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Inmunologa
www.elsevier.es/inmunologia
Revisin
Gloria Vsquez y Diana Castano
Hctor Rincn-Arvalo, Lina Yassin-Norena,
Grupo de Inmunologa Celular e Inmunogentica, Instituto de Investigaciones Mdicas, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia,
Medelln, Colombia
Historia del artculo: Los linfocitos B (LB) son clulas del sistema inmune adaptativo responsables de la respuesta
Recibido el 23 de abril de 2013
humoral. Durante los ltimos anos se ha demostrado en humanos y murinos la existencia
Aceptado el 12 de junio de 2013 de LB con capacidad reguladora (Breg). La funcin reguladora de estos LB se ha adjudicado
On-line el 26 de octubre de 2013 a la capacidad de producir IL-10 y de reducir la secrecin de IFN-, TNF- e IL-17 por parte
de linfocitos T CD4+ ; adems, las clulas Breg promueven la diferenciacin de linfocitos T a
Palabras clave: un fenotipo regulador e inducen la remisin de manifestaciones autoinmunes en diferentes
Regulacin modelos murinos. En humanos, alteraciones en el nmero y funcin de clulas Breg se han
Linfocitos B reportado en lupus eritematoso sistmico, artritis reumatoide, entre otras enfermedades
Autoinmunidad autoinmunes. Por consiguiente, se sugiere que las clulas Breg tienen un papel importante
Linfocitos B reguladores en la inmunopatologa de las enfermedades autoinmunes y podran convertirse en blanco
B10 potencial para tratamientos futuros.
Clulas transicionales 2 precursoras 2013 Sociedad Espaola de Inmunologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los
de clulas de zona marginal derechos reservados.
Interleucina 10
a b s t r a c t
Keywords: B lymphocytes belong to the adaptive immune system and they are responsible for humoral
Regulation responses. In recent years, it has been demonstrated the existence of B cells with regu-
B lymphocytes latory capacity (Breg) in humans and mouse models. The regulatory function of these B
Autoimmunity cells is explained by the production of IL-10 and the reduction of IFN-, TNF- and IL-17
Regulatory B lymphocytes secretion by CD4 + T cells; in addition, Breg cells promote the differentiation of T lymphocy-
B10 tes into a regulatory phenotype and induce the remission of autoimmune manifestations
Transitionals 2 marginal zone in different murine models. In humans, alterations in number and function of Breg cells
precursors have been reported in systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, and other
Interleukin 10
Autor para correspondencia.
Correo electrnico: dmcastano@gmail.com (D. Castano).
0213-9626/$ see front matter 2013 Sociedad Espaola de Inmunologa. Publicado por Elsevier Espaa, S.L. Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.inmuno.2013.06.001
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autoimmune diseases. Therefore, it has been suggested that Breg cells have an important
role in the immunopathology of autoimmune diseases and may be a potential target for
future treatments.
2013 Sociedad Espanola de Inmunologa. Published by Elsevier Espaa, S.L. All rights
reserved.
sugiere que la funcin reguladora de los LB tambin puede Estos hallazgos sugieren que en algunos casos la estimula-
inducirse a travs de estos receptores de la inmunidad cin a travs del BCR podra inducir en clulas B un fenotipo
innata. regulador.
Adicionalmente se ha observado cmo ratones C57BL/6 Algo similar se observ en el modelo murino de artritis CIA
Cd19/ inmunizados con MOG cursan con mayores niveles (del ingls collagen induced arthritis) donde LB provenientes
de IFN- y de autoanticuerpos y sufren de una forma ms de ratones DBA/1 (ratn susceptible al desarrollo de CIA) en
agresiva de EAE. La transferencia adoptiva de LB de un ratn fase de remisin de la enfermedad, estimulados in vitro con
Cd19/ con EAE a ratones silvestres inmunizados con MOG un anticuerpo agonista para CD40 y transferidos adoptiva-
condujo a una EAE con mayores ndices de inamacin, des- mente a un ratn DBA/1, previnieron el desarrollo de la artritis.
