Extraccin de ADN

Sandra Ramrez-Calero
27 Febrero de 2017
Seminario de Investigacin Laboratorio de
Ictiologa
 Qu es?
Procedimiento sencillo para extraer
el ADN

Extraer? Remover cualquier tipo

de componente del ADN (lpidos,
protenas, contaminantes, etc.)

Numerosos protocolos (Plantas,

tejido, saliva, sangre, aletas,
cabello, huesos, etc.)
Primera fase Segunda fase
Rompimiento membranas Purificacin de ADN en fro con
celulares alcoholes
Precipitacin y degradacin de
protenas
Primera Fase
Liberacin del ADN

Rompimiento de membranas
Detergente (Cell Lysis Solution)
Tris-HCl o EDTA (regulan pH)
NaCl, KCl, (NH4)2SO4 precipitan las
protenas
Triton o SDS (separan fosfolpidos junto
con protenas asociadas)
 Proteinasa K

Protenas especficas asociadas al ADN

Histonas
http://elmercaderdelasalud.blogspot.com.es/2012/01/las-histonas.html
Inactiva nucleasas de degradacin de
Ac. Nucleicos
Temp. ptima (Aprox. 50-60C y pH=8)
A mayor concentracin, mayor su
eficacia
http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Citologia2/nucleo2.php
 Invertir e incubar Homogenizacin de la
solucin (overnight)
Precipitacin de protenas y ARN Sales (NaCl)
o Solucin de Precipitacin de Protenas
Purege, Qiagen Rnase especficas para ARN
Centrifugacin
(Na+) + (-ADN) lo hace menos soluble en
otras sustancias (e.g. alcohol)
Segunda fase
Isopropanol Vs Etanol
 Proceso de Purificacin del ADN En fro

Isopropanol Vs Etanol

ADN < soluble reaccin ms

rpida ADN > soluble
Requiere < [ADN] Requiere > [ADN]
> riesgo de contaminacin (sales) < riesgo de contaminacin
< volumen de alcohol > volumen de alcohol
< tiempo > tiempo
 El DNA se vuelve ms pesado y cae
al fondo

Isopropanol propenso a dejar sales

Etanol para disolver la sal

Pellet libre de contaminantes

Evaporacin de alcohol

Hidratacin del ADN (Agua ultra

pura o buffer TE o TLE Tris y
EDTA Evitar degradacin ADN
El ADN se puede diluir
Tipos de extracciones
Phenol-chloroform Extraction CTAB DNA extraction

Lquido-Lquido Plantas (Polisacridos y

Separa molculas polifenoles) (e.g. celulosa y
orgnicas de acuerdo a su taninos)
solubilidad Separa molculas dependiendo
Dos fases: de su solubilidad
Acuosa (ADN) Cloroformo
Orgnica (Protenas,
restos celulares)

Cloroformo