FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA D

ESCUELA SUPERIOR POLITCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUMICAS
INGENIERA EN BIOTECNOLOGA AMBIENTAL
PRCTICA 4.
TEMA: Determinacin de coliformes fecales en una muestra de agua utilizando el

mtodo de filtracin.

INTEGRANTES:
ARGOTI ANA
CARTAGENA DANIELA
PREZ MIGUEL
RODRGUEZ GUSTAVO
VALLEJO JENNIFER
CRDENAS DAVID
BURI SOFA
LICTA EDWIN
ERAZO SOFA
TIERRA NATALY
MAYANQUER PAOLA
PAREDES JOHANA
CATEDRA: MICROBIOLOGA AMBIENTAL
DOCENTE: Ing. Sofa Godoy
SEMESTRE: QUINTO A
FECHA: 20 01 - 2015

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1. OBJETIVOS.

1.1.

OBJETIVO GENERAL.

Evaluar la calidad del agua de diferentes lugares.

1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS.
Conocer las colonias de coliformes fecales que estn presente en el agua en diferentes
ambiente.

Determinar el nmero de colonias formadoras de colonias en cada una de las muestra

analizadas

2.

Cuantificar la presencia de coliformes fecales en el agua.

INTRODUCCIN.

La posibilidad de contraer enfermedades de origen intestinal por consumo o contacto continuo

o fortuito de agua contaminada impone la necesidad de realizar un control higinico sanitario
no solamente al agua para bebida sino tambin a otros tipos de agua que se usan en las
actividades humanas, en vista de que pueden estar contaminadas por agentes patognicos.
Estos agentes al haber sido eliminados por las heces de humanos o animales enfermos
pueden estar presentes en aguas servidas o en aguas superficiales y en niveles ms bajos
que otros microorganismos, lo cual dificulta su deteccin y ha llevado.

3. MARCO TEORICO
IMPORTANCIA SANITARIA DEL ESTUDIO MICROBIO- LOGICO DEL AGUA.
El agua para consumo humano puede estar contaminada por microorganismos patogenos de
origen fecal como virus, bacterias, y parasitos. Muchas enfermedades importantes se asocian
a contaminacion del agua por desechos humanos. Algunas de estas enfermedades, como las
gastrointestinales, ocupan lugares preponderantes como causa de mortalidad infantil en
lugares donde la pobreza y la desnutricion son comunes, siendo los ninos el grupo de la
poblacion mas afectado. Las enfermedades parasitarias causan debilidad cronica llevando al
individuo a un mayor riesgo de sufrir infecciones por otros microorganismos.

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La materia fecal contiene una gran cantidad de bacterias, casi siempre inofensivas, algunas
de estas son utilizadas como indicadores de contaminacion fecal.

En la mayoria de infecciones por bacterias entericas patogenas existe el estado de portador

sano, por lo que en las comunidades donde estas infecciones son comunes, una proporcion
de individuos sanos seran foco de excrecion de bacterias patogenas, este estado de portador
puede variar de unas semanas hasta toda la vida del individuo.
Anlisis microbiolgico del agua
El inters se centra en los microorganismos patgenos, que son los diferentes tipos de
bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que transmiten enfermedades.

En los pases en vas de desarrollo las enfermedades producidas por estos patgenos son
uno de los motivos ms importantes de muerte prematura, sobre todo de nios. Normalmente
estos microbios llegan al agua en las heces y otros restos orgnicos que producen las
personas infectadas.

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Anlisis microbiolgico: Bacterias coliformes

Los

coliformes

reagrupan ciertas especies bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de

