ERK cé vai trd quan trong nhim duy tri trang thai kbéng biét hod. Su tte ché PISK (phosphoinositide 3-Kinase) da dan dén sy bigt hod cia (Paling va cOng sy, 2004), Con dudng tin biéu PISK cing duge cém tng béi LIF va sit bigt hod nhut la két qua cita su gia tang c4c ERK hoat hod.1. Bar quong vé te pay go Mét con duting khéc duge dé nghj: hoat hod bai LIF trong mES. Con dutng nay lién quan 4én sv hoat hod ho Src cia céc tyrosine kinase khéng receptor (nonreceptor tyrosine kinase} va thanh vién cYes dic biét cla né (Anneren VA cOng Sif, 2004). Su tic ché ho nay lam gidm st phét tridn va biéu hién céc marker ES @ mES va hES, Su hoat ha cia cYes trong mES duge diéu hda gidm (down-regulate) bai ca LIF va huyét thanh. Tuy nhién, dutmg nhu cYes khong cé chifc nang trung tam in vivo vi chuét bi d6t bién cYes vdn sOng va hu thu (Stein va cong su, 1994). Bang 4.1. Céc cytokine cén thiét cho sy ty lam mdi cia ES Protein | Chut dot bién Vai tro trong mES_| Vai trd trong hES uF Hu thy, thiét yéu | Thay thé sucdn | Khong c6 vai tro 16 cho sy lam té cia thiét cia té bao rang trong ty lam phéi (Stewart va cs, | feeder (Williams | mdi (Daheron va cs, 1992) va os, 1998) 2004) BMP4 | Khong tién dén giai | Thay thé nbu cdu | Lam hES biét hod doan egg cylinder. | cia huyét thanh_| thanh 14 nu6i phoi That bai thiét lap | (Ying va cs, 2003) | (trophectoderm) phéi vj va wrung phoi (Xu va cs, 2004) bi (Winnier va cs, 1995) bFGF | Sdng, khiém khuyét | Khong cén thiét | Can thiét cho sy trong suf phét trién —j cho sf ting sinh _| tng sinh trong mdi va chitc nang than trugng khéng huyét kinh (Dono va es, thanh (Amit va cs, 1998) 2000) ‘Trdi véi vai trd ca LIF in vitro, nhiing nghién cifu knock out cho thay tin higu LIF khéng cn thiét trong suét qué trinh phat trién phdi binh thug giai doan sém. Chudt dot bién LIF van phat trién va hitu thy, mac di LIF cén thiét cho suf lam t6 cde phoi (Stewart va cOng sy, 1992); chudt 46t bién LIF-R chét trong vong 24 gid sau khi sinh (Ware va cong sv, 1995), va s6 chudt d6t bién gp130 chét da ting dan sau ngdy 12,5 dpc (Yoshida va céng sv, 1996). Nhang nghién ctu tiép sau 46 dé nghj mac di LIF khéng cdn thiét trong sust qua trinh, phat trién sém binh thudng cia phéi, nhung né cén thiét trong qué trinh duge goi la thai ki nghi hogt déng (diapause) (Nichols va cOng sy, 2001).(Chuang 4. Tinh van nang va su ty iam mai 57 Ty déi méi va tinh da nang 14 au Garag JOPL| cay Gore = 7 Hinh 4.2. Cc con dung chinh lign quan a6n sy ty kam mdi cba 16 bao ES chudt Tin higu LIF va BMP4 cdn thiét cho sy tdng sinh t& bao mES. Sy gdn cila BMP4 vao receptor cia né dé hoat hod hai con duéng xudi dong (downstream pathway) lim ngan can sit biét hod. (a} Hoat hod Smads dan dén su ph ma cia gen Id, sy hoat dong cia gen nay lién quan dén sv tf lam mdi. (b) Uc ché’ ERK (nhdn t6' Iam té’ bao biét hod). Sy gén cha LIF vao receptor ctia né kich thich hoat hod cdc tin hiéu gay biét hod va tx hiéu chéng biét hod (anti-differentiation). Cdc tin hiéu gay biét hod gém hogt hod ERK, trong khi dé tin higu quan trong cho si ty lam mdi gém hoat hod STATS, hogt hod Scr va hoat hod Pi3K (lam ttc ché ERK). Céc nhén t6 phién ma dude biét co vai trd quan trong trong suf ty lam mdi 6 chudt la Oct4 va Nanog. Oct4 lam viéc trong su hyp tdc vdi nhén to phién ma dé diéu hoa sy phién mé ctia cdc gen muc tigu. Sy hop téc nay duge thiét lap nhd sy gdn vao cdc vj tr khéc nhaw trén enhancer cla gen muc tiéu cia ching Day 1a thai ki ma suf phét trign cia phoi bi dinh tré (xdy re trong vai tuan) tvong giai doan phi nang mudn trudc khi lam t6, nh’im dép tag lai suf tiét sita. Trong théi gian nay, té bao ICM gitt d trang thai kh6ng biét hod. Céc phoi dot bign gp190 khong thé hdi phuc phét trién sau ki nghi nay, va chting mat tinh da nang.38 Prin 1 Dai citing vé t6 nao go C6 thé vai rd cha LIF in vitro phan Anh didu kién khéc thuting ma 6 dé su khudch dai, tang sinh ngém ngdi cia ICM dugc kéo dai nhan tgo trong nudi cy, ging vai sy kéo dai ciia trang théi khuéch dai duge quan sét trong suét thi ki nghi cia phoi. Cac té& bao géc phdi ngu¥i cing cAin ding nudi cay vai té bao feeder, chang han MEF. Nhung khong thé nui cy hES trong moi trudng c6 bd sung LIF (nguén gée tit nguti hay chudt). LIF c6 nguén géc tit chudt khong hé hoat dong trén t6 bao ngudi (Layton va cong sy, 1994) va do dé, cdc protein tiét ra ti feeder MEF (té bao feeder fibroblast chudt) khong thé duy tri tinh da nang ciia t& bao hES. Trong hES cing nhit mES, dng nudi cy vdi té bao feeder c6 thé duge thay thé bing CM, va kéo dai nudi cay khong feeder cé thé duge duy trl trong sit hién dién cia chat nén ngoaf bao (nhu matrigel hay laminin) cing vi CM (Xu va c6ng sur, 2001). Dé gidi thich su khéng dap ting cia HES véi LIF, gid thiét adu tién dua ra la do sy biéu hién yéu hay vdng mat ciia cdc LIF-R (Rose-John, 2002). Tuy nhién, khi kiém tra gid thiét nay lai thay ring, c6 sy biéu hin khdc nhau cda LIF-R tron céc dang té bao hES khéc nhau (Ginis va cong sif, 2004), véi miic bidu hién thap dén khong biéu hién. Nguyén nhan thiéu dap ting cia LIF len té bdo hES khéng phai la do hES mét kha nang d4p ting véi LIF, ma la do sv hoat hod ciia STATS trong hES (cé vai trd trong qué trinh ty Jam méi cia mES) khong ngan cdn sy biét hod cla hES (Daheron va cong svt, 2004; Humphrey va cOng su, 2004). Thém vao 46, trong twang thai khéng biét hod cia hES thi con duéng STATS khong duge hoat hod. Trai lai, trong trang thai khong biét hod cba cdc t bao mES, thi con dugng nay & dang hoat hod. 11.1.2. BMPS BMP4 1a mot thanh vién thudc siéu ho TGF-beta cha nhém céc phan ti truyén tin higu polypeptide, ching lién quan dén su ngan can biét hod cia t6 bao mES (Ying va cong suf, 2003). Mac di LIF ngam chan higu qua sy biét hod cia mES trong moi tring cé huyét thanh, nhung khi khong o6 huyét than, ngay khi co hién dign LIF thi su biét hod thanh té bao than kinh vin xy ra. C6 1é do huyét thanh chifa nhiéu nhan (6 chua biét, duding nhu cé mét ft nhan té da ngin can sy biét hod. C6 thé bé sung BMP4 vao mdi trudng nudi cay khong huyét thanh néu cé sy biéu hign otia LIF, da xdy ra sybiét hog thanh cdc dong té bao (khong, phai té bao thdn kinh). Néu loai bé ca LIF va BMP4 thi chiing biét hod thanh 1 bao thén kinh, Do a6, LIF cdn dé duy tri kha nang khdng gay biét hod cia BMP4, ma khéng c6 LIF sé lam té bao biét hod. Vi vay, 06 thé két lun dugng nhu BMP4 ngan‘can biét hod cla mES thanh cacChong 4. Tinh van nang va su ty lam mot 59 té bao than kinh va LIF ngan cdn biét hod thanh céc 6 bao khéc (khong 1a bao than kinh). BMPS giGp cho sy ty 1am mdi cia mES th6ng qua su hoat hos cla cdc protein Smad. Chting sé hoat hod céc gen /d, 1a céc nhan t6 HLH am (negative bHLH factor). Céc mES dugc chuyén Id o6 thé phat trién trong méi truding khong huyét thanh va khéng cé BMP4, Huyét thanh cing cho thay c6 cdm ting suf biéu hién cia Id théng