EL NCLEO DE LA CLULA SE FORMA
Los bilogos celulares estn teniendo una mejor visin de cmo la estructura
interna del ncleo puede influir en la replicacin de genes y la actividad
En la secundaria o incluso en la
biologa universitaria, pocos pensaron
mucho en la complejidad del ncleo
celular. Por supuesto, sabamos que
como el contenedor de los
cromosomas portadores de genes, que
sirve de "central de control", no slo
dirigir las actividades cotidianas de la
clula, sino tambin la tarea de
duplicar los genes antes de dividir las
clulas de modo que cada Hija hereda
un conjunto intacto. Pero eso es ms o
menos lo que pensbamos que era el
ncleo, un contenedor. En silencio, en
los ltimos 20 aos, sin embargo, los
bilogos celulares han llegado a
reconocer que es mucho ms que un
solo saco de cromosomas y enzimas
zumbando en una solucin acuosa. Su
estructura es altamente organizada,
con cada molcula teniendo su propio
lugar. Incluso tiene su propio
esqueleto, una red de fibras de
protena insoluble conocida como la
matriz nuclear. Y eso no es todo. Como
los investigadores llevan el trabajo un
paso ms all, tambin estn
encontrando que esta organizacin
interna compleja bien puede influir en
la actividad gnica y las otras
reacciones bioqumicas crticas que
tienen lugar dentro del ncleo, como
ilustran dos artculos publicados en
este nmero de la Ciencia.
Cuando se activa un gen, la
informacin que codifica primero debe
ser copiada. En una molcula de ARN
mensajero (mRNA), que a su vez dirige
la sntesis del producto proteico del
gen. En las pginas 1326 y 1330, un
equipo dirigido por Jeanne Lawrence
del Centro Mdico de la Universidad de
Massachusetts en Bran Worcester
proporciona la primera visin mensual
de tres das de donde se sintetizan los
ARNm de los nucleos mentales y se
preparan para su exportacin a la
maquinaria de sintetizacin de
protenas en el citoplasma. "Los
resultados de Jeanne Lawrence nos
permiten ver rasgos de la organizacin
nuclear que en el pasado slo
podamos especular sobre su
laboratorio ha confirmado
experimentalmente que el
metabolismo del ARN est organizado
arquitectnicamente en el ncleo", dijo
el bilogo celular Jeffrey Nickerson del
Instituto de Tecnologa de
Massachusetts (MIT) .Este resultado es
muy emocionante para aquellos que
estudian la arquitectura nuclear-como
debera ser para aquellos que estudian
el metabolismo del ARN ".
Por qu la emocin? Debido a que los
bilogos de clulas esperan que este y
otros trabajos que definen la
organizacin de la estructura
molecular del ncleo no slo ir un
largo camino hacia explicar cmo se
organizan los genomas de mamferos,
sino tambin para proporcionar un
marco para entender qu controla la
expresin gnica en diferentes tipos
de clulas- Uno de los temas centrales
de la biologa molecular actual. S, los
bilogos moleculares ya han aprendido
mucho sobre la mecnica molecular
bsica de la expresin gnica. Pero
prcticamente todo ese trabajo se ha
hecho en sistemas de tubos de ensayo
simples, ignorando las posibles
influencias de la matriz nuclear y otros Berezney tambin comenz a
aspectos de la estructura nuclear encontrar evidencia para la estructura
sobre las reacciones. De hecho, dice el nuclear.
bilogo fsico Sheldon Penman del MIT,
Se dio cuenta, por ejemplo, de que si
uno de los primeros defensores de la
perforaba agujeros en la membrana
existencia de una matriz nuclear,
nuclear, permitiendo que su contenido
"existe un fuerte prejuicio para creer
se derramara, el ncleo conservaba su
en la bioqumica soluble".
forma esfrica. "Comenc a pensar
Y la definicin del papel de la que algo podra estar manteniendo el
estructura nuclear de la clula puede ncleo unido", recuerda Berezney.
tener implicaciones ms all de su Junto con Coffey, Berezney continu
impacto en los fundamentos tericos mostrando que si todos los cidos
de la biologa celular. La investigacin nucleicos z fueron digeridos con
puede tener aplicaciones prcticas enzimas y las protenas ms solubles
tambin. Resulta que las protenas de fueron eliminadas del ncleo con
la matriz nuclear de las clulas detergentes y sales, una malla de
cancerosas difieren de las de su protenas fibrosas, similar a las de las
contraparte normal, un hecho que primeras micrografas electrnicas,
puede resultar til en el desarrollo de Qued atrs, la red, que Berezney y
nuevas pruebas de diagnstico para el Coffey llamaron matriz nuclear, por lo
cncer (vase la historia en la pgina tanto, podra ser el "algo" que
1258). mantiene el ncleo juntos.
