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ANALISIS INSTRUMENTAl 2014

ESPECTROSCOPIA
ATOMICA
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIN
ESPECTROSCOPIA DE EMISION
ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA.

Las molculas y las transiciones electrnicas, vibracionales


Los enlaces en las molculas y el rol de los electrones de valencia.

1. INTRODUCCIN

El tomo y su estructura?
La parte ms pequea de un elemento recibe el nombre de tomo. De 92
elementos, tan slo 27 forman parte de la materia viva.

La espectroscopia atmica

El tomo:
Composicin:
a) Regin central (ncleo), formado por protones
y neutrones: la masa atmica
b) Regin perifrica (electrones)
Las propiedades fsicas estn en el nmero
atmico (protones).
Las propiedades qumicas se encuentran en
la periferia (electrones de capa externa).

Espectroscopia Atmica (EA): Tcnica


para determinar la concentracin de un
elemento metlico en una muestra.
Ejemplo, puede utilizarse para analizar la concentracin
de ms de 62 metales diferentes en una solucin.
Aunque la espectrometra de absorcin atmica data del
siglo XIX, la forma moderna fue desarrollada en la dcada
de los 50 por un equipo de qumicos de Australia,
dirigidos por Alan Walsh.

BUNSEN Y KIRCKHOFF (186-1870)

Ensayo a la llama, colores de la llama y los diferentes elementos ..

ELEMENTO

COLOR DE
LA LLAMA

INTENSIDAD

()

Ba

Verde Claro

Baja

5.150

Ca

Rojo - Anaranjado

Media

6.060

Cu

Azul verde - intenso

Media

5.790 - 5.850

Cr

Amarillo

Media

5.790 - 5.850

Cs

Rojo Claro

Media

6.520 - 6.940

In

Violeta - Rosado

Media

4.510

Violeta

Alta

4.044

Li

Rojo - Intenso

Alta

6.710

Na

Amarillo

Muy Alta

5.890 - 5.896

Pb

Azul Gris Claro

Escasa

-----

Sr

Rojo

Media

6.620 - 6.880

Longitud de onda y su relacin con cada uno de los elementos


en la llama.

Los electrones se agrupan en rbitas, siendo las ms


prximas al ncleo las de menos energa.

Cada rbita posee ciertas caractersticas energticas y


de frecuencia dependiendo del tipo y peso molecular
del tomo.

La EA, est basada en la absorcin, emisin o


fluorescencia por tomos o iones elementales.
Al respecto, hay dos regiones del espectro que dan
informacin atmica:
La UV/ VIS (Espectrometra Atmica).
La de rayos X.

Los EA ultravioleta y visible se obtienen mediante un


adecuado tratamiento trmico que convierte los
componentes de una muestra en tomos o iones
elementales gaseosos.

excitacin del
tomo

Emisin del
tomo

La emisin, absorcin o fluorescencia de la


mezcla
gaseosa
resultante
sirve
para
la
determinacin cualitativa y cuantitativa de uno o
varios de los elementos presentes en la muestra.

RESUMEN

La absorcin de radiacin electromagntica provoca


que las partculas integrantes de un material (tomos,
iones o molculas) pasen del estado fundamental a
uno o ms estados excitados de superior energa.
La emisin de radiacin electromagntica se origina
cuando partculas excitadas (tomos, iones, molculas)
se relajan a niveles de menor contenido energtico,
cediendo el exceso de energa en forma de fotones.
La radiacin absorbida o emitida se puede
caracterizar
adecuadamente
mediante
espectros.

EXCITACIN DEL ATOMO

Para excitar o mover un electrn a la siguiente rbita


ms alta, se necesita entregar energa de una frecuencia
especfica.
Eo ------ E1 energa de excitacin

Me*

Meo

Trmicamente
Elctricamente
Induccin electromagntica

A travs del proceso de resonancia, la energa de la


frecuencia apropiada excitar el electrn para moverlo a
un nivel ms alto o estado energtico en su rbita
alrededor del ncleo.

Diferencia entre:
Excitacin: Cuando un tomo recibe un aporte energtico
y los electrones pasan de una capa interna a una capa
ms externa.
Ionizacin: Cuando un tomo recibe un aporte energtico
que produce una separacin completa del electrn de su
tomo.

DIFERENCIANDO LOS ESPECTOS DE ABSORCION DE LOS ESPECTROS


DE EMISION
Espectro visible

Espectro de absorcin del tomo de hidrgeno en el visible

Espectro de emisin del tomo de hidrgeno en el visible

REGIONES DE ESPECTRO DONDE ES POSIBLE ESTUDIAR METALES Y


NO METALES.
LOS ESPECTROS ATOMICOS SON DE LINEA.

UV de vacio

NO METALES

AA

METALES

LAS ESTRATEGIAS PARA LA ATOMIZACIN SEGN EL CASO PARA LA


EAA, EEA, EFA, SON:
EN ABSORCIN ATOMICA CON:
Llama (ppm de la mayora de elementos)
Electrotrmica (Cmara de Grafito) ppb de gran numero
de elementos.
Vapor Fro (para Hg, As, S, Sb y elementos con hidruros
voltiles ppb a ppt)
EN EMISIN ATOMICA CON:
Llama ( Alcalinos y alcalinotrreos y muchos otros metales).
Arco o chispa.
Plasma ptico (La mayora de elementos y en
concentraciones que pueden variar des mg/ml a ppb).
EN FLUORESCENCIA ATOMICA CON:
Llama
Vapor fro (Hg, As, Sb, y S a niveles de ppt)

SI

USAMOS LA LLAMA PARA ATOMIZAR , DIFERENCIAMOS

Seal de
emisin
atmica
Seal de
absorcin
atomica

Seal de
fluorescencia
atmica

Estado
excitado

Estado
fundamental

EJEMPLOS POSIBLES, PARA LA CUANTIFICACION DE ELEMENTOS POR ESPECTROSCOPIA


ATOMICA

La absorcin y emisin de radiacin


en las regiones UV y VIS supone la
excitacin
de
electrones
de
valencia.
Esta cantidad de energa (o longitud de onda)
se refiere especficamente a una transicin de
electrones en un elemento particular, y en
general, cada longitud de onda corresponde a
un solo elemento.

Un elemento tiene su espectro de excitacin y un espectro de


emisin (VARIAS LINEAS).

De todas las lneas del espectro, una es la lnea espectral caracterstica del
elemento, denominado lnea de RESONANCIA.
Cual?
La ms intensa y la que presenta menor nmero de interferencias espectrales
con las lneas de otros elementos.

2. ABSORCION ATOMICA
Necesita de una Fuente de radiacin especfica para
cada elemento a determinar.
Que se mide?
La disminucin de intensidad de una lnea analtica tras la
interaccin de la fuente con la muestra.
La ventaja?
Al utilizar fuentes de radiacin especficas para cada
elemento, el nmero de interferencias espectrales es mucho
menor que en las tcnicas de emisin, la especificidad.

Cada elemento presenta sus lneas espectrales a diferentes


longitudes de onda y distintas intensidades, la localizacin de
stas en un espectro permite identificar y diferenciarlas.

