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COMPORTAMIENTO DE CUATRO HETEROINJERTOS (HIB) DE TOMATE

(Lycopersicon esculentum Mill) FRENTE A LA ENFERMEDAD DE LA GOTA


PRODUCIDA POR Phytophthora infestans De Bary

Alexander Lpez Lara

TRABAJO DE GRADO PRESENTADO COMO REQUISITO PARCIAL PARA


OPTAR AL TITULO DE

MICROBIOLOGO AGRICOLA Y VETERINARIO

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA


FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA
Bogot, D. C.
Febrero de 2009
NOTA DE ADVERTENCIA

Artculo 23 de la Resolucin N 13 de Julio de 1946

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus alumnos
en sus trabajos de tesis. Solo velar por que no se publique nada contrario al dogma y
a la moral catlica y por que las tesis no contengan ataques personales contra persona
alguna, antes bien se vea en ellas el anhelo de buscar la verdad y la justicia.
COMPORTAMIENTO DE CUATRO HETEROINJERTOS (HIB) DE TOMATE

(Lycopersicon esculentum Mill) A LA ENFERMEDAD TIZON TARDIO

PRODUCIDA POR Phytophthora infestans De Bary

Alexander Lpez Lara

APROBADO

________________________ ________________________
Ma. Clemecia F. de La-Rotta Gerardo Moreno
Ing. Agr. M. Sc. Fitopatologa Ing. Agr M. Sc
Director Asesor

________________________ ________________________
Jose Salvador Montaa Ximena Snchez
Bilogo M.Sc. Microbiloga. M.Sc.
Jurado Jurado
COMPORTAMIENTO DE CUATRO HETEROINJERTOS (HIB) DE TOMATE
(Lycopersicon esculentum Mill) A LA ENFERMEDAD TIZON TARDIO
PRODUCIDA POR Phytophthora infestans De Bary

Alexander Lpez Lara

APROBADO

________________________ ________________________
Ingrid Schuler Janeth Arias
Biloga, Phd Bacteriloga, M.Sc., M.Ed.
Decano Acadmico Director de Carrera
Este trabajo es dedicado en primer lugar a Dios, estandarte y soporte.

A aquellas personas que de una u otra forma me acompaaron durante el transcurso


de mi vida universitaria y me dieron su amor, comprensin, perdn y apoyo
incondicional, especialmente a la familia Enrquez Bernal, Marcela, Maya y a los
amigos con los cuales compart tantas cosas.

Quiero dedicar este trabajo a mi madre ya que sin su apoyo constante y sus oraciones
habra sido imposible alcanzar esta meta, a mi abuela quien siempre me acompao y
ayudo con sus oraciones, a mi hermana, sobrina, tas y primas, que siempre
estuvieron a mi lado impulsndome, apoyndome y poniendo su confianza en m.

Y a ti Karen (Mi nia preciosa) por estar a mi lado, apoyndome sin dejarme
desvanecer en los momentos difciles y por alegrarme la vida desde el primer
momento en que te conoc.
TABLA DE CONTENIDO

1.INTRODUCCIN..........................................1
2.MARCOTEORICO..3
2.1.Tomate(Lycopersicunesculentum).3
2.1.1Variedades.....................................4
2.1.2Taxonomiayclasificacion.7
2.1.3. Morfologia del tomate ..8
2.1.4. Enfermeddaes del tomate..11
2.2. Heteroinjerto Bernal (HIB)....................12
2.3. Fitopatgeno Phytophthora infestans.14
2.3.1 Origen y distribucin de Phytophthora infestans Mont de Bary15
2.3.2. Clasificacin taxonmica.................................................................17
2.3.3. Morfologa de Phytophthora infestans..18
2.3.4. Biologa de Phytophthora infestans..19
2.3.4.5. Ciclo de vida .20
2.3.5.1. Reproduccin Asexual21
2.3.5.2. Reproduccin Sexual..........................22
2.3.6. Sintomatologa y desarrollo de la enfermedad..23
2.4. Control de la gota (Tizn Tardo).26
2.5. RESISTENCIA GENETICA31
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA....35
3.1. JUSTIFICACIN...35
4. OBJETIVOS..37
5. MATERIALES Y METODOS.38
5.1. Localizacin.38
5.2. Preparacin de semilleros y trasplante38
5.3. Obtencin de la cepa e incremento de inculo38
5.4. Preparacin de la suspensin e inoculacin
en plntulas sanas..38
5.5. Toma de datos...39
5.6. Evaluacin de la incidencia y severidad...39
5.7. Reaislamiento..42
5.8. Variables de estudio42
5.9. Anlisis estadstico..42
6. RESULTADOS Y DISCUSIONES.43
6.1. Obtencin de plantas....43
6.2. Obtencin de inculo...43
6.3. Toma de datos..44
6.4. Incidencia.....45
6.5. Severidad.... .47
6.6. Anlisis estadstico...50
7. CONCLUSIONES.....52
8. RECOMENDACIONES...53
9. BIBLIOGRAFIA54
10. ANEXOS62
RESUMEN

El tizn tardo (Phytophthora infestans) es un problema serio en casi todas las zonas
donde se cultiva el tomate en Colombia. Esta enfermedad es causante de severas
prdidas en el cultivo de tomate, llegando hasta un 100% si no se aplica ninguna
medida de control, por tal razn en 1994 la Pontificia Universidad Javeriana, dentro
de la lnea de investigacin en alimentos, del departamento de Bioqumica y
Nutricin, obtuvo algunos materiales experimentales de tomate, mediante la
metodologa del HETEROINJERTO BERNAL (HIB); la cual permite obtener
variedades mejoradas de plantas sin importar las caractersticas taxonmicas de las
plantas involucradas; como resultado de este trabajo de mejoramiento vegetal con la
metodologa HIB se seleccionaron 4 materiales de tomate que en sus etapas iniciales
de investigacin y multiplicacin mostraron buen comportamiento en el campo y
altos rendimientos.

Este material se llevo a condiciones de invernadero para el desarrollo en etapa de


semillero y un posterior trasplante, los heteroinjertos HIB se inocularon con
Phytophthora infestans, con la intencin de comparar entre los cuatro heteroinjertos
cul de ellos presentaban mayor de grado de incidencia y severidad. La incidencia de
la enfermedad en los cuatro heteroinjertos se midi luego de la infectacin. durante
cuatro semanas, determinando sobre el nmero total de hojas la cantidad que se
encontraron afectadas, expresando el resultado en porcentaje; el grado de severidad se
midi en toda la planta, dividindola en tres estratos, inferior, medio y superior,
mediante la escala propuesta por Henfling, (1989) y adaptada a las condiciones de
este trabajo.

De los cuatro heteroinjertos, dos el HIB-1 y el HIB-4, presentaron los mayores


niveles de incidencia y severidad, mientras los HIB 2 y 3, mostraron menores grados
de incidencia y severidad, que los hace como potenciales cultivares con algn grado
de resistencia a la gota, sin embargo el uso de los HIB 1 y 4 no se deberan pasar por
alto en programas de mejoramiento, especialmente en aquellas regiones donde el
Oomicete, no es tan variable y agresivo, es posible que el traspaso de genes mediante
la metodologa del (HIB) de una especie vegetal a otra, puede inducir la aparicin de
barreras que permitan a las plantas defenderse de los patgenos potenciales,
disminuyendo el grado de severidad e incidencia en la planta.
Agradezco a la Pontificia Universidad Javeriana, por permitirme vivir parte de mis
mejores momentos en su campus, a la profesora Ma. Clemencia de la Rotta Ingeniera
Agrnoma y al profesor Gerardo Moreno Ingeniero Agronomo, por su valiosa
colaboracin en este trabajo, a la Doctora Janeth Arias Directora de las carreras de
Microbiologa por su compresin, a mi familia y amigos por su apoyo y compaa.

Febrero de 2009
1. INTRODUCCIN

El cultivo de tomate (Lycopersicon esculentum de Mill) reviste gran importancia


tanto en el mbito econmico como nutricional, ya que es empleado como materia
prima para un gran nmero de industrias de enlatados y conservas alimenticias,
adems de ser un producto utilizado en la dieta como fruta fresca, sin embrago, el
rea cultivada muchas veces no es suficiente para cubrir la demanda de este producto,
y ms si tenemos en cuenta la disminucin en la produccin debido a plagas y
principalmente a enfermedades (Abad, et al, 2001).

El principal factor limitante en la produccin de tomate es la enfermedad conocida


como gota (tizn tardo), la cual ataca a varias especies de solanceas, dos de ellas de
gran importancia econmica para el pas (papa y tomate); la enfermedad es
producida por el oomycete Phytophthora infestans, que se encuentra ampliamente
distribuido en las zonas productoras, y puede llegar a ocasionar perdidas hasta del
100%. La Gota tambin es conocida como Tizn Tardo, Gotera, Mancha,
Quemazn, Chamusquin, Candelilla o hilo fungoso, es una de las principales
enfermedades del tomate y sin duda la ms llamativa por los sntomas que ocasiona
cuando no se le controla en forma oportuna (Botero, 1997).

El tizn tardo tuvo su primer epidemia en 1840 cuando produjo la hambruna en


Europa, donde el clima de la regin fue ideal para el desarrollo del Oomycete,
devastando la totalidad de los cultivos de papa y ocasionando gran cantidad de
muertes, esto fue solo con la primera migracin del tipo de apareamiento A1 de
Phytophthora infestans, posteriormente se disemino por todas la regiones donde se
cultiva la papa, mediante una nueva migracin, esta vez de patotipos ms agresivos
(Arneson, 1998)..

En 1842 el hongo fue llamado Gangraena tuberum solani, que destrua el follaje y
tubrculos de papa en casi toda Europa, posteriormente Montagne describi el gnero
como Botrytis infestans y luego Anthony de Bary lo describi como Phytophthora
infestans (Erwin,. 1996).

Debido a que las plantas no presentan un sistema inmunolgico como el de los


animales nos vemos en la necesidad de emplear mtodos de control para evitar que
enfermedades devastadoras como la gota ataquen los cultivos, una de las tcnicas
utilizadas es la aplicacin de fungicidas en el suelo o el follaje de las plantas, pero
que se vienen usando de modo exagerado, generando que el oomicete adquiera alta
resistencia a los diferentes funguicidas (Chen y Chen, 1998).

La resistencia que viene presentando el fitopatgeno a los fungicidas, la gran carga de


residuos qumicos que son depositados en suelos, aguas y plantas, ocasionando daos
al medio ambiente y al ser humano, han llevado al desarrollo de nuevas variedades
de tomate y papa, que sean ms resistentes a la gota (tizn tardo), y necesiten de
menores concentraciones de agroqumicos (lvarez, 1996).

A nivel mundial se viene trabajando desde hace ya algn tiempo, en la traspaso de


genes de una especie a otra por medio de la biotecnologa, lo cual permitir a las
plantas desarrollar mayor resistencia a las enfermedades, y disminuir la carga qumica
en estas. En todas las partes del mundo el estudio de la gota, ha generado un gran
campo investigativo el cual integra diferentes factores como son el estudio de la
biologa y desarrollo tanto del patgeno como de la enfermedad, la variabilidad
gentica del patgeno, la bsqueda de materiales con resistencia, el mejoramiento en
las prcticas culturales y modelos predictivos (Moya, et al, 2000).
De acuerdo con estos intereses la Pontificia Universidad Javeriana viene trabajando
desde hace varios aos con una metodologa de mejoramiento de plantas denominado
Heteroinjerto Bernal (HIB), la cual se aplico a plantas de tomate, obtenindose cuatro
heteroinjertos que sern empleados para este trabajo, con el objeto de evaluar su
comportamiento a la enfermedad ocasionada por el oomycete P. Infestans, los cuales
se compararon con el fin de observar el comportamiento entre s, para obtener los
heteroinjertos ms resistentes y en un estudio posterior hacer una evaluacin
comparativa con especies de tomate comercial (Bernal, J. Y G. Moreno, 1981;
Moreno, G. 2001).

2. MARCO TEORICO

El cultivo de tomate constituye el 16.3% de la produccin hortcola mundial, con


alrededor de 4.6 millones de hectreas sembradas; estas cifras lo ubican como la
hortaliza ms importante en el mundo (Corporacin Colombiana Internacional, 2005).
En el ao 2005 la produccin de Tomate en Colombia fue de 411.994 toneladas,
ocupando un rea de 17.264 hectreas; los departamentos con mayor produccin son
Norte de Santander, Antioquia, Cundinamarca, Santander, Huila Valle del Cauca,
Boyac y Tolima (Ministerio de Agricultura y desarrollo Rural, 2005), de ah la
importancia de prevenir y controlar enfermedades tan limitantes como la Gota, para
mantener y aumentar la produccin de tomate en nuestro pas.

2.1. Tomate (Lycopersicon esculentum De Bary)


El tomate (L. esculentum) es una planta originaria de Amrica, de una franja de
terreno que se extiende desde el sur de Ecuador hasta el norte de Chile y las islas
Galpagos (Abad et al, 2001).

El tomate es una planta perenne de porte arbustivo que se cultiva como anual, que
puede desarrollarse de forma rastrera, semierecta o erecta, crece en climas desde
clidos hasta fro moderado y en alturas que van desde los cero hasta los 2600
m.s.n.m. El tiempo necesario para que un ovario fecundado se desarrolle en un fruto
maduro es de 7 a 9 semanas, el crecimiento de las plntulas se detiene a 11C y una
prolongada exposicin a temperaturas inferiores a 10C puede conducir a la muerte
de la planta. La temperatura ptima para el desarrollo de la planta se encuentra entre
21 y 24C, siendo importante una temperatura fresca durante la noche para un buen
cuajamiento de frutos (15-22C) (Jaramillo y Arias, 1997).
La mejor coloracin de los frutos se obtiene a temperaturas entre 18 y 24 C, a
temperaturas mayores los frutos tienden a volverse amarillos. El tomate se desarrolla
en suelos, con alta porosidad, buen drenaje y con capacidad de retener humedad,
crece en suelos que van desde arcillosos a franco arenosos y el pH ptimo es de 5,5-
6,5 (Jaramillo y Arias, 1997).

Jaramillo y Arias (1997), anotan que esta especie inicialmente se considero como una
planta venenosa e incluso se le atribuyeron propiedades afrodisacas, por tal razn se
le dio el nombre de manzana del amor, las primeras formas cultivadas presentaban
frutos de color amarillento y se sembraron con fines ornamentales.

2.1.1. Variedades
Uno de los mayores atractivos de cualquier producto frente al consumidor es su
diversidad. El tomate es una hortaliza que ha alcanzado una variedad de tipos muy
extensa, existen variedades con distinto aspecto exterior (forma, tamao y color) e
interior (sabor, textura y dureza), variedades destinadas para consumo fresco o
procesado industrial y dentro de estos usos principales, muchas especializaciones del
producto (Cultivo de tomate, infoagro, 2008).

