Como a vida funciona?

O processo de Transcrio

Dogma central

O fluxo da informao
unidirecional
Refutao definitiva da
herana dos caracteres
adquiridos

Transcrio
O que ?: processo de cpia do DNA em RNA
Pra qu serve?
Para ativao e desativao diferencial de genes
Define o repertrio de genes ativos a cada instante, o
transcriptoma
Muda de acordo com o tecido, alimentao, estmulos
ambientais
Um entendimento fino e preciso da regulao da
transcrio gnica define a adaptao do indivduo ao
meio, diferenciao celular, embriognese, etc...

Genoma ativo no tempo

E onde fica o RNA?

feito no ncleo e depois vai pro citoplasma
Mas procarioto no tem ncleo...
Por isso se diz que sua
transcrio acoplada
com a traduo

O acoplamento
transcrio-traduo

Ateno: s em procariotos
Claro, eles no tm ncleo

Eucariotos

O RNA vai
para o
citoplasma

E pra qu serve o RNA mesmo?

Ele um intermedirio do DNA (adaptador de
Crick) para regular a produo de uma
protena
Quanto mais se precisa da protena, mais RNA
dela produzido => Regulao da transcrio

Fatores de transcrio

RNAs bem-conhecidos
mRNA
tRNA
rRNA

Micro-RNAs
Pequenos RNAs no codificadores (ncRNA) com funes ainda no muito
bem entendidas
Atuam na regulao fina da expresso gnica (interferncia de RNA)
Atuam como ribozimas

O projeto ENCODE: maior parte do DNA transcrito

Model
organisms

~32.000 genes

~18.000 genes

~26.000 genes

~22.000 genes

A primazia do mRNA
Custou a ser descoberto
Heterogneo em tamanho
Pequena quantidade

DNA-like RNA (mRNA) foi

descoberto no fago T2

Contm as instrues para a produo das

protenas que esto sendo necessrias em um
determinado momento
O estudo de bibliotecas de cDNA
(transcriptmica; genmica funcional)

O RNA maior que a protena

O gene
O que um gene?
Qual a estrutura molecular de
um gene?
Depende...
De que organismos voc est
falando?

Procariotos X Eucariotos

 Mesmo dentro
dos eucariotos,
h grande
variao
Tamanho do
gene
inclui ntros e
xons

A sequncia
promotora
ou
O promotor

O gene procarioto
Gene X Operon
Promotor

O gene eucarioto
Genes partidos no genoma
Processamento: Exons, introns

Promotores, enhancers

O RNA eucaritico

Processamento
alternativo
Fgado X Pncreas
Cncer X Normal

Fitas molde e codificadora

O molde local
Genes podem estar numa ou noutra fita do
DNA
A escolha da fita molde depende da
localizao e orientao do promotor

O estudo dos promotores

Os promotores procariticos
-35 box e o TATA box

Heterogeneidade de sequncia
Reconhecimento
pela unidade
sigma
A sequncia
exata determina
a fora do
promotor

Enhancers
Os enhancers ou acentuadores so seqncias de
DNA que aumentam a afinidade da maquinaria de
transcrio por um certo promotor. Essas seqncias
podem estar localizadas acima (upstream), abaixo
(downstream) ou dentro do gene a ser transcrito e
podem tambm estar distantes muitos milhares de
pares de base deste, e em qualquer uma das fitas.