COMO SE ATOMIZA ?
La disociacin es necesaria para tener los tomos separados y en estado
fundamental.
Como se logra?
Con un sistema atomizador donde se suministra a las molculas la dosis de
energa necesaria para romper los enlaces y dejar los tomos en estado
fundamental.

La intensidad de la lnea de resonancia disminuye al pasar a travs


de los tomos de la muestra.
La intensidad de la absorcin es proporcional a la C del elemento
en la muestra, (Ley de Lambert-Beer).
Entonces, por la absorcin, la lnea de resonancia disminuye
proporcionalmente a la concentracin, y el resto de las lneas
permanece igual (C).

INSTRUMENTO
PARTES GENERALES DE UN ESPECTROMETRO DE
ABSORCION ATOMICA (EAA)

TRATAMIENTO DE LA MUESTRA Y USO DE PATRONES


-Por va hmeda: digestin con HCl; HNO3; HNO3
(3:1), HClO4; HF...

- Por va seca: calcinacin en horno mufla y


disolucin con un cido de las cenizas.

MICROONDAS

PATRONES DISUELTOS EN ACIDO Y AGUA


DESIONIZADA, PARA OBTENER LA CURVA DE
CALIBRACION.
USO DE MATERIALES LIBRE DE SALES.

PARTES DEL INSTRUMENTO

ESQUEMA DE UN EQUIPO DE ABSORCION ATOMICA

LAMPARA
DE
CATODO
HUECO

LLAMA
MONOCROMADOR

DETECTOR

COMBUSTIBLE

AMPLIFICADOR

REGISTRO

AIRE

MUESTRA PARA
ANALISIS EN
DISOLUCION

Generador de seales
Transductor de entrada o detector
Procesador de seales
Transductor de salida o dispositivo
de lectura

EAA- DE DOBLE HAZ

Instrumento de haz sencillo, con lmpara de deuterio para


correccin por absorcin no atmica

2.1. LAMPARAS
Debe ser de: alta intensidad, monocromacidad,
estabilidad) deben calentarse `previamente, son
discontinuas.

PRODUCE EMISION DE LINEA ESPECIFICA


DEL ELEMENTO
CON EL QUE SE
CONSTRUYO LA LAMPARA.
GENERALMENTE ES DE UN SOLO ELEMENTO
(MONOELEMENTAL); TAMBIEN LOS HAY BI,
TRI, TETRA ELEMENTALES.

Lmpara de descarga
electrodos (EDL)

sin
Slo para elementos fcilmente vaporizables
(As, Se, Sb, Pb, Sn, Hg)

Carcasa metlica

Ar

Ventana de cuarzo

I(EDL) > I(LCH)


Bovina generadora
de radiofrecuencias

Analito en estado metlico o en forma de sal

Proceso de emisin de rem en una EDL


Ar0

Ar+

e-

1. Ionizacin del Ar

M*
M0

Ar+

2. Excitacin de los tomos


del metal analito

M*
M0
3. Relajacin de los
tomos

Accin del campo de


microondas o radiofrecuencias
33

Lmpara de ctodo hueco : LCH


CATODO
GAS NOBLE

+++
++

ANODO

Anodo construido con un hilo de wolframio de 1 mm de dimetro y


30 mm de longitud.
ctodo de 5 a 6 mm de dimetro fabricado con un material igual al
elemento que se va a analizar.
Cilindro de vidrio con ventana de cuarzo
radiacin;
Cilindro est lleno de argn o nen a una P 1 a 5 torr.

1955, Walsh y Alkemade Emplean como


fuente de excitacin, fuentes de lneas
atmicas del mismo elemento que se va a
determinar.
En la lmpara se excitan los tomos del
elemento y emiten su radiacin
caracterstica que es absorbida por el
analito de la muestra.

lmparas

Operacin lmpara de Deuterio (para absorcin no atmica)

Anodo
Apertura

Usada para medir absorcin


no-atomica
Util desde 190 - 425nm
Gas de relleno es Deuterio

Ventana
de cuarzo
Ctodo
Termoinico

(D2)
Una descarga de corriente
excita el gas de D2
Alta emisin de luz a travs
de la apertura de descarga

2.2.ATOMIZACION EN
EL MTODO DE AAS
Modo de
atomizacin

Temperatura de
atomizacin, C

Nombre del mtodo

Llama

1700 3150

FAAS

Electrotrmica

1200 3000

ETAAS/GFAAS

Flame Atomic Absorption Spectrometry

Electrothermal Atomic Absorption Spectrometry


Graphite Furnace Atomic Absorption Spectrometry
38

ESPECTROSCOPA ATMICA: TIPOS DE ATOMIZADORES


Tipo de atomizador

Temp. atom. (C)

Llama

1700-3150

Vap. electrotrmica (ETV)

1200-3000

Plasma Ar acopl. Inductivo (ICP)

4000-6000

Plasma Ar corriente continua (DCP)

4000-6000

Plasma Ar inducido por microondas

2000-3000

Plasma de descarga luminiscente

No trmico

Arco elctrico

4000-5000

Chispa elctrica

40000 (?)

A. ATOMIZACION CON LLAMA


Componentes necesarios para obtener los tomos en estado
fundamental utilizando la llama.

a.Nebulizador:
convertir la muestra
aspirada en una nube
de gotas pequeas.

b.Cmara de premezcla:
penetra
la
muestra
nebulizada que se mezcla
con el oxidante y el
combustible ntimamente.

c.Mechero: est sobre la


cmara de premezcla, y por l
sale la llama cuya energa
consigue los tomos a su
estado fundamental.

d.La llama: aporta


energa
a
la
muestra.

a. METODOS DE NEBULIZACIN

a. NEBULIZACIN

b. CAMARA DE PREMEZCLA

nebulizador

Desague

c. MECHERO

atomizacin en llama (FAAS)


Quemador de flujo laminar o con cmara de premezclado
d. llama
1-10%
Quemador
Fig.1

Deflectores
Bola de
impacto

Residuos

99-90%

Nebulizador: transforma la muestra


lquida en un aerosol que es introducido
en la llama
45

d. LLAMA

Caractersticas de la llama
ZONA DE COMBUSTIN SECUNDARIA
(PROCESOS DE OXIDACIN)

REGIN INTERZONAL
(ATOMIZACIN Y EXCITACIN)

ZONA DE COMBUSTIN PRIMARIA


(EVAPORACIN DEL DISOLVENTE)

ESTRUCTURA DEL
ATOMIZADOR CON
MECHERO
DE
FLUJO LAMINAR.

Atomizacin y excitacin
Transformar muestras

tomos/iones
excitados
LLAMA = combustible + comburente
+ tomos en estado fundamental

Elementos alcalinos y alcalino-trreos, principalmente.


- Uso general absorcin atmica;
- En Emisin es restringida prcticamente a los
elementos alcalinos y alcalino-trreos (fotometra de
llama).

