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FACULTAD DE BIOLOGA
LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES
TESIS
Director de Tesis
Dra. Blanca Lilia Nader Garca
Agradecimientos
Al Dr. Javier Caballero Nieto, Jefe del Jardn Botnico del Instituto de Biologa de la
UNAM, la atencin de donar al laboratorio de cultivo de tejidos vegetales un individuo y
semillas de Aztekium ritterii para la realizacin de la presente tesis.
A la Doctora Blanca Lilia Nader Garca por su ayuda en la realizacin de este trabajo,
como directora de tesis, as como por los consejos brindados.
A Evelyn, Ftima, Betty y todos mis compaeros del Laboratorio de Cultivo de Tejidos
Vegetales por hacer tan agradable la estancia en el laboratorio.
Resumen
Aztekium ritterii es una especie endmica del municipio de Rayones en Nuevo Len, Mxico que
se encuentra amenazada segn la NORMA Oficial Mexicana NOM-059-SEMARNAT-2010 y
est registrada dentro del apndice I del CITES debido a la sobre explotacin del recurso para su
venta ilegal en el mercado nacional e internacional. Esta especie no puede reproducirse al ritmo
de la demanda comercial debido a su ciclo de vida largo y de lento crecimiento, por lo tanto, es
necesario idear tcnicas como el cultivo de tejidos vegetales para frenar la prdida de
poblaciones. En este trabajo se compararon los siguientes tres mtodos para la produccin de
brotes de Aztekium ritterii. La germinacin in vitro donde se evalu la influencia del cido
giberlico; la embriognesis somtica indirecta a travs de barridos hormonales de
Bencilaminopurina (BAP), y la elaboracin de microinjertos de A. ritterii utilizando 3 especies
como pie de injerto (Mammillaria haageana, Coryphantha greenwoodii y Ferocactus recurvus).
El mayor porcentaje de germinacin (60%) se dio al lavar las semillas con EXTRAN y
sembrarlas en medio MS sin reguladores; la concentracin de BAP que mejor resultado present
fue de 1.5 mgL-1, mientras que la especie que mejor respondi como pie de injerto para A. ritterii
fue Coryphantha greenwoodii, donde se observ una gran presencia de brotes laterales.
Comparando los resultados para los tres mtodos utilizados observamos que el mejor para la
obtencin de brotes fue el Microinjerto sobre Coryphantha greenwodii con un 440% de
produccin de brotes no hidratados.
ndice
1 Introduccin ............................................................................................. 1
1.2
Antecedentes .......................................................................................... 5
2.1
Germinacin .................................................................................................................................. 5
2.2
2.3
Microinjertos ................................................................................................................................. 8
Objetivo ................................................................................................. 9
4.1
Metas ............................................................................................................................................. 9
Hiptesis ................................................................................................ 9
Desinfestacin ......................................................................................................................... 10
5.1.2
5.1.3
5.2
5.2.1
5.2.2
Subcultivo................................................................................................................................ 12
5.3
5.3.1
Germinacin ................................................................................................................................ 10
Microinjertos ............................................................................................................................... 12
Medio de cultivo e inoculacin ............................................................................................... 13
Resultados............................................................................................ 13
6.1
6.1.1
Germinacin ................................................................................................................................ 13
Crecimiento de plntulas ......................................................................................................... 14
6.2
6.3
Microinjertos ............................................................................................................................... 20
6.4
Discusin.............................................................................................. 23
8 Conclusines ........................................................................................... 25
9
vi
1 Introduccin
La familia Cactaceae es exclusiva de Amrica (exceptuando dos especies epfitas provenientes de
frica) (Jenkins, 1993), y el 74% de las 550 especies registradas en Mxico son endmicas
(Hernndez, 2006). Sin embargo, las regiones ridas, semiridas y en particular la zona nortecentro del pas posee las concentraciones ms altas de cactceas amenazadas del mundo
(Hernndez y Brcenas 1995, 1996).
