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CARACTERSTICAS

PARA LA
IDENTIFICACIN
MICROBIANA

Se entiende por identificacin microbiana al conjunto


de tcnicas y procedimientos que se aplican para
establecer la identidad de un organismo.
.

Estas tcnicas se utilizan en diferentes


reas:
En el rea clnica es importante conocer cual es el agente causal de la
infeccin que presenta un enfermo para poder tratarlo.
Investigacin bsica donde se aisla un determinado organismo que debe
identificarse para comprobar si se trata de un organismo conocido o de
uno nuevo para poder clasificarlo.
En la industria de alimentos, donde las normas de control de calidad exige
que la fabricacin de estos alimentos debe realizarse en reas controladas
con ausencia de ciertos organismos, los alimentos son sometidos a una
serie de controles microbiolgicos para asegurar la ausencia de
organismos que puedan causar infecciones y/o descartar la presencia de
toxinas capaces de causar intoxicaciones alimentarias.

Los mtodo ms utilizados para la identificacin microbiana se


clasifican en:

Mtodos basados en criterios morfolgicos.


Mtodos basados en tincin diferencial.
Mtodos basados en pruebas bioqumicas.
Mtodos basados en pruebas serolgicas.
Mtodos basados en deteccin molecular.

No todos los organismos se identifican por las mismas tcnicas, ni con base a
un solo mtodo, sino a la combinacin de uno o ms.

MTODOS BASADOS EN CRITERIOS MORFOLGICOS.

Los rasgos morfolgicos (estructurales) han ayudado a los taxonomistas a


clasificar organismos.

Bajo el microscopio pueden ser tan parecidos dificultndose su clasificacin,

an cuando la morfologa celular dice poco sobre las relaciones filogenticas,


sigue siendo til para la identificacin bacteriana.

Caractersticas macroscpicas, en funcin del tamao, altura de la colonia,


forma, color, olor, textura y grado de adherencia al medio de cultivo.

Por ejemplo: la presencia de endosporas y su localizacin resulta de mucha


utilidad para la identificacin de bacilos esporulados.

MTODOS BASADOS EN TINCIN DIFERENCIAL.


Es posible sacar conclusiones en relacin con la morfologa examinando una lamina
que fue sometida a un proceso de tincin.

Estos criterios morfolgicos encabezan la primera etapa del proceso de identificacin


la mayor parte de la bacterias teidas con Gram se pueden clasificar como Gram
positivas y Gram negativas.

Tinciones fluorescentes (naranja de acridina, rodamina, blanco calcofluor) tincin de


inmunofluorescencia directa o indirecta.

Tinciones vitales. para la visualizacin de espiroquetas y protozoos.


Tinciones acidorresistentes y otras tinciones para detectar capsulas, flagelos, esporas

MTODOS BASADOS EN PRUEBAS BIOQUMICAS

Estas pruebas se fundamentan en demostrar si el organismo es


capaz de fermentar azcares, la presencia de enzimas, la
degradacin de compuestos, la produccin de compuestos
coloreados.
Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separase en dos
especies diferentes con base a pruebas bioqumicas.

Por ejemplo las bacterias entericas Gram forman un grupo


grande y heterogneo.
Esta familia Enterobacteriaceae incluye a varios patgenos
que causan sindromes diarreicos.

Los gneros clinicamente ms importantes son: Escherichia,


Salmonella, Shigella, Citrobacter y Enterobacter.
El

gnero Escherichia, Enterobacter y Citrobacter,


fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a
diferencia de los gneros Salmonella y Shigella que no
fermentan la lactosa.

Demostracin de la produccin de Indol

Aqu se emple dos tubos con triptona y se inocul los microorganismos


Salmonella y Staphylococcus Aureus y se dej incubado a 37 C por 24 horas y
despus a temperatura ambiente por 7 das.

El tubo de S. Aureus dio positivo con color a rojo cereza, esto indica que este
tipo de microorganismo es capaz de degradar al aminocido tritfano formando
un producto de hidrlisis de Indol.

Bioqumicamente la Salmonella se caracteriza por no fermentar la lactosa y por


no licuar la gelatina y por no producir Indol, aunque existen algunas
excepciones.

No todos los microorganismos pueden realizar este rompimiento de triptona a


indol, por lo cual esta reaccin es de valor taxonmico.

E. coli logr degradar la triptona y reaccionar para producir Indol, es decir dio
positiva la prueba, el microorganismo Gram - a pesar de que se le consideraba
susceptible, en este medio reaccionan sin ningn problema.

Produccin de H2S por los microorganismos

Aqu se inocul los microorganismos E. coli y Salmonella en un tubo de


ensayo cada uno con agar inclinado.

En el primer tubo con E. Coli no cambio color, dio negativo, no


reacciono con el azufre o no es capaz de producir cido sulfhdrico en un
medio de aminocido que contenga azufre, el microorganismos no se
desarrolla en medio de O2 en este caso.

Mientras que la salmonella si desarroll (en este medio con aminocido)


(H2S), esta prueba dio positivo.

Tambin hubo presencia del gas en medio del agar, este gas demuestra la
presencia de (H2S). Tambin el ennegrecimiento en la lnea de siembra, nos
indica que hubo produccin de cido sulfhdrico

MTODOS BASADOS EN DETECCIN MOLECULAR

A travs de procedimientos y reactivos, se pueden


detectar determinadas secuencias de ADN que son
propias de un determinado agente microbiano.

PCR se aplica generalmente para la identificacin


de organismos que no pueden ser cultivados por
mtodos convencionales

EJEMPLOS

Bacterias Vibrio cholerae, helicobacter pylori, Staphylococcus aureus.


Shigella dysenteriae, Escherichia coli, Mycobacterium tuberculosis.

Virus: Parvovirus, Rotavirus, Adenovirus Rhinovirus.


Protozoarios: Toxoplasma gondii, entamoeba histolyticum,
Tripanosoma cruzi.

MTODOS BASADOS EN PRUEBAS SEROLGICAS.

Implican la utilizacin de preparaciones de inmunoglobulinas

especficas provenientes de suero o de un reactivo y que pueden ser


de gran utilidad en la identificacin microbiana en muestras puras o
muestras biolgicas.

