FECHA: NOVIEMBRE 15, 2016 23:45

REALIZAR UN ENSAYO DE INVESTIGACIN EN PRUEBAS

INMUNOLOGICAS (ELISA, WESTER BLOU Y PCR) Y ELABORAR UN
ENSAYO DE LO INVESTIGADO. ESTE ENSAYO DEBE CONTENER.
ELISA, WESTER BLOU Y PCR)

1.-PROPOSITO

2.-DESARROLLO DE LAS PRUEBAS (UTILIDAD Y FUNCION).

3.-INTERPRETACION DE RESULTADOS
4.-IMAGENES
5.-CONCLUSION PERSONALIZADA
6.-BIBLIOGRAFIA
ASI TAMBIEN REALIZAR UNAS PRESENTACIONES POWER POINT PARA
EXPONERLO COMO SEMINARIO
PRUEBA ELISA
1.-PROPOSITO
Prueba basada en inmunoensayo para identificar la presencia de
complejos antgeno anticuerpo. El virus del VIH es el antgeno.

2.-DESARROLLO DE LAS PRUEBAS (UTILIDAD Y FUNCION).

La funcin de esta prueba la realiza el marcador enzimtico que se
emplea en estos anlisis, se conjuga con un ligando, que puede ser un
antgeno, un anticuerpos especfico para el antgeno de inters o un
anticuerpo para el anticuerpo primario.
Se requiere de un paso de separacin para eliminar el conjugado
enzimtico libre antes de proceder a determinar la cantidad de conjugado
enzimtico enlazado. Para lo cual se aade sustrato enzimtico y se mide
la reaccin cataltica entre la enzima y el sustrato. Por sus caractersticas
catalticas las enzimas son marcadores muy sensibles y verstiles. Una
sola protena enzimtica puede transformar en algunos minutos gran
nmero de molculas de sustrato en una cantidad igualmente abundante
de producto final, produciendo un cambio de color amplificado y que se
detecta con facilidad.
Las combinaciones de enzima y sustrato que se emplean en los diversos
mtodos ELISA incluyen:
1)peroxidasa de rbano y su sustrato, perxido de hidrgeno que en
presencia de cromgeno o-fenilendiamina produce un producto color
amarillo-naranja medible
2) galactosidasa beta y su sustrato o-nitrofenil-beta-Dgalactopiransido
que se transforma en un producto nitrofenolado amarillento medible
3)fosfatas alcalina y su sustrato p-nitrofenilfosfato que tambin se
transforma en nitrofenolato.
Se utiliza cido sulfrico para inhibir la actividad enzimtica y estabilizar
el producto final de reaccin que tiene color.
Utilidad:
Se pueden detectar antgenos contra diversos parasitos, hongos, virus,
bacterias, antgenos tumorales, drogas.
Entre los parasitos se pueden reconocer:
Plasmodiumfalciparum
Tripanosoma cruzi
Leishmaniadonovani
Toxoplasma gondii
Entamoebahystolitica
Schistosomamasoni
Fasciola heptica
Echinococcusgranulosus
Trichinellaspiralis

3.-INTERPRETACION DE RESULTADOS
Los anticuerpos son protenas que combaten la enfermedad, creadas por
el sistema inmunitario en respuesta a la infeccin.
Un resultado positivo significa que el sistema inmunitario ha producido
anticuerpos en respuesta a la infeccin por el VIH. Este resultado debe
confirmarse con otra prueba llamada Western Blot.

4.-IMGENES
5.-CONCLUSION PERSONALIZADA
6.-BIBLIOGRAFIA

PRUEBA WESTER BLOU

1.-PROPOSITO
Se utiliza para determinar la presencia y cantidad de antgenos y de
anticuerpos especficos

2.-DESARROLLO DE LAS PRUEBAS (UTILIDAD Y FUNCION).