mielinizacin y niveles aumentados de IFN- y menores de Por el contrario, la transferencia de LB de ratones DBA/1 Il-
IL-10, comparados con los ratones que no recibieron dicha 10/ no protegi al ratn de la induccin experimental de la
transferencia14 . Ratones C57BL/10.PL con deciencia de las enfermedad20 ; indicando que la produccin de IL-10 por parte
molculas de la familia B7 restringida a LB e inmunizados de los LB, similar a lo observado en el modelo de EAE, cum-
con MBP desarrollaron una EAE crnica sin remisin y con ple un papel en el control del desarrollo de la CIA y parece ser
menores niveles de transcripcin de IL-10 y Foxp3 en mdula dependiente de la estimulacin por CD40.
espinal15 . Estos resultados sugieren que molculas que par- En conjunto, estos estudios demostraron que los LB tienen
ticipan en la activacin del LB, como el CD19 y molculas la capacidad de regular las manifestaciones autoinmunes en
coestimuladoras implicadas en el contacto clula-clula como diferentes modelos murinos principalmente mediante la pro-
CD80/CD86, parecen ser importantes en la funcin reguladora duccin de IL-10. Adems, el uso de ratones decientes revel
de estos linfocitos. la importancia de molculas en esta funcin reguladora, como:
El papel regulador de los LB tambin se evidenci inicial- CD1d, TLR, MyD88, CD19, CD40, CD80 y CD86. Estas investiga-
mente en un modelo murino de colitis autoinmune, en el cual ciones iniciales tambin permitieron un mejor entendimiento
la transferencia pasiva de Ig de ratones silvestres (C57BL/6) de la funcin de las clulas B con capacidad reguladora (Breg),
no enfermos o de ratones C57BL/6 Tcr-/ (los cuales des- por ejemplo su accin sobre los LT CD4+ efectores que conlleva
arrollan espontneamente colitis) a ratones MT Tcr-/ (los a la menor produccin de citocinas proinamatorias como el
cuales desarrollan una inamacin an ms marcada) dis- TNF- y el IFN-14,19 y la induccin de los marcadores asocia-
minuy signicativamente la severidad de la colitis en estos dos con LT reguladores (Treg) IL-10 y Foxp3, los cuales tienen
animales16 . En este modelo de colitis, tambin se ha obser- un papel protector en el contexto de la autoinmunidad15,21
vado que los ratones Cd1d/ Tcr-/ desarrollan una forma (g. 1). Sin embargo, el desconocimiento de marcadores espe-
ms severa de la enfermedad. La transferencia adoptiva de LB ccos que permitieran la seleccin y diferenciacin clara de
de ratones Tcr-/ a ratones MTTcr-/ disminuy la ina- Breg de otras subpoblaciones de LB, condujo al desarrollo
macin del colon, lo que no ocurri con la transferencia de de diferentes trabajos que se encaminaron a una caracteri-
LB de ratones Tcr-/ Cd1d/ MHC-II/ , con los que se incre- zacin ms detallada de estas clulas en diferentes modelos
ment dicha inamacin. En este mismo estudio, el bloqueo murinos de enfermedad autoinmune.
de la IL-10 con un anticuerpo especco suprimi el efecto
benco observado con la transferencia de LB de ratones Tcr-
Subpoblaciones de clulas B con fenotipo
/ 17 . Estos resultados sugirieron que los LB tienen un papel
regulador en el ratn
protector y antiinamatorio en este modelo, en parte asociado
con la produccin de IL-10 y a la presencia de CD1d y MHC-II
as como de Ig. Se han descrito diversos marcadores de supercie para iden-
Evidencias de esta funcin reguladora de los LB tambin ticar las Breg de ratones, de los cuales hay algunos comunes
se encontraron en el modelo de ratones NOD (del ingls a las clulas B1 (CD1dhi CD5+ ), a las de zona marginal (ZM,
non-obese diabetic), los cuales desarrollan espontneamente CD1dhi CD23- IgMhi ) y a las transicionales 2 (T2, CD23+ IgMhi )
diabetes autoinmune. Se observ que la transferencia adop- (g. 2). Sin embargo, la fenotipicacin de Breg todava es con-
tiva de LB activados in vitro con lipopolisacrido (LPS) tuvo troversial dado que an se desconoce si existe una o varias
efectos protectores en el desarrollo de las manifestaciones clases o si las diferencias encontradas se deben a estadios
autoinmunes de estos ratones, tales como la inhibicin del de maduracin y diferenciacin dismiles. En resumen, en el
desarrollo de diabetes (> 80%), induccin de la produccin de modelo murino se han descrito al menos 2 clases de clulas B
TGF- y la presencia de 15-30 veces ms apoptosis de LT en con capacidad reguladora mediada por la produccin de IL-10
comparacin con la transferencia de LB no estimulados18 . Se (tabla 1).
