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Universidad de Cuenca

Facultad de Ciencias Qumicas - Carrera de Bioqumica y Farmacia


Cuenca-Ecuador

INFORME DE LABORATORIO DE MICOLOGIA


PRACTICA # 4
TEMA: Tcnicas de siembra
INTEGRANTES: Sofa Snchez y Anita Quito
GRUPO # 9A
FECHA: 16/04/2015

OBJETIVOS
Aplicar las tcnicas de siembra en diferentes muestras.
Observar y diferenciar el crecimiento de levaduras y mohos en medios de cultivo en caja y
en tubo.
Conocer las tcnicas de siembra aplicadas en Micologa Clnica.

MARCO TEORICO

Siembra de cultivos: introducir artificialmente una porcin de muestra


(inculo) en un medio adecuado con el fin de iniciar un cultivo y luego el medio
de cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento. (Arvalo,
2008)
Tcnicas de siembra:
Zigzag y por agotamiento empleado para muestras liquidas y la tcnica en
varios puntos para muestras secas.(Gua )
Tcnica de Agotamiento
Es un buen mtodo para el aislamiento de colonias (obtencin de colonias
aisladas): mediante esta tcnica buscamos obtener colonias separadas a partir
de un inoculo. Para su realizacin se toma la caja de Petri en la palma de la
mano y ligeramente inclinada: con la mano contraria, se manipula el asa de
argolla previamente esterilizada por flameado directo a la llama y con ella se
recoge el material de cultivo, para colocarlo en un rea perifrica de la caja
haciendo movimientos circulares para homogenizar el inoculo; a continuacin
se realiza una estra partiendo de la primera y arrastrando los microorganismos
presentes en ella hacia el extremo contrario de la superficie del agar. Se debe
procurar que en cada seccin de la caja las estras queden trazadas con mayor
separacin.(Rojas, 2011)
Tcnica de zig-zag
Depositamos la muestra lo ms alejado de nosotros y realizamos la siembra en
forma de zig-zag. De esta forma vamos descargando la muestra del asa. Es
importante no volver a repasar el trozo de medio de cultivo que ya hemos
sembrado. Para conseguir que al final de la estra tengamos colonias aisladas
es importante que al principio hagamos la estra ms junta y que la cantidad
de muestra tomada en el asa sea la adecuada. (Rojas, 2011)

Tcnica de varios puntos


En profundidad con asa de punta se pica con el asa el cultivo a sembrar y se
introduce mediante puncin en el medio contenido en la parte inferior del tubo.
(Seeley, 2006)

MATERIALES Y METODOS
Materiales:

Asas
Cajas Petri con SDA Reactivos para tinciones: ALF y
Gram
Tubos con SDA y SDA con antibitico
Mechero

Muestras
Cultivo en medio liquido con levaduras # 1
Cultivo en medio liquido con bacterias # 3
Vegetal contaminado con hongos

MTODOS:
De siembra:
Tcnica de zigzag
Siembra en varios puntos
Tcnica de agotamiento
De observacin directa:
Tincin de Gram
Azul de lactofenol
PROCEDIMIENTO

MUESTRAS

Escamas de
lesin de Muestra 3 Muestra 3a
sarna de perro
sembrar en: sembrar en: sembrar en:

SDA + SDA +
SDA simple Mycosel
antibitico antibitico
T. varios T. varios T. por
puntos puntos T. zig zag agotamiento

incubar a
25C

tincin de gram.
tincin de
lactofenol:
directa y scotch
tape

observar al
microscopio

Procedimiento para teir las muestras


Azul de
Tincion de gram
lactofenol
colocamos las util para los
muestras tomadas medios con
de los cultivos en un SDA y
portaobjetos MYCOSEL
Una gota de
fijamos la muestra azul de
lactofenol en la
placa

violeta de cristal tomar una


1min y lavar asada de la
muestra

solucion yodica colocar en la


1min y lavar placa

alcohol cetona 30 s observar con el


lavar y secar lente de 40x

observamoscon el
lente de 100x

RESULTADOS:

CARACTERISTICAS SDA + antibitico SDA + antibitico MYCOSEL SDA simple


MACROSCOPICAS
en el tubo en caja petri (en tubo) (en tubo)
Colonia Blanco Blanco Blanca Blanca
Color Reverso Blanco Blanco Amarillenta Blanca
Pigmen No existe No existe Negro Negro
to del
medio
Tamao de la En todo el medio Crecimiento en En todo el tubo En pocas partes
colonia partes
Dimetro 1mm de la colonia 2mm
Apariencia Granuloso Granuloso Algodonosa Cremosa

Grficos

CARACTERSTICAS MICROSCPICAS:
Escamas de sarna de Colonia 1 Colonia 2
perro en Mycosel
Caractersticas Hongo filamentoso Hongo filamentoso
Microscpicas
Micelio: Septado Continuo
Hialino Hialino
Delgado Grueso
Produccin, Tamao y Conidias producidas por No se observaron
Disposicin de las simple separacin de los conidias.
conidias tabiques, de tamao
pequeo.

GRAFICOS

Escamas de sarna de Colonia


perro en SDA simple
Caractersticas Hongo filamentoso
Microscpicas
Micelio: Continuo
Hialino
Grueso
Produccin, Tamao y No se observaron conidias.
Disposicin de las
conidias

GRAFICO
Muestra 3
(SDA +
antibitico)
Muestra 3a
Levaduras carcter Gram positiva.
(SDA +
Caractersticas
Bacilos Gram negativo. antibitico)
Microscpicas
Caractersti Levaduras carcter Gram
Cocos Gram positivos
cas positiva.
Microscpic Bacilos Gram negativo en
as poca cantidad

GRAFICO

GRAFICO

CONCLUSIONES

En esta prctica se aprendi las tcnicas de siembra con la finalidad de poder


observar microorganismos en los cultivos realizados.

Es importante seguir todos los pasos para lograr un cultivo adecuado ya que de
este depender ver las caractersticas microscpicas como macroscpicas.

En las muestras de escamas de sarna de perro en SDA simple como en Mycosel


se logr un cultivo en ptimas condiciones ya que tanto para las caractersticas
macroscpicas como microscpicas hubo un crecimiento grande de colonias en
la que se pudo observar fcilmente.

En el caso de las muestras 3 y 3a en SDA + antibitico a pesar que el medio


contiene antibitico se presentaron bacterias Gram + y Gram -, presencia que
pudo ser por una contaminacin del medio.
Recomendaciones:

Esterilizar correctamente las asas.

Trabajar siempre en un medio asptico.

BIBLIOGRAFIA

Rojas, A. (2011).Conceptos y prcticas de microbiologa general.

Seeley H. W., (2006). Microbios en accin. Laboratorio Manual de


Microbiologa. Cuarta Ed.WH Freeman, Nueva York

Arevalo, A. (2008). Tcnicas de aislamiento. Laboratorio de Microbiologa.

Gua de laboratorio de la Dra. Carmen Lucia Lopez.