Estructura de las protenas

La palabra protena proviene del griego protop (lo primero, lo principal, lo ms importante). La
protenas son las responsables de la formacin y reparacin de los tejidos, interviniendo en el
desarrollo corporal e intelectual.
Las protenas son biopolmeros (macromolculas orgnicas), de elevado peso molecular,
constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H), oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque
pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu),
magnesio (Mg), yodo (Y), entre otros elementos.
Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales (monmeros)
llamados aminocidos ( aa ), a los cuales se consideran como los "ladrillos de los edificios
moleculares proteicos". Estos edificios macromoleculares se construyen y desmoronan con gran
facilidad dentro de las clulas, y a ello debe precisamente la materia viva su capacidad de
crecimiento, reparacin y regulacin.
La unin de un bajo nmero de aminocidos da lugar a un pptido ; si el nmero de aa que forma
la molcula no es mayor de 10, se denomina oligopptido ; si es superior a 10, se
llamapolipptido y si el nmero es superior a 50 aa , se habla ya de protena .

Las protenas son, en resumen, biopolmeros de aminocidos y

su presencia en los seres vivos es indispensable para el
desarrollo de los mltiples procesos vitales.
Se clasifican, de forma general, en Holoprotenas y Heteroprotenas segn estn formadas,
respectivamente, slo por aminocidos o bien por aminocidos ms otras molculas o elementos
adicionales no aminoacdicos.
La organizacin de una protena viene definida por cuatro niveles estructurales
denominados: estructura primaria, estructura secundaria, estructura terciaria y estructura
cuaternaria . Cada una de estas estructuras informa de la disposicin de la anterior en el espacio.
Estructura primaria

La estructura primaria
es la secuencia de
aminocidos de la
protena. Nos indica
qu aminocidos
componen la cadena
polipeptdica y el orden
en que dichos
aminocidos se
encuentran. La funcin
de una protena
depende de su
secuencia y de la
forma que sta adopte.
Estructura secundaria
La estructura secundaria es la disposicin de la secuencia de aminocidos en el espacio. Los
aminocidos, a medida que van siendo enlazados durante la sntesis de protenas y gracias a la
capacidad de giro de sus enlaces, adquieren una disposicin espacial estable, la estructura
secundaria .
Existen dos tipos de estructura secundaria:

1.- La a(alfa)-hlice
Esta estructura se forma al enrollarse helicoidalmente sobre s
misma la estructura primaria.
Se debe a la formacin de enlaces de hidrgeno entre el -C=O
de un aminocido y el -NH- del cuarto aminocido que le sigue.

2.- La conformacin beta

En esta disposicin los
aminocidos no forman una
hlice sino una cadena en
forma de zigzag, denominada
disposicin en lmina plegada.
Presentan esta estructura
secundaria la queratina de la
seda o fibrona.

Estructura terciaria
La estructura terciaria informa sobre la disposicin de la estructura secundaria de un polipptido al
plegarse sobre s misma originando una conformacin globular.
En definitiva, es la estructura primaria la que determina cul ser la secundaria y por tanto la
terciaria.
Esta conformacin globular facilita la solubilidad en agua y as realizar funciones de transporte,
enzimticas, hormonales , etc.
Esta conformacin
globular se mantiene
estable gracias a la
existencia de enlaces
entre los radicales
R de los aminocidos.
Aparecen varios tipos
de enlaces:
1.- el puente
disulfuro entre los
radicales de
aminocidos que
tienen azufre.
2.- los puentes de
hidrgeno.
3.- los puentes
elctricos.

4.- las interacciones

hidrfobas .
Estructura cuaternaria
Esta estructura informa de la unin, mediante
enlaces dbiles (no covalentes) de varias
cadenas polipeptdicas con estructura terciaria,
para formar un complejo proteico. Cada una de
estas cadenas polipeptdicas recibe el nombre
de protmero .
El nmero de protmeros vara
desde dos, como en
la hexoquinasa; cuatro, como en
la hemoglobina , o muchos, como la cpsida
del virus de la poliomielitis, que consta de
sesenta unidades proteicas.
Funciones y ejemplos de protenas

Las protenas determinan la forma y la estructura de las clulas y dirigen casi todos los procesos
vitales. Las funciones de las protenas son especficas de cada una de ellas y permiten a las
clulas mantener su integridad, defenderse de agentes externos, reparar daos, controlar y regular
funciones, etc...
Todas las protenas realizan su funcin de la misma manera: por unin selectiva a molculas. Las
protenas estructurales se agregan a otras molculas de la misma protena para originar una
estructura mayor. Sin embargo, otras protenas se unen a molculas distintas: los anticuerpos, a los
antgenos especficos; la hemoglobina, al oxgeno; las enzimas, a sus sustratos; los reguladores de
la expresin gentica, al ADN ; las hormonas, a sus receptores especficos; etc...

A continuacin se exponen algunos ejemplos de protenas y las funciones que desempean:

Funcin estructural

Algunas protenas constituyen estructuras celulares.

Ciertas glucoprotenas forman parte de las membranas
celulares y actan como receptores o facilitan el
transporte de sustancias.
Las histonas, forman parte de los cromosomas que
regulan la expresin de los genes.
Otras protenas confieren elasticidad y resistencia a
rganos y tejidos:
El colgeno del tejido conjuntivo fibroso.
La elastina del tejido conjuntivo elstico.
La queratina de la epidermis.
Las araas y los gusanos de seda segregan fibroina
para fabricar las telas de araa y los capullos de seda,
respectivamente.
Funcin enzimtica
Las protenas con funcin enzimtica
son las ms numerosas y
especializadas.
Actan como biocatalizadores de las
reacciones qumicas del metabolismo
celular.
Ver: PSU: Biologa; Pregunta
04_2006
Funcin hormonal

Algunas hormonas son de naturaleza proteica, como la insulina y

el glucagn (que regulan los niveles de glucosa en sangre), o las
hormonas segregadas por la hipfisis, como la del crecimiento o
la adrenocorticotrpica (que regula la sntesis de
corticosteroides) o la calcitonina (que regula el metabolismo del
calcio).

Funcin reguladora

Algunas protenas regulan la expresin de

ciertos genes y otras regulan la divisin
celular (como la ciclina).

Funcin homeosttica
Algunas mantienen el equilibrio osmtico y actan junto con otros sistemas
amortiguadores para mantener constante el pH del medio interno.
Funcin defensiva

Las

inmunoglobulinas
actan
anticuerpos frente a posibles antgenos.

como

La trombina y el fibringeno contribuyen a la

formacin de cogulos sanguneos para evitar
hemorragias.

Las mucinas tienen efecto germicida y

protegen a las mucosas.

Algunas toxinas bacterianas, como la del

botulismo, o venenos de serpientes, son
protenas fabricadas con funciones defensivas.
Funcin de transporte

La hemoglobina transporta oxgeno en la

sangre de los vertebrados.

La hemocianina transporta oxgeno en la

sangre de los invertebrados.

La mioglobina transporta oxgeno en los

msculos.

Las lipoprotenas transportan lpidos por la

sangre.

Los citocromos transportan electrones.

Funcin contrctil

La actina y la miosina constituyen las miofibrillas responsables de la contraccin

muscular.

La dineina est relacionada con el movimiento de cilios y flagelos.

Funcin de reserva

La ovoalbmina de la clara de huevo, la gliadina del grano de trigo y la hordena de la

cebada, constituyen la reserva de aminocidos para el desarrollo del embrin.

La lactoalbmina de la leche.

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Diferencias Entre
Diferencias entre ADN y ARN

Diferencias entre ADN y ARN

QU DIFERENCIA HAY ENTRE ADN Y ARN?
Existen numerosas diferencias entre el ADN y el ARN.
Las ms importantes se refieren a la presencia de diferentes glucosas en
las molculas de ambas. Ribosa en al ARN y desoxirribosa en el ADN. De
aqu vienen sus nombres:

ADN : CIDO DESOXIRRIBONUCLEICO

ARN : CIDO RIBONUCLEICO.
1 A pesar de que el ADN y el ARN consisten en unidades repetidas de
nucletidos, como hemos visto antes, la diferencia est en la glucosa.
Por lo dems, el ARN una gama mucho ms amplia de cidos nucleicos,
unas 4 veces ms grande comparado con el ADN. Esta singularidad del
ARN le confiere una mayor capacidad para asumir diferentes formas y
funciones.
2 El ADN lleva a cabo la parte ms importante, que es la de seleccionar
el cdigo gentico que se va a transmitir a la siguiente generacin, y el
ARN va a ser el encargado de transmitir dicho cdigo, digamos que el
ADN lo escribe y el ARN lo transporta. El ADN funciona en dos fases y el
ARN en una sola fase, pero los dos son de una importancia crtica para
la evolucin y ambos se necesitan el uno del otro.

3 La desoxirribosa en el ADN contiene enlaces CH por lo que es ms

estable y reacciona menos en condiciones alcalinas. El ADN resulta muy
difcil de atacar por enzimas u otras sustancias perjudiciales. En cambio,
la diferencia con la ribosa, es que es ms reactiva con enlaces C-OH y no
es tan estable en condiciones alcalinas, lo que le confiere una gran
vulnerabilidad a los ataques de enzimas o la exposicin a rayos
ultravioletas.
4 Tanto el ADN como el ARN son cidos nucleicos, pero tienen algunas
diferencias bsicas. Tal y como hemos explicado antes, el ADN agrupa
sus protenas en forma de hlices pero a pares, siendo una doble
cadena, mientras que el ARN, forma una hlice simple.

5 La misin final del ADN es la de llevar a cabo el almacenamiento a

largo plazo y la trasferencia al futuro vstago de la informacin gentica.
El ARN, por otra parte, realiza la funcin de mensajero entre el ADN y los
ribosomas.
6 El ADN se encuentra siempre en el ncleo, en cambio el ARN puede
encontrarse tanto en el ncleo como en el citoplasma.
Resulta curioso saber que los rasgos de una persona estn directamente
relacionados con el ADN y el ARN. No cabe duda de que ambos son
decisivos para la propia evolucin de las especies y forman parte de la
clave de la vida.
Podemos resumir las anteriores diferencias en estas 4 diferencias
principales:

El ARN usa ribosa y el ADN desoxirribosa

El ADN tiene doble cadena de hlice y el ARN cadena simple
El ADN es estable en condiciones alcalinas, pero al ARN no lo es.
El ADN almacena y guarda la informacin gentica, pero el ARN
hace de mensajero.

Qu es lo que se traduce? En realidad se traduce el lenguaje del ADN, que se lee

de a bases, tanto en el ADN como en el ARN, a un nuevo lenguaje que es el de
los aminocidos que formarn un polipptido. Por eso se dice que un gen codifica
un polipptido.
El ARNm tanto en procariotas como eucariotas lleva informacin para la sntesis
de polipptidos y esto se hace gracias a que los ribosomas y los ARNt van
leyendo el ARN desde su extremo 5 al 3 donde desde el codn de incio (AUG)
hasta el de stop o paro (UAG,UAA y UGA) de a cada tres nuclotidos o codones,
as se van incoporando aminocidos que le corresponde a cada codn hasta llegar
al stop donde finaliza la sntesis de la protena.
Recordemos lo visto en la pgina de replicacin y trasncripcin

Estructura general de un gen eucariota. La Regin verde es la

que se traduce a una protena (desde el codn de incio (UAG)
hasta el de stop (UGA, UAA o UAG)

La traduccin de un lenguaje a otro debe realizarla un verdadero traductor que

comprenda ambos lenguajes. Este traductor es el ARN de transferencia (ARNt),
ya que puede leer bases en el ARNm, a travs de su anticodn que se une por
complementariedad al codn del ARNm, y puede asociarse a un aminocido
gracias a la unin de realiza la aminoacil sintetaza que lo carga con su respectivo
aminocido en su extremo 3.
La sntesis proteica se desarrolla en el citoplasma celular donde se encuentran los
ribosomas, que son partculas que en procariotas estn formadas por 3 molculas
de rRNA asociados con alrededor de 52 molculas proteicas. Estos proporcionan
el sistema enzimtico necesario para realizar la unin peptdica entre los
aminocidos que van a integrar la protena, el sitio de unin para el mRNA, y el
sitio de anclaje para los tRNA que portan los aminocidos; estos sitios se
denominan A y P. Los tRNA se asocian con las bases del mRNA mediante la
interaccin codn-anticodn.

Los primeros descubrimientos sobre el cdigo gentico mostraron que la

informacin proveniente del ADN (transcripta a un mRNA) se lee de a tripletes
de bases o nucletidos. Cada triplete de bases se corresponde con un aminocido.
A esta informacin en el ARNm que lleva la informacin para la sntesis de
protenas estar dada por el Codn de incio (AUG) y el codn de stop (UGA,
UAA o UAG). Ese es el correcto marco de lectura de cada codn.