Se emplean antgenos virales obtenidos por cultivo celular. Mediante
electroforesis se separan las diferentes protenas vricas por su diferente
peso molecular. Posteriormente se transfieren a papel de nitrocelulosa y
secundariamente se incuban con el suero problema. Los anticuerpos se
detectan aadiendo una anti-IgG humana marcada con una enzima
(peroxidasa) que produce una banda coloreada al aadir un sustrato. Esta
tcnica identifica anticuerpos especficos frente a las distintas protenas
del VIH (Figura 27). Las protenas son separadas en primer lugar mediante
electroforesis en geles de poliacrilamida y posteriormente se transfieren
mediante la aplicacin de un campo elctrico perpendicular al gel a una
membrana

3.-INTERPRETACION DE RESULTADOS

4.-IMGENES

5.-CONCLUSION PERSONALIZADA

6.-BIBLIOGRAFIA

PRUEBA PCR
1.-PROPOSITO
En esta prueba se detecta directamente la presencia del virus en el
organismo y es altamente fiable a partir de los 15 tras la exposicin. La
prueba de la PCR no es concluyente y tras 12 semanas deberas realizarte
un test ELISA antes de considerar el resultado negativo definitivamente.
La deteccin se realiza en una microplaca, y los pocillos se ocupan con
diluciones seriadas del producto de la amplificacin. Una vez finalizada la
hibridacin se revela al aadir un substrato. La placa se lee a una longitud
de onda determinada, y con los resultados de la lectura, basndonos en
los datos obtenidos para el control interno, obtenemos el nmero de
copias de ARN viral presente en la muestra problema.

2.-DESARROLLO DE LAS PRUEBAS (UTILIDAD Y FUNCION).

Esta prueba ha sido til para el estudio de agentes virales(como VIH,
VHB, VHC, Citomegalovirus, etc), Bacterianos(Bordetella pertussis,
Mycobacterium Tuberculosis, etc.), Micosis (Aspergillus), Parsitos
(Toxoplasma Gondii) y en algunos tipos de Carcinomas, confirmando la
presencia o ausencia de estos.
La PCR se lleva a cabo en tres etapas:
Desnaturalizacin: los ADN de los microorganismos son calentados y
separados a una temperatura 95C.
Hibridacin: se formaran primers, los cuales son secuencias de
oligonucletidos, se alinean en el extremo 3 del templado e hibridan la
secuencia para formar un complejo templado-primers, esta hibridacin
debe ser a una temperatura de 50c.
Extensin: la Taq polimerasa acta sobre el complejo formado y empieza
una reaccin cataltica, para crear cadenas completas de ADN, al final del
ciclo se crearan amplicones, la temperatura ptima para dicha reaccin
debe ser 72C, temperatura ideal para la funcin de la enzima.
La repeticin de estos ciclos 30 a 40 veces genera millones de molculas
del ADN blanco que puede ser detectado por su peso molecular en gel de
agarosa teido con bromuro de etidio.
3.-INTERPRETACION DE RESULTADOS
Para saber si la reaccin transcurri eficientemente, los amplicones son
visualizados a travs de una electroforesis en geles de agarosa. La
electroforesis consiste en la separacin de grandes molculas como los
cidos nucleicos a travs de una matriz slida que funciona como un
filtro para separar las molculas en un campo elctrico de acuerdo a su
tamao y carga elctrica.
La visualizacin de los amplicones se lleva a cabo tomando una foto
digital al gel de agarosa expuesto a luz UV.
Dependiendo de la sensibilidad de la prueba el PCR puede detectar ADN
de VIH en pacientes.

4.-IMGENES

5.-

CONCLUSION PERSONALIZADA
La PCR es una de esas herramientas que se ha desarrollado para ofrecer
una alternativa para el estudio de los cidos nucleicos.
La prueba de PCR es una prueba til debido a que este estudio puede dar
como resultado si un paciente ha adquirido el VIH desde hace 15 das
despus de la exposicin, en donde se detecta copias de ARN o ADN del
virus.

6.-BIBLIOGRAFIA
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2013/ir132d.pdf
http://www.cls.org.co/uploaded_user/pdf1997/03.pdf