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Pipetas
Cdigo (s) ECRI
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Pipetas
PIPETAS
Las pipetas son dispositivos que se utilizan para medir o transvasar pequeos volmenes de
lquido de un recipiente a otro, con gran exactitud; se caracterizan por carecer de un depsito. Las pipetas tienen gran diversidad de modelos. Inicialmente, se fabricaron en vidrio; en
la actualidad, existe una amplia gama de opciones. Se destacan las pipetas de volumen fijo
y las de volumen variable, las cuales en general disponen de controles mecnicos. Tambin
se han introducido recientemente en el mercado pipetas que disponen de controles de tipo
electrnico. En el presente captulo se tratan
los aspectos referentes al mantenimiento y calibracin1 de las pipetas mecnicas, las cuales
se conocen como pipetas tipo Gilson.
La calibracin debe ser realizada exclusivamente por personal capacitado, siguiendo estndares internacionales como
el BS ES ISO 8655-6:2002. Los instrumentos de trabajo deben estar debidamente calibrados por instituciones nacionales
o internacionales, responsables de verificar el cumplimiento de los estndares internacionales de medicin.
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Las pipetas a pistn en general son de dos tipos: las de volumen fijo que dispensan un volumen predeterminado de lquido, el cual es
conocido como volumen nominal [Vn], y las de
volumen variable, las cuales permiten ajustar
el volumen a ser dispensado dentro de un
rango determinado en las especificaciones de
la pipeta. La variacin en el volumen se logra
modificando la longitud de la carrera del pistn dentro del mbolo. En estas, el volumen
nominal es el lmite superior del rango de volumen de la pipeta, de acuerdo con las especificaciones dadas por el fabricante.
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0,1-2,5 l
Negro
0,5-10 l
Gris
2,0-20 l
Gris/Amarillo
10-100 l
Amarillo
50-200 l
Amarillo
100-1 000 l
Azul
500-2 500 l
Rojo
Pipetas
SERVICIOS REQUERIDOS
Para utilizar una pipeta se requiere que el laboratorio brinde unas condiciones adecuadas
de comodidad, limpieza e iluminacin. Las
condiciones generales son las siguientes:
1. Verificar que la temperatura del ambiente
donde se utiliza sea estable, con un rango
de variacin de 0,5 C, que se encuentre
entre los 15 C y los 30 C, siendo ptima
una temperatura de 20 C.
2. Confirmar que la humedad relativa del
ambiente sea superior al 50 %. Las pipetas
y muestras o materiales con los que se trabaja deben estar estabilizados a las condiciones del laboratorio, por lo que se recomienda que se encuentren en el mismo
con dos o tres horas de anticipacin al momento en que se realiza el trabajo.
3. Evitar trabajar con las pipetas bajo la influencia de la luz solar directa.
4. Utilizar los elementos de proteccin adecuados, si se trabaja con materiales txicos
o que conlleven riesgo biolgico.
USO DE LA PIPETA
Para obtener resultados exactos, precisos y
sobre todo confiables, es necesario que los
operadores de pipetas conozcan en detalle
los procedimientos relacionados con su utilizacin. Esto se logra mediante capacitacin y
seguimiento detallado del uso de las pipetas.
Se presentan a continuacin lineamientos generales para el uso adecuado de los dispositivos en mencin.
Advertencia: Antes de utilizar una pipeta, verificar que la misma se encuentra debidamente calibrada y que es adecuada
para realizar el trabajo que se requiere
desarrollar.
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Recomendaciones generales
1. Verificar que la pipeta se encuentra en posicin vertical, cuando se requiera aspirar
un lquido. La posicin vertical garantiza
que no se presente incertidumbre por variaciones mnimas en la cabeza del lquido.
2. Confirmar la recomendacin que efecta
el fabricante de la pipeta con relacin a la
profundidad mnima de inmersin de la
punta de la pipeta, cuando se requiere aspirar lquidos. Las profundidades varan de
acuerdo con el tipo y capacidad de la pipeta. Una gua general se muestra en la siguiente tabla2:
Profundidad de la inmersin
(mm)
1-100
2-3
100-1 000
2-4
1 000-5 000
2-5
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipette, UK, National Physical Laboratory, Teddington,
Middlesex, 2004, pg. 6. (www.npl.co.uk)
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5. Colocar la punta de la pipeta contra la pared del recipiente en el cual ser dispensado
Pipetas
RUTINAS DE MANTENIMIENTO
Se sealan a continuacin los lineamientos generales de las rutinas de mantenimiento requeridas por las pipetas mecnicas. Se deben
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realizar rutinas especficas de los diversos modelos, de acuerdo con las instrucciones de los
manuales suministrados por los fabricantes.