Los cactus tienen tasas de crecimiento lentas, ciclos de vida largos y poco reclutamiento (Nobel,
1988), por otro lado, son apreciados como plantas ornamentales por la belleza de sus flores o por
su rareza y se cotizan a buenos precios en el mercado nacional e internacional. Los viveros
especializados en la venta de cactceas son insuficientes para satisfacer las demandas comerciales
por lo que esta situacin ha propiciado la colecta ilegal y el trfico de especies (Santos, 2005).
La extraccin ilegal es el mayor problema que amenaza a la familia, esto causa el deterioro de
numerosas poblaciones (Glass 1998), por lo que 285 especies se han incluido en la NOM-059SEMARNAT-2001 (Semarnat 2002).
En 2004 la Procuradura Federal de Proteccin al Ambiente (PROFEPA) hizo un aseguramiento
de 240 cactceas en el Aeropuerto Internacional de la Ciudad de Mxico y se identificaron
especmenes de Aztekium ritterii, Obregonia denegrii y Ariocarpus spp., que son endmicas de
Mxico y que a pesar de estar protegidas por las leyes mexicanas y la Convencin sobre
Comercio Internacional de Especies Amenazadas de Fauna y Flora Silvestres (CITES), haban
sido extrados ilcitamente de su hbitat natural (PROFEPA, 2004).
Aztekium ritterii produce mezcalina, sin embargo, la produce en cantidades muy pequeas como
para provocar algn efecto psicotrpico (Btiz y Rojas-Arechiga, 2002), su verdadero valor
comercial est dado por su calidad ornamental.
Siguiendo estndares de la Unin Internacional para la Conservacin de la Naturaleza, se ha
llegado a la conclusin de que A. ritterii se encuentra amenazada de extincin (Vovides, Luna y
En 1928 Frederich Boedeker describi Echinocactus ritterii, a partir de una planta facilitada por
Frederich Ritter en Mxico, al ao siguiente Boedeker describi el gnero Aztekium, basando este
nombre en la apariencia de la planta y compararla con las pirmides de la cultura azteca
(Velazco, 2006).
3
El gnero Aztekium cuenta con 2 especies, A. ritterii y A. hintonii, las cuales se distribuyen
nicamente en Nuevo Len. Aztekium ritterii es una planta de lento crecimiento con un rea de
distribucin muy pequea, endmica del Valle de Rayones, Nuevo Len; se encuentra en
acantilados de piedra caliza y en superficies de yeso muy empinadas. La zona total en que
posiblemente se d se estima en 50 kilmetros cuadrados, pero los hbitats adecuados en esa zona
estn limitados a caones y acantilados (Anderson, Arias y Taylor, 1994).
A. ritterii es un cactus globular, normalmente no mayor a 5 cm y por lo general tiene de 9 a 11
costillas que a su vez presentan numerosos surcos horizontales, entre estas costillas verdaderas se
encuentran pequeas costillas secundarias que llegan a la mitad del cuerpo de la planta. El color
de los ejemplares jvenes es un verde amarillento, tornndose en un verde grisceo al envejecer.
El centro del cactus contiene una gran cantidad de pubescencias blancas. Una vez que la planta ha
terminado su crecimiento es comn encontrar pequeos brotes a su alrededor.
Esta especie presenta de 1 a 3 espinas pequeas y frgiles por areola, formando una lnea
continua hacia el centro sobre las costillas verdaderas. Muchas veces estn ausentes en las areolas
jvenes. Sus flores son pequeas, de menos de 10 mm de ancho. Crecen en pice, de un color
entre blanco y rosado. Usualmente los ptalos externos presentan una raya ms obscura. Florece
libremente en cultivo a lo largo de los meses de verano. Sus frutos son pequeos y rosados que se
abren cuando maduran.
Al abrirse los frutos, se desprenden las semillas, las cuales son diseminadas por sinzoocoria
(Rojas-Archiga y Vzquez-Yanes, 2000).
