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PROTOCOLO
1) OBTENCIN DE PELLETS BACTERIANOS
A partir de 1 Cultivo ON de Sm K279a en TSB (sembrar lo ms tarde posible)
inocular: 100 ul en 5 ml de TSB en tubos que entren en el Espectrofot. temprano
por la maana. En 4h-5h llega a DO 0.3. Fase exponencial!!
Pasar 1.5 ml de cultivo (con pipeta descartable estril) a 1 tubo de centrfuga,
centrifugar durante 3 min y descartar el sobrenadante. (En estos eppendorf de 1.5ml
qued retenido sobrenadante junto al pellet y no fue removido con tip)
Resuspender el pellet (RNA) con 1 ml de etanol 75% FRIO, mezclar bien con
VORTEX y llevar a -20C durante 24hs.
Para 10 ml de etanol 75%: 7.81 ml de ol 96 + 2.19 ml MQ
C1V1 = C2V2
para llegar a 75 sera:
(96*)(1 L) = (75)(V2)
V2 = 1.28 Litros
Es decir, faltan 0.28 L de agua (280 mililitros) para completar 1.28 litros de
alcohol al 75
* si es absoluto, recalcular
DETERMINACIN
DE
CONCENTRACIN:
(A230,
A260,
A280)
usando