NMX-AA-026-SCFI-2001

ANALISIS DE AGUA DETERMINACION DE NITROGENO TOTAL KJELDAHL

EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS
METODO DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX AA 026 1980)

EQUIPO Y MATERIALES
Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para el
presente

Mtodo.

5.1 Equipo

5.1.1 Para determinacin de nitrgeno tipo Kjeldahl que consta de: Digestor
con

Sistema de extraccin de humos y destilador con sistema de condensacin

Para mantener la temperatura por abajo de 29C.

5.1.2 Potencimetro para medicin de pH reproducible hasta 0,02 unidades de

pH, con compensador de la temperatura y sus respectivos electrodos.

5.1.3 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

5.1.4 Balanza granataria con precisin de 0,1 g

5.2 Materiales
Todo el material usado en esta determinacin debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una
disolucin de cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua desionizada. Los
detergentes con base de hidrxido de amonio o amoniaco no deben usarse
para la limpieza del material. Su uso debe restringirse dentro del laboratorio.

Todo el material volumtrico utilizado en este mtodo debe ser clase A con
certificado o en su caso debe estar calibrado.

5.2.1 Frasco de polietileno o vidrio con tapa de 2 L de capacidad

5.2.2 Matraz tipo Kjeldahl de 800 mL

5.2.3 Bureta
6 RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE
MUESTRAS
6.1 Deben tomarse un mnimo de 2,0 L de muestra en un envase de polietileno.
Pueden utilizarse muestras compuestas o simples.

6.2 Debe preservarse la muestra con cido sulfrico a un pH de 1,5 a 2,0.

Posteriormente mantener a 4C hasta su anlisis.

6.3 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 7 das.

9 PROCEDIMIENTO
9.1 Limpiar el equipo de destilacin antes de utilizarlo, destilando una mezcla
(1:1) agua-disolucin hidrxido - tiosulfato de sodio (ver inciso 4.20) hasta que
el destilado est libre de amonio. Repetir esta operacin cada vez que el
equipo se vaya a utilizar, si no se emplea en intervalos de menos de 4 h
tambin se requiere realizar esta operacin.

9.2 Seleccin de volumen de muestra: Determinar el volumen de la muestra de

acuerdo a la tabla 1, si es necesario, ajustar el volumen aproximadamente
500mL y neutralizar a pH 7. Colocar la muestra medida en un matraz Kjeldahl
de 800 mL.

TABLA 1.- Seleccin del volumen de muestra

9.3 Nitrgeno amoniacal

9.3.1 Tomar una muestra dependiendo de las concentraciones esperadas, de

acuerdo a la tabla 1 diluir con agua hasta 500 mL. Preparar un blanco con
500mL de agua y darle el mismo tratamiento que a la muestra como sigue:

9.3.2 Aadir 25 mL de la disolucin amortiguadora de boratos (ver inciso 4.15)

y ajustar el pH a 9,5 con disolucin de hidrxido de sodio 6 N (ver inciso 4.21)
utilizando potencimetro o papel indicador para verificar. Transferir la disolucin
a un matraz Kjeldahl y aadir unas cuentas de vidrio o perlas de ebullicin.

9.3.3 Conectar el matraz Kjeldahl al bulbo del aparato de destilacin, destilar la

muestra cuidando que la temperatura del condensador no pase de 302 K
(29C), recolectando el condensado con la punta del tubo del refrigerante
sumergido en 50 mL de la disolucin amortiguadora de boratos (ver inciso
4.15).

9.3.4 La destilacin se completa cuando se hayan recolectado 300 mL de

destilado aproximadamente, incluyendo los 50 mL de la disolucin
amortiguadora de Boratos (ver inciso 4.15) con la disolucin mezcla de
indicadores (ver inciso 4.18).

9.3.5 Retirar el matraz colector y titular con solucin de cido sulfrico 0,02 N
hasta que la solucin vire de un verde esmeralda a morado.

9.4 Nitrgeno orgnico

9.4.1 Enfriar el residuo contenido en el matraz Kjeldahl. Digestin: Adicionar

cuidadosamente 50 mL de reactivo para la digestin (ver inciso 4.19) al matraz
de destilacin y mezclar perfectamente. Aadir unas cuentas de vidrio o piedras
de ebullicin. Si se encuentran presentes grandes cantidades de materia
orgnica libre de nitrgeno adicionar 50 mL de reactivo de digestin por cada
gramo de materia slida en la muestra. Mezclar y calentar a ebullicin bajo una
campana de extraccin, (eliminar los vapores de SO3) hasta que el volumen de
la disolucin se reduzca aproximadamente entre 25 mL y 50 mL y se observe
gran desprendimiento de vapores blancos (estos vapores pueden oscurecerse
cuando la muestra presenta grandes cantidades de materia orgnica).

Continuar la digestin durante 30 min ms. En este perodo, la disolucin

cambia de turbia hasta ser transparente e incolora o con una ligera coloracin
amarillo plido. Durante la digestin el matraz Kjeldahl debe permanecer
inclinado. Enfriar el matraz y su contenido, diluir a 300 mL con agua y mezclar.

9.4.2 Cuidadosamente aadir 50 mL de la disolucin de hidrxido-tiosulfato de

sodio (ver inciso 4.20), para formar una capa alcalina en el fondo del matraz,
conectar el matraz a un equipo de destilacin y sumergir la punta del
condensador en un matraz que contenga 50 mL de disolucin de cido brico
(ver inciso 4.13) y la mezcla de indicadores por abajo del nivel de esta
disolucin. Agitar hasta asegurarse que est completamente mezclado, el pH
de la disolucin debe ser mayor a 11,0.