encontr que la transferencia adoptiva de LB de ratn NOD
activados con anti-IgM a ratones en etapa de iniciacin de B10
diabetes (5 semanas) indujo un retardo en el desarrollo
de la enfermedad y una baja incidencia (30-40%) comparada En el ratn, los LB con fenotipo CD19+ CD5+ CD1dhi , tambin
con los controles (75%). Sin embargo, cuando esta transferen- llamados B10, son hasta el momento los LB reguladores ms
cia se hizo a ratones con diabetes ya establecida (9 semanas) estudiados, y han sido descritos como potentes productores
la incidencia de la enfermedad fue mayor (85-90%). El cocul- de IL-10, con capacidad de regular diferentes respuestas inmu-
tivo de LB de estos ratones estimulados con anti-IgM y LT CD4+ nes y de aminorar el progreso de los sntomas autoinmunes
estimulados con anti-CD3 llev a la produccin de altos niveles en modelos murinos. En ratones C57BL/6 se ha observado
de IL-4, IL-10 y bajos niveles de IFN- por parte de LT CD4+19 . que LB esplnicos estimulados durante 5 h con LPS, PMA (del
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a b
CD19 IFN-
BCR
TLR4/9 Th1
CD80/86 TNF-
CD1d ? MHC-II
LT IL-17
Breg Th17
CD5? CD4+
CD40
Treg IL-10
IL-10
Figura 1 Modelo de activacin y funcin general de las clulas Breg murinas. Un modelo de activacin y funcin de las
clulas B reguladoras de murinos, independientemente de la subpoblacin estudiada. a. La estimulacin va TLR, BCR, la
presencia de CD1d, CD5, CD19 y MHC-II, as como la coestimulacin por CD40 y CD80/86, se han implicado en la activacin
de las clulas Breg y en la produccin de IL-10 por parte de estas clulas. b. Las clulas Breg poseen la capacidad de inhibir
la proliferacin, la secrecin de citocinas proinamatorias por LT CD4+ , al igual que inhibir la diferenciacin de estas clulas
a los perles Th1 y Th17 y promover la conversin de LT CD4+ a Treg productores de IL-10 y aumentar la expresin de
Foxp3 en Treg previamente diferenciadas.
ingls phorbol 12-myristate 13-acetate) ms ionomicina (L + PI) medio de la insercin de la secuencia de la protena verde uo-
en presencia de monensina (L + PIM) producen ex vivo mayores rescente o de la molcula de supercie Thy1.1 corriente abajo
niveles de IL-10 comparados con clulas derivadas de ratones del promotor de la IL-10; que a la vez alteraba la secuencia del
Cd19/ . Los LB CD19+ CD5+ CD1dhi productores de IL-10 pro- gen de esta citocina y su posterior expresin. Se observ que
vienen principalmente del bazo y de la cavidad peritoneal de los ratones reporteros Il-10/ tenan una frecuencia similar
estos ratones22 . La estimulacin in vitro de LB con fenotipo B10 de clulas con fenotipo B10 a la de los ratones silvestres y que,
usando un anticuerpo especco para CD40 o LPS durante 48 h luego de 48 h de estimulacin con LPS in vitro expresaron la
y PIM en las 5 h nales condujo a que 4-5 veces ms clulas pro- protena verde uorescente o la molcula Thy1.1 en niveles
dujeran IL-1022,23 . Estos hallazgos sugirieron que existen tanto similares a los de los ratones silvestres. Las clulas B10 con el
linfocitos B10 con produccin rpida de IL-10 luego de la esti- gen de Il-10 alterado se diferenciaron en clulas plasmticas
mulacin ex vivo, as como otra poblacin denominada B10pro, productoras de anticuerpos (principalmente IgM), luego de 3
que adquirieren la competencia de producir IL-10 luego de ser das de estimulacin in vitro con LPS24 . La IgM se ha asociado
estimuladas in vitro (g. 3). con proteccin en autoinmunidad, mediante la disminucin
Se ha observado que las clulas B10 no requieren de la de carga antignica (clulas apoptticas) y evitando la activa-
produccin de IL-10 para su generacin y mantenimiento en
cin de senales proinamatorias a travs de los FcR25 .
