UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE

MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
CUAUTITLN
LICENCIADO EN FARMACIA
LABORATORIO DE BIOFARMACIA
PRCTICA 2:
Curva de Calibracin en muestras biolgicas
INTEGRANTES:
AGUIRRE VIDAL PABLO
GARCIA RAMIREAZ FRANCISCO JAVIER
GUTIERREZ GONZLEZ ANA KAREN
JUREZ TOVAR KARLA PATRICIA
REYES ORTA JESSICA AMERICA
ROMERO HERNNDEZ MARITZA AIDE
PROFESORES:
JOS ANTONIO GARDUO ROSAS
JOS JUAN ESCOBAR CHAVEZ
MARA GUADALUPE REBOLLAR BARRERA
SEMESTRE: 2017-I
EQUIPO 2

INTRODUCCION
El uso de muestras biolgicas como matrices para el anlisis de sustancias
debe de cumplir los criterios de anlisis de muestras biolgicos de un estudios
de biodisponibilidad o bioequivalencia las cuales se mencionan en el artculo 9
de la Norma NOM-177-SSA1-2013. En la cual se menciona que todos los
mtodos de anlisis para la cuantificacin del frmaco de inters deben cumplir
con las caractersticas de desempeo sealadas en esta Norma.
Todos los mtodos analticos empleados para la cuantificacin de muestras
biolgicas deben ser validados en el sitio de anlisis y alcanzar el propsito
para el que han sido desarrollados, independientemente si son metodologas
desarrolladas por la unidad analtica o se adquieren comercialmente, como es
el caso de los mtodos basados en tcnicas inmunolgicas u otras.
La norma establece que una vez establecidas las condiciones analticas; la
validacin del mtodo debe incluir como mnimo distintos puntos en la
evaluacin del mtodo, dentro de los cuales se incluye la curva de calibracin
la cual menciona de Los datos de concentracin recuperada de la curva de
calibracin deben estar dentro del 15% de la concentracin nominal en cada
nivel de concentracin, excepto para el lmite inferior de cuantificacin, ya que
puede ser menor o igual que el 20%. Al menos el 75% de las concentraciones
de la curva de calibracin con un mnimo de 6 puntos deben cumplir con este
criterio.
Otro parmetro involucrado en el anlisis del mtodo y su capacidad predictiva
en la precisin del mtodo y este punto menciona que para las matrices
biolgicas son consideradas como matrices complejas y que para este El CV%
del valor promedio no debe ser mayor que el 15%, excepto para el lmite
inferior de cuantificacin, el cual debe ser menor o igual que 20% para mtodos
cromatogrficos y para mtodos inmunolgicos, no debe ser mayor que el 20%,
excepto para el lmite inferior de cuantificacin, el cual debe ser menor o igual
que 25%.
La validacin de un mtodo es un requisito importante en la prctica de los
anlisis qumicos. Sin embargo, se suele considerar a la validacin de un
mtodo como algo que solamente se puede hacer en colaboracin con otros
laboratorios y en consecuencia, no se hace.
Mtodo bionaltico: conjunto de todos los procedimientos involucrados en la
obtencin, tratamiento, almacenamiento y anlisis de muestras (especmenes)
biolgicas para la determinacin cuantitativa de una sustancia en una matriz
biolgicas determinada.
Validacin de mtodos bionalticos: establecimiento de la evidencia
documentada de que un mtodo bionaltico es lo suficientemente fiable para la
obtencin de resultados precisos y exactos dentro de las especificaciones de
calidad establecidas previamente. La validacin de los mtodos se realiza
cuando:

La medicin analtica es importante (costo, salud, remediacin)

Por la obligacin profesional del analista: el cliente espera confiar en los

resultados informados y generalmente los cuestiona cuando aparece
algn conflicto.
Se desarrolla un nuevo mtodo
Se revisa un mtodo ya establecido para mejorar o extender a uno
nuevo Los diferentes parmetros que se miden para saber cul es el
desempeo de los trabajadores son:

