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PRCTICAS DE
LABORATORIO
CARRERA
ASIGNATURA
FICHA TECNICA
MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO ITA-IBT
PRCTICA DE LABORATORIO
MICROBIOLOGA GENERAL
Fecha: 03-SEP-2015
Nombre del catedrtico: JUANITA YAZMIN DAMIAN ALMAZO
Clave:
ID. 1619
Nmero de prctica: 03 Duracin en horas: 03
COMPETENCIAS HABILIDADES
Capacidad para aplicar conocimientos de biologa Al finalizar la prctica el alumno ser capaz de:
celular de procariontes para seleccionar los tipos - Hacer frotis y fijacin de microorganismos obtenidos de
de tincin a usar. muestras slidas y lquidas para poder aplicar tcnicas
Habilidad en el uso de tcnicas de manipulacin, de tincin dependiendo de la caracterstica morfolgica
fijacin y tincin de microorganismos. que se quiera determinar mediante microscopia.
Capacidad de trabajar en equipo.
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OBJETIVO
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EQUIPO REQUERIDOS
NOMBRE ESPECIFICACIONES
1 Microscopio
REACTIVOS REQUERIDOS
NOMBRE CANTIDAD S I R O
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S: Riesgo a la Salud I: Riesgo de Incendio R: Riesgo de reactividad O: Riesgo Especifico
PROCEDIMIENTO O METODOLOGA
NOTA.- Deposita todos los desechos generados de los lavados en el puente de varillas de cristal en la
charola de fondo bajo
NOTA: Es indispensable que durante la realizacin de esta prctica se utilicen guantes y cubrebocas.
a) Despus de verificar que los portaobjetos y cubreobjetos se encuentran limpios se aplica con la ayuda de
los palillos una muy pequea muestra del sedimento del agua estancada en la parte central del portaobjetos
tratando de desbaratarla lo mas posible, y con ayuda del gotero se coloca una muy pequea cantidad del
agua de la muestra sobre el sedimento.
b) Se coloca con cuidado el cubreobjetos sobre la muestra procurando que no queden burbujas de aire.
c) El portaobjetos con la muestra se coloca sobre la platina del microscopio y la muestra se observa con el
objetivo de 10X, una vez localizado algn microorganismo se hace la visualizacin con el objetivo 40x.
Registra las observaciones de los diferentes microorganismos que se hayan encontrado en la muestra
(apariencia, estructuras celulares y descripcin de movimiento) con cada uno de los aumentos.
NOTA: Es indispensable que durante la realizacin de esta prctica se utilicen guantes y cubrebocas.
b) En condiciones estriles se toman dos o tres gotas del pre-inculo lquido (previamente agitado para
homogenizar el cultivo bacteriano) utilizado en la Prctica 2: TCNICAS Y MTODOS DE AISLAMIENTO Y
SELECCIN DE MICROORGANISMOS con el asa bacteriologica esteril y se colocan en la parte central un
portaobjetos limpio y rotulado en un extremo procurando extender las gotas en forma circular sin que
alcancen los bordes del portaobjetos.
d) El portaobjetos con la muestra se deja a temperatura ambiente hasta que el lquido se evapore.
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a) Se esteriliza el asa bacteriolgica en la flama del mechero y se deja enfriar.
b) Con ayuda del asa bacteriolgica estril se colocan una o dos gotas de agua sobre la parte central de un
portaobjetos limpio y rotulado en un extremo con el nombre de la muestra.
d) En condiciones estriles se toma una pequea cantidad de una colonia (la ms aislada) de las cajas con
el pre-inoculo estriado o plaqueado en la prctica 2: TCNICAS Y MTODOS DE AISLAMIENTO Y SELECCIN DE
MICROORGANISMOS y con ayuda del asa se dispersa en la gota de agua colocada en el portaobjetos.
f) El portaobjetos con la muestra se deja a temperatura ambiente hasta que el lquido se evapore.
g) Se repite el procedimiento (incisos (a-f)) para tener dos portaobjetos con frotis de colonias de pre-inculo
(cajas de la prctica 2: TCNICAS Y MTODOS DE AISLAMIENTO Y SELECCIN DE MICROORGANISMOS) y dos
portaobjetos con frotis de una colonia obtenida de muestras ambientales (cajas de la prctica 1:
PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE MATERIAL Y MEDIOS DE CULTIVO)
a) Una vez que los frotis con muestras lquidas y slidas estn secos se pasan dos o tres veces sobre la
flama del mechero siempre con la muestra hacia arriba para no quemarla. Se debe de evitar que el calor sea
excesivo para no alterar la muestra (se puede sujetar el portaobjetos con pinzas para ayudar a flamearlo y
evitar quemaduras).
a) Se coloca un portaobjetos de la muestra fijada con el frotis del pre-inculo en medio lquido, y un
portaobjetos con el frotis fijado del pre-inculo en medio slido y un portaobjetos con el frotis fijado de la
muestra ambiental de medio slido sobre el puente de varillas de cristal y con ayuda de un gotero se cubren
las muestras con azul de metileno evitando que escurra.
b) Se deja actuar el colorante durante 1 minuto sobre la muestra, posteriormente se escurre el exceso del
colorante y se lava suavemente el portaobjetos con la piceta de agua destilada para eliminar el exceso de
colorante.
c) Los portaobjetos se colocan sobre papel absorbente y las gotas de agua remanentes se dejan secar a
temperatura ambiente.