Cada uno tiene un fundamento particular, pero en lneas generales

todos se basan en la reaccin de un antgeno presente en el agente


microbiano con su anticuerpo correspondiente.

Los serotipos permiten diferenciar organismos a nivel de


subespecie, algo de gran importancia en epidemiologa.

Inmunofluorescencia puede utilizarse para la identificacin del organismo


aislado o presente en una muestra biolgica.

En el mtodo directo se fija la muestra problema a una lamina y se pone


en contacto con el antisuero especfico marcado con una sustancia
fluorescente (rodamina o fluorescena) transcurrido el tiempo para que
tenga lugar la reaccin antgeno anticuerpo se expone la lamina a la
radiacin ultravioleta para visualizar la reaccin

ELISA
Enzyme Linked Immuno Sorbent Asssay" por sus siglas en

ingls que significan Ensayo Inmuno Enzimtico


Absorbente. Estudio inmunolgico de laboratorio por
medio de reactivos para detectar diversos grmenes, tales
como virus o protozoarios.

Se basa en la deteccin de un antgeno inmovilizado sobre

una fase slida mediante anticuerpos que directa o


indirectamente producen una reaccin cuyo producto, por
ejemplo
un
colorante,
puede
ser
medido
espectofotomtricamente

Esta prueba se utiliza ampliamente en los laboratorios clnicos


y le permite al mdico:

Analizar la sangre del paciente con un antgeno (ej., virus o


bacterias) para ver si su sistema inmunolgico lo reconoce
como algo que ha visto antes.

Analizar la sangre del paciente para ver si una sustancia

particular como una hormona (un antgeno) est presente en su


organismo.

METODOS MICROBIOLGICOS
PARA LA ENUMERACIN E
IDENTIFICACIN

Identificacin Bacteriana
Cada gnero, inclusive especie, tiene diferentes
reacciones cuando se les enfrentan diferentes
reactivos, esto se hace a partir de un cultivo puro, ya
la bacteria aislada, con estas pruebas podremos decir
casi con exactitud de que gnero y qu especie es
esta bacteria.

Cada gnero de bacteria, inclusive especie, tiene


diferentes reacciones cuando se les enfrentan a
diferentes reactivos, esto se hace a partir de un
cultivo puro, ya la bacteria aislada, con estas pruebas
podremos decir casi con exactitud de que gnero y
qu especie es esta bacteria. A estas pruebas se les
ha como primarias, secundarias y complementarias.

Pruebas Primarias
(Identificacin)
Tincin de Gram
Revela la forma de la bacteria, agrupacin y grupo
taxonmico al que pertenece: Gram (+) o Gram (-).
Los fundamentos de la tcnica se basan en las diferencias entre las
paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram
negativas
Se deshidratan los poros cerrndolos, impidiendo
que escape el complejo cristal violeta/yodo,

Gram (+) Staphylococcus

No retiene el complejo de cristal violeta/yodo

Gram (-) E. coli cells

Tincin de Ziehl Neelsen


Es una tcnica de tincin diferencial rpida y econmica,
para la identificacin de microorganismos patgenos.
Se denomina tincin cido-alcohol resistente y es especfica para una serie de
bacterias con estructura de pared particular, las micobacterias. La pared de las
micobacterias no est basada en peptidoglicano como las bacterias gram
positivas y gram negativas, sino en cidos miclicos. Esta particularidad las hace
resistentes a la decoloracin con cido y alcohol que no se produce en casi
ningn otro tipo bacteriano.

Utiliza tres reactivos. El colorante primario es la fucsina


que tie toda la preparacin de rojo brillante.
Como mordiente se utiliza flameado de la preparacin
con el colorante. La solucin decolorante elimina el
colorante primario excepto el los bacilos cido alcohol
resistentes.
(BAAR). Por ltimo el azul de metileno tie de azul el
resto de la preparacin

Tincin de esporas
La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los gneros
Bacillus y Clostridium.

Alunas bacterias son capaces de desarrollar formas de resistencia

denominadas esporas como mecanismo de defensa a agresiones


ambientales. Son estructuras de pared gruesa en las que el
microorganismo logra soportar las condiciones desfavorables de calor,
desecacin, acidez, etc. Cuando las condiciones ambientales vuelven a
ser favorables las esporas "germinan" y vuelven a generarse formas
vegetativas.

Estn descritos varios mtodos para teir esporas.


El de Wirtz-Conklin o tincin con verde malaquita.
Este colorante se une fuertemente a las esporas
gracias a la utilizacin de calor como mordiente.
La fase de decoloracin en este caso se realiza con
agua abundante. Las formas vegetativas pierden el
color verde y se tien con el colorante de contraste
(fucsina o safranina).

BASTONES

Epulopiscium

Escherichia coli

COCOS

Estreptococos

Espirales

Espiroqueta

Borrelia

Gram positivas y gram negativas


Grampositiva

La diferencia de composicin bioqumica


de las paredes de dos grupos de bacterias
es responsable de su diferente
comportamiento frente a un colorante
formado por violeta de genciana y una
solucin yodurada (coloracin Gram).

Se distinguen las bacterias

grampositivas (que tienen el Gram

despus de lavarlas con alcohol) y las


gramnegativas (que pierden su
coloracin).

Gramnegativa

Pruebas de Identificacin rpidas


1.
2.
3.
4.

Prueba de la catalasa
Prueba de la coagulasa
Prueba de PYR
Prueba de oxidasa

Pruebas de Identificacin para


Cocos Gram +
1.
2.
3.
4.
5.
6.