periferia. Esto se evidenci en ratones C57BL/6 modicados El estudio de estas clulas B10 en la induccin de EAE
genticamente para servir como reporteros del gen Il-10 por en ratones inmunizados con MOG mostr que los animales
membrana
Mecanismo de Dependiente de IL-1026,2830 , B715 , Dependiente de IL-103133 , B715 ,
Regulacin CD1914,2629 , CD4027 CD1914
Estmulos LPS + PIM22,24 , LPS22,23 , CpG46 , CpG + PIM34 , LPS31 ,
activadores anti-CD40 + L + PIM22,23 anti-IgM + PIM3133 ,
anti-CD40 + PIM34
Efectos observados - Disminucin de LT CD4+ IL-17+30 - Disminucin de LT
- Reduccin en la produccin de CD4+ IL-17+32,33
IFN- y TNF- por parte de los LT - Reduccin en la produccin de
CD4+26,30 IFN- y TNF- por parte de los LT
- Aumento de LT CD4+31,34
CD4+ CD25+ Foxp3+28 - Aumento de LT
CD4+ CD25+ Foxp3+32,33
Modelos donde se EAE26,27 , colitis29 , CIA30 , lupus CIA31 , AIA32,33 , lupus murino34
han estudiado murino28
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Ag Ag CD80
CD40
IL-21r BCR IL-21r BCR Produccin /86
de IL-10 y MHC-II Produccin
IL-21r
presentacin clulas B10
B10pro B10 B10 B10 B10
B Produccin Produccin
de IL-10 IL-21r clulas B10
TLR4 TLR4
In vitro
CD40
LPS LPS
PIM
anti-CD40 IL-21
IL-10 IL-10
IL-10
Estmulo por 48 horas Estmulo por 5 horas Adicin de IL-21
Figura 3 Modelo de activacin de clulas B10 en ratones. a. Se presenta un modelo de activacin de las clulas B10 in vivo.
Hasta el momento, se desconoce el mecanismo por el cual las clulas B10pro adquieren la competencia de producir IL-10
in vivo. Sin embargo, se postula que estas clulas reconocen el antgeno (Ag) a travs de su BCR, lo internalizan, lo procesan
y lo presentan al LT CD4+ va MHC-II. El LT activado expresa el CD40L que al unirse a su ligando induce la produccion de
IL-10 por parte de estos LB. Dependiendo del microambiente y de las senales coestimuladoras, el LT CD4+ podra secretar
IL-21 que induce la proliferacin de las clulas B10 y la secrecin de ms IL-10. b. Se presenta un modelo de activacin de
las clulas B10 in vitro. La estimulacin in vitro con un anticuerpo agonista anti-CD40 o LPS durante 48 h conduce a las
clulas B10pro a diferenciarse a clulas B10 y, luego de una estimulacin durante 5 h con L + PIM producen IL-10. La adicin
de IL-21 al medio lleva a un incremento sustancial en la proliferacin de B10 y a la produccin de IL-10.
