A Wright-Giemsa stained blood smear was prepared for testing FPMs performance

against that of the conventional microscopy. 2.0 mg EDTA/mL was added to a whole
blood sample, and 1 L of the mixture was smeared uniformly across a cover glass
using another cover glass at a 30 degree smearing angle. After the specimen was
air-dried for 5 minutes, HEMA 3 Wright-Giemsa staining kit from Fisher Diagnostics
was used to fix and stain the specimen. The kit involved dipping the specimen for 1
second sequentially into three Coplin jars, with the first one containing methanol-
based HEMA 3 fixative solution, the second containing HEMA 3 solution I, and the
last containing HEMA 3 solution II. The dipping steps were repeated 5 times for each
specimen. Then, the specimen was rinsed with deionized water and air-dried for
another 5 minutes.
A Wright-Giemsa smear bernoda darah disiapkan untuk pengujian kinerja FPM
melawan bahwa dari mikroskop konvensional. 2,0 mg EDTA / mL ditambahkan ke
sampel darah utuh, dan 1 uL campuran dioleskan merata di seluruh penutup kaca
menggunakan kaca penutup lain pada sudut mengolesi 30 derajat. Setelah
spesimen itu udara kering selama 5 menit, HEMA 3 Wright-Giemsa staining kit dari
Diagnostik Fisher digunakan untuk memperbaiki dan noda spesimen. kit ini
melibatkan mencelupkan spesimen untuk 1 berurutan kedua menjadi tiga botol
Coplin, dengan yang pertama mengandung berbasis metanol HEMA 3 fiksatif solusi,
yang mengandung kedua HEMA 3 solusi saya, dan yang terakhir mengandung
HEMA 3 solusi II. Langkah-langkah mencelupkan diulang 5 kali untuk setiap
spesimen. Kemudian, spesimen dibilas dengan air deionisasi dan dikeringkan
selama 5 menit.
The presence of nuclei in WBCs is identified from the FPM images. In addition, the
nucleis morphology can be observed. Most of the WBCs in Fig 3 show the multi-
lobed nucleus structure, which is an indicator for neutrophil, eosinophil, or basophil,
and one WBC displays an eccentric nucleus, which is characteristic of a lymphocyte.
In this study, differential WBC counting was not performed. However, the high-
resolution FPM images suggest that using a higher NA objective and wider angles of
LED illumination in FPM setup to further increase the effective NA up to ~1.4 may
enable differential WBC counting on our system. For readers interested in the
implementation of a high NA FPM system, please refer to [23]. Also, acquiring a full-
color image of the blood smear may aid our system in performing differential
counting because the color of the cells helps for distinguishing different types of
WBCs.
Kehadiran inti di leukosit diidentifikasi dari gambar FPM. Selain itu, morfologi inti ini
dapat diamati. Sebagian besar leukosit pada Gambar 3 menunjukkan struktur inti
multi-lobed, yang merupakan indikator untuk neutrofil, eosinofil, atau basofil, dan
satu WBC menampilkan inti eksentrik, yang merupakan karakteristik dari limfosit.
Dalam penelitian ini, diferensial menghitung WBC tidak dilakukan. Namun, gambar
FPM resolusi tinggi menunjukkan bahwa menggunakan lebih tinggi NA sudut
obyektif dan lebih luas dari pencahayaan LED di setup FPM untuk lebih
meningkatkan efektif NA hingga ~ 1,4 dapat memungkinkan penghitungan WBC
diferensial pada sistem kami. Bagi pembaca yang tertarik dalam pelaksanaan
sistem NA FPM tinggi, silakan lihat [23]. Juga, memperoleh gambar penuh warna
dari hapusan darah dapat membantu sistem kami dalam melakukan penghitungan
diferensial karena warna sel membantu untuk membedakan berbagai jenis leukosit.
In the broadest sense, there are two ways to count WBCs: an automatic method and
a manual method. Flow cytometry is a common automatic method that works by
flowing WBCs in a single file through electronic detectors [10]. The detectors then
quantify the optical and electrical properties of the stream of fluid to differentially
count the five types of WBCs. This method is convenient for analyzing large
volumes of blood samples in the most time efficient manner, and is becoming more
economical with advances in microfluidics flow cytometry [11]. However, because it
does not capture any images of the cells being analyzed, further investigation into
the cells morphology and variation is almost impossible. Moreover, it cannot
identify cells with abnormal physiology because its identification method depends
on the accepted ranges for the signature characteristics of the cells in the blood.
Image cytometry bypasses these problems by also capturing the images of the
flowing analytes on top of performing flow cytometry [12]. Although it is very
powerful, it is unfavorable for resource-limited research labs or clinics due to its
expensive price tag.
A manual counting method is an alternate way to count WBCs, but with much lower
throughput. The manual WBC counting method can be performed on either a blood
smear sample or a hemocytometer using a standard microscope system. The
specimen can either be viewed directly through the microscopes eyepiece or
captured into image files. For a blood smear sample, the monolayer regions are
mechanically scanned for counting the total number of WBCs [13], while for a
hemocytometer, the gridded area is scanned for the counting purpose [14].
Although the manual method is more laborious and time consuming, it offers
scientists the flexibility to use a wide array of objective lenses available for the
standard microscope for careful visual analysis of the specimens. High-quality yet
inexpensive imaging devices of todays technology allow for this application in
resource-limited settings [15].
Dalam arti luas, ada dua cara untuk menghitung leukosit: metode otomatis dan
metode manual. Arus cytometry adalah metode otomatis umum yang bekerja
dengan mengalir leukosit dalam satu file melalui detektor elektronik [10]. Detektor
kemudian mengukur sifat optik dan listrik dari aliran cairan ke differentially
menghitung lima jenis leukosit. Metode ini nyaman untuk menganalisis volume
besar sampel darah dengan cara efisien waktu yang paling, dan menjadi lebih
ekonomis dengan kemajuan aliran mikrofluida cytometry [11]. Namun, karena tidak
menangkap gambar dari sel-sel yang dianalisis, penyelidikan lebih lanjut ke dalam
morfologi dan variasi sel 'hampir tidak mungkin. Selain itu, tidak dapat
mengidentifikasi sel-sel dengan fisiologi normal karena metode identifikasi
tergantung pada rentang diterima untuk karakteristik tanda tangan dari sel-sel
dalam darah. Gambar cytometry melewati masalah ini dengan juga menangkap
gambar dari analit yang mengalir di atas melakukan aliran cytometry [12].
Meskipun sangat kuat, itu tidak menguntungkan untuk laboratorium penelitian
terbatas sumber daya atau klinik karena harga yang mahal.
Sebuah metode penghitungan manual adalah cara alternatif untuk menghitung
leukosit, tetapi dengan throughput yang lebih rendah. Manual metode penghitungan
WBC dapat dilakukan di kedua sampel apusan darah atau hemositometer
menggunakan sistem mikroskop standar. Spesimen baik dapat dilihat langsung
melalui lensa mikroskop atau ditangkap dalam file gambar. Untuk sampel apusan
darah, daerah monolayer secara mekanis dipindai untuk menghitung jumlah total
leukosit [13], sedangkan untuk hemositometer, area grid dipindai untuk
penghitungan tujuan [14]. Meskipun metode manual lebih melelahkan dan
memakan waktu, ia menawarkan fleksibilitas untuk menggunakan beragam lensa
objektif yang tersedia untuk mikroskop standar untuk analisis visual yang cermat
dari spesimen ilmuwan. Berkualitas tinggi namun perangkat pencitraan murah dari
teknologi saat ini memungkinkan untuk aplikasi ini di rangkaian terbatas sumber
daya [15].
Jaebum Chung, dkk. 2015. Counting White Blood Cells from a Blood Smear Using
Fourier Ptychographic Microscopy.
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4506059/