qua nhiéu con duding, va mES phdt trién trong suf hign dién cia huyét thanh, khong bé sung BMP4 thi céc gen Id biéu hién (Ying va céng su, 2003). BMP4.c6 vai trd trong sy fy lam mdi bang céch le ché ERK va protein kinase hoat hod mitogen p36 (mitogen-activated protein kianse_MAPK) (Qi va cong su, 2004). Tuy nhién, trong hES, viéc thém BMP4 vao moj tru@ng khéng kich thich su ty lain mdi mhu d mES, That vay, BMP4 lam cho hES biét hod thanh cdc té bao trophoblast (Xu va cOng sif, 2002), Day 1a mot su khac biét, mES dung nhut khong c6 kha nang nay. Sy khdc biét trong cdc kha nang tao ra trophoblast, pay s¢ chi § la.hES va mES co thé duge thu nhdn ti cdc giai doan khéc nhau trong su phat trién, va do.dé kha nang ty lam méi cia ching c6 thé chiu téc dong béi cc nhan ts khée nhau. 11.1.3. bFGF bFGF cén thiét cho nudi cay théng thug céc hES trong méi trudng thay thé huyét thanh (Amit va cOng stf, 2000). Trong méi.trudng khong hoyét thanh va cé bé sung bFGF, t& bao sé biét hod, trong khi dé néu bé sung bFGF, té bao sé cé hinh dang nén dac han va cé thé khang biét hod trong théi gian dai hon, Trong khi viéc thém bFGF khéng cén thiét cho su tang sinh cia mES, thi chting lai quan trong d6i véi céc té bio khae nhu té bao EG & cé ngudi va chudt. bFGF can cho viée chuyén trang thai tang sinh cé gidi han cia té bao mam sinh duc thanh quan thé té bao tang sinh v6 han (Resnick va céng su, 1992), Tuy nhién, a6i véi céc EG chudt, mét khi dong t6 bao da duge thiét dp thi DFGF khéng cdn cén cho nudi cy (Matsui vA cong sy, 1992). Nhitng khdo sat kiém tra su biéu hién cdc nhan t6 @ nhiéu con dung tin higu trong hES, cho thay sy hign dién cia cdc nhan t6 truyén tfn higu FGF, bao gém ca bin receptor FGF va cdc thanh phan ctia con dudng xudi ding, c6 nhidu trong cdc HES khéng bidt hod, so véi cdc té bao da biét hod. bFGF dugc biéu hién béi hES, nhung cé vé & mitc thép khong ngan can sy. biét hod:60. Phan 1 : Dai cucng vé 16 bdo ase 1.1.4, Cac nhan 18 khae Do LIF va BMP4 kh6ng c6 vai trd quan trong trong su tt am mdi cla t& bao hES, cho nén sif tim kiém cdc nhan t6 khéc thay thé CM hES vin tiép tuc. G mES c6 bang chitng cho thay cdc con duéng tu lam mdi la déc lap v6i LIF hay sy¥ hoat hoé STATS (Dani va cong sy, 1998), do vay LIF duding nhu ‘khong phai 18 nén tang cua sy tao ra tinh da nang in vivo trong chuét. Céc con dung sinh If khdc chuta duge tim ra s@ c6 thé 1a nén tang cho tinh da nang cla té bao géc d cd nguai va chubt ‘Mt vai bdo cdo cho rng da thm ra nhan (5 thay thé CM trong nudi cay hES, ho&c con dung Wnt cé kha nang duy tri sy ty lam mdi cia té bao hES trong mot thdi gian ngén (Sato va céng svt, 2004). Béo céo khéc dé nghi ring TGF1, trong sy két hgp vdi fibronectin va LIF sé hiéu qua cho nudi cay khong CM va feeder (Amit va cong st, 2004). IL2, Cac nhan té bén trong 11.2.1. Oct4 Oct4 la mét nhan t6 phién ma thudc ho POU (POU transcription factor family), chita mot trinh ty nhan dién octamer (8-bp) duge théy trong céc promoter va enhancer cia nhiéu gen chuyén biét va bidu hign thudng xuyén. Sy bidu hién cia Oct4 dudng nhu chi c6 d cdc dang té bao van nang (Yeom va cong sif, 1996), mac di né cing hoat déng trong mot s6 truting hop ung thi. (Tai va cong su, 2004). Oct4 dug bidu higa trong phdi chudt 6 céc giai doan sdm tit 48 t6 bao, dén khi “ngoai phi bi” bat dau biét hod. Ching bidu hién lau dai trong EG. Phéi chudt dot bidn Oct4 sé chét sau khi 1am t6 bdi thiéu ICM (Nichols va c6ng s¥. 1998) va phéi nay chi cé duy nhdt mét loai t& bao 1a trophoblast. Nhang mES bi lam gidm bidu hién cia Oct4 sé biét hod thanh cac t& bao trophoblast (Niwa va cOng sy, 2000), va n&u gia tang (mét it hay gé’p hai) stt bid hién cia Oct4 trong mES cé thé lam céc té bao nay biét hod. C6 thé cho ring, Oct4 s@ we ché suf bigt hod thanh trophoblast, né hoat dong trong su két hop véi cdc nhén t& phién ma khdc hay cdc yéu té déng diéu hoa {co-regulator), va ti 1é gitta ndng d6 cla céc nhan t6 d6 sé quyét dinh so phan ciia té bao. Vai trd cita Oct4 trong suf duy tri tinh da nang cia té bao hES gidng V6i vai trd cilia né trong té bao MES. Gen myc tiéu cho Oct4 va nhitng nhén té digo hoa bat ddu duge sang 18, dac biét 4 mES. Nhiing gen duge xéc dinh bao gém Faf4 (Ambrosetti va cOng sv, 1997), déng nhan té phién ma Utf-1 (transcriptional co-factor Utf-1) (Nishimoto va cong su, 1999), protein ngén tay kém Rex-1 (zine finger protein) (Ben Shushan va cOng sy, 1998), receptor nhan 6 tang trudng thu nhdn tit61 yang 4. Tian van nang va su 1 bach cau (platelet-derived grawth factor) (Kraft va cOng sy. 1996), osteopontin (ONP) (Botquin va cong sy, 1998), Fbx15 (Tokuzawa va céng su, 2003)... Céch hoat hoé cita c4c gen muc tiéu Oct4 va duy i) tinh da nding van cha dude biét. Bang céch két hgp vdi cdc déng yéu t6 khéc, Oct4 c6 thé hoat dong vita nhu mOt nhan t6 hoat hod phién ma, vita nhu mét nhan t6 te ché phién ma. Oct4 c6 mét vai co-factor da dude biét nhu adeno virus E1A, nhén t6 Sox2 lién quan aén Sry (Sry-related factor Sox2), Foxd3 va HMG-1. Céc co-factor cba Oct4 bidu hin khéc nhau trong céc té bao da nang. Chng han, Sox? biéu hi¢n & ca ICM va ngoai bi nguyén thug, trong khi d6 ELA (hoat dong gidng E1A) chi biéu hign trong ICM. 11.2.2, Sox2 Sox2 Ja thanh vién ho gen Sox (box HMG lién quan dén SRY), ma hod nhén té phién. ma véi mét domain gdn DNA HMG don (single HMG DNA- binding domain). Gidng vdi Oct4, Sox2 biéu hién trong cdc té bao da nang ciia phoi chudt giai doan sém, ICM, ngoai phdi bi va té bao mam sinh duc. Nhung khéc vdi Oct4, né cng biéu hién trong nhiéu té bao cia ngoai bi ngoai phéi, va trong cdc té bao tién thn thdn kinh, va quan trong cho suf duy tri tinh déng shat cia chiing. Sy biéu hién gidm cia Sox2 lién quan dén qué trinh biét hod. Céc phéi chuét logi bé gen Sox? cé vé sng binh thitiing é giai doan phdi nang. nhung chét nhanh sau khi lam t8, Céc phdi nay thiéu cau triic egg cylinder va thiGu cdc té bao biéu md. Khi nudi cay in vitro d6 thiét lap dong ES, phéi nang loai bé gen Sox2 phat trién binh thudng vao ngay déu, nhung sau dé biét hod than té bao trophectoderm va céc té bao ni mé vach. Mac di vai trd in vivo cla Sox? da duge chitng minh bang knock out sau khi lam (6, nhumg né cdn 6 thér vai trd duy tri quan thé té bao da nang d giai doan sém aia phdi. Cac phdi sém biéu hién 6 mttc cao cdc protein Sox2 cé nguén géc tit me. Ngay khi trong chudt loai bé gen Soxz, céc protein Sox2 tit me van duge duy tn cho dén giai doan blastocyst. Bo d6, nguyén nhan ma cdc phdi dét bién vin séng s6t dén khi lam t6 c6 thé 1a do mite biéu hién higu qua ctia Sox2 c6 nguén g6c tit me dén giai doan d6. Do vay, c6 thé Sox2 khOng cén thiét cho st duy tr) hay tao ra tinh de nang tong céc giai doan sém, nhutng khéng thé dude phat hién trong chudt knock out béi vi sy hign dign cit Sox2 6 ngudn géc ca me. Hon nita, Sox? cé6 vai trd trong st duy ti céc t bao