Sntese (simultnea) do RNA

A liberao imediata permite a sntese de
muitas cpias de RNA ao mesmo tempo

A maquinaria de transcrio

RNA pol procaritica

Grande e complexa, a RNA polimerase de E. coli possui 5 tipos
de subunidades. A RNA polimerase interage com protenas
ativadoras e repressoras que modulam a taxa de expresso
gnica nas clulas
Subuni
dade

Gene

Nmero

Massa
(kg)

rpoA

36,5

Participa da iniciao, liga-se a

seqncias reguladoras

rpoB

151

Participa da iniciao e alongamento,

forma ligaes fosfodister

b'

rpoC

155

Liga-se a molde de DNA

rpoD

70

Reconhece promotor, inicia sntese

(dissociando-se logo aps)

11

Desconhecido

Papel

RNA pols de eucariotos

Tipos de Polimerases Genes transcritos
RNA polimerase I
Genes de rRNA 5.8S, 18S e 28S
RNA polimerase II
Genes de mRNAs e snoRNAs,
alguns genes de snRNAs
RNA polimerase III
Genes de tRNAs, rRNA 5S, alguns
snRNA, outros RNAs pequenos

No que
parece com a
replicao?

Sntese do RNA
A fita recm formada no permanece ligada
com a fita de DNA molde

A cadeia de RNA deslocada e a hlice se ressocia

Subunidade Sigma --
A subunidade sigma (s) da RNA
polimerase fundamental para o
reconhecimento especfico da
regio promotora. Ela,
juntamente ao cerne da enzima,
desliza ao longo do DNA
procura do promotor, no
precisando desenrolar a dupla
hlice nem ligar-se e desligar-se
a ela repetidamente.

Os fatores
de transcrio:
TFs

Fatores de
iniciao

TATA binding protein

O processo comea com a ligao de TFIID ao
TATA box ou seqncia TATA (sequncia de DNA
dupla hlice composta por nucleotdeos T e A)
A subunidade de TFIID que reconhece a
seqncia TATA no promotor denominada
TBP (TATA binding protein)

Outras sequncias promotoras

A seqncia TATA box no a nica que sinaliza o incio da
transcrio, mas a mais importante e ubiqua
A ligao de TFIID provoca uma grande distoro no DNA da
TATA box (localizao de um promotor)

Complexo de
iniciao da transcrio

Alongamento
da transcrio e
Processamento

Terminao da transcrio
Mecanismo pouco conhecido: pares de nucleotideos
A-T precedida por uma seqncia de DNA
duplamente simtrica

O processo de edio do mRNA

Capping, Poliadenilao e Splicing

O processamento
do RNA eucaritico
CAP5: guanina modificada
identifica o mRNA
Cauda poli-A 3 protege
regio codificadora (cds)

Cauda Poli-A
200-300bp de
adeninas na
extremidade 3
Sinal AAUAAA
Complexo de
poliadenilao
Garante que o
gene ser
traduzido com
toda informao

Fatores de poliadenilao
Ambos movimentam-se com a
cauda de RNA polimerase e so
transferidos extremidade 3
CPSF esto associadas TFIID
CPSF

CstF

CstF (fator de estimulao

clivagem)
CPSF (fator especfico de
clivagem e polialinao)

1. O RNA clivado
2.

A enzima poli-A
polimerase adiciona
Adenina

3. Protenas de
ligao poli-A
renem-se sobre
a cauda.

Conservao da estrutura exnica

Frequentemente conservada

 Pr-mRNA
RNAm maduro

Splicing, sequncias conservadas

Stio doador de Splicing
Stio aceptor de splicing

Spliceossomo
Complexo ribonucleoprotico
que realiza o splicing

 Protenas diferentes
reconhecem ntrons e
xons

Splicing alternativo

Transporte para o citosol

Transporte seletivo de mRNAs

O transporte seletivo est associado ao
processamento correto do RNA
O complexo do poro nuclear reconhece e
transporta apenas mRNAs completos
Na sua sntese, o RNA se liga a uma srie de
protenas:
Complexo de ligao capa
Protenas de splicing (SR)
Protenas de ligao cauda poli-A

Transporte seletivo de mRNAs

Controle da expresso gnica

Procariotos X Eucariotos

Concluso
A transcrio um processo de produo de
RNA que define quais genes esto ativos na
clula a cada instante
O processo precisamente regulado
Abertura do DNA, histonas
Scanneamento do DNA pela RNA pol + sigma
Produo e processamento do RNA
Exportao do RNA