Inspeccin
Frecuencia: Diaria
Las pipetas son dispositivos que requieren inspecciones frecuentes para detectar desgastes
anormales o daos y/o verificar que las mismas
se encuentran en buenas condiciones de funcionamiento. La inspeccin debe cubrir los siguientes aspectos:
1. Verificar la integridad y ajuste de los mecanismos. Los mismos deben poder moverse
de forma suave. El pistn debe desplazarse suavemente.
2. Confirmar que el portapuntas no presente
distorsiones o marcas de desgaste, dado que
es esencial para la exactitud de las medidas.
Verificar el ajuste de las puntas.
3. Colocar una punta y llenarla con agua destilada. La pipeta no debe presentar ningn tipo de fuga.
Limpieza y descontaminacin
1. Verificar cada da que la pipeta se encuentra
limpia, en sus superficies interiores y exteriores. Si se detecta suciedad, la misma debe limpiarse utilizando un solvente adecuado o una
solucin jabonosa. Revisar las recomendaciones del fabricante relativas a la compatibilidad que tienen los materiales con que est
fabricada la pipeta para seleccionar aquellos
solventes que no produzcan efectos dainos
a la integridad de los componentes.
2. Esterilizar la pipeta siguiendo las indicaciones
de los fabricantes. Algunas pipetas se pueden esterilizar en un autoclave, utilizando un
ciclo de 121 C y un tiempo estimado de 20
minutos; algunas requieren ser desensambladas para que el vapor est en contacto con
Las pipetas que se pueden esterilizar con vapor disponen de una marca que permite identificarlas; el fabricante proporciona los requerimientos de desensamble.
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Si los componentes interiores fueron contaminados accidentalmente, todas las superficies debern ser limpiadas con un detergente y luego con agua destilada. Si los anillos o
sellos en O requieren ser cambiados, debern
ser sustituidos por repuestos de las mismas
caractersticas de los originales. Debe tenerse
en cuenta que este tipo de sellos vara dependiendo de la marca, tipo y modelo.
3. Lubricar el mbolo y el pistn con grasa siliconada especial4 para pipetas. La grasa mencionada ha sido especialmente desarrollada
para ser utilizada en las pipetas. Utilizar siempre la recomendada por el fabricante. Retirar
cualquier exceso de lubricante con un papel
absorbente.
4. Ensamblar siguiendo un proceso inverso al
utilizado para desensamblar.
Mantenimiento
Frecuencia: Semestral
Una pipeta que se utiliza diariamente debe ser
sometida a los siguientes procedimientos para
garantizar su correcto funcionamiento:
1. Desensamblar la pipeta. Seguir el procedimiento que para el efecto describe el fabricante, en el manual de uso y mantenimiento de la
pipeta. (El procedimiento vara dependiendo
de la marca, tipo y modelo). Normalmente, se
desensambla el cuerpo principal de la pipeta
del sistema eyector de puntas, desenroscando
el cuerpo de la pipeta del cilindro.
2. Limpiar los anillos en O, el mbolo y las paredes interiores del cilindro antes de lubricar.
4
5
La grasa siliconada existe en diversas especificaciones. Por lo tanto, debe utilizarse la recomendada por el fabricante de las pipetas.
Despiece basado en el Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Single Channel, Variable models, Rev. 2 /
121199.
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Pipetas
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por la densidad del agua). En la prctica se realiza un grupo de mediciones, a las que se aplican
correcciones que compensen cualquier variacin
que las aparten de las condiciones estndar de
temperatura y presin atmosfrica y cualquier
evaporacin que resulte importante durante el
tiempo que duren los ensayos. Este tipo de ensayo permite las siguientes actividades:
1. Comparar diversos tipos de pipetas entre s
para detectar si hay diferencias entre ellas.
2. Controlar la precisin y la exactitud de una
pipeta.