DNasa
Prueba del manitol salado
Bilis esculina

CAMP
Hidrlisis del hipurato
Voges Proskauer

Pruebas de sensibilidad a ATB

1. Disco de Optoquina
2. Disco de novobiocina
3. Disco de Bacitracina

catalasa

Prueba de la catalasa
Fundamento: Detecta la presencia de la enzima
catalasa.
Procedimiento: En portaobjetos colocar sobre una
colonia unas gotas de H202 3 %.
H202
H20 + 02
Liberacin de burbujas rpida y sostenida indica la
produccin de oxgeno molecular = prueba (+)
Consideraciones:
No Agar sangre (peroxidasa en los eritrocitos).

coagulasa

Prueba de la coagulasa
Fundamento: Detecta un factor de agregacin clumping factor en la
superficie de la bacteriana.
Procedimiento: se coloca una colonia sospechosa de pertenecer a una
especie de Staphylococcus y se emulsifica en una gota de plasma de
conejo.
Interpretacin: arracimamiento bacteriano en 1 minuto = prueba (+).
Si el resultado es negativo ensayar la produccin de coagulasa en tubo.
Consideraciones:
Utilizar plasma con EDTA y no citratado, ya que organismos capaces
de metabolizar el citrato (Enterococcus spp.) pueden dar resultados
falsos (+).
Las pruebas (-) luego de 4 hs de incubacin a 35C, dejar a temperatura
ambiente y leer luego de 18-24 hs a fin de evitar la fibrinlisis que
producen algunas cepas al ser incubadas en forma prolongada a 35C.

Prueba de PYR

Prueba del PYR:


Fundamento: detecta la enzima pirrolidonil arilamidasa se utiliza como
sustrato el reactivo L-pirrolidonil- beta-naftilamida (PYR), para la
identificacin rpida de enterococos.

Procedimiento: Realizar un alto inculo (2 MacFarland) e introducir un disco


de PYR.

Tiempo y T de incubacin: 30 minutos a 35 C.


Tiempo de lectura: 5 minutos.
Interpretacin:

Disco rosado o rojo (+)


Disco y/o solucin amarillo a incoloro (-).
Consideraciones: Algunas especies de Staphylococcus y los estreptococos del
grupo A dan, tambin, una prueba positiva.

DNAsa

Prueba de la DNAsa
Fundamento: El S. aureus produce una DNAasa termoestable
que hidroliza DNA. La produccin de DNAsa puede
determinarse incorporando cido desoxirribonucleico (DNA)
en agar nutritivo .

Procedimiento: Se inocula el microorganismo en manchas

densas sobre agar DNA y despus de 18 a 24 hs de incubacin.


Revelar con HCl al 1%, que precipita el DNA nativo del medio.

Interpretacin: colonias rodeadas por una zona clara donde el


ADN ha sido despolimerizado e hidrolizado = prueba (+)

Manitol salado

Agar Manitol salado


Fundamento: el medio contiene manitol (1%), cloruro de sodio (7,5 %), rojo de fenol y
peptonas.

Procedimiento: Sembrar la cepa e incubar 18 a 24 hs a 35C.


Interpretacin:
Crecimiento y viraje

S. aureus
Crecimiento sin viraje.
S. epidermidis

Consideraciones:
La alta concentracin de sal inhibe otros microorganismos excepto enterococos (por lo tanto
usar la placa para identificacin, no para aislamiento).

Bilis Esculina

Prueba de la bilis-esculina:
Fundamento: Se basa en la capacidad de ciertas bacterias

(estreptococos del grupo D) para hidrolizar la esculina en


presencia de 1-4% de sales biliares.
Procedimiento: Se inocula el microorganismo en la superficie
de un pico de flauta. Incubar 24 hs.
Interpretacin: La beta glucosidasa escinde la esculina en
glucosa y esculetina. Esta ultima es soluble en el medio y forma
un complejo de color negro con Fe 3+ .La hidrlisis de esculina
se observa como un oscurecimiento del medio (color negro) en
24 hs de incubacin a 35C, raramente se requieren 48 hs de
incubacin hasta que la hidrlisis sea aparente.
Consideraciones: Es importante que el medio contenga 40%
de bilis, ya que algunos productos contienen menos cantidad lo
que lleva a confundir algunos estreptococos viridans con
enterococos

Prueba de CAMP
Fundamento: Los estreptococos grupo B secretan el factor CAMP que
interacta con la -hemolisina secretada por una cepa -hemoltica de S. aureus
(ATCC 25923) lo que causa un acrecentamiento o sinergismo de la hemlisis.

Procedimiento: En placa de agar sangre sembrar una estra de la cepa de S.


aureus y perpendicularmente a sta (lo ms cerca posible, sin llegar a tocarla)
sembrar la cepa de estreptococo en estudio.

Tiempo y T de incubacin: Incubar 24 hs a 35C en aerobiosis (en CO2


aumentan los falsos positivos).

Interpretacin: El sinergismo se observa como un rea de Hemlisis en forma de punta de flecha en la zona
de desarrollo ms cercana a ambas estras.

Prueba de CAMP

Prueba del hipurato de sodio

Fundamento: Ciertas cepas son capaces de hidrolizar el hipurato de sodio. La


produccin de hipuricasa resulta en la hidrlisis del hipurato de sodio con la
formacin de benzoato de sodio y glicina.

Procedimiento:
Inocular un tubo con medio hipurato de sodio con el microorganismo.
Incubar 24 hs a 35C. Centrifugar. Pipetear 0.8 ml el sobrenadante. Agregar 0.2
ml de cloruro frrico 7%.

Inocular un tubo con 0.4 ml de medio hipurato de sodio con el


microorganismo. Incubar 2 hs a 35C. Agregar 0.2 ml de Ninhidrina.

Interpretacin:
La formacin de un precipitado denso y persistente por 10 minutos = prueba
(+) Benzoato de sodio

La aparicin de un color prpura profundo = prueba (+) glicina.

Hidrlisis de hipurato

Prueba de la susceptibilidad a
la Novobiocina
Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la
novobiocina.

Procedimiento: Se inocula el microorganismo en agar Mueller Hinton


segn tcnica de Kirby-Bauer, utilizando discos de Novobiocina (5 g).

Interpretacin: Sensible: inhibicin del desarrollo con un dimetro


mayor o igual a 16 mm

Staphylococcus
Micrococcus

R
S

Consideraciones:
Kirby Bauer (Difusin en disco)
Inoculo sin incubacin previa
Tiempo de lectura: 24 hs.
T de incubacin: 33 a 35

Prueba de la Bacitracina:
Fundamento: Se basa en que ciertas bacterias son sensibles a la

bacitracina.
Procedimiento: Se inocula el microorganismo en AS segn tcnica
de Kirby-Bauer utilizando discos de Bacitracina (0.04 U).
Interpretacin: Sensible: Cualquier zona de inhibicin del
desarrollo.
Consideraciones: Kirby Bauer (Difusin en disco)
Inoculo sin incubacin previa
Tiempo de lectura: 18 a 24 hs.
T de incubacin: 33 a 35 en CO2
Recordar que el uso de discos de Bacitracina en forma directa en
las placas primarias de cultivo puede dar como resultado un 40% a
50% de falsos negativos.