Debido a las adversidades del medio, la depredacin animal y la falta de un microclima que
proteja el desarrollo de las plntulas, slo una pequea porcin de la gran cantidad de semillas
que puede llegar a producir el fruto llegan a germinar y a desarrollarse para producir nuevas
plantas. Las semillas estn cubiertas por una testa, el tegumento interno deja una pequea
abertura que es el micrpilo, el externo es ms corto, no llega al micrpilo y sus clulas contienen
abundantes taninos responsables de la dureza de la testa y de su color ms o menos obscuro. El
funculo al desprenderse, deja en las semillas residuos ms o menos grandes que constituyen una
estructura esponjosa llamada estrofolo (caracterstica de Aztekium ritterii, as como de
Mammillaria tetrancistra y Cochemiea poselgeri.). El embrin es el primordio de la planta, es
4
grande y ocupa toda la cavidad de la semilla; consta del eje primordial (tallito), la radcula y los
cotiledones. Durante la germinacin, la radcula del embrin saldr a travs del micrpilo, lo que
refiere una germinacin epigea. La plntula es el embrin desarrollado como consecuencia de la
germinacin, con cotiledones pequeos, siendo toda la plntula globosa u ovoide (Bravo-Hollis,
1978).
Figura 1. Semilla con testa tuberculada, puede notarse, en la parte inferior de la semilla, el estrofolo muy
desarrollado (Bravo-Hollis, 1978).
2 Antecedentes
2.1 Germinacin
El balance entre auxinas y citocininas es particular para la induccin de brotes para cada especie
de Mammilaria (Johnson y Emino, 1979).
(Leshem et al. 1988; Paques & Boxus 1987, Citados por Debergh, 1992) han descrito que altas
concentraciones de BAP (10 mg L-1) producen hiperhidratacin en cultivos in vitro.
Prez- Molphe-Balch et al. (1998) demostraron que la utilizacin de BA (1 mg L-1) sola o en
combinacin con cido ANA (0.01 mg L-1) fueron muy efectivos en la formacin directa de
brotes en 21 especies de cactceas mexicanas.
Clayton et al. (1990), Rodrguez y Rubluo (1994) y Malda et al. (1999 b) sealaron que, en
distintas especies de cactceas, concentraciones altas de BA y bajas de ANA inducen la
brotacin.
Se ha logrado la induccin de embriognesis somtica en Turbinicarpus pseudomacrochele
utilizando durante 4 semanas medio MS suplementado con 2,4-D (3mg L-1), ANA (2mg L-1), Kin
(2mg L-1), L-glutamina (500mg L-1), y casena hidrolizada (250mg L-1). La germinacin de los
6
embriones somticos fue a las 16 semanas de repicar en medio MS con 5g/L de Phytagel y sin
reguladores (Torres-Muoz, 1996).
Mammillaria elongata produce brotes en medio MS adicionado con 1.07 M ANA y 11.09 o
22.19 M BA. Sin embargo, al tratar de inducirlos a partir de brotes en forma de cresta, se
obtuvieron brotes hiperhidratados (Papafotiou et al., 2001).
Para Opuntia ellisiana se lograron brotes a partir de areolas en medio MS con 10 M de BAP y
10 M de IBA con fotoperiodo de 16 horas (35 das). El mayor porcentaje de enraizamiento se
dio con medio MS con 25 M IBA, despus de 19 das (Jurez, 2002).
Moebius-Goldammer, et a.l (2003), indujo brotes de Ariocarpus kotschoubeyanus a partir de
embriognesis indirecta utilizando medio MS suplementado con 13.3M de benciladenina (BA)
y 5.4M de ANA.
En plntulas enteras de Cephalocereus senilis se encontr que en la concentracin de 0.3 mg L-1
de ANA y 3.0 mg L-1 de BA se indujeron el mayor nmero de brotes en la parte basal, seguido de
la parte media y por ltimo la apical (Choreo-Tapia et al., 2002).
Para inducir la formacin de brotes de Ferocactus glaucescens, Santos (2005), utiliz medio MS
con el doble de la concentracin de cloruro de calcio descrita originalmente por Murashige y
Skoog (1962), adicionado con 1 mg L-1 de BA y 0,02 mg L-1 de ANA. Adems obtuvo mayor
nmero de brotes compactos al repicar en medio MS con 2 mg L-1 de BAP con 1% de carbn
activado.
Se obtuvo callo en Mammillaria albicoma Bod. Al aplicar al medio MS 0.1mg L-1 de ANA y
5.0 mg L-1 de BA (Wyka et al., 2006).
