PRACTICA # 5

TINCION GRAM
Laboratorio de Biologa
Licenciatura Medicina
Elaborada por: Dra. Jess Adriana Soto Guzmn
OBJETIVOS
- Aprender a desarrollar la tincin Gram
- Identificara bacterias gram negativas y gram positivas
INTRODUCCION
La tincin gram es un tipo de tincin diferencial que permite
identificar bacterias positivas y bacterias gram negativas. Esta tcnica
fue desarrollada por el bacterilogo Dans Christian Gram en 1884 y
actualmente es muy utilizada en el rea de bacteriologa para analizar
muestras clnicas.
Los reactivos utilizados en esta tcnica son: cristal-violeta,
solucin de yodo, Alcohol-acetona (decolorante) y safranina. Al final las
bacterias gram positivas se observarn azul o morado y las gram
negativas en rojo o rosa esta diferencia radica en la composicin de su
estructura qumica.
Las bacterias gram negativas poseen una membrana plasmtica
que esta cubierta por una pared de peptidoglicano llamada tambin
mureina (heteropolimeros de carbohidratos y pptidos) ya que esta
estructura es rica en en acido N-muramico (Figura 1). La membrana y
la pared de peptidoglicano estn unidas mediante molculas de acido
lipoteitoico que interacciona covalentemente con el peptidoglicano
atravs de un enlace fosfodiester. A su vez la pared de peptidoglicano
esta rodeada por una segunda membrana lipdica (Figura 2). En el caso
de las bacterias gram positivas no poseen la segunda capa de
membrana lipdica.

Figura 1
Figura 2

La primera etapa de la tincin Gram consiste en aadir el

colorante cristal violeta (colorante catinico) que interacciona con
ambos tipos de bacterias (gram postivas y gram negativas). Despus
se aade una solucin de yodo (mordiente) que formara un complejo
con el cristal violeta previamente aadido.
Posteriormente, se aplica una solucin de alcohol-acetona que
tiene la funcin de solubilizar al complejo y a su vez disolver los lpidos
de las membranas. En el caso de las bacterias gram negativas la
membrana lipdica constituye la capa ms externa y por lo tanto ser
disuelta en esta etapa y se perder el complejo formado. En el caso de
las bacterias gram positivas el complejo cristal-violeta interacciona
fuertemente con la capa de peptidoglicano y gracias a la accin de la
solucin alcohol-acetona los poros se retraen, la permeabilidad se
reduce y como consecuencia el complejo quedara atrapado.
La ltima etapa consiste en adicionar el colorante safranina que
interaccionara con las bacterias gram negativas pero no con las gram
positivas. Este colorante les confiere el color rojo o rosa a las bacterias
gram negativas y el cristal violeta confiere el color azul o morado a las
gram positivas.

MATERIALES:

Portaobjetos

Cubreobjetos

Frasco lavador

Mechero de bunsen

Hisopos estriles

METODOLOGIA:
1. Sobre un portaobjetos de vidrio se coloca el material que se va a
teir
2. El portaobjetos se pasa varias veces por la zona azul de la llama de
un mechero de Bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que
moleste al tacto pero no queme.
3. Cubrir la extensin con cristal violeta y dejar actuar durante un
minuto.
4. Lavar con agua corriente, cuidando que no se arrastre la
preparacin y
sacudir para eliminar el exceso de agua.
5. Cubrir la extensin con solucin de lugol y dejar actuar por un
minuto.
6. Lavar con agua corriente.
7. Decolorar con alcohol al 95 96%, aproximadamente 10 segundos.
9. Lavar con agua corriente.
8. Cubrir la extensin con Safranina y dejar actuar por 1 minuto.
9. Lavar con agua corriente.
10. Secar la preparacin al aire o colocndola entre papel absorbente.
11. Observar al microscopio
RESULTADOS
1. Dibuje las estructuras que observo en el microscopio

Aumento Total ____________

Aumento Total ____________

Observaciones:________________________________________________________
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CUESTIONARIO
a) Explique el fundamento de la tincin gram
b) Escribe el nombre cientfico de 5 bacterias gram positivas y 5 gram
negativas
BIBLIOGRAFA
Fischer Teresa. Indian River State College: Microbiology. Disponible en:
http://faculty.ircc.edu/faculty/tfischer/Default.htm [con acceso el 11 de
Noviembre del 2008]
Jorge S. Raisman. La pared bacteriana. Disponible desde Internet
http://fai.unne.edu.ar/biologia/bacterias/micro4.htm#gram_positiva
[con acceso el 11 de Noviembre del 2008]
Mathews, Christopher. Bioqumica: El campo de la bioqumica. 3ra
edicin, ed. Pearson Addison Wesley. 2006.1335p
Sciencenet Multimedia Publishing House. Gram positive bacteria.
Disponible
desde
internet
en

<http://www.microbionet.com.au/grampositivebacteria.htm>
acceso el 11 de Noviembre del 2008]

Modificado de: Mtra. Ana Lourdes Mata Pineda

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