ARN de transferencia
Como sabemos, para que la sntesis proteica se lleve a cabo es necesario que est
presente una molcula de mRNA que proviene del ncleo, que lleva la
informacin necesaria para decidir qu protena se va a sintetizar. Este mRNA
deber asociarse a un ribosoma que le brindar el ambiente necesario para la
traduccin y finalmente ser necesario que aparezca el primer aminocido
codificado por el primer codn del mRNA. Lo cierto es que el aminocido no
puede unirse solo sino que necesita una molcula adaptadora que lo porte. Esta
molcula es el tRNA que posee en un extremo el aminocido correcto y en otro
extremo tiene un triplete de bases llamado ANTICODON que se aparea por
complementariedad de bases con el codn presente en el mRNA.
Como cualquier RNA, est formado por una secuencia de bases (75 a 85 aprox.),
que se representa en la clsica forma de hoja de trbol debido al apareamiento de
bases que ocurre en cortas secuencias de su cadena (Estructura secundaria).

Cada ARNt est codificado en el ADN y hay uno para cada tipo de aminocido, y
la aminoacil sinteteza lo reconoce por esta estructura tridimensional en forma de
L. O sea que hay ARNt de leucinas , de argininas, de serinas etc. La estructura
tridimensional tambin le sirve para para poder asociarse a los ribosomas en el
proceso de la traduccin de protenas.
En este proceso entonces participan tres tipos de ARN, el de transferencia, el
ribosomal que se asocia a protenas formando los ribosomas y el ARNm que ser
ledo para sintetizar un polipptido.
La estructura de los ARN mensajeros ya ha sido descrita y sabemos que la
traduccin comienza en un triplete de bases (AUG) llamado el codn de inicio.
Este codn determinar entonces como se leer el ARNm, o sea de a tripletes o
codones que le siguen al AUG, por eso se dice que determina el marco de lectura
del ARNm.
Este tipo de estructura terciaria le brinda a la molcula la posibilidad de, por un
lado, poder aparear su anticodn con el codn del mRNA de una forma poco
habitual, es decir que permite que se apareen G con U por ejemplo, adems del
clsico A-U y C-G; y esta configuracin en forma de L le permite tener lo ms
alejado posible al anticodn del extremo aceptor, esto es necesario porque el
anticodn se asocia con el codn sobre la subunidad pequea del ribosoma y el

aminocido que est en el extremo aceptor se une con otro aminocido sobre la
subunidad grande del ribosoma.
El enlace entre un determinado aminocido y su correspondiente tRNA es
catalizado por la Aminoacil sintetaza, que es especfica para cada
aminocido, y por lo tanto para todos los tRNA que lo puedan portar. A los tRNA
diferentes que puedan portar el mismo aminocido, se los llama iso-aceptores.
La enzima produce la reaccin de carga del tRNA con su correspondiente
aminocido en dos pasos:
*

Aminocido + ATP ------- Aminoacil AMP + Pirofosfato

Aminoacil AMP + tRNA ------- Aminoacil tRNA + AMP

Un tRNA cargado con un aminocido se denomina Aminoacil tRNA y

cuando porta una cadena polipeptdica en crecimiento se denomina PeptidiltRNA.
Anteriormente se crea que la enzima reconoca al tRNA correspondiente a un
determinado Aminocido, por su anticodn ya que tericamente es
complementario del codn y por lo tanto de la informacin del DNA, pero luego
se comprob que la enzima reconoce al tRNA por su conformacin
exclusivamente y es tan especfica que una mutacin en una base del mismo hara
que la enzima ya no pueda reconocerlo.

Los Ribosomas
Los ribosomas son partculas ribo-nucleo-proteicas compuestas por dos
subunidades. Cada subunidad esta formada por varias protenas asociadas a
molculas de rRNA.
En el caso de los procariotas el ribosoma es de 70 S de coeficiente de
sedimentacin y las subunidades son de 30 S y 50 S. La subunidad pequea 30 S
est compuesta por el rRNA 16 S asociado a 21 protenas (S de small: S1 a S21)
en cambio la subunidad grande (50 S) est formada por los rRNA 5S y 23 S,
ambos asociados a 34 protenas denominadas L de large (L1 a L34).
En cambio en el caso de los eucariotas el ribosoma es 80 S y las subunidades son
de 40 S y 60 S. La subunidad pequea (40 S) est constituida por el rRNA 18 S y
33 protenas, y la 60 S integrada por los rRNA 5 S/5,8 S/28 S y 49 protenas.

Normalmente la subunidad pequea y la grande estn separadas y se asocian

cuando la subunidad pequea se une al mRNA y al primer tRNA (iniciador),
recin en este momento se une la subunidad grande. Este proceso difiere un tanto
dependiendo de si se trata de eucariotas o procariotas. Se describir ms
detalladamente cuando hablemos de la traduccin en s y de los factores
asociados que intervienen en ella.
De hecho, no solo hay un ribosoma que se asocia al mRNA sino que puede haber
varios, a los que se llama polirribosomas o polisomas, que van trabajando en
distintos sectores del mRNA.
Siempre los ribosomas se desplazan sobre el mRNA en direccin 5- 3,
traduciendo codn a codn el marco de lectura.
El ribosoma contiene el sitio P en el que aloja al peptidil-tRNA, o sea al que
porta la cadena peptdica en crecimiento, y el sitio A en que aloja al aminoaciltRNA, o sea al que trae al prximo aminocido que ser aadido. La energa
necesaria para la unin entre los aminocidos la proporciona el mismo ribosoma
y la enzima que cataliza la reaccin es la peptidil transferasa, que se encarga de
unir siempre el extremo carboxilo del aminocido del peptidil-tRNA y el grupo
amino del aminocido que lleva el aminoacil-tRNA. As se rompe el enlace que
tena el peptidil-tRNA con la cadena polipeptdica y queda libre o desacilado,
quedando as la cadena polipeptdica con el nuevo aminocido unida al
aminoacil-tRNA en el sitio A, hasta que el ribosoma se traslade un codn sobre el
mRNA, quedando as el ahora llamado peptidil-tRNA con la cadena en el sitio P
y el sitio A vaco.
El nico aminoacil-tRNA que puede entrar directamente al Sitio P, sin pasar por
el sitio A previamente es el tRNA iniciador, o sea aquel que porta el aminocido
que se corresponde con el codn de inicio (AUG), es decir Metionina (Met) o
Formil Metionina (fMet) segn se trate de eucariotas o procariotas
respectivamente.

El cdigo del ADN o sea el cdigo

gentico:
A pesar de que solo hay 20 aminocidos, Francis Crick descubri que el cdigo
gentico se lee de a tres bases.

Cuadro con los aminoacidos y sus abreviaturas de tres letras y una letra.

Se conoce la existencia de 20 aminocidos diferentes. Sabemos tambin que en el

mRNA hay 4 tipos de bases diferentes (A, G, C y U); por lo tanto, si la
informacin se leyera de a una sola base slo habra 4 tipos de aminocidos

distintos, por otro lado si se tomara la informacin de a dos bases, la

combinacin de 4 bases elevado al cuadrado, nos dara 16 tipos de aminocidos,
lo que tampoco alcanza; finalmente si las 4 bases se toman de a tres, tendramos
64 posibles aminocidos, o mejor dicho tenemos 64 distintos tripletes de bases,
tambin llamados codones. Como vemos, existen muchos ms codones que
aminocidos. Con el tiempo se descubri que algunos aminocidos estn
codificados por varios codones o sea que hay codones redundantes. A esto se lo
llama REDUNDANCIA DEL CODIGO, o se dice que el cdigo gentico es
DEGENERADO.

Varios codones un aminocido

Los codones estn escritos con la base 5 terminal a la izquierda por convencin.
Abreviaturas convencionales de tres letras: *Ala: Alanina
*Arg: Arginina *Asp: Aspartato *Asn: Asparragina *Cys: Cistena *Glu:
Glutamina *Gly: Glicina *Gln: Glutamato *His: Histidina *Ileu: Isoleucina *
Leu: Leucina *Lys: Lisina * Met: Metionina *Phe: Fenilalanina *Pro: Prolina
*Ser: Serina *Thr: Treonina *Trp: Triptofano *Tyr: Tirosina *Val: Valina
Obsrvese que la mayora de los aminocidos estn representados por ms de un
codn y que la variacin entre esos codones para el mismo Aa, en general es en la
tercera base.
El significado de cada uno de los codones se descubri a travs de ensayos in
vitrocon soluciones de polinucletidos, ribosomas, una fuente de energa y un
mRNA; as se descubri que por ejemplo el cido poliuridlico codificaba una
cadena proteica formada slo por fenilalanina por lo tanto el codn UUU codifica

para este aminocido. As tambin se encontr que 3 de los 64 codones no

codifican para ningn aminocido (UAG, UGA y UAA) y por lo tanto son
codones de fin de cadena o de terminacin de la sntesis proteica, tambin
llamados codn Ambar, Opalo y Ocre respectivamente.
Por todo esto se descubri luego que no era necesario que hubiera 64 ARNt para
cada triplete sino que existen muchos menos ya que como la tercera base del
codn del mensajero es redundante, la primera base del anticodn puede
aparearse de forma no usual aceptando que algunas bases se apareen en forma
anormal o se cambia quimicamente permitiendo que reconozcan a ms de una
tercera base. A esto se le llama apareamiento tipo Wobble.

La traduccin de protenas es un proceso rpido en los procariotas casi

simultneo a la transcripcin y en los eucariotas en el citoplasma con el ARNm
maduro con una protena que se une a la cola poly A (poly A binding protein) y
esto colabora a que la traduccin sea ms eficiente.
Tiene varios pasos la inciacin en la que difieren las bacterias de los
organismos superiores y el resto de las etapas son iguales en ambos organismos.
Las siguientes etapas son la elongacin y translocacin que son seguidas
una de otra, dnde comienza a crecer la cadena polipeptdica y
la terminacin que es el fin de la traduccin cuando aparece un codn de stop
(UGA; UAA Y UAG).

Fase de Iniciacin

Cada mRNA tiene una secuencia de bases precedente al codn de inicio que es
complementaria a una secuencia de consenso que se encuentra en el rRNA 16 S,
la cul se denomina secuencia de Shine Dalgarno y que permite el apareamiento
entre los dos RNA (mRNA y rRNA) por complementariedad de bases, formando
el complejo de iniciacin.
Este complejo est integrado tambin por protenas indispensables para el inicio
y que son llamadas Factores de iniciacin, que intervienen en la disociacin de
los ribosomas, la unin al mRNA, la unin al tRNA iniciador y alguna otra
funcin desconocida an. En procariotas se conocen 3 de estos factores, y en
eucariotas 11 factores.
El Factor de Iniciacin 3 (IF-3) en procariotas, se une a la subunidad pequea del
ribosoma, y los dos se unen al mRNA, por lo tanto ste participa de la separacin
de las subunidades del ribosoma, luego el IF-2 es el encargado de traer al tRNA
iniciador (tRNA-f Met). Al unirse el IF-2 con su tRNA, ambos se asocian con el
complejo que se haba formado entre la subunidad pequea, el IF-3 y el mRNA,
y forman entonces en conjunto el Complejo de Iniciacin. Ms tarde se
une al complejo la subunidad grande del ribosoma, quedando liberados al medio
los factores de iniciacin.
En el caso de los eucariotas hay muchos ms factores que intervienen en la
iniciacin, adems de existir algunas diferencias con respecto al tRNA iniciador
que porta metionina normal, la subunidad pequea es 40 S y primero sta debe
reconocer el extremo 5 del mRNA y desde all se desplaza sobre el mismo hasta
encontrar el codn de inicio (Teora de scanning). Estas diferencias las realiza
gracias a la gran cantidad de factores asociados al ribosoma.
No se conoce an con exactitud como el IF-2 reconoce al tRNA-fMet en los
procariotas, pero se supone que sera por tener el grupo amino bloqueado. En los
eucariotas en cambio el tRNA lleva metionina normal lo que no lo hara diferente
de un tRNA-Met comn, pero est comprobado que en su extremo aceptor hay
una de las bases que no est unida por puente de H a su complementaria y este
cambio de configuracin sera lo que lo distingue.
Es importante aclarar que tanto el tRNA iniciador de procariotas como el de
eucariotas tienen propiedades especiales que los distinguen de otros tRNA no
iniciadores.

Particularidades de la Fase de Iniciacin en

PROCARIOTAS
El iniciador tRNA-fMet en primera instancia es acilado o cargado con Met, y
subsecuentemente modificado o formilado por la tRNA metionil
transformilasa que le transfiere un grupo formil a la Met previamente
cargada. Esta enzima transformilasa NO formila la Met de un tRNA-Met no
iniciador, por lo tanto debe haber estructuras diferentes entre el tRNA-Met y el
tRNA-fMet. As tambin deben existir estructuras que los diferencien en el
ribosoma, ya que slo el tRNA-fMet puede ingresar al sitio P sin ocupar
previamente el sitio A como todos los otros tRNA.
Las diferencias encontradas hasta el momento seran por un lado que la base 5
terminal no tiene puente de H con la base opuesta en el extremo aceptor. Por otro
lado existe un puente de H entre un U adyacente al anticodn y una ribosa del
anticodn en todos los tRNA que no aparece en el tRNA iniciador, lo que le da
una estructura ms abierta al loop anticodn. Tambin se describen diferencias en
el extremo aceptor y en el loop DHU.
Otra diferencia encontrada es la interaccin codn anticodn del tRNA-fMet que
podra ser un Wobble en la primera posicin del anticodn ya que este tRNA
iniciador procariota no slo puede aparearse con el codn AUG sino tambin con
el codn para Val (GUG) y con los de Leu (UUG y CUG) que ocasionalmente
pueden ser usados como codones de paro o stop tambin. Este efecto Wobble
puede ser explicado por la estructura ms abierta del loop anticodn ya
mencionada.