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d) Una vez secos se coloca un cubreobjetos sobre la muestra y se observa en microscopio. La ubicacin de
los microorganismos puede hacerse con el objetivo del menor aumento y despus se emplea el objetivo
100x para observar sus caractersticas. Previo a la observacin con el objetivo 100x debe colocarse una
gota de aceite de inmersin entre el cubreobjetos y el lente del microscopio.
e) Una vez registradas las observaciones de morfologa y agrupacin bacteriana el portaobjetos se retira del
microscopio y se coloca en un recipiente de vidrio con solucin desinfectante y el lente con el objetivo 100x
del microscopio se limpia para eliminar el aceite de inmersin.
a) Se coloca un portaobjetos limpio y rotulado sobre el puente de varillas de cristal y con ayuda del asa
bacteriolgica estril se coloca una pequea gota de nigrosina o tinta china en un extremo del portaobjetos
(aproximadamente a 0.5 cm del borde).
d) Con el extremo de otro portaobjetos se extienden las gotas de la muestra mezclada con el colorante a lo
largo de la superficie del portaobjetos donde esta contenida. El portaobjetos que se us para hacer la
extensin del cultivo se deposita en solucin desinfectante.
e) Los portaobjetos con la mezcla de colorante y bacterias extendidas se dejan secar a temperatura
ambiente. NO SE FIJAN CON CALOR.
f) Una vez secos, se coloca un cubreobjetos sobre la muestra y se observa en microscopio con los objetivos
10x, 40x y 100x. Previo a la observacin con el objetivo 100x debe colocarse una gota de aceite de
inmersin entre el cubreobjetos y el lente del microscopio.
g) Una vez registradas las observaciones el portaobjetos se retira del microscopio y se coloca en un
recipiente con solucin desinfectante y el lente con el objetivo 100x del microscopio se limpia para eliminar
el aceite de inmersin.
NOTA: Es indispensable que durante la realizacin de esta prctica se utilicen guantes y cubrebocas.
a) Se coloca un portaobjetos con el frotis fijado del pre-inculo en medio slido y un portaobjetos con el frotis
fijado de la muestra ambiental de medio slido sobre el puente de varillas de cristal y con ayuda de un
gotero se cubren las muestras con cristal violeta evitando que escurra.
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b) Se deja actuar el colorante sobre las muestras durante 30 segundos, posteriormente se escurre el exceso
del colorante y se lavan suavemente los portaobjetos con la piceta de agua destilada aproximadamente
durante dos o tres segundos.
c) Con ayuda de un gotero las muestras lavadas se cubren con la solucin idica de Gram y se deja actuar
durante 1 minuto.
d) Se escurre la solucin y las muestras se lavan con alcohol etlico 95% (durante 10 a 20 segundos).
Posteriormente los portaobjetos se lavan durante unos segundos con la piceta de agua destilada
e) Con ayuda de un gotero las muestras se cubren con safranina y de deja actuar durante 20 segundos.
Posteriormente la solucin de safranina se escurre y las muestras se lavan con la piceta de agua destilada.
f) Los portaobjetos se colocan entre papel absorbente para secar las gotas de agua remanentes.
g) Una vez secos, se coloca un cubreobjetos sobre las muestras y se observa en microscopio con los
objetivos 10x, 40x y 100x. Previo a la observacin con el objetivo 100x debe colocarse una gota de aceite de
inmersin entre el cubreobjetos y el lente del microscopio.
h) Una vez registradas las observaciones el portaobjetos se retira del microscopio y se coloca en un
recipiente con solucin desinfectante y el lente con el objetivo 100x del microscopio se limpia para eliminar
el aceite de inmersin.
NOTA: Es indispensable que durante la realizacin de esta prctica se utilicen guantes y cubrebocas.
b) Con la ayuda de las pinzas previamente esterilizadas en mechero se toma un trozo de cinta adhesiva de
aproximadamente 1cm2.
c) En condiciones aspticas se abre la caja del cultivo con el hongo y se presiona ligeramente la parte
adhesiva de la cinta contra el micelio.
d) Se coloca la cinta sobre la gota de lactofenol azul de algodn del portaobjetos procurando que quede
extendida evitando hacer mucha presin para evitar daar hifas y cuerpos fructferos. Inmediatamente
despus se esteriliza la pinza utilizada en el mechero.
e) Una vez extendida la cinta adhesiva con el micelio en el portaobjetos se adiciona una gota del colorante
lactofenol azul de algodn sobre la cinta y se coloca un cubreobjetos.
f) La muestra se coloca en el microscopio y se registran las observaciones hechas con los objetivos de 10x y
40x.
g) Una vez registradas las observaciones de morfologa del hongo, el portaobjetos se retira del microscopio
y se coloca en un recipiente con solucin desinfectante.
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REPORTE DE LA PRCTICA
El reporte de la prctica se realizar tomando en consideracin los apartados a evaluar en la rbrica
de evaluacin descrita en la matriz de sesiones.
Toma video o fotografa de los resultados vistos en el microscopio para anexarlos al reporte de tu
prctica y poder correlacionarlos con la estructura celular de los microorganismos
DISCUSIN
CONCLUSIN
BIBLIOGRAFA
Consultada por el maestro y por el alumno