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La extraccin del aceite se llev a cabo con un rendimiento aproximado del 0.5% (p/p),
ya que para 500g de cscara de naranja fresca, se obtuvieron alrededor de 3.1mL (2.66g) de
aceite, tras un proceso de destilacin de alrededor de tres horas, partiendo del montado del
sistema y calentamiento del agua.
34
35
El rendimiento de extraccin obtenido es aceptable, ya que se ha reportado que la
mayora de los aceites cuentan con rendimientos de extraccin de 0.5 a 2% y, particularmente
para naranja oscilan entre 0.5 y 0.8%, el cual depende de la variedad y madurez de la fruta,
equipo y mtodo de extraccin, preparacin de la muestra y solventes utilizados (CostaBatllori, 2003).
7.2.1 Densidad
La densidad del aceite esencial de cscara de naranja, a 25C es de 850100 kg/m3, la cual
coincide con un valor reportado de 850 kg/m3 (Viuda-Martos et al., 2008) y se aproxima
estrechamente con el rango reportado en la norma NMX-F-063-1978, de 842 846 kg/m3
Como se puede observar, la densidad del aceite es menor a la del agua, caracterstica
que era de esperarse. Esta caracterstica es la responsable de hacer posible la separacin del
aceite del agua al final del proceso de destilacin.
7.2.2 Color
36
cierta tonalidad naranja. Esta descripcin corresponde con la apariencia descrita en la norma
NMX-F-063-1978, de lquido cristalino cuyo color vara del amarillo claro al anaranjado oscuro.
Coordenadas
de color
L
a
b
X
Y
Z
95.3400.127
0.2400.269
0.7900.198
89.2500.099
90.8700.198
106.0750.035
De acuerdo con lo reportado por Prez (2006), los aceites esenciales poseen un ndice de
refraccin elevado, con un promedio de 1.5. En el caso de Viuda-Martos et al. (2008) reportan
un ndice de refraccin del aceite esencial de cscara de naranja de 1.47 a 20C, valor que
corresponde con el obtenido en este trabajo a 25C, de 1.470.
37
7.3 Composicin qumica del aceite (cromatografa de gases- espectrometra de masas)
38
Las otras 6 sustancias presentes se enlistan en la tabla II, acompaadas de su
composicin, as como la composicin reportada en la bibliografa. De las 7 sustancias
mencionadas, se ha reportado la presencia de 6 en el aceite esencial de cscara de naranja (pineno, -pineno, -myrceno, Citral-Z y Citral-E) (Stashenko et al., 1996; Marstica y Pastore,
2007; David et al., 2002). Es probable que tal diferencia se deba tanto a la variedad y madurez
de la naranja a partir de la cual se extrajo el aceite, las condiciones del medio en que se
desarroll y la poca del ao, adems del mtodo de extraccin del mismo (Fisher y Phillips,
2008).
Tabla II. Anlisis cualitativo y cuantitativo de la composicin qumica del aceite esencial de cscara
de naranja
Compuesto
Composicin %
% Literatura
Clasificacin
Limoneno
96.62
94.00%S
Monoterpeno
-myrceno
1.72
1.18%S
Monoterpeno
-pineno
0.53
Monoterpeno
-pineno
0.47
0.54%S
Monoterpeno
Alcohol isoproplico
0.32
Alcohol
Citral-Z
0.15
0.09%S
Aldehdo
Citral-E
0.18
0.14%S
Aldehdo
39
difcil correlacionar la actividad antimicrobiana con los componentes de manera individual.
French (1985) seala que los diversos componentes que conforman el aceite deben actuar de
manera sinrgica para inhibir el crecimiento de los microorganismos.
7.4 Efectos de la concentracin y concentracin mnima inhibitoria del aceite esencial para
el crecimiento de Aspergillus flavus
7.4.1
40
antimicrobiano en un mismo tipo de aceite pueden atribuirse a factores como la calidad de la
fruta, las condiciones ecolgicas en que se cultiv, as como su grado de madurez al momento
de la extraccin (Moreira et al., 2005).
2.5
2.0
ln(Dt/Do)
1.5
Control
500 ppm
1000 ppm
2000 ppm
4000 ppm
8000 ppm
16000 ppm
1.0
0.5
0.0
0
10
15
20
tiempo (das)
Figura 8. Crecimiento de A. flavus a distintas concentraciones de aceite diluido en agar
41
coeficientes de correlacin (R2) obtenidos para cada una de las concentraciones, los cuales
variaron dentro de un rango de 0.986 a 0.997.
0.6
v (mm/da)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
Control
500 ppm 1000 ppm 2000 ppm 4000 ppm 8000 ppm
16000
ppm
En la figura 10 se encuentra graficado el tiempo lag (), el cual muestra una tendencia a
incrementar su valor a mayores concentraciones de aceite esencial. Esto es una clara seal de
que la adicin del aceite provoca un retraso en el crecimiento del microorganismo, habiendo
comenzado a crecer, hasta 4.4 das despus de su inoculacin para una concentracin de 8,000
ppm.