trophoblast, v4ng mat Sox2 nhitng té bao nay khong thé tao ra.62 F 1 Bay cumrayé 8 ban one Bang 4.2. Nhiing nhdn t6 chinh lién quan dén sy ty lam méi cia té bao ES Gen Chuot dee bién Vai tro trong mES Su biéu hién + trong hES va vai tro Oct | Chét sau khi lam t8 | Can cho su ngan can biét | Biéu hién trong vi thidu ICM hoa thanh trophoblast. | nhiéu dong té Biéu hién qué mite bao ES. Cé vai lam biét hoa thank trd trong sy ty ngoai bi va ndi bi ngogi_| lam mdi phdi (extraembryonic | nhut d té bao endoderm and ectoderm) | mES Nanog | Chi chifa céc m6 —_| Cn cho vide ngan cén_| Biéu hién trong ngoai phoi mét 6 | su biét hod thanh ndi bi | nhidu dong t& chic va khong cé6 | nguyén thu. Biéu bién | bao ES ngoai phi bihay | qué mifc lam su phat ngosi bi ngoai phdi_| trién khong phy thugc vao LIF Sox2 | Séng sét khong mES t¥ céc chudt null | Bidu hién trong lau sau khi lam té. khéng thé thiét lap. nhidu dong té Phat trién ICM binh | Ban dau ching phat | bao ES thudng, nhung sau | trién binh thudng, 46 thiéu cau tric | nhung sau dé chi tao egg cylinder va that | ra trophectoderm va bai duy tri ngoai bao néi mé vach phdi bi cia ching | (parietal endoderm cell) Foxd3 | Chét khong léu sau | mES tit chuét null Chi biéu hién khi lam té, Kich khong thé thiét lap, trong mét sé thude ngoai phdi bi | mac di ban dau sy phat | dong té bao ES cia ching bj giém | trién cia ching c6 vé_| va do dé cd va ranh nguyén thug | binh thu@ing. C6 su néi_ | vd khong quan (primitive streak) | rng cla ngoai bi ngoai | trong khéng tén tai phéi 11.2.3, Foxd3 Foxd3 thudc cdc gen ho dau ché (forkhead family gene). N6 khéng biéu hign trong céc tring chua thy tinh hay ph6i giai doan 1 té bao, nhumg sy phién ma cia né duge phat hién trong phdi nang. Céc phoi chudt loai bé gen Foxd3 sé chét trong khoang thai gian xung quanh st ph6i vi hod, vi sy mat ngoaiphoi bi va sy ndi rng cita Iép ndi bi va ngoai bi ngoai phéi, Tuy nhién, trong giai doan phdi nang, [CM cia ching c6 vé binh thudng, biéw hign binh thuding céc marker ICM. Khi nu6i cy in vitro, cdc phéi chu6t giai doan phéi nang \eai bd gen Foxd3 cé vé binh thing, ‘nhung sau 46 ICM ciia ching khong thé ndi rong. Nhiéu thf nghi¢m cho thay té bao null Foxd3 cé thé biét hod thanh nhidu kiéu té bao khde nhau. Do d6, dutting nhu Foxd3 cdn thigt cho su phdi vi hoa. Vai trd cla Sox2 va Foxd3 khong dude kiém tra trén hES. Sox3 rd rang 1a biéu hign trén cdc t& bao hES khng biét hod. Tréi lai, trong khi mot s6 dong té bao ES ngudi thi Foxd3 biéu hién, mét s6 khac thi khéng biéu hién. Do dé, hhinh nhu né khong cén thiét cho sy ty lam mdi alia cdc té bao hES. UL2.4. Nanog MOt gen khéc vite duge phat hign én quan dén sy ty lam mdi ES 1a Nanog (Chambers va cong s¥, 2003; Mitsui vA cong sv, 2003], mgt nhan 16 phién ma homebox khéng thudc vao bat ki nhém ndo ca céc gen homebox. No bigu hién trong ICM phéi chu@t giai doan phai dau nén chat hay phoi nang, EG sém, ES va céc tf bao EG, nhung véng mat trong céc té bao da biét hoa. Néu cé sy biéu hién qua mic cia Nanog, té bao khong phy thudc vao LIF. Tuy c6 suf ty lam mdi va gitt duge tinh da nang khi ving mat cia LIF, nhntng kha nang ty lam mdi cia nb giam. Do dé, sy biéu hién qué mite cia Nanog khong hoan toan gidp té bao hét phy thuge UF. Téc dong cda sy biéu hién ‘qué mifc Nanog khéng théng qua sy hoat hod STATS va do vay. cé 18 hai con dung STATS va Nanog d6c lap vai nhaw, Khi Nanog ctia c4c mES hu hai lam cho té bao biét hod thanh cdc dong té bao ndi bi ngoai phdi. Phoi chudt knock out Nanog phat trién thanh giai doan phai nang, nhving khi nudi cay trén gelatin thi ICM cia ching biét hoa hoan toan thanh céc t& bao giding ndi mé véch. Do 46, Nanog can thiét cho su duy tri tinh da nang ctla té bao ICM. Néu Oct tic ché biét hod cdc ES thanh trophoblast, Nanog lam tic ché su ‘bit hoa té bao thanh nj bi nguyén thug. Tuy nhién, khong ging Octa (ngan chan su biét hod}, Nanog khong chi ngan chan bigt hod ma con duy tri tink da nang. Cée gon muc tién ma Nanog hoat hoa hay ttc ché cing cha duge biét. Tuy nhién, teinh ty’ DNA ma n6 gn vao da duge xéc dinh va gen muc tiéu da duge dé nghj dua vao su hign dign cla trinh ty nay, ngudc dong véi vj tri khdi su phién ma cita chting, Chdng han, 46 1 gen GATA6, va duding nhu Nanog c6 thé tte ché sy biéu hign gen nay béi su biéu hién manh cia GATAG téc dong cho sy bigt hod thanh ndi bl ngoai phéi, Nanog cling chia hai domain c6 kha nang hoat hod phién ma va do dé, cé thé didu hoa duong tfnh céc gen chuyén biét ES, we ché’ nhaing gen n6i bi ngoai phoi.64 Nanog 4 nguv¥i duge biéu hién trong hES, EC va EG, té bao sinh duc va trong vai khéi u. C6 thé con dutng Nanog 6 ngudi va chudt 6 su tuang déng vé chife nang, nhung diéu nay chwa duge kiém tra. 11.2.5. miRNA. MicroRNA (miRNA) 1a nhing nhén té diéu hoa duge dé nghj lién quan dén su duy tri tinh déng nhét cia BS. Céc phan tit RNA ngdn duge quan dén su diéu hoa phién ma. Hau hét chiing tic ché dich ma, mot sé trusng hgp bj mRNA phan huj. ‘Mét nghién cifu trén mES thay rang, cdc miRNA méi biéu hién chuyén biet trong céc té bao ES khong biét hod, ciing nhyt mét vai miRNA da dugc xdc dinh truéc dé tn tai nhiéu hon trong céc té bao chua biét hod so vdi céc 18 bao da biét hoa. Vi la mét trong nhitng yéu t6 didu hoa sit phét trién, nén miRNA duge dé nghi 1a nhGng phan bit c6 vai trd trong sif duy tn tinh da nang cba té bao E: MOt nghién ctu twdng ty trén té bao HES cho thay c6 én 17 miRNA méi tdn tai trong céc té bao BS chua biét hod, 11 trong sé chiing c6 sy tung déng véi céc miRNA phat hién 4 mES (Suh va cong sf, 2004), Ill. CON DUGNG TIN HIEU TRONG TINH VAN NANG VA SU TU LAM MOL IIL. LIF/gp130/STAT3 Céc t& bao géc ES chudt duge thu nhén va duy tri trén lép feeder MEF. Tuy nhién, chi méi truting diéu kién tt’ MEF cé thé hé tro su ty lam méi cla cac té bao ES chuét ma khéng cén lép feeder. Sau dé, ngudi ta thay ring, MEF ite ché sy biét hod ca ES théng qua sv san xudt mét cytokine IL-6 18 nhn to ite ché bénh bach c&u (LIF). V6i vige bé sung protein LIF vao mdi trugng nudi cy, tat cd céc t& bao ES chuét cé thé nuéi cy khong ding lép té bao feeder. Receptor cho LIF 1a mét phic hgp heteromer chita gp130 va receptor LIF (LIFR, hay cing goi la LIFRbeta). Tyrosine kinase Janus kinase (JAK) gan vao domain bén trong té bao ciia phitc hgp receptor nay trong dang bat hoat cita nd. Dén khi gn LIF, JAK kinase phosphory! hoé déu tyrosine cia cd gp130 va LIFR. Sy phosphoryl hod cia céc tyrosine Y768/812/904/914 cila domain thudc gp130 ‘bén trong t6 bao va Y976/996/1023 cia LIFR lam chiéu mé protein chuyén tin higu va nh4n t6 hoat héa phién ma STAT1 va STATS, thong qua céc domain SH2 cia né.Chuang 4. Tinh van nang va sy ty lam mai 65 © Z \ Hinh 4.3. Cac tin higu n6i bao hogt hod bd! LIF Su két hop ctia LIF véi receptor heteromer cia nd, bao gdm LIFR va gp130, két qud trong su hogt hod cita cdc con duting