morfologa bacilar, Gram negativas, aerobias o anaerobias facultativas, oxidasa negativa, no
esporuladas y que fermentan la lactosa con produccin de cido a 37C en 24-48 horas.
Coliformes fecales
Los coliformes fecales se definen como el grupo de organismos coliformes que pueden
fermentar la lactosa a 44-45 C. Incluyen bacterias del gnero Escherichia y tambin especies
de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter. Aunque frecuentemente su origen es fecal,
organismos que dan positivo en este mtodo de prueba pueden provenir de aguas
enriquecidas, efluentes industriales y materia vegetal y suelo en descomposicin, por lo que
el trmino coliformes fecales no es siempre acertado (la OMS recomienda el trmino
coliformes termorresistentes).
Las pruebas de coliformes fecales son suficientemente sencillas para evaluar la contaminacin
fecal de aguas y alimentos.
El cuerpo humano excreta gran cantidad de coliformes fecales diariamente. Debido a que uno
de los objetivos primarios del tratamiento de aguas residuales es evitar que se conviertan en
foco de enfermedades infecciosas, es de particular inters reducir estos coliformes a niveles
que pueden ser eliminados en la naturaleza. Un buen sistema de lodos activados es capaz de
eliminar una fraccin mayoritaria y un proceso de desinfeccin final como adicin de cloro o
uso de lmparas UV termina por hacer seguar al agua. El control de los coliformes mediante
anlisis es imprescindible para garantizar que funciona bien el proceso de tratamiento.
4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS.
MATERIALES:

Cajas Petri

Mechero

Algodn

Pinza

REACTIVOS:

MC Farland para coliformes fecales

Agua destilada
Membranas

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EQUIPOS:

Estufa a 35 C

Bomba de vacio

Rampa de
Filtracion

5. PROCEDIMIENTO.
Desinfectar el lugar de trabajo y sobre todo la rampa de filtracin.

Realizar cuatro diluciones de la muestra inicial de agua.

Colocar las membranas en los embudos de la rampa de filtracin y asegurar los

mismos.

Prender la bomba de vaco y colocar las muestras de agua en los recipientes de la

rampa de filtracin Una vez que se han vaciado los embudos con la ayuda de una pinza
sacar las membranas y colocar en las cajas que estn previamente con el medio a
utilizar.

Una vez seco el medio colocarla caja Petri invertida en la estufa a 35 C y por 24
horas.

Para el clculo de colonias utilizar la ecuacin:

RESULTADOS.
Al realizar el conteo del nmero de colonias presentes en nuestra caja Petri, el valor obtenido
fue de 96 UFCs. Casi todas las colonias encontradas en la caja Petri se caracterizan por
poseer formas redondeadas con bordes regulares, su tamao promedio es de alrededor de
1mm de dimetro, aunque un pequeo nmero de colonias presenta un dimetro menor.
Las colonias presentaban colores en tonos suaves, en abundancia existan colonias de color
rosa, cerca de 89 tenan esta coloracin, mientras que alrededor de 6 colonias mostraban un
color amarillo muy plido; solo una colonia posea un color azul grisceo, su tamao era muy
pequeo en relacin al resto de colonias, aunque se asemejaban en forma y regularidad de
sus bordes.

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6. CALCULO DE COLONIAS

1(1 105 )
=
10

= 0.000001 = 1 106
Segn el clculo el nmero de colonias contadas totales contadas en coliformes fecales en el
medio de cultivo realizado en la prctica es de 1 106 tomando en cuenta el nmero de
disoluciones realizadas.
7. DISCUSIN DE RESULTADOS.
De las 96 colonia (UFCs), las de formas redondeadas con bordes regulares, las de 1mm de
dimetro, especficamente las azules grisceo como se encuentra en el grfico de los anexos
son coliformes fecales ya que la prctica es para un indicador de contaminacin fecal en el
control y calidad del agua destinada al consumo humano o nivel de contaminacin con heces
fecales ya que son ms resistentes que las bacterias patgenas intestinales y porque su
origen es principalmente fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es
bacteriolgicamente segura. Las amarillas muy plidas segn su forma y color, etc.,
pertenecen a las bacterias Escherichia coli, estas en su hbitat vive en los intestinos de los
mamferos sanos. Es el principal organismo anaerobio facultativo del sistema digestivo, esta
bacteria acta como un comensal formando parte de la flora intestinal por lo que podramos
asegurar que se encuentran en el agua por la secrecin de los animales en sus heces fecales.
Por ultimo las rosas coliformes que no provienen directamente de las heces fecales sino que
pueden provenir de los alimentos o sin nmero de materia orgnica en descomposicin.
8. CONCLUSIN.
Las colonias presentaban colores en tonos suaves:
Azul grisceo: Coliformes fecales
Rosado cremoso: Coliformes no fecales
Amarillo muy plido: Escherichia coli
Al realizar el conteo del nmero de colonias presentes en nuestra caja Petri, se obtuvo 96
UFC. Las colonias presentaban colores en tonos suaves, en abundancia existan colonias