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menor supervivencia y presentan manifestaciones ms seve- DBA/1, como clulas productoras de IL-10 en respuesta a la
ras de la enfermedad, as como dano renal marcado y estimulacin in vitro con LPS o anti-IgM (g. 4). En este estudio
glomerulonefritis severa, en comparacin con los ratones sil- se observ que la transferencia adoptiva de LB T2-MZP prove-
vestres. En estos ratones Cd19/ se observ una disminucin nientes de ratones en fase de remisin de la CIA a ratones en
signicativa en el nmero y frecuencia de clulas con fenotipo el da de la inmunizacin con colgeno tipo ii disminuy las
B10 y en la produccin de IL-10 por parte de LB esplnicos. La manifestaciones autoinmunes, reduciendo en un 60% el inl-
transferencia adoptiva de linfocitos B10 de ratones silvestres trado celular y minimizando el dano en el cartlago de estos
a un ratn Cd19/ disminuy la severidad de la enfermedad ratones. La transferencia de LB de ZM y foliculares (FO) de rato-
y aument el nmero de LT CD4+ CD25+ Foxp3+ productores nes silvestres o de LB T2-MZP de ratones Il-10/ no mostr el
de IL-10, comparado con la transferencia de clulas no-B1028 . efecto regulador. El cocultivo de LB junto con LT CD4+ en pre-
Estos resultados sugieren que las clulas B10 tienen un papel sencia de colgeno tipo ii mostr que las clulas T2-MZP, pero
regulador de la progresin del lupus y que los mecanismos no las ZM o FO, inhibieron la produccin de IFN- por parte
efectores que emplean estas clulas pueden deberse al menos de los LT31 . Estos hallazgos sugirieron que los LB T2-MZP son
en parte a la conversin de LT CD4+ a un perl regulador. clulas reguladoras y que requieren de la produccin de IL-10
Los ratones C57BL/6 silvestres sufren de inamacin intes- para ejercer su funcin.
tinal cuando se les administra DSS (del ingls dextran sulphate La transferencia adoptiva de LB T2-MZP provenientes de
sodium) y adems, cuando son decientes de Cd19 sufren de ratones C57BL/6 silvestres en remisin de AIA (del ingls
una enfermedad ms severa. Se encontr que los ratones sil- adjuvant-induced arthritis) a ratones Il-10/ previamente
vestres tuvieron una clara expansin de linfocitos B10 luego inmunizados con mBSA (del ingls methylated bovine serum
del tratamiento con DSS, mientras que en los ratones Cd19/ albumin) para inducir AIA llev a un aumento en la propor-
se encontr ausencia de estas clulas y no hubo produccin de cin de LT CD4+ Foxp3+ en los ndulos linfticos (a 14,3% a
IL-10 por parte de los LB en respuesta al LPS ms ionomicina. partir de un 8,03% del total de LT). En el mismo estudio, se
La transferencia adoptiva de clulas B10 de ratones silvestres encontr que la frecuencia de LT CD4+ IFN-g+ y LT CD4+ IL-17+
a ratones Cd19/ antes de la induccin de la inamacin con disminuy con la transferencia adoptiva de LB T2-MZP de rato-
DSS redujo la severidad de la enfermedad, mientras que la nes silvestres pero no cuando est subpoblacin provino de
transferencia de clulas B10 a partir de ratones Il-10/ no ratones Il-10/ . El cocultivo de LT CD4+ CD25 y LB T2-MZP de
tuvo dicho efecto29 . Estos hallazgos muestran la importancia ratones silvestres en presencia de mBSA, evidenci la diferen-
de estas clulas en la regulacin de la inamacin intestinal, ciacin de estos LT a clulas Foxp3+ (20,3% del total de LT), en
mediada principalmente por la produccin de IL-10. contraste con el uso de LB de Il-10/ (0,84%)32,33 . Estos resul-
En un modelo de CIA se observ que la transferencia adop- tados muestran que las Breg T2-MZP tienen la capacidad de
tiva de clulas B10 a ratones DBA/1 inmunizados con colgeno inducir la diferenciacin de LT CD4+ efectores en Treg y sugie-
tipo ii disminuy signicativamente el desarrollo de artritis ren que estas Breg pueden regular el balance entre los perles
y redujo la frecuencia de LT Th17, mientras que el uso de Th1-Th17/Treg.