9.5 Destilacin

Destilar y colectar aproximadamente 200 mL de destilado, no permitir que la

temperatura en el condensador suba por arriba de 29C. Cuando se alcance un
volumen aproximado de 250 mL en el matraz colector del destilado, sacar la
punta del condensador del destilado sin retirarlo del matraz y continuar la
destilacin durante 1 min o 2 min para limpiar el condensador.

9.6 Titulacin del destilado

Titular el volumen destilado con disolucin valorada de cido sulfrico 0,02 N
(ver inciso 4.17) hasta el cambio del indicador de verde esmeralda a morado.

9.7 Blanco

Llevar un blanco durante todos los pasos del mtodo.

10. CLCULOS
10.1 Usar la siguiente ecuacin para calcular la concentracin de nitrgeno
total

(Nt): mg Ntk / L = (A-B) (N) (14) (1 000) / V

mg NH3-N/ L = (A-B) (N) (14) (1 000) / V

mg N-ORG/ L = (A-B) (N) (14) (1 000) / V

mg Ntk / L - = mg NH3-N/ L+ mg N-ORG/ L

Donde:

A: son los mL de cido sulfrico gastados en la titulacin de la muestra;

B: son los mL de cido sulfrico gastados en el blanco;

N: es la normalidad del cido sulfrico;

V: son los mL de muestra, y

14: es el peso equivalente del nitrgeno.

11. INTERFERENCIAS
11.1 Nitratos: Durante la digestin, el nitrato en concentraciones por arriba de
10 mg/L puede oxidar parte del amoniaco liberado produciendo N2O y dando
lugar a una interferencia negativa. Cuando se encuentre presente materia
orgnica reductora, el nitrato puede reducirse a amoniaco, resultando una
interferencia positiva.

11.2 Durante la digestin, puede haber prdidas de nitrgeno por pirlisis.

11.3 Materia orgnica: Durante la digestin, el H2SO4 oxida la materia orgnica

a CO2 y H2O. Si estuviera presente una gran cantidad de materia orgnica, se
consume mucho cido, aumentar la proporcin de sal-cido y aumentar la
temperatura de digestin.

11.4 Dado que los reactivos pueden contener trazas de amoniaco, trate el
blanco de reactivos igual que las muestras.
NMX-AA-028-SCFI-2001
ANLISIS DE AGUA - DETERMINACIN DE LA DEMANDA BIOQUMICA DE
OXGENO EN AGUAS NATURALES, RESIDUALES (DBO5) Y RESIDUALES
TRATADAS - MTODO DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-028-1981)

5 REACTIVOS Y PATRONES
Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado
reactivo, a menos que se indique otro grado.

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.;

b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.

5.1 Fosfato monobsico de potasio (KH2PO4)

5.2 Fosfato dibsico de potasio (K2HPO4)

5.3 Fosfato dibsico de sodio heptahidratado (Na2HPO47H2O)

5.4 Cloruro de amonio (NH4Cl)

5.5 Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO47H2O)

5.6 Cloruro de calcio anhidro (CaCl2)

5.7 Cloruro frrico hexahidratado (FeCl36H2O)

5.8 cido sulfrico concentrado (H2SO4)

5.9 Hidrxido de sodio (NaOH)

5.10 Sulfito de sodio (Na2SO3)

5.11 2-cloro-6 (triclorometil) piridina

5.12 Glucosa grado patrn primario (C6H12O6)

5.13 cido glutmico grado patrn primario(C5H9NO4)

5.14 cido clorhdrico (HCl)

5.15 Acido ntrico (HNO3)

5.16 Disolucin amortiguadora de fosfato. Pesar aproximadamente 8,5 g de

fosfato monobsico de potasio (ver inciso 5.1), 21,75 g de fosfato dibsico de
potasio (ver inciso 5.2), 33,4 g de sosfato dibsico de sodio heptahidratado (ver
inciso 5.3) y 1,7 g de cloruro de amonio (ver inciso 5.4), disolver en 500 mL de
agua y aforar a 1 L. El pH de la disolucin debe ser de 7,2. Desechar el
reactivo (o cualquiera de los siguientes reactivos) si hay algn signo de
crecimiento biolgico en el frasco de almacenamiento.

5.17 Disolucin de sulfato de magnesio. Pesar aproximadamente 22,5 g de

sulfato de magnesio heptahidratado (ver inciso 5.5), disolver en agua y diluir a
1 L.

5.18 Disolucin de cloruro de calcio. Pesar aproximadamente 27,5 g de cloruro

de calcio anhdro (ver inciso 5.6), disolver en agua y diluir a 1 L.

5.19 Disolucin de cloruro frrico. Pesar aproximadamente 0,25 g de cloruro

frrico hexahidratado (ver inciso 5.7), disolver en agua y diluir a 1 L.

5.20 Disolucin de cido sulfrico (0,1N). Agregar aproximadamente 2,8 mL de

cido sulfrico concentrado (ver inciso 5.8) a 500 mL de agua, mezclar bien y
diluir hasta 1 L.

5.21 Disolucin de hidrxido de sodio (0,1N). Pesar aproximadamente 4,0 g de

hidrxido de sodio (ver inciso 5.9), disolver en agua y diluir a 1 L.

5.22 Disolucin de sulfito de sodio. Pesar aproximadamente 1,575 g de sulfito

de sodio (ver inciso 5.10), disolver en agua y diluir a 1 L. Esta disolucin no es
estable; por lo que debe prepararse diariamente.

5.23 Disolucin patrn de glucosa-cido glutmico. Secar glucosa y cido

glutmico a 103C durante una hora. Pesar aproximadamente y con precisin
150,0 mg de glucosa (ver inciso 5.12) y 150,0 mg de cido glutmico (ver inciso
5.13), diluir en agua y aforar a 1 L. Preparar inmediatamente antes de usarla.
Esta disolucin tiene una DBO5 de 198 mg/L.

