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Curso de Anlisis Qumico - Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales -UNLP

INTRODUCCIN A LOS MTODOS


ESPECTROSCPICOS DE ANALISIS

Objetivos

Entender las nociones bsicas del espectro electromagntico.


Comprender los conceptos relativos a la interaccin entre la radiacin electromagntica
y la materia.
Enunciar la ley de Lambert Beer, comprender el significado de las magnitudes que
intervienen en ella e interpretar la naturaleza de las desviaciones de esa ley.
Describir los componentes bsicos de los instrumentos para mediciones de absorcin de
radiacin ultravioleta- visible, espectrofotmetros.
Conocer las aplicaciones de los mtodos espectrofotomtricos en las regiones visible y
ultravioleta.

1.- Introduccin
Histricamente el trmino espectroscopia se refera slo a la regin visible del espectro,
donde la luz se descompona en sus longitudes de onda originndose espectros que se usaban
para estudiar la estructura de la materia o para anlisis cualitativos o cuantitativos. Con el
paso del tiempo, se ampli el significado para incluir todo el espectro de radiaciones
electromagnticas. Sin embargo en la actualidad, el significado de espectroscopia es ms
amplio an, ya que incluye otros tipos de radiacin como por ejemplo con iones
(espectroscopia de masas), de electrones (espectroscopia de electrones) y ondas de sonido
(espectroscopia acstica).
Cuando la radiacin electromagntica pasa desde el vacio a la superficie de una porcin de
materia, interacta con los tomos y/o molculas del medio. La naturaleza de esta interaccin
depende de las propiedades de la materia y puede dar lugar a la desviacin, transmisin,
absorcin y emisin de la radiacin.
Cuando el fenmeno involucra una desviacin del haz de luz los mtodos se conocen con el
nombre de No espectroscpicos, mientras que en todas las otras interacciones se puede
obtener un espectro y se conocen con el nombre de mtodos Espectroscpicos.
Abordaremos primero los mtodos espectroscpicos de absorcin

2. Mtodos espectroscpicos de Absorcin


Al pasar la radiacin electromagntica por una capa transparente de un slido, lquido o gas,
pueden eliminarse selectivamente ciertas frecuencias como consecuencia del proceso llamado
absorcin. En este caso la radiacin electromagntica se transfiere a los tomos o molculas
que constituyen la muestra, como resultado de ello estas partculas pasan del estado de menor
energa o fundamental a estados de mayor energa o estados excitados absorbiendo un fotn.

3.- Introduccin a la radiacin electromagntica

La radiacin electromagntica es una combinacin de campos elctricos y magnticos


oscilantes, que se propagan a travs del espacio transportando energa de un lugar a otro. A
diferencia de otros tipos de onda, como el sonido, que necesitan un medio material para
propagarse, la radiacin electromagntica se puede propagar en el vaco. Muchas de las
propiedades de la radiacin electromagntica se explican convenientemente mediante la

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teora ondulatoria clsica con parmetros como velocidad, frecuencia, longitud de onda y
amplitud. La teora ondulatoria para la radiacin electromagntica no explica completamente
los fenmenos asociados con la absorcin o la emisin de energa radiante, para estos
procesos es necesario considerar la energa radiante como un flujo de partculas discretas de
energa llamados fotones o cuantos.
Estos dos conceptos se complementan muy bien (dualidad, onda partcula) y se aplican tanto
al flujo de electrones como al de otras partculas elementales.

3.1- Propiedades de las ondas

La radiacin electromagntica se representa adecuadamente como un campo elctrico y otro


magntico que estn en fase, con oscilaciones sinusoidales en ngulos recto de uno respecto a
otro y respecto a la direccin de propagcin.
La figura 1 es una representacin de este tipo para un rayo individual de una radiacin
electromagntica polarizada en el plano. Polarizada en el plano significa que todos los
osciladores tanto para el campo elctrico como para el campo magntico estn en un solo
plano.
En la figura 2, puede verse la representacin bidimensional de la componente elctrica del
rayo de la figura 1. La abscisa de esta grfica puede ser el tiempo, cuando la radiacin
atraviesa un punto fijo del espacio o la distancia cuando el tiempo se mantiene constante.
A lo largo de esta explicacin, slo se consider la componente elctrica de la radiacin, ya
que el campo elctrico es el responsable de la mayora de los fenmenos que nos intereran,
como la transmisin, reflexin, refraccin y absorcin. Sin embargo debemos sealar que la
componente magntica de la radiacin electromagntica es la responsable de la absorcin de
las ondas de radiofrecuencias en la espectroscopa de resonancia magntica nuclear.

Figura 1 Figura 2

3.1.2- Parmetros ondulatorios

Como ya hemos visto, la radiacin electromagntica puede ser descrita como una onda. Los
parmetros que la definen son:

Perodo (p): tiempo necesario para que dos mximos sucesivos de una onda pasen por un
punto.
Longitud de onda ( ) es la distancia lineal entre dos mximos consecutivos de la onda. Se
mide en unidades de distancia: por ejemplo, metros (m) o cualquiera de sus submltiplos,
como el ngstrom (1 = 10-10 m) o los nanometros nm (1 nm = 10-9m).