Para Notocactus magnificus se reporta la formacin de callo en medio MS con tiamina HCl, iinositol, sacarosa 2% (w/v), BAP y 2,4-D. En el mismo medio, pero en obscuridad, se formaron
brotes a los 2-4 meses. (Ara de M., 2006).
Ruvalcaba (2010), obtuvo los mejores resultados en la proliferacin de brotes a partir de plantas
germinadas en laboratorio, tanto de las porciones apicales como laterales, de Coryphantha retusa
2.3 Microinjertos
En teora todos los cactus se pueden injertar en cualquier otro miembro de la familia Cactaceae,
pero las especies que se emplean ms a menudo como portainjertos en cactceas son Hylocereus
undatus, Echinopsis pachanoi, E. brigdesii, E. macrogonus, E. peruvianus, E. multiplex,
Trichocereus pachanoi, T.spachianus, T. macrogonus, T. fulvianus y T. pasacana. (Anderson,
1997; Toogood, 2002).
3 Objetivo
Comparar 3 mtodos para la obtencin in vitro de brotes de Aztekium ritterii
4.1 Metas
4 Hiptesis
-
Las semillas de Aztekium ritterii germinarn bajo el efecto de luz blanca constante y en
presencia de cido giberlico.
5 Material y mtodo
5.1 Germinacin
5.1.1
Desinfestacin
El total de semillas (90 semillas), se dividi en tres grupos, cada uno con un tratamiento distinto:
A) Se lavaron 30 semillas con agua corriente y agua destilada, para remover cualquier mucilago
restante. Luego se sumergieron en una solucin antibacterial (Agrimicyn).
B) Se lavaron 30 semillas con agua corriente y agua destilada. Se sumergieron en una solucin
detergente (Extran) al 2% durante 30 minutos.
C) Se lavaron 30 semillas con agua corriente y agua destilada. Se colocaron en Extran al 2%
durante media hora y se enjuagaron bien, para posteriormente transferirlas a una solucin de
cido ctrico (2mg L-1) y cido ascrbico (2mg L-1).
Despus de los respectivos enjuagues, dentro de la campana se procedi a desinfectar las 90
semillas sumergindolas en una solucin de Cloro al 50% por 10 minutos y se volvieron a
enjuagar.
10
5.1.2
Para cada uno de los tratamientos (A, B y C) procedieron las siguientes indicaciones:
5.1.3
Medicin de plntulas
11
5.2.1
Se utiliz medio MS adicionado con ANA 0.5mg L-1, AS 2.0mg L-1, Polyvinylpyrrolidona
(PVP) 2.0g/L y cinco concentraciones distintas de BAP (1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 mg L-1). Se
cortaron fragmentos de tejido calloso y se colocaron 2 de stos por cada frasco, se sembraron 2
lotes de 7 repeticiones con cada concentracin. Posteriormente el tejido calloso restante y los
brotes reventados por el exceso de humedad se repicaron en otros 2 lotes, uno con 7 repeticiones
y otro con seis, por cada concentracin de BAP. Por otro lado, se sembraron 15 frascos en medio
MS sin reguladores como control.
5.2.2
Subcultivo
Los brotes hidratados obtenidos se repicaron en 50 frascos con medio MS adicionado con PVP
2.0g/L, AS 2.0mg L-1 y 4.5g L-1 de Phytagel, la mitad de los frascos totales contenan tambin
vermiculita para disminuir el nivel de humedad del medio.
Los frascos se mantuvieron en una cmara de incubacin con luz blanca constante a una
temperatura de 25C.
Los explantes se repicaron una vez por mes y pasados 3 meses de la primera siembra en medio
de induccin de brotes se procedi a contabilizar la presencia de stos.
5.3 Microinjertos
12
5.3.1
En medio MS sin reguladores, diez brotes de Aztekium ritterii se microinjertaron sobre plntulas
de Coryphantha greenwoodii, otros diez sobre plntulas de Mammillaria haageana y otros diez
sobre plntulas de Ferocactus recurvus, realizando cortes horizontales para observar si de esta
manera disminuye su absorcin de agua.
Los frascos se mantuvieron en una cmara de incubacin con luz blanca constante a una
temperatura de 25C.
