Facultad de Ciencia, Tecnologa y Ambiente

Departamento de Ciencias Bsicas

Coordinacin de Ciencias Naturales

Prctica de laboratorio No. 7

Aplicacin de la Cromatografia en Capa Fina (CCF)
Objetivo General

Conocer la tcnica de cromatografa en capa fina, sus caractersticas y los

factores que en ella intervienen.

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Objetivos especficos

Calcular valores de RF de varias sustancias y correlacionarlo a la seleccin

adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de las
sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
Aplicar la tcnica de CCF como criterio de pureza e identificacin de sustancias.

Introduccin
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos
por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase
mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las
dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o columna), liquido-liquido y
gases-liquido (fase vapor). Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la
distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase
mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que
progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser
un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido.
Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor
grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden
ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva
es el principio fundamental de la cromatografa.
En este laboratorio se trabajar con Cromatografa en Capa Fina. En este tipo de
cromatografa se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente asciende, por capilaridad,
por la placa y arrastra los componentes a lo largo de sta produciendo manchas de los
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componentes. Se usan lminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plstico (Ej:
acetato) metlicos (Ej: aluminio). Los tamaos de la placa para CCf convencional son:
20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2.
Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin
de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirn
tcnicas de revelado.
El parmetro que mide el registro o desplazamiento de la muestra en una placa es R f.
Este se define como:
Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin / distancia que
recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.
El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de
adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr
duplicados de la misma placa.
Otros factores que afectan la Cromatografa en Capa Fina son:
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse
corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar
completamente antes de aplicar la muestra.
d) Pureza de los disolventes.
Materiales

Sustancias y Reactivos

Experimento 1:

Polaridad de las Sustancias

Es un experimento comparativo en el que se desea saber cul sustancia es ms polar y

cul menos polar. Para ello se le proporcionar a usted las soluciones 1 y 2. Prepare 3
cromatoplacas (Nota 1) y aplique estas soluciones en cada una de ellas (Nota 2), de tal
manera que queden como se indica en la siguiente figura:

Eluya la primera cromatoplaca con hexano, la segunda con acetato de etilo y la

tercera con MeOH.
En cada caso, una vez que se ha eludo cada placa, sacar de la cmara de elucin
y dejar evaporar el eluyente para posteriormente revelar con luz ultravioleta y
posteriormente con yodo, observe y anote sus resultados (Nota 3), luego revele
con yodo, observe nuevamente (Nota 4).
Con base en los resultados obtenidos, conteste:
a) Cul es el eluyente adecuado? Por qu?
b) Cul es la sustancia ms polar (solucin 1 2)? Por qu?
c) Cul es la sustancia menos polar (solucin 1 2)? Por qu?

Experimento 2:

Se desea saber cul sustancia es pura y cul es impura. Para ello se le

proporcionar a usted las soluciones 3 y 4.
Prepare una cromatoplaca y aplique en ella ambas soluciones por separado,
como en el experimento anterior. Eluya entonces con acetato de etilo. Revele
con luz UV y posteriormente con yodo. Anote sus observaciones. Conteste:
Cul es la sustancia pura (Solucin 3 4)?, Cul es la impura?, Cul es el Rf
de cada componente?

Experimento 3:

Pureza de las Sustancias

Influencia de la Concentracin

Se desea saber cul es el efecto de la concentracin de una sustancia en CCF

Para ello se le proporcionar a usted la solucin 5.
Prepare una cromatoplaca y en ella haga 3 aplicaciones de esta solucin en
orden creciente de concentracin como se indica en la siguiente figura:

Eluya entonces con acetato de etilo. Revele con luz UV y posteriormente con
yodo. En cada caso observe la intensidad de la coloracin de las manchas.
Cul es la relacin que existe entre la intensidad de la coloracin de las
manchas y la concentracin de la sustancia, en cada caso?

Cuestionario
1.
2.

En el Experimento 1, Cul de las dos sustancias, la ms polar o la menos polar,

recorre mayor distancia en la placa a partir del punto de aplicacin? Porqu?
En ese mismo experimento, calcular los valores Rf y contestar Cul de las dos
sustancias tiene Rf mayor y Cul menor?
Frasco de elucin Revelado con luz UV
Placa
Papel filtro
Punto de aplicacin
Disolvente
Frente del eluyente

3.

Qu significa que una sustancia tenga:

a) Rf < 0.5 ?
b) Rf = 0.5 ?
c) Rf > 0.5 ?

4.

En el Experimento 4, cul de las dos formas de elucin permiti mayor

separacin de la mezcla?, A qu se debe esto?

5.

Porqu la CCF es un criterio parcial y no total de identificacin?

6.

Cul ser el resultado de los siguientes errores en cromatografa en capa fina?

a) Aplicacin de solucin muy concentrada.
b) Utilizar eluyente de alta polaridad.
c) Emplear gran cantidad de eluyente en la cmara de cromatografa.

7.

Una serie de colorantes es separada por cromatografa en capa fina. Calcular los
valores de Rf de cada colorante de acuerdo a la siguiente tabla.
Colorantes Distancia Recorrida (mm)

Eluyente 66.0

Rojo de metilo 56.0

Rodamina B 38.0
Rojo Congo 0.5