INSTITUDO FEDERAL DE EDUCAO, CINCIAS E TECNOLOGIA

DE MATO GROSSO
CAMPUS SO VICENTE NCLEO AVANADO DE CAMPO VERDE
CURSO DE AGRONOMIA

LVARO RICARDO LOPATIUK

EDER BERTOLLO
EDILSON RUFINO DE SOUZA
ELBER SANTOS OLIVEIRA

ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS

CAMPO VERDE
2016

LVARO RICARDO LOPATIUK

EDER BERTOLLO
EDILSON RUFINO DE SOUZA
ELBER SANTOS OLIVEIRA

ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS

Trabalho sobre organismos geneticamente

modificados, apresentado a disciplina de
Gentica na Agropecuria, orientado pelo
professor Alex Caetano Pimenta, como
avaliao parcial do semestre.

CAMPO VERDE
2016

Sumrio

Introduo
ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS OGMs
IDENTIFICAO, CLONAGEM E ISOLAMENTO DOS GENES
Transformao indireta
Transformao via Agrobacterium tumefasciens
Transformao direta
Biobalstica
Eletroporao
Microinjeo
Transformao de plen
Lipossomos
VANTAGENS E DESVANTAGENS DO USO DE OGMs
Vantagens
Desvantagens
Concluso
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

Introduo

Principalmente na agricultura, desde seus primrdios, o homem vem

buscando melhorias nos cultivares em relao a seus genitores atravs de
cruzamentos especficos. Porm as tcnicas de melhoramento convencional so

limitadas devido a diferena sexual, ligao gnica e tempo de seleo para a

obteno do caractere desejado. O estudo e desenvolvimento de tcnicas de
transformao gerou um enorme progresso, pois possibilitou vislumbrar a interao
de genes de origem vegetal, animal e de microrganismos.
Nos anos cinquenta, o bilogo norte americano James Watson e o biofsico
britnico Francis Crick apresentaram o modelo de dupla hlice a fim de explicar a
estrutura molecular do DNA. A partir da a gentica obteve grandes avanos,
contando com a colaborao de cientistas do mundo todo, dando origem ao campo
da gentica molecular. Na dcada seguinte o cdigo gentico foi desvendado, bem
como a precisa combinao entre as sequencias de nucleotdeos existentes nos
genes e as sequencias de aminocidos nas protenas por eles codificados.
Na dcada de setenta o desenvolvimento de ferramentas especificas
permitiram a manipulao do DNA e a metodologia do DNA recombinante, como as
enzimas de restrio que so responsveis por reconhecer determinadas
sequencias de DNA e segmentar a dupla hlice, e a DNA ligase, que como o nome
sugere empregada para unir dois pedaos de DNA.
Tais ferramentas viabilizaram os primeiros ensaios de transferncia controlada
de genes de um organismo para outro por meio no sexual. Atravs desses
processos

surgiram

os

organismos

geneticamente

modificados,

alm

dos

transgnicos, junto com eles os marcadores moleculares, muito utilizados em

trabalhos de melhoramento gentico e para identificar e caracterizar indivduos a
nvel molecular.

ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS OGMs

Apesar de geralmente serem indicados como similares, organismos

geneticamente modificados no so necessariamente transgnicos, porm todo

transgnico um OGM. Transgnicos referem-se a organismos que receberam

parte de material gentico de outra espcie, ou seja foi submetido a tcnicas de
laboratrio especificas que inseriram trechos de DNA de outra espcie em seu
genoma. J os organismos geneticamente modificados, apesar de terem sofrido
alteraes artificiais em seu DNA como na estrutura ou na funo do prprio material
gentico, no receberem material gentico de outros organismos.
Assim todo organismo transgnico um OGM, j que sofreu alteraes
genticas artificiais. Porm um OGM s se torna um transgnico se houver recebido
uma informao gentica de uma outra espcie nesse processo de manipulao.
Em sntese, organismos geneticamente modificados so definidos como toda
entidade biolgica cujo material gentico foi alterado por meio de qualquer tcnica
de engenharia gentica, de uma maneira que no ocorreria naturalmente, afim de
obter caractersticas singulares do original.
A produo de organismo transgnico, ou OGM, fundamentada dos fatos de
serem vivos apresentarem os mesmos tipos d molculas informacionais (DNA e
RNA), que so constitudas das mesmas unidades bsicas, os nucleotdeos. Alm
disso, a linguagem utilizada para a expresso da informao gentica, o cdigo
gentico, essencialmente universal. Com base nesses princpios, possvel
transferir genes entre organismos da mesma espcie, entre espcies diferentes e,
at mesmo, entre reinos diferentes. Uma vez integrado ao genoma do OGM, o gene,
ou transgene, indistinguvel dos genes normalmente presentes nos seus
cromossomos. (VIANA et al., 2003).
O processo gerar um organismo geneticamente modificado bastante
complexo, por isso dividido em algumas etapas. Segundo CRUZ et al., 2003, elas
so cinco;

Isolamento e caracterizao de um transgene de interesse que codifique a

protena que se deseja expressar no OGM;

Ligao dos promotores, sequencias regulatrias e terminador, adequados e

compatveis com o sistema onde se deseja expressar o gene;

Ligao do transgene a um vetor de transformao (plasmdeo, cromossomo

artificial, genoma de um vrus, etc;

Transformao de clulas do organismo de interesse, e;
Seleo das clulas transformadas e regenerao do organismo transgnico.

A realizao dessas etapas, geralmente demanda um longo perodo de tempo,

anos at, ainda mais especificamente se o gene desejado ainda no estiver
disponvel. A engenharia gentica atual trabalha essencialmente com genes que
determinam caracteres qualitativos, ou seja aqueles governados por um ou poucos
genes, denominados tambm de variveis discretas por apresentar classes
fenotpicas facilmente separveis umas das outras, podendo ser associados a um ou
poucos gentipos. No entanto, tambm possvel a modificao de genes de maior
efeito, os quais alteram caractersticas quantitativas, tambm conhecidos como
polignicos so aqueles que governados por mltiplos genes, sendo que cada gene
apresenta segregao conforme as Leis de Mendel, e estes esto ligados a
produtividade ou adaptabilidade.
Um dos primeiros genes a ser clonado e manipulado foi o que codifica o
hormnio insulina em humanos. Esse gene foi transferido para a bactria E. Coli,
que passou a produzir insulina com a mesma estrutura primaria (sequncia de
aminocidos) daquela sintetizada por humanos. Apesar disso, a insulina produzida
por E. Coli no funcional, uma vez que procariontes no possuem as enzimas e
compartimentos celulares necessrios ao seu processamento, apara que ela adquira
sua estrutura terciaria (tridimensional) funcional. Por esse motivo, atualmente muitos
pesquisadores preferem expressar protenas de eucariontes em fungos, que
tambm so eucariontes e possuem a maquinaria enzimtica necessria a eventuais
processamentos e tambm um sistema de secreo eficiente, o que facilita a
recuperao da protena no meio extracelular. (VIANA et al., 2003).
Todo o processo de engenharia envolvido na manipulao do transgene se faz
necessrio pois embora o cdigo gentico seja formado por bases de maneira
universal, cada grupo de indivduos expressa esses genes e suas caractersticas de
forma particular. Alm disso deve-se observar aspectos como tempo e espao, por
que esses genes podem configurar diferentes combinaes nas diversas fases do
desenvolvimento do organismo.
A associao de um transgene a um intermedirio, facilita sua manipulao e
pode promover a sua integrao no genoma hospedeiro. Para a transformao de
bactrias normal a introduo do gene de interesse em um plasmdeo. Plasmdeos
so um tipo de molcula de DNA extra cromossmica, geralmente circular que