Sin embargo, este reconocimiento de Pero a pesar de que otros grupos
la importancia de la estructura nuclear tambin encontraron evidencia de una
tard mucho en llegar. De hecho, red de protenas en el ncleo, el
durante muchos aos, muchos pblico cientfico general permaneci
bilogos celulares no crean que la poco convencido, dice Penman. El
matriz nuclear exista en absoluto. problema principal era que la matriz
todava no poda verse muy bien en las
La idea se remonta al trabajo realizado
micrografas electrnicas de las clulas
a mediados de los aos setenta por
enteras.
Ronald Berezney, que era entonces un
postdoc en el laboratorio de Donald La actitud predominante era que si no
Coffey en la Escuela de Medicina de la se vea claramente, no estaba all,
Universidad John Hopkins. En ese explica Penman. A mediados de la
momento, la opinin general era que dcada de 1980, Penman ayud a
el ncleo es una "bolsa de cromatina resolver el impasse mediante el
flotando en un mar de nucleoplasma", desarrollo de nuevas tcnicas que
como Berezney recuerda la lnea permitieron una mejor resolucin de
oficial. Aun as, ya haba habido las estructuras nucleares, incluida la
indicios de que la estructura nuclear matriz. En los aos intermedios, el
era considerablemente ms compleja grupo de Penman ha hecho lo que
de lo que se pensaba; Las micrografas Nickerson describi como "cientos, tal
electrnicas realizadas en los aos vez miles" de micrografas de la matriz
sesenta mostraron estructuras fibrosas nuclear.
y granulares en todo el ncleo. Y luego
Mientras tanto, las pruebas ya estaban
construyendo que las estructuras
nucleares son participantes clave en
una importante reaccin bioqumica
que tiene lugar en el ncleo-la
replicacin del ADN. Del trabajo de
investigadores, incluyendo Berezney,
Coffey, Drew Pardoll y Bert Vogelstein,
tambin en Johns Hopkins, as como el
grupo de Fredrich Wanka en la
Universidad de Nijmegen, Pases Bajos,
y Peter Cook en la Universidad de
Oxford en Inglaterra, Mostrando que el
ADN de replicacin forma estructuras
repetitivas de bucles, denominadas
replicones, que se unen a la matriz en
las bases de bucle. La maquinaria de
replicacin est localizada en los sitios
de fijacin, y cuando se copia el ADN,
los bucles se extraen a travs de la
maquinaria.
Pero la influencia de la matriz en la
organizacin del ADN nuclear
aparentemente no se detiene al nivel
del replicn. Los 50.000 replicones en
el genoma promedio de mamferos se
duplican en grupos de 10 a 100 y el
trabajo reciente del grupo de
Berezney, ahora en la Universidad
Estatal de Nueva York en Buffalo, y por
Hiromu Nakamura y sus colegas en el
Centro de Cncer Aichi en Nagoya,
Japn, indica que la matriz nuclear es
necesaria para organizar los clsteres
replicn. Berezney tambin es capaz
de identificar las coordenadas de cada
sitio de replicacin. Esto puede ser til,
dice, en la comprensin de cmo la
arquitectura nuclear de las clulas
normales y de cncer difieren, y cmo
esto puede estar relacionado con el
aumento de la proliferacin de clulas
cancerosas.
Impacto ms all del ADN
Por supuesto, la replicacin del ADN es
slo una de las principales reacciones
bioqumicas que tiene lugar en el
ncleo. El ADN de los genes tambin
tiene que ser copiado en los ARN
mensajeros, el primer paso necesario
en la sntesis de protenas. Y puesto
que los genes contienen secuencias
que no codifican la estructura de la
protena, estos segmentos no
codificantes, llamados intrones, deben
ser empalmados de las molculas de
ARNm antes de que se muevan fuera
del ncleo al citoplasma celular donde
realmente se produce la sntesis de
protenas. Y ah es donde entra el
nuevo trabajo del grupo de Lawrence,
ya que seala las ubicaciones en el
ncleo donde se producen esas
reacciones.
Por razones que no se entienden,
despus de que los ARNm se
sintetizan, se aade a un extremo una
larga secuencia de nucletidos de
adenina conocida como la cola poli (A).
