INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA

Cromatografa significa escritura en color. Es un grupo variado de mtodos de separacin que permiten al quimico separar, aislar e identificar componentes estrechamente relacionados en mezclas complejas, muchas de estas
separaciones son imposibles por otros mtodos.

Se emplea una fase estacionaria y una fase mvil.Los componentes de una mezcla se transportan a travs de la fase estacionaria por medio de una fase mvil que fluye continuamente. Las separaciones se basan en las
diferencias de velocidad de migracin de los componentes de la mezcla a travs de la columna.

Componentes

Fase estacionaria: Constituida por un soluto granular que se encuentra empacada en una columna de vidrio o metal. Tambien se puede utilizar papel filtro, en la cromatofrafia en papel. Cuando se usa placa revertida en
absorbente la tcnica se llama cromatografa en capa fina.

Materiales:

CaCO3

SiO2

Zeolitas(SiO4+AlO2) celulosa, etc.

Tambien puede ser un liquido organico de alto punto de ebullicin inmicible con la fase mvil.

La funcin de la fase mvil es adsorber con diferente fuerza a cada uno de los componentes de la muestra en su paso por la columna

Fase mvil

Tiene la funcin de transportar a los componentes de la muestra a travs de la columna. Puede ser un liquido o gas (crom.liquida o gaseosa) Sustancias:

Agua,ter de petroleo, acido actico, etanol, isopropanol, acetona, tolueno, benceno, etc. Gas nitrgeno hidrogeno y helio.`

Muestra o sustrato

Es la muestra liquida o gaseosa objeto de anlisis que contiene dos o mas componentes a separar . SI se encuentra en estado solido debe diluirse previo a su anlisis.

Cromatografia lineal

Se denomina cromatografa lineal al proceso de migracin en la que la concentracin de soluto es baja y la relacin cs/cm(coeficientedeparticion) se mantiene constante y consecuentemente la grafica es lineal.

Cromatografa de elucin

El proceso por el cual el soluto es eluido por el disolvente a travs de la columna se llama elucin
La muestra disuelta se introduce en la parte superior de la columna y se adisionan porciones de disolvente que desplaza las molculas a lo largo de la columna realizando migraciones entre mvil y estacionaria y viceversa. Los
componentes se distribuyen en la columna y los que pasan mayor tiempo en la fase mvil adquieren mayor velocidad

Teoria cinetica de la cromatografa

Describe el efecto de las variables que afectan el ancho de una banda cromtica y la velocidad de migracin de un soluto a lo largo de la columna.

Causas del ensanchamiento de la zona

Difusin turbulenta

Se debe a las diferentes trayectorias que toma una molcula en su recorrido a travs de la fase estacionaria en la columna

Difusion longitudinal

Se debe a la migracin de las molculas desde la posicin central mas concentrada hacia las regiones mas diluidas hacia adelante y hacia atrs.

transferencia de masa fuera del equilibrio

El flujo en la fase mvil es tan rpido que no permite alcanzar un verdadero equilibrio de soluto ntrelas dos fases.

Variables

Velocidad de flujo

Tamao de partcula de la fase estacionaria

Las velocidades de difusin

El espesor de la pelcula de la fase estacionaria

CROMATOGRAFIA LIQUIDA

Se denomina cromatografa liquida a todos los procedimientos cromatograficos que utilizan una fase mvil liquida y una fase estacionaria liquida o solida, por ejemplo: Cromatografia de particin(liq-liq) Cromatografia de
adsorcin(liq-solido Cromatografia de intercambio ionico(liq-solido) Cromatografia en papel y capa fina(liq-sol)

Se utiliza un tubo de vidrio o de metal para sostener la fase estacionaria, por eso son mtodos crom. En columna. Los ltimos son proc. Crom. Planos.

Cromatografa en columna

Utiliza un tubo de vidrio de dimetro de 10 a 20 mm que contiene partculas solidas que forman la parte estacionaria. Para obtener un flujo razonable de la parte mvil se utilizan partculas mayores a 150 200 um.