TIPOS DE LLAMA y temperatura que alcanzan


Combustible

Oxidante

Temperaturas (C)

Gas natural

Aire

1700-1900

Gas natural

Oxgeno

2700-2800

Hidrgeno

Aire

2000-2100

Hidrgeno

Oxgeno

2550-2700

Acetileno

Aire

2100-2400

Acetileno

Oxgeno

3050-3150

Acetileno

xido nitroso

2600-2800

Espectrometra de absorcin atmica con atomizacin en llama (FAAS)


- Proporciones de los gases
Caractersticas de la llama

Estequiomtrica
Oxidante
Reductora

- Naturaleza de los gases

Tipos de llamas segn la naturaleza de los gases

Combustible

Oxidante

Temperaturas, K

Gas natural

Aire

1500 - 1700

Hidrgeno

Oxgeno

2800 - 3000

Hidrgeno

Aire

2300 2400

Acetileno

Aire

2400 2700

Acetileno

xido nitroso

2900 3100

Acetileno

Oxgeno

3300 - 3400

Ciangeno

Oxgeno

4800

Alcalinos y
alcalinotrreos

Mezclas de
gases ms
empleados

50

COMBUSTIBLE Y OXIDANTE (PROPORCIONES)


OXIDANTE

COMBUSTIBLE

OXIDANTE

COMBUSTIBLE

VELOCIDAD
DE FLUJO (cm s-1)

Los tipos de llamas tambin utilizados son: Aire-propano.


1725C, Argn-hidrogeno-aire. 1577C

COMBUSTIBLE-COMBURENTE, Y ejemplos de
elementos que pueden atomizarse.
a - Para elementos fcilmente atomizables como
cobre, plomo, potasio y sodio se debe emplear
llama de aire-acetileno.
b - para elementos que forman compuestos
refractarios y que no se descomponen en la llama
aire-acetileno como aluminio, silicio y tungsteno se
debe emplear llama de xido nitroso-acetileno.
c - para determinar elementos tales como
arsnico, calcio, cromo, magnesio, molibdeno,
osmio, selenio o estroncio, pueden ser empleados
indistintamente ambos tipos de llama.

AIRE COMPRIMIDO. Para la operacin de la flama, el aire puede


ser suministrado con un flujo mnimo de 28 L/min (1 pie
cbico/min) a una presin mnima de 350 kPa (50 psig). La
neumtica puede requerir una presin de aire de 500 kPa (70 75
psig) .
Se requiere tener una trampa para aire y aceite o un filtro entre la
compresora y el sistema de control de gases del instrumento para
mantener las gotas de agua y aceite fuera de los sistemas de
medicin de flujo

ACETILENO. es preferido como gas AA. para la determinacin de


cerca de 35 elementos. La que alcanza la flama de aire acetileno es
2300 C. Una flama de aire-acetileno puede ser usada con todas las
cabezas de quemador, comnmente usada con la cabeza de
quemador de 10 cm ( 4 inch).
La pureza mnima ser 99.6 %, acetileno grado AA. Un cilindro tipo
de acetileno contiene cerca de 8500 L (300 pies cbicos) de
acetileno y durar normalmente 30 horas de tiempo de quemado
con una flama de aire-acetileno.
El acetileno viene disuelto en acetona, si la presin del tanque cae,
la cantidad de acetona aumenta a la entrada del gas y puede
proporcionar resultados errticos, particularmente para elementos
Ca, Sn, Cr, Mo. Reemplazar el cilindro cuando la presin sea de
aprox, 600 kPa. Debido a que el acetileno est disuelto en acetona,
a presin baja no es lineal con la remocin del gas, y a presiones de
600 kPa indica que el cilindro est casi vaco, asumiendo que se
encuentra a temperatura ambiente.

ETAPAS DE LA ATOMIZACION
Etapas por las que pasa una muestra
en solucin hasta la obtencin de
tomos o iones excitados son:

Desolvatacin,
Vaporizacin,
Atomizacin,
Excitacin e ionizacin

DETALLE DE LAS ETAPAS DE LA ATOMIZACION


Nebulizacin:

Disolucin analito
Niebla

Desolvatacin:
Aerosol slido/gas
Volatilizacin:
Molculas gaseosas
Disociacin:

Molculas excitadas

tomos

tomos excitados

Iones atmicos

Iones excitados

Ionizacin:

Esquema de un EAA

Campana de extraccin de gases

llama

atomizador

lamparas

B. Atomizacin electrotrmica

Cmara de grafito.
Muestra en un tubo de grafito, proceso paulatino de
calefaccin mediante una programacin de temperatura,
dentro de una atmsfera inerte.
Resultado, tomos en estado fundamental, usado en las
tcnicas de absorcin atmica.

Espectrometra de absorcin atmica con atomizacin electrotrmica


(ETAAS)

CALENTAMIENTO
TRANSVERSAL
Inyeccin de muestra
hasta 40 L

Pared
del tubo
Camino
ptico

Camino
ptico

Camino
ptico

Tubo de grafito
en el interior
Plataforma de
Lvov curvada

Contactores elctricos
enfriados con agua

60

-Toma de muestra y dilutor


-Descarga de muestra en el
tubo de grafito
-Horno de grafito en
funcionamiento.

atomizacin electrotrmica, etapas (ETAAS)


PROGRAMA DE TEMPERATURA

Limpieza

Temperatura, C

2500
2000

Atomizacin

1500
1000

Calcinacin

500

Secado
0

20

40
Tiempo, s

60

80

Programa bsico:
-Secado
-Carbonizacin
-Enfriamiento (opcional)
-Atomizacin
-Limpieza
-Enfriamiento

ETAPAS DE LA Atomizacin sin llama


1

Secado:
Se elimina el disolvente en un programa
(50C-200C)

de tiempo y T fijo

2 Mineralizacin:
Programa T/tiempo utilizado para destruir la matriz en la que se
encuentra el analito. (200C-800C)
3 Atomizacin:
Programa de rpido crecimiento de la T (2000C-3000C) en
pocos segundos en los que se mide la absorcin.

atomizacin electrotrmica (ETAAS)


Otros ejemplos de programas de temperatura
Manganeso

Cobalto

T, C

Rampa,
C s-1

Mantenido,
s

T, C

Rampa,
C s-1

Mantenido,
s

Secado

130

10

40

110

10

40

Calcinacin

1100

100

15

1600

200

15

Atomizacina

2100

Mxima

2500

Mxima

Limpieza

2700

Mxima

2700

Mxima

Etapa

a Flujo

de argn = 0 mL min-1

64

detector sensible a la luz

monocromador

sistema electrnico de lectura


fuente de luz

Io

It
atomizador
(llama, horno
o hidruros)

Resonante
No-resonante
Gas de relleno

Esquema del EAA con


atomizacin electrotrmica,
donde el monocromador
selecciona la lnea resonante.

Resonante

2.3. Monocromador
Seleccin de longitud de onda

red de difraccin
600- 4200 lneas/mm.

Por debajo de 190 nm hay que hacer vaco o


purgar ya que absorbe el O2.

Monocromador

Slit de
Salida

Spherical
Mirror

Slit
Adjustment
Wheel

Angle of the Grating


Determines the
Wavelength Focused on
the Exit Slit
Grating

Slit de
Entrada

Changing
Knob Changes Grating Angle

Spherical
Mirror

2.4. El detector
Fotomultiplicador

Tubo al vaco con fotoctodo de material fotosensible


(elementos u xidos alcalinos fcilmente ionizables).
Los dnodos estn a voltajes 70-100 V superior cada uno.
Presenta un poder de amplificacin de hasta 109.