assume uma origem de replicao para sua manuteno na clula hospedeira,

podendo ser uma marca de seleo, normalmente um gene de resistncia a um
antibitico, e stios nicos de corte por enzimas de restrio, facilitando assim a
insero do gene de interesse. Para introduzir o plasmdeo na bactria necessrio
torna-la apta a receb-lo, e mesmo esse plasmdeo no se integrando ao DNA
cromossmico bacteriano, o transgene pode se expressar normalmente.
Em vegetais, existem vrios modos de obteno de clulas transformadas. Num
deles o transgene inserido em uma regio denominada T-DNA, presente em um
plasmdeo modificado retirado de uma bactria, Agrobacterium tumefasciens, a qual
naturalmente infecta determinados tipos de plantas, provocando o aparecimento de
tumores. As extremidades do T-DNA contm uma pequena regio repetida, de
aproximadamente 25 pares de bases, que facilita a mobilizao do T-DNA e a sua
insero no genoma da planta hospedeira, quando ela infectada pela bactria.
Alternativamente, a regio do T-DNA pode ser transferida para dentro da clula
vegetal por eletropolao. (VIANA et al., 2003).
Outra tcnica de transferncia do transgene para o interior da clula a
biobalstica. Nesse mtodo o DNA mergulhado em uma soluo misturada a
metais pesados como tungstnio ou ouro e lanado diretamente sobre a superfcie
celular sob alta presso. Dessa forma as partculas atravessam a membrana
plasmtica e o involucro nuclear, e possivelmente vindo a se integrar ao genoma por
recombinao. Os dois mtodos citados acima exigem um grande nmero de
repeties para se obter sucesso devido baixa taxa de efetividade das
transformaes.
No mbito comercial, uma das primeiras cultivares transgnicas a serem
exploradas foi a soja tolerante ao herbicida glifosato. Este herbicida derivado de
uma enzima catalizadora de importantes reaes no interior dos cloroplastos, e
fazem parte da via metablica que leva a sntese de aminocidos precursores de
compostos indispensveis ao desenvolvimento e a vida da planta. Portanto o
glifosato muito utilizado para o combate de plantas daninhas e consequentemente
mata a soja convencional. J a soja transgnica, modificada utilizando um gene da
Agrobacterium tumefasciens adquire uma certa afinidade a molcula do glifosato
tornando a planta menos sensvel ao herbicida. Portanto a soja transgnica pode

suportar concentraes relativamente grandes de glifosato, logo o herbicida pode

ser aplicado em ps emergncia, quando as plantas de soja j esto bem
desenvolvidas e as plantas daninhas tambm, o que torna a eficincia do herbicida
muito maior.

IDENTIFICAO, CLONAGEM E ISOLAMENTO DOS GENES

A transformao do gene pode ser dividida em algumas etapas, tendo por

incio a identificao do gene de interesse, seu isolamento e replicao, introduo
em novas clulas ou tecidos, seleo in vitro das clulas transformadas,
regenerao do organismo transgnicos, anlises moleculares e avaliao em casa
de vegetao e campo, no caso de vegetais, os quais so nosso alvo de interesse
no presente trabalho.
Embora a manipulao do DNA abra diversas frentes para o melhoramento,
vrios fatores podem afetar o sucesso da obteno de plantas transformadas, como
a integrao do DNA no genoma hospedeiro, a expresso, a herana e a
estabilidade desse DNA exgeno, problemas e regenerao do explante,
disponibilidade de genes de interesse e aspectos relacionados a biossegurana.
(BRASILEIRO, 1999).
Existem diversos mtodos de transformao, porm, a escolha depende da
espcie a ser transformada, do tipo do explante utilizado, ou seja, clulas, tecidos ou
protoplastos, da capacidade de regenerao desse explante e da disponibilidade de
materiais.
A identificao e localizao de genes de interesse na agricultura um dos
principais obstculos para a obteno de transgnicos. Estudos de sequenciamento
de genoma de diversas espcies vegetais, animas e microrganismos tem sido
desenvolvido em todo o mundo afim de identific-los. Porm ainda insignificante o
aprendizado sobre esses genes relacionado ao aumento de produtividade,
resistncia a estresses biticos e abiticos, qualidade nutricional e outras
caractersticas de interesse econmico ou no.

