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AULA PRTICA 8

Isolamento de microrganismos do solo: Mtodo de diluio em placa

Objetivo: Permitir ao aluno um aperfeioamento da tcnica de diluio seriada e mostrar as


diferenas visveis no desenvolvimento dos microrganismos (fungos e bactrias) aps cada etapa da
diluio.

Material:

Agitador de tubos
lcool
Ala de Drigalski
Amostra de solo
Balana analtica
Becker
Lamparina
Meios de cultura Martin, NA e Amido Casena + agar(AC)
Tubos de ensaio contendo soluo salina
Pipetas
Placas de Petri contendo meio de cultura estril
Ponteiras estreis

Procedimento 1: Diluio de solo

1. Identificar as placas de Petri (data, nome do grupo, concentrao)


2.Retirar o tampo de um erlenmeyer esterilizado com 90 ml de Soluo salina (85%)
3.Colocar 10 g de solo no erlenmeyer
4.Fechar o erlenmeyer com o tampo, agitando-se para homogeneizar a soluo de solo
5.Retirar 1 ml da soluo de solo do erlenmeyer
6.Verter este 1 ml de soluo de solo do erlenmeyer em um primeiro tubo (1), marcar 1:10 (10 -1)
7.Agitar o tubo de ensaio (1) e retirar 1 ml da soluo de solo
8.Verter este 1 ml de soluo de solo do primeiro tubo em um segundo tubo, marcar 1:100 (10 -2)
9.Agitar o tubo de ensaio (2) e retirar 1 ml da soluo de solo
10.Verter este 1 ml de soluo de solo do segundo tubo em um terceiro tubo, marcar 1:1000 (10 -3)
11. Agitar o tubo de ensaio (3) e retirar 1 ml da soluo de solo
12.Verter este 1 ml de soluo de solo do terceiro tubo em um quarto tubo, marcar 1:10000 (10 -4)
13. Agitar o tubo de ensaio (4) e retirar 1 ml da soluo de solo
14.Verter este 1 ml de soluo de solo do quarto tubo em um quinto tubo, marcar 1:100000 (10 -5)

Procedimento 2: Plaqueamento

Para cada tubo de ensaio (cada diluio) plaquear duas placas de cada meio, sendo Martin, NA e AC.

1. Agitar o tubo (1) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 1)
2. Agitar o tubo (1) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 2)
3. Agitar o tubo (2) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 1)
4. Agitar o tubo (2) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 2)

5. Agitar o tubo (3) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 1)
6. Agitar o tubo (3) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 2)

7. Agitar o tubo (4) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski flambada. (Placa 1)
8. Agitar o tubo (4) e retirar 0,1 mL com ajuda de uma pipeta. Verter a soluo sobre a placa de
Petri, espalhando-a, posteriormente, com uma ala de Drigalski. (Placa 2)

Procedimento 3: Incubao em BOD ou estufa a 28C


O perodo de incubao para bactrias de 48 h, fungos e actinomicetos de 96 h, conforme
velocidade de crescimento de cada microrganismo.
Usar as diluies 1 e 2 para anlise de fungos; e as diluies 3 e 4 para anlise de bactrias e
actinomicetos (isso para anlise de solo).
Contar a diluio que est entre 20 e 200,
Depois fazer a transformao para o valor real de UFC (unidade formadora de colnia).

Figura 1: Esquema de diluio seriada de amostra de solo e contagem de colnias.