5.24 Disolucin de cloruro de amonio. Pesar aproximadamente 1,15 g de

cloruro de amonio (ver inciso 5.4) y disolver en 500 mL de agua, ajustar el pH a
7,2 con disolucin de hidrxido de sodio (ver inciso 5.21) y aforar a 1 L. La
disolucin contiene 0,3 mg N/mL.

6 EQUIPO Y MATERIALES

6.1 Equipo

6.1.1 Equipo de aireacin con difusor

6.1.2 Incubador: Controlado por termostato a 20C 1C. Eliminar toda la luz
para evitar la posibilidad de produccin fotosinttica de oxgeno disuelto.

6.1.3 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg

6.1.4 Medidor de oxgeno disuelto

6.2 Material Limpieza del material.

6.2.1 Todo el material usado en la determinacin debe ser exclusivo para este
procedimiento. Para el lavado del material remojar durante 1 h en una
disolucin de cido sulfrico al 10 % y enjuagar con agua. Los detergentes con base
de amoniaco no deben usarse para la limpieza del material.

6.2.2 Los contenedores de las muestras deben lavarse con disolucin de detergente
no inico, libre de metales, enjuagarse con agua, remojarse en cido toda la noche y
volver a enjuagarse con agua libre de metales.

6.2.3 Para el material de cuarzo, politetrafloroetileno o material de vidrio debe dejarse

remojando de 12 h a 24 h con HNO3 (1:1), HCl (1:1) o con agua regia (3 partes de HCl
concentrado + 1 parte de HNO3 concentrado) a 70C solo en los casos que presente
material adherido, despus debe ser enjuagado con agua libre de metales.

6.2.4 En los casos de que el material presente grasas, enjuagar con acetona y/o
hexano.

6.2.5 Botellas Winkler de vidrio para incubacin con capacidad de 300 mL de aforo
total y con boca estrecha, reborde y tapn de vidrio esmerilado, de forma cnica.

6.2.6 Contratapa de politetrafloroetileno u otro material plstico para botella Winkler

6.2.7 Bureta

7 RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE

MUESTRAS

7.1 En el caso de aguas naturales debe tomarse un mnimo de 1 L de muestra

en un envase de polietileno o vidrio. En el caso de aguas residuales (DBO5
mayores a 50 mg/L) deben tomarse mnimo 100 mL. Pueden utilizarse
muestras simples o compuestas.

7.2 No se debe agregar ningn preservador a las muestras. Solo deben

conservarse a 4C hasta su anlisis.

7.3 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 24 h.

10 PROCEDIMIENTO

10.1 Preparacin de agua para dilucin 1 mL de cada una de las siguientes

disoluciones: disolucin de sulfato de magnesio (ver inciso 5.17), disolucin de
cloruro de calcio (ver inciso 5.18), disolucin de cloruro frrico (ver inciso 5.19)
y disolucin amortiguadora de fosfatos (ver inciso 5.16). Preparar el agua de
dilucin diariamente.

Analizar y almacenar el agua de dilucin como se describe en los incisos 10.2 y

10.3, de tal forma que siempre tenga a mano agua de calidad garantizada.
Antes de usar el agua de dilucin debe ponerse a una temperatura aproximada
de 20C. Saturar con oxgeno aireando con aire filtrado, libre de materia
orgnica durante 1 h por lo menos.
Si la muestra presenta alto contenido de biocidas como cloro o se sabe de su
bajo contenido de materia orgnica, es necesario inocular la muestra. Si se
requiere, sembrar el agua de dilucin como se indica en el inciso 10.4.1.

10.2 Control del agua de dilucin

10.2.1 Utilizar este procedimiento como una comprobacin aproximada de la

calidad del agua de dilucin. Si la disminucin de oxgeno disuelto del agua
excede de 0,2 mg/L, obtener agua de mejor calidad mejorando la purificacin o
usar agua de otra fuente. Alternativamente si se requiere inhibir la nitrificacin,
almacenar el agua de dilucin sembrada en una habitacin oscura a
temperatura ambiente hasta que la captacin de oxgeno disuelto se haya
reducido lo suficiente para cumplir los criterios de comprobacin del agua de
dilucin. No se recomienda su almacenamiento cuando la DBO5 se va a
determinar sin inhibir la nitrificacin ya que pueden desarrollarse
microorganismos nitrificantes durante ese tiempo. Si el agua de dilucin no ha
sido almacenada para mejorar su calidad, aadir suficiente inculo como para
un consumo de OD de 0,05 mg/L a 0,1 mg/L en cinco das a 20C. Al Incubar
en un frasco Winkler lleno de agua de dilucin durante cinco das a 20C, el
consumo no debe ser mayor a 0,2 mg/L y preferiblemente no menor a 0,1
mg/L.

10.3 Control de la glucosa-cido glutmico

Comprobar en cada lote analtico la calidad del agua de dilucin, la efectividad

del inculo y la tcnica analtica mediante determinaciones de la DBO5 en
muestras estndar de concentracin conocida. Utilizar la disolucin de glucosa-
cido glutmico (ver inciso 5.23) como disolucin madre de control. La glucosa
tiene una tasa excepcionalmente alta y variable de oxidacin, pero cuando se
utiliza con cido glutmico, dicha tasa se estabiliza y es similar a la obtenida en
muchas aguas residuales municipales. Alternativamente, si un agua residual
particular contiene un componente principal identificable que contribuya a la
DBO5, utilizar este compuesto en lugar de la glucosa-cido glutmico.
Determinar la DBO5 de una disolucin al 2 % de la disolucin de control patrn
de glucosa-cido glutmico utilizando las tcnicas expuestas en los incisos
10.4 a 10.10.