42
5.0
4.5
tiempo (das)
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
Control 500 ppm 1000 ppm 2000 ppm 4000 ppm 8000 ppm16000 ppm
Figura 10. Tiempo lag () de A. flavus para distintas concentraciones de aceite
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
Control
500 ppm 1000 ppm 2000 ppm 4000 ppm 8000 ppm 16000 ppm
43
7.4.2
2.0
Control
ln(Dt/Do)
1.8
0.6 mL/L
1.6
1.2 mL/L
1.4
2.4 mL/L
1.2
4.7 mL/L
9.4 mL/L
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
0
10
15
20
tiempo (das)
Figura 12. Crecimiento de A. flavus a distintas cantidades de aceite por L de aire
44
De manera similar que en la adicin directa, el efecto que se observa en la figura 12 para
las concentraciones de 1.2 y 2.3 mL/L se invierte en relacin al crecimiento esperado; para lo
cual, se llev a cabo la prueba de t-studenT (Apndice D), determinando que no existe
diferencia significativa entre ambos tratamientos.
45
En la figura 13 se encuentra graficada la velocidad de crecimiento radial a cada una de las
concentraciones utilizadas en el trabajo, disminuyendo su valor con el incremento en la
cantidad de aceite utilizado.
0.25
v (mm/da)
0.20
0.15
0.10
0.05
0.00
Control
0.6 mL/L
1.2 mL/L
2.4 mL/L
4.7 mL/L
9.4 mL/L
Figura 13. Velocidad de crecimiento radial de A. flavus a distintas cantidades de aceite por L de aire
46
1.4
1.2
tiempo (das)
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
Control
0.6 mL/L
1.2 mL/L
2.4 mL/L
4.7 mL/L
9.4 mL/L
Figura 14. Tiempo lag () de A. flavus para distintas cantidades de aceite por L de aire
2.0
1.8
1.6
1.4
A
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
Control
0.6 mL/L
1.2 mL/L
2.4 mL/L
4.7 mL/L
9.4 mL/L
47
7.4.3
R2
500 ppm
0.4090.069
2.1620.509
2.2960.002
0.994
0.6 mL/L
0.1140.003
1.0680.190
1.6690.029
0.995
1000 ppm
0.3260.064
2.1430.413
2.2250.046
0.986
1.2 mL/L
0.1330.006
0.2230.287
1.7000.034
0.987
2000 ppm
0.3470.050
2.6110.195
2.0800.060
0.987
2.4 mL/L
0.0910.006
0.5410.457
1.5570.078
0.983
4000 ppm
0.3120.030
2.6210.288
1.9920.063
0.989
4.7 mL/L
0.0770.004
0.2630.291
0.9800.020
0.991
8000 ppm
0.2640.002
4.4100.214
1.8200.045
0.997
9.4 mL/L
0.000
0.000
0.000
1.000
16000 ppm
0.000
0.000
0.000
1.000
18.8 mL/L
48
Es por ello que se puede afirmar que la concentracin mnima inhibitoria para la metodologa
de generacin de vapores es menor que la concentracin requerida por dilucin en agar. De la
misma manera, Inouye (2003) afirma que los valores de la concentracin mnima inhibitoria por
contacto gaseoso son menores en comparacin con los requeridos por dilucin.
0.6
v (mm/da)
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0.0
500
0.6 1000 1.2 2000 2.4 4000 4.7 8000 9.4
ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L
Figura 16. Comparacin del efecto que tienen la adicin directa y la generacin de vapores
del aceite esencial de naranja en la velocidad de crecimiento de A. flavus
49
mientras que la adicin directa del mismo da lugar a un notorio retraso en el crecimiento del
moho. Dicho efecto se aprecia grficamente en la figura 17.
5.0
4.0
lag (das)
3.0
2.0
1.0
0.0
-1.0
500 0.6 1000 1.2 2000 2.4 4000 4.7 8000 9.4
ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L ppm mL/L
Figura 17. Comparacin del efecto que tienen la adicin directa y la generacin de vapores
del aceite esencial de cscara de naranja en el tiempo lag () para A. flavus
Al observar la figura 18 se percibe una vez ms, una mayor inhibicin del crecimiento de
A. flavus mediante los vapores generados del aceite, en comparacin con la dilucin del mismo
en el agar; ya que, aunque en ambos casos disminuye el crecimiento mximo alcanzado en la
fase estacionaria (A), en los casos en que se aplic la generacin de vapores, el valor de A se
reduce en mayor magnitud que en la adicin directa.
50
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0.0
500
ppm
0.6
mL/L
1000
ppm
1.2
mL/L
2000
ppm
2.4
mL/L
4000
ppm
4.7
mL/L
8000
ppm
9.4
mL/L
Figura 18. Comparacin del efecto que tienen la adicin directa y la generacin de vapores
del aceite esencial de cscara de naranja en el crecimiento mximo de A. flavus
La alta bioactividad de los aceites esenciales en estado vapor, comparada con aquella en
medio acuoso se ha reportado previamente. Fries (1973) indic que las molculas lipoflicas, en
medio acuoso, tienden a asociarse entre ellas formando micelas, lo que reprime el
acoplamiento y absorcin de los componentes del aceite al organismo objetivo, lo cual es
esencial para la expresin de su bioactividad (Inouye, 1998).