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La frecuencia ( ) se define como el nmero de de oscilaciones del campo elctrico por


segundo y es igual 1/p (1 ciclo por segundo = 1 Hertz, Hz). La frecuencia es una magnitud
invariable que est determinada por la fuente de radiacin
La amplitud (A) se define como la longitud del vector elctrico en el mximo de la onda.

Debido a que la velocidad de la luz es constante e igual a c (2,997921010 cm/s), existe una
relacin directa entre la frecuencia y la longitud de onda, ya que dada una longitud de onda
determinada, si sabemos que la onda se desplaza a velocidad c, para saber el nmero de veces
que pasa un mximo por un punto, slo hace falta dividir la velocidad de la luz por la longitud
de onda. Tenemos, por tanto, que:
c

Otra forma de describir la radiacin electromagntica es a travs del nmero de onda ( ), que
est definido como el inverso de la longitud de onda en centmetros. La unidad de es cm-1,
que es el nmero de ondas de una frecuencia dada en el trayecto de 1 cm.

3.2- Caractersticas de partcula

Para comprender muchas de las interacciones entre la radiacin y la materia se necesita


postular que la radiacin electromagntica est constituda por paquetes de energa llamdos
fotones (o cuantos). La energa de la radiacin electromagntica est directamente
relacionada con la frecuencia de la radiacin:
E h
donde h es la constante de Plank (6,63 10-34 J.s). Si utilizamos la relacin entre la frecuencia
y la longitud de onda y/o el nmero de onda, podemos escribir esta relacin como sigue:
c
E h h c

Esta expresin nos expresa que las ondas con una frecuencia alta sern muy energticas,
mientras que aquellas cuyas frecuencias sean bajas (y, por tanto, su longitud de onda grande)
transportarn menos energa.

3.3 Espectro electromagntico

El espectro electromagntico comprende un intervalo enorme de longitudes de onda y


energas. De todas esas energas, la luz visibleno es ms que radiacin electromagntica en un
rango de frecuencias a las que el ojo humano (y el de la mayora de las especies dotadas de
visin) es sensible que abarca desde alrededor de 300 nm hasta 800 nm. El hecho de que
estemos dotados para la visin en el rango visible, nos permite aprovechar el mximo de
emisin del Sol que se produce en este rango. Probablemente, si nuestro Sol tuviese su
mximo en el infrarrojo, nuestros ojos estaran dotados para ese tipo de visin. Pero el
espectro electromagntico no tiene una frecuencia mxima o mnima, sino que se extiende
indefinidamente, ms all de los estrechos lmites de sensibilidad del ojo humano.
En orden creciente de frecuencias (y por tanto, de energa) el espectro est compuesto por las
ondas de radio, el infrarrojo, la luz visible, el ultravioleta, los rayos X y los rayos gamma.
Puede observarse en la figura que que la radiacin visible, comnmente llamada luz, slo
representa una fraccin pequea del espectro electromagntico.

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En el espectro electromagntico suelen diferenciarse las siguientes zonas:

1. Ondas de radio: son las ondas electromagnticas que se utilizan en telecomunicaciones.


Incluye las ondas de radio y de televisin. Su rango de frecuencia comprende desde unos
pocos hercios hasta 1109 Hz, distinguindose en esta zona diferentes bandas.

2. Microondas: se utilizan en sistemas de comunicaciones como el radar o la banda UHFde


televisin y tambin en los hornos de microondas. Su rango de frecuencias comprende
desde 1109 Hz hasta 11011Hz.

3. Infrarrojos: son las ondas electromagnticas que emiten los cuerpos calientes. Tienen
diferentes aplicaciones en industria, medicina, etc. Comprenden la zona incluida entre
11011Hz y 41014Hz.

4. Luz visible: incluye una estrecha franja entre 41014Hz y 81014Hz. Corresponde a esta
banda las frecuencias que asociadas a cada color.

5. Ultravioleta: esta banda comprende el rango de frecuencias que va de 81014Hz hasta


11017Hz. Estas ondas electromagnticas son producidas por los electrones que se
encuentran en los tomos y molculas excitados.

6. Rayos X: comprende una gama de frecuencias que incluye desde 11017Hz hasta
11019Hz. Son producidos por los electrones que estn ms fuertemente ligados al tomo.

7. Rayos gamma: estas ondas electromagnticas comprenden las frecuencias incluidas a partir
de 11019Hz. Su origen reside en el ncleo del tomo. Son producidos por numerosas
sustancias radioactivas. Su manipulacin requiere protecciones muy especiales.

4. Absorcin de la radiacin

Qu pasa cuando un tomo, in o molcula, absorbe radiacin electromagntica?

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Cuando la radiacin pasa a travs de una capa de un


slido, un lquido o un gas, ciertas frecuencias
pueden eliminarse selectivamente por absorcin, un
proceso en el que la energa electromagntica se
transfiere a los tomos, iones o
molculas constitutivas de la
muestra.