Inciacion traduccion procariotas

INICIACION DE LA TRADUCCION EN EUCARIOTAS

Secuencia de consenso Kozak
La secuencia descripta por Kozak (1987) se encuentra en la mayora de los
mRNA eucariotas y se describe como 5 gccRccAUGG 3, donde R puede ser
una purina (A o G) tres bases antes del AUG. Esta secuencia es reconocida por
el ribosoma como sitio de inicio de la traduccin. El ribosoma la necesita para
saber donde comenzar a traducir. Seria el equivalente a la secuencia de Shine
Dalgarno en bacterias. NO debe confundirse con secuencias denominadas RBS
(ribosome binding site) que pueden ser el 5 cap del mensajero o los sitios
internos IRES .
Algunas de las bases son ms conservadas que otras y por lo tanto mas
importantes para que la traduccin se produzca. Mayormente las ms
conservadas son AccAUGG.
Iniciacin de la traduccin cap dependiente en eucariotas
La iniciacin de la traduccin en eucariotas involucra ciertas protenas que tienen
una afinidad especial por el 5 cap propio de los mensajeros eucariotas. Algunas
de estas protenas son la subunidad pequea 40S del ribosoma y los factores de
iniciacin que son indispensables para sostener al mensajero en una posicin. El
factor eIF3 se asocia con la subunidad pequea del ribosoma y juega un rol
importante manteniendo a las subunidades del mismo separadas evitando su
asociacin prematura. A su vez interacta con el complejo eIF4F que contiene a
varios factores: eIF4A, eIF4E and eIF4G. El factor 4E es la protena de union al
cap o cap binding protein y a veces es clivado por proteinas virales para evitar
que la clula infectada traduzca su propios mensajeros. El eIF4A es una helicasa
dependiente de ATP que se encarga de abair el RNA que se asocia por
complementariedad formando horquillas doble hlice. Otra protena importante
es la Poly-A binding protein o protena de union a la cola poly Ade la gran
mayoria de los mensajeros. Esta protena juega un importante rol en la
circularizacin del mensajero durante la traduccin.
El complejo de preiniciacin formado por la subunidad pequea y el mensajero
acompaados por los factores proteicos realiza el scanning o barrido del mRNA
desde el extremo 5 al 3. en busca del codn de inicio AUG que codifica para
Metionina (Met).

El ARNt iniciador viene cargado con Met formando parte del complejo con el
ribosoma y por lo tanto la traduccin comenzar con Met, a menudo luego
removida por una proteasa. El ARNt inciador trado por el factor eIF2, se
introduce en el sitio P de la subunidad pequea del ribosoma y se hidroliza GTP
en esa unin. Esto provoca junto con la liberacin de algunos factores en la
asociacin de la subunidad grande (60S). As el ribosoma una vez completo est
listo para inciar la elongacin y translocacin hasta encontrar el codn de stop.
Inciacin cap independiente.

El ejemplo ms estudiado de la inciacin cap

independiente es el de la entrada al sitio interno del
Ribosoma (Internal Ribosome Entry Site IRES). En estos casos
no es necesario el scannig o barrido. El ribosoma es llevado
por factores llamados trans actin (ITAFs derivado de IRES
trans actin factors) sorteando el barrido. Este modo de inciio
es recientemente conocido y es usado en clulas que
requieren una traduccin particular debido a factores de
stress o incapacidad de traducir a la mayora de los
mensajeros. Por ejemplo en factores que responden a la
apoptosis o respuestas inducidas frente a stress.

Inciacin eucariotas traduccion

Fuente: wikipedia

Fase de elongacin
El sitio A ser ocupado entonces por un tRNA determinado por el siguiente
codn del mRNA y se le unir el aminocido que est en el sitio P (Metionina)
por un enlace covalente que realiza la peptidil transferasa, producindose de esta
forma un enlace entre el grupo amino del aminocido que ingresa y el grupo
carboxilo del aminocido anterior (o la cadena en crecimiento). De esta forma
queda el tRNA iniciador sin aminocido o sea desacilado y el sitio P libre.
As cada vez que ingresa un tRNA cargado al sitio A y se produce la unin entre
el grupo COOH del aminocido de la cadena en crecimiento y el grupo NH2 del
aminocido del sitio A, se cumple la fase de elongacin.
Este proceso tambin esta regido por protenas llamadas factores de elongacin,
que colaboran con la unin de los aminoacil-tRNA. Se descubri en procariotas
que este Factor de elongacin tiene dos componentes, el EF-Tu y EF-Ts (Uno
termolbil y otro termoestable).

Fase de translocacin
Ahora el ribosoma se desplaza un codn o tres bases, de modo que por un lado
libera al tRNA que estaba en sitio P e introduce en el mismo al que estaba en el A
(que es un peptidil tRNA ya que porta dos aminocidos) y de esta forma queda
nuevamente el sitio A libre para aceptar un nuevo Aminoacil tRNA. Este
movimiento se realiza en direccin 5-3 de la cadena de mRNA.
El proceso contina hasta que en el sitio A queda expuesto un codn de
terminacin, que no codifica para ningn aminocido y que ser reconocido por
un factor de liberacin.

Fase de terminacin

El factor de liberacin perturba la actividad de la peptidil transferasa, por lo tanto

sta cataliza la unin de una molcula de agua al peptidil tRNA en lugar de un
grupo NH2 de un aminocido. De esta forma queda el extremo COOH libre de la
cadena proteica recin formada liberado del tRNA que la portaba (peptidil
tRNA). Esta cadena proteica se libera as al citoplasma pudiendo luego sufrir
procesos pos traduccionales que la modifiquen activndola o desactivndola
como la fosforilacin por ejemplo.

Los procesos se reunen en los siguientes esquemas

Este es el inicio de la traduccin en procariotas

La elongacin y translocacin del ribosoma o sea que se corre un triplete mas

hacia el extremo3 del mensajero

Finalizacin de la traduccin de la cadena de polipptidos

En eucariotas la iniciacin es mas compleja y puede ser cap dependiende o

independiente. Incluso puede circularizarse el ARN mensajero para que la tasa de
traduccin aumente.

Este esquema ilustra el comienzo de la traduccin en los eucariotas, donde se ve

claramente que es mas compleja que la procariota.

En las bacterias el inicio o sea la regin que se reconoce por el complejo de inicio
de la traduccin se denomina secuencia de Shine Dalgarno y es donde se unen
el mensajero y la subunidad pequea del ribosoma.

1. 3. Qu es el AND?El ADN es el cido Desoxirribonucleico.Es el tipo de molcula ms

complejaque se conoce. Contiene la informacinnecesaria para poder controlar
elmetabolismo un ser vivo. El ADNes el lugar donde reside la informacingentica de
un ser vivo.
2. 4. La estructura del ADNCada molcula de ADN est formada por dos cadenas conun
elevado nmero de compuestos qumicos llamadosnucletidos. Estas cadenas forman
una doble hlice. Cadanucletido est formado por tres unidades Una molcula
llamada desoxirribosa Un grupo fosfato Cuatro posibles compuestos nitrogenados :
adenina, guanina, timina y citosina.
3. 5. Procesos que sufre el ADN El material gentico de cualquier organismo (procariota
o eucariota) est sometido a una serie de procesos cclicos que aseguran la
realizacin de sus dos funciones esenciales: la transmisin de la informacin gentica
y la expresin de sa informacin gentica.
4. 6. Los ARN El cido ribonucleico es un cido nucleico formado por una cadena de
ribonucletidos. Est presente en las clulas procariotas y en las eucariotas, y es el
nico material gentico de ciertos virus (virus ARN)..El ADN no puede actuar solo, y se
valedel ARN para transferir esta informacindurante la sntesis de protenas.
5. 7. La reduplicacin del ADN molcula de ADN inicial Permite al ADN duplicarse .De
esta manera de una molculade ADN nica, se obtienen dos o ms "clones" de la
primera. La molcula de ADN se abre por ruptura de los puentes de hidrgeno entre
las bases complementarias liberndose dos hebras y la ADN polimerasa sintetiza la
mitad complementaria aadiendonucletidos que se encuentrandispersos en el ncleo.
De estaforma, cada nueva molcula es igual a la primera.

6. 8. La transcripcin del Es el proceso por el que se transmite la informacin

ADNcontenida en el ADN al ARN.Este proceso se lleva a cabo por la ARN polimerasa
que utiliza como molde una de las dos hebras del ADN, la denominada hebra
codificante. Durante elproceso de transcripcin sereconoce un sitio especficode la
molcula de ADN en el que se van a unir las enzimas.
7. 9. En clulas procariticas existe una serie de protenas que pueden un irse a la ARN
polimerasa. Estas protenas se denominan factores sigma. En clulas eucariticas la
unin de la ARN polimerasa a un promotor o a otro viene regulada por la unin de
otras muchas
protenashttp://www.stolaf.edu/people/giannini/flashanimat/molgenetics/transcription.sw
f
8. 10. Es el proceso por el que la La traduccin del ADN informacin gentica contenida
en el ADN y transcrita en una ARNmensajero va a ser utilizada para sintetizar
unaprotena. El proceso se lleva a cabo en los ribosomas.
9. 11. La traduccin del mensaje gentico desde el ARN hasta una protena no es
suficiente, en algunos casos, para que se exprese correctamente. Es necesario que el
polipptido que se va sintetizando por el ribosoma se pliegue de forma adecuada para
que pueda desarrollar su funcin biolgica

Por Dr. Ananya Mandal, MD

Hay varios tipos y formas de ARN. Por ejemplo, el ARN mensajero (ARNm) lleva la
informacin desde el ADN al ribosoma en el citoplasma donde realiza la sntesis de
protena real (traduccin).
Tipos de ARN pueden definirse como:

ARN mensajero (ARNm)

Esto est formado por el proceso de transcripcin. La cadena de ADN acta como una
plantilla en la formacin de esta hebra de RNA. El ARNm lleva el cdigo gentico del
ADN en el citoplasma a los ribosomas para su traduccin del ARN en un filamento de
protena o polipptido.

ARN ribosmico
Esto ayuda al ARNm y el ARN de transferencia a unirse para formar la cadena
polipeptdica.

ARN de transferencia o ARNt

Hay al menos 20 especies de ARNt y estos actan en traer las bases para formar los
aminocidos de la cadena polipeptdica.

ARN no codificante o ARNt

Estos son codificados por genes de RNA y tambin deriva de intrones de ARNm.

Transferencia-mensajero RNA (tmRNA)

Esto se encuentra en muchas bacterias y plastos. Estas etiquetas las protenas
codifican por el ARNm que carecen de codones de parada para la degradacin e impide
que el ribosoma calado.

Ribozimas (enzimas RNA)

Algunos RNAs son enzimas. Durante muchos aos se crea ampliamente que slo
protenas podran ser enzimas. RNAs son conocidos a adoptar estructuras terciarias
complejas y actuar como catalizadores biolgicos. Estas enzimas RNA son conocidas
como ribozimas y exhiben muchas de las caractersticas de una enzima clsica, como
un sitio activo, un sitio de enlace para un substrato y un sitio de enlace para un
cofactor, como un ion de metal.
Una de las ribozimas de primera en ser descubierta fue ARNasa P, una ribonucleasa
que participa en la generacin de molculas de tRNA de mayor tamao, precursor
RNAs. ARNasa P se compone de RNA y protenas; Sin embargo, la porcin de RNA solo
es el catalizador.

ARNs reguladores
Estos RNAs sirven para regular el proceso de la expresin gnica. MicroRNAs (miRNA;
21-22 nt) por ejemplo son encontrados en eucariotas y actuar a travs de ARN de
interferencia (ARNi). Estos miRNA y enzimas pueden descomponer ARNm que es
complementario a la miRNA. Esto puede bloquear el ARNm de ser traducido, o aceleran
su degradacin.
Por otro lado pequeos RNAs de interferencia (siRNA; 20-25 nt) a menudo son
producidos por la degradacin del ARN viral, tambin hay fuentes endgenas de ARNsi.
Actan similares a miRNA. Un ARNm puede contener elementos reguladores, como
riboswitches, en la 5' UTR o 3' UTR; Estos elementos cis reguladores regulan la
actividad de ese mRNA.

