TECNICAS DE CULTIVO DE MICROORGANISMOS

OBJETIVOS.
Aplicar la tcnica adecuada de preparacin del rea de trabajo y medidas de prevencin de
contaminaciones.
Manipular los cultivos puros con la debida tcnica especializada.
Conocer los principales mtodos de cultivo utilizados para las diversas especies de
microorganismos.
Identificar y describir las caractersticas macroscpicas y microscopias que poseen algunas
bacterias.
Organizar e interpretar los resultados del estudio macroscpico y microscpico de bacterias.

1. PARTE EXPERIMENTAL.
1.1 EQUIPOS.
Microscopio electrnico.

1.2 REACTIVOS.
Hipoclorito de Sodio (NaClO)
Azul de metilo (C16H18ClN3S)

Cultivos puros de bacterias y levaduras:

Escherichia coli
Serratia marcescens
Micrococcus luteus
Pseudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Saccharomyces cerevisiae
Lysteria spp.

2. PROCEDIMIENTOS.

En esta prctica los utensilios utilizados se marcaron con el nmero del grupo, el nombre del
microorganismo y la fecha; 5 cajas Petri, 1 tubo de ensayo con caldo BHI, 2 con agar inclinado y 1 con
medio semislido gelatina. Se dividi por secciones enumeradas del 1 al 8 las 4 cajas Petri con agar BHI,
EMB, McConkey y Cetrimide.

El microorganismo que se fue asignado a este grupo para el presente experimento fue el Klebsiella
Pneumoniae y corresponde a la seccin 7 de las cajas Petri utilizadas.

MTODO DE SIEMBRA DEL MICROORGANISMO.

CAJA PETRI 1 (BHI EXPANDIDO).

Esta caja Petri se dividi en 3 secciones siendo la del medio la de mayor tamao, usando un asa
bacteriolgica se inocul con el microorganismo mediante la tcnica de extendido, exponiendo el asa con
el microorganismo al fuego cada vez que se sembraba.

CAJA PETRI 2 (BHI TODOS).

Esta caja Petri se dividi en 8 secciones, con el asa bacteriolgica se realiz la siembra del
microorganismo en la Seccin # 7 mediante la tcnica de estra. Las otras secciones se inocularon con
muestras de los otros microorganismos utilizados.
CAJA PETRI 3 (EMB) CAJA PETRI 4 (CETRIMIDE) CAJA PETRI 5 (McCONKEY)
Estas cajas Petri se dividieron en 8 secciones, y se inocularon utilizando un asa redonda con el
microorganismo en la seccin #7 de cada una de ellas, en las dems secciones se inocularon con los
microorganismos correspondientes a cada nmero.

TUBO DE ENSAYO CON CALDO BHI.

Se realiz la inoculacin mediante la transferencia del microorganismo a los 7 mL de caldo BHI a travs
de un asa redonda.

TUBOS CON AGAR INCLINADO.

- Se inocul el tubo #1 mediante la transferencia del microorganismo al agar, utilizando un asa y
Realizando una estra recta, y el tubo #2 realizando una estra ondulada.

TUBO CON AGAR SEMISLIDO GELATINA.

Se inocul este tubo mediante la picadura del agar semislido con el asa recta que contena el
microorganismo.

Se incubaron los tubos y las cajas Petri a 37 C durante 24 horas en condiciones aerbicas.
Transcurrido el tiempo de incubacin, revisar y guardar en refrigeracin a 4C hasta su lectura.

RESULTADOS.

Figura 1. Tubo Semislido Gelatina, Agar BHI Inclinado Ondulado, Agar BHI Inclinado Liso, Caldo
Inoculado. (Izq.-der.)

Figura 2. Tubo Semislido Gelatina con picadura en medio (Izq.) y Agar BHI inclinado con estra
ondulada (Der).
Figura 3. Tubo con Agar BHI inclinado liso (Izq.) y Caldo inoculado con asa.

Figura 4. Cajas Petri inoculadas mediante la tcnica por extensin (Cetrimide, Mc Conkey, EMB, BHI,
BHI) (izq.-der.)

Figura 5. Caja Petri BHI inoculada mediante la tcnica de Agotamiento.

Figura 6. Caja Petri BHI inoculada en la seccin 7 con el microorganismo Klebsiella Pneumoniae, y en
las otras secciones con el microorganismo correspondiente.
Figura 7. Caja Petri EMB inoculada en la seccin 7 con el microorganismo Klebsiella Pneumoniae, y en
las otras secciones con el microorganismo correspondiente.