10.4 Inculo

10.4.1 Fuente de la siembra

10.4.1.1 Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaces

de oxidar la materia orgnica biodegradable de la muestra. El agua residual
domstica, los efluentes no clorados o sin desinfeccin, los efluentes de las
plantas de tratamiento de desechos biolgicos y las aguas superficiales que
reciben las descargas de aguas residuales que contienen poblaciones
microbianas satisfactorias. Algunas muestras no contienen una poblacin
microbiana suficiente (por ejemplo, algunos residuos industriales no tratados,
residuos desinfectados, residuos de alta temperatura o con valores de pH
extremos).
Para tales residuos, sembrar el agua de dilucin aadiendo una poblacin de
microorganismos. La mejor siembra es la que proviene del efluente de un
sistema de tratamiento biolgico de aguas residuales. Cuando se usa como
siembra el efluente de tratamiento biolgico de sistema de aguas residuales se
recomienda la inhibicin de la nitrificacin. Cuando no se disponga de sta,
utilizar el sobrenadante del agua residual domstica despus de dejarlo
reposar a temperatura ambiente durante al menos 1 h, pero no ms de 36 h.
Determinar si la poblacin existente es satisfactoria haciendo la prueba de la
siembra en una muestra para DBO5. El incremento del valor de la DBO5 indica
una siembra exitosa.

10.5 Control del inculo

Determinar la DBO5 del material de siembra como para cualquier otra muestra.
Esto es una siembra control. A partir de este valor y de uno conocido de la
dilucin del material de siembra (en el agua de dilucin) determinar el consumo
de OD de la siembra. Lo ideal es hacer disoluciones tales de la siembra que la
mayor cantidad de los resultados presenten una disminucin de al menos el 50
% del OD. La representacin de la disminucin del OD (mg/L) con respecto a
los mililitros de siembra, tiene que ser una lnea recta cuya pendiente
corresponde a la disminucin de OD por mililitro del inculo. La interseccin del
eje de las abscisas (OD) representa el consumo del oxgeno causado por el
agua de dilucin y debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver inciso 10.8). Para
determinar el consumo de OD de una muestra, se resta el consumo de OD de
la siembra, del consumo de OD total. La captacin de OD total del agua de
dilucin sembrada debe oscilar entre 0,6 mg/L y 1,0 mg/L.

10.6 Pretratamiento de la muestra

10.6.1 Muestras con pH cidos o bsicos

10.6.1.1 Neutralizar las muestras a un pH entre 6,5 y 7,5 con cido sulfrico o
hidrxido de sodio de concentracin tal que la cantidad de reactivo no diluya la
muestra en ms del 0,5 %. El pH del agua de dilucin sembrada no debe verse
afectado por la dilucin de la muestra.

10.6.2 Muestras que contienen cloro residual

10.6.2.1 Si es posible, evitar las muestras que contengan cloro residual,

tomndolas antes del proceso de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero
no hay residuo detectable de cloro, sembrar el agua de dilucin. Si hay cloro
residual, eliminar el cloro de la muestra y sembrar con inculo (ver inciso 10.4).
No se deben analizar las muestras cloradas sin sembrar el agua de dilucin. En
algunas muestras, el cloro desaparece en el lapso de 1 h a 2 h despus de su
exposicin a la luz. Esto suele ocurrir durante el transporte o la manipulacin
de la muestra. Para las muestras en las que el residuo de cloro no se disipe en
un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro residual aadiendo disolucin
de sulfito de sodio. Determinar el volumen requerido de disolucin de sulfito de
sodio cuantificando el cloro residual total. Aadir a la muestra neutralizada el
volumen relativo de la disolucin de sulfito de sodio determinada por la prueba
anterior, mezclar y despus de 10 min a 20 min, comprobar el cloro residual de
la muestra.

10.6.2.2 La determinacin de cloro residual se realiza de acuerdo a lo

establecido en la norma mexicana NMX-AA-100 (ver 2 Referencias).

10.6.3 Muestras sobresaturadas con OD

10.6.3.1 En aguas fras o en aguas donde se produce la fotosntesis (aguas de

embalses), es posible encontrar muestras que contienen ms de 9,0 mg
OD/L a 20C. Para evitar la prdida de oxgeno durante la incubacin de tales
muestras, reducir el OD por saturacin, calentando la muestra
aproximadamente a 20C en frascos parcialmente llenos mientras se agitan
con fuerza o se airean con aire limpio, filtrado y comprimido.

10.6.4 Ajustar la temperatura de la muestra a 20C 1C antes de hacer

diluciones.

10.6.5 Inhibicin de la nitrificacin

10.6.5.1 Si se requiere inhibir la nitrificacin adicionar 3,0 mg de 2-cloro-6

(triclorometil) piridina (ver inciso 5.11) a cada uno de los frascos antes de
recolectar o bien adicionar la cantidad suficiente de agua para tener una
concentracin de 10 mg/L aproximadamente.

10.6.5.2 Entre las muestras que requieren inhibicin de la nitrificacin se

incluyen, los efluentes tratados biolgicamente, las muestras sembradas con
efluentes tratados biolgicamente y las aguas superficiales entre otras. Debe
hacerse la observacin del uso de inhibicin del nitrgeno cuando se presente
el informe de los resultados.

10.7 Tcnica de dilucin

10.7.1 Las diluciones que dan lugar a un OD residual mayor de 1 mg/L y una
captacin de OD de al menos 2 mg/L despus de 5 das de incubacin, 3) por
duplicado de la muestra preparada para obtener una captacin de OD en dicho
intervalo. La experimentacin con una muestra concreta permite el uso de un
nmero menor de diluciones. Un anlisis ms rpido tal como la DQO, presenta
una correlacin aproximada con la DBO5 y sirve como una gua para
seleccionar las diluciones. En ausencia de datos previos, utilizar las siguientes
diluciones: de 0 % a 1 % para los residuos industriales fuertes, de 1 % a 5 %
para las aguas residuales sedimentadas y crudas, del 5 % al 25 % para el
efluente tratado biolgicamente y del 25 % al 100 % para las aguas
superficiales contaminadas.