RNAs en proceso de la estructura terciaria de RNA

RNAs muchos participan en la modificacin de otros RNAs. Por ejemplo, los intrones
son empalmados fuera del pre-mRNA por catabolizar, que contienen varios RNAs
pequeos de nucleares (snRNA).

RNA como material gentico o genomas de ARN

Como el ADN, RNA puede llevar la informacin gentica. Esto se ve en muchos virus de
ARN.

ARN en la transcripcin inversa

Algunos virus como el VIH tienen RNA como su material gentico que copia en ADN en
forma de transcripcin inversa. Estas copias de ADN, a continuacin, se transcriben
ARN nuevo.

ARN bicatenario
Estos son llamados dsARN donde el ARN tiene dos hebras complementarias, similares
al ADN encontrado en todas las clulas. dsARN constituye el material gentico de
algunos virus (virus de ARN bicatenario).

Introduccin
Como es lgico la rapidez con que se suceden las innovaciones de toda ndole tanto
cientficas como humansticas resulta difcil adaptarse a los avances alcanzados, en
los momentos actuales, que se dan a nivel mundial, que coloca esta ciencia entre las
primeras con ms descubrimientos y logros..
AL hacer este estudio, se ha tenido en cuenta los progresos de la Biologa y de
la Genticacon un tema tan interesante como lo es la estructura del ADN y ARN.
Esperamos que este estudio no sea un tema complicado ms sin embargo que nos
sea fcil de entender y discutir con gran facilidad.

cido desoxirribonucleico (ADN)

cido desoxirribonucleico (ADN), material gentico de todos los organismos
celulares y casi todos los virus. El ADN lleva la informacin necesaria para dirigir la
sntesis de protenas y la replicacin. Se llama sntesis de protenas a la produccin

de lasprotenas que necesita la clula o el virus para realizar sus actividades y

desarrollarse.
La replicacin es el conjunto de reacciones por medio de las
cuales el ADN se copia a s mismo cada vez que una clula o un
virus se reproduce y transmite a la descendencia la informacin
que contiene.En casi todos los organismos celulares el ADN est
organizado en forma de cromosomas, situados en
el ncleo de la clula.

Estructura del ADN

Cada molcula de ADN est constituida por dos cadenas o bandas
formadas por un elevado nmero de compuestos qumicos llamados
nucletidos. Estas cadenas forman una especie de escalera retorcida que se
llama doble hlice. Cada nucletido est formado por tres unidades: una molcula
de azcar llamada desoxirribosa, un grupo fosfato y uno de cuatro posibles
compuestos nitrogenados llamados bases: adenina (abreviada como A), guanina
(G), timina
(T) y citosina (C).
La molcula
est
base al otro.

de desoxirribosa ocupa el centro del nucletido y

flanqueada por un grupo fosfato a un lado y una
El grupo fosfato est a su vez unido a la
desoxirribosa del nucletido adyacente de la
cadena.
Estas subunidades enlazadas desoxirribosafosfato forman los lados de la escalera; las bases estn enfrentadas por parejas,
mirando hacia el interior, y forman los travesaos.
Los nucletidos de cada una de las dos cadenas que forman el ADN establecen
unaasociacin especfica con los correspondientes de la otra cadena. Debido a la
afinidad qumica entre las bases, los nucletidos que contienen adenina se acoplan
siempre con los que contienen timina, y los que contienen citosina con los que
contienen guanina. Las bases complementarias se unen entre s por enlaces
qumicos dbiles llamados enlaces de hidrgeno.

En 1953, el bioqumico estadounidense James Watson y el

biofsico britnico Francis Crick publicaron la primera
descripcin de la estructura del ADN. Su modelo adquiri tal
importancia para comprender la sntesis proteica, la replicacin
del ADN y las mutaciones, que los cientficos obtuvieron en
1962 el Premio Nobel de Medicina por su
trabajo.

Sntesis Proteica
Una de las tareas ms importantes de la clula es la sntesis
de protenas, molculas que intervienen en la mayora de las funciones
celulares.
El material hereditario conocido como cido desoxirribonucleico (ADN), que
se encuentra en el ncleo de la clula, contiene la informacin necesaria para
dirigir la fabricacin de protenas.
El ADN incorpora las instrucciones de produccin de protenas. Una protena es un
compuesto formado por molculas pequeas llamadas aminocidos, que
determinan su estructura y funcin.
La secuencia de aminocidos est a su
vez determinada por la secuencia de
bases de los
nucletidos del
ADN.
Cada secuencia de
una palabra
especifica un aminocido determinado.

tres bases, llamada triplete, constituye

del cdigo gentico o codn, que

As, el triplete GAC (guanina, adenina, citosina) es el codn

correspondiente al aminocido leucina, mientras que el CAG
(citosina, adenina, guanina) corresponde al
aminocido valina.

Por tanto, una protena formada por 100 aminocidos queda codificada por un
segmento de 300 nucletidos de ADN.
De las dos cadenas de polinucletidos que forman una molcula de ADN, slo una,
llamada paralela, contiene la informacin necesaria para la produccin de una
secuencia de aminocidos determinada. La otra, llamada antiparalela, ayuda a la
replicacin.
La sntesis proteica comienza con la separacin de la molcula
de ADN en sus dos hebras. En un proceso llamado
transcripcin, una parte de la hebra paralela acta como
plantilla para formar una nueva cadena que se llama ARN mensajero o ARNm.
El ARNm sale del ncleo celular y se acopla a los ribosomas, unas estructuras
celulares especializadas que actan como centro de sntesis de protenas. Los
aminocidos son transportados hasta los ribosomas por otro tipo de ARN
llamado de transferencia (ARNt). Se inicia un fenmeno llamado traduccin que
consiste en el enlace de los aminocidos en una secuencia determinada por el
ARNm para formar una molcula de
protena.
Un gen es una secuencia de nucletidos
de ADN que especifica el orden de
aminocidos de una protena por medio de una molcula intermediaria de ARNm.
La sustitucin de un nucletido de ADN por otro que contiene una base distinta
hace que todas las clulas o virus descendientes contengan esa misma secuencia de
bases alterada.
Como resultado de
la sustitucin, tambin puede cambiar
la secuencia de
aminocidos de la protena resultante.
Esta alteracin de
una molcula de ADN se llama
mutacin. Casi todas
las mutaciones son resultado de errores
durante el proceso de replicacin. La exposicin de una clula o un virus a las
radiaciones o a determinados compuestos qumicos aumenta la probabilidad de
sufrir mutaciones.

Replicacin

En casi todos los organismos celulares, la replicacin de las molculas de ADN

tiene lugar en el ncleo, justo antes de la divisin celular. Empieza con la
separacin de las dos cadenas de polinucletidos, cada una de las cuales acta a
continuacin como plantilla para el montaje de una nueva cadena complementaria.
A medida que la cadena original se abre, cada uno de los nucletidos de las dos
cadenas resultantes atrae a otro nucletido complementario previamente formado
por la clula.
Los nucletidos se unen entre s mediante enlaces de
hidrgeno para formar los travesaos de una nueva
molcula de ADN. A medida que los nucletidos
complementarios van encajando en su lugar, una
enzima llamada ADN polimerasa los une enlazando el grupo fosfato de uno con la
molcula de azcar del siguiente, para as construir la hebra lateral de la nueva
molcula de ADN. Este proceso contina hasta que se ha formado una nueva
cadena de polinucletidos a lo largo de la antigua; se reconstruye as una nueva
molcula con estructura de doble hlice.

Herramientas y Tcnicas para el estudio del ADN

Existen numerosas tcnicas y procedimientos que emplean los cientficos para
estudiar el ADN. Una de estas herramientas utiliza un grupo de enzimas
especializadas, denominadas enzimas de restriccin, que fueron encontradas en
bacterias y que se usan como tijeras moleculares para cortar los enlaces fosfato de
la molcula de ADN en secuencias especficas.
Las cadenas de ADN que han sido cortadas con estas
enzimas presentan extremos de cadena sencilla, que
pueden unirse a otros fragmentos de ADN que
presentan extremos del mismo tipo. Los cientficos
utilizan este tipo de enzimas para llevar a cabo la
tecnologa del ADN recombinante o ingeniera gentica.
Esto implica la eliminacin de genes especficos de un organismo y su sustitucin
por genes de otro organismo.Otra herramienta muy til para trabajar con ADN es
un procedimiento llamado reaccin en cadena de la polimerasa (RCP), tambin
conocida como PCR por su traduccin directa del ingls (polymerase chain

reaction). Esta tcnica utiliza una enzima denominada ADN polimerasa que copia
cadenas de ADN en un proceso que simula la forma en la que el ADN se replica de
modo natural en la clula.
Este proceso, que ha revolucionado todos los campos de la biologa, permite a los
cientficos obtener gran nmero de copias a partir de un segmento determinado de
ADN. La tecnologa denominada huella de ADN (DNA fingerprinting) permite
comparar muestras de ADN de diversos orgenes, de manera anloga a la
comparacin de huellas dactilares.
En esta tcnica los investigadores utilizan tambin las enzimas de restriccin para
romper una molcula de ADN en pequeos fragmentos que separan en un gel al
que someten a una corriente elctrica (electroforesis); de esta manera, los
fragmentos se ordenan en funcin de su tamao, ya que los ms pequeos migran
ms rpidamente que los de mayor tamao.
Se puede obtener as un patrn de bandas o huella
caracterstica de cada organismo. Se utiliza una sonda
(fragmento de ADN marcado) que hibride (se una
especficamente) con algunos de los fragmentos obtenidos
y, tras una exposicin a una pelcula de rayos X, se obtiene una huella de ADN, es
decir, un patrn de bandas negras caracterstico para cada tipo de ADN.
Un procedimiento denominado secuenciacin de ADN permite determinar
el orden preciso de bases nucletidas (secuencia) de un fragmento de
ADN. La mayora de los tipos de secuenciacin de ADN se basan en una
tcnica denominada extensin de oligonucletido (primer extension) desarrollada
por el bilogo molecular britnico Frederick Sanger.
En esta tcnica se lleva a cabo una replicacin de
fragmentos especficos de ADN, de tal modo que el extremo
del fragmento presenta una forma fluorescente de una de
las cuatro bases nucletidas.
Los modernos secuenciadores de ADN parten de la idea del bilogo molecular
estadounidense Leroy Hood, incorporando ordenadores y lser en el proceso. Los
cientficos ya han completado la secuenciacin del material gentico de varios
microorganismos, incluyendo la bacteria Escherichia coli.

En 1998 se llev a cabo el reto de la secuenciacin del genoma de un organismo

pluricelular, un gusano nematodo conocido como Caenorhabditis elegans. Desde
entonces, la lista de organismos cuyo genoma ha sido secuenciado ha continuado
aumentando e incluye, entre otros, la mosca del vinagre (Drosophila
melanogaster), el arroz, el ratn, el protozoo Plasmodium falciparum y el mosquito
Anopheles gambiae.
Ms recientemente, en abril de 2003, el consorcio pblico
internacional que integra el Proyecto Genoma Humano
anunci el desciframiento de la secuencia completa
del genoma humano.

Aplicaciones
La investigacin sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el
mbito de la medicina. A travs de la tecnologa del ADN recombinante los
cientficos pueden modificar microorganismos que llegan a convertir en autnticas
fbricas para producir grandes cantidades de sustancias tiles. Por ejemplo, esta
tcnica se ha empleado para producir insulina (necesaria para los enfermos de
diabetes) o interfern (muy til en el tratamiento del
cncer).
Los estudios sobre el ADN humano tambin revelan la
existencia de genes asociados con enfermedades
especficas como la fibrosis qustica y determinados tipos
de cncer. Esta informacin puede ser valiosa para el
diagnstico preventivo de varios tipos de enfermedades.
La medicina forense utiliza tcnicas desarrolladas en el curso de
la investigacin sobre el ADN para identificar delincuentes. Las
muestras de ADN tomadas de semen, piel o sangre en el escenario
del crimen se comparan con el ADN del sospechoso; el resultado
es una prueba que puede utilizarse ante los tribunales.

El estudio del ADN tambin ayuda a los taxnomos a establecer las relaciones
evolutivas entre animales, plantas y otras formas de vida, ya que las especies ms

cercanas filogenticamente presentan molculas de ADN ms semejantes entre s

que cuando se comparan con especies ms distantes evolutivamente. Por ejemplo,
los buitres americanos estn ms emparentados con las cigeas que con los
buitres europeos, asiticos o africanos, a pesar de que morfolgicamente y
etolgicamente son ms similares a estos ltimos.
La agricultura y la ganadera se valen ahora de tcnicas de manipulacin de ADN
conocidas como ingeniera gentica y biotecnologa. Las estirpes de plantas
cultivadas a las que se han transferido genes pueden rendir cosechas mayores o ser
ms resistentes a los insectos. Tambin los animales se han sometido a
intervenciones de este tipo para obtener razas con mayor produccin de leche o de
carne o razas de cerdo ms ricas en carne y con menos
grasa.