La absorcin promueve a estas partculas desde su estado normal a


temperatura ambiente, o estado fundamental o basal, a uno o varios
estados excitados de una energa ms elevada.
Segn la teora cuntica, los tomos, molculas o iones slo tienen un
nmero limitado de niveles de energa discretos y, por lo tanto, para que
se produzca la absorcin de la radiacin, la energa de los fotones excitados debe coincidir
exactamente con la diferencia de energa entre el estado fundamental y uno de los estados
excitados de la especie absorbente. E estado exitado E estado basal h .
La excitacin de una especie M a su estado excitado M* se puede representar por la ecuacin:
M h M * , despus de un perodo corto de aproximadamente 10-8s la especie excitada se
relaja (vuelve al estado fundamental) transfiriendo el exceso de energa a los otros tomos,
molculas o iones. Durante este proceso se produce un aumento de la temperatura del medio y
se puede representar:

M * M calor
Ya que estas diferencias de energa son particulares para cada especie, el estudio de las
frecuencias de radiacin absorbidas proporciona un medio de caracterizar a los constituyentes
de una muestra. Con este fin se representa la absorbancia en funcin de la longitud de onda, a
esta representacin se la llama espectro de absorcin. En general la naturaleza de un espectro
viene influida por varibles como: la complejidad de los niveles energticos, el estado fsico y
entorno de las especcies absorbentes. Sin embargo, las diferencias entre los espectros de
absorcin de tomos y molculas es ms profunda.

4.1 Absorcin atmica

El paso de la radiacin ultravioleta o visible a travs de


un medio constituido por partculas monoatmicas, como
por ejemplo, mercurio o sodio gaseosos, produce la
absorcin de unas pocas frecuencias, bien definidas. La
relativa
simplicidad de
tales espectros se
debe al pequeo
nmero de
posibles estados
energticos de las
partculas absorbentes. Por lo tanto sus espectros slo
presentan unas pocas lneas.
La exitacin slo puede producirse mediante un
proceso electrnico en el que uno o varios de los
electrones del tomo se promocionan a un nivel de
energa ms alto.

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Por ejemplo el espectro de vapor de sodio mostrado en la figura muestra los dos picos agudos
de absorcin en la regin amarilla del espectro visible que son consecuencia de la exitacin
del electrn 3s a los dos estados 3p que difieren muy poco en energa

4.2 Absorcin molecular


E s p e c tr o d e v a p o r d e s o d io

a b s o r b a n c ia
25
Los espectros de absorcin de las molculas
poliatmicas y en particular en estado lquido, son 20

bastante ms complejos que los espectros 15

atmicos, porque el nmero de estados de


excitados disponibles es en general muy grande si
10

se los compara con el nmero de estados 5

disponibles en los tomos aislados. 0

La energa (E) asociada a una molcula est dada 5 8 8 ,5 5 8 9 ,0 5 8 9 ,5 5 9 0 ,0

por tres componentes: lo n g itu d d e o n d a ( n m )


E = Eelectrnica + Evibracional + Erotacional

La energa electrnica representa la energa que proviene de los estados energticos de los
electrones de enlaceLa energa vibracional est asociada con los movimientos de
estiramiento y flexin de los enlaces moleculares.
Los niveles vibracionales son mucho ms
numerosos que los electrnicos y menos
energticos. La energa rotacional es la energa
asociada los movimientos rotacionales dentro de
una molcula. Los niveles rotaciones son ms
numerosos que los vibracionales. As, para cada
estado electrnico de una molcula existen varios
estados vibracionales posibles y, a su vez, para
cada uno de stos son posibles numerosos estados
rotacionales. Por lo tanto, los espectros moleculares
de la regin ultravioleta-visible, se caracterizan por bandas de absorcin (como se muestra en
la figura) que a menudo abarcan un intervalo considerable de longitudes de onda. El motivo
por el cual las bandas de absorcin suelen ser muy anchas es que muchos niveles
vibracionales y rotacionales distintos se encuentran disponibles en niveles energticos
cercanos. Por lo tanto, una molcula podra absorber fotones en un amplio intervalo de
energas y ser an promovida del estado electrnico fundamental a un estado electrnico
excitado particular.

En la siguiente tabla se indican las regiones del espectro que se utilizan en la qumica
analtica, las transiciones atmicas o moleculares responsables de la absorcin o emisin de
radiacin en cada regin.

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Regiones del
Intervalo de
espectro Tipo de transicin
longitudes de onda
electromagntico
Rayos gamma (R) 0,005 - 1,4 Cambio de las configuraciones nucleares
Rayos X (RX),
ultravioleta (UV), 0,1 - 1800 Cambio de las configuraciones electrnicas
visible
Cambio en las configuraciones rotacionales y
Infrarrojo (IR) 0,780 - 300m
vibracionales
Microondas 0,75 - 3,75 mm Cambio en el entorno molecular

5. Procesos de relajacin

Qu ocurre con la energa absorbida?

El tiempo en que un in o molcula permanece en el estado excitado es corto. Existen varios


mecanismos por los cuales pueden devolver el exceso de energa y pasar nuevamente al
estado fundamental, estos procesos se conocen con el nombre de relajacin.