Prueba de la Bacitracina

Prueba de la optoquina

Pruebas de Identificacin para


enterobacterias
1. Prueba OF
2. Prueba de la oxidasa o citocromooxidasa
3. TSI
4. SIM (Sulfhdrico- Indol- Movilidad)
5. Rojo de metilo - Voges Proskauer
6. ONPG (O-nitrofenil-b-galactopiranosido)
7. Citrato
8. Ureasa
9. Fenil-alanina-desaminasa
10. Descarboxilasas

Oxidasa

NEG

POS

CITOCROMOOXIDASA O
PRUEBA DE LA OXIDASA
Fundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla en microorganismo
aerobios, microaerfilos y anaerobios facultativos.

Procedimiento: Hacer una suspensin del microorganismo con solucin

fisiolgica (inculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de


papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2
minutos se debe leer.

Interpretacin: Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+).


Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

Consideraciones Esta prueba no puede realizarse con colonias que

provengan de medios de cultivo que contenga hidratos de carbono ni


indicadores, por lo que si se la va a realizar se debe incubar los
microorganismos en un placa de AS o bien un TSA (tripteina-soya-agar)

Prueba OF

PRUEBA DE OXIDACIN
FERMENTACIN (O-F)
Fundamento: Determinan el metabolismo oxidativo o fermentativo de un

hidrato de carbono o su falta de utilizacin. Se usa el medio O-F de Hugh y


Leifson que contiene peptonas e hidratos de carbono en una relacin 1:5. Al ser
menor la concentracin de peptonas, hay menor produccin de productos de
oxidacin a partir de los AA que tienden a elevar el pH y pueden neutralizar los
cidos dbiles producidos por los microorganismos no fermentadores.

Procedimiento: Se utilizan 2 tubos con el medio O-F, se hace la siembra con asa
de punta hasta el fondo de los dos tubos. Uno de los tubos queda expuesto al
aire, y el otro se cubre con vaselina estril.

Interpretacin:
Microorganismos oxidativo: producen cido solo en el tubo abierto, expuesto
al O2 atmosfrico. Por lo que solamente el tubo expuesto al aire atmosfrico
cambia su color original a amarillo.

Microorganismos fermentadores: producen cido en los 2 tubos. O sea que


los dos tubos viran del verde al amarillo.

Bacterias sacarolticas: son inertes a este medio que conserva su pH alcalino


despus de la incubacin, conservando su color original.

Triple Azcar Hierro

TSI (TRIPLE AZCAR HIERRO


AGAR)
Fundamento: Sirve para detectar la fermentacin de hidratos
de carbono. El medio contiene: glucosa al 0.1%, lactosa 1%,
sacarosa al 1% y peptonas; tambin tiene un indicador rojo de
fenol y sulfato de hierro para evidenciar la formacin de SH2.
Procedimiento: El medio se fracciona en picos de flauta con
una capa basal profunda (2 cm. por lo menos). Con el ansa en
punta se siembra por puncin y estra.
El medio no inoculado es anaranjado-rojizo o rojo plido.
Incubar 24 hs a 35 C.

TSI (TRIPLE AZCAR


HIERRO AGAR)
Interpretacin:
Fermentacin de la glucosa (alcalino/cido)
Primero los microorganismos empiezan a fermentar la glucosa, produciendo
cidos y virando totalmente el medio a color amarillo. Como solamente utilizan la
glucosa, no pueden usar la sacarosa ni la lactosa, cuando la glucosa que se halla en
baja concentracin se consume (antes de las 24hs) los microorganismos
comienzan a utilizar la peptonas con produccin de amonaco que alcaliniza el
medio dando un color rojo, pero solamente en el pico, quedando el fondo cido.

Fermentacin de glucosa, lactosa y sacarosa (cido/cido)


Como la lactosa y sacarosa estn en una proporcin 10 veces mayor que la
glucosa, en un perodo de 24hs., la lactosa y sacarosa, an no se consumen
quedando cido el medio o sea totalmente amarillo.

3) No fermentacin de lactosa, sacarosa ni glucosa (alcalino/alcalino). Un

microorganismo incapaz de obtener sus nutrientes de los hidratos de carbono, lo


obtiene de las peptonas. Cuando las peptonas son degradadas libran amonaco y
alcalinizan el medio. Producindose entonces intensificacin del color.

Consideraciones del TSI


Es importante respetar el tiempo de lectura, porque si el caso 1 se lee

antes de las 24hs. se va a interpretar como ac/ac y no lo es. Si el 2 se


lee despus de las 24hs, los microorganismo ya se quedan sin hidratos
de carbono, entonces comienzan a utilizar las peptonas y se alcaliniza el
medio.

Con respecto al sulfhdrico pueden presentarse distintas modalidades:


Pico rojo, fondo amarillo con precipitado negro y formacin de gas,
esto se puede dar en Salmonella, se lee: alc/ac (SH2) (gas)

Tambin se puede ver totalmente amarillo y el fondo negro: se lee:


ac/ac (SH2).

Adems se puede visualizar en el tubo la produccin de gas por parte

del microorganismo, entonces en el medio se observan burbujas,


resquebrajamiento, o si no todo el medio de cultivo aparece levantado.

SIM

SIM (SULFHDRICO INDOL


MOVILIDAD)

Fundamento: Es un medio semi-slido transparente que pone en evidencia la


movilidad, la produccin de triptofanasa y de SH2. Contiene:

Triptofano: la enzima triptofanasa, lo desdobla, produce indol, que se pone de manifiesto


con el reactivo de Erlich o Kovac

Citrato de hierro y amonio: los microorganismos productores de SH2 ennegrecen el


medio de cultivo

Si los microorganismos son mviles, al ser ste un medio semi-slido se produce


enturbiamiento del medio de cultivo, caso contrario solo crece en la puncin.