Figura 8. Caja Petri McConkey inoculada en la seccin 7 con el microorganismo Klebsiella Pneumoniae,
y en las otras secciones con el microorganismo correspondiente.

Figura 9. Caja Petri Cetrimide inoculada en la seccin 7 con el microorganismo Klebsiella Pneumoniae, y
en las otras secciones con el microorganismo correspondiente.
Figura 10. Placa BHI por extensin vista en el microscopio a 10X (Izq.) y 100X (Der).

Figura 11. Placa BHI por extensin sometida a Tincin, vista en el microscopio a 4X (Izq.) y 10X (Der).

Figura 12. Placa BHI por extensin sometida a Tincin, vista en el microscopio a 100X (Izq.) y 1000X
(Der).
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS Y DE CRECIMIENTO EN MEDIOS
LQUIDOS, SEMISLIDOS Y SLIDOS, INOCULADOS MEDIANTE DIFERENTES
TCNICAS
Nombre cientfico de la bacteria: Klebsiella Pneumoniae

Presentacin del medio de cultivo Caractersticas de desarrollo Resultados

y tcnica de siembra
Caractersticas microscpicas Forma Cilindrica.
Agrupacin Bacilar.
Gram Negativa
Caldo inoculado con Superficial (pelicular o anillado) Anillado
Asa Sedimento Sedimento Blanco
Turbiedad Bastante turbio con partculas
blanquecinas semislidas,
color amarillo oscuro y olor
desagradable.
Picadura en medio Movilidad (+ o -) Ninguna
Semislido Caractersticas de crecimiento No evidente. Creacin de
burbujas en la superficie.
Color amarillo.
Consistencia (seca, hmeda) Los 2 hmedos.
Agar inclinado Forma del crecimiento: (filiforme, 1 y 2 perlados.
Tubo 1 recta. perlado o
Tubo 2 Ondulado. arborescente)
Color Blanquecino en la muestra
sembrada El gel amarillo
oscuro.
Textura (acuosa, butirosa, 1 y 2 poseen una textura
cremosa, Butirosa.
membranosa, viscosa) Los resultados nos indican
que es un microorganismo
productor de gas.
Placa por extensin Desarrollo masivo o confluente Desarrollo masivo.
Presencia de colonias aisladas Algunas colonias aisladas.
Color Blanquecino.
 Placa por estra Caractersticas de las colonias:
Forma (puntiforme, circular,
ameboide,
rizoide, fusiforme)
Color (blanquecino, blanco opaco, Resultados especificados a
Amarillo etc.) continuacin:
Borde (entero, ondulado, lobulado,
crenado, filamentoso)
Elevacin (plana, elevada,
convexa,
rugosa, papilar, embonada)
Textura (acuosa, butirosa,
cremosa,
membranosa, viscosa)
Consistencia (seca, hmeda)
Presencia de colonias aisladas

CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS.

BHI
FORMA: Circular.
COLOR: Blanquecino.
BORDE: Ondulado ( circular expandido).
ELEVACIN: Un poco elevada.
TEXTURA: Cremosa.
CONSISTENCIA: Hmeda.
PRESENCIA DE COLONIAS AISLADAS: Algunas colonias aisladas.

EMB
FORMA: Fusiforme (con pequeos puntos).
COLOR: Blanquecino con bordes negros (Algunos).
BORDE: Lobulado.
ELEVACIN: Plana.
TEXTURA: Viscosa.
CONSISTENCIA: Hmeda.
PRESENCIA DE COLONIAS AISLADAS: Pocas colonias aisladas.

CETRIMIDE
FORMA: Circular.
COLOR: Blanco.
BORDE: Ondulado.
ELEVACIN: Plana.
TEXTURA: Butirosa.
CONSISTENCIA: Seca.
PRESENCIA DE COLONIAS AISLADAS: No; Solo una colonia observable.

McCONKEY
FORMA:
COLOR: Blanquesino con bordes rojizos.
BORDE: Lobulado.
ELEVACIN: Con poca elevacin.
TEXTURA: Cremosa.
CONSISTENCIA: Humedo.
PRESENCIA DE COLONIAS AISLADAS: No.
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS Y DE CRECIMIENTO DE BACTERIAS

Nombre cientfico de la bacteria: Klebsiella Pneumoniae

Caractersticas Forma Circular.

coloniales Color Blanquecino.
Elevacin Un poco elevada.
Textura Cremosa.
Aspecto (seco, hmedo) Hmedo.
Caractersticas microscpicas Forma Pequeos circulos.
Otras estructuras Algunas estructuras ovaladas y
otras alargadas.
Gram Negativa