10.7.2 Diluciones preparadas directamente en frascos tipo Winkler. Utilizando

una pipeta volumtrica, aadir el volumen de muestra deseado a frascos
Winkler individuales de 300 mL. Aadir cantidades adecuadas del material de
siembra a los frascos tipo Winkler o al agua de dilucin. Llenar los frascos con
suficiente agua de dilucin, sembrada si es necesario, de forma que la
insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas. No realizar
diluciones mayores de 1:300 (1 mL de la muestra en un frasco). Determinar el
OD inicial en uno de los frascos de cada una de las diferentes diluciones. En
los frascos de los duplicados de cada una de las diluciones, Ajustar
hermticamente el tapn, poner un sello hidralico y la contratapa e incubar
durante 5 das a 20C.

10.8 Determinacin del OD inicial

10.8.1 Mtodo yodomtrico La determinacin del OD inicial se realiza por

medio del mtodo yodomtrico de azida modificado, de acuerdo a lo
establecido en la norma mexicana NMX-AA-012-SCFI (ver 2 Referencias).

10.8.2 Mtodo electromtrico

La determinacin del OD inicial se realiza por medio del mtodo electromtrico

con electrodo de membrana, de acuerdo a lo establecido en la norma mexicana
NMXAA- 012-SCFI (ver 2 Referencias). Los aceites, grasas o cualquier
sustancia que se adhiera a la membrana puede ser causa de baja respuesta en
el electrodo.

10.9 Blanco del agua de dilucin. Emplear un blanco del agua de dilucin como
un control aproximado de la calidad del agua de dilucin no sembrada y de la
limpieza de los frascos de incubacin. Junto con cada lote de muestras, incubar
un frasco de agua de dilucin no sembrada. Determinar el OD inicial y final
como se especifica en los incisos 10.7 y 10.10. El consumo de OD no debe ser
mayor de 0,2 mg/L y preferentemente no menor a 0,1 mg/L.

10.10 Incubacin

Incubar a 20C 1C las botellas de DBO5 que contengan las muestras con las
diluciones deseadas, los controles de siembra, los blancos de agua de dilucin
y el control de glucosa-cido glutmico. En caso de no contar con contratapas,
diariamente se debe verificar que el sello hidralico est intacto en cada botella
incubada, agregar agua si es necesario.

10.11 Determinacin del OD final

Despus de 5 das de incubacin determinar el OD en las diluciones de la

muestra, en los controles y en los blancos. La medicin del OD debe ser
realizada inmediatamente despus de destapar la botella de Winkler, para
evitar la absorcin de oxgeno del aire por la muestra.

11 CLCULOS

11.1 Calcular la DBO5

11.1.1 Cuando no se utilice inculo ni diluciones:

DBO5 (mg/L) = ODi mg/L - OD5 mg/L
Donde:

ODI mg/L es el oxgeno disuelto inicial, y

OD5 mg/L es el oxgeno disuelto al quinto da.

11.1.2 Cuando se emplea una dilucin:

DBO5 (mg/L) = ODi mg/L - OD5 mg/L / % de dilucin expresado en

decimales

11.2 Cuando se utiliza inculo

11.2.1 Sin dilucin:

DBO5 (m/L)= (ODi mg/L - OD5 mg/ L) (C1 (B1 - B2 ) (Vt ) / C2(Vm))

11.2.2 Con dilucin:

DBO5 (m/L)=[ (ODi mg/L - OD5 mg/ L) - C1 (B1 - B2 ) (Vt )] / C2(Vm) | P

Donde:

B1 es el OD del inculo antes de la incubacin, en mg/L;

B2 es el OD del inculo despus de la incubacin, en mg/L;

C1 es el volumen de inculo en la muestra;

C2 es el volumen de inculo en el inculo control;

Vt es el volumen total del frasco Winkler, y

Vm es el volumen de muestra sembrada.

11.3 Expresar los resultados como CDBO5 s se inhibe la nitrificacin.

11.4 Reportar los resultados en mg/L de DBO5 con dos cifras significativas con
la precisin (media, desviacin estndar) correspondiente.

12 INTERFERENCIAS

12.1 El pH cido o alcalino

12.2 Cloro residual

12.3 Nitritos: Es la interferencia ms comn en las muestras de DBO5

incubadas. Para eliminarla ver inciso 10.6.5.
12.4 Sustancias inorgnicas y orgnicas reductoras.

NMX-AA-029-SCFI-2001

ANLISIS DE AGUAS - DETERMINACIN DE FSFORO TOTAL EN AGUAS

NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS
MTODO DE PRUEBA (CANCELA A LA NMX-AA-029-1981)

4 REACTIVOS Y PATRONES

Todos los productos qumicos usados en este mtodo deben ser grado reactivo
analtico, a menos que se indique otro grado.

Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes caractersticas:

a) Resistividad, megohm-cm a 25C: 0,2 min.

b) Conductividad, S/cm a 25C: 5,0 mx., y
c) pH: 5,0 a 8,0.

4.1 Generales

4.1.1 Fosfato monobsico de potasio anhidro (KH2PO4)

4.1.2 Disolucin madre de fosfato. Pesar aproximadamente y con precisin

219,5 mg de fosato monobsico de potasio anhidro previamente secado a
105C durante dos horas, aforar con agua a 1 L; 1,0 mL = 50,0 g de P como
PO4 -3

4.1.3 Fenolftalena

4.1.4 cido sulfrico concentrado (H2SO4)

4.1.5 Persulfato de amonio [(NH4)2S2O8] o persulfato de potasio (K2S2O8)

4.1.6 Hidrxido de sodio (NaOH)

4.1.7 Disolucin de cido fuerte. Cuidadosamente adicionar 300 mL de cido

sulfrico concentrado (ver inciso 4.1.4) a aproximadamente 600 mL de agua.
Dejar enfriar y agregar 4 mL de cido ntrico concentrado y aforar a 1L con
agua.