Procedimiento: se inocula el microorganismo por puncin con ansa de punta. Se deja


incubar a 35C durante 24hs. y luego de este tiempo se agregan unas gotas del reactivo
de Erlich o Kovac dejndolo resbalar por las paredes del tubo.

Interpretacin:
Triptfano (+): observar la interfase, la aparicin de un color rojo fucsia brillante por la
formacin de un complejo entre el indol y el p-dimetilaminobenzaldehido.

M (+) / SH2 (-) enturbiamiento del medio


M (+) / SH2 (+), se ennegrece todo el medio
M (-) / SH2 (-) se observa crecimiento solamente en la estra
M (-) / SH2 (+), se observa precipitado negro alrededor de la estra (pero no
ennegreciendo de todo el medio).

SIM
SH2+
Ind+
Mot+

SH2+ IndMot-

SH2- Ind+ SH2- IndMot+


Mot-

Prueba de VP y RM

ROJO DE METILO
VOGES PROSKAUER:
Fundamento: El acido pirvico, un compuesto fundamental formado en la

fermentacin de la glucosa, es metabolizado an mas a travs de cierto numero de


vas metablicas. Una de ellas da como resultado la produccin de acetona (acetilmetil-carbinol) un producto final de reaccin neutra. En presencia de oxigeno e
KOH al 40%, la acetona es convertida en diacetilo y el naftol sirve como
catalizador para producir un complejo de color rojo.

Procedimiento: Se usa el mismo caldo de enriquecimiento para las dos pruebas

(2ml), se hace la inoculacin del microorganismo, y se lleva a incubar a 35C durante


como mnimo 24-72hs..

Luego se lo divide en dos partes, una para la prueba de RM y otra para la de VP.
Rojo de metilo: se agregan 3 gotas del reactivo de metilo, si en la superficie del

medio aparece un color rojo intenso es RM (+) = microorganismos que utilizan la


glucosa fermentndola hasta llegar a un pH menor a 4,4.

VP: Se agrega 0.6 ml de alfa-naftol seguidos de 0,2 ml de KOH al 40%. Es esencial

que los reactivos se agreguen en este orden. El tubo se sacude suavemente y luego se
deja quieto de 10 a 15 min. La aparicin de color rojo = prueba (+) (presencia de
acetil-metil-carbinol).

ONPG

ONPG (O-NITROFENIL-GALACTOPIRANSIDO)
Fundamento: Lo microorganismos lactosa (+) tienen -galactosidasa y permeasa,
dos enzimas necesarias para la formacin de cidos a partir de la lactosa

La permeasa es necesaria para que la molcula de lactosa ingrese en la clula


bacteriana.

Hay algunos microorganismo que son falsos lactosa (-) por carecer de permeasa,
pero s tienen -galactosidasa, en realidad son lactosas (+).

Esta prueba se hace con los microorganismo que dan lactosa (-)
Procedimiento: Hacer un inculo con SF estril, agregar un disco de papel
comercial, se agita y antes de los 2 minutos se debe leer.

Interpretacin: Un color amarillo intenso nos indica que el microorganismo es


productor de -galactosidasa= prueba (+).

Consideraciones
Se hace un inculo del microorganismo en solucin fisiolgica estril, se agrega un
disco de papel. Se lleva a incubar a 37C durante 24hs.

Citrato

CITRATO
Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos

microorganismos que utilizan el citrato como nica


fuente de carbono, el indicador es azul de bromo timol.

Procedimiento: El color original del medio es verde, y

se encuentra fraccionado en pico de flauta, la siembra se


hace por estra, se incuba 24-72hs a 35C.

Interpretacin: Si el microorganismo utiliza citrato, se

produce alcalinizacin del medio de cultivo pasando ste


a color azul intenso, lo cual indica prueba positiva para el
citrato.

Ureasa
Positivo

Negativo

UREA:
Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos
microorganismo que poseen la enzima ureasa.

Procedimiento: El medio fraccionado en pico de flauta

contiene urea y rojo de fenol como indicador, el color


original del medio es amarillo (o sea cido) La siembra se
realiza con ansa de punta tanto en profundidad como en la
superficie. Se deja incubar 24 hs a 35 C.

Interpretacin: Si el microorganismo es productor de

ureasa, desdobla la urea produciendo amonaco,


consecuentemente produce alcalinidad que se manifiesta
porque el medio toma un color fucsia.

Fenilalanina
(-)

(+)

FENIL-ALANINADESAMINASA:
Fundamento: Sirve para poner de manifiesto aquellos

microorganismo que poseen la enzima FENIL-ALANINADESAMINASA. El medio se prepara con un pico de flauta
largo, pues la lectura se hace sobre la superficie del medio de
cultivo.

Procedimiento: Se siembra sobre la superficie del medio

solamente, se incuba 24 hs a 35 C, se revela con cloruro frrico.

Interpretacin: El color original es amarillo, si el

microorganismo es productor de la enzima, al agregar sobre el


medio cloruro frrico, sta se pone de manifiesto, dando a la
superficie un color verde intenso.

Lisina Decarboxilasa

AMINOCIDOS:
DESCARBOXILASAS:
Fundamento: Las descarboxilasas son enzimas sustrato-especficas

(presentes o no en los microorganismos) capaces de reaccionar con la


porcin carboxilo (COOH) de AA formando aminas de reaccin alcalina.
Esta reaccin, conocida como descarboxilacin, forma C02 como producto
secundario. Cada descarboxilasa es especfica para un aminocido.

Lisina, arginina y ornitina son los aminocidos evaluados de rutina en la


identificacin de enterobacterias.

El medio Moeller es la base (semi-slida) que se emplea con ms frecuencia.


El aminocido se agrega a la base. El color original es lila.

Procedimiento: Se inoculan por puncin 2 tubos y se sellan con aceite


mineral. Uno de los tubos contiene el AA y el otro no.