Existen diferentes variedades de tomate segn su uso, entre las cuales encontramos:

Tipo Beef. Plantas vigorosas hasta el 6-7 ramillete, a partir del cual pierde
bastante vigor coincidiendo con el engorde de los primeros ramilletes. Frutos
de gran tamao y poca consistencia. Produccin precoz y agrupada. Cierre
pistilar irregular. Mercados ms importantes (Estados Unidos) (Infoagro,
2008).
Tipo Marmande. Plantas poco vigorosas que emiten de 4 a 6 ramilletes
aprovechables. El fruto se caracteriza por su buen sabor y su forma
acostillada, achatada y multilocular, que puede variar en funcin de la poca
de cultivo (Infoagro, 2008).
Tipo Vemone. Plantas finas y de hoja estrecha, de porte indeterminado y
marco de plantacin muy denso. Frutos que presentan un elevado grado de
acidez y azcar, inducido por el agricultor al someterlo a estrs hdrico. Su
recoleccin se realiza en verde pintn marcando bien los hombros. Son
variedades con pocas resistencias a enfermedades que se cultivan con gran
xito en Cerdea (Italia) (Infoagro, 2008).
Tipo Moneymaker. Plantas de porte generalmente indeterminado. Frutos lisos,
redondos y con buena formacin en ramillete (Infoagro, 2008).
Tipo Cocktail. Plantas muy finas de crecimiento indeterminado. Frutos de
peso comprendido entre 30 y 50 gramos, redondos, generalmente con 2
lculos, sensibles al rajado y usados principalmente como adorno de platos.
Tambin existen frutos aperados que presentan las caractersticas de un
tomate de industria debido a su consistencia, contenido en slidos solubles y
acidez, aunque su consumo se realiza principalmente en fresco. Debe
suprimirse la aplicacin de fungicidas que manchen el fruto para impedir su
depreciacin comercial (Infoagro, 2008).
Tipo Cereza (Cherry). Plantas vigorosas de crecimiento indeterminado. Frutos
de pequeo tamao y de piel fina con tendencia al rajado, que se agrupan en
ramilletes de 15 a ms de 50 frutos. Sabor dulce y agradable. Existen
cultivares que presentan frutos rojos y amarillos. El objetivo de este producto
es tener una produccin que complete el ciclo anual con cantidades
homogneas. En cualquier caso se persigue un tomate resistente a virosis y al
rajado, ya que es muy sensible a los cambios bruscos de temperatura
(Infoagro, 2008).
Tipo Larga Vida. La introduccin de los genes Nor y Rin son los responsable
de su larga vida, confirindole mayor consistencia y gran conservacin de los
frutos de cara a su comercializacin, en detrimento del sabor. Generalmente se
buscan frutos de superficie lisa y coloracin uniforme anaranjada o roja
(Infoagro, 2008).
Tipo Liso. Variedades cultivadas para mercado, comercializadas en pintn y
de menor vigor que las de tipo Larga vida (Infoagro, 2008).
Tipo Ramillete. Cada vez ms presente en los mercados, resulta difcil definir
que tipo de tomate es ideal para ramillete, aunque generalmente se buscan las
siguientes caractersticas: frutos de color rojo vivo, insertos en ramilletes en
forma de raspa de pescado, etc (Infoagro, 2008).

Para elegir el tipo de tomate a cultivar se deben tener en cuenta algunos criterios de
eleccin como las caractersticas de la variedad comercial: vigor de la planta,
caractersticas del fruto, resistencias a enfermedades, el mercado de destino, la
estructura de invernadero, el suelo, el clima y la calidad del agua de riego(Infoagro,
2008).

Con el desarrollo y mejoramiento de la biotecnologa (transgnica), se hace factible el


desarrollo de nuevas variedades de tomate, que presenten una menor severidad e
incidencia a las enfermedades as como aumento en la produccin y mejoramiento en
la calidad, y es en el lugar de origen del tomate silvestre donde la diversidad dentro
y entre las nueve especies del gnero es fuerte y representa la mejor fuente para la
obtencin de nuevas variedades, que abarca, por ejemplo, especies resistentes a la
salinidad, que pueden crecer a slo cinco metros del mar, por lo cual el valor del
aporte de semejante diversidad gentica al cultivo del tomate es inestimable. Al
tomate de horticultura se le han introducido por lo menos veinte caractersticas de
resistencia del tomate silvestre, de hecho, esta diversidad de los tomates silvestres es
la que ha hecho literalmente posible el cultivo del tomate (lvarez, 1996).

Esta incorporacin se ha debido en gran parte al trabajo de uno de los pioneros


indiscutidos de la mejora del tomate industrial, el Dr. C. M. Rick, de la Universidad
de California, Davis. Desde 1948, Rick es uno de los principales recolectores de
tomate silvestre en su lugar de origen (Mxico). La creacin del C. M. Rick
Tomato Genetic Resource Centre (TGRC) ha sido fruto de sus esfuerzos. En la
actualidad, el TGRC posee alrededor de 1.010 muestras de especies silvestres
registradas (Alvares, 1996).

La firma francesa Vilmorin, que hoy forma parte del grupo Limagrain, en 1947
obtuvo los primeros tomates hbridos. En 1962- 63, el Institut National of the
Recherche Agricole (INRA) obtuvo sus primeros hbridos y en 1989-90, dicho
instituto y los principales grupos franceses productores de semillas, ClauseLimagrain,
recibieron una colaboracin pblica para constituir una red de bancos de genes para la
creacin de nuevas variedades de tomate, lo cual fue de gran importancia en el
empeo de producir un fruto que tomara sabor en la planta pero fuera lo
suficientemente resistente para llegar al consumidor final, lo que dio como resultado
el hbrido Daniela. Obtenido en 1990 por seleccionadores israeles y estadounidenses,
que se convirti en el primer tomate larga vida y madura en el doble de tiempo.
Desde entonces, se han obtenido hbridos larga vida con ms atractivo para los
sentidos humanos (Gonzales, 1997).

El tomate que es a la vez el producto final de un mercado de miles de millones y la


materia prima de otro mercado valorado en una cifra similar fue, desde el principio
mismo, objeto de deseo de las firmas pioneras en biotecnologa y de las
trasnacionales agroqumicas, listas para apoderarse de los mercados potenciales que
ofrece la nueva tecnologa y sus derechos de propiedad correspondientes, as que no
sorprende que el primer cultivo modificado genticamente en llegar al mercado fuera
el tomate transgnico Flavr Savr de Calgene. Ni que una de las primeras batallas
importantes por cuestin de patentes se librara con respecto a un gen de tomate
(Gonzales, 1997).

Actualmente las compaas que controlan todas las lneas de investigacin alrededor
del tomate son las transnacionales de la agroqumica que dominan la ingeniera
fitogentica, Monsanto y Pioneer se dividen el control de las propiedades
agronmicas del tomate y en materia de calidad del producto, parecen dominar
Zeneca y Monsanto (Moya, et al, 2000).

La investigacin biotecnolgica sobre el tomate tiene en lneas generales los mismos


objetivos que la mejora clsica: resistencia y calidad, los mtodos para la obtencin
de variabilidad gentica en tomate y otros cultivos, se han incrementado en los
ltimos aos, logrndose aumentar la variabilidad gentica disponible para la
seleccin de nuevos genotipos (Moya, et al, 2000)

2.1.2. Taxonoma y clasificacin


El tomate pertenece a la familia de las solanceas, de la que forman parte algunas
especies hortcolas importantes en la dieta alimenticia como lulo, tabaco, papa,
pimentn y tomate de rbol. Los tomates cultivados se agrupan dentro del subgnero
Eulycopersicon, y son aquellos en el cual los frutos cambian de color verde a rojo
cuando maduran, las otras especies relacionadas, estn incluidas dentro del subgnero
Eriopersicon, en el cual los frutos permanecen verdes cuando maduros, las especies
de este subgnero tienen valor en la obtencin de nuevas variedades, ya que se han
empleado como fuente de resistencia a muchas enfermedades causadas por
patgenos y agentes fisiolgicos. Los nombres cientficos de las especies cultivas
son: L. esculentum y son los tomates de mesa e industria, y L. pimpinellifollium que
corresponden al llamado tomate de alio (Arias y Jaramillo, 1997).

Reino: Vegetal
Clase: Dicotiledneas
Orden: Solanales
Familia: Solanaceae
Subfamilia: Solanoideae
Gnero: Lycopersicon
Subgenero: Eulycopersicon
Especie: sculentum
2.1.3. Morfologa del tomate
Raz
El tipo de raz depende del sistema de cultivo, los tomates sembrados en forma
directa presentan un sistema radicular pivotante, profundo y poco ramificado,
mientras que los sembrados por trasplante poseen races ms superficiales y ms
ramificadas (Figura 1) (Jaramillo y Arias, 1997).

Figura 1. Tipos de raz de tomate


Tallos
Los tallos y ramas son de consistencia herbcea, por lo cual la planta no se sostiene
por s sola, teniendo que emplearse tutores (Figura 2) para su cultivo. El tallo
principal presenta protuberancias en la zona proximal al cuello de la raz, que pueden
originar races adventicias cuando se rodea de suelo hasta la primera hoja (Jaramillo y
Arias, 1997).

Figura 2. Tallo de tomate con tutores.


Hojas
Las hojas son compuestas, imparipinadas y estn recubiertas de una fina vellosidad,
los bordes de las hojas son lobulados Figura 2: A (Jaramillo y Arias, 1997).

Figura 2: A Hoja de tomate

Flores
Las flores son pentmeras o hexmeras (Figura 3), los estambres se encuentran
soldadas entre s, formando un cono estaminal alrededor del pistilo, cuyo estigma se
encuentra por debajo de la superficie del cono estaminal, con lo cual se asegura la
autopolinizacin. Las flores se encuentran agrupadas en inflorescencias o tipo de
racimo; en la planta el cuajamiento de los frutos ocurre de abajo hacia arriba, esto
quiere decir, de las inflorescencias inferiores a las superiores (Jaramillo y Arias,
1997).

Figura 3. Flor pentmera de tomate.

Fruto
El fruto (Figura 3: A) es una baya de forma y tamao variable, est dividido en cinco
partes, pared externa e interna, tejido locular, pulpa gelatinosa, piel y semillas. El
color del fruto depende de la presencia de pigmentos carotenoides y es un aspecto
fundamental de la calidad (Jaramillo y Arias, 1997).

Figura 3: A

Semillas
Son ligeramente pubescentes y aplanadas (Figura 4), el embrin est colocado en
espiral, envuelto por el endospermo; la viabilidad de la semilla es de tres a cuatro
aos, aun cuando en algunos casos se conserva hasta los 12 aos (Jaramillo y Arias,
1997).

Figura 4. Semillas de tomate

2.1.4. Enfermedades del tomate


El tomate es una de las especies hortcolas ms susceptibles a enfermedades, por lo
que su control se convierte en una de las principales actividades en la plantacin. Las
enfermedades de esta hortaliza se pueden clasificar en dos clases: parasitarias y no
parasitarias (Abad y Aldanondo, 2001).

Las enfermedades parasitarias son las producidas por los organismos vivos, como son
bacterias, hongos, nematodos, incluyendo los virus, cabe resaltar que en este grupo se
encuentran las enfermedades de mayor importancia; los hongos y bacterias que ms
afectan el cultivo de tomate son: Alternaria solani, que produce la pudricin negra,
Phytophthora infestans, que produce la gota, Botrytis cinrea, que produce la
pudricin por moho gris, Rhizopus sp. que produce la Pudricin blanda, Geotrichum
sp. que produce la Pudricin cida, varias especies de Colletutrichum, responsables
de la llamada antracnosis, Phoma licopersici, que produce manchas negras en frutos,
Xantomonas campestris, que produce puntos negros contorneados por un halo de
aspecto grisiento que al envejecer se agrandan los puntos hasta formar pstulas de
aspecto corchosa y tonos marrones en los frutos, Xantomonas vesicstoria, que
produce manchas negras grandes y regulares en el fruto, Pseudomonas syrigae, que
produce la Mancha negra del tomate. Las enfermedades no parasitarias se producen
por condiciones desfavorables, como humedad o sequa excesiva, temperaturas
extremas, deficiencia o toxicidad por nutrientes (Abad y Aldanondo, 2001).

Las enfermedades pueden clasificarse tambin por el orden de aparicin en el cultivo:


semilleros, trasplante, desarrollo y fructificacin, sin embargo casi todas aparecen al
mismo tiempo, siendo la etapa de fructificacin la ms afectada, cabe anotar que la
enfermedad de la gota, puede aparecer en cualquier etapa de desarrollo de la planta.

Las plantas no poseen un sistema inmunolgico comparable con el de los animales


superiores (Chen y Chen, 1998), sin embargo son capaces de defenderse de la
mayora de los patgenos potenciales, mediante una serie de barreras de defensa que
pueden ser clasificadas en constitutivas o preexistentes e inducibles. Toda planta tiene
la capacidad de reaccionar frente al ataque ya sea de un patgeno, un insecto o
simplemente al dao mecnico; en el caso de los patgenos uno de los mecanismos
que ha desarrollado, es una reaccin que se inicia desde el sitio de ataque, la cual
desencadena una serie de acciones que llevan a la expresin de la Resistencia
Sistmica Adquirida (RSA), entre estas se encuentra la disminucin de las lesiones
causadas por el patgeno, generada por muerte celular programada denominada
Respuesta Hipersensitiva (RH), que se caracteriza por presentarse en el sitio de la
infeccin y trae como beneficios el limitar la proliferacin del patgeno y el acceso a
los nutrientes del hospedero ( Guzmn, 1964).

Tambin se presentan otras reacciones fisiolgicas y bioqumicas dentro de las que se


destacan el cambio de pH intracelular, el fortalecimiento de la pared celular cerca del
sitio de infeccin, la liberacin de molculas como seales secundarias tales como
fitoalexinas y las protenas relacionadas con la patogenicidad, a pesar de ello no se
provee resistencia contra todas las enfermedades en una misma planta (Chen y Chen
1998).

2.2. Heteroinjerto Bernal (HIB)


En nuestro pas son pocas las investigaciones que se realizan acerca del
mejoramiento del tomate, por lo cual, es necesario llenar el gran vaco que existe y
tratar de resolver el problema del campo; por tal razn, en la Pontificia Universidad
Javeriana, consientes de esta situacin y pensando en ayudar a resolver el problema
de contaminacin de los alimentos y del medio ambiente, se decidi en 1994, dentro
de la lnea de investigacin en alimentos, del departamento de Bioqumica y
Nutricin, producir algunos materiales experimentales de tomate, mediante la
metodologa del HETEROINJERTO BERNAL (HIB); que permite obtener
variedades mejoradas de plantas sin importar las caractersticas taxonmicas de las
plantas involucradas (Moreno, 2001).

El Heteroinjerto consiste en transferir mediante ciruga vegetal y en un medio


qumico apropiado yemas de races de una planta a otra, con la cual no es necesario
que las plantas tengan afinidad taxonmica, de tal modo que se establece entre
ambos tejidos una unin definitiva, que favorece a su buen crecimiento y desarrollo
orgnico funcional, las plantas as obtenidas se pueden clasificar como nuevas
cultivariedades que requieren para su mejor conocimiento estudios de tipo
morfolgico, agronmico, bromatolgico, bioqumico, nutricional, gentico y todos
aquellos que permitan diferenciarlos de las plantas originales. (Bernal, J; Moreno, G,
1981; Moreno, G. 2001).