Detector de luz, transduccin a energa elctrica


y seguir con la amplificacin
PM Tube
Energa lumnica (h

Energa elctrica

COMPARACIN FAAS-ETAAS
1. Sensibilidad: ETAAS > FAAS
a. 100% de la muestra aspirada es atomizada
b. Mayor tiempo promedio de los tomos en el camino
ptico
2. Consumo de muestra: FAAS > ETAAS
FAAS: 5 6 mL
ETAAS: 10 25 L
3. Tipo de seales obtenidas:
FAAS: continua
ETAAS: discreta o discontinua
0,15
A
A

rea de pico

t, s
t, s
4. ETAAS es aplicable directamente a muestras slidas

70

Con un instrumento en condiciones (quality) de


calidad, se contarn con datos que servirn
para obtener los resultados confiables.

2.5. REGISTRO Y TRATAMIENTO DE DATOS


El patrn sirve para construir la curva de calibracin y las lecturas de
la muestra se interpolan.
Preparacin
muestra.

de

la

Disolventes orgnicos.
Curvas de calibrado.
Mtodo de la adicin
de estndar.
Lmites de deteccin.
Exactitud.

Determinaciones de iones metlicos en alimentos, por


ejemplo, usando la curva de calibracin externa o el modo
de adicin estndar.

Recta de adiciones
estndar a la muestra

Punto de corte
con eje abcisas

Absorbancia

Fig.1

Recta de calibracin acuosa

Fe aadido, ppm
73

Anlisis de Metales por Flama y Horno de Grafito


Aluminio (Al)

Bario (Ba)

Calcio (Ca)

Cadmio (Cd)

Cesio (Cs)

Cobalto (Co)

Cromo (Cr)

Cobre (Cu)

Fierro (Fe)

Potasio (K)

Litio (Li)

Magnesio (Mg)

Manganeso (Mn) Sodio (Na)

Nquel (Ni)

Plomo (Pb)

Antimonio (Sb)

Silicio (Si)

Estao (Sn)

Zinc (Zn)

Otros

Metales preciosos
Oro (Au)
Paladio (Pd)
Plata (Ag)

Anlisis de Metales por Generador


de Hidruros y Vapor Frio
Arsnico (As)
Selenio (Se)
Mercurio (Hg)

Las muestras son digeridas previamente en recipientes de


tefln cerrados para evitar contaminacin y prdida de
muestra, usando cidos de alta pureza para conservar la
integridad de la misma desde su muestreo hasta su anlisis.

2.6. CASOS ESPECIALES PARA EL ANALISIS DE ALGUNOS


ELEMENTOS:
CASOS . Generacin de hidruros (HGAAS) y vapor fro (CVAAS)
Analitos vaporizados como molculas o en estado atmico

Reaccin qumica a
temperatura
ambiente
Muestra

HGAAS: Hydride Generation


Atomic Absorption
Spectrometry

CVAAS: Cold Vapour


Atomic Absorption
Spectrometry

PRIMERO: Generacin de hidruros (HGAAS)


Clula de cuarzo
Fuente de
radiacin

Monocromador

Modulador

Detector

Registrador

Vlvula

Gas inerte

1
2

AsH3

As3+ + BH4- + H+

AsH3 + H2

Seal analtica dependiente del t

Disolucin de muestra/HCl

NaBH4/NaOH

Cd Ge As Se
Tl Sn Sb Te
Pb Bi

Elementos que forman hidruros fcilmente


76

SEGUNDO: Vapor fro (CVAAS)


Clula de
cuarzo
Fuente de
radiacin

Modulador

Monocromador

Detector

Display

Vlvula

Gas inerte

1
2

Seal analtica dependiente del t

Disolucin de muestra/HCl

Hg2+ + Sn2+

Hg
Hg0 + Sn4+

SnCl2
77

VAPOR FRO

- Hg
- Agente reductor NaBH4
- Hg+2
Hg0
- separador gas/lquido
- filtro de politetrafluoroetileno
- transporte del vapor de mercurio
hasta la clula absorcin mediante
argn.

- As, Bi, Ge, Pb, , Sb, Se, , Sn, Te

EJEMPLO
Celda de Cuarzo
Lmpara de arsnico

Argn
Detector

Muestra/Estndar / HCl

Determinaciones de
derivados metilados:
Borohidruro de sodio
/ NaOH

As inorgnico y sus

DIFERENCIA el arsnico inorgnico y sus


metabolitos metilados del arsnico, (dieta) como:
Arsenobetana, arsenocolina, arsenoazucares en
general.

2.7. APLICACIONES
Control de especies txicas.
Especiacin de metales.
Caracterizacin de vinos.
Anlisis de rocas y minerales.
Anlisis clnico, toxicolgico y medioambiental.
Control de calidad ambiental.
Anlisis multielemental de aguas potables,
residuales y residuos industriales.
Anlisis multielemental de suelos y sedimentos

Determinaciones de iones metlicos en alimentos


Determinacin directa de cualquier elemento de la Tabla Peridica salvo:
Halgenos, C, N, P, O, S, H, gases nobles, y unos pocos elementos ms.
Industria alimentaria: Cu, Pb, Cd en galletas, harinas
Zn, Cr, Mn vegetales
Al, Cr, Mo en chicles y golosinas
Ca, Fe.. Leche y productos lcteos
Na, K en ketchup y patatas fritas
Hg, As, Se. en pescado

Determinaciones indirectas:
Precipitacin

Cl- + Ag+
SO42- + Ba2+

AgCl(s) + Ag+
BaSO4(s) + Ba2+

Complejacin y extraccin en disolvente orgnico: (NH4)3.PO4.12MoO3

81

2.8. INTERFERENCIAS
- ESPECTRALES: La seal del analito se solapa con:
- Seales debidas a otros elementos: Seleccin de una alternativa.
- Seales debidas a la llama o al horno: Dispositivos de correccin de
fondo
- NO ESPECTRALES:
Qumicas: Se deben a algn componente de la muestra que disminuya el
grado de atomizacin del analito
Agentes liberadores
De ionizacin: Si el analito se ioniza absorber a distinta

que el tomo neutro.

Supresores de ionizacin
83

A-No Espectrales

INTERFERENCIAS

a- Ionizacin excesiva : metales alcalinos. Corregir con supresor de ionizacin, o una llama
de menor temperatura, como lo es la flama de aire-propano y se determina el elemento por:

Espectroscopia de Emisin de Llama

b- Interferencias por propiedades fsicas de las soluciones (viscosidad)


c- Interferencias por volatilizacin de soluto (refractario)

B-Espectrales
a- Solapamiento de lneas atmicas
b- Dispersin de partculas (solucin aspirada hacia el quemador tiene un gran nmero
de slidos disueltos)

c- Solapamiento de bandas moleculares (matriz de la muestra se entiende todo lo que


acompaa al analito, tiene en cantidades grandes, compuestos moleculares sumamente
complejos; por ejemplo: una muestra de orina o de sangre)

Ensanchamiento de presin

colisiones de las especies que

emiten o que Absorben, con otros tomos o iones presentes. El ensanchamiento


de lneas incrementa con la concentracin, se producen pequeos cambios en
los niveles de energa del estado fundamental y por tanto, se origina una
dispersin de las longitudes de onda emitidas o absorbidas. Aumenta con la T

Ensanchamiento de lnea por el efecto de incertidumbre. Esta


determinado por el tiempo de vida de los estados de transicin y por el principio
de incertidumbre de Heisenberg.
t>=1. Cuanto menor sea el tiempo de
vida, mayor es el ensanchamiento de la lnea.