tin hiéu ndi bao, bao gdm con duong STATS, con duéng Ras/ERK va con duidng PI3 kinase. Con dudng STATI quan trong cho sf duy tri tinh van nang ctia cdc t& bao ES, nhung khéng quan trong trong té bao BS linh truéng. LIF cting hogt hod Ras/ERK va con dudng PI3 kinase. Céc protein STAT sau dé duge hoat hoa béi qué trinh phosphoryl hod tyrosine théng qua JAK dé hinh thanh homodimer va/hay heterodimer, sau 6 chuyén vi dén nhan, noi ma ching thé hign chifc nang cia minh nhu mot nhan t6 phién ma. Sy kfch thich cla LIF efing cdm ting c4c con duting tin higu khac. MOt vai nhém nghién cifu cho thay ring, STATS quan trong cho st duy trl tinh van nang cla t bao ES. Dac biét, Mastuda va cOng sy tao ra mot dang cam ting cia STATS bing céch dung hgp né véi domain gén ligand cia receptor estrogen, cho phép hoat hod STATS bang cach kiém sodt tamoxifen. Ho da béo céo ring, sy hoat hod STATS cdn thiét cho sx ty lam mdi trong saTeBnococSB 2 Dah voy vb Wl bn ge moi trudng chita huyét thanh bao thai ba (FBS). Mot trong nhitng gen muc tiéu quan trong cia STATS 1a c-Myc (m6t nhan t6 phién ma helix-loop-helix/leucin zipper). Tuy nhién, LIF khOng thé hé tr¢ sy tng sinh dng cdc té bao ES chudt trong sy vdng mat cia buyét thanh. Phét hign nay cho ring, nhiing nhan t6 khéc cdn thiét cho sy tang sinh ciia tf bao ES va duy tri la hign dign trong huyét thanh va san xuét bai lép MEF. Khdng gidng céc té bao ES chudt, LIF kh6ng thé thie day sy ty lam méi ciia céc té bao ES ngudi va khi. Té bao ES ngudi biéu hién mic tuong déi thap céc thanh phdn truyén tin higu LIF (LIFR, JAK va STATS), va mife cao chat te ché suf truyén tin hiéu cytokine (suppressor of cytokine signaling SOCS), déng thdi diéu hda 4m tinh tin higu LIF. Trong cdc té bao ES khi, con duting tin hidu LIF khéng tac déng béi dang am tiah trdi cla STATS. Cac té bao ES khi va ngudi duding nhu duy trl tinh van nang trong con duting doc lap LIF/STATS. I1L.2, BMP/Smad BMP io typeI receptor I-Smad Hinh 4.4. Con dusting tin hiéy ngi bao dude hoat hoa ba! BMP Céc receptor cita siéu ho ligand TGF- chita phiic hgp heteromer cia type 1 va type I receptor serine/threonine kinase. Sif gdn cila BMP vao receptor cdm se-Tennococng 4. Tinh van nang vat sy tu Im mai 67 ting su phosphoryl hod R-Smad bdi type 1 receptor. R-Smad ditgc phosphoryl hod hinh thanh cdc phitc hgp vi Co-Smad va tich luf trong nhdn, (noi mé cing voi nhau chting diéu hoa suv phién ma cia cde gen). I-Smad ite ché con duttng théng qua mét vai co ché. Trong cdc té& bao ES chudt, BMP4 cé thé cém ung suv biéu hin cia Id vé kim ham sy biét hod thén kinb. Trdi lai, trong cdc té bao ES ngudi, mot vai nhém nghién citu bdo cdo ring BMP4 cdm ting sy biét hod. Cac protein tao hinh théi xong (Bone morphogenetic proteins BMP) 1a céc thanh vién cia siéu ho nhan té phat trién chuyén dang beta (TGF,), Nhiing Vigand nay duge tiét ra gan vao cdc phttc hgp heterodimer cia type I (ALK2, ALK3, ALK6) va type IT (BMPRIL, ActRIT, ActRIIB) céc receptor tyrosine kinase. Su gdn cba BMP khdi sy hinh thanh phic hgp cila cdc thanh phdn receptor, va lam dé dang hoa sy phosphoryl hod cia Smad (céc phan ttt chuyén tin hidu n§i bao c6 thé rai vao mt trong ba mite: Smad didu hoa receptor (R-Smad), Smad hgp téc (Co-Smad), va Smad kim ham (I-Smad)). Dén khi BMP gan vao, R-Smad (Smad, Smads, and Smads) dugc phophoryl hod tai cdc tén cling serine ddu mit C va binh thanh pbttc hgp heteromer vdi Smad4, Co-Smad trong dng vat c6 vi. Cac phitc hgp Smad sau dé chuyén vj vo nhan va ¢6 chitc nang nhu cdc nhan t6 phién ma. I-Smad (Smadd and Smad7) we ché con dudng truyén tin higu Smad bang cach tic ché suf két hgp gitta receptor va R-Smad, canh tranh véi Smad1 cho gd4n véi Co-Smad, hoc phét huy sy phan huy pia thuéc Ubiquitin cila cdc receptor vi R-Smad. Ying va cong sy da bdo céo ring, BMP4 va LIF hgp téc trong su duy i tinh vgn nang cila céc té bao ES chudt. Dudi didu kign moi trating nudi cay khong huyét thanh ma ho sit dung, LIF mot minh kich thich su biét hod thanh thdn kinh cia céc té bao ES. Tuy nhién, viée thém BMP4 cém ting sy biéu hign cia nhén té kim ham st biét hod (Inhibitor of differentiation_Id), mét nhan ts ve ché cho céc nhan té phién ma helix-loop-helix duge biét la tien quan dén trong nhiéu sy xc djnh so phan cla té bao, ké ca su biét hod té bao than kinh, Khi protein Id biéu hién qué trong cdc té bao ES chuét, LIF cé thé duy tri tinh ty lam méi cia ede té bao ES trong sit vang mat hoje RMP4, hogc huyét thanh. Do dé, BMP4 cé vé ng&n cn su biét hod thanh té bao than kinh cilia céc té bao ES, thong qua cdm iing sy biéu hién Id. Trdi lai, BMP4 mot minh lam dé dang hod sit bigt hod thanh trung mé ciia t& bao géc phdi chudt. Nhiing tim kiém nay dé nghi rang, sy tyt lam mdi cia cdc t& bao géc BS chuét dat dude béi suf cAn bang “I nhj” giifa hai cytokine LIF va BMP. Trong cdc t& bao ES ngudi, BMP4 cdm ting biét hod thanh cdc trung mé va ngoai bi, trong khi dé BMP2 cdm ting bit hod thanh néi bi ngoai phéi. Sy kim ham troyén tin higu BMP trong céc té bao ES ngudi béi viéc thém antagonist BMP Noggin va liu cao cla bFGF da hé trg suf tu lam méi trong thdi gian dai véi su véng mat cia huyét thank va c&c té bao feeder.68 IIL.3. Wnt/ B-Catenin/TCE B-catenin 14 mot protein trong 1 bao chat c6 chtto nang trong sv dinh t& bao-té bao bang cac lién két cadherin vao sgi actin ctia b6 xudng té bao. 6 cing 6 thé hoat dong nh mét phan ti truyén tin hidu gitta cdc t& bao cia con dung truyén tin higu Wnt. Khi khéng c6 sit hoat hod Wat, B-catenin dutgc phosphoryl hod bai mét phitc hgp chifa adenomatous polyposis coli gene (APC), Axin va glycogen synthase kinase (GSK) 3. f-catenin duge phosphoryl hod sé bi phén gidi bdi he théng ubiquitinproteasome, do 46 git! mitc B-catenin trong t6 bao chat thap. Dén khi Wnt két hgp vao céc receptor cita n6, Frizzled va LRP5/6, GSK3 bj bat hoat thong qua co ché chua due hiéu rd, lién quan én sy tudng téc tc tiép cia Axin véi LRPS/6 va/hay hoat dong céa phan ti gén Axia, Dishevelled. Nhu 1a mot két qua, -catenin tich tu trong té bao chat va van chuyén vao nhan, ndi 46 né két hgp vi nhan t phién ma, nhan 16 tang cuding lympho (lymphoid enhancer factor_LEF) LEF/nhan té t8 bao T (TCR). Aubert va c6ng sy cho thay ring, sy biét hod than kinh cia céc té bao ES. chudt s8 yéu di bai sy hoat hod tin higu Wnt, hay bai su biéu hign vugt mite cia Wnt, hay xit If vdi lithium chloride (mét téc nhén kim ham cia GSK3) Tuy nhién, chudt dét bién Wnt3a biéu hién hinh thanh éng thén kinh lac vi trong ranh nguyén thuy cia phdi chudt dang phdi vi hod. Ngoai ra, cdc té bao ES vai mét dang dot bién cia APC cho thay kha nang dugc lim suy you biét hod thanh ba lép mém. Céc dit ligu nay dé nghj ring, con dutng tin higu Wnt c6 thé kim ham su biét hod trong cdc ph6i giai doan sém va trong céc te bao ES. Sato va céng stf so sénh sy bidu hién gon cia cdc té bdo ES nguvi hod va chvfa biét hod mét céch chi tiét, va cho thay cé su lam gidu Frizzled 5 trong cdc t& bao ES khéng bigt hod. Ho ciing bao céo ring, 6-bromoindirubin- 3'-oxime (BIO), mot nhan t6 We ché GSK3 méi dug x4e dinh, cé thé duy tri tinh van nang cia céc té bao ES chuét trong stt véng mat cia LIF. Béng htu y 1a BIO cing duy tri cdc t& bao ES ngudsi trong trang thai khong bigt hod va duy tri sy bidu hién cba Oct3/4, Rex va Nanog. LIF duge cho la c6 téc dong nhé én céc t& bao ES ngudi, BIO hau fch cho viéc phat huy ki thuét nudi cay cdc 16 bao ES ngudi.