Interpretacin: Si el aminocido es descarboxilado, se forman aminas

alcalinas y el medio pasa a violeta ms intenso. Si no es descarboxilado pero


fermenta la glucosa, vira al amarillo por la formacin de cidos

Lisina Hierro Agar (LIA)

LIA SH2 -

LIA + SH2 -

LIA + SH2 -

LIA:
Agar de ensayo para la demostracin simultnea de lisina
decarboxilasa (LD) y de la formacin de hidrogeno sulfurado
(H2S) para la identificacin de enterobacterias.
La lisina puede ser descarboxilada por microorganismos LD
positivas que la transforman en la amina cadaverina. Esto
produce un viraje al violeta del indicador de pH prpura de
bromocresol, puesto que la descarboxilacin slo tiene lugar en
medio cido (pH inferior a 6.0). Es necesario que se produzca
previamente la acidificacin del medio de cultivo, por
fermentacin de la glucosa. Este medio de cultivo solo puede
utilizarse para la diferenciacin de bacterias que fermentan
glucosa.
Los microorganismos LD negativos, pero fermentadores de la
glucosa, producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio
de cultivo. La incubacin prolongada puede ocasionar
alcalinizacin en la zona de la superficie del medio de cultivo y en
consecuencia, se produce un viraje al violeta. La formacin de
H2S produce una coloracin negra debido al sulfuro de hierro
producido.

cido de la Glucosa

Muchas de las bacterias de inters mdico usan la glucosa como fuente de


carbono, como parte importante de su metabolismo. Se determina si la
bacteria usa la glucosa produciendo cido y/o gas a partir de dicho
carbohidrato.

En un tubo con agua peptonada al 1% tapado,


y un tubo de Durham, se inocula la bacteria
por agitacin teniendo cuidado de no mover
el tubo de Durham e incubndolo 24 horas y
37C se obtienen los siguientes resultados.
Si la bacteria usa la glucosa producir cido
y/o gas, por lo tanto el agua peptonada se
observar rosa, si produce gas, se observar
Una burbuja en el tubo de Durham.
(+) cido y gas a partir de la glucosa: Escherichia coli
(-)Negativo a produccin de gas: Proteus stuartii.

Prueba MIO
(Motility-Indole-Ornitine Motilidad-IndolOrnitina)
Esta prueba bioqumica permite identificar bacterias de
acuerdo a su motilidad a la reaccin de Indol a la
descarboxilacin
de la ornitina.

Procedimiento:
Inocular en picada las cepas de organismos en el medio de
cultivo e incubar por 24 horas a 37.

Agar Citrato
La utilizacin de citrato como nica fuente de carbono es

una prueba til en la identificacin de enterobacterias. La


utilizacin de citrato como nica fuente de carbono se
detecta en un medio de cultivo con citrato como nica
fuente de carbono mediante el crecimiento y la
alcalinizacin del medio. Este aumento de pH se visualiza
con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a
pH 7,6.

Procedimiento:
Se inocula el agar inclinado en una sola estra en el pico.
Utilizar un cultivo de 24 horas en un medio slido y
cuidando no arrastrar medio de cultivo, ya que se pueden
producir falsos positivos por crecimiento a partir del
medio de cultivo del inculo. Incubar a 35C durante 4
das. El ensayo es positivo cuando se observa crecimiento
a lo largo de la estra, acompaado o no de un viraje del
indicador al azul.

Indol
El indol es uno de los productos de degradacin metablica del aminocido
triptofano. Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar y
desaminar el triptofano con produccin de indol, cido pirvico y amonaco. La
produccin de indol es una caracterstica importante para la identificacin de
muchas especies de microorganismos. La prueba de indol est basada en la
formacin de un complejo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehdo
del p-dimetilaminobenzaldehdo. Este es el principio activo de los reactivos de
Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.

Procedimiento:
Inocular el caldo triptofano con el organismo en estudio e incubar a 35C
durante 18 a 24 horas. Al finalizar este perodo, aadir 5 gotas de reactivo de
Kovacs por la pared interior del tubo. El desarrollo de un vivo color rojo fucsia
en la interfase del reactivo y el caldo, segundos despus de aadir el reactivo
indica la presencia de indol y una prueba positiva.

Resultados:
(+) Escherichia coli
( - ) Klebsiella pneumoniae

Rojo Metilo
Una de las caractersticas taxonmicas que se utilizan para identificar los
diferentes gneros de enterobacterias lo constituyen el tipo y la
proporcin de productos de fermentacin que se originan por la
fermentacin de la glucosa. Se conocen 2 tipos generales: La
fermentacin cido-mixta y la fermentacin del 2,3 butanodiol. En la
fermentacin cido mixta se forman fundamentalmente lctico, actico
y succnico, adems de etanol, H2 y CO2. En la va del butanodiol se
forman cantidades menores de cido (acetato y succinato) y los
principales productos son el butanodiol, etanol, H2 y CO2.
El rojo de metilo es un indicador de pH con un intervalo entre 6,0
(amarillo) y 4,4 (rojo), que se utiliza para visualizar la produccin de
cidos por la va de fermentacin cido mixta.

Procedimiento: Inocular el caldo Rojo Metilo con un cultivo puro de no


ms de 24 horas del microorganismo en estudio. Incubar a 35C durante 48 hr.
Luego de finalizado el tiempo de incubacin agregar unas gotas del reactivo d
e rojo de metilo. La prueba es positiva si se desarrolla de un color rojo estable.
Esto indica que la produccin de cido es suficiente para producir el viraje del
indicador y el microorganismo ferment la glucosa por la va de cido mixta.
Un color anaranjado, intermedio entre el rojo y el amarillo no es considerado
como positivo.

Recuento de
microorganismos viables
totales.
(Muestras lquidas u homogeneizadas)

Se trata de conocer el nmero total de microorganismos

presentes en el alimento. Este nmero no guarda


relacin con el de microorganismos patgenos por lo
que no puede usarse como ndice de su presencia y slo
debe considerarse un indicador de las caractersticas
higinicas generales del alimento.

-Dependiendo de las caractersticas del medio utilizado

(medio rico, medio limitado en nutrientes para medida


de la flora no lctica de alimentos fermentados) y de las
condiciones de incubacin (mesfilos, psicrfilos) los
microorganismos analizados sern miembros de
poblaciones diferentes. En general se investiga la
presencia de microorganismos aerobios o aerotolerantes
(anaerobios facultativos); aunque, en ciertas situaciones
(alimentos envasados al vaco), puede ser de inters
hacer recuentos de anaerobios totales.