Ensanchamiento Doppler. Es debido a la rpida movilidad de los tomos


en el momento en que adsorben o emiten radiacin. La de la radiacin emitida
o absorbida por un tomo, que se mueve rpidamente, disminuye si el
movimiento es hacia el detector y aumenta si el tomo se aleja del mismo.
Depende de la temperatura (aumento de velocidad)

Interferencias espectrales:
Mtodos de correccin (de las dos lneas, con una
fuente continua, basados en el efecto Zeeman,
basados en una fuente con autoinversin).
Interferencias qumicas:
Formacin de compuestos poco voltiles.
Equilibrios de disociacin.
Equilibrios de ionizacin.

Nuevo trabajo

3. FOTOMETRIA DE LLAMA (EMISION ATOMICA)

Emisin atmica

Espectro de emisin del Hidrgeno obtenido por un


espectrmetro

ESQUEMA DE UN EQUIPO DE EMISION ATOMICA (EEA).


Tcnica multielemental
LLAMA

Selector de
MONOCROMADOR
longitudes de
onda

DETECTOR

COMBUSTIBLE
AIRE

MUESTRA PARA
ANALISIS EN
DISOLUCION

AMPLIFICADOR

REGISTRO

Mtodos de atomizacin en EEA


Arco elctrico.
Volatilizacin, haciendo pasar una corriente entre dos electrodos,
en uno de los cuales est contenida la muestra.
arcos de corriente continua baja reproducibidad
arcos de corriente alterna (alto voltaje 2200-4400 V o bajo
voltaje 10-25 V), que la mejoran notablemente.

espectros atmicos.

Chispa elctrica.
Descarga a travs de dos electrodos entre los cuales existe una
diferencia de potencial muy elevada (10 a 40 kV).
Uno de los electrodos suele ser la propia muestra.
Fuente de excitacin muy estable y reproducible, apta para el
anlisis cuantitativo de muestras metlicas.
Se consiguen

espectros inicos.

Plasma. Mezclas de iones positivos y electrones, en igual proporcin y

tomos y molculas neutras. espectros inicos.


Tres tipos de plasmas:
ICP -plasma acoplado por induccin,
DCP -plasma de corriente continua
MIP plasma de induccin por microondas

INSTRUMENTO Mejorado a la
EMISION ATOMICA CON PLASMA
(ICP)

PLASMA ACOPLADO INDUCTIVAMENTE (ICP)


Plasma, mezcla gaseosa conductora de la electricidad que contiene
una (C ) cationes y electrones. En el plasma de argn (usado en
emisin) los iones de Ar y los e- son las principales especies
conductoras. Los iones argn, una vez que se han formado en un
plasma, son capaces de absorber suficiente potencia de una fuente
externa, como para mantener un nivel de temperatura en el que la
ionizacin adicional sustenta el plasma indefinidamente

PROCEDIMIENTOS CON LA MUESTRA

ambiente del laboratorio


preparacin
primaria

digestin
separacin
preconcentracin

preparacin
final

material y reactivos

entrada
directa

ICP-MS

digestin cida en bombas abiertas

minerales y rocas

secado y
molienda

HNO3
HClO4
HF
digestin

ICP- MS

fusin alcalina

minerales y rocas

secado y
molienda

LiBO2
Na2O2

fusin

ICP- MS

ablacin con lser


minerales y rocas
Efecto del laser
sobre la muestra

Espectro de masas (MS)

ICP consigue la ionizacin de los elementos atomizados


Detector

Espectrmetro

Plasma
A LA ANTORCHA, Convergen tres
tubos concntricos de cuarzo a travs
de los cuales fluye una corriente de
argn
con
un
caudal
total
comprendido entre 11 y 17 L/min.

ionizacin
del
argn, inicia por
medio de una
chispa
(bobina
Tesla).

GAS ARGN
11 y 17 L/min.

La muestra,
aerosol, vapor
polvo fino.
Dentro la bobina de induccin
interacciona los iones y los e-,
estos iones y e- se mueven en
trayectorias anulares cerradas.

potencia de 2kW
a unos 27MHz.

EL PLASMA ICP CONO DE IONIZACIN


Plasma de Argon (>1% Ar+).
Presin atmosfrica.
Canal central para introduccin
de muestras.
Altas temperaturas: 6000-8000 K.
Elevada densidad electrnica.
Alta eficacia de ionizacin.

PLASMA: PROCESOS
Recombinacin
M+ + e
M
Ionizacin
M
M+
Atomizacin
MX(g)
M+X
Vaporizacin
MX(s)
MX(g)
Desolvatacin
H2O(l)

H2O(g)

Aerosol con la muestra

EMISION-ICP- acoplado para conseguir la deteccin y el resultado,


se usa.el ESPECTROMETRO DE MASAS (MS)

EN QUE CONSISTE LA ESPECTROSCOPIA DE MASAS?............................

4. EL ESPECTROMETRO DE MASAS
Se fundamenta en la separacin de

partculas moleculares o

atmicas por su diferente masa.

EM, es una tcnica de anlisis cualitativo esencialmente y luego cuantitativo ,


muy usado en la determinacin de estructuras orgnicas e inorgnicas, por si
sola en COMBINACION CON OTRAS TECNICAS ESPECTROFOTOMETRICAS y de
SEPARACION.
La MS (EM) , tiene muy poco en comn con la tcnica
espectrofotomtrica, no es propiamente un mtodo espectroscpico.

clsica

En MS, no se usa ningn tipo de radiacin , los procesos son mas bien
puramente fsicos, no destructivos.

En SMS, sin embargo,. durante la obtencin del espectro tienen lugar los
procesos qumicos y la muestra se destruye; la cantidad de muestra necesaria est
en el orden de microgramos (ug).
La MS, se basa en la obtencin de iones a partir del analto en fase gaseosa, luego se
separan de acuerdo a su masa y carga y luego se detecta.
Es en consecuencia, es una tcnica que brinda abundante informacin bidimensional,
relaciona la abundancia de los diferentes tipos de iones en funcin de su relacin
carga/masa de c/u.
El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente
cuatro etapas y entonces cuatro funciones y cuatro partes:

Ionizacin de la muestra.
Aceleracin de los iones por un campo elctrico.
Dispersin de los iones segn su masa/carga.
Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente
seal elctrica.

De acuerdo con la naturaleza de la muestra a estudiar, se


utilizan principalmente tres mtodos para introducir la
muestra:
a. Introduccin indirecta, se vaporiza la muestra en un
recipiente externo a T elevada. Luego con un dispositivo se
permite salir el vapor a escala molecular hacia la fuente de
iones (con elevado vaco) con gran rapidez.
b. Introduccin directa, se introduce en la fuente de iones
usando una varilla metlica que lleva una punta capilar en la
que est la muestra . Calienta la varilla (medio electro
trmico) y se expone al vaco e ingresa la muestra . Este
mtodo tiene varios inconvenientes.
c. Introduccin a partir de un cromatgrafo de gases, la
introduccin es directamente en fase gaseosa, ya que el
cromatgrafo la separa los diferentes componentes de la
mezcla en el patrn o la muestra.