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de color rosa, cerca de 89 tenan esta coloracin, mientras que alrededor de 6 colonias
mostraban un color amarillo muy plido; solo una colonia posea un color azul grisceo, su
tamao era muy pequeo en relacin al resto de colonias, aunque se asemejaban en forma
y regularidad de sus bordes.
Solo se logr cuantificar una sola colonia de Coliformes fecal en nuestra muestra de agua
residual, que tena una coloracin azul grisceo, su tamao era muy pequeo en relacin
al resto de colonias, pero se asemejaban en la forma y en la regularidad de sus bordes.

9. RECOMENDACIONES
Una vez tomada la muestra no tapar el recipiente para que los microorganismos reciban
la cantidad adecuada de oxgeno, tambin se debe etiquetar la muestra con el lugar, la
fecha y la hora a la cual se recogi.
Se recomienda realizar un nmero mayor de diluciones cuando la muestra tiene una
concentracin material particulado suspendido y se puede observar ms turbia, en caso
de aguas ms contaminadas es necesario realizar ms diluciones.
Se recomienda realizar una cantidad mnima de disoluciones o trabajar con la propia
muestra en caso de aguas poco contaminadas para obtener resultados de colonias de
coliformes fecales.
Es necesario utilizar una pipeta por cada disolucin que se haga de esta manera no se
contamina la muestra.
Ser preciso en las medidas para realizar correctamente las disoluciones.
Trabajar dentro de la cmara de flujo laminar y su correcta utilizacin es muy importante
ya que evitara que la muestra se contamine de otros microorganismos provenientes del
ambiente o de nuestros materiales.
Trabajar con guantes mascarilla y cofia es muy recomendable ya que as tambin se
evitara que la muestra se contagie de microorganismos presentes en nuestras manos
o cabello, mantener el control de la asepsia del lugar lo ms que se pueda.

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Al colocar la membrana en el embudo de la rampa de filtracin hacerlo del lado
adecuado e inmediatamente colocarla de ser posible con pinzas sacndola del
empaque para evitar contaminacin de otros microorganismos.
Mantener
encendida la bomba de vaco e tiempo necesario para que todo el lquido de la muestra
se filtre.
Colocar de manera uniforme el medio de cultivo para que cubra toda la superficie de la
placa.
Colocar la caja Petri invertida y a la temperatura adecuada esto se deber llevar a cabo
para que los coliformes fecales puedan desarrollarse debidamente.
10. CUESTIONARIO.

1. Por qu razones es importante determinar la presencia de coliformes fecales en una

muestra de agua?

Es importante para determinar la presencia de coliformes fecales para que el agua que se
encuentre contaminada pueda ser tratada para tener una mejor calidad de agua y no afecte
la salud humana, animal y vegetal, ya que este tipo de contaminacin produce
enfermedades.

2. Porqu es fundamental realizar diluciones de la muestra de agua a analizar? Detalle

el nmero de diluciones que realiz, cmo lo hizo y porqu.

Realizamos diluciones para poder realizar un conteo de coliformes presentes en nuestra

muestra de agua residual.

Realizamos un total de 5 diluciones.

Procedimiento de la realizacin de diluciones

Colocamos 10 ml del agua residual en la probeta.

En un matraz tenamos 10 ml de agua destilada esteril.

Colocamos en los 5 tubos de ensayo estriles, 9 ml de agua destilada en cada uno.

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Tubos de ensayo con 9ml de agua destilada

EN ESTOS TUBOS DE ENSAYO CON AGUA DESTILADA REALIZAMOS NUESTRAS
DILUSIONES

En nuestro tubo de dilucin 101 le aadimos 1ml de agua residual.

De nuestro tubo de dilucin 101 cogemos 1ml y la colocamos en el tubo de dilucin 102.

De nuestro tubo de dilucin 102 cogemos 1ml y la colocamos en el tubo de dilucin 103.

De nuestro tubo de dilucin 103 cogemos 1ml y la colocamos en el tubo de dilucin 104.