Contaje de Placa
Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen
conocido del alimento que se analiza. El resultado es
funcin de una serie de factores como son el mtodo de
muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y
las caractersticas del medio de cultivo. Los cultivos
pueden hacerse tanto en masa como en superficie, aunque
hay que considerar que los cultivos en masa son letales
para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable formar una
colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa normal o
por medio de un plaqueador en espiral que va depositando
concentraciones progresivamente ms diludas de la
muestra.

Filtros de membrana
Utilizados cuando el nmero de bacterias es bajo.
Son filtros con un poro de 0,45 mm que retienen las
bacterias. Se filtra un volumen dado y se coloca el
filtro sobre una placa del medio de cultivo apropiado.
La muestra puede haber sido procesada para
epifluorescencia previamente, lo que facilita el
recuento (la epifluorescencia se puede provocar con
naranja de acridina que tie especficamente los
cidos nucleicos).

Microcolonias en DEFT
DEFT son las iniciales en ingls de Direct Epifluorescence Filter
Technique (tcnica de epifluorescencia directa en filtro). En esta tcnica
las bacterias se filtran para retenerlas en una membrana apropiada que
posteriormente se trata con un agente fluorescente (como la naranja de
acridina) para teir las clulas bacterianas (se somete el filtrado a un
tratamiento previo con detergentes para destruir las clulas somticas).
La deteccin de los microorganismos ha de hacerse mediante
microscopa de fluorescencia o por cualquier otro mtodo de medida de
la epifluorescencia. En ciertos casos, las membranas se incuban para
producir colonias que son ms fcilmente detectables.

Films secos (Petrifilm)


Son pelculas deshidratadas de medios de cultivos
generales o selectivos en las que se deposita 1 ml de
la muestra que rehidrata el medio. Tras la incubacin
se hace el recuento.

Mtodo del nmero ms


probable
Basado en series de diluciones y clculo estadstico
del nmero de bacterias presentes en las diluciones
ms altas. Se puede hacer con 3 5 tubos. El mtodo
es popular aunque poco excto.

Tubos rodantes
Son tubos hermticamente cerrados en los que
hacindolos girar se forma una fina capa de agua.
tiles para recuento de anaerobios.

Mtodos qumicos de
deteccin de
microorganismos.

Nucleasa Termoestable
S. aureus produce una nucleasa termoestable con
mayor rapidez y en mayor cantidad que la
enterotoxina responsable de la intoxicacin. La
endonucleasa puede detectarse experimentalmente
como un ndice de la presencia de S. aureus incluso en
concentraciones demasiado bajas para que hayan
producido unas cantidades detectables de
enterotoxina.

Lisado de Limulus
Usado para deteccin de endotoxinas (derivadas del
lipopolisacrido LPS de las bacterias Gram
negativas). Se basa en la aglutinacin de extractos de
amebocito de sangre de Limulus (cangrejo de mar)
producido por cantidades del orden de picogramos
de LPS. Puede detectar 300 clulas de E. coli. El
mtodo detecta clulas viables y no-viables. Es muy
rpido.

PRUEBA CLASE DE
MICROBIOLOGA
CLNICA
PARALELO C

TERCER PARCIAL

INSTRUCCIONES
LEA DETENIDAMNTE CADA PREGUNTA
RESPONDA CON EL LITERAL Y LA RESPUESTA
CORRECTA.

Ejemplo:
c) Ninguna de las Anteriores

TODO SE REALIZA CON ESFERO


LAS PREGUNTAS PEDEN TENER MS DE UNA
RESPUESTA

CUALQUIER INTENTO DE COPIA SE ANULA LA


EVALUACIN.

INSTRUCCIONES
LOS TACHONES, BORRONES O MANCHONES
EN LAS PREGUNTAS NO SERN CALIFICADAS.

NO INSISTIRA POR FAVOR

EL PROFESOR A PARTIR DE ESTE INSTANTE


TIENE:

ALZHEIMER
Y ESTA SORDO Y SIN HABLA..

MUCHA SUERTE

PREGUNTA N 1
PARA APLICAR NOVOBIOCINA LO PROCEDEMOS A
SEMBRAR EN:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Agar Sangre
Agar Sabouraud
Agar Mueller Hinton
Agar Eosina
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 2
PARA APLICAR BACITRACINA LO PROCEDEMOS A
SEMBRAR EN:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Agar Sangre
Agar Sabouraud
Agar Mueller Hinton
Agar Eosina
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 3
COLOCAR VERDADERO O FALSO AL SIGUIENTE
ENUNCIADO:

a) El uso de discos de Novobiocina en forma directa en las placas


primarias de cultivo puede dar como resultado un 40% a 50%
de falsos negativos.

PREGUNTA N 4
LAS PRUEBAS DE IDENTIFICACIN PARA
ENTEROBACTERIAS SON:

a) OF, citocromooxidasa, TSI, SIM, ONPG, Citrato, Ureasa,


Dnasa, CAMP.

b) Dnasa, CAMP, OF, citocromooxidasa, TSI, SIM, ONPG,


Citrato, Ureasa,.

c) OF, TSSI, SIM, ONPG, Citrato, Ureasa.


d) Todas las Anteriores
e) Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 5
LA PRUEBA DE CITOCROMOOXIDASA DA POSITIVO
CUANDO:

a) Un cambio de color del disco a rosado o naranja.


b) Un cambio de color del disco a Amarillo o ladrillo.
c) Un cambio de color del disco a anaranjado o con
enturbiamiento obscuro.

d) Todas las Anteriores


e) Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 6
LA PRUEBA DE OXIDACIN FERMENTACIN EN
LOS MICROORGANISMOS NO FERMENTADORES
PRODUCEN:

a) ACIDEZ DEL MEDIO DE CULTIVO.


b) AUMENTAN LA BASICIDAD DEL MEDIO
CULTIVO.

c) NINGUNA DE LAS ANTERIORES

DE

PREGUNTA N 7
ESCRIBA TRES MEDIOS EN LOS QUE SE DEBE
SEMBRAR EN PICO DE FLAUTA:

PREGUNTA N 8
LA PRUEBA DE OXIDACIN FERMENTACIN ES
TIL PARA IDENTIFICAR:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Produccin de cido
Cambio de pH
Presencia de gas
Oxidacin
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 9
DE ACUERDO A LA GRFICA EL MEDIO
TSI INDICA:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Lactosa (-), Glucosa (-), SH2 (-)