A partir del ao 1994 en la Pontificia Universidad Javeriana, luego de estudiar las


caractersticas del HIB decidi que cuando la metodologa se utiliza entre plantas del
mismo gnero taxonmico se denomina injerto Bernal (IB). Cuando se utiliza entre
plantas de diferente gnero taxonmico se denomina heteroinjerto Bernal (HIB). Las
semillas resultantes del uso de esta metodologa son frtiles y dan origen a plantas
que crecen ms rpido y se reproducen como variedades (no como hbridos
vegetales), presentan alto vigor, mayor adaptacin al medio ambiente, alta resistencia
al ataque de plagas y/o enfermedades e incremento en la produccin (Castro, 2001).

Como resultado de este trabajo de mejoramiento vegetal con la metodologa HIB, en


1997 se obtuvieron para diferentes ambientes y climas, los materiales HIB de tomate,
para climas frescos T1 Tomate chonto-altamisa (Planta medicinal, originaria de
America posiblemente de Mexico) (8381) y T2 Tomate chonto-Maciega (Planta
forrajera, originaria de America del sur) (2857), para climas templados a clidos T3
Tomate chonto-Lupinus albus (Leguminosa, conocida como altamusa, originaria de
Europa) (2847) y para climas templados T4 Tomate chonto-Soya (Leguminosa,
originaria de asia) (2827),los cuales se seleccionaron ya que en sus etapas iniciales de
investigacin y multiplicacin mostraron buen comportamiento en el campo y altos
rendimientos Tablas. 1-9, estas denominaciones corresponden a la nomenclatura
experimental que luego de numerosos estudios y avances generacionales recibirn un
nombre definitivo para ser sacados el mercado (Moreno, G. 2001).
Segn Moreno, 2001, las plantas obtenidas con la metodologa del HIB presentan
ciertas caractersticas que se han reunido en las siguientes hiptesis:

Las plantas presentan mayor adaptacin a los diferentes ambientes, clases de


suelos, rangos ms amplios para temperatura y humedad.
Hay cariacin notable en los valores dados por los anlisis bromatolgicos
muestran incremento en el valor de la materia seca, porcentaje de proteina y en
los minerales.
Presentan mayor resistencia en campo al ataque de plagas y enfermedades.
Hay incremento notable en la produccin y productividad del cultivo, con plantas
que presentan mayor produccin y cosechas por unidad de superficie.

ANALISIS BROMATOLOGICO DE TOMATES HIB

Tabla 1. Resumen datos de humedad

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 93,74 0,52 93,66 0,34 92,28 0,59 91,78 0,45

Pintn 93,9 0,67 92,62 0,30 91,86 0,25 90,21 0,96

Maduro 94,01 0,53 92,99 0,63 93,88 0,86 92,33 0,47

(Desv: Desviacin estndar.)

Tabla 2. Porcentaje de materia seca

Estado T1 T2 T3 T4

Verde 6,26 6,34 7,72 8,22


Pintn 6,1 7,38 8,14 9,8

Maduro 5,99 7,01 6,12 7,67

Tabla 3. Resumen datos de cenizas

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 0,64 0,03 0,66 0,06 0,80 0,08 0,76 0,05

Pintn 0,68 0,14 0,65 0,07 0,98 0,04 0,97 0,11

Maduro 0,57 0,11 0,64 0,11 0,95 0,03 0,68 0,07

Tabla 4. Resumen datos de protena

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 1,22 0,33 1,07 0,07 1,16 0,11 1,09 0,19

Pintn 1,61 0,20 1,13 0,10 1,41 0,10 1,48 0,18

Maduro 1,36 0,21 1,25 0,16 1,26 0,04 1,41 0,29


Tabla 5. Resumen datos de grasa

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 0,04 0,002 0,05 0,01 0,08 0,004 0,10 0,005

Pintn 0,02 0,004 0,05 0,008 0,06 0,004 0,07 0,009

Maduro 0,05 0,008 0,05 0,002 0,05 0,004 0,08 0,01

Tabla 6. Resumen de datos de fibra

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 0,79 0,140 0,732 0,017 0,677 0,012 0,665 0,031

Pintn 0,82 0,036 0,882 0,021 0,692 0,045 0,756 0,15

Maduro 0,41 0,01 0,59 0,079 0,87 0,029 0,657 0,104

Tabla 7. Extracto no nitrogenado

T1 T2 T3 T4

Verde 3,56 3,82 4,97 5,59

Pintn 2,96 4,64 5,59 6,50

Maduro 3,99 4,46 2,97 4,82


Tabla 8. Resumen del contenido energtico de los frutos (kcal)

Estado T1 T2 T3 T4

Verde 16.658 13.587 17.105 14.118

Pintn 19.940 15.788 21.278 21.079

Maduro 19.664 21.277 21.802 33.396

Tabla 9. Resumen datos porcentaje de carbohidratos reductores

Estado T1 Desv. T2 Desv. T3 Desv. T4 Desv.

Verde 2,85 0,008 2,19 0,004 2,91 0,004 2,21 0,01

Pintn 3,33 0,007 2,70 0,057 3,77 0,016 3,63 0,004

Maduro 3,43 0,005 3,95 0,028 4,06 0,03 6,75 0,025

Datos tomados de Castro, 2001.

El objetivo principal de la metodologa del HETEROINJERTO BERNAL, es


desarrollar nuevas variedades de plantas, capaces de resistir el ataque de
fitopatgenos, resistir condiciones climatolgicas adversas y aumentar el contenido
de nutrientes (Moreno, 2001).

2.3. Fitopatgeno Phytophthora infestans

Phytophthora significa destructor de plantas. El oomicete Phytophthora infestans,


agente causante de la gota (tizn tardo) en el tomate y la papa. Ha sido reconocido
desde las pocas precolombinas, pero solo hasta 1845, se tomo conciencia de su
magnitud, debido a la hambruna que desencadeno en el pueblo Irlands (Jaramillo,
2003).

El tizn tardo es un problema serio en casi todas las zonas de produccin, ya que es
causante de severas prdidas en los cultivos de papa y tomate, llegando hasta un
100% si no se aplica ninguna medida de control, y hasta 60% con control, por lo tanto
para su control se requieren numerosas aplicaciones de fungicidas, llegando en
algunos casos a ms de 10 durante el ciclo de cultivo, stas medidas, adems de
elevar notablemente los costos de produccin, daan el medio ambiente y la salud de
los agricultores (Carrasco, et al, 1997).

En aos resientes ste fitopatgeno ha recobrado importancia debido al brote de


variedades ms resistentes que resultan de la presencia del grupo de compatibilidad
A2 fuera del valle de Toluca (Mxico), que es considerado como un centro de origen
secundario del gnero Solanum, el cual ha coevolucionado con el fitopatgeno,
viviendo en equilibrio con l y conteniendo genes de resistencia, de manera que
ambos, planta y fitopatgeno, completan sus ciclos de vida (Niederhauser, 1991,
citado por Carrasco, 1997).

Es posible que su ubicacin dentro del reino de los hongos, durante tantos aos, haya
retrasado el proceso de conocimiento de la biologa de este patgeno y el diseo de
productos qumicos ms apropiados para el control de los Oomycetes (Govers, 2001).

2.3.1. Origen y distribucin de Phytophthora infestans Mont de Bary


El agente causal de la gota, P. infestans, es el resultado de una serie de pasajes de
razas que afectan a S. tuberosum, a travs de los tejidos foliares del tomate. El
determinar el centro de origen donde ha ocurrido esta coevolucin ha dado origen a
profundas conjeturas cientficas, desde 1950 algunos autores sealan el centro de
Mxico (Valle de Toluca) Fig. 5, como el sitio de origen, esta opinin es respaldada
por el hecho de haberse encontrado los grupos de compatibilidad sexual A1 y A2, y
por la alta complejidad gentica y diversidad de razas fisiolgicas (Goodwin et al,
1992). Eventualmente, el patgeno evolucion en especies silvestres de Solanum en
la parte central de Mxico y muy posiblemente no encontr los cultivos (papa y
tomate) hasta que fue introducido con algunos especmenes silvestres a los jardines
botnicos de Nueva York a principios del siglo XIX. Luego fue exportado a Europa,
probablemente en tubrculos de papa, en donde a partir de 1840, P. infestans apareci
en Irlanda, pas donde la poblacin haba dependido casi exclusivamente del
consumo de papa por ms de 200 aos. El clima de esta regin fue ideal para el
desarrollo del hongo y en los aos 1845-46 hubo una epidemia severa de gota que
devast el cultivo de papa (Arneson, 1998).

Figura 5.
http://jehuite.blogspot.com/2008/08/una-visita-al-valle-de-toluca.html

Sin embargo la primera teora acerca del origen de P. infestans, fue propuesta por
Berkeley y De Bary, ellos indicaban a los Andes suramericanos como el centro de
origen del patgeno, teora que ha sido retomada por las evidencias cientficas a su
favor, como son la resistencia al hongo encontrada en especies solanceas silvestres
y cultivadas en la regin andina, por lo cual a partir de los aos 1980s, el programa
de tizn tardo de la papa (gota) del CIP ( Centro Internacional de la Papa) inici
actividades de investigacin en los andes suramericanos. All se encontr gran
cantidad de huspedes en el Per, (Abad, 1983), Ecuador (Ordez, 2000) y una gran
diversidad y agresividad del patgeno en Rionegro, Colombia, razn por la cual, se
considero este lugar como el segundo sitio de diversidad de P. infestans, trasladando
al Centro Regional de Investigacin La selva del ICA, el programa de evaluacin
de los clones obtenidos por los mejoradores de dicho centro (Jaramillo, 2003).

P. infestans ha migrado desde su centro de origen a todos los lugares del mundo
donde se cultiva el tomate. La primera migracin fue limitada ya que solo se disperso
el tipo de apareamiento A1, situacin que se mantuvo por 130 aos
aproximadamente, ya que se limit nicamente a la reproduccin asexual del hongo.
Para 1970, ocurri una nueva migracin a Europa por la importacin de papa de
varios pases, en esta ocasin no solo llegaron los tipos A1 y A2, sino variantes ms
agresivas de ambos tipos, que desplazaron las antiguas poblaciones del hongo; en
pocos aos esta nueva poblacin cruzo Europa y Asia llegando hasta el
Japn.(Goodwin et al, 1995).

P. infestans es el agente que causa la gota (tizn tardo) del tomate, Matius de Prusia
en 1842, lo llamo Gangraena tuberum solani, cuando por primera vez describi el
hongo que causo la enfermedad que devasto el follaje y los tubrculos de papa en casi
toda Europa, estos reportes fueron considerados como hereja hasta que el
reverendo Berkeley de Inglaterra interesado en el estudio de la patologa de las
plantas, lo reviso, lo tradujo y lo public en el Gardenerss Chronicle, dado que sus
estudios coincidieron con el punto de vista de dicho investigador (Erwin,. 1996).

Segn Bourke (1991) citado por Erwin y Ribeiro (1996), hubo muchas teoras para
explicar la nueva enfermedad que apareci en la papa en Europa, Las islas Britnicas,
pero la mayora de los comentarios se basaban en el mal clima (tiempo lluvioso y
polucin industrial). Hacia 1845, Morren de Blgica escribi varias cartas en las que
sostena que un hongo era la causa del tizn en la papa.
Despus de algunas dudas Montagne acepto la teora de Morren y con la informacin
que tenia describi el gnero Botrytis infestans, el cual conocemos hoy como
Phytophthora infestans, que fue confirmada posteriormente por Anthony de Bary
(Erwin y Ribero, 1996).

Los europeos ya conocan otros males que afectaban la produccin de papa


(encrespamientos y pudriciones secas) desde 1970s que los condujo a reemplazar las
semillas degeneradas, introduciendo nuevos materiales importados de norte y Sur
Amrica, utilizadas en ensayos de campo entre 1843-1845, posibilitando el ingreso
del agente causal de la gota (Daly, 1996)

2.3.2. Clasificacin taxonmica


El Phylum Oomycota, perteneciente al reino Cromista, comprende ms de 700
especies, las cuales no tienen pigmentos fotosintticos, poseen dos flagelos en las
zoosporas, con paredes formadas por celulosa o polmetros similares a la celulosa que
tienen hbitos acuticos y terrestres, aunque siempre necesitan la presencia del agua
(Jaramillo, 2003).

Por sus formas filamentosas parecidas a hifas, se agrupo originalmente como hongos
(Raven, Evert y Eichhorm, 1999), pero luego fue confirmado mediante las filogenias
moleculares de las secuencias de RNA ribosomal, datos de los aminocidos
compilados para las protenas de la mitocondria y cuatro protenas que codifican para
los genes cromosmicos, evidenciando que los Oomicetes adquirieron la habilidad de
infectar las plantas de manera independiente de los hongos verdaderos (Kamoun,
2002).

Las caractersticas que diferencian el gnero Phytophthora de los hongos se basan en


la morfologa de las crestas mitocondriales (tubulares) y la bioqumica de las paredes
celulares, las cuales contienen microfibrillas de celulosa con glucano en vez de
quitina.

REINO: Cromista ( grupo Stramenophyle)


PHYLUM: Oomycota
CLASE: Oomycete
SUBCLASE: Peronosporomycetidae
ORDEN: Pythiales
FAMILIA: Pythiaceae
GENERO: Phytophthora
ESPECIE: infestans
Un grupo grande de este Phyllum son acuticos, algunos saprofitos y otros son
parsitos que causan enfermedades en peces y huevos. Otros son terrestres como los
gneros Phytophthora y Pythium estrechamente relacionados y pertenecen a la
familia Pythiaceae, los cuales causan enfermedades en las plantas, pero requieren el
agua para la movilidad de las zoosporas en el suelo o en el follaje (Jaramillo, 2003).

2.3.3. Morfologa de Phytophthora infestans


La morfologa en Phytophthora es utilizada para la clasificacin de especies, que
aunque parece ser relativamente simple, las diferencias morfolgicas con otras
especies del mismo gnero son tan pequeas y algunas caractersticas tan variables,
que incluso los expertos consideran que el gnero es difcil de clasificar.