Cada mes se repicaron los microinjertos y se procedi a tomar fotografas para observar su
respuesta.
6 Resultados
6.1 Germinacin
Se realizaron 3 tratamientos, con 30 semillas cada una; los tres resultaron efectivos en cuanto a la
desinfestacin de las semillas, nicamente en el primer tratamiento se contamin un frasco.
Tabla 1. Porcentaje de germinacin = (Nmero de semillas germinadas/ semillas sembradas) X 100. El mejor
resultado se obtuvo con el grupo tratado con Extran en medio MS sin reguladores para la germinacin de
semillas de Aztekium ritterii.
Medio MS
Sin
reguladores
1mgL-1 GA3
Embebidas en
1mgL-1 GA3
Agrimycin
Extran
cido Ctrico +
cido Ascrbico
30%
60%
20%
30%
50%
10%
10%
40%
30%
13
En la tabla anterior (Tabla 1) se aprecia que las mejores condiciones para la germinacin de
semillas de A. ritterii se consiguieron con la utilizacin de Extran en el tratamiento previo a la
germinacin y la inoculacin en medio MS sin reguladores.
Debido a la baja germinacin de semillas en obscuridad, tanto en presencia de GA3 como sin
ste, despus de transcurrir dos meses de la siembra, se trasladaron a luz, lo que produjo una
rpida respuesta en el caso de algunas semillas germinadas, lo que nos sugiere la necesidad de luz
sobre la germinacin.
Es importante notar que la mayora de las plntulas obtienen de forma natural una raz a los pocos
das de germinar.
6.1.1
Crecimiento de plntulas
Se registr el crecimiento de las plntulas germinadas con mediciones diarias durante 3 meses a
partir de su germinacin.
En las siguientes grficas (Grficas 1, 2 y 3) se muestra el crecimiento registrado durante 90 das
de las plntulas de cada tratamiento, adems se observa el tiempo de germinacin de la semilla
desde su siembra.
Se puede observar que en los casos de las semilla con tratamiento previo a la siembra de
Agrimycin (Grfica 1) y de Extran (Grfica 2) las semillas embebidas en una solucin 1mgL-1 de
cido giberlico tuvieron una germinacin ms temprana y tuvieron un crecimiento un poco
14
mayor al de las semillas en medio MS sin reguladores. En contraste, las semillas sembradas en
medio MS adicionadas con 1mgL-1 de GA3 sufrieron un crecimiento acelerado llegando a medir
entre 5 y 6 mm con un aspecto hiperhidratado, seguramente debido a que la presencia del cido
giberlico inhibi el desarrollo de races.
7
6
5
4
3
2
1
0
Da 1
Da 6
Da 11
Da 16
Da 21
Da 26
Da 31
Da 36
Da 41
Da 46
Da 51
Da 56
Da 61
Da 66
Da 71
Da 76
Da 81
Da 86
Da 91
Da 96
Da 101
Da 106
Da 111
Da 116
Da 121
Da 126
Da 131
Da 136
Agrimycin
S/reguladores
MS+GA3
Embebida GA3
Grfica 1 Crecimiento de Plntulas de Aztekium ritterii del tratamiento con Agrimycin, las semillas.
6
5
4
3
2
1
0
Da 1
Da 6
Da 11
Da 16
Da 21
Da 26
Da 31
Da 36
Da 41
Da 46
Da 51
Da 56
Da 61
Da 66
Da 71
Da 76
Da 81
Da 86
Da 91
Da 96
Da 101
Da 106
Da 111
Da 116
Da 121
Extran
S/reguladores
MS+GA3
Embebida GA3
15
En el caso del tratamiento con cido ctrico y cido ascrbico (Grfica 3) se registr el menor
tiempo de germinacin para las semillas embebidas en cido giberlico, incluso menor que los de
los otros tratamientos y el mayor crecimiento a lo largo de los 90 das llegando a los 4 mm con
raz.