Na primeira etapa que precede a clonagem (amplificao de bactrias e

vetores), necessria uma srie de modificaes do gene antes que seja utilizado
por um mtodo de transformao. Nesse processo, empregam-se tcnicas de
engenharia gentica, mas quais enzimas de restrio e DNA ligases so
amplamente empregadas como ferramentas para manipular o DNA. Essas enzimas
so capazes de cortar o DNA de diferentes origens e, por meio de unio dos
fragmentos resultantes gerar molculas novas, denominadas de DNA recombinante.
Existe uma especificade das enzimas de restrio, pois o DNA sempre cortado em
locais precisos (em determinada sequncia de bases), e reconhece o sitio de corte
de DNA em qualquer espcie, tanto vrus, quanto plantas ou animais. (BRASILEIRO,
1999). A seguir veremos alguns dos principais mtodos de transformao.

Transformao indireta

A transformao indireta consiste no uso de um vetor, como a bactria

Agrobacterium tumefasciens, para intermediar a transferncia de DNA.

Transformao via Agrobacterium tumefasciens

[ PARTE QUE FALTA]

Transformao direta
Consiste no uso de mtodos fsicos e qumicos, atualmente os dois principais
so a biobalstica e a eletroporao.
Biobalstica

Tcnica da biobalstica (biologia + balstica), em razo da alta velocidade

imprimida aos microscpicos projeteis revestidos com DNA. Essa tcnica consiste
no uso de partculas diminutas de tungstnio ou ouro, que so revestidas com o
DNA a ser transferido. As partculas podem ser aceleradas por ar comprimido (hlio),
onda de choque eltrico, plvora, entre outros, com fora suficiente para penetrarem
na camada exterior da parede das clulas de um tecido alvo, com isso, uma
quantidade de DNA presente nas partculas ser transferido ao ncleo das clulas
do tecido utilizado, o qual passar a incorporar o novo DNA.

Eletroporao
Consiste na induo de poros na membrana celular de protoplastos por meio
de pulsos eltricos de alta voltagem, permitindo a entrada do vetor de transformao
contendo o gene de interesse para o interior da clula, como so reversveis, ou
seja, fecham-se novamente depois de terminada a aplicao do pulso eltrico, os
protoplastos podem regenerar-se em novas plantas transformadas.

Microinjeo
Foi desenvolvida principalmente para transformao genica em animais e
posteriormente adaptada para plantas, consiste na microinjeo de DNA direto no
ncleo de protoplastos ou em inflorescncias, mesmo sendo uma tcnica trabalhosa,
ela apresenta resultados comprovadamente positivos. So utilizados tubos micro
capilares para se fazer a introduo do DNA nas clulas sem afetar a sua
viabilidade. Cada clula tem de ser manipulada individualmente. J foram
alcanados resultados positivos em milho, trigo, soja, fumo, arroz, cevada, girassol e
outros.

Transformao de plen
Por esse mtodo o plen maduro embebido em soluo com DNA e efetuase a polinizao das flores femininas das plantas. Detectam-se os transformantes
logo na fase inicial da plntula mediante o emprego de um gene marcador. Porm,

um mtodo de baixa eficincia, difcil de reproduzir e necessita mais estudos para

aumentar a eficincia.

Lipossomos
Esse mtodo baseia-se na utilizao de vesculas lipdicas artificiais como
veculos para introduo de partculas ou matria exgeno dentro de protoplastos. A
vescula visa proteger o DNA que se encarrega do ataque de endonucleases. O
mtodo requer a digesto da parece celular e incubao desses protoplastos com
lipossomos na presena de agentes fusognicos como o PEG ou o PVA com
lavagem subsequente em elevado pH saturado com ons de clcio.
Embora parece haver maior dificuldade de incorporao de molculas
maiores, o mtodo pode ser empregado para encapsular e introduzir plasmdeos e
DNA recombinante em RNA viral em protoplastos. No entanto apresenta baixa
eficincia de transformao estvel.