2.3.3.1. Micelio
Las estructuras somticas (talos) de Phytophthora son llamadas micelio y estn
compuestos de filamentos, hialinos (hifas) ramificados y cenocticos (no septados),
aunque en cultivos viejos, algunas veces se pueden observan septos. El micelio (5-
8micras) es variable y depende de la naturaleza fsica y qumica del medio (Sansome,
1976, citado por Abad, 1983).
2.3.3.2. Esporangios
Los esporangios se producen sobre pednculos llamados esporangiforos, su
desarrollo es indeterminado y se ramifican simpodialmente, lo cual es propio de P.
infestans. Los esporangios se diferencian porque en Phytophthora cada uno tiene un
pednculo, cuya longitud varia con la especie, en rangos de medio a corto como en P.
infestans, en el cual pueden liberar hasta 36 zoosporas (Sansome 1976, citado por
Abad, 1983, Jaramillo, 2003).
Lo esporangios varan en forma y tamao. Las formas son algo diferentes para una
especie en particular, pero son a menudo variables en el rango: De esfricas,
subesfricas, elipsoides, limoniformes (P. infestans), periformes, obperiformes (en
forma de pera invertida), turbinadas (como un trompo), Obturbinadas (trompo
invertido). La diferencia de tamao puede estar afectada por la luz, los esteroles y los
medios nutritivos (Waterhause, 1963, citado por Jaramillo, 2003).
El patgeno P. infestans, produce hinchamientos en el esporangiforo zona donde se
desprende el esporangio; el engrosamiento apical el esporangio, el cual tiene forma
de limn, se denomina papila, de cuyo extremo emergen las zoosporas, el espesor de
esta estructura vara entre especies,. La especie P. infestans es semipapilada o sea con
una cavidad superficial, cuyo poro es generalmente estrecho. P. infestans y P.
phaseol son las nicas especies con esporangio que se desprenden y son arrastrados
por el aire o el agua. (Jaramillo, 2003).

2.3.3.3. Zoosporas
El aparato flagelar tpico de las zoosporas posee dos flagelos uno en forma de ltigo y
el otro en forma de pluma. La zoospora est conformada por varias partes: el
kinetosoma (cuerpo basal de la zoospora), la zona de transicin que une el flagelo
con el kinetosoma, y el sistema del microtbulo, que permite anclar el flagelo a la
zoospora.

Los anclajes de los flagelos de P. infestans, son significativamente diferentes, pues


solo poseen cinco de estos, mientras que otras especies tienen seis. Uno de los
anclajes de las zoosporas de P. infestans contiene seis microtbulos en comparacin
con otras especies que solo presentan cuatro (Jaramillo, 2003).

2.3.4. Biologa de Phytophthora infestans


Dada la habilidad de P. infestans para la manipulacin bioqumica, fisiolgica y
morfolgica en su husped, a travs de la formacin de diversas molculas de
virulencia o avirulencia, definidas como efectoras, es necesario realizar estudios, de
genmica estructural, con el fin de entender las bases moleculares de la patogenicidad
de P. infestans, a travs de la identificacin de genes que contribuyan a los procesos
de infeccin, identificar la funcin de virulencia y avirulencia en los huspedes y no-
huspedes y los centros del control qumico (Kamoun, 2002).
Este patgeno se propaga sexual y asexualmente; la reproduccin sexual sirve para
proporcionar un estado de supervivencia de las esporas (oosporas) y generar nuevas
combinacin de genes. Sin embargo, este organismo ha tenido grandes explosiones
de poblaciones epidmicas por la reproduccin asexual, como saprofito obligado,
causando la gota en cultivos de papa y tomate principalmente, con marcadas
consecuencias econmicas y sociales (Jaramillo, 2003).

Segn Turkesteen 2002, hay dos tipos de esporas, las ms frecuentes son las
zoosporas, que son hialinas y de pared delgada y tiene forma de limn, con un tamao
de 21-38 nm X 12-23 nm ubicadas en las puntas de las ramificaciones del micelio,
otro tipo son las oosporas, cuerpos redondos de 24-26 nm, con paredes gruesas. Bajo
condiciones secas, los esporangiforos empiezan a retorcerse y el esporangio se
desprende, bajo estas condiciones los zoosporangios son de vida corta, al igual que si
no encuentran el tejido husped apropiado. La germinacin se da en agua libre, de
manera directa por la emisin de un tubo germinativo, pero comnmente se liberan
ocho o ms zoosporas, las cuales nadan con la ayuda de los dos flagelos, luego estas
se enquistan y forman el tubo germinativo para infectar.
Estudios de sobrevivencia a largo plazo, de las oosporas (sexual) y esporangios y
micelio (asexual), realizados sobre hojas quemadas por la gota en el campo,
permitieron detectar el inculo de tipo sexual y asexual hasta por 12 y 21 meses
despus de la quemazn de las hojas (Lees et al., 2002).

2.3.5. Ciclo de vida


Existen dos ciclos epidemiolgicos que se deben considerar en el manejo de la gota,
el ciclo sexual y el ciclo asexual, Figura 6, el primero ocurre una vez al ao, sin
embargo en Colombia no es frecuente encontrarlo; mientras el ciclo asexual ocurre
aproximadamente cada siete das durante el tiempo favorable para el hongo
(Arneson, 1998).

El tipo de apareamiento es una factor importante tanto en las variaciones de las


poblaciones y el tipo de reproduccin del oomicete, es as como el tipo de
apareamiento A2 tiene gran tendencia a la autofertilizacin (96%, n=47), mientras
que en el A1 es escasa (6%, n=69) (Jaramillo, 2003).

2.3.5.1. Reproduccin Asexual


El esporangio (zoosporangio) es la unidad de reproduccin asexual, el cual puede ser
producido en abundancia en muchas especies de huspedes: Una sola lesin puede
producir hasta 300.000 esporangios en una noche (Legar, et al, 1995, citado por
Smart, et al, 2000)

El micelio de este hongo produce esporangiforos ramificados de crecimiento


indeterminado. En las puntas de las bifurcaciones de esos esporangiforos, se forman
esporangios papilados que tienen la forma de limn, los cuales estn programados
ms para la produccin de zoosporas que para la germinacin directa, pero conforme
prosigue el crecimiento de las puntas de las ramas, los esporangios son desplazados
hacia los lados y ms tarde se desprenden. En los sitios donde se forman los
esporangios, los esporangiforos forman hinchamientos que son una caracterstica
particular del oomicete. (Fry, 1998)
Los esporangios son estructuras hialinas con un tamao que oscila entre 18-24 nm
por 25-35 nm, separados del micelio por una septa. Cada esporangio tiene de seis a
diez ncleos, que se desprenden fcilmente de los esporangiforos cuando maduran y
son arrastrados por el viento que los dispersa y los cambios de humedad relativa que
los ayudan a germinar en los tejidos de las plantas huspedes, mediante la
germinacin directa a travs de un tubo germinativo o indirectamente al producir
zoosporas (Smart, et al, 2000)

Las esporas (zoosporas) se dispersan por el viento y por la salpicadura de gotas de


lluvia, cada una produce dos flagelos, pero despus de aproximadamente una hora de
movilidad las zoosporas se enquistan (pierden los flagelos y desarrollan una pared
celular) y germinan produciendo un tubo germinativo.

En condiciones hmedas los esporangios germinan a temperaturas altas; entre 18-


24C se produce un tubo germinativo que penetra directamente la cutcula de la hoja
y a temperaturas bajas se lleva a cabo la liberacin de 3 a 8 zoosporas biflageladas
dentro del esporangio, luego que se rompe la pared de este, las zoosporas se enquistan
y penetran la hoja del hospedero.

2.3.5.2. Reproduccin Sexual


La formacin de oosporas es uno de los aspectos ms relevantes del ciclo de vida de
P. infestans. Como organismo heterotlico, son necesarios ambos tipos de
apareamiento denominados A1 y A2 para la reproduccin sexual. Las esporas
(oosporas) se forman a medida que cada tipo de apareamiento responde a la hormona
inducida por el tipo de apareamiento contrario, produciendo un oogonio y un
anteridio (Galindo y Gallegly, 1960). Al parecer el control gentico del apareamiento
es muy dbil. Las oosporas de autofertilizacin en organismos heterocigotos generan
mayor variabilidad, condicin que constituye un factor importante en la
epidemiologia del patosistema (Smart, et al, 2000), debido a que solo uno de ellos
ocurre en la mayora de los pases, el ciclo sexual de este oomycete rara vez se ha
observado.

En Mxico y en otras reas de centro y Sudamrica ambos tipos de compatibilidad se


encuentran ampliamente distribuidos y las oosporas son muy comunes, aunque en
Colombia no se presenta este tipo de reproduccin. Cuando los tipos de
compatibilidad A1 y A2 crecen uno cerca del otro, la hifa femenina crece en
direccin del anteridio joven y forma un oogonio (Henfling, 1987).

El oogonio despus de fecundado por el anteridio se desarrolla en una oospora de


descanso dura y de pared gruesa que le permite resistir condiciones desfavorables,
como sequa, bajas temperaturas y ausencia de husped, las oosporas germinan por
medio de un tubo germinal, el cual produce un zoosporangio que germina y las
zoosporas resultantes pueden iniciar un nuevo ciclo de vida, aunque algunas veces
forma directamente un micelio (Henfling, 1987, Gastelo & Landeo, 1998).
Figura 6. Ciclo de vida de Phytophthora infestans.
Tomado de: www.cals.ncsu.edu/plantpath/Faculty/ristaino/graphics/fig1.gif

2.3.6. Sintomatologa y desarrollo de la enfermedad


En la naturaleza P. infestans se disemina por el viento, lluvia, agua del suelo y
semillas. En el desarrollo causativo de la enfermedad, los oomicetes interaccionan
con las plantas segn una secuencia de etapas, denominadas patognesis. Las
zoosporas de oomicetos son trasportadas por el viento o el agua hasta encontrar la
planta husped, donde la zoospora se mueve en agua libre en los sustratos donde son
liberadas desde los esporangios y tienen la capacidad de localizar la zona de
penetracin en la planta. El periodo mximo de movilidad oscila entre 20 y 30h con
una velocidad de 50-230 ums/s, que le permite desplazarse varios centmetros de
distancia (Llcer, et al, 2000).

Los microorganismos zoosporicos, poseen zoosporas flageladas capaces de nadar en


el agua del suelo y races siguiendo gradientes de concentracin de los exhudados de
las mismas races, mediante el fenmeno denominado quimiotaxis, la cual implica la
percepcin de seales por quimioreceptores en las zoosporas que germinan de forma
indirecta, mediante la formacin y liberacin de zoosporas de esporangios
desarrollados en esporangioforos, o tras la germinacin directa de oosporas y
zigosporas (Llcer, et al, 2000).

En los mildius foliares, las zoosporas se mueven sobre la superficie vegetal en gotas
de agua hacia los estomas de la planta husped, donde se lleva a cabo la formacin
del tubo germinativo, mediante un crecimiento apical que resulta del transporte
citoplsmatico de materia estructural de pared y membrana y su disposicin en el
apice, el crecimiento orientado del tubo germinativo requiere su adherencia a la
superficie vegetal, que tiene lugar mediante la produccin de una matrix extracelular
que se compone generalmente de polisacridos o glicoprotenas, penetrando la
cutcula o aprovechando las aberturas naturales, para este proceso se necesitan
periodos de alta humedad, una vez dentro del husped se establece una relacin
trfica que le permite obtener sus nutrientes, el micelio crece dentro de los tejidos y
eventualmente vuelve a producir estructuras reproductivas (Llcer, et al, 2000).

El tipo de lesin vara con la temperatura, humedad, intensidad lumnica y variedad


del hospedante. Los sntomas iniciales se presentan como manchas pequeas de color
verde claro a verde oscuro, de forma irregular. Bajo condiciones favorables, las
lesiones se convierten en reas necrticas grandes de color castao a negro purpreo,
que pueden ocasionar la muerte de los foliolos y avanzar por los pecolos hasta el
tallo, finalmente puede matar la planta afectada.
(Alarcn, 2001)

Generalmente se observa un halo de color verde claro amarillento en la parte externa


de la zona necrtica de la hoja, sin embargo bajo condiciones favorables de humedad
en el ambiente, aparece sobre ella un crecimiento blanquecino constituido por
esporangios y esporangiforos en el borde de las lesiones, principalmente en el borde
inferior de la hoja (Huertas, 1985).

En las hojas produce manchas castaas (Figura. 7.A) a negras, sin embargo cuando
las condiciones ambientales son muy favorables al parsito, aparecen las
fructificaciones blancas del oomicete especialmente en la cara inferior, en el tallo
manchas como si hubiese sido quemado por efectos de las heladas (Figura B), en el
fruto hay una decoloracin castaa oscura con bordes definidos (Figura C),
frecuentemente cubierta por la fructificacin del parsito, estos sntomas y signos
aparecen en cualquier etapa del desarrollo, luego se manifiesta una pudricin de
aspecto acuoso en la parte externa del fruto, la cual aumenta progresivamente
(Botero, 1997)

Figura 7. Lesiones tpicas de P. infestans en diferentes tejidos de plantas de tomate A. Manchas en


hojas B. Lesin en tallo C. Decoloracin en frutos
En las reas tropicales donde se cultiva tomate todo el ao, la fase de hibernacin de
P. infestans no tiene importancia, pero en lugares donde la diferencia de estaciones es
marcada, dicha hibernacin se hace en forma de micelio, ya sea en frutos, residuos de
cosecha y en los sitios de almacenamiento de semilla, en el caso de papa cuando
germina la semilla emerge la planta y el hongo invade los brotes en desarrollo y
esporula cuando las condiciones de humedad son favorables, produciendo el inculo
primario, posteriormente la diseminacin se hace por los esporangios que son
transportados por el agua y el viento (Federacin Colombiana de Productores de
Papa, 1996).
El desarrollo de epidemias de la gota depende del efecto que tiene la humedad y
temperatura en el ciclo de vida del hongo. La esporulacin es favorecida por una
humedad relativa alta (100%) y temperaturas entre 10 y 22C, los esporangios
pierdan su viabilidad luego de 3 a 6 horas a menos de 80% de humedad relativa,
mientras que la esporulacin se lleva a cabo cuando hay roco o una pequea pelcula
de agua libre sobre las hojas de la planta y una temperatura entre 18 y 25C,
concluyendo luego de media o dos horas mximo.
Una vez los esporangios han germinado se requiere un periodo de dos a dos horas y
media con temperaturas de 15 a 25C, para que se produzca la penetracin de los
tubos germinativos en los tejidos del hospedante. El micelio del oomicete se
desarrolla con mayor rapidez a temperaturas entre 17 y 21C, esta tambin es optima
para la esporulacin, mientras que a temperaturas mayores a 30C se inhibe el
desarrollo del oomicete en el campo, pero no lo destruye, ya que este puede volver a
esporular cuando se den las condiciones apropiadas.(Agrios, 2004)

2.4. Control de la gota (Tizn Tardo)


La forma ms adecuada para enfrentar la gota del tomate, es mediante la utilizacin
de todas las tcnicas que conducen al manejo integrado de la enfermedad, como las
medidas de prevencin, mediante el cumplimiento de las normas sanitarias para el
transporte de material vegetal, erradicacin, las cuarentenas cuando se requieran,
variedades resistentes y semillas sanas, las prcticas culturales bien ejecutadas y
oportunas como la calidad de la semilla, la siembra, fertilizacin y control de malezas
(Jaramillo, 2003)
Es necesario conocer los factores que inciden en las epidemias de gota de la papa y/o
tomate y el impacto de las diferentes fuentes de inculo de P. infestans, para poder
establecer las medidas de control ms convenientes, segn las situaciones particulares
de cada zona (Jaramillo, 2003)
2.4.1. Control biolgico
Existen algunos intentos de conseguir microorganismos para control biolgico, se han
realizado algunas inoculaciones previas con cepas de P. infestans, que por su cultivo
permanente en medios artificiales ha perdido su agresividad en las plantas de tomate
y papa, y se usan para que en un posterior ataque del patgeno a la planta lo
identifique rapidamente y presente mayor resistencia, tambin se han venido
buscando cepas de bateras que le den alguna actividad de antibiosis a P. infestans y
otros fitopatgenos, es probable que algunas comunidades de bacterias endfitas,
puedan inducir un cierto grado de defensa contra los fitopatgenos, segn su
adaptacin y localizacin dentro del husped, la cual puede ser especfica para un
determinado sitio y tipo de tejido (Sturtz, et al, 1999 citado por Jaramillo, 2003).
2.4.2. Saneamiento
Estas prcticas estn encaminadas a reducir la cantidad de inoculo para los cultivos
siguientes. Implica la destruccin de follajes antes de la cosecha, pilas de tubrculos
de cosechas anteriores que hayan quedado en el campo y dems residuos de cosecha,
que permitan mantener el inculo vivo como cordones verdes en la zona de cultivo,
tambin la eliminacin de plantas huspedes alternos, en muchos casos especies
silvestres u otros cultivo de papa y tomate (Jaramillo, 2003).