Jaebum Chung,#1,* Xiaoze Ou,#1 Rajan P. Kulkarni,2 and Changhuei Yang1,3

Juan Carlos del Alamo, Editor
Published online 2015 Jul 17.

WBC count is the number of neutrophils, lymphocytes, monocytes, eosinophils,

baso-
phils, and immature or atypical cells present in 1 mL of blood. Leukocytosis, or
eleva-
tion of the WBC, can be seen in a broad range of conditions, including both benign
and
malignant conditions. Elevation of the WBC requires accurate differential count and
morphologic evaluation of the peripheral blood smear along with clinical information
to determine the cause.
Leukopenia, or decrease of the WBC, can also be caused
by several conditions and requires accurate differential and morphologic
examination
to determine which cell line is decreased and to assess whether rare atypical or
abnormal cells are present
count WBC adalah jumlah neutrofil, limfosit, monosit, eosinofil, baso-
phils, dan sel-sel yang belum matang atau atipikal hadir dalam 1 mL darah.
Leukositosis, atau elevasi
tion dari WBC, dapat dilihat dalam berbagai kondisi, termasuk baik jinak dan
kondisi ganas. Peningkatan WBC membutuhkan hitungan diferensial akurat dan
evaluasi morfologi dari apusan darah tepi bersama dengan informasi klinis
untuk menentukan penyebabnya.
Leukopenia, atau penurunan dari WBC, dapat juga disebabkan
oleh beberapa kondisi dan membutuhkan diferensial akurat dan pemeriksaan
morfologis
untuk menentukan garis sel menurun dan untuk menilai apakah langka khas atau
sel-sel abnormal yang hadir
Devon Chabot-Richards. 2015. White Blood Cell Counts Reference Methodology.
https://www.researchgate.net/publication/272186771_White_Blood_Cell_Counts_Ref
erence_Methodology
Clinics in Laboratory Medicine 35(1):11-24 March 2015with1,991 Reads
DOI: 10.1016/j.cll.2014.10.007 Source: PubMed
Devon Chabot-Richards