Debido a que otras formas de cidos
nucleicos no tienen una cola poli (A),
Lawrence y sus colegas razonaron que
si pudieran encontrar la localizacin
nuclear de todos los poli (A) que
contienen la cola Molculas,
entenderan mejor la disposicin de
mRNAs y los genes que los codifican
en el ncleo.
Su trabajo anterior haba demostrado
que los ARN poli (A) se concentran en
regiones discretas del ncleo que
tambin contienen componentes de la
maquinaria de empalme de mRNA.
Ahora, Lawrence y sus colegas, entre
ellos Kenneth Carter y Fredric Fay,
tambin en el Centro Mdico de la
Universidad de Massachusetts, han
determinado la disposicin
tridimensional de esas regiones, que
denominan "dominios de
transcripcin", en el ncleo (vase
tambin la pgina 1330 ).
Demostraron que estaban vestidos,
dice Lawrence, en centros que se
encuentran en un solo plano, justo
debajo de la lnea media del ncleo ya
cierta distancia del sobre nuclear. Y lo
que hizo ese hallazgo particularmente
significativo fue la identidad de otra
molcula que el grupo de Lawrence
identific en los dominios de la
transcripcin.
Ubicada en el ncleo de cada una de
ellas se encontraba una protena
llamada SC35 que el grupo de Tom
Maniatis en la Universidad de Harvard
ha encontrado que es necesario para
el ensamblaje de la maquinaria
molecular que empalma los intrones
del ARNm. Los componentes de la
maquinaria de empalme haban sido
Spector's en Cold Spring Harbor
Laboratory en Long Island y Nils
Ringertz's en el Instituto Karolinska en
Estocolmo, Suecia, para ocupar
ubicaciones nucleares discretas. Pero
esta es la primera vez que se ha
demostrado que los transcritos de
mRNA estn presentes en los mismos
sitios exactos. El hallazgo sugiere
fuertemente, dice Lawrence, que la
maquinaria de empalme se ensambla
muy cerca o en el mismo lugar donde
el empalme realmente ocurre.
Sugiere es una cosa, por supuesto;
Mostrando es otro. En la fase dos, los
investigadores siguieron el camino
tomado a travs del ncleo por el ARN
mensajero para una protena celular
particular, llamada fibronectina, Para
determinar dnde fue transcrita y
luego empalmada. El grupo de
Lawrence haba demostrado
previamente que un mRNA viral haca
largas pistas desde el centro del
ncleo hasta la periferia, y los
investigadores queran saber si el
mRNA celular hara pistas similares. Lo
hizo, aunque las pistas fueron algo
menos dramticas que las del ARNm
viral. Es ms, en casi el 90% de los
casos, las pistas se superponen a los
dominios de transcripcin, o al menos
estaban en contacto con ellos.
Para preguntar directamente si las
pistas de mRNA se forman en el sitio
donde se transcribe el gen de la
fibronectina, los investigadores usaron
sondas que les permitieron encontrar
simultneamente la localizacin del
gen de la fibronectina y su
transcripcin de mRNA. El resultado: El
gen relativamente pequeo se
superpone a la pista de mRNA, por lo
general cerca de un extremo, lo que
demuestra que el mRNA fue
sintetizado en una parte de la pista.
Luego, los investigadores preguntaron
si el mRNA tambin estaba
empalmado a lo largo de la va. Para
ver esto, usaron sondas que podan
distinguir entre los intrones y los
exones del mRNA. Siguiendo la
distribucin de ambos, pudieron
demostrar que los exones estn
presentes a lo largo de toda la pista,
mientras que los intrones estn
presentes slo durante parte de ella.
"Es evidente," dice Lawrence, "que el
empalme debe haber ocurrido en
algn lugar a lo largo de la pista."
Mientras que se necesita ms trabajo
para definir la conexin precisa entre
las vas y los dominios, est claro que
la maquinaria metablica del mRNA
est integrada con la estructura
nuclear, dice Lawrence.
 lo hace aparentemente para la sntesis
de ADN.