2.4.3. Escape
Esta prctica va encaminada a evitar los cultivos en ciertas zonas y/o durante los
periodos que favorecen las condiciones ambientales para el desarrollo del patgeno,
mediante la anticipacin o retraso de las fechas de siembra. Para este caso es muy
importante conocer el comportamiento de la resistencia de las variedades, ya que
algunas se vuelven susceptibles en das cortos (Jaramillo, 2003).

2.4.4. Otras prcticas de control cultural


La fertilizacin adecuada puede ser una prctica que puede contribuir de manera
importante a la reduccin de los daos causados por la gota, por incidir en la relacin
resistencia/susceptibilidad del cultivo. Sin embargo, existen pocos reportes, uno de
los cuales fue realizado por Santos et al (2002), en el cual manifiesta que se ha
identificado que el potasio tiene un efecto sobre la enfermedad a travs de funciones
metablicas especficas, que alteran las relaciones de compatibilidad del ambiente
(Huber y Arny, 1985, reportados por Santos et al, 2002, citado por Jaramillo, 2003).

Frenkel et al, (2002) indica que el boro como microelemento que abunda en las aguas
riego recicladas y otros compuestos no determinados, pueden inducir resistencia
sistmica adquirida contra P. infestans.

2.4.5. Control qumico


El control qumico hace parte de las estrategias del manejo integrado de la gota en
papa y tomate, dado que es imposible hacer un control eficiente en base a productos
orgnicos o biolgicos, razn por la cual es necesario integrarlo en las medidas de
prevencin y mejoramiento gentico. El control qumico puede estar enfocado a
fungistticos (inhiben la germinacin de las esporas) o fungicidas que matan las
esporas, con accin erradicante, pero que puede causar fitotoxicidad de forma
especfica a los Oomycetes, pues segn Govers (2001) es importante producir y
utilizar productos oomicidas.

El desarrollo de fungicidas debe estar asociado a enzimas particulares y otros


procesos bioqumicos que son nicos para los Oomycetes, puesto que poseen una
maquinaria bioqumica y molecular propia. El antibitico poliene suprime el
crecimiento de la mayora de los hongos pero no el de P. infestans; Govers (2001)
manifiesta que ha habido cierta demora en el desarrollo de molculas qumicas para
este fitopatgeno, puesto que hasta hace poco tiempo fue considerado como hongo,
cuyas caractersticas bioqumicas son diferentes.
Dado que los Oomicetes no requieren esteroles para su crecimiento, no son sensibles
a fungicidas que inhiben la sntesis de estos compuestos, como Triademenfon,
Triadimenol, Bitertanol, y Propiconazol (Erwnin y Ribero, 1996).
A finales de 1880 se utilizaron productos a base de cobre (Caldo Bordels), los
cuales pueden ser aplicados al comienzo y al final del cultivo, pero fueron siendo
reemplazados por los ditiocarbamantos (Zineb, Maneb y Mancozeb) a partir de 1930,
por ser menos toxicos y en ocasiones aumentan el color verde de las hojas,
posiblemente porque corrigen la deficiencia de algunos elementos menores tipo
cationes como el Zinc, para los aos 70s se pusieron en el mercado los fungicidas
sistmicos y curativos (Egan et al, 1995).

Flier et al, (2002) opinan que la mayora de los fungicidas tiene una excelente
actividad contra la formacin de las oosporas. A concentraciones por debajo de las
recomendadas, todos los fungicidas evaluados in vitro, redujeron significativamente
la formacin de oosporas. De las evaluaciones en plantas, se concluyo que tanto los
fungicidas protectantes como los semicurativos, podan ser aplicados para evitar la
formacin de oosporas, a pesar que la epidemia hubiese estado bien avanzada.

Algunos fungicidas utilizados para el control qumico de la gota son los protectantes,
debido a los cambios significativos en la composicin de las poblaciones de P.
infestans en EEUU y Canad; Kato et al, (1997) (citado por Jaramillo, 2003),
evaluaron la sensibilidad de los fungicidas protectantes Mancozeb y Clorotalonil a
aislamientos colectados entre 1990-1994, pertenecientes a los linajes clonales US-1,
US-6, US-7 y US-8, encontrando que ningn aislamiento o linaje clonal fue resistente
a dichos fungicidas.
Erwin y Ribero (1996), indican que los protectantes tipo ditiocarbamatos (mancozeb,
maneb, metiran, propineb y zineb) inhiben la germinacin de las zoosporas y el
crecimiento del micelio. No se translocan en el follaje y representan el 33% del
mercado mundial para el control de la gota (tizn tardo) en la papa y el tomate,
adems son de amplio espectro. En mezclas con productos sistmicos y curativos
como fenilamidas y cymoxanil, introducidos en 1970, pueden ser ms efectivos para
el control de la gota, tambin estn las Phthalamidas, cuya accin no es especifica,
pero al parecer reaccionan con los grupos tioles de las clulas, las piridineamidas, que
en dosis bajas acta como protectante con excelente accin residual y por su actividad
antiesporulante, puede ser utilizado en las ltimas tres aplicaciones (Egan, et al,
1995).

Los compuestos Trifeniltinas son muy efectivos contra la gota de la papa en el follaje
y tambin ofrecen alguna proteccin a los tubrculos, debido a su actividad en el
suelo, es antiesporulante, reduciendo, la dispersin de los esporangios, que podran
causar infeccin (Egan et al, 1995), en los fungicidas sistmicos, hay cinco grupos
principales de nuevos productos que son activos contra Oomicetos, los cuales se
pueden trasladar hacia arriba con la transpiracin (por el Apoplasto) a las nuevas
zonas de crecimiento o hacia abajo por el floema (por el Simplasto), en ambos
sentidos como el Fosetil de aluminio o translaminar como el Cymoxanil (Jaramillo,
2003), los Carbamatos como el Propamocarb, que mostro sinergismo en mezcla con
mancozeb para el control de la gota, tiene movimiento translaminar en las hojas , pero
poco movimiento sistmico acropetalo o basipetalo, afecta las membranas celulares,
pero su accin es principalmente fungisttica (Egan, et al, 1995).

Otro de los compuestos utilizados contra la gota son los derivados del cido
cinmico, como el Dimetomorf que es producido por Shell, es un nuevo fungicida
curativo y de gran efectividad contra especies de Phytophthora a bajas
concentraciones, tiene accin sistmica local, tiene actividad translaminar ( atravs de
la hoja), y fuerte resistencia al lavado por lluvias, es muy activo contra lneas de P.
infestans resistentes al metalaxyl, su actividad fue asociada a la supresin de los
procesos de formacin de la pared celular de las zoosporas, adems de impedir la
germinacin de esporangios y zoosporas, llegando a ser letal (Egan, et al, 1995).

Las cianoacetamidas-oximes (CYMOXANIL), que se formulan como Curzate o


Curathane, que penetran localmente y tiene un movimiento translaminar rpido pero
no se transloca de una hoja a otra, ni del tallo al follaje. Es curativo y preventivo,
pues es efectivo en los tres primeros das de iniciada la infeccin antes que aparezcan
los sntomas, tiene efecto sinergstico para el control de P. infestans en papa y tomate,
cuando se aplica en mezcla con mancozeb y con oxadycil. Se ha mostrado que afecta
la sntesis de RNA en los hongos (Erwin y Ribeiro, 1996; Egan, et al, 1995).

Los fosfonatos, aunque no se ha entendido de manera clara las razones por las cuales
el fosetil-Al (Aliette 80 wp) tienen amplio espectro de accin en las especies de
Phytophthora, posiblemente por muchos sitios de accin bioqumica, no es muy
efectivo para el control de la gota de la papa en el follaje, pero s tiene actividad para
su control en los tubrculos (Erwin y Ribeiro, 1996); las fenilamidas (Metalaxyl)
fueron un xito en el control de fitopatgenos como Phytophthora, por su efectividad
y efecto curativo a bajas dosis en condiciones de alta presin de la enfermedad, lo que
hizo que fuera tan atractivo para los agricultores quienes explotaron sus
potencialidades al mximo, presionando la resistencia, es altamente sistmico con
traslocacin hacia arriba o hacia abajo, pues el tratamiento al follaje da buena
proteccin a los tubrculos, posiblemente por la translocacin del ingrediente activo,
inhibiendo la esporulacin y el desarrollo de los esporangios y es menos susceptible
de ser lavado por la lluvias (Egan, et al, 1995).

2.4. RESISTENCIA GENETICA


La gota es el problema ms serio de los cultivos de papa y tomate, ya que durante las
prcticas de produccin es necesaria la aplicacin de fungicidas y prcticas culturales
intensivas para el control de P. infestans, sin embargo, y debido a los constantes
cambios genticos en las poblaciones del microorganismo y a la resistencia que ha
desarrollado este oomicete, ha provocado grandes prdidas a los agricultores (Fry
and Goodwin, 1997; Garelik, 2002).

La variedad en el tipo de control gentico de resistencia y las condiciones necesarias


para su expresin, han conducido a un gran nmero de clasificaciones, entre las que
encontramos la resistencia oligogentica, cuando un solo gen confiere resistencia
completa de tipo hipersensible, como es el caso del gen R y de la cual se obtienen
proporciones mendelianas simples en los cruzamientos, y poligentica, cuando el
nmero de genes que proporcionan la resistencia son dos o tres, la resistencia
poligentica tambin hace referencia a cualquier tipo de resistencia en la cual no se
obtienen proporciones mendelianas claras en los cruzamientos, en 1964 se obtuvo
evidencia de la presencia de cuatro genes aditivos que confieren resistencia a algunas
cepas de P. infestans en familias de Solanum, los materiales se obtuvieron de
cruzamientos entre variedades susceptibles de S. tuberosum y una variedad resistente
de S. andigena ( Guzmn, 1964).

Se considera un husped resistente cuando no puede ser atacado por el patgeno, sin
embargo, en la relacin husped-patgeno, la resistencia puede ser de varios niveles y
algunos individuos o clones, pueden estar ms afectados que otros, la resistencia
puede ser total (100%), o parcial (Turkensteen, 2002)

A pesar de exister una amplia reserva de genes en especies silvestres de Solanum, se


ha obtenido un xito limitado en la resistencia de variedades de tomate y papa a P.
infestans debido a que se conoce muy poco sobre la fisiologa y las bases moleculares
de la resistencia (Vleeshowuers, et al. 2000). Otro aspecto es la complejidad del
patgeno, pues los aislamientos a evaluar deben ser representativos de la poblacin de
P. infestans en por lo menos 12 a 20 aos; se cuestiona si las pruebas deben ser
hechas a partir de un solo aislamiento compatible con todas las fuentes de resistencia
disponibles (Turkensteen y Flier, 2002b)

La practica ms efectiva y amigable ambientalmente para prevenir la devastacin por


P. infestans es la incorporacin de especies resistentes en los cultivos, lo cual se viene
realizando desde mediados del siglo XIX de forma extensiva, principalmente en
papa, donde se viene trabajando en esta rea con S. demissum. Las variedades que
presentan resistencia al patgeno pueden ser del tipo de resistencia vertical, ya que
estas poseen un gen que proporciona resistencia especifica el cual es conocido como
el gen R, o el gen de la virulencia que interacta con el correspondiente gen de la
avirulencia Avr encontrado en el patgeno, que es conocido como el concepto de gen
por gen, y que resulta en el estmulo de una reaccin de hipersensibilidad (HR) (Flor,
1971; Hammond-kosack and jones, 1996; Keen, 2000; Leister, 2000). En este modelo
de gen por gen, la presencia de los genes R en la planta y su correspondiente gen de la
avirulencia (Avr) en el patgeno, resulta en una resistencia (interaccin
incompatible), mientras que la ausencia de genes R o de Avr resulta en una
interaccin compatible y por lo tanto se presenta la enfermedad (Jaramillo, 2003).

Hay diferencia de criterios entre los grupos que defienden la utilizacin de material
vegetal con genes R y los que prefieren que estn libres de estos, el hecho es que los
materiales con genes R en algn momento pierden la resistencia por compatibilidad
con las poblaciones de P. infestans predominantes. Segn Turkensteen y Flier
(2002b) existen tres normas bsicas para la resistencia a este patgeno: 1. Los genes
R pueden contribuir a la resistencia parcial durable a travs del ligamiento o por
efectos pleitropicos. 2. Hay evidencia de que el mejoramiento por genes R puede
producir variedades muy susceptibles, como la variedad vertifolia que posee cuatro
genes R (R1, R2, R3, R4). 3. Hay una sola evidencia de los buenos niveles de
resistencia despus de la remocin de los genes R de las poblaciones mejoradas.

Las plantas que poseen este gen R son efectivas solo para prevenir el desarrollo de la
gota si la cepa de P. infestans contiene el correspondiente gen de la avirulencia
Avr, el gen R expresa una resistencia media y es rpidamente vencido por una
nueva cepa del patgeno (Malcolmson and Black, 1966).
En los aos 70 los cultivos con nfasis en resistencia vertical, comenzaron a ser
reemplazados por cultivos con nfasis en resistencia horizontal, en la que participan
muchos genes (Poligentica) y que se hereda de forma cuantitativa, sta es una forma
ms duradera de resistencia a enfermedades (Wastie, 1991, Agrios, 2004), sin
embargo los mecanismos de accin de la resistencia horizontal no han sido
completamente entendidos, pero se cree que esta tiene una mayor durabilidad que la
resistencia vertical, la durabilidad de la resistencia horizontal est mostrando un
efecto ms duradero frente a diferentes enfermedades (Johnson, 1984). La resistencia
presentada en una especie de papa S. bulbocastanum es efectiva contra un gran
nmero de especies de P. infestans, debido al gen RB localizado en el cromosoma
ocho, esto muestra un amplio espectro de resistencia tanto en invernadero como en
campo que puede ser usado para transferir resistencia a otras especies (Song et al,
2003; Lozoya-Saldana et al, 2005).