Lactosa (+), Glucosa (+), SH2 (+)
Lactosa (-), Glucosa (+), SH2 (-)
Lactosa (+), Glucosa (+), SH2 (-)

Todas las Anteriores


Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 10
DE ACUERDO A LA GRFICA EL
MEDIO SIM INDICA:
a) M (+) / SH2 (-)
b) M (+) / SH2 (+)
c) M (-) / SH2 (-)
d) M (-) / SH2 (+)

e) Todas las Anteriores


f) Ninguna de las anteriores
ESTA PREGUNTA TIENE 2 RESPUESTAS
UNA POR CADA LITERAL DE LA GRFICA

PREGUNTA N 11
LA PRUEBA PARA IDENTIFICAR EL
MICROORGANISMO PRODUCTOR DE GALACTOSIDASA ES:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

VP y RM
TSI
Citrato
ONPG
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 12
LAS PRUEBAS DE CITRATO, UREA Y
FENILALANINA SON UTILIZADAS PARA:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Deteccin de aerobios
Deteccin de Anaerobios
Gram +
Gram Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 13
EL CONTAJE EN PLACA SE UTILIZA PARA:
a) Aislamiento de muestras slidas
b) Aislamiento de muestras lquidas
c) Identificacin y aislamiento de microoganismos.
d) Cuantificacin microbiana
e) Todas las Anteriores
f) Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 14
LA PRUEBA DE LISADO DE LIMULUS ES
UTILIZADA PARA LA DETECCIN DE:

PREGUNTA N 15
LA PRUEBA DE LA NUCLEASA
TERMOESTABLE SE UTILIZA PARA LA
DETECCIN DE:

PREGUNTA N 16
DE ACUERDO A LA GRFICA EL
MEDIO ROJO METILO INDICA:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Presencia de cianobacterias
Presencia de Gram +
Presencia de enterococos

Presencia de enterobacilos
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 17
EL MEDIO BIOQUMICO MIO IDENTIFICA:
a) Bacterias de acuerdo a su motilidad
b) Descarboxilacin de Ornitina
c) Para deteccin de Indol
d) a y c
e) Todas las Anteriores
f) Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 18
EL MEDIO BIOQUMICO CIDO DE GLUCOSA
IDENTIFICA:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

Produccin de cido y gas

Produccin de Indol y gas


Produccin de cido e Indol
Produccin de Lisina e Indol
Todas las Anteriores
Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 19
EL MEDIO BIOQUMICO LIA IDENTIFICA:
a) Diferenciacin de bacterias fermentadoras de glucosa
b) Diferenciacin de bacterias que no fermentan glucosa
c) La formacin de H2S
d) a y c
e) a y b
f) Todas las Anteriores
g) Ninguna de las anteriores

PREGUNTA N 20
ENUMERE DOS MEDIOS DE CULTIVO
UTILIZADOS PARA LA DETECCIN DE
ENTEROBACTERIAS Y CUATRO PRUEBAS
DE IDENTIFICACIN:

PRUEBA DE
UNIDAD DE
MICROBIOLOGA
APLICADA
PARALELO A

PRIMER PARCIAL

INSTRUCCIONES
LEA DETENIDAMNTE CADA PREGUNTA.
RESPONDA NICAMENTE LO QUE SE LE PIDE
EN CADA PREGUNTA.

TODO SE REALIZA CON ESFERO.


CUALQUIER INTENTO DE COPIA SE ANULA LA
EVALUACIN.

INSTRUCCIONES
LOS TACHONES, BORRONES O MANCHONES
EN LAS PREGUNTAS NO SERN CALIFICADAS.

NO INSISTIRA POR FAVOR

EL PROFESOR A PARTIR DE ESTE INSTANTE


TIENE:

ALZHEIMER
Y SABE TODO LO QUE LOS ESTUDIANTES QUE
PREGUNTAN SABEN..

MUCHA SUERTE

RECUERDEN
QUE SER BIOQUMICO FARMACUTICO NO ES
UNA PROFESIN MS

ES

LA
PROFESIN
DIFERENCIA

QUE

HACE

LA

PREGUNTA N 1

DEFINA PROBITICO

PREGUNTA N 2
ENUMERE 4
MICROORGANISMOS
PROBITICOS

PREGUNTA N 3

ENUMERE 4
CARACTERSTICAS
FAVORABLES DE LOS
PROBITICOS

PREGUNTA N 4

DESCRIBA DOS DE LOS


EFECTOS FAVORABLES DE
LOS ALIMENTOS
PROBITICOS

PREGUNTA N 5
ENUMERE 4
MICROORGANISMOS
PRESENTES EN LOS
ALIMENTOS

PREGUNTA N 6
IDENTIFIQUE LA UTILIDAD DE
LA ACTIVIDAD DE AGUA EN
LOS ALIMENTOS

PREGUNTA N 7
DEFINA EN UNA LNEA LA
PALABRA CONSERVACIN

PREGUNTA N 8
Ponga las definiciones de:
Liofilizacin..........................
Curado....................................
Ahumado...............................
Nutriente...............................
ETA.......................................
Infeccin.............................
Intoxicacin........................

PREGUNTA N 9
ENLISTE LAS FORMAS DE
CLASIFICACIN DE LOS
MICROORGANISMOS DE ACUERDO
A:
TEMPERTATURA
PRESIN
pH
RELACIN DE O2

PREGUNTA N 10
ENUMERE LOS FACTORES
INTRINSECOS Y
EXTRINSECOS; Y CUL ES
LA DIFERENCIA ENTRE
DICHOS FACTORES.

PREGUNTA N 11
DIGA LA DIFERENCIA ENTRE
MTODOS FSICOS Y
QUMICOS DE
CONSERVACIN

PREGUNTA N 12
ENLISTE 5 MTODOS FSICOS Y
5 MTODOS QUMICOS DE
CONSERVACIN DE
ALIMENTOS

PREGUNTA N 13
DIGA POR QU EL SODIO ES
UTILIZADO COMO
CONSERVANTE UNIVERSAL

SE ENTREGA LA
EVALUACIN AHORA