4.2 Mtodo cloruro estanoso

4.2.1 cido ntrico concentrado(HNO3)

4.2.2 Glicerol (C3H8O3)

4.2.3 Cloruro estanoso dihidratado (SnCl22H2O)

4.2.4 Heptamolibdato de amonio tetrahidratado [(NH4)6Mo7O244H2O]

4.2.5 Disolucin de cido fuerte: Cuidadosamente adicionar 300 mL de cido
sulfrico concentrado (ver inciso 4.1.4) a aproximadamente 600 mL de agua.
Dejar enfriar y agregar 4 mL de cido ntrico concentrado y aforar a 1L con
agua.

4.2.6 Disolucin de cloruro estanoso: Pesar aproximadamente y con precisin

2,5 g de cloruro estanoso dihidratado (ver inciso 4.2.3) y disolver en 100 mL de
glicerol. Calentar en bao de agua y agitar con una varilla de vidrio. El reactivo
es estable y no requiere de la adicin de conservadores o almacenamiento
especial.

4.2.7 Disolucin de heptamolibdato de amonio tetrahidratado: Disolver 25 g de

heptamolibdato de amonio tetrahidratado (ver inciso 4.2.4) en 75 mL de agua.
Con mucho cuidado agregar 280 mL de cido sulfrico (ver inciso 4.1.4) a 400
mL de agua, enfriar y adicionar al heptamolibdato de amonio tetrahidratado y
diluir a 1 L.

4.3 Mtodo vanadomolibdofosfrico:

4.3.1 Carbn activado libre de fosfatos

4.3.2 cido clorhdrico concentrado (HCl)

4.3.3 Metavanadato de amonio (NH4VO3)

4.3.4 Hidrxido de sodio (NaOH)

4.3.5 cido clorhdrico (1:1). Agregar cuidadosamente 100 mL de cido

clorhdrico concentrado (ver inciso 4.3.2) a 100 mL de agua, lentamente. La
concentracin del cido no es crtica para la determinacin, pero se
recomienda una concentracin final en la muestra de 0,5 N.

4.3.6 Disolucin A. Pesar aproximadamente y con precisin 25,0 g de

heptamolibdato de amonio (ver inciso 4.2.4), y diluir en 300 mL de agua.

4.3.7 Disolucin B. Pesar aproximadamente y con precisin 1,25 g de

metavanadato de amonio (ver inciso 4.3.3) y diluir en 300 mL de agua
destilada, calentar hasta ebullicin. Enfriar y aadir 330 mL de cido clorhdrico
concentrado (ver inciso 4.3.2). Dejar enfriar a temperatura ambiente.

4.3.8 Disolucin reactivo vanado-molibdato: Adicionar la disolucin A (ver inciso

4.3.6) a la disolucin B (ver inciso 4.3.7), mezclar y aforar a 1 L.

4.3.9 Disolucin de hidrxido de sodio (1N). Pesar aproximadamente y con

precisin 40 g de hidrxido de sodio (ver inciso 4.3.4) y diluir con 500 mL de
agua, agitar y dejar enfriar, agregar ms agua y en cada ocasin agitar y dejar
enfriar hasta que el volumen final sea de 1 L.
5 EQUIPO Y MATERIALES

Slo se mencionan los equipos y materiales que son de relevancia para este
mtodo.

5.1 Equipo

5.1.1 Balanza analtica con precisin de 0,1 mg.

5.1.2 Placa de calentamiento: Una superficie de 30 cm X 50 cm es adecuada.

5.1.3 Autoclave: Puede utilizarse un autoclave capaz de alcanzar de 98 kPa a

137 kPa en lugar de la placa de calentamiento.

5.1.4 Espectrofotmetro: Para utilizarse de 190 nm a 900 nm y equipado con

celda de 1 cm de paso ptico de luz.

5.2 Materiales
Todo el material volumtrico utilizado en este procedimiento debe ser clase A
con certificado o en su caso debe estar calibrado.

5.2.1 Embudo de filtracin y papel filtro cualitativo Whatman 42 o equivalente.

6 RECOLECCIN, PRESERVACIN Y ALMACENAMIENTO DE

MUESTRAS

6.1 Tomar un mnimo de 500 mL de muestra en envases de plstico. Pueden

utilizarse muestras compuestas o simples.

6.2 Si la muestra solamente es analizada para determinar la forma de fsforo

disuelto, filtrar la muestra inmediatamente despus de la colecta a travs de un
papel filtro de poro fino.

6.3 Conservar en refrigeracin a 4C.

6.4 El tiempo mximo de almacenamiento previo al anlisis es de 28 das.

7 CONTROL DE CALIDAD

7.1 Cada laboratorio que utilice este mtodo debe operar un programa de
control de calidad (CC) formal.

7.2 El laboratorio debe mantener los siguientes registros:

- Los nombres y ttulos de los analistas que ejecutan los anlisis y el encargado
de control de calidad que verifica los anlisis, y

- Las bitcoras manuscritas del analista y del equipo en los que se contengan
los siguientes datos:
a) Identificacin de la muestra;
b) Fecha del anlisis;
c) Procedimiento cronolgico utilizado;
d) Cantidad de muestra utilizada;
e) Nmero de muestras de control de calidad analizadas;
f) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medicin;
g) Evidencia de la aceptacin o rechazo de los resultados, y
h) Adems el laboratorio debe mantener la informacin original reportada por
los equipos en disquetes o en otros respaldos de informacin.

De tal forma que permita a un evaluador externo reconstruir cada

determinacin mediante el seguimiento de la informacin desde la recepcin de
la muestra hasta el resultado final.