Estos resultados muestran que es posible el desarrollo de variedades resistentes


mediante la insercin de genes provenientes de especies resistentes tanto para papa
como para tomate, sin embargo para el tomate se han encontrado genes especficos
como son el Ph-1 y el Ph-2, que vienen siendo objeto de estudio por parte de los
mejoradores.
3. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

El cultivo de tomate es muy importante para Colombia, no solo por lo que representa
para la seguridad alimentaria del pas, ya que es bsico para la canasta familiar, sino
tambin por la generacin de mano de obra para las labores del cultivo, transporte,
comercializacin y transformacin industrial, que se traduce en mejor calidad de vida
para las personas vinculadas de manera directa o indirecta a dichas actividades y
mayor desarrollo de los municipios, ya que este cultivo hace parte de la cadena
agroalimentaria.

Por tal razn amerita todos los esfuerzos encaminados al control del patgeno P.
infestans, causante de la principal enfermedad del cultivo de tomate (tizn tardo), y
por lo cual se deben desarrollar nuevas tcnicas acompaadas por el desarrollo de
nuevas variedades capaces de resistir el ataque del fitopatgeno y disminuir su
agresividad, influyendo en la reduccin de costos por la disminucin en la dosis de
fungicidas (oomicidas) y ayudar a bajar la contaminacin de suelos y aguas.

3.1. JUSTIFICACIN

El cultivo de tomate es uno de los ms importantes en el mbito mundial, tanto en la


industria como en la dieta diaria, pero debido a la gran cantidad de enfermedades que
este cultivo padece, principalmente la gota, la produccin se ve severamente afectada,
debido a la susceptibilidad que presentan las diferentes variedades de tomate y a la
resistencia que con el pasar del tiempo viene desarrollando P. infestans a los
fungicidas. Por tal razn es conveniente la introduccin y cultivo de variedades que
tengan mayor resistencia a la enfermedad, de tal manera que se pueda aumentar la
produccin y mejorar la calidad para lograr cubrir la demanda tanto a nivel nacional
como internacional, adems de disminuir los costos tanto a los grandes productores
como al pequeo agricultor, sin contar el bienestar que estas prcticas pueden
producir al medio ambiente.
Hoy en da existe una gran preocupacin por el resurgimiento de nuevas poblaciones
de P. infestans, debido al desconocimiento por parte de los agricultores sobre las
estrategias del control integrado y la inestabilidad de la resistencia de las variedades
de tomate, que podran conducir a epidemias de mayor magnitud incluso que la de
Irlanda. Por tal motivo se deben realizar acciones que mejoren las estrategias de
manejo integrado de la gota, para en un futuro contar con nuevos materiales, que
tengan altos niveles de resistencia estable, que pueden contrarrestar el incremento de
los niveles de patogenicidad exhibidos por P. infestans.
4. OBJETIVOS

4.1. Objetivo general

Determinar el comportamiento de cuatro materiales experimentales de tomate,


obtenidos por medio de la metodologa HETEROINJERTO BERNAL (HIB) al
Oomycete P. infestans, agente causal de la enfermedad conocida como gota.

4.2. Objetivos especficos

Describir los sntomas de la enfermedad en los heteroinjertos (HIB).


Comparar el efecto de Phytophthora infestans en cuanto a los niveles de
incidencia y severidad en los cuatro heteroinjertos evaluados.
Seleccionar los heteroinjertos ms apropiados para recomendar dentro de un
programa de manejo integrado de P. infestans.
5. MATERIALES Y METODOS

5.1. Diseo experimental


Para desarrollar la investigacin se empleo un diseo experimental de bloques
completos al azar con 35 repeticiones. Cada bloque tuvo un tratamiento
correspondiente a uno de los materiales obtenidos por el mtodo HIB para un total de
cuatro bloques, cada uno de 1.5 metro de ancho por 1.5 metros de largo donde se
ubicaron las 35 plntulas de cada heteroinjerto y a una altura del suelo de 30
centmetros y entre bloques se dejo una calle de 50 cm de ancho. En cada bloque se
ubicaron siete columnas por cinco filas de plantas distanciadas 10 centmetros
aproximadamente para un total de 35 plantas las cuales se emplearon en su totalidad
para hacer las respectivas lecturas.

5.2. Localizacin
El trabajo de investigacin se realizo en dos fases, la primera correspondi a la etapa
de laboratorio y la segunda a las pruebas sobre la especie vegetal estudiada, que se
adelant en los invernaderos el Centro Experimental San Javier ubicado en el
municipio de Zipaquira, instalaciones de la Pontificia Universidad Javeriana. La
investigacin se inicio en el mes de Octubre del 2007 y las evaluaciones
correspondientes finalizaron en el mes de Junio de 2008.

5.3. Preparacin de semilleros y trasplante


Inicialmente se seleccionaron las semillas de los heteroinjertos, a las cuales se les
realizo un lavado con agua destilada estril, para una posterior siembra en un medio
artificial selectivo PDA (Agar papa dextrosa)y evaluar que las semillas no
presentaran ningun tipo de contaminacin microbiana, posteriormente se sembraron
en semilleros preparados con turba, suelo y cascarilla en una relacin 1:2:1 y riego
permanente, fueron ubicados bajo condiciones de invernadero a una temperatura de
24oC y una humedad relativa de 70%.
Una vez obtenidas las plntulas y cuando presentaron una altura de 12 cm se
transplantaron a bolsas de 1 kilo, con el sustrato preparado en la proporcin
mencionada anteriormente; el material vegetal fue regado periodicamente y
fertilizado con abono qumico 10-30-10, de acuerdo a las necesidades de las plantas,
sugerido por el Doctor Gerardo Moreno (Codirector).

5.4. Obtencin de la cepa e incremento de inculo


La cepa pura de P. infestans fue obtenida en el laboratorio de Fitopatologa de
Corpoica; reportada como el genotipo EC-1. perteneciente al tipo de apareamiento A1
y reportada tanto para Ecuador como para Colombia. Para multiplicar el inculo se
realizaron pases al medio selectivo agar V8 (Jugo V8, Agar-agar y Carbonato de
calcio), y se llevaron a incubar a temperatura ambiente, observando el crecimiento de
las colonias cada tercer da, luego se hizo un montaje en fresco para observar al
microscopio las caractersticas tpicas del microorganismo.

5.5. Preparacin de la suspensin e inoculacin en plntulas sanas

Fase de Laboratorio

Una vez activado el inculo se multiplico tambin en agar V8, a temperatura


ambiente y en completa oscuridad. Una vez obtenido suficiente desarrollo micelial
como de esporangios (4-7 das) se procedi a lavar las colonias con agua destilada
estril, luego se pasaron por un filtro de nylon de 10u, hasta obtener una suspensin
muy pura de esporangios que se almaceno a 4C por dos horas para promover la
liberacin de zoosporas, para la inoculacin se calculo una concentracin que estaba
entre 3x103-5x104 zoosporas/ml (Trillos, 1989).

Fase de Invernadero

Posteriormente la suspensin se coloc en una nevera de icopor con gel de


enfriamiento y se transport a los invernaderos y con ayuda de un aspersor de plstico
se inocul cada uno de los heteroinjertos. La aspersin se localiz en los foliolos de la
tercera, cuarta y quinta hoja plenamente desarrollada, de acuerdo con la metodologa
propuesta por Trillos (1989).

Las plantas inoculadas se mantuvieron en condiciones de invernadero, con humedad


adecuada y buena luminosidad, para iniciar las correspondientes evaluaciones 10 das
despus de la inoculacin, de acuerdo con la metodologa sugerida por Trillos (1989).

5.6. Toma de datos


La evaluacin del material por dao de la gota se realiz en todos los casos cada siete
das, una vez iniciada la infeccin y durante cuatro semanas (Carrasco, 1997).
Esta se realizo mediante la observacin y descripcin del tipo de lesin, por la toma
de fotos, teniendo en cuenta color del tejido y forma de las lesiones, caractersticas
como olor y consistencia del tejido(suave, hmedo, duro, etc.), se realizo una
observacin microscpica, cortando el tejido o utilizando directamente las estructuras
fungosas ya sea removindolas con un asa o empleando la tcnica de la cinta pegante
transparente o impronta para preparar montajes y observarlos al microscopio (vila,
C. 2001).

5.7. Evaluacin de la incidencia y severidad


La incidencia de la enfermedad en los cuatro heteroinjertos se midi en cada una de
las 35 plantas, durante cuatro semanas, determinando sobre el nmero total de hojas
la cantidad que se encontraron afectadas, expresando el resultado en porcentaje; la
formula permite medir la incidencia es la siguiente (Agrios, 2004; Jaramillo, 2003):

%I = NTH HE x 100
NTH

% I: Porcentaje de incidencia
NTH: Nmero total de hojas
HE: Numero de hojas enfermas

Se realizaron cuatro lecturas con intervalos de 8 das para un total de 32 das Una vez
realizadas las respectivas lecturas se promedio entre las 35 plantas la incidencia de la
enfermedad y se compararon entre los diferentes materiales evaluados.

El grado de severidad se midi en toda la planta, dividindola en tres estratos,


inferior, medio y superior, mediante la escala propuesta por Henfling, (1989) Tabla.
10 (Lozoya et al, 2006) y ajustada a las condiciones de este trabajo, para evaluar el
grado de rea foliar afectada por P. infestans, se realizarn cuatro observaciones, la
escala se anota a continuacin.

Tabla 10. Escala para evaluar el grado de severidad de P. infestans en tomate.

Grado de % de
severidad enfermedad

Sntomas

1 0 Sin sntomas de
enfermedad
2 1-20 Muy pocos
sntomas de
enfermedad

3 21-50 Hasta la mitad del


follaje presenta
algn sntomas de
enfermedad

4 51-75 Muy pocas reas


verdes sin sntomas
de enfermedad

5 Mayor a 76 Todo el follaje con


sntomas de
enfermedad

www.inta.gov.ar/.../tizon/foto1resistencia.jpg
Grados 1-2: Resistencia alta

Grado 3: Resistencia media

Grados 4-5: resistencia baja

Adaptacin de la escala propuesta por Henfling, (1980)

Una vez realizadas las evaluaciones sobre la severidad se promediaron los porcentajes
obtenidos en cada una de las 35 plantas de cada tratamiento. La informacin sobre los
datos obtenidos con la incidencia y severidad se recolecto en las tablas del anexo
10.1.

5.8. Reaislamiento
Algunas de las hojas de los heteroinjertos que presentaron las lesiones caractersticas
de la enfermedad y abundante esporulacin se llevaron al laboratorio con el fin de
reaislar el microorganismo; como medio de cultivo se uso V8, y para su aislamiento
se uso el mtodo de raspado directo del material colectado de acuerdo con la
metodologa propuesta por Chycoski y Punja, 1996 y Dekker, 1987.

5.9. Variables de estudio


Las variables que se evaluaron en este proyecto, fueron severidad (que es la
proporcin de tejido de la planta (foliolos) que presentaron sntomas de la
enfermedad) e incidencia, (que se refiere a la cantidad de hojas de la planta
(expresados en porcentaje) que presentaron cualquier tipo de sintoma por pequeo
que sea), la medicin de severidad se hizo mediante la escala de lesiones desarrollada
por Henfling, pero adaptada a las de la investigacin en condiciones de invernadero.
5.10. Anlisis estadstico para incidencia y severidad
La unidad experimental fue la planta, y cada heteroinjerto cont con 35 repeticiones.
El diseo fue completamente aleatorio.

Se realizo un anlisis de varianza con el fin de determinar las diferencias entre los
promedios de los tratamientos evaluados.

La comparacin de medias de tratamientos se hizo mediante la prueba de


comparacin de Tukey de acuerdo con los objetivos especficos, con un nivel de
significancia del 5% (Anexo 10.2).

6. RESULTADOS Y DISCUSION

6.1. Obtencin de plantas


De la siembra de las semillas lavadas no se obtuvo ningn microorganismo con
caractersticas de fitopatgeno que influyera en los resultados del estudio. Se
obtuvieron plantas que presentaron de cinco a siete hojas verdaderas y una altura
aproximada de 20 a 25 cm y que llegaron a la etapa de floracin, y fue en este estado
de desarrollo que se llevo a cabo la inoculacin, pues se considero que las plantas
presentaron las caractersticas necesarias.

6.2. Obtencin de inculo


En el medio de cultivo Agar V-8 se logro obtener las colonias necesarias (150 cajas)
para alcanzar una concentracin de 4x104 zoosporas/ml sugeridas por Trillos, 1989;
a pesar de la dificultad en el aislamiento del agente causal de la enfermedad
registrado por numerosos investigadores en este medio de cultivo se obtuvieron
colonias puras de apariencia algodonosa y crecimiento en forma de rosetas y bordes
irregulares tal como se presenta en la Fig. 8. El crecimiento del microorganismo se
obtuvo despus de ocho das de incubacin, alcanzando un dimetro de 10 cm
Figura 8. Colonia de P. infestans en el medio de cultivo agar V-8; presenta color blanco, con una
colonia de apariencia algodonosa y bordes irregulares (8das).

En las observaciones realizadas en el microscopio el oomycete presento las


estructuras que caracterizan al microorganismo, como micelio aseptado,
esporangiforos y esporangios. En la Fig. 8:A se observan los esporangioforos y los
esporangios de la enfermedad conocida como gota o tizn tardo.

b.
a.
c.

Figura 8:A. Estructuras de P. infestans observadas al microscopio: a. Esporangiforo ramificado


caracterstico de P. infestans; b. Esporangios de forma alimonada y c. Papila que permite la salida de
las zoosporas.

6.3. Toma de datos


Bajo las condiciones de invernadero las plantas lograron el desarrollo apropiado para
la inoculacin, ya que los primeros sntomas de la enfermedad se obtuvieron a los 10
das de la inoculacin en los materiales ensayados. Los primeros sntomas observados
en los foliolos se presentan en la Fig 9, donde se observan las lesiones tpicos que
ocasiona el microorganismo y que registran autores como Trillos, (1989), Jaramillo,
(2003) entre otros. Las lesiones presentan bordes muy definidos, gran tamao y
apariencia hmeda, en todos los materiales, con pequeas diferencias entre los
heteroinjertos como son tamao y textura de la lesin.

a) b)

c) d)
Figura 9. Lesiones sobre los foliolos de tomate. a. Sntomas tpicos de la enfermedad, (15
das) se observa el borde blanquecino y la necrosis interna del tejido. b. Mancha necrtica
con presencia de los signos de la enfermedad (20 das). c. Mancha necrtica (30 das). d.
Lesin por el envs, presenta apariencia hmeda y abundante esporulacin.

Sobre los tallos las lesiones se presentaron con menos frecuencia posiblemente
debido a que el inculo no se aplico directamente sobre el tejido. Los sntomas
observados fueron manchas de menor tamao que las de los foliolos, bordes definidos
de color claro y con algn crecimiento micelial; en la Fig. 9:A se observa una de las
lesiones encontradas
Figura 9:A Lesin observada en los tallos de tomate, presenta un color claro, borde definido y
apariencia seca.

6.4. Incidencia

La informacin recolectada sobre la incidencia de la enfermedad en el material


vegetal se presenta en el Anexo 10.3 y 10.1; de acuerdo con las lecturas registradas
durante cuatro semanas, en la Fig.10 se observan los resultados obtenidos para los
cuatro heteroinjertos.