Linealidad: denominada normalmente como curva patrn o curva de

calibracin. La linealidad del mtodo es su capacidad para obtener (dentro de
cierto intervalo) resultados que son directamente proporcionales a la
concentracin en la muestra de la sustancia que se pretende analizar.
Intervalo: el intervalo de un mtodo bioanaltico est definido por las
concentraciones comprendidas entre los niveles de concentracin superior e
inferior de la sustancia, en el cual se ha demostrado que el mtodo es preciso,
exacto y lineal.
Exactitud: capacidad de un mtodo para producir resultados lo ms prximos
posibles a los valores que son aceptados convencionalmente como verdaderos
o reales.
Las muestras biolgicas que se emplean usualmente para utilizarlos como
matrices en la determinacin de analtos son orina, saliva he incluso plasma
sanguneo; unas de las caractersticas de las muestras empleadas en esta
prctica son:
Orina: La orina es un fluido de desecho que presenta ciertas
caractersticas, tales como un color que se debe principalmente a la
presencia de uropigmentos, tambin se presenta olor que puede ser
fcilmente enmascarado por los olores de los alimentos que se
consumen, o bien por la produccin de amoniaco debido a la accin de
bacterias.
La orina normal es completamente transparente, aunque debido a la
presencia de sales y cristales puede adoptar un aspecto turbio, sobre
todo si la orina es concentrada y ha permanecido algn tiempo en
reposo, estas sales y cristales normales en la orina son: cido rico,
fosfatos,
uratos,
carbonatos
y
oxalatos;
est
compuesta
fundamentalmente por agua entre un 90-95%. Tambin es normal
encontrar hilos de mocos de las vas urinarias. Si la turbidez aparece en
la orina recin emitida ser por alguna de las siguientes causas:
presencia elevada de bacterias u hongos, de una cantidad importante de
leucocitos o hemates, presencia de moco de las vas urinarias debido a
una inflamacin de las mismas, lquido prosttico, semen, materia fecal y
alteraciones del pH.
Cuando la orina se ha contaminado y no es vlida como muestra exhala
un olor amoniacal debido a la degradacin de la urea. La orina puede
ver alterado su olor si la persona presenta determinadas enfermedades

como tirosinemia en donde se percibe un olor a rancio, o fenilcetonuria

con olor a ratones, etc. La excrecin de la orina normal en un adulto es
de 850-2000mL al da, apareciendo una cantidad media de 1500mL/da,
en los nios la cantidad es algo superior. La orina presenta un pH de 4.8
y 7.5, aunque en las personas que se alimentan balanceadamente su pH
normal es aproximadamente de 5 a 6.
Los salicilatos se han determinado tradicionalmente con el reactivo de Trinder,
Tcnica analtica de Trinder
Fundamento
El mtodo de Trinder es un test colorimtrico en el que el cido saliclico
Es determinado midiendo la absorbancia del complejo ion frricoSalicilato. El mtodo de Trinder se basa en la formacin de un complejo
De color prpura por reaccin de los salicilatos con nitrato frrico y la
precipitacin simultanea de las protenas sricas en presencia de cloruro
Mercrico en medio cido.
OBJETIVO:
Llevar a cabo el anlisis de una muestra biolgica con el propsito de conocer
la cantidad de salicilatos presentes en la muestra; mediante la observacin y
realizacin de una curva de calibracin. * Realizar de manera adecuada los
clculos para una correcta preparacin de la curva de calibracin * Preparar de
manera adecuada la soluciones.
Metodologa:
1.- pesar aproximadamente y bien conocidos 250 mg de salicilatos de sodio en
un porta muestras.
2.- Colocar el polvo pesado en un vaso de precipitados de 50 ml, y agregar
aproximadamente 25 ml de orina y agitarlo 25 veces o hasta disolver.
3.- trasvasar la solucin a un matraz volumtrico de 50 ml.
4.- con un poco de orina enjuagar el matraz de precipitados y pasar al matraz
volumtrico.
5.- llevar a la solucin a un aforo de 50 ml y agitar 25 veces (solucin stock)
6.- de la solucin anterior se tomara una alcuota de 1ml con la ayuda de una
pipeta volumtrica y colocarlo en un matraz volumtrico de 25 ml (solucin 1a).
Este paso realizarlo 2 veces ms y etiquetar las soluciones como: 1b y 1c
7.-de la solucin stock preparar soluciones con alcuota de 3,4y 5, y llevarlas a
un matraz volumtrico de 25 ml, dicha soluciones aforar y realizarlas 2 veces
cada una y etiquetarlas como a, b, y c segn el lugar que ocupe y el nmero
que le corresponda.

Resultados:
Solucin
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15

Concentracin (mcg/ml)
200.48
400.40
601.44
801.92
1002.4
200.48
400.90
601.44
801.92
1002.4
200.48
400.90
601.44
801.92
1002.4

Absorbancia
0.5455
0.9413
1.3619
1.8662
2.3797
0.6544
0.9752
1.4273
1.8856
2.2937
0.5908
1.0885
1.4553
1.9098
2.3916

Referencias

Dosal, M. A., & Villanueva, M. (2008). Introduccin a la Metrologa

Qumica. Curvas de Calibracin en los Mtodos Analticos. Antologa de
Qumica Analtica Experimental, 18-19. Recuperado el 26 de Febrero de 2014,
de http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Antologia_18909.pdf
Quer, A. (2008). l Laboratorio de Qumica Analtica. Introduccin al
Laboratorio de Qumica Analtica Experimental, 1-3. Recuperado el 26 de
Febrero de 2014, de
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Antologia_18909.pdf
Harris, Daniel. 2001. Anlisis Qumico Cuantitativo. Segunda edicin. Ed.
Revert, Barcelona, Espaa