linfocitos con fenotipo B10 provenientes de ratones Il-10/ Se ha determinado que los LB T2-MZP de ratones MRL/lpr,
no mostr el efecto regulador30 . Esta evidencia sugiere que los cuales desarrollan espontneamente una enfermedad tipo
las clulas B10 tienen la capacidad de regular los LT con per- LES, producen IL-10 al ser estimulados in vitro con anti-CD40
l proinamatorio Th17 presentes por lo menos en algunas (g. 4). El cocultivo de estas clulas T2-MZP previamente acti-
enfermedades autoinmunes. vadas con un agonista del CD40 junto con LT CD4+ CD25
En resumen, los datos que se tienen hasta el momento estimulados con anti-CD3, inhibi la produccin de TNF-
demuestran claramente la existencia de clulas con fenotipo e IFN- por parte de estos LT. La transferencia adoptiva de
B10 productoras de IL-10, las cuales estn implicadas en la las clulas T2-MZP a ratones MRL/lpr disminuy signicati-
regulacin de diversos modelos murinos de enfermedades vamente los niveles de proteinuria, la inltracin glomerular
autoinmunes como AR, esclerosis mltiple, LES y colitis. Esta e intersticial, as como la mortalidad de estos ratones, en com-
regulacin es mediada principalmente por la IL-10 y depende paracin con la transferencia de LB FO o de MZ34 .
de la presencia de mltiples molculas como CD19, CD1d, En sntesis, las clulas T2-MZP murinas han mostrado un
CD40, CD80, CD86, MHC-II e IL-21R; estas clulas tiene la papel regulador en modelos de enfermedades autoinmunes
capacidad de reducir la frecuencia de LT de los perles proin- como la AR y LES, principalmente mediante la produccin
amatorios Th1 y Th17, as como promover el aumento de Treg de IL-10 desencadenada mediante la estimulacin del CD40.
(gs. 1 y 3). Similar a lo reportado para las clulas B10, las T2-MZP tambin
reducen la proporcin de LT de los perles proinamatorios
Clulas transicionales 2 precursoras de clulas de zona Th1 y Th17 e inducen un aumento en los LT reguladores
marginal CD4+ CD25+ Foxp3+ productores de IL-10.
LT
A
In vivo
Ag CD80
CD40
BCR /86
Presentacin MHC Produccin
IL-10
Antignica de IL-10
T2-MZP T2-MZP T2-MZP
Produccin
B TLR4/9 de IL-10 IL-10
BCR
CD40
In vitro
LPS/CpG
PIM
anti-IgM
anti-CD40
Figura 4 Modelo de activacin de clulas T2-MZP en ratones. a. Se presenta un modelo de activacin de los LB T2-MZP
reguladores in vivo. Se desconocen las senales que llevan a la produccin in vivo de IL-10 por parte de las clulas T2-MZP,
pero se cree que estas clulas Breg reconocen el antgeno va BCR, lo internalizan, lo procesan y lo presentan al LT CD4+ por
medio del MHC-II. El LT activado expresa CD40L, que al unirse a su ligando induce la produccin de IL-10 en estos LB. b. Se
presenta un modelo del funcionamiento de los LB T2-MZP reguladores in vitro. La estimulacin con un anticuerpo agonista
anti-IgM o anti-CD40 o LPS/CpG durante 48 h y posteriormente con PIM durante las 4-8 h nales, lleva a la produccin de
IL-10 por parte de los LB T2-MZP.
se desconoce si algunas de estas clulas son de una misma signicativo en la expresin de Foxp3 y de CTLA-4 en estos
subclase o si por el contrario existen como subgrupos diferen- Treg; mientras que el uso del receptor soluble de IL-10 no
ciados de Breg. afect dicho incremento, sugiriendo un efecto de estas Breg
independiente de IL-10. Adems, mediante el cocultivo de
estos linfocitos separados por una membrana, se encontr que
Linfocitos B CD19+ CD25+
las clulas Breg inducen la expresin de Foxp3 y de CTLA-4
de una forma dependiente de contacto36 . Como se ver ms
Se ha observado que los LB humanos CD19+ CD25+ provenien-
adelante, el fenotipo anteriormente descrito referente a la
tes de sangre perifrica de personas sanas producen ms
expresin de CD1d tiene similitud con otras clulas Breg repor-
IL-10 y menos IL-2 en respuesta a CpGs en comparacin
tadas, por lo que es posible que se trate de subpoblaciones
con las clulas CD19+ CD2535 . Recientemente se report la
equivalentes; sin embargo, se requieren otros estudios para
existencia de unos LB de sangre perifrica con un fenotipo
resolver esta incgnita.