Conclusin
Hoy en da el ADN ha tomado una importancia que aos
atrs no lo tenia y se ha vuelto un tema de frecuente
discusin. La investigacin sobre el ADN tiene un impacto significativo,
especialmente en el mbito de la medicina, la agricultura y ganadera.
Como conclusin general podemos afirmar que este trabajo nos sirvi para ampliar
nuestros conocimientos, informar y complementar nuestros objetivos en pos de
una mayor divulgacin cientfica.

Ej1: si muta el gen responsable de la formacin de melanina, el resultado es un individuo albino

En este caso es una mutacin gnica y hay cambio en el fenotipo. (no se sintetiz la protena)
Ej2: Si se produce una gametognesis anmala, el resultado de la reproduccin puede ser que un
individuo tenga 3 cromosomas 21 en vez de dos, el resultado es un individuo con un fenotipo
caracterstico denominado "mongolismo" o sndrome de Down.
En este caso es una mutacin genmica. (cambi el nmero de cromosomas)
Ej3: si cambia una base del ADN cambia la protena sintetizada (otra mutacin gnica) y es una
protena diferente.
...
...
y as, ms...
por eso te digo que tu pregunta est mal formulada.
Fuente(s):Los libros de gentica que me estudi en la carrera ;-)
Estimado Enrique, permtame disentir de su eleccin, la respuesta correcta sera: "pueden ser la C
o la D"
Estoy considerando cmo pregunta: "una caracterstica" es decir solo un caracter, no varios, que
sera un euploida. Por ello descartara la trisoma y me quedara con una simple mutacin gnica
(prdida, ganancia o sustitucin de una base). Pero la pregunta est mal formulada.
nomemates hace 7 aos
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Comentario
Notificar abuso

Hola:
En efecto, la pregunta y las respuestas estn mal formuladas:
A. Cambio de nmero de cromosomas: S se expresa una caracterstica fenotpica.
B. Hubo formacin de clulas haploides: No se relaciona con la pregunta.
C. No ocurri sntesis de protenas: Puede ser, en efecto, por una mutacin, y como resultado se

puede manifestar o no en el fenotipo, depende de cul protena se trate.

D. Se sintetiz una protena diferente de la esperada. Igual que en C, se puede manifestar o no en
el fenotipo.
Considerando todas las posibilidades y los errores acadmicos de origen en el problema. La
respuesta ms probable sera A.

Desde nuestros inicios se han llevado a cabo un sin fin de investigaciones, experimentos, hiptesis
y dems estudios acerca del ADN, muchos cientficos dedicaron su vida a la investigacin de esta
biomolcula, dejando a las generaciones siguientes dudas y ganas de seguir aclarando este
fascinante tema, hay que aclarar que muchas personas estuvieron involucradas en este proceso,
en el cual tuvieron que pasar muchos aos para esclarecer este tema. Sin embargo hoy en da
agradecemos cada hallazgo, respuesta y definicin de lo que conocemos como ADN.
Hoy en da vemos que el ADN se a vuelto una herramienta clave para identificar a una persona, su
parentesco; tambin puede ser muy til en el derecho para reconocer a una persona que haya
cometido un crimen (en especial en casos de libertad sexual o en los que se haya ejercido
violencia). Podemos conocer que posibles enfermedades hereditarias pueden manifestarse en
siguientes generaciones de una familia.
Es de mucha importancia seguir aprendiendo acerca de nosotros mismo y lo que nos compone
tanto emocional y biolgicamente.

Duplicacin: se copia el ADN progenitor en molculas hijas idnticas al ADN progenitor.

Traduccin: el mensaje cifrado en el idioma de tripletes( codones) es descifrado por el
ARNt, sintetizando se una protena.
Transcripcin: se transcribe la informacin gentica del ADN al ARNtm, para ser llevado al
lugar de sntesis de protena; los ribosotas.
Protenas: las protenas estn formadas por la unin de miles de otras molculas mas
pequeas llamadas aminocidos.

Sntesis de protenas: en este proceso los aminocidos son transportados por ARN
mensajero donde se unen en la posicin adecuada para formar las nuevas protenas.
Las protenas son sintetizadas en los ribosomas a partir de la informacin codificada en el
ARN mensajero. Suplida la necesidad, el ARN mensajero es destruido. La grfica que
mejor ilustra este proceso es la letra "A" ya que de puede ver un descenso en la linea del
ARN

Publicadas por Marianella Barraza a la/s 13:04 No hay comentarios.:

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Transcripcin Del ADN en eucariotas

Transcripcin del ADN: Es el primer proceso de la expresin gentica mediante el
cual se transfiere la informacin contenida en la secuencia del ADN hacia la
secuencia de protena utilizando diversos ARN. Durante esta etapa las secuencias
del ADN son copiadas a ARN mediante el ARN polimerasa que sintetiza un ARN
mensajero
En el caso de las eucariotas, el proceso se realiza en el ncleo.
En las clulas eucariotas el ADN se transcribe a ARN y posteriormente este se traduce para
fabricar una protena, la cadena de ADN se transcribe a su complementario de ARN

mensajero (ARNm) este sale del ncleo y es ledo, en grupos de tres nucletidos para atraer
complementarios de ARN de transferencia (ARNt), a los cuales se unen aminocidos (aa)
particulares, con la ayuda de los ribosomas.

Publicadas por Marianella Barraza a la/s 12:38 No hay comentarios.:

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ADN
ADN

El cido desoxirribonucleico (ADN), es un cido nucleico

que contiene instrucciones genticas usadas en el desarrollo
y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y
algunos virus.
Su estructura fue descubierta en 1953 por los cientficos
watson y crick.
La molcula del ADN esta constituida por dos largas cadenas
de nucletidos que forman una doble hlice, consta de 4
bases nitrigenadas que se unen mediante puentes de
hidrgeno, estas bases reciben los nombres de adenina (A)
timina(T) guanina(G) citosina(C). Dichas bases estn
condicionadas qumicamente de tal forma que la adenina
slo se pueda unir con la timina y la guanina con la citocina.

La estructura de un determinado ADN esta definida por la

secuencia de las bases nitrogenadas en la cadena de
nucletidos, conocer esta secuencia de bases equivale a
descifrar su mensaje gentico.

Publicadas por Marianella Barraza a la/s 12:10 No hay comentarios.:

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Excepciones de las leyes de mendel:

1.
La herencia de algunos caracteres parece incumplir las leyes de mendel
porque las proporciones genotpicas o fenotpicas resultantes no son las
esperadas.

Entre estas excepciones o anomalas podemos nombrar:

Las mutaciones: hacen aparecer fenotipos nuevos y no predecibles.
La presencia de genes letales que provocan la muerte de algunos
individiduos modificando las proporciones genotpicas y fenotipicas.

Los alelos mltiples: en los caracteres mendelianos tpicos existen solo dos
alelos posibles. Pero para algunos caracteres, aunque, cada individuo solo posee
dos genes, los alelos o alternativas posibles son ms de dos.

Publicadas por Marianella Barraza a la/s 11:26 No hay comentarios.:

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mircoles, 1 de octubre de 2014

Leyes de Mendel
En su trabajo publicado en el ao 1865, Gregor Mendel habl de un conjunto de reglas bsicas,
para entender como se da la transmisin por herencia de las caractersticas de padres a sus hijos.
Son tres leyes, las cuales buscan predecir como sern los caracteres fenotipicos de el nuevo
individuo.
1 Ley de Mendel: Ley de la uniformidad de los hbridos de la primera generacin filial:
Explica que al cruzar dos razas puras ( una con un genotipo dominante y otra con un genotipo
recisivo) para un determinado carcter; todos los descendientes de la primera generacin sern
iguales entre si genotpica y fenotpicamente.
2 Ley de Mendel: Ley de la segregacin de los caracteres en la segunda generacin filial:
El carcter hereditario que se transmite como una unidad que se combina, se diluye o se pierde al
pasar de una generacin a otra, solo se segrega o se separa. Los dos genes que rigen cada
carcter no se mezclan ni se fusionan, sino que se segregan a la hora de formarse los gametos,
teniendo cada gameto uno y solo uno de los alelos diferentes.
3 Ley de Mendel: Ley de la independencia de los caracteres hereditarios:
Se hace referencia al caso de que se contemplen dos caracteres distintos. Cada uno de ellos se
transmite siguiendo manera independiente las leyes anteriores, como si no existiera presencia del
otro carcter.

LAS HERRAMIENTAS BSICAS DE LA BIOTECNOLOGA

Las herramientas bsicas que usa la biotecnologa para manipular el ADN son las
siguientes:
1.
Para cortar. Las enzimas de restriccin. Son capaces de cortar el ADN en
secuencias especficas, son como unas <<tijeras>> moleculares.
2.
Para pegar. La ADN ligasa. Permite unir fragmentos de ADN que han sido
cortados por otras enzimas.

3.
Para copiar. Los plsmidos. Son pequeas molculas circulares de ADN
(con capacidad de autorreplicarse) que <<viven>> en el interior de las bacterias.
Los plsmidos se usan como vehculos o vectores en ingeniera gentica.

ADN ligasa reparando un cromosoma daado.

Soy Ingeniero en Biotecnologa y no estoy seguro si te refieres a las herramientas como tales o a
las tcnicas empleadas en biotecnologia...
Las tcnicas que ms se usan en biotec. son la electroforesis en general y la reaccin en cadena
de la polimerasa PCR, adems de algunas tcnicas inmunolgicas en especial la
inmunoprecipitacin y ELISA, no debes descuidar que la biotecnologia es una ciencia demasiado
amplia y las tcnicas tradicionales de fermentaciones, preparaciones de alimentos y otras prcticas
tambien constituyen parte de la biotecnologa
Galo A hace 9 aos

PCR (Reaccin en cadena

de la polimerasa)
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tcnica de laboratorio
que permite amplificar pequeos fragmentos de ADN para identificar
grmenes microscpicos que causan enfermedades.

Escrito por David Saceda Corralo, Mdico Interno Residente, especialista en Dermatologa
Medicoquirrgica y Veneorologa

Compartido:
56

Qu es la PCR

Cundo se hace una PCR

Preparacin para una PCR

Cmo se hace una PCR

Resultados de la PCR

PCR (Reaccin en cadena de la

polimerasa)
PCR son las siglas por las que se conoce a la reaccin en cadena de la
polimerasa (en ingls Polymerase Chain Reaction), una tcnica cientfica
avanzada que fue inventada por el bioqumico estadounidense Kary Mullis en
1985. Esta tcnica permite amplificar pequeas regiones especficas del ADN en
laboratorio. Es decir, consigue que un pequeo segmento de ADN que pasara

desapercibido en un anlisis cualquiera se multiplique millones de veces y as sea

fcil de detectar.
Gracias a esta tcnica se han podido realizar estudios genticos en cualquier
campo de la ciencia. Por ejemplo, se utiliza diariamente para la identificacin de
cadveres o en el estudio de escenas del crimen para buscar rastros del culpable.
Tambin se emplea en la biologa, para identificar cadenas genticas de plantas,
animales o, sobre todo, microorganismos. En la medicina se rene la experiencia
de todos esos campos y se usa principalmente para identificar grmenes
agresores que se encuentran en nuestro organismo.
Cuando se desarroll la prueba de la PCR por primera vez se trataba de una
tcnica cara y algo engorrosa de realizar, pero pronto se generaliz su uso y se
empezaron a desarrollar equipos sencillos y muy baratos que se utilizan todava
hoy en muchos
centros diagnsticos.
Adems, se han diseado PCR ms especficas que se pueden elegir segn sea
la muestra a estudio. Los diferentes tipos de PCR, adems de la bsica, son:
PCR anidada: consigue amplificar muestras mnimas de ADN a miles de
millones de fragmentos. Es capaz por lo tanto de detectar trazos minsculos.
PCR in situ: permite la deteccin de ADN en el mismo lugar de la muestra, sin
tener que procesarla primero con tcnicas de laboratorio. Se suele utilizar para
biopsias o raspados de clulas.
PCR mltiple: con este tipo de PCR se consiguen detectar varios trazos de
ADN a la vez y con una sola muestra.
PCR con transcriptasa inversa: en este caso se utilizan cadenas de ARN
para detectar moldes de ADN. Se utiliza la enzima transcriptasa inversa, la misma
que utiliza el VIH entre otros virus.
PCR en tiempo real o PCR cuantitativa: se aade un componente
fluorescente que permite medir la luz. A ms luz, ms cantidad del ADN detectado.

Reaccin en cadena de la polimerasa

Gel de agarosa teido con bromuro de etidio que muestra varios productos de PCR obtenidos mediante
el uso de distintos cebadores, los cuales presentan un bajo nivel de especificidad.

La reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls
(polymerase chain reaction), es una tcnica de biologa molecular desarrollada
en 1986 por Kary Mullis.1 Su objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento
de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de ese
fragmento original, o molde.
Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificacin
resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes
de una enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el
ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una
tcnica muy extendida, sobre todo en el mbito de la investigacin forense, con el
consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevar a cabo dicha tcnica.
ndice
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1Fundamento e importancia

2Reactivos

3Conceptos de la PCR

4Ciclo de amplificacin
o

4.1Inicio

4.2Desnaturalizacin

4.3Alineamiento o unin del cebador

4.4Extensin o elongacin de la cadena

4.5Elongacin final

4.6Conservacin

5Optimizacin de la PCR

6Tipos de PCR

6.1PCR anidada

6.2PCR de extensin solapada (Mutagnesis)

6.3PCR in situ

6.4PCR mltiple

6.5PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)

6.6PCR en tiempo real o PCR cuantitativo (qPCR)

6.7Variaciones de la PCR bsica

7Aplicaciones
o

7.1Investigacin

7.2Medicina

7.3Paleontologa, antropologa biolgica, y ciencias forenses

7.4Agronoma y diversidad

8Historia
o

8.1Guerras de patentes

9Vase tambin

10Referencias

11Bibliografa

12Enlaces externos

Fundamento e importancia[editar]
Esta tcnica se fundamenta en la propiedad natural de los ADN polimerasas para replicar
hebras de ADN, para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas temperaturas alternadas para
separar las hebras de ADN recin formadas entre s tras cada fase de replicacin y, a
continuacin, dejar que las hebras de ADN vuelvan a unirse para poder duplicarlas
nuevamente. La reaccin en cadena de la polimerasa fue perfeccionada por Kary
Mullis perteneciente a la Cetus Corporation en California, en la dcada de 1980. Inicialmente
la tcnica era lenta, ya que las polimerasas se desnaturalizaban al realizar los cambios de
temperatura y era necesario agregar nuevas polimerasas en cada ciclo. Puesto que las
temperaturas del ciclo (95 C en las fases de desnaturalizacin del ADN) suponen la inmediata
desnaturalizacin de toda protena, se emplean ADN polimerasas termoestables, extradas
de microorganismos adaptados a vivir a esas temperaturas, restrictivas para la mayora de los
seres vivos. Dichos microorganismos, generalmente arqueas, son: Thermus

aquaticus (polimerasa Taq), Pyrococcus furiosus (Pfu), Thermococcus litoralis (Vent)

y Thermus thermophilus (Tth). Generalmente se emplean mezclas de polimerasas muy
procesivas (Taq) con otras capaces de hacer correccin de errores (Pfu, Vent).

Termociclador: aparato en el que se efecta la PCR convencional.

Hoy, todo el proceso de la PCR est automatizado mediante un aparato

llamado termociclador, que permite calentar y enfriar los tubos de reaccin para controlar la
temperatura necesaria para cada etapa de la reaccin. Muchos termocicladores modernos
hacen uso del efecto Peltier, que permite tanto calentar como enfriar los tubos simplemente
invirtiendo la corriente elctrica. Los tubos usados para PCR tienen una pared muy fina, lo que
favorece una buena conductividad trmica, permitiendo que se alcance rpidamente
el equilibrio trmico. Casi todos los termocicladores tienen un sistema que calienta la tapa de
cierre con el fin de evitar la condensacin sobre los tubos de reaccin. Los termocicladores
ms antiguos carecan de este sistema y solucionaban el problema de la condensacin con
una capa de aceite en la parte superior de la mezcla de reaccin o con un poco de cera dentro
de los tubos. Actualmente existen algunos termocicladores que utilizan o pueden utilizar aceite
mineral en el tubo de PCR como los termocicladores de nueva generacin de flujo de are.
Por lo general, la PCR es una tcnica comn y normalmente indispensable en laboratorios de
investigacin mdica y biolgica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se
incluyen la clonacin de ADN para la secuenciacin, la filogenia basada en ADN, el anlisis
funcional de genes, el diagnstico de trastornos hereditarios, la identificacin de huellas
genticas (usada en tcnicas forenses y test de paternidad) y la deteccin y diagnstico
de enfermedades infecciosas.

Reactivos[editar]

Tubos de PCR que albergan la mezcla en un volumen total de 100 L.

Para realizar la tcnica se necesitan:2

Los 4 desoxirribonucletidos-trifosfato (dNTP), sustratos para polimerizar nuevo ADN.

Dos cebadores o iniciadores (en ingls, primers), oligonucletidos que son, cada uno,
complementarios a una de las dos hebras del ADN. Son secuencias cortas, de entre seis y
cuarenta nucletidos, normalmente de dieciocho a veintids, que permiten que la
polimerasa inicie la reaccin. Deben estar enfrentados y no a mucha distancia. Delimitan
la zona de ADN a amplificar, es decir, corresponden a los nucletidos que definen los
extremos de la secuencia que se desea replicar.

Iones divalentes. Se suele usar magnesio (Mg2+), agregado comnmente como cloruro
de magnesio (MgCl2), o algn otro catin divalente. Tambin se puede
emplear manganeso (Mn2+), para mutagnesis de ADN mediante PCR, ya que altas
concentraciones de Mn2+ incrementan la tasa de error durante la sntesis de ADN. Actan
como cofactores de la polimerasa.

Iones monovalentes, como el potasio.

Una solucin tampn o buffer que mantiene el pH adecuado para el funcionamiento de

la ADN polimerasa.

ADN polimerasa o mezcla de distintas polimerasas con temperatura ptima alrededor

de 70 C (la ms comn es la polimerasa Taq).

ADN molde, que contiene la regin de ADN que se va a amplificar.

Termociclador, el aparato que mantiene la temperatura necesaria en cada una de las
etapas que conforman un ciclo.

Conceptos de la PCR[editar]

Sensibilidad: se refiere a la cantidad mnima de ADN necesaria para que se produzca

la amplificacin, es decir, para obtener una banda. Se relaciona con los falsos negativos,
ya que puede que una muestra sea positiva pero sea dada como negativa porque no se
ha amplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.

Especificidad: se refiere a la obtencin de un solo producto amplificado. Viene

determinada por los oligos y la especificidad con la que se unen al ADN molde. De esta
forma, si los oligos tienen ms de un sitio al que se pueden unir aparecer ms de un
producto amplificado. Se relaciona con los falsos positivos, ya que puede que una
muestra sea negativa pero sea dada como positiva porque se ha amplificado una regin
de ADN no diana o que no se buscaba amplificar.

Eficiencia: se refiere a la amplificacin mxima que se puede obtener en un nmero

determinado de ciclos.

Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la

amplificacin. Este concepto es de especial importancia en la secuenciacin, pero en

otros casos no es tan importante. Una buena fidelidad permite evitar falsos positivos y/o
negativos.

Ciclo de amplificacin[editar]

Esquema general de la PCR.

Grado de amplificacin segn el nmero de ciclos empleados. A: gel de agarosa (1: ladder, 2: producto
especfico, 3: producto inespecfico); B concentracin de ADN respecto del tiempo; C logaritmo de la
concentracin de ADN respecto del tiempo.

El proceso de PCR por lo general consiste en una serie de 20 a 35 cambios repetidos de

temperatura llamados ciclos; cada ciclo suele consistir en 2-3 pasos a diferentes
temperaturas. La PCR comn se realiza con ciclos que tienen tres pasos de temperatura. Los
pasos de ciclos a menudo estn precedidos por un choque trmico (llamado "hold") a alta
temperatura (> 90 C), y seguido por otro hold al final del proceso para la extensin de
producto final o el breve almacenaje. Las temperaturas usadas y el tiempo aplicado en cada
ciclo dependen de gran variedad de parmetros. Estos incluyen la enzima usada para la
sntesis de ADN, la concentracin de iones divalentes y de los dNTP en la reaccin, y la
temperatura de unin de los cebadores, as como la longitud del ADN que se desea
amplificar.2
Actualmente, casi todos los termocicladores dan la opcin de realizar la reaccin de PCR con
la llamada " tapa caliente". Es decir, que el sistema del termociclador aplicar calor a la parte
de arriba del vial que contiene la mezcla de PCR. Al comienzo, los laboratorios que
empezaron a usar los primeros aparatos que se comercializaron y que no incluan este
sistema tenan que poner unas gotas de aceite dentro del vial. El objetivo de este
procedimiento, al igual que el de la tapa caliente, es evitar la condensacin de la muestra, ya
que en el eppendorf se encuentran dos fases:lquido y gas. Al condensarse la muestra,
perdemos volumen de la mezcla. Sin embargo, calentando la tapa o poniendo las gotas de
aceite evitamos este proceso fsico, conservando casi intacto el volumen de la muestra.

Inicio[editar]
Este paso consiste en llevar la reaccin hasta una temperatura de 94-96 C ( 98 C si se est
usando una polimerasa termoestable extrema), que se mantiene durante 1-9 minutos. Esto
slo es necesario para ADN polimerasas que requieran activacin por calor.

Desnaturalizacin[editar]
En primer lugar, se desnaturaliza el ADN (se separan las dos cadenas de las cuales est
constituido). Este paso puede realizarse de diferentes modos, siendo el calentamiento (9495 C) de la muestra la forma ms habitual. La temperatura a la cual se decide realizar la
desnaturalizacin depende, por ejemplo, de la proporcin de G+C que tenga la cadena, como
tambin del largo de la misma. Otros mtodos, raramente empleados en la tcnica de la PCR,
seran la adicin de sales o agentes qumicos capaces de realizar la desnaturalizacin.

Alineamiento o unin del cebador[editar]

A continuacin se producir la hibridacin del cebador, es decir, el cebador se unir a su
secuencia complementaria en el ADN molde. Para ello es necesario bajar la temperatura a 4068 C durante 20-40 segundos (segn el caso), permitiendo as el alineamiento. Los puentes
de hidrgeno estables entre las cadenas de ADN (unin ADN-ADN) slo se forman cuando la
secuencia del cebador es muy similar a la secuencia del ADN molde. La polimerasa une el
hbrido de la cadena molde y el cebador, y empieza a sintetizar ADN. Los cebadores actuarn
como lmites de la regin de la molcula que va a ser amplificada.

Extensin o elongacin de la cadena[editar]

Acta la polimerasa, tomando el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y
partiendo del cebador como soporte inicial necesario para la sntesis de nuevo ADN. La
polimerasa sintetiza una nueva hebra de ADN complementaria a la hebra molde aadiendo los
dNTP complementarios en direccin 5' 3', uniendo el grupo 5'-fosfato de los dNTP con el
grupo 3'-hidroxilo del final de la hebra de ADN creciente (la cual se extiende). La temperatura
para este paso depende del ADN polimerasa que usemos. Para la polimerasa Taq, la
temperatura de mxima actividad est en 75-80 C (comnmente 72 C). El tiempo de
extensin depende tanto de el ADN polimerasa usada como de la longitud del fragmento de
ADN que se va a amplificar. Hay una regla comnmente usada: en su temperatura ptima, la
polimerasa de ADN polimerizar mil bases en un minuto.

Elongacin final[editar]
Etapa nica que se lleva a cabo a una temperatura de 70-74 C durante 5-15 minutos tras el
ltimo ciclo de PCR. Con ella se asegura que cualquier ADN de cadena simple restante sea
totalmente ampliado.

Conservacin[editar]
Este es un paso que se lleva a cabo a 4-15 C durante un tiempo indefinido para conservar la
reaccin a corto plazo.
La PCR normalmente se realiza con un volumen de reaccin de 15-100 L, en pequeos
tubos de 0.2-0.5 mL que se colocan en el termociclador.
Para verificar que la PCR ha generado el fragmento de ADN previsto, se emplean tcnicas
de electroforesis, que separan los fragmentos de ADN generados de acuerdo a su carga, esto
es, longitud, y, en menor medida y dependiendo de la matriz empleada, a su tamao:
tpicamente se emplean la electroforesis en gel de agarosa, para fragmentos grandes;
en acrilamida, para los ms pequeos; y, de forma ms rpida y aplicable a la PCR asociada a
marcaje fluorescente, la electroforesis capilar.3 El/los tamao/s de los productos de la PCR
vienen determinados por un marcador de peso molecular de ADN, el cual contiene fragmentos
de ADN de tamao conocido, y que se corre en el gel junto con los productos de PCR.

Optimizacin de la PCR[editar]
En la prctica, la PCR puede fallar por varias razones, entre ellas:

La PCR es una tcnica de gran sensibilidad, es decir, necesita una mnima cantidad de
ADN para obtener un gran nmero de copias. Adems, puede ser muy propensa a errores
si se lleva a cabo en condiciones inadecuadas de esterilidad, que conduzcan a la
amplificacin de ADN no correspondiente a la muestra a analizar (y por tanto a
conclusiones inciertas). Se han de tomar una serie de precauciones para evitar
la contaminacin con ADN extrao. Ejemplos en los que es especialmente importante
evitar la amplificacin son la deteccin de enfermedades (para no diagnosticar
errneamente a los pacientes) o el diagnstico de identidad y parentesco.
Posibles precaucionesson:

Tener especial cuidado durante los pasos previos a la amplificacin: recogida,

envo, custodia y procesado de muestras.