Una pista de que podra provenir de la
neurobiloga Laura Manuelidis en la
Facultad de Medicina de la Universidad
de Yale. Ella ha demostrado que el
ADN nuclear est altamente
organizado en las clulas nerviosas,
incluso cuando estn "descansando" y
no preparndose para dividirse. Si ella
marca un sitio particular de un
cromosoma, por ejemplo, encuentra
que siempre ocupa el mismo lugar en
el ncleo en una etapa dada de
desarrollo. Ella tambin encuentra que
esta organizacin cambia de maneras
predecibles como madres de las
clulas nerviosas. Eso sugiere, dice
Manuelidis, que las alteraciones
arquitectnicas pueden ayudar a
controlar qu genes estn activos en
las diferentes etapas de la vida de las
clulas nerviosas, aunque en esta
etapa de la investigacin no se sabe si
Recorte La parte superior izquierda de la matriz o algn otro factor es
la caricatura muestra el ncleo con un responsable.
dominio de transcripcin (punto
Sin embargo, la evidencia que sugiere
brillante) y; MRNA adyacente. A
que la matriz nuclear puede influir en
continuacin se muestra una vista
qu genes se activan en diferentes
ampliada de la pista donde el axman
tipos de clulas proviene del grupo de
est cortando los intrones del
Gary Stein, que tambin est en la
mensajero.
Facultad de Medicina de la Universidad
La investigacin de maana de Massachusetts. Generalmente, los
genes son activados por un complejo
Tan elegantes como son estos de varios factores de transcripcin de
experimentos, simplemente han protenas que tienen que actuar
planteado una nueva pregunta para juntos. Pero muchas de las protenas
los bilogos celulares: La matriz que activan la expresin de los genes
nuclear u otros aspectos de la especficos del tipo celular se
arquitectura nuclear influyen en la encuentran en concentraciones
organizacin o actividades de los extremadamente bajas en la clula,
dominios de transcripcin vistos por el seala Stein. Esto significa, explica,
grupo de Lawrence? Si es as, entonces que si se distribuyeran ranzalmente,
la arquitectura puede desempear un nunca se encontraran entre s para
papel en la regulacin de la activacin unirse y formar el complejo gentico-
de genes y la sntesis de mRNA, como activador requerido. Sin embargo, la
matriz podra servir para concentrar y "No somos tan buenos pensando en
localizar todo el ADN que se va a cmo se coordina todo el genoma".
transcribir, as como las protenas Pero eso bien puede mejorar como la
necesarias para la expresin gnica imagen completa que muestra cmo
especfica del tejido, de manera que las reacciones que tienen lugar en el
puedan iniciar la expresin gnica. ncleo estn vinculados a la estructura
tridimensional nuclear entra en un
En apoyo de su punto de vista, l y sus
enfoque ms ntido.
colegas Jane Lian, Janet Stein y sus
asociados tienen pruebas, que aparece -Michelle Hoffman
en la edicin del 15 de febrero de la
Proceedings de la Academia Nacional
de Ciencias, de que un factor de
transcripcin necesario para la
activacin del gen para la osteocalcina
, Una protena especfica de hueso, se
asocia con la matriz nuclear de las
clulas seas immaanture en el
momento en que activan el gen. El
hallazgo sugiere, Stein dice, que el
apego a la matriz puede ser
importante para la expresin gnica.
En ese caso, la naturaleza de los
componentes matriculados tendra que
cambiar durante el desarrollo, como
han propuesto Manuelidis y otros. Buscando el cncer en las
Stein se apresura a sealar, sin protenas de matriz nuclear
embargo, que la fijacin de la matriz
En la ltima dcada, los bilogos
no puede ser necesaria para toda la
celulares han comenzado a trabajar las
expresin gnica. Para algunos genes,
implicaciones funcionales de la matriz
los factores que contribuyen a la
nuclear, una red de protenas
transcripcin pueden encontrarse en
estructurales que permea el ncleo y
tal abundancia que los servicios de la
ayuda a mantener su forma. Tambin
matriz pueden no ser necesarios.
desempea un papel, al regular
Sin embargo, los investigadores estn reacciones clave en el ncleo, como la
construyendo un caso en el que la activacin de genes.El estudio
estructura nuclear tendr que ser adicional de la matriz puede conducir
tenida en cuenta cuando se trata de a nuevos mtodos de deteccin y
entender la replicacin y expresin de tratamiento del cncer tambin. Al
genes, especialmente cuando el menos esa es la opinin optimista de
control de genes es complicado. los funcionarios de Matritech Inc., una
Durante el desarrollo embrionario, por pequea empresa de biotecnologa en
ejemplo, 100.000 o ms genes pueden Cambridge Massachusetts.
tener que ser encendido o apagado.
Ya que en la tubera de Matritech se
"Somos bastante buenos pensando en
encuentran los ensayos para detectar
cmo se activan y desactivan los
de la vejiga, la mama, el colon, el
genes individuales", dice Lawrence.
cuello uterino y varios otros cnceres,
que se basan En los hallazgos, la
composicin proteica de la matriz
nuclear, difiere entre las clulas
cancerosas y sus homlogas normales.