(Chuong 4. Tinh van nang va sy ty lam mat 69 on LRP Frizzled E-cadherin <_ Con dwéng khéng kinh dién | Sn, cat Dishevelted| RKC Cie sgi actin PDE ‘Axin APC GSK3p pe Hinh 4.5. Con duténg tin higu ni bao hoat hod bai Wnt Phin huy Wnt gdn vao receptor cita nd, Frizzled va coreceptor, LRPS hay LAP6. Nhan 16 te dOng xudi Dishevelled sau dé dug hoat hod thong qua ctic ce ché chuta duge hiéu 19. Dishevelled duge hoat hod sé bat hoat phic hop APC/Axin/GSK3. Vi trong phitc hgp nay sé cém ung su phan huj cia f-catenin khi thiéu ligand Wat, sit bat hoat cia né gay két qué 1a sv 6n dinh va tich luy protein Pecatenin trong nhdn. Pcatenin gdn vao vd hogt hod nhan t6 phién ma LEF/TCP. Trong cd t& bao ES chu6t va ngudi, con duténg Wnt/ p-catenin cé thé phat huy sy ty lam mdi. Wnt cing lam nhanh qué trinh tang sinh cla céc té bao géc trong rudt, hé thong biéu bi va tao mau; n6 c6 thé trinh dién mot nhan t6 phé bida kiém sost sy tang sinh ctia té bao. Tuy nhién, Wnt lam dé dang sy biét hod cic té bao ES thanh neuron va cdm tng sit bidu hién céc marker trung m6, Brachyury. Wnt c6 thé truyén tin higu déc lap ciia B-catenin théng qua con dung khéng duge goi chinh théng. Diéu nay bao gém dong calcium, JNK va cd céc protein’ G heterotrimer va nhé. Trong céc t& bao carcinoma phdi chudt F9,70 in 1 : Bal cuong vé t6 bao géc Wnt5A c6 thé hoat hod céc phosphodiesterase chuyén biét cGMP théng qua protein G heterotrimer. Céc vai trd ciia cdc con duding Wnt khong chinh théng nay trong viéc duy tri tinh van nang van chia rd rang. 111.4, Phosphatidy! Inositol 3 (PI3) Kinase Céc PIS kinase 1a céc kjnase lipid xtic téc su phosphoryl hod ciia inositol phospholipid tai vi trf carbon thtt ba cia vong inositol. Ching duge chia thank ba nhém chinh theo sy chuyén biét o¢ chat, trinh ty amino acid va su déng nhat cia cdc domain kinase lipid. Lép 1A P13 kinase la céc heterodimer chita mot adaptor/didu hoa va mot tiéu phan xiic téc. Cac tiéu phan didu hoa c6 1 trong 7 dang isoform tao ra bang sy c&t n6i kh4c nhau tif 3 gen (p85a, p85b, and p55g ), trong khi c6 3 isoform cia tiéu phan xic téc (p110a, p110b, and p110g). Sy hoat hod ciia céc kinase 1ép 1A PI3 duc cdm xing bing nhiéu receptor tyrosine kinase khdc nhau cho céc nhan t6 tang trudng nhu FGF, EGF va PDGF, dan dén tao ra chat din truyén tin hiéu thit hai phosphatidylinositol-3.4, 5-tris-phosphate (PIP3), M6t serine/threonine kinase, Akt1, gan vdi PIP3 thong qua domain tudng déng pleckstrin (pleckstrin homology-PH) cilia né va duoc chuyén vj dén mang trong cia t@ bao, noi 46 n6 duge phosphoryl hod va hoat hod bdi serine/threonine kinase khéc, PDK1. Akt1 dugc hoat hod sé bién diéu chic nang cia mét s6 co chét nhu Mdm2, IKK va céc muc tiéu rapamycin cia dng vat cé vi (mTOR) va ca nhitng dap tng khdc nhau cila té bao, bao gom su tng sinh va kim ham sf chét t@ bao. P13 kinase cing duge bist hoat dong nhut mét téc dng gidm cita Ras. Glim nhin t6 ting trang (FGF; EGF; PDFG... A Yrs \\ en GE Gi) mi \ yam (iar) —+ (nn) —> aio Hinh 4.6. Sy hoat hod cla con duénig Ras/ERK va con duéng Pr3 kinase bi ca nhan 16 tang trudagChuong 4. Tinh van nang va su ty kam mdi _ ” Su gdn cia cde nhén t8 tang trudng vdo receptor ctia nd cém ting sut ty phosphoryl hod ctia cdc receptor va/hay phosphoryl hod cdc protein két hap receptor. Céc Grb2 protein adaptor gdn vdi tyrosine dugc phosphoryl hod théng qua domain SH2 va hoat hod con dung Ras/ERK théng qua suf thay d6i GTP-GDP nhan t6 SOS. Sw hoat hod cha con duéng Ras/ERK cém ting suf biet hod trong cdc té bao ES chudt. Con dung PI3 kinase e6 thé dugc hoat hod théng qua 3 con dung. Truc tién, Gab1 cé thé gén vao Grb2, két qud la su phosphoryl hod tyrosine va hoat hod ctia con duéng PI3 kinase. Thi hai, tiéu phdn diéu hod PI3 kinase p85 co thé gdn vao dau tyrosine dugc phosphoryl hod ctia receptor. Céch khdc, Res duge hoat hod c6 thé cdm ting su dinh vi mang va hoat hod cia tiéu phén xtc tc p110 ctia PI3 kinase. Thém vao dé, con dutng PI3 kinase la duge hogt hod bdi Eras trong cde t& bao ES chudt PTEN Id mét nhén té' diéu hoa dm tinh cita con dung PI3 kinase. Con dung PI3 kinase c6 thé phat huy suf uy lam mdi cia cdc té bao ES chust va ngudi, cé thé bj kim ham béi con dugg ERK. Vide xif If cc t& bao ES chust véi LY294002 (mot téc nhan tic ché PI3 kinase tiém tang) sé kim ham chu trinh té bao tir G1 dén phase $ va lam gidm su tang sinh té bao. Néu pha bé (nham muc tiéu) homologue tensin va phosphatase trén NST cila ten/PTEN/mét nhan t6 diéu hod 4m tinh ca con dutimg PI3 kinase théng qua sv khit phosphoryl hod thi tng cudng sy tang sinh céc té bao ES va su hinh thank kh6i w. Do 46, con dudng PIS kinase duéing nhut 1a mt nhan t6 did hod quan trong trong sf tang sinh té bao ES. Ngoai ra, con duding PI3 kinase ¢6 thé lién quan dén sv duy tri tinh van nang trong cé té bao ES chuét va ngudsi. IIL.5. Ras/RafERK Céc protein Ras thugc siéu ho céc protein g4n GTP cé trong higng phan tit thap va kiém sodt chu ki té bao va sit biét hod trong nhidu kiéu té bao. Gidng véi cdc protein gén GTP khdc, Ras tén tai trong hai trang thdi — mét trang thai gdn GTP hoat dong va mdt trang thai g4n GDP bat hoat. Su thay déi cau hinh tir dang bat hoat sang dang hoat dng la thong qua céc nha t6 trao adi Ras-GTP. Nhién nhan to tang truténg khéc nhau va cé thé hoat hod sy truyén tin higu Ras bai su gdn vao receptor tyrosine kinase, két qua 1a su ty! phosphoryl hod cia cdc dau tyrosine trén céc receptor. Phosphatase tyrosine chtta domain SH2 (SHP) va protein gin receptor nhan té tang trudng Grb2 (growth factor receptor binding protein), sau 46 g4n vao phosphotyrosine trén cdc receptor72 Phan 1 Dai cuang vé té bao gée va hoat hod Ras, théng qua céc nhan té trao déi Ras-GTP, SOS (son of sevenless) dé két hap véi Grb2. Ras dugc hoat hod gd4n vao nhiéu protein tac déng xudi, bao gdm céc kinase Raf serine/threonine, ma hoat hod kinase diéu hda tin higu ngoai bao (extracellular signalregulated kinase_ERK). Con dufting nay dain én su phosphoryl hod va hoat hod céc nhan t phién ma nhut c-Jun, c-Fos, Rts va Elk. Mac dit con dudng Ras/ERK phét huy sy tang sinh va sdng sot cda nhiéu kiéu té bao khdc nhau, bang cbting tir nhiéu ding t& bao cho ring con duang nay phét huy su biét hod va kim ham sy tang cla céc té bao ES chuot. Chang han, déu tyrosine trong gp130 cdn thiét cho