1) Los mecanismos de relajacin sin


emisin de radiacin: El exceso de
energa se transfiere mediante colisiones
a otras molculas, tanto del soluto como
el solvente y el efecto resultante es la
conversin de la energa en exceso en
calor que se distribuye en todo el medio.

2) Los mecanismos de relajacin


que involucran emisin de radiacin las
molculas retornan al estado
fundamental emitiendo un fotn. Estos
procesos son:

a) fluorescencia (F)
b) fosforescencia (P)

En la figura se representan los mecanismos mencionados. Con flechas onduladas se


representan los mecanismos de relajacin sin emisin de radiacin.

6. Leyes de la absorcin molecular en la


regin ultravioleta - visible

Cuando la radiacin electromagntica intercta


con la materia, se produce la absorcin si la
frecuencia de la radiacin se corresponde
precisamente con la energa requerida para elevar
al sistema a un nivel permitido de energa
superior. Por lo tanto, cuando un haz de luz de
una determinada longitud de onda de intensidad

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I0 incide perpendicularmente sobre una solucin de un compuesto qumico que absorbe luz o
cromforo, el compuesto absorber una parte de la radiacin incidente (P0) y dejar pasar el
resto (P).

6.1 Transmitancia

Cuando un haz de potencia radiante P0, incide sobre una muestra de espesor b, debido a la
interaccin entre los fotones y las partculas absorbentes, la potencia radiante del haz
emergente disminuye (P).
En la figura se representa un haz de luz pararlelo antes y despus de haber atravesado una
solucin de una especie absorbente de concentracin c y de espesor b.
Se llama transmitancia, T de la solucin a la relacin entre la cantidad de la radiacin
transmitida por la solucin que lllega al detector una vez que ha atravezado la muestra y la
cantidad de luz que incidi sobre ella y se representa normalmente segn la siguiente
ecuacin:
P
T
P0
A menudo, la transmitancia se expresa como el porcentaje de la luz transmitido
(transmitancia porcentual)
P
%T 100 T 100
P0
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de potencia incidente y transmitida al
pasar por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin no es lineal, pero asume una
relacin logartmica inversa.

Nota: La potencia radiante P se define como la energa por segundo por unidad de rea del
haz de luz.

6.2 Absorbancia

La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos indica la
cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en
consecuencia:
A = log 1/T = -log T = -log P/ Po.
Cuando la potencia incidente y transmitida son iguales (Po = P), la transmitancia es del 100%
e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y A vale log 1 = 0.
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz a travs de la solucin
del cromforo y de la concentracin de ste.
Observar que a diferencia de la transmitancia, la absorbancia de una solucin aumenta cuando
mayor es la atenuacin del haz emergente. La importancia de la absorbancia estriba en que es
directamente proporcional a la concentracin de la especie absorbente en la muestra.

6.3 Ley de Lambert Beer

La ley de Lambert beer establece que la absorbancia de una solucin es directamente


proporcional a su concentracin a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz
con ellas-; y tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin a igual
concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra ms molculas se

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encontrar-; y por ltimo, depende de , una constante de proporcionalidad -denominada


absortividad molar- que es especfica de cada cromforo.

A bC abC

La ecuacin anterior es fundamental para aplicar la espectroscopa en qumica analtica y se


denomina la ley de Lambert Beer o simplemente ley de Beer.

o La absorbancia, A, es adimensional.
o La concentracin de la muestra, C, se suele expresar en moles/litro (M) o en g/litro
o La longitud del camino ptico, b, se expresa en cm.
o La cantidad se llama absortividad molar y sus unidades son litro/mol cm. Cuando
la concentracin es expresada en g/l, debe hablarse de la absortividad a , y sus
unidades son litro/gcm.

La absortividad o absortividad molar es la propiedad caracterstica de las sustancias que


indica cunta luz se absorbe a una longitud de onda dada. Los valores de A y dependen de la
longitud de onda. Por lo tanto es conveniente escribir la ley de Lambert Beer como una
funcin de la longitud de onda.

A( ) ( ) b C a ( ) b C

Cuando representamos la medida de la absorbancia de


una especie en funcin de la longitud de onda, lo que
obtenemos es un espectro de absorcin. Dicha grfica
indica en qu forma A (o /a) depende de la longitud de
onda. En la figura se muestran los espectros de
absorcin de algunas sustancias. La parte de la
molcula a la que se debe la absorcin de la luz se
llama cromforo. La sustancia absorbe ciertas
longitudes de onda de la luz blanca y el ojo humano
detecta las longitudes de onda no absorbidas. El color
de una solucin es el complemento del color de la luz
que absorbe.