regulador CD25hi CD27hi CD86hi CD1dhi , productores de altos
niveles de IL-10 y TGF-. En este estudio se observ, adems,
una menor proliferacin de LT CD4+ estimulados con anti-CD3 Linfocitos B CD19+ CD24hi CD38hi
cuando estos eran cocultivados con LB que exhiban el feno-
tipo anteriormente mencionado, comparado con el cocultivo Se ha reportado que los LB de sangre perifrica de individuos
empleando LB CD25low . El cocultivo de LB CD19+ CD25+ con sanos con fenotipo CD19+ CD38hi CD24hi son productores de IL-
linfocitos Treg (CD4+ CD25hi Foxp3+ ) en presencia de la pro- 10 y tienen capacidad reguladora sobre LT. Estas Breg poseen
tena recombinante CD40L, CpG e IL-4 indujo un aumento el fenotipo IgMhi IgDhi CD5+ CD10+ CD20+ CD27 CD1dhi , similar
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a los LB T2 humanos. Se encontr que estas clulas estimu- en nmero como en funcin de las clulas Breg que podran
ladas va CD40 suprimieron la produccin de TNF- e IFN- estar involucradas en la siopatologa de la enfermedad.
pero no de IL-17 por LT CD4+ , as como parte de la prolifera-
cin de estas clulas en respuesta al anti-CD3. La adicin de Linfocitos B CD19+ CD24hi CD27+
un anticuerpo anti-IL-10 as como el bloqueo de la coestimula-
cin mediada por CD80 y CD86 evit que estas Breg inhibieran Similar a las clulas B10 murinas, los LB CD24hi CD27+ (B10
la proliferacin de LT CD4+ , pero se sigui observando el blo- humanos) aislados de sangre perifrica de humanos y estimu-
que en la produccin de TNF- e IFN-. Contrariamente, el lados con LPS y anti-CD40 producen cantidades importantes
bloqueo de la interaccin CD40-CD40L impidi que las Breg de IL-10. Las clulas B10 humanas productoras ex vivo de IL-10
suprimieran la proliferacin de LT, pero no se observ efecto representan el 0,6% del total de LB en sangre perifrica, pero
sobre la produccin de IFN- y TNF-37,38 . Estos datos sugie- su frecuencia aumenta a 12,1% luego de la estimulacin in vitro
ren que la regulacin mediada por estas clulas Breg requiere, con LPS y anticuerpo agonista para CD40. Esto indica que los LB
por una parte, de IL-10 y la coestimulacin va CD80/86 para CD24hi CD27+ pueden capacitarse para la produccin de IL-10,
inhibir la produccin de citocinas proinamatorias, y por otra, semejante a lo observado con las clulas B10pro de murinos41 .
de la coestimulacin del CD40 para inhibir la proliferacin de Se ha observado que las clulas B10 humanas tratadas con
LT. CpG y anti-CD40 regulan negativamente la produccin de
En pacientes con LES se ha encontrado que la proporcin TNF- por parte de LT CD4+ estimulados con anti-CD3. El
de estas clulas Breg est aumentada (15% del total de LB) cocultivo de estas clulas B10 con monocitos circulantes tam-
en comparacin con controles sanos y con pacientes con sn- bin redujo la produccin de TNF- por parte de estas clulas.
drome de Sjgren y osteoartritis (10%). A pesar del nmero Mediante el uso de un anticuerpo especco para IL-10 en
elevado en LES, se ha observado que estas clulas son inca- estos experimentos, se observ que la inhibicin mediada por
paces de suprimir la produccin de TNF- e IFN- por parte estas clulas Breg es independiente de esta citocina para LT
de LT CD4+ estimulados con anti-CD3, mientras que las clu- CD4+ pero dependiente de ella para los monocitos41,42 . Estas
las de individuos sanos as como de pacientes con sndrome clulas B10 humanas se han caracterizado con los marcadores
de Sjgren y osteoartritis s lo hacen37 . Las clulas Breg de CD19hi CD38hi CD1dhi CD20hi CD21hi CD23hi CD24hi CD25hi CD27hi41 .