su hoat hod cia con dudng Ras/ERK lai kh6ng thiét y6u cho su duy tri tinh ty lam mdi eta cdc t& bao ES. chuét. Ngoai ra, vide xit If véi tac nhan tic ch ERK PD98059 lam tang higu qua thu nh4n cia cac té bao ES tit cdc phéi nang. S bao ES null Grb2 that bai Diét hod thanh céc dong ndi bi, trong khi dé su biéu hién lec vi cia dang hoat hod ciia HRas trong céc té bdo ES vdi két qua 1a sy biét hoa 6 at thanh cdc dong ndi bi nguyén thug. Nhiing két qua nay cho thay rang con dudng Ras/ERK phat huy su biét hod va kim ham su tu lam mdi cila céc té bao ES. NILG, Sy Lién hé chéo giita cdc con dudng truyén tin higu Céc con dutng truyén tin higu ndi bao trén dude bidt 1a lién ho chéo véi nhau. Ngoai STAT, sy kich thich LIF cm tng cdc con dung tin higu khdc thong qua protein tac dong, SHP2 gén vao Y757 cla domain ngoai bao ciia gp130 (Y18 trong domain néi bao) va Y969 cia LIFR (Y115 trong domain té bao chat). Khi duge phosphoryl hod béi Jak, SHP2 gén vao protein adaptor Grb2 va hoat hod con dung tin higu Ras/ERK. SHP2 hoat hod cing gan yeu t gén két hop Grb2 (Grb2-associated binder_Gab), hoat hod con duiing tin hiéu Pia Kinase. Sy heat hod cia SHP2 cing duge biét 1a khong cdn thiét cho sy ty lam méi cila cdc té bao ES, nhuing can thiét cho sy biét hoa thich hopChuang 4. Tinh van nang va su ty lam m6! 73 nim ib LIF tng trang Wat BMPS PIS kinase GSK3 L Breatenin 1 ae v Ty im mai Hinh 4.7. Sy bét chéo gida cde con duéng truydn tin hidu trong cae 18 bao ES chudt STATS cam ting sy biéu hién cia c-Myc va sau dé c-Myc hoat hod vao gen muc tiéu cho syf ty Jam mdi. GSK3 bat hoat c-Myc bang cach phosphoryl hod va phn huy théng qua proteosome. Tuy nhién, né khong ro rang la c-Myc, ma chi Id téc dong xudi cia con dung LIF/STAT cho tinh van néng. Con dutng tin higu BMP/Smad ngan can suf biét hod béi sy cam ting cba cdc gen myc tiéu gidng Id va tin hiéu ca ching cing kim ham trong con dung ERK, thong qua cde co ché gidn tiép. Con dung P13 kinase tic ché sy truyén tin higu ERK thong qua sv phosphoryl hod cita Raf bing Akt. Su kich thich ciia Wnt va tle ché cita GSK3 duac bao tang cudng sv tu lam mai ctia cdc té bao ES ngudi va chudt. Su duy tri tinh van nang bang truyén tin hieu Wat cé thé dat dugc bang su tich luy ciia c-Myc va/hay P-catenin. c-Myc dude xdc dinh nhut mOt trong céc gen muc tiéu cla con duéng Ras/ERK trong cdc nguyén bao soi Con duding PI3 kinase dugc hoat hod bing céc nhan (6 ngoai sinh nh insulin nhung cing duge hogt hod bdi cdc nhén té n6i sinh nhd ERas, mét phan td protein gén GTP nhé mdi bigu hién trong cac té bao ES chudt. Con ditiing PI3 kinase va BMP4 c6 vé duy wi trang th4i khong bidt hod ctia t& bao ES chudt thong qua sy tie ché eile ERK va cd ERK véi p38, Su kim bam hoat dong cia ERK bdi con dudng PI3 kinase cing dugc quan sét & cdc74 Phan 1 :Bal cuang vé v6 bao g6e té bao ES khiém khuyét trong tiéu phan xtc téc p85a hay PDK1, ma hoat hod Akt. Con duting PIs kinase ite ché tin hiéu ERK c6 thé thong qua sy phosphoryl hod cia Raf bai Akt. Con dung tin hiéu PI3 kinase cé thé hoat hod con duting Wnt/B-catenin thong qua suf ttc ché cia GSK3 bdi Akt, nhung vai trd cia né trong céc 16 bao ES fa khong rd rang. Su bat chéo khdc cita cdc thanh phan tin hiéu cing duge béo céo, Wnt cling bao co tte ché sy bigt hod than kinh trong céc té bao ES bdi suf cdm tng biéu hién BMP. LEF/TCF1 m6t nh4n td phién ma xudi dong aiia tin higu Wnt, tao phiic v6i Smad4, Co-Smad trong con duting BMP, hgp tac kiém sodt su bidu ic 18 bao ES chudt hign gen trong Sut bat chéa céc con dutting tin higu cing dude bao trong cdc té bao gée va tién than than kinh. Chang han, sy hgp téc gitta tin hiéu LIF va BMP2 théng qua sif tuong téc gia STATS va Smadi, hinh thanh mdt phite hgp véi p300, két qua la cam ting astrocyte. BMP4 cdm ung sv biét hod co tran thong qua ‘Smad trong nudi edy t& bao mat dé thap, trong khi né cam ting suf bidt hod té bao glial théng qua mTOR va STATS tai mat dé t& bao cao.Dhan 2: TE BAO GOC PHOIChuong 5 TE BAO GSC PHO VA VIC THU NHAN TE BAO G6C VAN NANG 1. TE BAO GOC PHOL ‘T6 bao géc dude thu nhan tit phoi 1a t@ bao gOc phdi, dé 1a ton goi ciia loai té bao géc theo vj tri thu nha. Thdi gian dau, khi néi dén thudt ngit “t8 bao g6c phOi” (embryonic stem cell) ngudi ta thutng nght va quy wdc dé 1a céc 6 bao géc duce thu nh4n tit 16p ICM (inner cell mass) cita phdi giai doan phdi nang (blastocyst). Tuy nhién, céc phat hign méi sau nay da khién thuat ngi trén it nhiéu duge thay déi vé cach hiéu. Céc phat hién dau tién thay ring t bao cia ICM 1a duy nbat 66 tinh van nang. Nhung sy that da khéo, nhiéu nghién cttu gan day cho thay = Trong phi, ngoai té bao géc trong ICM cin cé6 céc té bao géie ngodi l6p ICM. — Ngoai ph6i, trong thai, céc phan phy ngoai thai hay ngay ca @ co thé trudng thanh ciing 06 té bao géc, giéng vai té bao géc 6 ICM. Chinh vi vay, vige sit dung thuat ngit nay trd nén xo tron vA gay nhiéu phién ha cho ngu’i doc, cée nha nghién citu. Nhin chung, ngay nay, thuat ngit té bao géc phéi dudc hiéu la mét trong cc loai t® bao ge van nang, Nhiéu téc gid sit dung thuat ngtt té bao géc phéi trong truing hgp ching duge thu ti dich 6i, méu cuéng rén... Diéu nay, ngudi ta mudn khang dinh ring, céc té bao tdn tai trong céc ving mo dy gidng voi cAc té bao géc van nang cia lép ICM. Trong cuén séch nay (ngoai trit chong nay), vdi tat cd cdc chuong con la céc téc gid sé sit dung thuat ngt té bdo géc phéi dé chi dinh riéng cho loai té bao ctia Iép ICM. Céc té bao tung dong khac sé goi la té bao géc gidng té bao 6c phdi, 1é bao géc tit phdi, 6 bao géc van nding dé thay thé cho céc thudt ng ma nhiéu tac gia khac goi chung Ia t6 bao goc phoi. Cum tii “cac loai 16 bao géc phoi” dudi day nh&m chi céc té bao gée thu nhén tit phdi hay céc kigu té bao géc cita phoi.Phan 2 :Té bao gde phot 0 Carcinoma phéi (Embryonic Carcinoma_KC) EC 1a cdc 16 bao lan dau tién dude thu nhén tir khéi u quai (terat trong tinh hoan hay buéng tritng. Cac té bao nay dugc tao ra tif cdc té bao mam phdi (embryonic germ cell_EG), va chting cé kha nang biét hoa thanh nhiéu loai té bao Khdc nhau. Nhu da ndi, khdi u quéi c6 thé dude tao ra theo kiéu “tron lin” nhiéu loai t& bao khong theo trdt ty. Cac té bao khong biét hod tif céc khéi u nay o6 thé duge nuéi cay abu té bao géc (Stevens, 1983). Céc phoi khi phat trién tir giai doan phdi nang trai qua giai doan hau lam. 16, hay céc té bao nguén g6c ty ranh sinh dyc (genital ridge) ciing tao ra nhing Khoi u, giding hét khi cy vao mét vj tri khéc trén co thé thich hop. Néi cach khdc, kh6i u quéi o6 th8 dugc tao ra tit tat cd cdc giai doan phat sinh phéi, va chting chia phan Ién céc té bao van nang. Cac té bao géc khdi u tao ra tir ph6i cé thé dude tach, nuéi cay in vitro va chiing giéng véi cdc té bao EC khac (Stevens, 1983). Ching phan bao khong han dinh trong trang théi khdng bidt hod, va vin c6 kha nang biét hod