En el MS, debe trabajarse con alto vaco, que se consigue con bombas de alto vaco. La s
que se usan son las bombas de vaco difusoras (chorro supersnico , y retorno del aceite),
SON DE LARGA DURACIN; y las bombas de vaco turbomoleculares , usa turbinas y alaves
que provocan velocidad supersnica.

Fuentes de ionizacin
Ionizacin por impacto electrnico
Ionizacin qumica
Fuente de bombardeo con tomos rpidos
Desorcin con lser (LAMMA)
Ionizacin qumica a presin atmosfrica
Electronebulizacin asistida con un gas (electrospray)
Termospray
Ionizacin por haz de partculas

Analizador

A LA Salida del ionizador, se tiene una mezcla de iones


que deben ser separados para detectarlos de forma
individual . Los procedimientos son varios, entre los que
se tienen el:

a. Analizador de trampa de iones., es una modificacin de analizador


cuadrupolar.
b. Analizador de tiempo de vuelo, ocurre en microsegundos, es aplicable a
molecular de alto peso molecular.

DETECTOR
DETECTOR

DETECTOR

DETECTOR

c.

Analizador de campo magntico . Los iones acelerados en un en un


campo elctrico (105 m/s), y al llegar a un campo magntico
perpendicular que influir , obligando a los iones hacer trayectoria
circular. Entonces es necesario un barrido de campo magntico.

d. Analizador cuadrupolar, usa cuatro barras metlicas paralelas, al que se


aplica un potencial constante y un potencial alterno de radiofrecuancia. De la
combinacin de ambos campos se origina un movimiento lateral complejo de
los iones. Los barridos son muy rpidos (0,01 s), la masa el lineal a la masa,
entonces es posible interpolar masas.

Esquema de un espectrmetro de masa por


impacto electrnico (EI)
Campo magntico

Introduccin de muestra indirecta

Campo magntico

Acelerador.

Sistema de
entrada de
muestras.
Cmara de
ionizacin.

Analizadores.
Detector.

cuadruplo

Detector

Del analizador sale una corriente de iones de muy


pequea intensidad, difciles de detectar , ojo , debe
detectarse rpido y con precisin. Los detectores
pueden ser:

a. Detector de caja o copa Faraday, usa una caja y dentro una placa
ligeramente inclinada; los iones que llegan arrancan electrones de la placa y
se neutralizan. La clave, es medir la corriente necesaria para neutralizar a
todos los iones. Es muy usado para anlisis cuantitativo, en especial para
determinaciones de abundancia isotpica.
b. Detector de placa fotogrfica, se usa para cuando se necesita altsima
sensibilidad. Los iones al salir del analizador chocan placas que se resuelven
como fotografas y se lee por densitometra.
c. Detector multiplicador de electrones, igual a tubos fotomultiplicadores. Usa
la energa cintica de los iones, que al chocar sobre una placa, este emite
corriente de electrones que se aceleran a una 2da placa y sucesivamente.
As, se amplifica la corriente inica que no es muy proporcional para medidas
cuantitativas

Entonces, .. cuando el ICP (que es la fuente


de iones) en espectroscopia de emisin
(deteccin multielemental), se acopla al MS y
se simboliza como ICP-MS, sirve para muestras
en las que se logra ANALISIS DE IDENTIDAD Y
CANTIDAD ELEMENTAL

116

Lmites de deteccin de un ICP-MS con detector


cuadrupolo.

ESPECTRO DE MASAS , USADO PARA


ANALISIS DE ELEMENTOS COMO
MOLCULAS

Determinacin
del
peso molecular .
Determinacin de la
formula molecular.

PATRON DE IONIZACION DE UNA MOLECULA


EN EL MS

4. ESPECTROSCOPCIA DE FLUORESCENCIA
ATOMICA (EFA)

DE LAS TECNICAS DE ESPECTROSCOPIA ATOMICA DIFERENCIAMOS ESTAS TRES

FLUORESCENCIA ATOMICA

EFA. El mtodo de eleccin para el anlisis de ultratrazas Hg

5. RAYOS X (XR)

Los rayos X se definen como una


radiacin electromagntica de
longitud de onda corta.

la espectroscopa de rayos X convencional abarca la regin de


aproximadamente 0.1 a 25 .

Los rayos X forman parte de un espectro electromagntico y son expresados en


trminos de su energa (Kilo Electrn Voltio- Kev) o forma de onda (NanometrosNm). La fluorescencia de rayos x es una consecuencia de los cambios que toman
lugar dentro de un tomo.
Un tomo estable se comprende de un ncleo y los electrones que lo orbitan,
estos son organizados en capas, cada capa esta hecha de electrones con la misma
energa. Con una alta energa incidente (primaria) los rayos X que colisionan con un
tomo perturban la estabilidad de ste. Un electrn es eyectado de una capa
menor de energa (ej. Capa K) y se genera un espacio. Como resultado un electrn
de un nivel de energa ms alto (ej. Capa L) cae y llena ese espacio.
La diferencia de energa producida mientras el electrn se mueve entre estos
niveles es liberada en forma de rayos X secundarios los cuales son caractersticos
al elemento, este proceso es llamado fluorescencia de rayos X.

XR

XRF CONVENCIONAL , LA FLUORESCENCIA ATOMICA CON


RAYOS X

DETECTOR

HAZ PRIMARIO
TUBO DE
RAYOS-X

RADIACIN
FLUORESCENTE

MUESTRA

129

La fluorescencia de rayos X
END, bombardeo una muestra con rayos X y se analiza un espectro de rayos X
emitido por la muestra (fluorescencia). Fcil preparacin de la muestra, ensayo
rpido (lquidos, slidos, polvos, pelculas delgadas, pastas, etc).

El equipo puede estar dotado de un sistema robotizado para la introduccin de muestras en la cmara
de medida que se encuentra a vaco.
La fuente para la excitacin de la muestra es un tubo de rayos X con nodo de rodio y ventana Be de 75
m. El tubo y el generador de rayos X estn diseados para proporcionar una salida mxima de 4 KW
con un voltaje y corriente mximos aplicables de 60 KV y 150 mA.
El equipo dispone de un juego de filtros primarios (3 filtros de Cu de 200, 300 y 1000 m y 5 filtros de
Al de 12.5, 100, 200, 500 y 800 m), montados en un dispositivo que permite intercambiarlos
automticamente para eliminar componentes indeseados de la radiacin del tubo, mejorando adems
la relacin seal/ruido.
Mscara de 34 mm (mscara del colimador, situada entre la muestra y el colimador) que elimina la
radiacin procedente del borde de la apertura del portamuestras.
Dos colimadores de 0,23 y 0,46, y cinco cristales analizadores: OVO-55, PET, Ge, LiF200 y LiF220,
montados en sendos dispositivos que permiten intercambiarlos automticamente. El uso combinado
de ambos componentes estar en funcin del elemento a determinar teniendo en cuenta los
requerimientos de intensidad y/o resolucin de la seal.
El equipo est equipado con dos detectores (Sealed Proportional Counter y Scintillation Counter)
cuyo movimiento est gobernado por un gonimetro de alta precisin que cubre la totalidad del rango
de medida del instrumento. El uso de uno u otro estar en funcin del elemento a determinar.