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6.4 Medida experimental de la absorbancia


y transmitancia

La absorbancia y la transmitancia, tal como se


define en la ley de Lambert Beer, no pueden
ser medidas en el laboratorio, porque la
solucin en estudio debe estar contenida
dentro de un recipiente. La interaccin entre la
radiacin y las paredes del recipiente es
inevitable, producindose prdidas de potencia
en cada interfase como resultado de
reflexiones y posiblemente de absorcin. Las
prdidas por absorcin son importantes.
Adems de las prdidas por reflexin, puede
darse la dispersin de la potencia del haz al atravesar la solucin, debido a molculas grandes
o a las heterogeneidades del solvente. Para compensar esos efectos, la potencia del haz
transmitida a travs de la celda que contiene la solucin absorbente, por lo general, se
compara con la de un haz que pasa a travs de una celda idntica que contiene slo solvente.
La absorbancia medida experimentalmente se define, pues por la ecuacin:

Psolvente P
A log log 0
Psolucin P

La absorbancia experimental obedece la ley de Lambert-Beer. En adelante, cuando nos


refiramos al trmino absorbancia, entenderemos el cociente definido por la ecuacin
anterior, siendo P0 la potencia de la radiacin despus de atravesar una celda que contiene el
solvente y P la potencia despus de atravesar una celda idntica con la solucin del analito.

7. Limitaciones de la aplicabilidad de la Ley de Lambert-Beer


La relacin lineal entre la absorbancia y la longitud de camino ptico para una concentracin
fija de sustancia absorbente es una generalizacin de la que no se conocen excepciones. Sin
embargo, se presentan desviaciones de la proporcionalidad directa entre la absorbancia y la
concentracin cuando b es constante.
La ley de Lambert Beer establece que la absorbancia es proporcional a la concentracin de
las especies absorbentes. Esto se verifica estrictamente para luz monocromtica y muy bien
en el caso de soluciones diluidas de la mayora de las sustancias.
La ley de Lambert-Beer se justifica considerando las propiedades absorbentes de las
soluciones diluidas, y en ese sentido es una ley lmite.
A concentraciones altas ( 0.01M) las distancias medias entre las partculas disminuyen hasta
tal punto que cada partcula afecta la distribucin de carga de los vecinos. Estas interacciones
pueden alterar la capacidad absorbente de las partculas respecto a una radiacin de
determinada longitud de onda. Dado que el grado de interaccin depende de la concentracin,
la existencia de este fenmeno causa desviaciones de la relacin lineal entre la absorbancia y
la concentracin.
A concentraciones muy diluidas (con muy baja concentracn del absorbente), pero con
concentraciones elevadas de otras especies, en especial electrolitos, la gran proximidad de
estos iones a las especies absorbentes altera la absortividad molar debido a interacciones
electrostticas que conducen a desviaciones de la ley de Lambert-beer.

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7.1 Desviaciones qumicas

Se presentan desviaciones de la ley de Lambert-Beer cuando el analito experimenta


asociacin, disocicin o reaccin con el solvente para dar produtos con propiedades diferentes
a las del propio analito.
Ejemplo: debidas a reacciones del absorbente con el disolvente, como en el caso del dicromato en
disoluciones no amortiguadas.
2- + 2-
Cr O + H O 2H + 2CrO
2 7 2 4
Para cualquier longitud de onda la absortividad molar del ion dicromato y del cromato son
diferentes.

7.2 Desviaciones instrumentales

La ley de Lambert-Beer es una ley lmite en el sentido de que se aplica slo cuando la
absorbancia se mide con una radiacin monocromtica. Sin embargo, en instrumentos
analticos de rutina no son prcticas las fuentes verdaderamente monocromticas, como los
lseres. En lugar de ellas, se emplean fuentes continuas policromticas junto con una red o
filtro, que proporcionan una banda de longitudes de onda simtrica y estrecha en torno a la
deseada.

Es un hecho experimental que las desviaciones de la ley de Lambert-Beer que resultan del uso
de un haz policromtico no son apreciables, siempre que la radiacin usada abarque un tramo
espectral dentro del cual el absorbente no presenta grandes cambios en funcin de la longitud
de onda, como se muestra en la figura. La banda A no muestra desviacin, ya que la
absorbancia no vara mucho a lo largo de la banda. La banda B muestra una desviacin
marcada ya que la absorbancia experimenta una variacin significativa en esta regin.

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8. Componentes instrumentales
La mayora de los instrumentos espectroscpicos constan de cinco componentes:
1. Una fuente estable de energa radiante
2. Un selector de longitudes de onda que permite el aislamiento de una regin reducida de
longitudes de onda
3. Uno o ms recipientes con la muestra
4. Un detector de la radiacin o transductor que convierte la energa radiante en una seal
medible (normalmente elctrica)
5. Un procesador y lector de la seal

8.1 Fuentes

Se requiere una fuente de radiacin externa de potencia constante y suficientemente intensa y


estable para facilitar la deteccin y la medida.
Las distintas fuentes continuas que pueden emplearse en los equipos de absorcin, segn la
regin del espectro se listan en la tabla:

Fuente Regin
del espectro (nm)
lmpara de H2 y D2 160-380 Absorcin molecular UV
lmpara de Absorcin molecular
240-2500
W/halgeno UV/visibles/IR cercano
Absorcin molecular visibles/IR
lmpara de W 320-2500
cercano

La fuente ms comn de radiacin en la regin del visible e


infrarrojo cercano es la lmpara de tungsteno que se muestra en
la figura. El filamento de tungsteno tpico funciona a una
temperatura de 3000K y produce una radiacin til en el
intervalo 320-2500 nm. Esto comprende toda la regin visible
y parte de las regiones de ultravioleta y de infrarrojo. El lmite
inferior lo impone la absorcin del bulbo de vidrio que absorbe
las energas que corresponden al ultravioleta.