VANTAGENS E DESVANTAGENS DO USO DE OGMs

Vantagens
Tolerncia a herbicidas e aumento da produtividade
As plantas podem ser modificadas de modo a que no seu DNA haja um gene
que lhe confira resistncia a produtos qumicos como os pesticidas e os inseticidas.
Com isto os agricultores podem utilizar a quantidade de qumicos que desejarem
contra pragas e o produto final no ser afetado, aumentando assim a quantidade da
produo no final de cada safra.
Tolerncia a insetos e reduo do uso de qumicos
As culturas transgnicas podem ser munidas de genes que lhes confiram
resistncia s suas pragas naturais, produzindo toxinas que matam essas pragas.
Assim, desnecessrio o uso de qumicos como por exemplo os pesticidas na

agricultura, uma vez que a prpria planta se protege, contribuindo para a reduo do
impacto e poluio ambiental.
Reduo de uso de fertilizantes
Algumas frutas e leguminosas so munidos de genes capazes de os fazer
aumentar de tamanho naturalmente sem utilizao de produtos qumicos ou
fertilizantes, alm da maior produo total.
Melhoria da qualidade dos Alimentos
A tecnologia usada nos transgnicos permite-nos melhorar e corrigir os mais
variados alimentos, de modo a produzirmos novos alimentos com as caractersticas
desejadas. Podem ser obtidos alimentos com maior teor em certos nutrientes,
alimentos com vitaminas que naturalmente no conseguiriam produzir e reduzir a
sntese de algumas protenas, para que deste modo os alimentos durem mais
tempo.
Produo de compostos com interesse econmico
A inovao da biotecnologia a este nvel de tal forma grandiosa, que
possvel produzir variados tipos de organismos que nos possibilitem uma vida mais
fcil. possvel criar vacinas comestveis, modificar o material gentico das vacas
para produzirem mais leite e criar peixes coloridos.
Clonagem
Atravs da tcnica de DNA recombinante possvel introduzir nas bactrias
genes com determinadas funes. As bactrias ao reproduzirem-se formam
descendentes exatamente iguais entre si, como se fosse um clone, assim fazem
cpias desse gene.
Produo de medicamentos
Tal como na clonagem, atravs de tcnicas de DNA recombinante possvel
fazer com que as bactrias passem a produzir determinadas substncias atravs da
insero de genes de interesse benficas para a sade, e assim produzir
medicamentos com base nessas substncias produzidas.

Acabar com a fome mundial

Os transgnicos ao permitirem um maior aproveitamento de culturas e
principalmente a concepo de alimentos mais ricos em nutrientes e vitaminas, so
vistos como uma esperana para os pases de terceiro mundo.
Desvantagens
Poluio do Ambiente
O uso no controlado de herbicidas e pesticidas, gerando consequncias
altamente nocivas sobre o ambiente, tendo assim um impacto direto sobre os solos,
uma vez que os qumicos utilizados se infiltram na terra, contaminando-a, e um
impacto indireto sobre as guas subterrneas, os rios e mesmo sobre a atmosfera,
uma vez que os qumicos presentes no solo chegaram aos lenis freticos e aos
rios.
Reduo da biodiversidade
A existncia de plantas resistentes a produtos qumicos provoca uma reduo
dos predadores naturais dessa planta, afetando assim os nveis seguintes da cadeia
alimentar.
Poluio gentica
No possvel separar culturas convencionais das transgnicas, pois os
gros de plen percorrem distncias na ordem dos 180 Km por dia, sendo possvel
haver uma disseminao dos gros de plen das plantas transgnicas para as
plantas naturais, podendo converter todas as plantas atingidas em plantas com as
mesmas caractersticas das transgnicas, alterando assim tambm a biodiversidade.
Aumento das alergias
H possibilidade de desenvolvimento de alergias a produtos transgnicos. A
criao de protenas sintetizadas pelos novos genes nos transgnicos pode ter um
potencial alrgico ao nosso organismo e so postos venda nos supermercados
muitos produtos com substncias transgnicas cujo potencial alrgico ainda no foi
testado.