Limpieza exhaustiva y esterilizacin (leja, etanol, luz UV, psoralenos...) de la

superficie de trabajo entre la realizacin de una PCR y la siguiente.

En laboratorios de diagnstico gentico, se suelen tener reas separadas de

trabajo: un laboratorio para la preparacin de la mezcla madre para la PCR, otro para
la adicin del ADN a amplificar, otro donde se encuentra la maquinaria para realizar la
PCR y otro donde se abre y analiza la muestra ya amplificada.

Cabinas de seguridad biolgica para reducir vapores cargados de amplicones

de enfermedades.

Proteccin adecuada de los operarios que manipulen las muestras y los

instrumentos del laboratorio: guantes, bata, cubrezapatos, gafas de seguridad, pelo
recogido... En el diagnstico molecular es conveniente que se cambien estos
elementos al pasar de una zona de trabajo a otra.

Controles positivos y negativos.

Tipado de todo el personal del laboratorio. En el caso de encontrar una
amplificacin no esperada se podr comprobar si proviene de uno de los operarios.

Las tcnicas de diseo de cebadores son importantes en la mejora de la obtencin

de productos de PCR y en evitar la formacin de productos falsos.
Algunas consideraciones al disear estos cebadores son:

Se recomienda usar primers de ms de 15 nucletidos (18-30 nn)

Normalmente, se suelen disear de 20 nucletidos. Los cebadores muy cortos hacen
que nuestra PCR no sea muy especfica, y los que se excedan en longitud harn que
perdamos rendimiento en la reaccin.
Los primers no deben diferir en ms de 3 bases.

La proporcin entre bases pricas y pirimidnicas de los dos oligos sea 1:1 (4060% a lo sumo), y que empiecen y terminen con 1 2 bases pricas.

Se requiere una distribucin homognea de los cuatro nucletidos en la

secuencia, evitando los poliT/A/G/C.

La Tm (melting temperature) de los oligos no puede diferir en ms de 5 C.

Los cebadores no deben incluir en su secuencia regiones que sean
complementarias entre s, o se formarn dmeros entre ellos.

Existe una gran variedad de polimerasas disponibles, pudiendo elegir la que ms se

ajuste a nuestras necesidades. Por ejemplo, algunas tienen actividades inexistentes en
otras o las realizan de forma ms eficiente, o funcionan en intervalos de temperatura en
los cuales otras se desnaturalizan o pierden funcionalidad. Las ms habituales son la taq y
la pfu.

Los componentes del tampn de reaccin debern ajustarse a las exigencias de

nuestras enzimas.

El termociclador, por supuesto, debe ser capaz de reproducir correctamente los

ciclos de la PCR: para ello, diversas casas comerciales nos ofrecern termocicladores
elaborados con materiales que hagan ms eficaces el desarrollo y el transcurso de las
etapas, adems de diversas facilidades de manejo. Dentro del laboratorio, su manejo,
mantenimiento y ubicacin ser clave.

Aparte de aspectos como la contaminacin y algn fallo en la hibridacin de primers, puede

haber otras complejidades que afecten a la PCR, como son:

Degradacin del ADN: esto puede ocurrir cuando se manipula la muestra en

condiciones subptimas o cuando se hace una autopsia, por ejemplo, y resulta en
ausencia de amplificacin o resultados parciales. Un caso particular es el "allele dropout",
o bien prdida de un alelo, que se puede llegar a confundir con ser homocigtico para
dicho alelo.

Inhibicin de la PCR: puede haber agentes que interfieran en el correcto transcurso

de la PCR. Requerir un procesamiento adicional de la muestra para eliminar estos
compuestos del medio antes de preparar la mezcla de PCR. Tanto la sangre como
el semen contienen este tipo de inhibidores, por lo que es necesario una purificacin
previa.

Modificacin del ADN: las sustancias como el formol (empleado en conservacin de

tejidos) o la luz ultravioleta modifican el ADN, alterando as los resultados de la
amplificacin.

Artefactos: pueden darse situaciones como las bandas "stutter" o "shadow", que
consisten en que la polimerasa amplifica una repeticin de ms de un microsatlite o
repeticin en tndem.

Alelo fuera de patrn: un alelo amplificado puede no coincidir con el patrn de picos
de la referencia. Esto es seal de que algo ha ido mal durante la PCR.

Mezclas: es posible que dos muestran se mezclen de alguna forma y el resultado sea
una combinacin del patrn de picos que cabe esperar tras la amplificacin de cada una
de ellas por separado. Esto y el caso anterior dificulta la interpretacin de los resultados.

Tipos de PCR[editar]
PCR anidada[editar]
Tcnica muy sensible de PCR en la que el producto de una amplificacin es utilizado como
molde para realizar una segunda amplificacin con cebadores que se ubican dentro de la
primera secuencia amplificada, es decir, cuando tenemos el primer, como su amplificacion se
pueden unir los cebadores y se hace de nuevo una amplificacin dentro del amplicn inicial.
Este tipo de PCR tiene la ventaja de brindar alta sensibilidad y especificidad. La especificidad
aumenta porque como es amplificacin de un amplicn obtenido previamente, los cebadores
slo van a hibridar en un sitio dentro de la molcula y el resultado ser una nica banda. As,
evitamos posibles hibridaciones inespecficas de los cebadores. La desventaja de esta
tcnica es que no nos permite cuantificar la muestra.

PCR de extensin solapada (Mutagnesis)[editar]

Se introducen cambios de secuencia dentro de fragmentos (clonados) de ADN. Se requieren 2

cebadores (primmers) mutagnicos y otros 2. Se amplifica un fragmento 5' y un fragmento 3'
que se solapan portando ambos la mutacin. Se usan los productos en otra reaccin para
producir el ADN mutado de longitud completa.

PCR in situ[editar]
La PCR in situ consiste en una reaccin de PCR en secciones histolgicas o clulas, donde
los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificacin. Es realizada sobre
preparaciones fijas en un portaobjetos. En la tcnica de PCR in situ se realiza una primera
amplificacin de ADN blanco y luego deteccin mediante hibridacin in situ convencional
con sondas de ADN/ARN. De esta manera pueden detectarse cantidades pequesimas
de genoma. Esta tecnologa es de gran alcance en la capacidad de amplificar especficamente
una poblacin de secuencias de menor representacin.

PCR mltiple[editar]
PCR en la cual se amplifica simultneamente ms de una secuencia. Para ello, se combinan
dos o ms pares de cebadores en un mismo tubo, junto con el resto de los reactivos de
la reaccin en cantidades suficientes, para amplificar simultneamente varios segmentos de
ADN. Ventajas: informacin sobre varios locus en una sola reaccin, menor cantidad de
molde para el anlisis, menor cantidad de reactivos, rpida construccin de bases de
datos. Desventajas: para llevarla a cabo adecuadamente y sin errores, se requiere de una
cuidadosa optimizacin del proceso.

PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR)[editar]

Es una variante de la PCR en la que usamos ARN como molde inicial en vez de ADN, y
emplea una transcriptasa inversa (como Tth) para realizar la sntesis de un ADN
complementario al ARN (ADNc). De esta forma, el desarrollo inicial de una RT-PCR sera:

1.er paso: retrotranscripcin a partir del ARN.

2 paso: amplificacin a partir de la primera hebra de ADNc.

3.er paso: PCR estndar.

PCR en tiempo real o PCR cuantitativo (qPCR)[editar]

Artculo principal: PCR en tiempo real

Reaccin de PCR cuya principal caracterstica es que permite cuantificar la cantidad de ADN o
ARN presente en la muestra original, o para identificar con una muy alta probabilidad,
muestras de ADN especficas a partir de su temperatura de fusin (tambin denominado
valor Tm, del ingls melting temperature).
Se puede dividir en las tcnicas basadas en fluorocromos no especficos y en las tcnicas
basadas en sondas especficas.
En las tcnicas basadas en fluorocromos el ADN, que ve multiplicada su cantidad con cada
ciclo, se une al fluorocromo (generalmente SYBR Green) produciendo fluorescencia que es
medida por el termociclador apto para PCR en tiempo real. Permite cuantificar slo una
secuencia por reaccin pero tiene la ventaja de utilizar cebadores normales para su
realizacin. Es mucho ms econmica que la que usa sondas especficas.
Las tcnicas basadas en sondas especficas utilizan una sonda unida a dos fluorocromos que
hibrida en la zona intermedia entre el cebador directo (forward) y el inverso (reverse); cuando
la sonda est intacta, presenta una transferencia energtica de fluorescencia por resonancia

(FRET). Dicha FRET no se produce cuando la sonda est daada y los dos fluorocromos
estn distantes, producto de la actividad 5'-3' exonucleasa de la ADN polimerasa. Esto permite
monitorizar el cambio del patrn de fluorescencia y deducir el nivel de amplificacin del gen.
La mayora de estos inconvenientes se han solucionado con la introduccin de la PCR
realizada en tiempo real (Q-PCR), que elimina cualquier proceso post-PCR puesto que
monitoriza la progresin de la amplificacin en el momento en que ocurre. A diferencia de la
PCR convencional (en punto final), que mide la acumulacin del ADN al final de un nmero
predeterminado de ciclos, con Q-PCR esto se hace durante el proceso de amplificacin
usando fluorescencia, de forma que su aumento es proporcional a la cantidad de ADN
formada. El proceso se puede automatizar fcilmente usando un sistema que realice la
amplificacin (termociclador) y que a su vez sea capaz de leer fluorescencia. Existe una
amplia oferta de aparatos en el mercado. La mayora pueden trabajar con las diversas
opciones de marcado fluorescente y son "abiertos", es decir, permiten programar las
condiciones de amplificacin y lectura de forma que su uso no queda limitado a unos reactivos
determinados.

Variaciones de la PCR bsica[editar]

PCR especfica de alelo: esta tcnica de diagnstico o clonacin es usada para

identificar o utilizar los polimorfismos de una sola base (SNPs). Utiliza cebadores
especficos para las secuencias normal y mutante. El diseo ms habitual es un anlisis
en dos tubos con dos cebadores: uno normal y otro mutante en reacciones separadas
junto con los cebadores control.

PCR "assembly": consiste en la sntesis artificial de largas secuencias de ADN,

realizando para ello la PCR en un fondo de oligonucletidos largos con secuencias
solapantes cortas.

PCR asimtrica: usada para amplificar preferentemente una cadena del ADN original
con respecto a la otra.

PCR de colonia: mediante esta tcnica, colonias de bacterias Escherichia coli pueden
ser rpidamente examinadas para construcciones viables de vectores de ADN.

Amplificacin dependiente de helicasa: esta tcnica es muy parecida a la PCR

convencional, pero en ella se emplea la enzima helicasa y una temperatura constante en
lugar de la polimerasa de ADN y los ciclos repetidos de hibridacin-elongacin.

PCR hot-start: esta tcnica reduce la amplificacin inespecfica durante las etapas
iniciales de la PCR: mientras que la mquina alcanza la temperatura de la primera etapa
(unos 95 ) puede que ocurra la unin de los cebadores y se produzca amplificacin, ya
que en el camino para alcanzar estos 95 se pasa por la temperatura de anillamiento
(que es ms baja).
Para evitar esto, la PCR hot-start se basa en que la reaccin comience cuando la
mquina ya est a 95, debido a que antes no se encuentran presentes la polimerasa
o el cloruro de magnesio, lo que podemos conseguir mediante varias tcnicas:
- Aadir la polimerasa o el cloruro de magnesio tras el periodo de calentamiento
- Separar por una capa de cera los distintos componentes de la reaccin. La cera se
funde al alcanzar los 95 y es entonces cuando los componentes entran en contacto
- Anticuerpos anti-polimerasa que estn bloqueando a la polimerasa. Al alcanzar los
95 estos anticuerpos se inactivan debido a que se desnaturalizan y la polimerasa
puede actuar

PCR especfica de intersecuencia (ISSR): se trata de un mtodo de PCR para su

uso en huella gentica, que amplifica regiones entre repeticiones de secuencia simple
para producir una huella gentica nica de longitudes de fragmento amplificadas.

PCR inversa: es un mtodo usado para poder realizar la PCR cuando slo es
conocida una secuencia interna. Muy til en la identificacin de secuencias que
flanquean insertos genmicos.

PCR mediada por ligacin: este mtodo usa pequeos linkers de ADN ligados al ADN
de inters y mltiples cebadores hibridando estos linkers.

PCR especfica de metilacin (MSP): se usa para detectar metilaciones en islas CpG
de ADN genmico.

Amplificacin Mltiple Dependiente de Sonda (Multiplex Ligation-dependent

Probe Amplification o MLPA): permite amplificar varias secuencias objetivo con un
nico par de cebadores, evitando as las limitaciones de resolucin de la PCR
multiplex.