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8.2 Selectores de longitudes de onda

Se dice que la luz de una sola longitud de onda es monocromtica. Sin embargo, hay que
aclarar que ningn selector es capaz de producir radiacin monocromtica, sino que la salida
de todos los dispositivos es una franja de longitudes de onda contiguas, llamada banda. Estas
longitudes se distribuyen simtricamente en torno a una longitud de onda central, llamada
nominal.
Para conseguir bandas estrechas de radiacin se usan dos tipos generales de selectores de
longitudes de onda: filtros y monocromadores. Los monocromadores tienen la ventaja de que
se puede escoger de forma continua la longitud de onda de salida dentro de un intervalo
espectral considerable.

8.2.1 Filtros

Los filtros trabajan absorbiendo todas las


radiaciones excepto una banda estrecha de
radiacin procedente de la fuente continua. A un
filtro se lo caracteriza por o general por una
longitud de onda nominal, un porcentaje mximo
de transmitancia y un ancho de banda efectivo.

Filtro Regin del Caractersticas


espectro (nm)
Se emplea en el UV-visible, estn construdos por una
Interferencia 20-14000 lmina de CaF2 o MgF2 recubiertos por una pelcula de
metal delgada
Se emplea en el visible, construdos por una lmina de
Absorcin 380-750 vidrio coloreado que elimina parte de la radiacin incidente
por absorcin.

8.2.2 Monocromadores

La figura presenta el esquema de


un monocromador de red de
difraccin tpico. La radiacin
policromtica que pasa por la
rendija de entrada se colima un
haz de rayos paralelo medinate un
espejo ccavo. Estos rayos inciden
sobre la red de difraccin, donde
las diferentes longitudes de onda
son difractadas en diferentes
ngulos. La luz llega a un segundo
espejo cncavo, el cual enfoca
cada longitud de onda en
diferentes puntos sobre el plano
focal. La orientacin de la red de

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difraccin slo dirige una banda estrecha de longitudes de onda hacia la ranura de salida del
monocromador. Haciendo girar la red de difraccin se permite el paso de diferentes
longitudes de onda a travs de la ranura de salida.
Las ranuras o rendijas desempean un papel importante en la determinacinde la calidad de
un monocromador. En algunos monocromadores las aberturas de las dos ranuras (entrada y
salida) son fijas, pero en otros se pueden variar. La ranura de entrada sirve de fuente de
radiacin, su imagen es enfocada sobre la superficie que contiene a la ranura de salida. Si la
fuente de radiacin emite algunas lineas discretas, aparecern sobre el plano focal de la ranura
de salida una serie de lineas brillantes de forma rectangular, cada una correspondiente a una
determinada longitud de onda. Cada linea particular se puede enfocar en la ranura de salida
rotando al elemento dispersor.

8.3 Detectores

Un detector es un dispositivo que indica la presencia de un fenmeno fsico. (Ejemplo: una


pelcula fotogrfica, la aguja de una balanza, el nivel del Hg en el termmetro).
Un transductor es un tipo especial de detector que convierte seales tales como la intensidad
de luz, pH, masa y temperatura en seales elctricas que luego pueden ampliarse y convertirse
en nmeros que representan la magnitud original.
Un transductor ideal de la radiacin electromagntica debe cumplir los siguientes requisitos
responder rpidamente a bajos niveles de energa radiante en un amplio rango de
longitudes de onda
debe producir una seal elctrica que se amplifique fcilmente
tener un nivel de ruido relativamente bajo
la seal elctrica producida debe ser directamente proporcional a la potencia del haz.
G = kP + k
Siendo:
G = es la respuesta (en unidades de corriente, resistencia o potencial)
k = cte que mide la sensibilidad del detector
k= respuesta constante, conocida como corriente oscura, an cuando no llegue radiacin
al detector.
Los detectores empleados en la regin ultravioleta, visible e infrarrojo cercano se denominan
detectores fotnicos. Estos se basan en la interaccin de la radiacin con la superficie reactiva
que produce electrones (fotoemisin) o que eleva electrones a estados de energa en los cuales
pueden conducir electricidad (fotoconduccin)
En la tabla se listan los detectores ms empleados en la espectroscopia de absorcin

Detectores Fotnicos intervalo de longitudes de onda


(nm)
fotubo 150-1000
fotomultiplicadores 150-1000
diodos de silicio 350-1100
fotoconductores 750-3000
clulas fotovoltaicas 380-780

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Ejemplo:
El fototubo consta de un ctodo y un nodo sellados al vaco. El
ctodo est recubierto por un material fotoemisivo (generalmente
de metales alcalinos) que emiten electrones cuando se irradia.
Cuando se aplica un potencial los electrones migran hacia el nodo
produciendo una fotocorriente. El nmero de electrones es
directamente proporcional a la potencia del haz de radiacin.