Aplicaciones principales: Anlisis cualitativo general e inspeccin


semicuantitativo de todos los elementos de nmero atmico mayor
de 5 (B); anlisis cuantitativo de precisin en especial de los mas
pesados.
Fenmeno atmico: Reemisin de rayos X de los tomos excitados
Ventajas en el anlisis cualitativo: General para todos los
elementos de nmero atmico mayor de 5; preparacin mnima de
la muestra.
Ventajas en el anlisis cuantitativo: General para todos los
elementos de nmero atmico mayor de 13 (Al), en algunos casos
alta sensibilidad, sencillez, preparacin de la muestra mnima.
Muestra promedio deseable: 500 mg (no destructivo)
Limitaciones del mtodo: Insensible a los elementos de nmero
atmico menor de 5, precisin limitada por la no uniformidad de la
muestra
Limitaciones para la muestra: Aplicable principalmente a slidos y
lquidos no voltiles

La fluorescencia de rayos x

es una tcnica aprobada para anlisis de


materiales en un amplio rango de industrias y aplicaciones, desde identificacin
positiva de materiales (PMI), anlisis de chatarra, medicin de azufre en aceite,
anlisis de espesor de recubrimiento, anlisis de metales y control de calidad.
Beneficios
Mnima o ninguna preparacin de muestra.
Anlisis no destructivo.
Anlisis de slidos, lquidos, polvos, pelculas, granulados, etc.
Anlisis rpido- resultado en minutos.
Anlisis cuantitativo, cualitativo y semicuantitativo.
Anlisis de rutina de control de calidad que puede ser realizado con mnimo
entrenamiento.
No se necesitan cidos, reactivos o solventes qumicos.
Anlisis desde Na11 (Sodio) a U92 (Uranio) desde ppm a rangos de altas
concentraciones en porcentaje.

SEGUNDO REFLECTOR
PRIMER REFLECTOR
FILTRO

HAZ REFLEJADO

SLIT

RADIACION FLUORESCENTE

TUBO DE
RAYOS-X
DETECTOR DE Si (Li)

ESPECTRO DE TXRF DE UNA SOLUCIN


PATRN CON 10 g/g DE ELEMENTO

Espectroscopia de fluorescencia
de rayos X de reflexin total

RMN

La Resonancia Magntica Nuclear (RMN) es


un mtodo qumico-fsico basado en las
propiedades magnticas de los ncleos
atmicos.

Es el estudio de la estructura molecular a travs de la medicin de


la interaccin de un campo electromagntico de radio frecuencia
oscilante con un grupo de ncleos inmersos en un potente campo
magntico externo.
Muchos ncleos se comportan como pequeos imanes, generando
un dbil campo magntico. La ubicacin de dichos ncleos en una
zona donde se halla presente un campo magntico intenso Bo hace
que los estados que difieren en la orientacin de los momentos
magnticos nucleares posean diferente energa.
utilidad de la RMN en Determinacin estructural y la respuesta
sera sencilla

Los tomos mas abundantes en los compuestos orgnicos son el H y el C, y


cantidades de N y P. De ellos los que son magnticamente activos y se
observan son: H1, C13 (el C12 es magnticamente inactivo), N15 y el P31.

En presencia de un campo magntico, los ncleos de tomos con momento


magntico de spin (+ -), pueden mostrar dos orientaciones, uno a favor y otro
contra del campo externo. Cada uno en el campo magntico resuena diferente,
el cual, se debe a la estructura. Las influencias se deben a) a la densidad
electrnica en torno al ncleo b) los campos inducidos.

Informacin que resulta:


a. Frecuencia a la que sale cada ncleo en concreto-DESPLAZAMIENTO.
b. Numero de ncleos de cada tipo INTEGRAL
c. Numero y disposicin de los ncleos proximos-MULTIPLICIDAD

En ausencia de un campo magntico externo, los espines nucleares


de los ncleos magnticos estn orientados en diferentes
direcciones.

sin campo

con campo

Al colocarlos los ncleos entre los polos de un magneto fuerte, el


ncleo adopta una orientacin especfica y el espn de H1 o C13
puede orientarse paralelo o antiparalelo al campo externo.
La orientacin paralela al campo magntico es ligeramente ms
baja en energa, por lo tanto es favorecida.

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

Al momento de introducir tomos con espn nuclear a un campo


magntico externo, el ncleo se comporta como un pequeo
imn y tiende a orientarse, preferentemente, a favor del campo
magntico.

sin campo

con campo

144

Si se aplica energa que obligue a los ncleos a invertir el sentido


de su orientacin con respecto al campo magntico, se dice que el
sistema est en resonancia

Esta energa aplicada, E, corresponde a radiacin electromagntica de la


regin de las radiofrecuencias

Para el caso del protn, si Bo es 11.75 Teslas, la frecuencia de la radiacin de excitacin


tendr que ser 500 MHz. Hay que enfatizar que para el mismo campo magntico, pero
diferente ncleo, la frecuencia de la radiacin cambia.
Al campo magntico anterior 13C absorbe a 125.73 MHz y 15N a 50.66 MHz.

En la prctica se utilizan magnetos superconductores para


producir campos poderosos hasta 14.1 tesla (T).
La fortaleza ms comn de los campos estn entre 1.41 4.7 T.
La fortaleza de un campo magntico de 1.41 Tesla (energa de
radio frecuencia rf de 14,100 gauss) est en los 60 MHz para un
ncleo protnico H1.
Para que un ncleo de C13 tenga resonancia,la radiofrecuencia
debe ser 15 MHz.

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

A medida que los ncleos van regresando poco a poco a la situacin inicial de equilibrio
alineados con en el campo magntico principal, la seal detectada va disminuyendo de
intensidad hasta hacerse cero. Esta cada de la seal se conoce como cada libre de la
induccin (Free Induction Decay) (FID) y da lugar al espectro de RMN
La FID es una onda que contiene todas las seales del espectro en una forma que es
dependiente del tiempo. Esta onda puede convertirse en un espectro de seales en
funcin de su frecuencia. Para ello se utiliza una funcin matemtica conocida como
Transformada de Fourier. El resultado es lo que se conoce como un espectro de RMN
(espectro de frecuencias).

Si no hay campo magntico aplicado, no hay diferencia entre los


estados de los espines.
A medida que aumenta el campo, aumenta la separacin de
energas de los estados de los espines.

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

148

Las absorciones de la NMR para H1 ocurre entre 0 12 .