7.3 Cada vez que se adquiera nuevo material volumtrico debe de realizarse la
verificacin de la calibracin de ste tomando una muestra representativa del
lote adquirido.

9 PROCEDIMIENTO

9.1 Digestin de la muestra

Preparacin de la muestra por medio de la digestin con persulfato:

9.1.1 Usar 50 mL o la porcin adecuada de la muestra bien mezclada.

Adicionar una gota de fenolftalena (ver inciso 4.1.3). Si aparece un color rojo,
adicionar gota a gota cido sulfrico concentrado (ver inciso 4.1.4) hasta que
desaparezca el color. Posteriormente adicionar 1 mL de disolucin de cido
fuerte (ver inciso 4.1.7) y 0,4 g de persulfato de amonio o 0,5 g persulfato de
potasio (ver inciso 4.1.5).

9.1.2 Calentar hasta que rompa la ebullicin y mantenerla sobre la placa de

calentamiento, por 30 min o 40 min o hasta que el volumen final alcanzado sea
de 10 mL. Los compuestos organofosforados pueden requerir de 1,5 h a 2 h
para su digestin completa. Enfriar, diluir a 30 mL con agua, adicionar una gota
de fenolftalena (ver inciso 4.1.3), y neutralizar hasta desvanecer a un color
rosa plido con la disolucin de hidrxido de sodio (ver inciso 4.3.9).
Alternativamente, calentar por 30 min en un autoclave u olla de presin de 98
kPa a 137 kPa. Enfriar, aadir una gota de fenolftalena y neutralizar hasta
desvanecer a un color rosa plido con la disolucin de hidrxido de sodio (ver
inciso 4.3.9). Aforar a 100 mL con agua destilada. En algunas muestras puede
formarse un precipitado en esta fase, pero no se debe filtrar. Mezclar bien para
cualquier subdivisin de la muestra. El precipitado (posiblemente de fosfato de
calcio) se redisuelve bajo condiciones cidas de la prueba colorimtrica para
determinar fsforo.

9.2 Mtodo cloruro estanoso

9.2.1 Ajustar el pH de la muestra. A 100 mL de muestra que contenga no ms
de 200 g P y libre de color y turbidez adicionar 1 gota de fenolftalena (ver
inciso 4.1.3). Si la disolucin tiene un color rosado, adicionar unas cuantas
gotas de disolucin de cido fuerte (ver inciso 4.1.7) para neutralizar.

9.2.2 Desarrollo del color en la muestra. Adicionar, agitando fuertemente

despus de cada adicin, 4,0 mL de disolucin de heptamolibdato de amonio
tetrahidratado (ver inciso 4.2.7) y 0,5 mL (10 gotas) de disolucin de cloruro
estanoso (ver inciso 4.2.6). La intensidad del color depende de la temperatura
ambiente de la disolucin final, incrementndose sta alrededor de 1 % por
cada grado centgrado ms de temperatura ambiente. Por lo que es importante
realizar las mediciones a la misma temperatura.

9.2.3 Medicin de color. El tiempo en el cual se realiza la medicin es

importante para tener un buen resultado, la medicin debe de efectuarse
despus de 10 min de haber desarrollado el color, pero antes de 12 min, utilizar
el mismo intervalo de tiempo para todas las mediciones, medir la intensidad de
color espectrofotomtricamente a 690 nm y comparar contra la curva de
calibracin, utilizar como blanco agua.

NOTA.- Es necesario tener un blanco de agua y un blanco de reactivos. Debido

a que el color se desarrolla primero de manera progresiva y posteriormente se
desvanece, mantener siempre condiciones iguales de tiempos de desarrollo de
color y medicin para muestras y estndares. Preparar al menos un estndar
por cada lote de muestras o una cada da que se realiza la prueba. La curva de
calibracin es lineal en un intervalo de concentraciones de 0,3 mg/L a 2,0 mg/L.

9.3 Mtodo cido vanadomolibdofosfrico

9.3.1 Ajustar el pH de la muestra. Si la muestra tiene un pH mayor a 10,

adicionar una gota de fenolftalena (ver inciso 4.1.3) a 50,0 mL de la muestra y
despus eliminar el color rosa con una disolucin de cido clorhdrico (1:1) (ver
inciso 4.3.5), antes de diluir a 100 mL.

9.3.2 Remocin del color de las muestras. Remover el exceso de color en las
muestras por medio de la adicin de 200 mg de carbn activado (ver inciso
4.3.1) a una muestra de 50 mL en un matraz Erlenmeyer y agitar por 5 min,
posteriormente filtrar para remover el carbn activado. Comprobar los fosfatos
de cada lote de carbn activado.

9.3.3 Desarrollo del color en la muestra. Tomar una alcuota que contenga de
0,05 mg a 1,0 mg de fsforo, en un matraz volumtrico de 50 mL. Aadir 10 mL
de la disolucin reactivo vanado-molibdato (ver inciso 4.3.8) y diluir hasta la
marca con agua. Preparar un blanco usando una cantidad de agua equivalente
a la alcuota de la muestra. Despus de 10 min o ms, medir la absorbancia de
una muestra contra un blanco a una longitud de onda de 400 nm a 490 nm,
dependiendo de la sensibilidad deseada. Los intervalos de concentracin para
diferentes longitudes de onda son:
TABLA 1.- Longitud de onda

El color es estable por das y su intensidad no se ve afectada por las

variaciones de la temperatura ambiente.

10 CLCULOS

10.1 Calcular la concentracin de la muestra por medio de la ecuacin obtenida

de la curva de calibracin y que es representada por la siguiente ecuacin:
Y = mX + b

Donde:

m es la pendiente;
b es la ordenada al origen;
Y es la absorbancia, y
X es la concentracin (mg P/L).