8.4 Recipientes de muestra

Los recipientes que contienen la muestra normalmente se llaman celdas o cubetas y deben
estar fabricados de un material transparente en la regin espectral de inters. En la tabla se
listan algunos de los materiales ms empleado:

Material regin en la cual es transparente


cuarzo o slice fundida UV - por debajo de los 350 nm
vidrio Visible - IR cercano 375-2000 nm
plstico Visible

Las mejores celdas son prismticas, de un centmetro de


camino. Pueden ser ms pequeas o tan grandes como 5
cm, este ltimo tamao se emplea para determinar trazas

8.5 Procesadores y medidores de seal

Un procesador de seal es de ordinario, un dispositivo electrnico que amplifica la seal


elctrica del detector.

9. Instrumentos espectroscpicos

Todas las partes mencionadas antes componen los instrumentos empleados en espectroscopia.
Se pueden distinguir dos tipos principales de instrumentos

o Fotmetro: es un instrumento sencillo, que usa filtros como selector de longitudes de


onda y como detector puede emplear una fotocelda o fototubo.

o Espetrofotmetro: como selector de longitudes de onda usa una red de difraccin y


como detector emplea fototubo o fotomultipliacdores o diodo.

Se utilizan dos diseos bsicos en los espectrofotmetros utilizados en la regin del UV-
visible: ellos son: simple haz y doble haz.

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En los instrumentos de simple haz la radiacin pasa a travs de una sola solucin a la vez. En
los de doble haz, un haz de radiacin pasa a travs de la solucin problema y otro haz pasa a
travs de la solucin blanco o de referencia.
Para medir la transmitancia en instrumentos de simple haz se deben llevar a cabo los
siguientes pasos:

a) Sin que llegue luz al detector (paso de luz cerrado) se lleva a cero la indicacin del
medidor (o% de transmitancia)
b) Con la solucin blanco o de referencia, se abre el paso de luz y se ajusta el instrumento de
modo que mida 100% de transmitancia.
c) Se coloca la solucin problema y se lee la transmitancia

Estas tres operaciones se den repetir para cada longitud de onda, ya que tanto la salida de la
fuente como la respuesta del detector varan con la longitud de onda. Adems, la absorbancia
del solvente (blanco) puede cambiar con la longitud de onda. La naturaleza secuencial de
estos tres pasos tambin significa que tanto la salida de la fuente como la sensibilidad del
detector deben permanecer constantes durante se desarrollo implicando que el voltaje de la
fuente y del detector deben ser estables.

En el instrumento de doble haz, la operacin se simplifica. Para calibrar el instrumento slo es


necesario:

a) Con el blanco colocado en el camino de ambos rayos, se ajusta el 100% de transmitancia


b) Con el blanco en el haz de referencia y sin que incida radiacin sobre el detector
proveniente de la muestra se ajusta el 0% de transmitancia.

Una vez calibrado el instrumento, la transmitancia de la muestra se puede medir a cualquier


longitud de onda sin repetir la calibracin ya que la seal del haz de referencia es
continuamente referida a la seal del solvente y slo la diferencia entre ambas seales es
amplificada y registrada. Por lo tanto, la medida ser independiente de la variabilidad en la
salida de la fuente y la sensibilidad el detector. Cualquier absorbancia debida al solvente ser
automticamente sustrada siempre que las dos celdas o cubetas sean iguales. Adems,
cualquier variacin en el voltaje de la fuente ser compensada automticamente, suponiendo
que los dos detectores sean iguales.
La mayora de los espectrofotmetros de doble haz estn equipados para realizar un barrido
automtico de la longitud de onda y el registro de la absorbancia.
En la figura se muestra un esquema ptico de un instrumento doble haz. (La ptica de un
instrumento simple haz se muestra en las actividades de laboratorio)

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Errores instrumentales

La mayora de los espectrofotmetros presentan un error mnimo para valores de absorbancia


intermedios (A~ 0.4 a 0.9). Cuando emerge poca luz de la muestra (absorbancia alta), la
intensidad es difcil de medir. Cuando emerge demasiada luz (absorbancia baja), es difcil de
detectar la diferencia de absorbancia entre las celdas de la muestra y el blanco. Por lo anterior,
es deseable que la concentracin de las muestras se ajuste para quedar en el intervalo
intermedio de absorbancia.

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ACTIVIDADES DE LABORATORIO

1- Determinacin de fsforo en muestras de un fertilizante


1.1. Introduccin: El fsforo es un elemento esencial tanto en animales como en vegetales.
Puede hallarse en los seres vivos en forma orgnica, o inorgnica (como ortofosfato). Este
anin a diferencia del nitrato y sulfato, no es reducido al ser absorbido en las races de las
plantas, sino que permanece en la forma oxidada formando steres, en numerosos compuestos
orgnicos. As, por ejemplo, el fsforo se encuentra en los cidos nucleicos, fosfolpidos de
membrana, fosfoprotenas y forma parte de una molcula central del metabolismo energtico
como el adenosin trifosfato (ATP). En animales, posee una funcin fundamental en el
desarrollo del tejido seo, pudiendo el contenido de este elemento ascender a 1% m/m. Los
niveles de P en plantas suelen ubicarse en valores cercanos a 0,2% m/m. En ciertos casos,
durante el desarrollo de los cultivos, las necesidades de P deben ser satisfechas mediante el
agregado de fertilizantes. Algunos compuestos comnmente utilizados para la fertilizacin
fosforada incluyen al fosfato mono-amnico (dihidrgeno fosfato de amonio), y fosfato di-
amnico (monohidrgeno fosfato de amonio).

