Professional Documents
Culture Documents
OBJETIVO
INTRODUCCIN
Marco terico
CERVEZA
El principio bsico de esta tcnica es provocar una alteracin de alguna propiedad del solvente original
que promueva la precipitacin de la protena, afectando su solubilidad, esta depende de tres factores
principales: (i) composicin y distribucin de sus aminocidos perifricos (una protena rica en
aminocidos hidrofbicos es en general menos soluble que una rica en aminocidos polares), en general
los aminocidos hidrofbicos tienden a encontrarse en el interior de la molcula y los hidroflicos en la
superficie; (ii) su estructura tridimensional (las protenas fibrosas son en general menos solubles que las
globulares) y (iii) el entorno de la propia protena como la temperatura, la constante dielctrica del medio,
el pH, y la fuerza inica
La separacin por precipitacin se puede realizar por tres mtodos: (i) Precipitacin por sales, (ii)
Precipitacin por solventes orgnicos y (iii) Precipitacin por polmeros.
Precipitacin por sales: Por aos, la adicin de sales neutras a los extractos enzimticos para su
purificacin y concentracin, ha sido la tcnica mas utilizada. En la separacin por solubilidad diferencial,
al adicionar el soluto, se pueden presentar dos fenmenos importantes para la enzima a separar; (i) que
la protena presente una mayor solubilizacin en el solvente debido a la interaccin de los grupos
cargados que se relacionan a su vez con los iones de la sal incrementando la densidad de carga con una
mayor repulsin intermolecular, este fenmeno es conocido como: solubilizacin por salado o salting in.
Lo contrario de esto es la (ii) precipitacin por salado o salting out, los grupos hidrofbicos superficiales
originan un ordenamiento de las molculas de agua alrededor de estas zonas dando como resultado un
estado ordenado termodinmicamente inestable que lleva a la agregacin y precipitacin de la protena.
Las sales de iones divalentes como el cloruro de magnesio MgCl2, cloruro de manganeso MnCl2, el sulfato
de amonio (NH4)2SO4entre otros, son mucho mas eficientes tanto para la precipitacin o solubilidad de
protenas que las sales de iones monovalentes como el cloruro de sodio NaCl, cloruro de potasio KCl o
cloruro de amonio NH4Cl. La sal mas utilizada es el sulfato de amonio por su alta solubilidad y el alcanzar
fuerzas inicas muy elevadas.
Donde:
0 1 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 5 5 6 6 6
0 3 6 9 2 5 9 2 6 9 3 7 1 5 0 5 9
6 4 4 4 6 8 1 6 1 8 6 6 6 9 3 0 7
5 7 1 1 1 1 2 2 2 3 3 4 4 4 5 5 6 6
9 0 3 6 9 2 6 9 3 6 0 4 8 2 7 1 6
8 7 6 7 9 2 6 1 8 5 4 4 6 0 5 2
10 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 5 5 6
3 1 0 3 6 0 3 6 0 3 7 1 5 9 3 8 2
9 9 9 0 3 6 1 7 4 2 2 3 6 1 7
15 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 5 5 5
6 4 2 1 4 7 0 3 7 0 4 8 2 6 0 4 9
1 1 2 4 7 1 6 3 1 0 0 3 7 2
20 0 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 5 5
7 5 3 1 4 7 0 4 7 1 4 8 2 6 1 5
3 3 5 7 1 6 2 9 7 7 9 2 7
25 0 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 5
7 6 4 1 4 7 1 4 8 1 5 9 3 7 2
5 6 9 1 5 0 7 5 5 6 8 2
30 0 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 4 4 4
8 6 6 1 4 8 1 4 8 2 6 0 4 8
7 8 1 4 9 5 3 2 2 5 8
35 0 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 4 4
8 7 7 1 5 8 1 5 9 2 6 1 5
8 1 4 8 4 1 9 9 0 3
40 0 2 5 8 1 1 1 2 2 2 3 3 4
9 8 9 2 5 8 2 5 9 3 7 1
0 3 7 2 8 6 5 6 8
45 0 2 5 9 1 1 1 2 2 3 3 3
9 9 0 2 5 9 2 6 0 4 8
3 6 0 6 3 2 2 3
50 0 3 6 9 1 1 1 2 2 3 3
0 0 2 2 5 9 3 6 0 4
5 9 4 0 8 8 8
55 0 3 6 9 1 1 1 2 2 3
0 1 3 2 6 9 3 7 1
7 1 7 5 3 3
60 0 3 6 9 1 1 2 2 2
1 2 5 2 6 0 3 7
9 4 1 9 9
65 0 3 6 9 1 1 2 2
1 3 7 3 6 0 4
2 8 5 4
70 0 3 6 9 1 1 2
2 5 9 3 7 0
4 1 9
75 0 3 6 1 1 1
2 6 0 3 7
1 7 4
80 0 3 6 1 1
3 7 0 3
3 9
85 0 3 6 1
4 8 0
5
90 0 3 7
4 0
95 0 3
5
100 0
Tabla 1. Sulfato de amonio requerido para la precipitacin de una
protena. Esta tabla muestra la cantidad requerida de sulfato de
amonio (NH4)2SO4 para llevar una solucin de 1 litro con una
concentracin inicial de saturacin, a una final a cero (0) oC
Temperatura (o C)
0 10 20 25 30
Moles de (NH4)2SO4 por 1000 g 5,35 5,53 5,73 5,82 5,91
de H2O
Porcentaje en peso 41,42 42,22 43,09 43,47 43,85
Gramos de (NH4)2SO4 requeridos 706,8 730,5 755,8 766,8 777,5
para saturar 1000 ml de H2O
Gramos de (NH4)2SO4 por 1 litro 514,7 525,1 536,1 541,2 545,9
de solucin saturada (G)
Molaridad de la solucin 3,90 3,97 4,06 4,10 4,13
saturada
Densidad (g/cm3) 1,242 1,243 1,244 1,245 1,244
8 6 7 0 9
volumen especfico parcial del 0,528 0,535 0,541 0,543 0,545
(NH4)2SO4 en la solucin 1 7 4 5 8
saturada
Formacin de precipitados
CONCLUSIONES
Bibliografa