Se logra mejorar considerablemente su eficiencia por medio de una disminucin del tamao de partcula de la fase estacionaria dando origen a instrumentos mas complejos y el alto rendimiento
La eficiencia de separacin de la columna se incrementa con la reduccin del dimetro de la particula

Componentes:

Reservorio para el disolvente y sistema para desgasificarlo la eficiencia aumenta considerablemente mediante una elucin en gradiente, para lo cual se utilizan dos o mas disolventes.

Bombas Mecanicas o de movimiento alternado. Volumenes de disolvente sin limites, reducido volumen interno ideales para elucin en gradiente

Precolumnas Separar las impurezas del disolvente para evitar la contaminacin de la columna analtica.

Sistema de inyeccin de muestra Se utilizan vlvulas giratorias y de corredera

Columnas Se fabrican con tubos de vidrio de pared gruesa o acero inoxidable. Empaque gel de slice o pequeas esferas de vidrio

Control de temperatura Temp. Ambiente, columnas encamisadas con agua control preciso de la temperatura

Detectores distintos sistemas de acuerdo a la naturaleza de la muestra

CROMATOGRAFIA DE ADSORCIN

En estos procedimientos cromatograficos la fase estacionaria es la Superficie de un solido finamente dividido. El soluto compite con el eluyente por la superficie libre sobre el solido y la retencin es el resultado de las fuerzas de
adsorcin. Las grandes siferencias en el gradode retencin de los compuestos son su fundamento.

Fase estacionaria: Gel de slice, alumina

Fase movil: La eleccin es fundamental para el xito variando el disolvente q puede modificarse hasta caer al intervalo ideal de 1-10. Uno con alta fuerza de elucion eluira las especies absorbidas mas rpidamente.

Aplicaciones:Separacion de compuestos organicos neutros, determinacin de numero de hidroxilos de molecula,dobles enlaces, grupos funcionales.

CROMATOGRAFIA DE PARTICION

Soporte solido: Acido silcico o gel de slice, la fase estacionaria es acuosa.Disolventes polares como alcoholes alifticos glicoles o nitrometano, solos o mezclados con agua. Tierra de infusorios, almidon, celulosa y vidrio en
polvo recubiertos con liquidos organicos.

Movil: Disolvente puro o mezcla de disolventes, con diferente polaridad al estacionario para que sean inmiscibles.

Empaque con fase ligada: Particulas de gel de silice puro sobre las cuales se ha unido qumicamente un grupo orgnico

Aplicaciones

Separacion de sustancias estrechamente relacionadas, aminocidos por la hirolisis de una protena, alcoholes alifticos y derivados de azucares.

INTERCAMBIO IONICO
El disolvente por lo general es agua y las especies a separar son iones. Intercambiadores de iones naturales son las arcillas y zeolitas, sintticos son resinas sintenticas.

Aplicaciones

Separacion de aminocidos y otros acidos y bases organicas, anlisis de aminocidos.

CROMATOGRAFA EN GEL

Es una tcnica en la que la separacin se basa por lo menos en parte en el tamao y la forma molecular de las especies de la muestra. Tambin se conoce como permeacion en el, exclusin y tamizado molecular

Se efecta sobre una columna y por elusin.

Fase estacionaria: Consiste en partculas esfricas de un polmero poroso que absorbe fcilmente agua u otro disuelventes y se hincha a consecuencia de ello. Uno de los polmeros mas utilizados es preparado por una serie de
resinas con diferentes tamaos de poro llamados sephadex.

Aplicaciones: separacin de molculas de bajo peso molecular de las molculas de productos naturales de alto peso molecular.

Otros son usados para fraccionar pptidos, los mas porosos para la purificacin y fraccionamiento de macromolculas como protenas, cidos nucleicos y polisacridos

Y para estimacin de pesos moleculares de molculas grandes.