10.2 En caso de haber dilucin de la muestra a lo largo del desarrollo del

mtodo (digestin y alcuota de muestra), utilizar la siguiente ecuacin:

mg P/L = concentracin x Factor de dilucin

10.3 Reportar los resultados en mg P/L con dos dcimas, con la precisin
correspondiente.

11 INTERFERENCIAS

Arseniato, fluoruro, torio, bismuto, sulfuro, tiosulfato, tiocianato o excesos de

molibdato interfieren. El hierro en su forma ferrosa produce un color azul, pero
no afecta a los resultados, si su concentracin es menor a 100 mg/L. La
interferencia de sulfuro puede eliminarse por oxidacin con agua de bromo. Los
siguientes iones no interfieren en concentraciones superiores a 1 g/L: Al3+,
Fe3+, Mg2+, Ca2+, Ba2+, Sr2+, Li+, Na+, K+, NH4+, Cd2+, Mn2+, Pb2+,
Hg22+, Sn2+, Cu2+, Ni2+, Ag+, U4+, Zr4+, AsO3-, Br-, CO3 2-, ClO4-, CN-, IO3,
SiO44-, NO3-, NO2-, SO42-, SO32-, pirofosfato, molibdato, tetraborato, selenato,
benzoato, citrato, oxalato, lactato, tartrato, formiato y salicilato.
NORMA MEXICANA NMX-AA-64-1981

"ANALISIS DE AGUA.- DETERMINACION DE MERCURIO.- METODO

COLORIMETRICO DE LA DITIZONA".

5.- MATERIAL Y EQUIPO

5.1. Material comn de laboratorio (ver 3.3)

5.2. Equipo colorimtrico, se necesita uno de los siguientes:

5.2.1. Espectrofotmetro para usarse a una longitud de onda de 490 nm

provisto de un paso de luz de 1 cm, con sus celdas correspondientes.

5.2.2. Fotmetro de filtro provisto de un paso de luz de 1 cm o mayor equipado

con un filtro para 490 nm y sus celdas correspondientes.

6.- MUESTREO Y CONSERVACION DE MUESTRAS.

6.1. La muestra debe tomarse en frasco de plstico.

6.2. Si el anlisis no se efecta inmediatamente la muestra puede conservarse

hasta por seis meses, mediante la adicin de 1.5 cm3 de cido ntrico
concentrado por litro de muestra (ver 10.1).

7.- INTERFERENCIAS

El cobre, oro, paladio, platino divalente y plata reaccionan con la ditizona en

solucin cida. El cobre es separado durante el procedimiento permaneciendo
en la fase orgnica, mientras que el mercurio es transferido a la fase acuosa.
Los otros interferentes normalmente no se presentan.

La determinacin se debe llevar a cabo rpidamente, debido a que el ditizonato

mercrico es fotosensible.

8.- PROCEDIMIENTO

8.1. Preparacin de la curva de calibracin.

8.1.1 Colocar en una serie de vasos de precipitados, los volmenes de

solucin patrn de mercurio (4.11.2), indicados en la tabla 1. Agregar a cada
vaso de precipitados 500 cm3 de agua y continuar como en 8.3.2.

8.1.2. Elaborar una grfica colocando como abscisas los ug de Hg y como

ordenadas las lecturas.
8.2. Prueba testigo. Preparar un testigo con 500 cm3 de agua y proceder como
se indica en 8.3.2.

8.3. Determinacin.

8.3.1. Tomar una alcuota de 500 cm3 de la muestra de anlisis.

8.3.2. Transferir la alcuota a un vaso de precipitados, agregar 1 cm3 de

solucin de permanganato de potasio y 10 cm3 de cido sulfrico concentrado.
Agitar y llevar a ebullicin. Si es necesario, agregar ms solucin de
permanganato de potasio, hasta que persista un color rosa. (ver 10.2).

8.3.3. Aadir con cuidado 5 cm3 de solucin de persulfato de potasio y dejar

enfriar durante 30 minutos. Agregar una o ms gotas de solucin de clorhidrato
de hidroxilamina hasta eliminar el color rosa.

8.3.4. Cuando se haya enfriado, transferir la solucin a un embudo de

separacin de 1 litro y agregar 25 cm3 de solucin de ditizona. Agitar el
embudo vigorosamente y transferir la capa orgnica a un embudo de
separacin de 250 cm3. Repetir esta extraccin por lo menos 3 veces, hasta
que la coloracin en la capa de ditizona sea de un azul intenso como el de la
solucin original de ditizona.

8.3.5. Lavar los extractos acumulados de ditizona en el embudo de separacin

de 250 cm3, con 50 cm3 de cido sulfrico 0.25 N y agitar. Transferir la fase
orgnica a otro embudo de separacin de 250 cm3.

8.3.6. Agregar 50 cm3 de cido sulfrico 0.25 N y 10 cm3 de solucin de

bromuro de potasio. Agitar vigorosamente para transferir el ditizonato mercrico
de la capa orgnica a la acuosa y desechar la capa inferior de ditizona.

8.3.7. Lavar la capa acuosa con un volumen pequeo de cloroformo y desechar

la fase inferior. Agregar 20 cm3 de solucin "buffer" y 10 cm3 de solucin de
ditizona. Agitar fuertemente y despus de la separacin de las fases transferir
la fase orgnica que contiene el ditizonato mercrico a un vaso de precipitados.

8.3.8. Agregar a la fase orgnica de 1 a 2 g de sulfato de sodio anhdro y

decantar en la celda de 1 cm de paso de luz. (Ver 10.3). Medir la absorbancia a
490 nm, ajustado el espectrofotmetro o el fotocolormetro a cero de lectura
con el testigo (8.2).

9.-CALCULOS

La concentracin de mercurio se calcula por la siguiente frmula:

mg Hg/1 = m / V

En donde:

m = masa leda en la curva de calibracin, en microgramos de Hg.

V = volumen de la alcuota, en cm3.