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
Da 1
Da 7
Da 13
Da 19
Da 25
Da 31
Da 37
Da 43
Da 49
Da 55
Da 61
Da 67
Da 73
Da 79
Da 85
Da 91
Da 97
Da 103
Da 109
Da 115
Da 121
Da 127
Da 133
Da 139
Da 145
Da 151
Da 157
Da 163
Da 169
Da 175
S/reguladores
MS+GA3
Embebida GA3
Grfica 3. Crecimiento de plntulas de Aztekium ritterii del tratamiento con cido ctrico y cido ascrbico
Las semillas embebidas en cido giberlico inoculadas en medio MS basal, aunque presentaron
un bajo porcentaje de germinacin destacan por haber germinado en una menor cantidad de das
que las sembradas en los otros medios de cultivo.
16
Tabla 2. Diferentes ensayos para induccin de brotes de Aztekium ritterii, 27 frascos por concentracin de
BAP, 15 frascos sin reguladores como control. Se obtuvo una mayor cantidad de brotes con la concentracin
de 1.5mg L-1 de BAP.
Total de Brotes
Promedio de brotes
Formados
por frasco
1.0 mg L-1
71
2.62
1.5 mg L-1
88
3.25
2.0 mg L-1
60
2.22
2.5 mg L-1
43
1.59
3.0 mg L-1
31
1.14
Control
---
12
0.8
Ensayo
BAP
17
18
16
14
Nmero de brotes
12
10
8
6
4
2
0
-2
1 mg/L BAP
2 mg/L BAP
3 mg/L BAP
Sin reguladores
Reguladores de crecimiento
Grfica 4. Diagrama de cajas y alambres sobre la distribucin en el nmero de brotes por concentracin de
BAP. Se aprecia que la concentracin de 1.5 mgL-1 form un nmero mayor de brotes.
Los tratamientos 2 mg/L BAP, 2.5 mg/L BAP y 3 mg/L BAP presentan
comportamiento muy similar, el nmero de brotes flucta entre 0 y 6 brotes. En cualquier caso, se
observa una mayor produccin de brotes que en el medio sin reguladores.
Posterior a la formacin de brotes, se repicaron 50 frascos, con 4 brotes cada uno, a medio MS
sin reguladores, la mitad con vermiculita y la mitad sin esta. En los frascos sin vermiculita se
observ una gran hidratacin y prdida de color. Los brotes en el medio con vermiculita
crecieron conservando su forma y recuperaron un color obscuro, adems de presentar formacin
de primordios de raz.
18
19
Cuando se repicaron lotes de 5 repeticiones en medio MS basal con 5gL-1 de Phytagel, medio MS
basal con 4.5gL-1 de Phytagel y la mitad de concentracin de calcio y medio MS basal con 4.5gL1
En el primer caso, el exceso del agente gelificante en el medio dificult la recepcin de agua a los
brotes evitando la hiperhidratacin, de tal manera que algunos comenzaron a deshidratarse
adems de permanecer poco estables sobre este medio.
En algunos casos se ha dejado agotar el medio de cultivo en los frascos y se han reportado
mejoras estructurales en brotes muy afectados por la hiperhidratacin y en algunos casos se
comienza a formar un primordio de raz.
6.3 Microinjertos
Se realizaron tres grupos de microinjertos, uno colocando brotes de A. ritterii sobre portainjertos
de Coryphanta greenwoodii, otro sobre portainjertos de Mammillaria haageana y otro sobre
Ferocactus recurvus.
Los pies de injerto de C. greenwoodii tuvieron un impacto ms favorable sobre los brotes de
Aztekium ritterii injertados. Es importante resaltar que a diferencia de las cabezas montadas sobre
20
Figura 10 (da 1), 11 (da 30), 12 (da 60) y 13 (da 90) Microinjerto sobre M. haageana.
Ilustracin 14 (da 1), 15 (da 30), 16 (da 60) y 17 (da 90) Microinjerto sobre C. greenwoodii.
21
Es importante observar que la parte apical del pie de injerto se ha unido con xito a la parte basal
de los brotes diseccionados de A. ritterii y se ha logrado un desarrollo continuo, lo que garantiza
ms material para microinjertos futuros.
Debido a que el objetivo de este trabajo es comparar la eficiencia de las tres tcnicas expuestas
con respecto a la obtencin de brotes de Aztekium ritterii se lleg a la conclusin de que el
Microinjerto sobre Coryphantha greenwoodii es la ms ptima (ver Tabla 3).