De esta manera se encuentra que en el tomate HIB-1, la incidencia de la enfermedad


aumento a partir de la segunda semana de la evaluacin y a travs de las lecturas
siguientes se increment progresivamente, variando entre un 10 hasta 60 % de
incidencia, situacin que era de esperar de acuerdo con Botero en 1997, muchas de
las hojas presentaron signos de esporulacin, lo que permite el desarrollo de nuevos
ciclos de la enfermedad, de esta manera, es posible que el material presente algn
grado de susceptibilidad a la enfermedad, de acuerdo con arneso (1998), este
microorganismos puede iniciar cada siete das nuevos ciclos de la enfermedad dada la
continua presencia de inoculo, cuando las condiciones ambientales son favorables
para su desarrollo.

En el HIB-2 Fig. 10, la incidencia tuvo un comportamiento diferente ya que la


variacin fue entre 5% hasta llegar en la ltima lectura a ser de aproximadamente
26%, considerndose que este material tuvo niveles bajos de severidad puede
presentar algn grado de resistencia a la enfermedad, es posible que su composicin
gentica le permita evitar el desarrollo de la enfermedad al compararse con los otros
materiales vegetales evaluados.

En el HIB-3 la incidencia inicial fue una de las menores, sin embargo en la lectura
final alcanzo a llegar a un 42%; es probable que comportamientos como estos puedan
ser complementados con otras prcticas de manejo de la enfermedad que contribuyan
a disminuir la presencia de la enfermedad, como es una mayor aireacin como
propone Abad, et al, 2001.

Respecto al HIB-4 el comportamiento de la enfermedad fue similar al HIB-1,


teniendo en cuenta que la incidencia inicial fue un poco mayor, pero al final de las
evaluaciones alcanzo a ser del 55%. En estas observaciones se aprecia que los
materiales HIB-1 y HIB-4 presentaron los niveles ms altos de incidencia tanto al
iniciar las lecturas como al final de la evaluacin.

Incidencia Incidencia
heteroinjerto 1 heteroinjerto 2
% Area foliar agfcetada

% Area foliar afectada

50 50

0 0
1 2 3 4 1 2 3 4

Semanas de evaluacin Semanas de evaluacion

Incidencia Incidencia
% Area foliar afcetada

60
50 heteroinjerto 3 heteroinjerto 4
40
% Area foliar afectada

30 100
20
0
10
0 1 2 3 4
1 2 3 4 Semanas de evaluacin
Semanas de evaluacin
Figura 10. Incidencia de la enfermedad en los cuatro heteroinjertos evaluados. Se observa que lo
heteroinjertos que presentaron los mejores resultados para ser integrados en el manejo de la
enfermedad son los 2 y 3.

Por tanto la incidencia en el material vegetal se comporto de la siguiente forma:

HIB-1>HIB-4>HIB-3>HIB-2

Mostrando los niveles ms altos de incidencia en los heteroinjertos HIB 1 y 4 Fig 11.

Incidencia en los Heteroinjertos


60
% Incidencia

50
40
30
20
10
0
1 2 3 4
Semana 1 0 0 0 0
Semana 2 9 5 7 20
Semana 3 40 20 29 23
Semana 4 60 26 42 57
Heteroinjertos

Figura 11. Comparacin de la incidencia en los cuatro heteroinjertos.

Los cultivares que presentaron menor grado de incidencia puede decirse que tienen
algn grado de resistencia al patgeno (Botero, et al, 1997), ya que se observo que
los heteroinjertos 2 y 3 presentaron los niveles ms bajos de incidencia, siendo estos
cultivares los ms promisorios para un manejo integrado de la gota, ya que estos
mostraron una disminucin de la lesin causada por el patgeno P. infestans al
compararlos con los otros heteroinjertos , lo que indica una posible Resistencia
Sistmica Adquirida (RSA), (Guzmn, 1964).
La resistencia observada en follaje debe ser confirmada con los rendimientos
obtenidos y atributos agronmicos de los frutos para de esta manera proceder a la
seleccin de aquellos materiales vegetales sobresalientes en todos estos aspectos
(Carrasco, 1997).

El desarrollo de nuevas metodologas como el HIB buscan un mejoramiento a nivel


gentico que influya directamente en la calidad de esta especie hortcola,
fortaleciendo la produccin de tomate en nuestro pas, adaptando su cultivo a las
necesidades del agricultor y de la agroindustria intentando crear una variedad
resistente a plagas y enfermedades reduciendo a la vez los costos en su produccin
(Castro, J; Olaya, A. 2001)

6.5. Severidad

Las lecturas que permitieron conocer los diferentes grados de severidad en los tres
estratos de las plantas se registran en el anexo 10.1 y 10.4 y se presentan en la Fig.
12.

En el HIB-1 para climas frescos se observo que el mayor grado severidad de la


enfermedad se presento en los tercios medio e inferior ya que el porcentaje de rea
foliar afectada llego a ser de 36 %, y 63 % mientras el tercio superior con 2%,
mostrando una calificacin final de 4 (Muy pocas reas verdes sin sntomas de enfermedad) en
el estrato medio, segn las escala de Henfling, (1980), esta situacin se puede
presentar dado que en el tercio superior la densidad de hojas es menor, permitiendo
mayor aireacin lo cual contribuye a que la humedad relativa sea menor, de acuerdo
con Jaramillo, 2003, mientras que en los estratos bajo y medio se presenta mayor
densidad de hojas y por tanto una humedad relativa ms alta, factor ambiental que
favorece al microorganismo para que inicie el proceso de penetracin, germinacin y
la produccin de esporangios y zoosporas, en el tercio medio (Flier, et al, 2002).
El HIB-2, para climas frescos mostr alta severidad en los estratos bajo de 43% y
medio de 54%, mientras en el estrato alto una baja cantidad de tejido necrosado ya
que solo alcanzo a ser del 5%, mostrando una calificacin final de 4 (Muy pocas reas
verdes sin sntomas de enfermedad) en el estrato medio, segn las escala de Henfling,
(1980) esto puede ser debido a la mayor predisposicin de tejidos suculentos que
generalmente se encuentran ubicados en los tercios superiores de las plantas (Huertas,
1985), sin embargo es probable que en el estrato superior la mayor aireacin permita
menor condensacin de agua que disminuye la capacidad germinativa de esporangios
o zoosporas (Carrasco, 1997); aunque no se midi la cantidad de hojas ubicadas en
este tercio, es probable que este HIB-2 presente mayor cantidad de follaje que
permita condiciones favorables para el inicio de la enfermedad; sin embargo de
acuerdo con las mediciones de incidencia y severidad se considera en forma
preliminar que este material puede ser considerado como material promisorio para
ser estudiado en condiciones de campo y compararlo con los materiales de uso
comercial consumidos en el mercado nacional.

Un comportamiento similar presento el HIB-3 para climas templados a clidos ya que


se encontr una baja severidad en el estrato superior, llegando a ser nicamente de
4% del rea foliar afectada, mientras que en los estratos inferior y medio llego a estar
en el 44 y 44 %, mostrando una calificacin final de 3 (Hasta la mitad del follaje presenta
algn sntomas de enfermedad) en el estrato medio, segn las escala de Henfling, (1980).

En el HIB-4 se observa que en el estrato inferior presento un 36% y en el estrato


medio 60 % y el superior solamente de 6%, mostrando una calificacin final de 4
(Muy pocas reas verdes sin sntomas de enfermedad) en el estrato medio, segn las escala de
Henfling, (1980). Sin embargo es conveniente realizar nuevas evaluaciones que
permitan conocer si la cantidad de tejido afectado est relacionada con la
esporulacin (Arneson, 1998), de manera que se convierta en una fuente de inoculo
para infecciones posteriores.
A pesar de que todos los materiales tienen algunas de las bases genticas similares es
probable que dentro de cada individuo se puedan presentar diferentes
comportamientos frente al mismo patgeno (Jaramillo, 2003), lo cual podria explicar
las diferencias entre los heteroinjertos en el desarrollo de la enfermedad.

Severidad por Severidad por


estratos en estratos en el
el heteroinjerto 1 heteroinjerto 2
100

% material vegetal
% material vegetal

60 0

infectado
1 2 3
infectado

-40
1 2 3
Estratos Estratos

Severidad por Severidad por


estratos en el estratros en el
heteroinjerto 3 heteroinjerto 4
% Material vegetal

60 60
% Material vegetal

-40 -40
infectado
infectado

1 2 3 1 2 3
Estratos Estratos

Figura 12. Resultados de la severidad frente a la enfermedad gota, en los tres estratos 1. (Bajo), 2.
(Medio), 3. (Alto) de los heteroinjertos HIB de tomate.

Por tanto la severidad en el material vegetal se comporto de la siguiente forma:

HIB-1>HIB-4>HIB-2>HIB-3

Mostrando los niveles ms altos de severidad en los heteroinjertos HIB 1 y 4 Figura


13.
Severidad en los Heteroinjertos
70
60

% Severidad
50
40
30
20
10
0
1 2 3 4
Estrato bajo 36 43 44 36
estrato medio 62 54 44 60
Estrato alto 2 5 4 6
Heteroinjertos

Figura 13. Comparacin de la severidad en los cuatro heteroinjertos.

Como resultado se observo que los Heteroinjertos 1 y 4 presentaron los mayores


grados de severidad, y una alta susceptibilidad del material vegetal evaluado al
patgeno P. infestans, segn las escala Henfling, aun as su uso, en programas de
mejoramiento no se debera pasar por alto en aquellas regiones donde el Oomicete, no
es tan variable y agresivo (Lozoya, et al, 2006) aunque todos presentaron mayor
susceptibilidad en los estratos bajo y medio, los heteroinjertos 2 y 3, presentaron
niveles ms bajos en los estratos medios, aunque en el estrato bajo, estos mostraron
niveles altos de severidad, debido posiblemente al poco espacio que hubo entre cada
individuo del estudio (Abad, et al, 2001) sin embargo siguen siendo las dos
cultivariedades con ms potencial de resistencia al fitopatgeno, y se pueden
considerar con algn nivel de resistentes debido a la baja severidad de ataque en
estas cultivariedades (Lozoya, et al, 2006)

Se considera un husped resistente cuando no puede ser atacado por el patgeno, sin
embargo, en la relacin husped-patgeno, la resistencia puede ser de varios niveles y
algunos individuos o clones, pueden estar ms afectados que otros, la resistencia
puede ser total (100%), o parcial (Alta, media o baja)(Turkensteen, 2002), para los
resultados de este estudio, los heteroinjertos que presentaron mayor grado de
resistencia fueron los heteroinjertos 2 y 3 presentado una resistencia media y baja
para la evaluacin de la severidad, y un mayor grado de resistencia en la evaluacin
de la incidencia.

La falta cultivares propios para cada regin trae consigo serios limitantes, ya sean
estos biolgicos, agronmicos y/o econmicos, entre los cuales se destacan, los
problemas sanitarios (ataque de plagas, enfermedades, adaptacin a determinados
ambientes), usos intensivo de capital y mano de obra, que repercute en altos costos de
produccin (fertilizantes, plaguicidas, etc.), prdidas en postcosecha, escasa
tecnificacin en la produccin, entre otros que limitan su rendimiento (Moreno,
2001).

La practica ms efectiva y amigable ambientalmente para prevenir la devastacin por


P. infestans es la incorporacin de especies resistentes en los cultivos, lo cual se viene
realizando desde mediados del siglo XIX de forma extensiva (Flor, 1971; Hammond-
kosack and Jones, 1996; Keen, 2000; Leister, 2000), y el tomate es una especie que
ha sido objeto de estudio de numerosas investigaciones y creador de programas a
travs del mundo (Moreno, 2001), como es la metodologa del heteroinjerto bernal
que busca disminuir las limitantes en el cultivo y obtener cultivariedades con mejores
caractersticas bromatolgicas, de produccin y de resistencia gentica al patgeno.

En Colombia se han llevado a cabo algunos estudios sobre las hortalizas entre las
cuales se encuentra el tomate; (Cabrera, 1999, citado por Castro, 2001) cita algunos
realizados por el programa de investigacin y mejoramiento gentico y produccin de
semillas y hortalizas de la Universidad Nacional de Colombia y por el Instituto
Colombiano Agropecuario (ICA); entre los estudios ms sobresalientes realizados
por estas instituciones, se encuentran investigaciones en las cuales se evalu
principalmente la resistencia a diferentes plagas y enfermedades buscando obtener
una mejor variedad de la hortaliza partiendo de diferentes cruzamientos
experimentales entre distintos tipos de tomate, que pudieran ser sometidos a
condiciones de invernadero y de campo, utilizando para ello cultivos en diferentes
lugares del pas, dentro de estos estudios se puede citar el uso de la metodologa HIB,
que es realizado en la Pontificia Universidad Javeriana, con el fin de mejorar algunas
caractersticas del tomate como resistencia (incidencia y severidad), calidad y
produccin.

La mejora que permiti la intensificacin del cultivo en la dcada de 1930 en EEUU


y en la de 1960 en Europa, se baso y se sigue basando en la hibridacin (Moya, et al,
2000), metodologa que se emplea no solamente para aumentar la produccin y
calidad del tomate sino tambin para aumentar la resistencia al algunos patgenos, sin
embargo al acrecentarse el conocimiento sobre esta hortcola, se ha permitido el
desarrollo de nuevas metodologas, que permiten la unin de plantas sin importar sus
caractersticas taxonmicas, como es el HETEROINJERTO BERNAL( Moreno,
2001) que lo permite y aumenta la posibilidad de encontrar caractersticas,
esencialmente genticas, que puedan beneficiar el producto final en este caso el
tomate.

El tomate constituye un ejemplo clarsimo del modelo devastador de


empobrecimiento gentico debido a la reduccin de la diversidad gentica en
America del Sur y el control de los recursos genticos por America del Norte
(Vallejo, 1999), por lo cual se hace relevante el desarrollo de nuevas variedades, las
cuales aporten nuevas bases genticas que den a los mejoradores nuevas herramientas
que les permiten combatir el fantasma del empobrecimiento gentico.

Dentro de los factores biticos que afectan el tomate est la gota que causa severas
prdidas de hasta un 100% si no se toma ninguna medida de control y hasta un 60%
con control. Por tanto para su control se requieren numerosas aplicaciones de
fungicidas, llegando en algunos casos a ms de 10 durante el ciclo de cultivo. Estas
medidas, adems de elevar notablemente los costos de produccin, daan el medio
ambiente y la salud de los agricultores (Carrasco, 1997).

A nivel mundial, se ha venido trabajando durante muchos aos en la obtencin de


cultivares resistentes a fitopatogenos, aunque en la mayora de los casos esta
resistencia fue vencida al cabo de dos o tres aos (Carrasco, 1997), adems de la
alteracin fisiolgica que sufre la planta por la disminucin del rea foliar afectando
su capacidad fotosinttica.

Obtener cultivares resistentes a la gota con rendimientos superiores a los actuales y


con buenas caractersticas agronmicas, depende en gran medida del desarrollo de
cultivares que formen parte de un adecuado "Manejo Integrado" para el control de la
gota (Carrasco, 1997).