khi gap diéu kién thich hgp. Mét sé protein téng hdp ti dong EC tuong tu vdi protein duge téng hop tif céc té bao ngoai phdi bi. Khi tiém vao phdi nang, céc EC phét trién giding vi cdc t& bao phdi va ching tham gia hinh thanh khdm (Papaionanou va cs, 1975). Tuy nhién, vai trd céa EC trong viée hinh thanh kham it déng b6 han so véi cdc té bao géc phdi thu duge tit 1ép ICM, EC rat hiém khi biét hod thanh t@ bao mdm (Papaionanou va Rossant, 1983). EC khéc vdi té bao phéi thu tit Ip ICM 1a cing vin khuéch dai nhung khong biét hoa, ké cd khi sy phat sinh phéi hoan thanh, ching tao nhidu kh6i u trong thé kham sau khi sinh, Su didu hoa khong hoan hdo kha nang phan bao cia EC 1a do moi trugng nui, qué trinh nay cé thé phan nh nhing thay déi di truyén xdy ra trong dién bién hinh thanh khéi u qudi, hay trong suét qué trimh thu nh4n, nudi cdy (Papaionnou va Rossant,1983 11.2. Té bao gée phdi (Embryanic Stem cell_PS) 11.2.1. Khai n Neguti ta da thu nh4n thanh cng céc dong té bao g6c truc tiép tit phéi chudt, véi cdc diéu kién nudi cdy phéi nang khdc nhau (Martin, 1981), Nhiing dong khéc duge thu nhan bing céch nudi phdi nang, sau d6 thu lép ICM va nudi céc t6 bao tach rai tir ICM trong méi truting c6 bd sung nhan t6 te ché bénh bach cdu (Leukemia Inhibitory Factor_LIF) (Smith va cs, 1988), hay nud! trén lp dan nguyén bao sgi phéi chudt (Mouse embryonic fibroblast_ MEF) dé cung cap LIF.Chuang 5. T8 bio g6c phi va vige thu nhan t6 bao géc van nang 79 Cac té bao ES chudt duge duy tri vinh cttu, chting khong biét hod khi nudi chung véi LIF. Ching van git binh thing vé kiéu nban, ciing nhu kha nang biét hod thanh nhiéu dong té bao in vitro trong céc kh6i u quai, sau khi cy lac vj vao chudt chi va tao khdim khi tiém vao phoi nang. Phin én cae dong ES dugc thiét lap 1a té bao gidi tinh duc (XY) béi kiéu nhan XX luén kém 6n dinh va thudng bi mét m6t trong hai NST X. Hinh 6.1. NuOl edy cde 16 bao 96 phdl khi (A : X 20, B : X 40) Nhitng nghién ctu vé sy bidu hign chi tit protein va gon da gidp dé dang xéc dinh cdc té bao ES. Chang han, Oct (con goi la Pou5fi), mét marker c6 tinh van nang trong ICM cia phoi binh thuting, duge bidu hign trong cc t bao ES va didu hoa khong biét hod. Nhiing ES c6 thé trd thanh bat ki kidu te bao nao dé trong thé kham, ké cd céc t& bao mdm, ngoai trit cdc dong té bao thudc lp nu6i ph6i va nhitng dong té bao n6i m6 ngoai phdi (Beddington va Robertson, 1987). 11.2.2. Thu nan Viée thu nhan va duy tri cde t8 bao ge phoi van nang tit phdi dong vat 6 vii da duge béo cdo dgc lap bai Evans va Kaufman (1981), Martin (1981). CA hai chién luige néi tron déu sit dung dang déng nudi céy véi 1ép nguyén bao sgi, nhim duy trl cac t6 bao van nang @ trang thai khng bidt hoa. Té bao g6c phoi ngudi dutgc thu nhan ln dau tién ciing da tién hanh véi phuong phap ting ty nhu véi chién lige sit dung 4 6 bao g6c phéi chudt (tao lp feeder nguyén bao sgi chugt) (Thomson, 1998) Sau nay, nhiéu chién luge khéc da duge tién hanh dé thu nhgn té bao g6c phOi ma khong cén sit dung dp feeder, thay vao dé, ngudii ta c6 thé sit dung méi truéing diéu kién (Conditional Medium_CM), hay sit dung méi truéing khong huyét thanh, hoge sit dung mdi truding v6i cdc yéu 6 duge xdc dinh. Hau hét cdc nghién ertu cdi tién n6i trén, chu yu dugc tién hanh cho viéc thu nh4n céc ding té bao géc phoi ngudi.80 Phan 2 -Té bao 8c pnd! 11.2.3. Nhan dién Cai marker phan Ui nhén diéa te 2S chu Nhén té phién ma domain-POU Oct-4 dugc xac dinh g4n vao motif DNA hoat hod trong cac té bao EC khéng biét hod (Scholer va cs, 1990). Su phién ma Oct4 bj han ché 6 té bao van nang cla phi, hay cd trong céc té bao van nang in vitro. Sy bidu hién & mic dé thap cdc marker Oct4 da duge phat hién trong nhiéu dong tbo ngogi bi hay ngoai bi than kinh (ectoderm/neuroectoderm) 4d in vivo va in vitro (Rathjen va cs, 2002). Thi nghiém trén chudt knockout gen Oct4 cho thay, Octé gid vai trd quyét dinh trong sy thiét lp tinh déng nhatt cita cdc té bao van nang. Chuét bj knockout gen nay s& v&ng mat tf bao van nang trong céc phoi nang Oct’ (Nichols va cs, 1998). Oct4 diéu hoa mét sO gon nhu Rexi va Fef4 trong céc dong té bao van nang. Tuy nhién, chitc nang quan trong (néu c6) cia céc gen nay trong viéc duy tr tinh van nang chia ré rang (Niwa va cs, 2001). Kidu biéu hign gidi han va vai trd quan trong trong in vitro va in vivo (Nichols VA cs, 1998; Niwa va cs, 2000) da lam Oct4 trd thanh mdt trong cdc marker manh cia cac t& bao gée van nang. Nhitng marker khde biéu hin tét trong céc quan thé t@ bao van nang in vitro va in vivo bao gom SSEA-1 (stage specific mouse embryonic antigene-1), cd 4 telomerase (Amstrong va cs, 2000), va hoat tinh enzyme alkaline phosphatase (Pease va cs, 1990) Trong suét qua trinh phat trién phi, cdc t& bdo ICM biét hod thanh cac quan thé té bao van nang thit céip, ngogi bi nguyén thuy. Mot vai marker biéu hign gen nhu Rex1, CRTR-1 va Psct da duge xac dinh dé phan biét céc quan thé nay, qua d6 cung cap m6t ngudn cdc marker dé nhén dién té bAo ICM/ té& bao ES (Pelton va cs, 2002), ‘Tat cd marker trén biéu hin ¢ céc té bao van nang cia lép ICM va 16 bao ES, nhung chting lai diéu hoa gidm trudc khi hinh thanb ngoai bi nguyén thu} (primitive ectoderm) in vivo, hay hinh thanh céc té bao giéng ngoai bi nguyéa thuy in vitro (Pelton va cs, 2002). Dé phan biét gitfa té bao ES va t& bao EPL ti cac t6 bao van nang ciia dong té bao mam nguyén thuj, ngudi ta cé thé tién hanh si dyng marker E-cadherin/uvomorulin diéu hoa gidm trong céc dong té bao ven nang, mot khi cdn thiét lap cdc dong té bao mam (Sefton va cs, 1992). b. Marker cho cde ao BS ngudsi Ngoai biéu higén Oct4, con nhiéu khéng nguyén bé mat té bao cing biéu hién gidi han nhu SSEA-4, TRA 1-60, GCTM-2, TRA1-81 va SSEA-3.. d& duge sit dung dé xc dinh céc té bao ES ngudi (Reubinoff va cs, 2000). Nhing khangChuong 5.8 bao géec phdi va vige thu nhan te bao gBe van nang 81 nguyén nay dau tién duge xdc dinh dya vao su biéu hién trong cdc dong EC van nang nguti, hay trong céc dong BS cia linh trudng. Diéu thi vi la SSEA-1 dude sit dung dé xac dinh céc tf bao géc ES chudt lai khong hoat dong 6 ES ngu@i (Kavfman va cs, 2001). Hon mifa, CD90, CD133 va CD117, cing whut HTERT, mot gen telomerase ngusi (Xu va cs, 2001) duge thy biéu hién 6 té bao BS ngudi. Nhu vay, ngoai trit Oct4 va mét so’ bang chttng ban dau mé ta sut hogt dong giéi han ca promoter Rex1 cila chudt trong t& bao ES ngutii, thi c6 rat it céc marker khdc dé cé thé ding xdc dinh sy khéc biét giita @ bao ES ngudi va chudt Bang 5.1. Céc marker cita té bao g&c phbi ngudi Antigen’ ] Antibody Cellular location/Comments/Supplier (Species and isotype) | (N= Nuclear; CS = Cellsurface; C=Cytoplasmic) SSEA3 MC631 CS/Globoseries Glycolipid/(Andrews (Rat IgM) va cs, 1982 ; Draper va cs, 2002 ; Fenderson va cs, 1987 ; Henderson va cs, 2002 ; Shevinsky va cs, 1982)/DSHB & Chemicon SSBAS MC813-70 C$/Globoseries Glycolipid/(Draper va cs, (Mouse IgG) 2002 ; Ferderson va cs, 1987; Henderson va cs, 2002 ; Kannagi va cs, 1983)/DSHB & Chemicom TRA-1-60 TRA-1-60 CS/Keratin sulfate/(Andrews va cs. | (Mouse IgM) 1984 ; Badcock va cs, 1999 ; Draper va cs, 2002 ; Henderson va cs)/DSHB & Chemicon i TRA-1-81 TRA-1-81 CS/Keratin sulfate/(Andrews va cs, (Mouse IgM) 1984 ; Badcock va cs, 1999; Draper va} ts, 2002 ; Henderson va cs)/DSHB & Chemicon Alkaline |TRA-2-54 CS/Liver-Bone-Kidney Alkaline Phosphatase | (Mouse 'gG) Phosphatase/ (Andrews va cs, 1984; Dreper va cs, 2002 ; Henderson va cs, | 2002)/DSHB & Chemicon | Alkaline |TRA-2-49 CS/Liver-Bone-Kidney Alkaline Phosphatase | (Mouse igG) Phosphatase/ (Andrews va cs, 1984)/ DSHB & Chemicon ea TEaKOBOC82 Phan 2 :T6 bao géc pha) CD90 C8/Immunoglobuline supergen family/ (Mouse IgG) (Andrews va cs, 1983 ; Andrews va cs, 1987 ; Draper va cs, 2002)/Abcam ab23894 GeTm.2 CS/Keratin sulfate/(Pera va cs, (Mouse IgM) 1988 ; Reubinoff va cs, 2000)/ Dr M, Pera Anti Oct-4 N/Pluripotency associated transcription (Mouse tg) factor/ (Nichols va cs, 1998)/Santa Cruz : 5279 Anti-Nanog N/Pluripotency associated transcription (Rabbit poly) factor/ (Chambers va cs, 2003}/Cosmo Bio. Co. RCAB0002P-F C6 mét 86 khde biét gitta 16 bao ES ngutti (human embryonic stem cell_hES) va chudt (murine embryonic stem cell_mES) (Pera va Trounson, 2004). Chang han, cdc t6 bao mES phat trién nhu céc quan ty tron vdi dudng vidn t6 bao kh phan biet, trong khi 46 céc quan ty hES thi det hon, cdc dudng vidn t& bao 76 rang hon. Hai kiéu t8 bao cing c6 nhiéu dac diém khéc nhau trong su diéu hoa phét trién. Nhin chung, cdc té bao mES va hES déu cin gia thé feeder nguyén bao sdi. Gan day, nguti ta cé géng thay thé gid thé do véi hai cach ti6p cn kbéc nhau cho hai loai, Nhan t6 phét trién hoa tan, LIF, cé thé thay thé cdc t8 bao I5p foeder trong vide duy tr cée 16 bao MES, nhing cdc 1 bao hES cén chat nén ngoai bao dang rdn (matrigel) dé cé thé thay thd’ cac té bao aguyén bao sdi (Xu va cs, 2005). Nhiing vi du va su khdc biét gitta cdc loai cho thay, néu mot khi da xéc dinh cdc tin higu téc dong dé cac 16 bao ge bidt hod thanh cdc té bao chuyén bigt, thi cng viée cdn nén tin han vdi ca hai loai t& bao hES va mES. Cae té bao gc pkdi c6 ba dic diém quan trong dé phan biét chang véi cac kiéu té bao khdc. Trudc hét, té bao hES thé hign cdc nhan té Oct4, Sox2, Tert, Utf1 va Rex két hgp vdi cc té bao van nang (Carpenter va Bhatia, 2004). ‘Thit hai, chiing 1a nhong 16 bao cha chuyén hod chitc mang va c6 thé ty lam sndi qua nhidu lan phan chia. Mot quan thé ban dau cita cdc 16 bao géc c6 thé khuéch dai trong nhiéu théng in vitro, tao hang triéu té bao mdi. Mot thif théch quan trong trong nghién cifu Ja phai tim céch lam chi duge céc tin hiéu khién quan thé té bao géc gii? dude tinh khdng chuyén hod, dé tiép tuc khuéch dai cho dén khi ching duge huy dong, nham sii chia cic mé dac biét nao a6. sa.TearocacChuang $. T6 bao g6c phol va viéc thu nhan t6 bao g6c van nang 83 Giao we Hop wit Phoi nang Té bao ES Thu tinh Téch ICM Aas -— Hink thank EB Tiem dui da Tiem vo 1 } phéi nang visemes — Lee) : ee esek —_—> — EB v6i 18 bao Hinh thank u quai Chupe khém cua 3 lp mam Hinh §.2. Thu nhn va xde dinh dc tinh 18 bao géc phdi chudt Dac tinh thit ba cita céc t8 bao BES 1a dudi mot sf didu kiéi cdc diéu kién thi nghiém), ching ¢6 thé dvgc cm ting trd thanh cdc t6 bao voi céc chite nang nhu té bao cd tim, té bao gan, té bao co chat than kinh, té bao n6i bi, té bao tao mau va uhitng té bao tiét insulin..(Chadwick va cs, 2003). Tuy nhién, céc té bao hES chua duge sif dung trong cée nghién citu tao khém, do vay chi cé thé dinh mite sy bi@t hod in vitro sau khi tiém cdc t& bao hES va trong chudt suy gidm mién dich. G day, cdc té bao tao ra khdi u chita céc t& bao cia mo phét sinh t ba lép phOi (Thomson va cs, 1998) nlut xuung va cdc m6 syn, cd van, cu tric da day.. Cac t8 bao hES cing cé thé tao thanh thé phoi va bidt hod in vitro (Itskovitz Eldor va cs, 2000). Nhiing kiéu thit nghiém bigt hod nay khong cung cap cae bang chitng thuyét phuc dé c6 thé két Luan Ping: cdc kiéu té bao ¢6 binh thuding vé chiic nang hay khéng. Ro rang, chting can phai duge kiém tra trong thé kham nhu da 1am véi cdc té bao mE, sinh Ii (hay IL3. Té bao mam phéi (Embryonic germ cell_EG) 1.3.1. Khai niém Vige cay cde te bao thu nhén tit céc ranh sinh duc ¢6 thé tao ra céc *€ bao EG, da ggi ¥ vide thu nhan céc té bao gc trite tiép tit céc té bao mam sinh duc (PGC) truéc khi né bigt hod thanh céc giao tit. Nhan té Steel (Steel Factor_SF), c kit ligand can thiét cho su sng va syt khuéch dai cia cac tf bao PGC di cu trong phdi va cung célp déu higu can thiét cho céc diéu kién nudi cy in viteo,84 Prdn 2: Y6 bao g6c phoi 46 6 thé thu nhan céc té bao géc tif eae t@ bao ranh sinh duc. Nam 1992, hai nh6m nghién cifu doc lap ching cong bé da thu nhan thanh cng cdc dong té bao EG bling cach Jgi dung cdc dac tinh néi trén cita té bao mam sinh duc. Khéc véi vige nudi ey ES, nhan t6 LIF 1a thanh phn quan trong dé duy tri tfnh van nang thi trong nudi cay EG, ngoai LIF, ngudi ta cn phdi bé sung thém nhan t6 tang truéng nguyén bao soi (Fibroblast Growth Factor_PGF) (con goi la FGF2) va SF. Cac dong té bao EG duc va céi déu 66 thé duge thu nhan. true tip tit PGC truéc khi ching di cu vao ph6i 6 giai doan thodt nang, hay sau khi chiing da dén ranh sinh duc (Resnick va cs, 1992), Cac té bao nay cé dc Uinh cita t& bao got vai kha nding biét hod in vitro (Ohtaka va cs, 1999), cing hut sut tham gia clia chting trong thé khdm, cy thé la kbd nang déng g6p vao dong té bao mam trong chuét khdm. ‘Trang théi cdc gen duge in d&u ta khia canh khéc biét quan trong cia té bao EG véi t6 bao ES. Sy biu hidn céc gen duge in dau phu thudc vao cha me, nghia 1a sy methyl hod khéc nhau mang tinh di truydn cia cé¢ allele cé aguén géc tit me hay tit cha (Howell va cs, 2001). Tuy nhién, dau in sé bi x6a va thiét lap lai trong cdc t bao mdm @ mdi thé hg. Mot s6 ca thé kham phat trién bling t bao EG cho théy su déng gép cita (6 bao EG la binh thiting, va c6 suf chuyén kiéu gen sang thé hé tiép theo. Phoi mugn Ge he Chuyén dang endoderm Thodt nang { extoderm Phi som mesoderm ‘in. vivo Chuyen bige dong PGC hEGCs ye Hinh 9.3. Nguén 16 bao géc van nang phd! ngudi Trong mt sO trdng hop, thé khdm c6 biéu bién bat thuting v6 bo xuong cfug ahwt sy phat trign vitot mite, Nhiing dong EG duge thu nhan tit cac té bao PGC giai doan sém so véi chinh nkéng té bao EG d6 duge thu nhan vao giai doan mudn hon tir ranh sinh duc da cho théy c6 céc khac biét trong trang thai mothyl hod, it nhat tai m6t gen Igf2r. Qua 46, cho phép két luan rang, suf in dau bi xéa gitta hai thai Ki phat trign 6 cdc ddng té bao thu nhdn tt giai doan sém, cdn nhitng dang té bao thu nhgn mu6n c6 su in dau (c6 ngudn tit ba, hoac