PCR cuantitativa: se usa para medir la cantidad de un producto de PCR. En la

tcnica clsica de PCR, se cuantifica por aproximacin con diluciones y amplificacin
de concentraciones conocidas de la secuencia diana. Tambin se puede cuantificar
por mtodo competitivo: se trabaja con concentraciones crecientes conocidas de un
fragmento que puede ser amplificado por los mismos oligos que la muestra de
estudio, pero de menor tamao que sta, de forma que con los resultados obtenidos
se puede estimar qu concentracin del competidor es equivalente a la de la muestra
de cantidad desconocida. La cuantificacin en PCR est optimizada en la tcnica
de PCR en tiempo real.

PCR-TAIL: la PCR termal de entrelazado asimtrico es usada para aislar una

secuencia desconocida que flanquea una secuencia conocida.

PCR touchdown: se trata de una variante de la PCR que se emplea cuando se

desconoce la secuencia exacta de los extremos de la secuencia a amplificar, de modo
que se asume que puede existir alguna base desapareada en el alineamiento

cebador-secuencia. Su finalidad es reducir el fondo no especfico bajando

gradualmente la temperatura de hibridacin a lo largo del progreso de la PCR.

PAN-AC: este mtodo usa condiciones isotermas para la amplificacin, y puede ser
usado en clulas vivas.

Ciclo trmico rpido para PCR:4 La amplificacin del DNA puede llevarse a cabo
rpidamente, como completar 30 ciclos en menos de 30 minutos: ciclo trmico rpido.
Normalmente se ha considerado que las etapas de cada ciclo son tres reacciones que
ocurren en tres periodos separados y a tres temperaturas diferentes. Este paradigma
del equilibrio secuencial no tiene en cuenta que la temperatura de la muestra no
cambia instantneamente, de hecho, durante una PCR la muestra est la mayora del
tiempo en temperaturas de transicin. El ciclo trmico rpido aprovecha la ventaja de
la instantnea desnaturalizacin e hibridacin, cuyas temperaturas necesitan
alcanzarse, pero no mantenerse. Adems, para productos cortos, la extensin puede
llevarse a cabo durante la transicin a la temperatura de extensin, y por lo tanto,
tampoco es necesario mantenerla. Un ciclo rpido podra entonces describirse como
94 C, 0 s; 55 C, 0 s y 72 C, 0 s. Como vemos, este modelo no ayuda, porque nos
lleva solo a temperaturas extremas y no nos da informacin sobre lo que pasa entre
ellas. En cambio, en el paradigma cintico para PCR de ciclo rpido se describe
completamente el historial de temperaturas de la muestra. Se considera que
desnaturalizacin, hibridacin y elongacin ocurren en un rango de temperaturas y
adems pueden solapar temporalmente. Hay termocicladores que permiten que un
ciclo se complete en 20-60 segundos, por lo que 30 ciclos tardan de 10 a 30 minutos.

Aplicaciones[editar]
La tcnica de la PCR tiene multitud de aplicaciones: ya en ciencia bsica, como
herramienta de deteccin y/o generacin de acervos de fragmentos de ADN de inters; ya
en ciencia aplicada, como elemento resolutivo en s mismo, por ejemplo en diagnstico
clnico.

Investigacin[editar]
La PCR convencional, se emplea como base para multitud de tcnicas en el laboratorio
debido a su robustez y rapidez. De este modo, la PCR de punto final permite controlar y
detectar los fragmentos de ADN de inters.

Clonacin de un segmento de ADN mediante amplificacin con cebadores que contienen una
secuencia apta para la recombinacin dirigida con un plsmido.

Una aplicacin de la PCR de extrema importancia es la clonacin de secuencias de ADN

en vectores, como pueden ser los plsmidos. Para ello, se emplean cebadores que
contienen en su extremo 5' una corta secuencia que permite la interaccin posterior con
otra complementaria situada en el vector de clonacin a emplear. Por ejemplo, se puede
incluir una diana de restriccin en dichos cebadores, de modo que, y si sta no exista
previamente en el fragmento y es nica en el vector, pueda efectuarse una ligacin
mediante la ligasa de T4 tras la digestin con la enzima de restriccin apropiada de ambos
elementos. Otro mtodo asimilable a esta va es el empleo de la recombinacin dirigida;
esto es, se adapta al 5' de los cebadores una secuencia que faculta a una recombinasa la
recombinacin dirigida con un vector dado.5

Medicina[editar]
En medicina, la PCR se emplea fundamentalmente como herramienta
de diagnosis (Coleman y Tsongalis, 2006):

Una de las principales aplicaciones de la PCR es hacer pruebas genticas para

detectar mutaciones en el ADN que provoquen algn tipo de enfermedad.El
diagnstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma es un proceso
largo y complicado que puede acortarse significativamente gracias a la PCR. As, se
pueden hacer anlisis del ADN de los futuros padres para ver si son portadores, o
analizar el ADN de sus hijos por si estn afectados por una enfermedad hereditaria.
Para el anlisis prenatal, las muestras de ADN pueden obtenerse a partir de
la amniocentesis, de la muestra de las vellosidades corinicas o incluso a partir de
algunas clulas fetales que circulan por el torrente sanguneo de la madre. El uso de
la PCR tambin es esencial para el diagnstico gentico preimplantacional donde se
pueden analizar las clulas del embrin para buscar posibles mutaciones.

Permite el genotipar la especie o especies que provocan un determinado cuadro

infeccioso: para ello, se amplifica una zona del genoma bacteriano cuyo producto de
PCR posea unas caractersticas de tamao o temperatura de fusin que permitan
identificarlo de forma inequvoca. En el caso de infecciones virales que implican la
integracin del genoma del patgeno en el ADN del hospedador, como es el de la
infeccin por VIH, la PCR cuantitativa posibilita la determinacin de la carga
viral existente y por tanto, del estadio de la enfermedad.6

La PCR tambin se puede usar en revisiones mdicas rutinarias, como en los servicios
de donantes de sangre, para test de rutina. A travs de esta tcnica se pueden
detectar infecciones en el donante (como VIH o Hepatitis B) mientras an estn en el
periodo de incubacin. Dada la sensibilidad de los test de PCR se pueden tomar
muestras colectivas o "pools" (por ejemplo, 96 pruebas individuales). Si una de estas
muestras colectivas da positivo, se toman a partir de ella muestras progresivamente
menores hasta que se encuentre el causante.

Tambin se puede usar la PCR como parte de las pruebas realizadas cuando se hace
un trasplante de tejidos. En 2008 se propuso usar esta tcnica para reemplazar las
pruebas tradicionales con anticuerpos.7

A veces, mediante la PCR se pueden hacer terapias personalizadas para pacientes

con ciertos tipos de cncer que producen mutaciones en los oncogenes a partir de la
deteccin de estas mutaciones.

Paleontologa, antropologa biolgica, y ciencias forenses [editar]

Los campos de la paleontologa, antropologa biolgica y la medicina y antropologa
forense se han visto enormemente beneficiados por esta tcnica, puesto que todas ellas
construyen con frecuencia el conocimiento de sus correspondientes disciplinas gracias a
restos o huellas de seres vivos. Uno de los materiales biolgicos que ms informacin
puede proporcionar es el ADN.
La relativa estabilidad de ste permite que, aunque fragmentado, se conserve durante
largos perodos si las condiciones son propicias.5 En ocasiones las muestras intactas con
las que se puede contar son extraordinariamente pequeas o estn deterioradas. La PCR
soluciona ambos problemas y proporciona cantidades tiles para posteriores pasos de
anlisis. En primer lugar aumenta la cantidad de material recuperado a partir de muestras
escasas, puesto que como ya se dijo anteriormente, en teora basta una sola molcula
para que el proceso pueda tener lugar. Tambin debido a la naturaleza de la tcnica y su
propsito de amplificacin de fragmentos pequeos, esta fragmentacin no impide que
este ADN pueda ser empleado como molde para una reaccin de PCR.

En paleontologa y Antropologa la PCR permite recuperar las escasas cantidades de

ADN que an no se han degradado. Algunos lugares en que el ADN podra
preservarse son la brea las cenizas volcnicas, el mbar, hielos histricos polares
o glaciares y ambientes ridos, sedimentos, as como en los cristales de apatita de
restos de esqueleto,8 siendo posible de ese modo caracterizar cadveres, fsiles u
otros restos mediante genotipado por anlisis de microsatlites o incluso genomas
de taxonesextintos, amplificados de este modo, como pueden ser los realizados
mediante el ADN genmico del hombre de Neanderthal.9 El propsito sera utilizar
este ADN amplificado para posteriormente realizar
estudios filogenticos o etnogrficos o de poblaciones mediante la comparacin de
secuencias de ADN, o el estudio de las causas de la separacin evolutiva de dos
especies.

En las ciencias forenses se emplea para establecer la filiacin de una persona o para
obtener pruebas a partir de muestras mnimas dejadas por el autor de
un crimen como saliva, semen u otros restos de tejidos (Butler, 2005).

Agronoma y diversidad[editar]
Tal y como la PCR multiplex permite producir huellas genticas de individuos concretos,
dentro del marco de la gentica forense, existen mtodos basados en la PCR que
permiten discernir entre grupos infraespecficos de cultivos de inters agronmico; por
ejemplo, de cultivares.10 Para ello, se emplean oligonucletidos de un tamao lo
suficientemente pequeo como para que ceben de forma relativamente inespecfica,
aunque siempre de tal forma que produzcan un patrn de bandas discreto e interpretable.
De este modo, la pauta obtenida tras la electroforesis de los fragmentos tiende a agrupar
a los individuos de mayor semejanza, que poseen un comportamiento similar, de los que
divergen.

Historia[editar]

Electroforesis de protenas SDS-PAGE resolviendo la polimerasa Taq.

En 1971, un artculo publicado por Kleppe et al. en Journal of Molecular Biology describi
por primera vez un mtodo que usaba enzimas para replicar una secuencia pequea de
ADN con cebadores in vitro.11 Sin embargo, este temprano ejemplo del principio bsico de
la PCR no recibi mucha atencin, y la invencin de la reaccin en cadena de la
polimerasa en 1983 es generalmente atribuida a Kary Mullis.12 13 Mullis gan el Premio
Nobel por su trabajo en PCR.
Algo muy a tener en cuenta en la PCR es que la ADN polimerasa que se use sea capaz
de soportar las altas temperaturas de >90 C necesarias para la separacin de las dos
hebras de ADN de la doble hlice tras cada ciclo de replicacin. Las ADN polimerasas que
se utilizaron originariamente para los experimentos in vitro previos a la PCR no eran
capaces de soportar estas altas temperaturas, por lo que los primeros procedimientos
para replicar el ADN eran muy ineficientes, largos y requeran grandes cantidades de ADN
polimerasa.
El descubrimiento en 1968 de la polimerasa Taq, una polimerasa de ADN extrada de
la bacteria termfila Thermus aquaticus que habita medios de muy alta temperatura (5080 C), elimin los grandes inconvenientes del mtodo de la PCR. Este ADN polimerasa
es estable a altas temperaturas, permaneciendo activa hasta despus de la
desnaturalizacin del ADN, eliminando la necesidad de aadir a la reaccin nueva
polimerasa tras cada ciclo. Este descubrimiento permiti automatizar el proceso, antes tan
tedioso, acoplndolo al uso del termociclador.
Al mismo tiempo que desarrollaba la PCR en 1983, Mullis trabajaba en
Emeryville, California (EE UU), para una de las primeras empresas biotecnolgicas, Cetus
Corporation, donde era responsable de sintetizar cadenas cortas de ADN. Mullis afirma
que concibi la idea para la PCR una noche mientras cruzaba la Autopista de la
Costa Pacfica (EE UU) en su coche.12 Estaba imaginando una nueva forma de analizar
mutaciones en el ADN cuando se percat de que, en lugar de eso, haba inventado un
mtodo para amplificar regiones especficas de ADN mediante ciclos de duplicacin
repetidos usando ADN polimerasas. Mullis atribuye la invencin de esta tcnica a los
efectos de la droga psicodlica y alucingena LSD.14
En la revista Scientific American, Mullis resumi el procedimiento: "Comenzando con una
nica molcula del material gentico ADN, la PCR puede generar 100 billones de
molculas iguales en una tarde. La reaccin es fcil de hacer, no requiere ms que un
tubo de pruebas, unos pocos reactivos simples y una fuente de calor". 15 Fue premiado con
el Premio Nobel de Qumica en 1993 por su invencin, y siete aos despus, l y sus
colegas del Cetus llevaron a la prctica su propuesta. Sin embargo, han aparecido
controversias y diferentes versiones sobre las contribuciones intelectuales y prcticas de
otros cientficos al trabajo de Mullis, y sobre si l fue el inventor nico del principio de la
PCR.

Guerras de patentes[editar]

La tcnica de la PCR fue patentada por Cetus Corporation, donde Mullis trabajaba cuando
invent la tcnica en 1983. La enzima polimerasa Taq fue tambin cubierta de patentes.
Tuvieron lugar varios pleitos relacionados con la tcnica, incluyendo un pleito fracasado
generado por DuPont. La compaa farmacutica Hoffmann-La Roche adquiri los
derechos de las patentes en 1992 y actualmente mantiene las que an estn
protegidas.16 17