Perigo para os agricultores

A existncia de culturas transgnicas pode prejudicar aqueles agricultores que
no as utilizam.
Aparecimento de novas doenas
Os transgnicos munidos de genes que lhe conferem resistncia a algumas
bactrias podem provocar um fortalecimento dessas bactrias contra as quais
atuam. As bactrias que sobrevivem resistncia das plantas transgnicas, por um
processo de seleo natural, vo se reproduzindo, criando novas colnias de
bactrias que no so afetadas por aquelas plantas transgnicas, desenvolvendo-se
assim um novo tipo de bactrias e surgindo novas doenas nas plantas.
Perigo para a sade pblica
O excesso de produtos qumicos que advm da utilizao de organismos
geneticamente modificados na agricultura, no tem apenas um impacto negativo no
ambiente, mas tambm um risco para sade pblica. Se considerarmos que os
alimentos provenientes de campos transgnicos so excessivamente irrigados com
pesticidas e herbicidas, esses mesmos produtos qumicos vo chegar a nossa
mesa, mesmo em grande quantidade.
Resistncia a antibiticos
O mesmo ocorrido com as plantas. O resultado ser ento a ineficincia
desse antibitico numa possvel infeco provocada por uma bactria, ou seja,
quando necessitarmos desse antibitico, seremos resistentes a este, e assim, no
nos far efeito, com isso, podem multiplicar o nmero de problemas de sade que
envolvem bactrias imunes e dificultar o tratamento de doenas.
Insegurana na utilizao dos transgnicos
Os estudos feitos aos organismos geneticamente modificados so de curta
durao e superficiais, no sendo possvel avaliar com segurana os danos
provocados por a introduo de transgnicos no ambiente.
Falta de informao

Existe uma falta de informao relativa aos organismos geneticamente

modificados, sendo que grande parte da populao no est informada acerca da
sua concepo e em geral nem sequer sabem do que se trata um transgnico. Alm
disto, mesmo a parte da populao que tem conhecimento do assunto e dos
possveis impactos no tem uma informao evidente das quantidades de produtos
ingeridos.

Concluso
O estudo de novos mtodos de transformao gentica abre caminho para o
melhoramento de organismos, especialmente de plantas, uma vez que corroboram
para a reduo drstica no tempo de obteno de variedades com novas
caractersticas, bem como a transferncia desses atributos de interesse entre
espcies que podem no ser sexualmente compatveis. Ou seja, as barreiras
naturais entre as espcies eliminadas, o que oferece alternativas a se obter novas
cultivares transgnicas. Para tanto, torna possvel os mtodos da biologia molecular
moderna, isolar e modificar genes especficos, o que no acontece geralmente na
natureza e pelos meios de melhoramento clssico.
Quanto a polemica entorno dos transgnicos, ainda temos vrios pases que
restringem de forma severa seu consumo, outros, porm so mais abertos a sua
produo e consumo. Grande parte dessa discusso justificada no s pelos fortes
e conflitantes interesses econmicos e comerciais, mas tambm pela ignorncia,
pelo receio do desconhecido e pelo sensacionalismo dos meios de comunicao.
Apesar disso, no podemos deixar de investir em uma metodologia que pode
trazes grandes benefcios a humanidade, alm da produo agrcola em grande
escala e superior qualidade gerada atravs dos OGMs, temos uma infinidade de
outros produtos que podem trazer de forma simplificada uma estabilidade econmica
e social a todo o planeta.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BRASILEIRO, A. C. M.
Braslia, DF, v. 20 1993.

Biologia de Agrobacterium sp. ABCP Notcias,

CRUZ, C. D.; BARROS, E. G.; VIANA, J. M. S. Gentica vol 1

fundamentos. 2 ed. Viosa: UFV, 2003. 314p.
VIANA, J. M. S. Gentica vol 1 fundamentos. 2 ed. Viosa: UFV, 2012.
330p.