Los mtodos para la obtencin de variabilidad gentica en tomate y otros cultivos, se


han incrementado en los ltimos aos, logrndose aumentar la variabilidad gentica
disponible para la seleccin de nuevos genotipos. Esto obliga a perfeccionar las
metodologas de evaluacin, de manera que se puedan discriminar con mayor
precisin y celeridad los genotipos adecuados para una condicin productiva dada
(Moya, et al, 2000)

Los objetivos fundamentales de los programas de mejoramiento gentico del tomate


estn centrados en la bsqueda de variedades resistentes a altas temperaturas, altas
precipitaciones, sequa, salinidad, alta luminosidad y tolerancia a las plagas y
enfermedades ms importantes de este cultivo en el pas (Moya, et al, 2000).

6.6. Anlisis estadstico


A los datos tomados en campo se les aplic el anlisis de varianza con el fin de
determinar las diferencias entre los promedios de los tratamientos evaluados.
La comparacin de medias de tratamientos se hizo mediante la prueba de
comparacin de Tukey de acuerdo con los objetivos especficos. En todos los casos,
el nivel de significancia escogido fue del 5%. Los anlisis estadsticos se hicieron por
separado para evaluar incidencia y severidad y los datos de la severidad fueron
transformados (x +0,5).

Cuando se analiz la variable incidencia de la enfermedad de la gota, la prueba de


Tukey registr diferencias altamente significativas (P< 0,01) entre los Heteroinjertos
evaluados. El Heteroinjerto 4 con un promedio del 32,91% de incidencia y el
Heteroinjerto 1 con un promedio del 32,10%, registraron los mayores promedios de
incidencia de la enfermedad de La gota. Los menores promedios de incidencia se
registraron entre el Heteroinjerto 3 con un promedio de 19,96% y el Heteroinjerto 2
con un promedio de 13,78%.

De acuerdo con el anlisis de varianza para la variable severidad, la prueba de Tukey


registr diferencias altamente significativas (P< 0,01) cuando se compararon los
promedios entre los diferentes Heteroinjertos evaluados. El Heteroinjerto 1 present
la mayor severidad de la enfermedad con un promedio del 53,1%, superior al resto de
tratamientos. Cuando se compararon los otros Heteroinjertos entre s no se
encontraron diferencias significativas en cuanto a la severidad de la enfermedad. El
Heteroinjerto 4 present un promedio del 23,92%, el Heteroinjerto 2, 21,04% y el
Heteroinjerto 3, 19,27%.

A pesar que las plantas no poseen un sistema inmunolgico comparable con el de los
animales superiores (Chen y Chen, 1998), el traspaso de genes mediante la
metodologa del (HIB) de una especie vegetal a otra, puede inducir la aparicin de
barreras que permitan a las plantas defenderse de los patgenos potenciales,
disminuyendo el grado de severidad e incidencia en la planta.

La utilizacin de variedades resistentes al patgeno, no solo ayudara a aumentar y


mantener una produccin constante de tomate, como es el caso de S.mdemsisum
que se ha usado ampliamente en programas de mejoramiento ( Lozoya, et al, 2006)
sino tambin a bajar costos en la utilizacin de plaguicidas y a si mismo, disminuir la
carga qumica asimilada por el suelo proveniente de estos, finalizando con una
esterilidad del suelo.
7. CONCLUSIONES

Los signos y sntomas expresados por los cuatro Heteroinjertos, correspondieron


a los tpicos de la enfermedad conocida como la gota y se confirmaron mediante
el anlisis realizado en el laboratorio.
El Heteroinjerto 1 y 4 presentaron el mayor porcentaje de incidencia y severidad,
mostrando mayor susceptibilidad al patgeno y posiblemente una alta
predisposicin a padecer la enfermedad de la gota.
Los Heteroinjertos 2 y 3 presentaron los niveles ms bajos de incidencia y
severidad, mostrando menor susceptibilidad y una menor posibilidad de expresar
la enfermedad de la gota.
El mayor grado de severidad se presento en los estrato 1(bajo) y 2 (medio),
debido a que en estos hay mayor numero de foliolos, y por lo tanto hay mayor
humedad, para evita tener estas condiciones propicias para el desarrollo de la
enfermedad, se debe aumentar el espacio entra planta y planta, permitiendo una
mayor aireacin.
La practica ms efectiva y amigable ambientalmente para prevenir la devastacin
por P. infestans es la incorporacin de especies resistentes en los cultivos, ya que
disminuye costos y la carga qumica al suelo y agua.
En forma preliminar se considera que bajo las condiciones del estudio que la
metodologa del Heteroinjerto Bernal, presenta caractersticas que pueden ser
tenidas en cuenta en la obtencin de material resistente a la gota que permita ser
integrado dentro de un manejo integrado de la enfermedad en plantas de tomate.
Estos nuevos cultivares pueden presentar algn grado de resistencia combinada,
es decir poseen resistencia o tolerancia a factores biticos y abiticos, lo que los
hace an ms ventajosos.
8. RECOMENDACIONES

Hacer evaluaciones en condiciones de campo con los Heteroinjertos 2 y 3.


Realizar estudios comparativos de comportamiento de los Heteroinjertos 2 y 3,
con algunas variedades de tomate comercial.
Hacer anlisis de comportamiento de los cuatro Heteroinjertos, frente a otras
enfermedades.
Evaluar el comportamiento de los Heteroinjertos, frente a otras cepas del
patgeno.
El uso de los heteroinjertos 1 y 4 no se debe descartar del todo, en especial en
regiones donde el oomicete, no esta presente o no es tan variable y agresivo.
Se debe mantener un espacio aproximado de 50 centmetros, entre cada planta
para aumentar la aireacin en los diferentes estratos y de esta forma ayudar a
disminuir la humedad relativa evitando las condiciones optimas para el desarrollo
de P. infestans.
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Academic Press. Limited, Vol 7, Cap 7: 193-224.
10. ANEXOS
10.1 Tablas de datos de Incidencia y Severidad
Incidencia heteroinjerto 1
PLANTA MATERIAL INFECTADO
NUMERO Semana 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4
Planta 1 X X X
Planta 2
Planta 3 X X
Planta 4
Planta 5
Planta 6 X X
Planta 7
Planta 8 X X X
Planta 9
Planta 10 X
Planta 11
Planta 12
Planta 13 X X
Planta 14
Planta 15
Planta 16
Planta 17 X X
Planta 18
Planta 19
Planta 20 X X X
Planta 21
Planta 22
Planta 23 X
Planta 24 X X
Planta 25
Planta 26 X
Planta 27
Planta 28
Planta 29 X X
Planta 30 X
Planta 31
Planta 32 X X
Planta 33 X
Planta 34
Planta 35

Incidencia heteroinjerto 2
PLANTA MATERIAL INFECTADO
NUMERO Semana 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4
Planta 1
Planta 2
Planta 3 X X
Planta 4
Planta 5
Planta 6 X X X
Planta 7
Planta 8
Planta 9
Planta 10
Planta 11
Planta 12
Planta 13 X X
Planta 14
Planta 15
Planta 16 X
Planta 17
Planta 18
Planta 19
Planta 20
Planta 21 X X X
Planta 22
Planta 23
Planta 24 X X
Planta 25
Planta 26
Planta 27 X X
Planta 28
Planta 29
Planta 30 X
Planta 31
Planta 32
Planta 33 X X
Planta 34
Planta 35

Incidencia heteroinjerto 3
PLANTA MATERIAL INFECTADO
NUMERO Semana 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4
Planta 1 X X X
Planta 2 X X
Planta 3
Planta 4 X
Planta 5 X X
Planta 6
Planta 7 X
Planta 8 X X
Planta 9
Planta 10 X X
Planta 11
Planta 12 X
Planta 13 X X
Planta 14
Planta 15 X X
Planta 16 X
Planta 17
Planta 18 X X
Planta 19
Planta 20
Planta 21 X X
Planta 22
Planta 23 X X
Planta 24 X
Planta 25
Planta 26 X X
Planta 27
Planta 28 X
Planta 29
Planta 30 X X
Planta 31
Planta 32
Planta 33 X
Planta 34 X X
Planta 35 X X

Incidencia heteroinjerto 4
PLANTA MATERIAL INFECTADO
NUMERO Semana 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4
Planta 1 X X X
Planta 2 X
Planta 3 X
Planta 4
Planta 5
Planta 6 X
Planta 7 X X X
Planta 8
Planta 9 X
Planta 10 X
Planta 11
Planta 12 X
Planta 13 X X X
Planta 14 X
Planta 15
Planta 16 X
Planta 17 X X
Planta 18 X X X
Planta 19
Planta 20
Planta 21 X
Planta 22 X
Planta 23
Planta 24
Planta 25 X X X
Planta 26
Planta 27 X
Planta 28
Planta 29 X
Planta 30
Planta 31 X X X
Planta 32
Planta 33
Planta 34 X X X
Planta 35

Severidad heteroinjerto1.
PLANTA NUMERO PORCENTAJE DE MATERIAL INFECTADO
Estrato 1 Estrato 2 Estrato 3
Planta 1
Planta 2
Planta 3 X X
Planta 4
Planta 5 X
Planta 6 X
Planta 7
Planta 8 X
Planta 9
Planta 10
Planta 11
Planta 12
Planta 13 X X X
Planta 14
Planta 15
Planta 16 X
Planta 17
Planta 18 X
Planta 19
Planta 20 X
Planta 21 X
Planta 22 X
Planta 23
Planta 24 X
Planta 25 X
Planta 26 X
Planta 27
Planta 28 X
Planta 29 X
Planta 30 X
Planta 31 X
Planta 32 X
Planta 33
Planta 34
Planta 35 X

Severidad Heteroinjerto 2.
PLANTA NUMERO PORCENTAJE DE MATERIAL INFECTADO
Estrato 1 Estrato 2 Estrato 3
Planta 1 X
Planta 2
Planta 3 X
Planta 4
Planta 5 X
Planta 6 X
Planta 7
Planta 8 X
Planta 9 X
Planta 10 X
Planta 11 X
Planta 12 X
Planta 13 X X X
Planta 14 X
Planta 15
Planta 16 X
Planta 17 X
Planta 18 X
Planta 19 X
Planta 20 X
Planta 21 X
Planta 22 X
Planta 23 X
Planta 24 X
Planta 25 X X
Planta 26 X
Planta 27 X
Planta 28 X X
Planta 29
Planta 30 X X X
Planta 31 X
Planta 32 X
Planta 33 X
Planta 34 X
Planta 35 X

Severidad Heteroinjerto 3.
PLANTA NUMERO PORCENTAJE DE MATERIAL INFECTADO
Estrato 1 Estrato 2 Estrato 3
Planta 1 X
Planta 2 X
Planta 3 X
Planta 4 X
Planta 5 X
Planta 6 X
Planta 7 X
Planta 8
Planta 9 X X
Planta 10
Planta 11 X
Planta 12 X
Planta 13 X
Planta 14 X
Planta 15
Planta 16 X X
Planta 17
Planta 18 X
Planta 19 X
Planta 20 X
Planta 21 X
Planta 22 X X X
Planta 23
Planta 24 X
Planta 25 X
Planta 26 X
Planta 27 X
Planta 28 X X
Planta 29 X
Planta 30 X
Planta 31 X
Planta 32 X
Planta 33 X
Planta 34 X
Planta 35 X

Severidad Heteroinjerto 4.
PLANTA NUMERO PORCENTAJE DE MATERIAL INFECTADO
Estrato 1 Estrato 2 Estrato 3
Planta 1 X
Planta 2
Planta 3 X
Planta 4 X
Planta 5 X
Planta 6
Planta 7
Planta 8 X X X
Planta 9
Planta 10 X X
Planta 11
Planta 12 X X
Planta 13
Planta 14 X
Planta 15
Planta 16 X X
Planta 17 X X X
Planta 18 X X
Planta 19 X
Planta 20 X
Planta 21 X
Planta 22 X
Planta 23
Planta 24 X X
Planta 25 X X
Planta 26 X
Planta 27
Planta 28
Planta 29 X
Planta 30 X
Planta 31 X
Planta 32 X
Planta 33
Planta 34
Planta 35

10.2. Evaluacin de Heteroinjertos para control de la severidad e incidencia de


enfermedades
ANALISIS DE VARIANZA

PARA: VARIBLE= Incidencia


VARIABLE: GRADO transformada con Raz(x+1/2)
FUENTE gl SC CM F PR>F
MATERIAL 3 98.739083 32.913028 11.91 0.0001
Error 136 375.738493 2.762783
Total 139 474.477576
Promedio 4.947959
R2 0.2081
C.V.(%) 33.59

Prueba de Comparacin de Tukey


Variable: GRADO
MATERIAL Promedios N Agrupacin
4 5.7804 35 a
1 5.7098 35 a
3 4.5229 35 b
2 3.7787 35 b
RCME: 1.6622
Promedios con la misma letra
NO son significativamente diferentes (P=0.05)

Evaluacin de Heteroinjertos para control de la severidad e incidencia de


enfermedades

ANALISIS DE VARIANZA
PARA: VARIBLE= Severidad
VARIABLE: GRADO transformada con Raz(x+1/2)
FUENTE gl SC CM F PR>F
MATERIAL 3 187.995245 62.665082 24.11 0.0001
Error 136 353.511725 2.599351
Total 139 541.506970
Promedio 5.337531
R2 0.3472
C.V. (%) 30.21

Prueba de Comparacin de Tukey


Variable: GRADO

MATERIAL Promedios N Agrupacin


1 7.3212 35 a
4 4.9421 35 b
2 4.6407 35 b
3 4.4462 35 b
RCME: 1.6123

Promedios con la misma letra


NO son significativamente diferentes (P=0.05)
10.3 Tablas de incidencia
Incidencia Heteroinjerto 1
PORCENTAJE DE MATERIAL AFECTADO semas de evaluacin
0 1
9 2
40 3
60 4

Incidencia Heteroinjerto 2
SEMANAS DE
PORCENTAJE DE MATERIAL AFECTADO EVALUACION
0 1
5 2
20 3
26 4
Incidencia Heteroinjerto 3
SEMANAS DE
PORCENTAJE DE MATERIAL AFECTADO EVALUACION
0 1
7 2
29 3
42 4

Incidencia Heteroinjerto 4
SEMANAS DE
PORCENTAJE DE MATERIAL AFECTADO EVALUACION
0 1
20 2
23 3
57 4

10.4 Tablas de severidad

Severidad Heteroinjerto1.
PORCENTAJE DE MATERIAL
INFECTADO ESTRATOS
36 1
62 2
2 3

Severidad Heteroinjerto 2.
PORCENTAJE DE MATERIAL
INFECTADO ESTRATOS
43 1
54 2
5 3

Severidad Heteroinjerto3.
PORCENTAJE DE MATERIAL
INFECTADO ESTRATOS
44 1
44 2
4 3

Severidad Heteroinjerto 4.
PORCENTAJE DE MATERIAL
INFECTADO ESTRATOS
36 1
60 2
6 3