De nuestro tubo de dilucin 104 cogemos 1ml y la colocamos en el tubo de dilucin 105.

Realizamos 5 diluciones porque el contenido de nuestra muestra presentaba una

coloracin caf, turbia que aparentemente presentaba contaminacin, y para poder realizar
el conteo de coliformes fecales debamos hacer un total de entre 4 a 5 diluciones, ya que
si no se realizan diluciones el conteo e coliformes se tornara complicado debido a que se
podra presentar excesiva carga microbiana.

3. Cules son los requerimientos nutricionales de las coliformes fecales?

Son coliformes que fermentan la lactosa con produccin de gas a una temperatura de 44
a 44,5C 0,2, de vida libre, y medios de cultivo como el reactivo McFarland, o cajas
petrifilm.

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4. Consulte la composicin del medio de cultivo trabajado en esta prctica?
Medio de cultivo MFC
Triptosa

10 g/l

Peptona de proteosa

5 g/l

Extracto de levadura

3 g/l

Cloruro de sodio

5 g/l

Lactosa

12,5 g/l

Sales biliales

1,5 g/l

Solucin de ac. roslico al 1%

10 ml/l

5. Compare los resultados obtenidos mediante una tabla con los grupos de clase y haga
un anlisis al respecto.

GRUPO 1

GRUPO2

GRUPO 3

Lugar de Llaves de agua de los Canal de riego del

obtencin
baos de maestros
parque
Cesqui
de
Centenario
muestras

Facultad de recursos
naturales de la rea de
microbiologa Ambiental y
Curtido de pieles.

Numero de Se realiz la dilucin de Se realiz la dilucin

dilusiones. 103
de 104

Se realiz la dilucin de
105

Numero de No
se
colonias
colonias.

Se encontr un total de
una colonia.

encontraron Se encontr un total

de 10 colonias

Realizando el cuadro comparativo hemos llegado a determinar una mayor cantidad de

coliformes fecales en el grupo 2 que se obtuvo la muestra del canal de riego del Parque Cesqui
Centenario en el cual se encontr 10 colonias formadoras de coliformes fecales, a diferencias
de los otros grupos que se encontr una menor cantidad de coliformes fecales pero que al
igual que la del grupo dos existi estas colonias formadoras por lo cual se puede llegar a
determinar que tipo de calidad tiene el agua de cada grupo por la presencia de estos
microorganismos.

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11. Anexos

ESCUELA SUPERIOR
POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE
CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS
QUIMICAS

INGENIERIA EN
BIOTECNOLOGIA
AMBIENTAL

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Se instala la bomba de vaco

donde se lleva a cabo la
siembra de las coliformes
fecales.

ESCUELA SUPERIOR
POLITECNICA DE CHIMBORAZO

ASIGNATURA DE

Fecha:27/10/2015

MIBROBIOLOGIA
AMBIENTAL

CURSO : Quinto

FACULTAD DE
CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS
QUIMICAS

ESCUELA SUPERIOR
FACULTAD DE
POLITECNICA DE CHIMBORAZO
CIENCIAS
Caja Petri invertida con los
ASIGNATURA
DE
DE CIENCIAS
resultados despus en la ESCUELA
QUIMICAS
estufa a35C por 24 h
MIBROBIOLOGIA
AMBIENTAL
Podemos identificar que las
azules
son
coliformes
Se
coloca
la membrana
fecales,
las amarillas
e coli y
celulsica
en
el
las rosas coliformeslugar
no
ASIGNATURA DE
correspondiente
de
la
fecales.
MIBROBIOLOGIA
bomba al vaco con los
AMBIENTAL
respectivos cuidados.
Una vez acabado el proceso
se coloca la membrana
celulsica en el medio MC
Farland para coliformes
fecale

PARALELO: A

INGENIERIA EN
BIOTECNOLOGIA
AMBIENTAL

INGENIERIA EN
BIOTECNOLOGIA
AMBIENTAL
Fecha:13-01-2016
CURSO : Quinto
PARALELO: A

Fecha:13-01-2016
CURSO : Quinto
PARALELO: A

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REFRENCIAS

Severo, O. (7 de Diciembre
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Biologa
Molecular.
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