Tabla 3. Comparacin brotes obtenidos entre los mtodos de germinacin, embriognesis somtica y
microinjertos. El mtodo ms eficiente fue el de Microinjerto sobre C greenwoodii con un 440% de formacin
de brotes.
Explantes
Brotes
obtenidos
Porcentaje
Callo en medio MS +
1.5mgL-1 BAP
10
54
Microinjerto
sobre C.
greenwoodii
10
88
44
60%
162.96%
440%
22
7 Discusin
Aztekium ritterii es una especie en peligro de extincin muy solicitada por el mercado
internacional debido a su atractivo como planta ornamental y se ha visto amenazada por la
colecta ilegal.
Para que pueda combatirse la colecta ilegal y apoyar a la recuperacin de las poblaciones
originales de A. ritterii, en este trabajo se han estudiado 3 mtodos para la obtencin de nuevas
plantas que en medida de lo posible ayudarn a satisfacer las demandas del mercado.
Las semillas fueron almacenadas en una cmara de incubacin con una temperatura que rodeaba
los 25C, condicin que entra dentro del rango manejado por Fearn (1981) y Rojas-Archiga et
al. (2000) que oscila entre los 12 C y sobre los 28C.
Los resultados arrojados por el experimento de germinacin no nos sugieren un beneficio
relevante del cido giberlico sobre las semillas en cuanto a su porcentaje de germinacin ni en
luz ni en obscuridad. Esto contrasta con lo reportado por Deno (1996) para Aztekium ritterii,
Alcorn y Kurtz (1959) para Carnegiea gigantea, Cardarelli et al (2010) para Obregonia denegrii
Fric. y Nagao et al. (1959) para Begonia evansiana.
Aztekium ritterii tiene semillas muy pequeas y manifest una preferencia por la germinacin en
condiciones de luz, esto se podra complementar con lo mencionado por Millberg et al. (2000)
quien estipula que las especies de cactus con semillas grandes son generalmente menos
dependientes de la luz para su germinacin.
El factor de escarificacin aparentemente influy ms sobre el porcentaje de germinacin,
mientras que el embeber las semillas en cido giberlico aceler la germinacin. El Extran fue la
mejor opcin encontrada en los experimento presentados, posiblemente debido a su fuerte accin
que acta como escarificante, aun as no resulta tan agresiva como la proporcionada por los
cidos ctrico y ascrbico, el cual se piensa pudo haber sido muy agresivo para las semillas ms
dbiles, afectando en el porcentaje de germinacin. Se sugiere que se realicen trabajos con una
concentracin menor de cido ctrico y cido ascrbico para comprobar su efectividad, con una
cantidad mayor de semillas y tambin distintas concentraciones de cido giberlico para
embebrlas.
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En la experiencia del barrido hormonal se observ que las concentraciones ms bajas de BAP
desencadenaban una respuesta ms eficaz en la formacin de brotes, mientras que al aumentar la
concentracin del regulador se encontraban menos brotes.
Para la obtencin de brotes se utiliz una concentracin mayor de BAP que de ANA, lo cual
coincide con lo sugerido por Prez- Molphe-Balch et al. (1998) para 21 especies de cactceas as
como Clayton et al. (1990), Rodrguez y Rubluo (1994) y Malda et al. (1999 b) para distintas
especies de cactceas, Papafotiou et al. (2001) para Mammillaria elongata, Moebius-Goldammer,
et al. (2003) para Ariocarpus kotschoubeyanus, Choreo-Tapia et al. (2002) para Cephalocereus
senilis
crearon callo para Mammillaria albicoma Bod. segn Wyka et al. (2006).
Para Aztekium ritterii, se reporta que la influencia de BAP en combinacin con ANA favoreci
la expresin morfogentica segn los trabajos de Starling (1984), Martnez-Vzquez y Rubluo
(1989) y Clayton et al. (1990). Lo cual coincide con lo reportado en este trabajo.