Las absorciones de la NMR para C13 ocurre entre 1 220

desplazamiento qumico

frecuencia de la seal frecuencia de referencia


frecuencia espectrmetro

desplazamiento qumico observado


frecuencia del espectrmetro en MHz

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

150

Propiedades de algunos ncleos


atmicos
Istop
o

Abundanci
a natural
(%)

1H

99.984

2H

0.016

12C

98.9

13C

1.1

14N

99.64

15N

0.37

16O

99.76

17
19F
28Si
31P

0.0317
100
92.28
100

nmero
cuntico
de spin
(I)

Momento
magntico
)

Frecuencia
de
resonancia
a 7 T (MHz)

Sensibilidad
relativa

1/2

2.79628

300.13

1.0000

0.85739

46.07

0.0964

1/2

0.70220

75.47

0.0159

0.40358

21.68

0.00101

1/2

0.28304

30.41

0.00104

5/2

1.8930

40.69

0.0291

1/2

2.6273

282.40

0.834

0
1/2

1.1205

121.49

0.0664

151

Funcin de un espectrmetro de NMR


La muestra es colocada en el campo
magntico y excitada con pulsaciones en la
radiofrecuencia colocada.
El realineamiento de los campos magnticos
induce una seal en el circuito .
El pulso es repetido tantas veces como sea
necesario para dar seales.

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

154

Equipo bsico de RMN


transmisor de
radiofrecuenci
a

receptor de
radiofrecuencia

Bobinas
de barrido

Bobinas
de barrido
Polo del
imn

Polo del
imn

Control y
registrador

Tubo de
muestra
Generador
de barrido

155

Ejemplo

28 de enero de 2008

Prof. Mara de los A. Muiz

157

El espectro de RMN protnica dividido en una serie de zonas en las que se


encontraran situados los diferentes tipos de protones:

MRI Magnetic Resonance Imaging

Tcnica tridimensional de RMN que se utiliza como alternativa a los rayos


X en medicina.
Permite obtener imgenes del cuerpo humano con una tcnica mucho
menos agresiva que los rayos X.
Se basa en la utilizacin de gradientes de campo y lo que registra es el
hidrgeno de los tejidos (el agua), transformndose en imgenes ms o
menos coloreadas en funcin de la intensidad de los picos.

Un poco ms complicado: 2D
C4H8O: COSY
CH2

OH

CH2

CH3

CH3 CH2 CH2 OH

162

(A) Lisozima intercambiada con


deuterio
(B) Lisozima sin intercambio (1H)
(C) Lisozima precipitada en D2O
con un desnaturalizante suave

Modificacin de protenas

163
Chang, S.T. et al (1998) Biotech. and Bioeng. 59:144.

Bioelementos presentes
nicamente en
cantidades mnimas:
Bioelementos
presentes en
cantidades
importantes en la
materia viva:
Carbono -> C
Hidrgeno -> H
Oxgeno -> O
Nitrgeno -> N
Fsforo -> P
Azufre -> S

Hierro -> Fe
Cobre -> Cu
Cinc -> Zn
Manganeso -> Mn
Cobalto -> Co
Yodo -> I
Molibdeno -> Mo
Vanadio -> V
Nquel -> Ni
Cromo -> Cr
Flor -> F
Selenio -> Se
Silicio -> Si
Estao -> Sn
Boro -> B
Arsnico -> As

Bioelementos
presentes como iones:
Sodio -> Na+
Potasio -> K+
Magnesio -> Mg++
Calcio -> Ca++
Cloro -> Cl

CRISTALOGRAFIA DE RAYOS X

vencer muchos obstculos experimentales antes


un cristal de protena. de que la estructura tridimensional de una
macromolcula sea determinada por difraccin de
rayos X de cristales
Las molculas con porciones altamente
hidrofbicas no pueden ser cristalizadas, pero
en algunos casos, los cristales se pueden
obtener en presencia de detergentes.
se produce un patrn de difraccin por
irradiacin de rayos X. Este patrn consiste de
miles de puntos que son los datos crudos.
patrn de difraccin de una protena
La posicin e intensidad de cada punto es determinada
relativamente fcil, las fases de las ondas que
formaron cada punto debe ser tambin determinada
para producir un mapa de densidad electrnica.
mapa de densidad electrnica
de una protena

posicin de los tomos resueltos por


cristalografa de rayos X.

Esta imagen se interpreta al construir


un modelo de la protena que se ajuste
al mapa. Un modelo molecular de la
secuencia
de
aminocidos
o
nucletidos que se conozca mejor
independientemente,
es
ajustado
dentro del mapa de densidades
electrnicas y se termina con una serie
de refinamientos. El resultado es un
juego de coordenadas Cartesianas X, Y,
Z para cada tomo que no sea un
hidrgeno en la molcula.

La descripcin completa de cada reflexin - su


posicin, intensidad y fase - es denominada
"factor de estructura". Los factores de
estructura estn disponibles en el PDB para
aproximadamente 25 % de las entidades
cristalogrficas. Al publicar los factores de
estructura, permite a otros investigadores
generar y examinar los mapas de densidad o
tratar refinamientos alternativos o mtodos de
fase.

cmo funciona un difractmetro de rayos x?

Un resultado del refinamiento es la


asignacin de un factor de temperatura
para cada tomo en el modelo final. Un
factor de temperatura elevado sugiere
desorden o movimiento trmico. Aqu
desorden significa que el tomo ocupa
diferentes posiciones en diferentes
molculas del cristal y movimiento
trmico se refiere a vibraciones de un
tomo sobre su posicin de reposo. Estas
posibilidades no pueden ser distinguidas
nicamente a partir de los datos de
difraccin. Si porciones de una cadena
tienen alta movilidad o desorden,
producen
densidades
electrnicas
pobres o poco homogneas, lo que hace
imposible asignar posiciones a los
tomos en esas regiones. Por esta razn
es comn encontrar que los extremos
amino o carboxilo terminal y tal vez que
uno o dos giros de una protena carezcan
de coordenadas cristalogrficas. Los
programas de cmputo RasMol y Chime
tienen en sus mens de color un
esquema designado. "temperatura".
Este proceso asigna colores clidos a
factores de temperatura elevados y
colores fros a los bajos.

ya desde el pasado siglo XX, la Cristalografa eS una de las disciplinas bsicas para muchas ramas de
la Ciencia, y en especial de la Fsica y Qumica de la materia condensada, de la Biologa y de la
Biomedicina.
Gracias al conocimiento estructural que nos proporciona la Cristalografa somos capaces de producir
materiales con propiedades prediseadas, desde catalizadores para una reaccin qumica de inters
industrial, hasta pasta de dientes, placas de vitrocermica, materiales de gran dureza para uso
quirrgico, o determinados componentes de los aviones, por poner algunos ejemplos.
La Cristalografa nos proporcion los secretos estructurales del ADN, el llamado cdigo gentico.
Podemos aumentar la resistencia de las plantas frente al deterioro medioambiental. Somos capaces
de comprender, modificar o inhibir, enzimas implicados en procesos fundamentales de la vida e
importantes para mecanismos de sealizacin que ocurren en el interior de nuestras clulas, como
el cncer.
Gracias al conocimiento de la estructura del ribosoma, la mayor fbrica de protenas de nuestras
clulas, podemos entender el funcionamiento de los antibiticos y modificar su estructura para
mejorar su eficacia. De la estructura de enzimas, producidos por ciertos virus, hemos aprendido
cmo combatir bacterias con alta resistencia a antibiticos, y ya somos capaces de desentraar las
sutiles maquinarias de defensa que han desarrollado estos grmenes, con lo que no es un sueo
pensar que podremos combatirlos con herramientas alternativas a los antibiticos.