Procedimiento7
Principio
6
7
Los equipos a utilizar en la calibracin de la pipeta deben estar certificados por un laboratorio de calibracin acreditado.
El procedimiento presentado es una gua general. Para detalles completos, consultar estndares como el BS ES ISO 86556:2002.
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Mi
D
1
n-1
(Xi - XAV)
i=1
Frmulas
X=
Vi
Cv(%) =
nxZ
XAV
Clculos
Para efectuar los clculos se procede como se
describe a continuacin:
1. Calcular la masa del agua dispensada por la
pipeta en cada ciclo. Restar la lectura registrada correspondiente al final del ciclo anterior
de la registrada en el presente ciclo y continuar as hasta el final. Si se considera adecuado, sumar la masa promedio correspondiente
a la evaporacin calculada por ciclo.
S=
x (Xi-XAV)
n-1
D(%) =
XAV - XNom
i=1
Es = X - Vn
x 100
Vi =
XNom
Mi
D
Convenciones:
Convenciones:
X = valor promedio del volumen Cv(%) = coeficiente de
S = desviacin estndar
variacin
Z = factor de ajuste en
D(%) = inexactitud
(l / mg)8
Los valores de Z dependen de la temperatura y la presin para el agua destilada. Deben consultarse en publicaciones especializadas como el Estndar BS EN ISO 8655-6:2002, Anexo A.
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Pipetas
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PROBLEMA
La pipeta presenta fugas.
CAUSA PROBABLE
REMEDIO
Pistn contaminado.
Gotas visibles dentro de la punta de la Humidificacin no homognea de la Instalar una punta nueva en la pipeta.
pared plstica.
pipeta.
La pipeta presenta inexactitudes.
Interferencia en la calibracin.
Punta contaminada.
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DEFINICIONES BSICAS
Coeficiente de variacin [CV]. Parmetro
estadstico que representa la fraccin de la
desviacin tpica con respecto a la media.
Densidad. Relacin que existe entre la masa de
un cuerpo y el volumen que el mismo ocupa. La
densidad promedio de un objeto es igual a su
masa total dividida por su volumen total. Se
identifica mediante la letra griega Ro []. En el
Sistema Internacional de Unidades, la densidad
se mide en kilogramos por metro cbico [kg/m3].
Desviacin estndar [S]. Parmetro estadstico que se utiliza para determinar el error
global de una muestra.
Error (de una medida). Diferencia que se
presenta entre el valor medido y el valor
correcto.
Exactitud. Concepto relacionado con los
errores que presentan las medidas. Se dice
que un instrumento es exacto cuando los valores de un grupo de mediciones se acercan
bastante al valor real.
Masa. Propiedad fsica de los cuerpos relacionada con la cantidad de materia que estos
contienen. En fsica hay dos cantidades a las
que se denomina masa. La masa gravitacional
que es una medida de la forma en que un
cuerpo interacta con el campo gravitacional. (Si la masa del cuerpo es pequea, el
cuerpo experimenta una fuerza menor que la
que experimentara si su masa fuera mayor).
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Pipetas
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Bibliografa
Blues, J., Bayliss, D., Buckley, M., The calibration and use of piston pipettes, National Physical Laboratory, Teddington, Middlesex, UK, 2004. (www.npl.co.uk)
Digital pipette, Guide to Justor 100 series pipettes, Nichiryo Co., LTD.
Maintenance and Service Manual for Genex Mechanical Pipettes, Rev. 2/121199.
Mantenimiento y reparacin del equipo de laboratorio, diagnstico por imagen y hospital,
Ginebra, Organizacin Mundial de la Salud, 1996, 52-55.
Manual de instrucciones, Eppendorf Serie 2000.
(http://www.brinkmann.com/pdf/bs-manuals/ReferenceSeries2000.pdf)
Standard Operating Procedure for Pipettes, Brinkmann/Eppendorf SOP. 5101-201C,
Brinkmann Instruments Inc, 2001. (http://www.brinkmann.com/pdf/5101-C201.pdf)
The Finnpipette, Instructions for Use, Labsystems, Helsinki, Finland.
Universal Medical Device Nomenclature System (UMDNS), Product Categories Thesaurus,
ECRI, 5200 Butler Pike, Plymouth Meeting, PA, USA, 2000.
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