La Figura 7 nos muestra que la concentracin con un mayor nmero de brotes formados es de 1.5
mgL-1 de BAP ms 0.5 mgL-1 de ANA lo cual difiere de la reportada por Navarro et al. (2009),
quien utiliz una concentracin de 1 mgL-1 de BAP con 1 mgL-1 de ANA. Sin embargo, en el
presente trabajo se obtuvieron brotes menos hidratados y menos alargados, manteniendo una
forma ms acorde a la natural.
Aunque los brotes obtenidos se hiperhidrataron en menor medida fue necesario repicarlos a un
medio con vermiculita, la cual result eficaz en la tarea de contrarrestar el exceso de humedad en
el medio, donde se pudieron apreciar individuos con un color verde obscuro y muy compactos.
Es importante resaltar que al acabarse el medio de cultivo los brotes comenzaron a formar
pequeos primordios de raz.
En el experimento de microinjertos se utilizaron como pie de injerto tres distintas especies,
siendo Coryphantha greenwoodii la ms adecuada para el desarrollo de los injertos. Un resultado
destacado es la proliferacin de brotes laterales de A. ritterii sin la utilizacin de reguladores de
crecimiento. La importancia de estos microinjertos radica en la relativa facilidad para enraizar los
pies de injertos.
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Los resultados obtenidos en este trabajo muestran un nmero superior de brotacin en los
microinjertos (440%) que en los obtenidos de callo con ayuda de 1.5 mgL-1 de BAP (162.96%) y
por germinacin (60%). Esto coincide con lo establecido por Rodrguez-Garay y Rubluo (1992),
quienes mencionan que el proceso de morfognesis en Aztekium ritterii es tan compleja que se
requiere la estructura completa de la planta para producir brotes.
En trabajos anteriores con A. ritterii se ha logrado la produccin de brotes in vitro, sin embargo,
la totalidad de los individuos obtenidos invariablemente se ha desarrollado en un estado de
hiperhidratacin. Las tcnicas desarrolladas en el presente trabajo lograron la obtencin de brotes
no hidratados de A. ritterii, lo que significa un importante avance en el estudio de la
micropropagacin de esta especie.
8 Conclusin
El cultivo de tejidos vegetales es una herramienta til para la proliferacin de plantas. En un
principio se enfoc su uso para especies ornamentales y alimenticias, sin embargo, actualmente
se a extendido su uso para tratar especies en peligro de extincin y es importante explorar todas
las opciones posibles para determinar la mejor tcnica que pueda utilizarse para cada situacin.
En este caso, para la especie Aztekium ritterii se haba trabajado en la formacin de brotes por
barrido hormonal a partir de areolas y a partir de callo, sin embargo, en este trabajo se realizaron
nuevos experimentos para evaluar la obtencin de brotes in vitro, como fue la germinacin y los
microinjertos.
Al hacer la comparacin de distintas tcnicas debe destacarse una caracterstica en comn, en esta
ocasin la obtencin de brotes, sin embargo por separado cada tcnica tiene sus ventajas y sus
desventajas.
En el caso del uso de semillas hay claras desventajas, como son el bajo porcentaje de
germinacin y el hecho de que por explante no se consigue ms de una plntula. Por el contrario
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ste es el explante ideal para conseguir plantas completas y la variabilidad gentica deseada para
un proyecto de reforestacin.
La formacin de brotes con ayuda de reguladores de crecimiento es una gran herramienta para la
micropropagacin, ya que con los reguladores indicados y las concentraciones ideales se puede
obtener un alto ndice de brotacin. Esto nos puede servir para abastecer de manera ms eficiente
los viveros para que se vendan plantas no extradas de su medio y combatir el saqueo ilegal.
El objetivo principal de los injertos en esta experiencia fue evitar que los brotes de Aztekium
ritterii se hiperhidrataran y ayudarlas a establecerse en el suelo, por lo tanto nos sorprendi
encontrar tal ndice de brotacin, sin reguladores de crecimiento, sobre los individuos injertados
sobre Coryphantha greenwoodii.
Es muy importante investigar en trabajos futuros las condiciones necesarias para enraizar brotes
de A. ritterii y entender todo su ciclo. Cuando todo ese conocimiento se alcance ser viable su
micropropagacin y sera posible la formacin de una UMA especializada en esta y otras
especies amenazadas de su regin de origen para regular el trfico ilegal y la colecta clandestina.
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