El mercado mdico para tales ensayos
se estima en ms de mil millones de
dlares al ao, por lo que puede
parecer sorprendente que, hasta la
fecha, Matritech haya tenido el campo
de la matriz nuclear comercial sobre
todo para s mismo. Parte de la
explicacin de esto es que durante
aos los investigadores haban
ignorado esencialmente las protenas
de matriz nuclear (NMP) porque las
protenas insolubles son
extremadamente difciles de aislar y
trabajar con ellas. "Hasta hace poco, la
mayora de los bioqumicos haban
arrojado estas cosas por el desage",
dice Graham Lidgard, vicepresidente
de desarrollo de productos en
Matritech.
Pero mientras que los cientficos han
tenido problemas para romper la
matriz en sus componentes, la
naturaleza aparentemente lo logra con
facilidad. En estudios de tubos de
ensayo en los ltimos aos, los
investigadores de la compaa se han
asustado al descubrir que a medida
que las clulas mueren, su matriz
nuclear desaparece y las protenas de
la matriz se liberan en los fluidos
circundantes, ya sea en cultivo de
laboratorio o en animales vivos.
Este descubrimiento abri otra lnea
de investigacin: los investigadores
podran comparar los NMP liberados
por distintos tipos de clulas para ver
si eran todos iguales o si diferentes
tipos de clulas tienen sus propias
variantes distintas. Usando
anticuerpos monoclonales en clulas
en cultivo de laboratorio, Matritech ha
identificado ms de una docena de
NMP, muchos de ellos especficos de
clulas. Ms importante para el futuro
financiero de Matritech, los NMP
liberados por las clulas cancerosas
difieren de los Publicado en la ltima
edicin de Cancer Research, un equipo
de la Escuela de Medicina de la
Universidad John Hopkins, incluyendo
a Alan Partin y Donald Coffey, informa
que las clulas de cncer de prstata
llevan una protena de matriz nuclear
que no se ve en las Clulas normales
de prstata o incluso en tejido de
prstata "hiperplsico" que muestra
crecimiento celular excesivo pero que
sigue siendo benigno. Matritech espera
detectar protenas como esa en
pruebas sencillas de sangre o orina
que utilizan procedimientos de
laboratorio estndar como la
electroforesis bidimensional para
separar las protenas de acuerdo con
su tamao y carga.
Los diagnsticos de cncer basados en
ese principio deberan ser ensayos
clnicos de gin este ao, de acuerdo
con los funcionarios de Matritech, que
creen que sus ensayos podran ser
mucho ms sensibles y especficos que
las pocas pruebas actuales en el
mercado, muchas de las cuales buscan
protenas encontradas en la superficie
de un cncer de la clula. Esos
ensayos, dice Lidgard, a menudo dan
demasiados positivos falsos, porque
las protenas que detectan se liberan
en condiciones distintas del cncer. Por
ejemplo, una popular prueba de suero
para detectar el cncer de prstata a
menudo se convierte en hiperplasia
benigna. Otra prueba de deteccin de
cncer, el frotis de Papanicolaou para
el cncer de cuello uterino, sufre del
problema opuesto; La tasa de falsos
negativos se estima en un 25%. Para
abordar este problema, Matritech est
desarrollando un anlisis de
anticuerpos para protenas de matriz razonables para intentarlo, pero no
para complementar la prueba creo que tengamos suficientes datos
tradicional que depende simplemente para decir que funcionarn".
de observaciones de cambios
- John Travis
estructurales en las clulas cervicales
para diagnosticar posibles cnceres.
Y eso no es todo: la compaa acaba
de establecer un nuevo grupo de
investigacin para comenzar a
explorar si su trabajo con matriz
nuclear podra proporcionar nuevas
estrategias teraputicas para el
cncer. Todava es demasiado pronto
para saber cules podran ser esas
estrategias, dicen los investigadores
de la compaa, pero no estaran
invirtiendo el dinero si no fueran
optimistas. Por otro lado, el xito Diferencia cancerosa. La
cientfico y financiero de Matritech electroforesis bidimensional
est lejos de estar asegurado. encuentra protenas en las clulas
Precauciones SheliaTaube, jefe de la cancerosas (izquierda) que no se
Seccin de Diagnstico del Cncer del ven en las clulas normales.
Instituto Nacional del Cncer: "Creo
que [sus pruebas son mtodos