COMPARACION CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTO RENDIMIENTO CON CROMATOGRAFA DE GAS LIQUIDO.

Gas liquido: Rapidez y simplicidad instrumental

Alto rendimiento: Aplicable a sustancias no voltiles y a materiales trmicamente inestables.

Compartidas:

Eficiente, muy selectivo y de gran aplicabilidad. Requieren una muestra pequea Fcilmente adaptable al anlisis cuantitativo

CROMATOGRAFIA PLANA

Se coloca una gota de la solucin que contiene la muestra en algn punto de la superficie plana de la fase estacionaria, se evapora el disolvente y se desarrolla la cromatofafia por medio del flujo movil a travs de una superficie.
Se debe a fuerzas capilares

Capa delgada

La separacin se produce sobre una capa de un solido finamente dividido que se ha fijado sobre una superficie plana. Hoja o fibra de papel de filtro grueso.

Fase estacionaria Gel de slice, que funciona como soporte para el agua u otros disolventes polares en las separaciones liquido-liquido. Si se seca en un horno esta pierde la humedad y su superficie resulta solida de modo que
sirve como adsorbente para separaciones liquido-solido Tambin se usa geles de sephadex.

En papel
Se realiza de la misma forma que las separaciones en capa delgada, usando papeles de elevada pureza y con caractersticas reproductibles en cuanto a porosidad y grosor. tienen bastante humedad absorbida por lo que se
pueden clasificar como cromatografa liquido liquido, sin embargo es posible hacer que otros liquidos desplacen el agua proporcionando un tipo diferente de fase estacionaria.

CROMATOGRAFIA GASES

FUNDAMENTO

Es una tcnica de separacin fsica de los componenetes de una mezcla compleja por medio de una columna y su posterior cuantificacin a travs de un detector que genere una seal proporcional a la concentracin de cada
componente.

COMPONENTES

Suministro de fase mvil: Gas inerte H He N , transportar la muestra a travs de a columna. Alta pureza y diferente a los componentes de la muestra.

Dispositivo de control de caudal:

Influencia directa en la eficiencia de la columna. Su control es muy importante, controlndolo se puede corregir los defector del detector causado por el ruido que genera dicho gas.

Bloque de inyeccin de la muestra.

Permite la introduccin de una amplia variedad de muestras incluyendo gases y liquidos. Directa por medio de geringa o por lugs de muestreo. Las solidas deben ser disueltas previamente con el disolvente adecuado.

Termostato

Lograr la separacin de los componentes a temperaturas reproducibles, mantener un amplio intervalo de temperaturas.

Isotrmica t eb. Similares, programada si muy diferentes.

Columnas:Tubo largo de metal relleno de un solido granular . Separar eficientemente los componentes de una muestra. Existen rellenas y capilares, mas costosas y eficientes. Eficiencia se mide por n de platos tericos,
dimetro y su longitud

Estacionaria solido granular con o sin recubrimiento de un liquido organico de alto punto de ebullicin. Separar a los componentes retenindolos a cada uno con diferente fuerza.

CARACTERISTICAS estacionaria Extensa superficie de contacto Diametro de poro uniforme Inactivad con la muestra

Tamao de particula uniforme Buena resistencia mecnica

La constituyen por lo general tierra de diatomceas(slice hidratada algas marinas, etc)

CHROMOSORf G Separar compuestos polares P no polares T altamente polares

Detector
General una seal proporcional a la concnetracion de cada componenete y la enva al registrador

Su funcionamiento se basa el en principio de transferencia de calor del filamento hacia las molculas.

Fuentes de error
Tecnicas de muestreo, comportamiento del detector, del registrador, tcnicas de calculo.

APLICACIN

Analisis cuantitativo de compuestos organicos y bioqumicos en estado gaseoso. Tambien sustancias liquidas y solidas que puedan pasar al estado gaseoso 400C