pacientes con LES estimuladas con un anticuerpo agonista de Se ha reportado un aumento en la frecuencia de estas
CD40 tuvieron una produccin signicativamente menor clulas B10 en sangre perifrica de pacientes con LES, AR
de IL-10 en comparacin con controles sanos, sin que se y sndrome de Sjgren (2,4; 2,3 y 1,6%, respectivamente)
observara en los pacientes defectos en el nivel de expresin en comparacin con individuos sanos (0,7%) y pacientes con
de esta molcula coestimuladora37 . Estos resultados sugie- esclerosis mltiple (0,8%). No obstante, la frecuencia de LB con
ren alteraciones en la senalizacin de CD40 en las clulas el fenotipo B10pro en mononucleares estimulados con CpG y
Breg de los pacientes con LES, lo cual podra explicar en PIB (de su sigla en ingls phorbol ester and ionomycin plus BFA)
parte las alteraciones en la tolerancia que presentan estos se encontr signicativamente aumentada en pacientes con
pacientes. LES (21%), AR (20%), sndrome de Sjgren (17%) y esclerosis
Otro estudio report que la supresin mediada por esta mltiple (9%) en comparacin con individuos sanos (4%)41 .
clase de Breg se encuentra defectuosa en pacientes con LES; Asimismo, se ha reportado que el porcentaje de estas clu-
la proliferacin de LT estimulados con anti-CD3 fue regu- las Breg est disminuido signicativamente en pacientes con
lada negativamente por las clulas Breg de pacientes con AR enfermedad de Graves en comparacin con individuos sanos
y sndrome de Sjgren y no por las Breg de pacientes con y que dichos niveles se normalizan luego del tratamiento con
LES38 . Se ha encontrado que pacientes con AR tratados metimazol. Las clulas Breg de pacientes con enfermedad de
con anti-CD20 (rituximab), un anticuerpo que reduce signi- Graves activa produjeron menores niveles de IL-10 y fueron
cativamente las poblaciones de LB (en un 97%), repueblan su incapaces de inhibir la produccin de TNF- e IFN- por parte
sangre perifrica con LB CD27 e IgD+ , los cuales presentan de LT CD4+ , comparados con controles sanos42 .
un incremento en la expresin de CD38 y CD539 , sugiriendo
que la mejora clnica observada en los pacientes luego del
uso de rituximab podra asociarse con un incremento de LB Conclusiones y perspectivas
con fenotipo regulador. Sin embargo, se requieren estudios
adicionales que permitan sacar conclusiones denitivas al La caracterizacin que se tiene hasta el momento de las Breg
respecto. independiente de la produccin de IL-10 no permite una de-
Las clulas Breg CD19+ CD38hi CD24hi de sangre perifrica de nicin precisa y exacta de estas clulas, ya que los marcadores
individuos sanos indujeron en LT CD4+ CD25+ estimulados con de membrana utilizados se comparten con otras poblacio-
anti-CD3 un perl regulador productor de IL-10 e inhibieron la nes de LB que no poseen propiedades reguladoras y/o poseen
diferenciacin de estos linfocitos a los perles Th1 y Th17. Sin caractersticas de clulas inmaduras (g. 2). Por lo tanto, se
embargo, las clulas Breg de pacientes con AR fueron inca- requiere de estudios que permitan denir mejor el fenotipo
paces de inducir dicho fenotipo regulador y de inhibir el perl de estas clulas. Algo similar ocurre con los mecanismos fun-
Th17, pero conservaron la capacidad de bloquear la diferencia- cionales, ya que an son controversiales los elementos que
cin a Th140 . Tambin se observ que pacientes con AR activa participan en la regulacin mediada por estas clulas; por
tenan un menor nmero de Breg circulantes comparado con ejemplo, se desconoce cul es el papel de la presentacin
individuos sanos y con AR inactiva40 . Estos resultados mues- antignica y la expresin de molculas como FasL, TRAIL (del
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