1.2. Fundamento del mtodo: La determinacin de P en soluciones en las que este elemento
se encuentra como ortofosfato, puede realizarse en forma espectrofotomtrica, previa
formacin de un complejo coloreado con el molibdato de amonio, en medio cido (H2SO4) y
en presencia de reductores como el cloruro estaoso o cido ascrbico. Este mtodo posee un
nivel de deteccin muy bajo, pudiendo realizarse determinaciones en muestras conteniendo
hasta 7 g de P por litro.

1.3. Reactivos
Solucion patrn de fsforo 50 mg/L
Reactivo A: Solucin de molibdato de amonio 2,5% m/v en H2SO4 10 N
Reactivo B: Reactivo cloruro estaoso 2,5% en glicerol.

1.4. Determinacin del espectro de absorcin para seleccionar la longitud de onda


apropiada para la cuantificacin de fsforo

Procedimiento: Colocar en un mataz aforado de 100 mL, 1 mL de solucin patrn de fsforo


y enrasar con agua destilada. En un segundo matraz, completar los 100 mL slo con agua
destilada (solucin blanco). Transferir el contenido de los matraces a 2 erlenmeyers y agregar
en cada uno 4 mL de reactivo A y posteriormente 3 gotas de reactivo B. Agitar y luego
esperar 10 minutos hasta que la reaccin de formacin del azul de molibdeno haya sido
completa. Llevar a cabo el espectro de absorcin de dicho complejo como se indica a
continuacin:
1-Encender el espectrofotmetro.
2-Seleccionar el modo de trabajo espectro y el rango de barrido entre 370 y 1000 nm.
3-Colocar en el espectrofotmetro una cubeta con la solucin blanco (muestra en la que se
realiz la reaccin de desarrollo de color en ausencia de P), para que el equipo pueda hacer
una correccin de la lnea de base o lo que es lo mismo, llevar a cero de absorbancia
4-Finalizada la correccin de la lnea de base, colocar la muestra en la que se realiz el
desarrollo de color e iniciar el barrido.

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5- Analizar el grfico de absorbancia vs longitud de onda obtenido (espectro de absorcin), y


seleccionar la longitud de onda que ser apropiada para la posterior cuantificacin de la
muestra problema .

1.5. Realizacin de la curva de calibracin (verificacin del cumplimiento de la Ley de


Lambert-Beer) y cuantificacin de la muestra problema
Una vez seleccionada la longitud de onda siguiendo el procedimiento descrito en 1.4. puede
procederse a determinar la concentracin de fsforo en la muestra problema. Para esto resulta
necesario, en primer lugar, realizar una curva de calibracin. Esta permitir por un lado,
verificar que bajo las condiciones de trabajo exista linearidad entre la absorbancia y la
concentracin de P, conforme establece la ley de Lambert-Beer. Por otra parte, resultar
necesaria para poder determinar a qu concentracin de P equivale la absorbancia medida en
la muestra problema.

Procedimiento: Colocar en matraces aforados de 100 mL 0; 1; 2; 3 y 5 mL de solucin


patrn de P y enrasar con agua destilada. Calcular la concentracin resultate. Transferir el
contenido de los matraces a erlenmeyers previamente rotulados. Agregar 4 mL de reactivo A
y posteriormente 3 gotas de reactivo B. Esperar 10 minutos, hasta que la reaccin de
formacin del azul de molibdeno haya sido completa. Encender el espectrofotmetro, e
ingresar en el modo de trabajo fotomtrico. Indicar en el equipo la longitud de onda a la que
se realizarn las determinaciones (aquella seleccionada en 1.4). Colocar una cubeta con el
blanco de la curva de calibracin (muestra en la que se realiz la reaccin de desarrollo de
color en ausencia de P) y ajustar el valor a cero de absorbancia en el equipo. Realizar las
lecturas de los dems puntos de la curva de calibracin. Anotar los valores de absorbancia
correspondientes a cada concentracin de P y graficar la absorbancia en funcin de
concentracion de P en ppm. Ajustar los datos experimentales a una recta y determinar la
calidad del ajuste obtenido empleando el mtodo de mnimos cuadrados.
Si los datos experimentales muestran un apropiado cumplimiento de la ley de Lambert-Beer
en las condiciones de trabajo, puede entonces procederse a analizar la muestra problema. Para
esto se toma una alicuota apropiada (aca debemos decir cual es la alicuota poraue la muestra
no la traen ellos) de una solucin del fertilizante, se coloca en un matraz de 100 mL y se
enrasa con agua destilada. Posteriormente se procede al desarrollo de color como se realiz
con las soluciones patrn de P. Se lee la absorbancia y a partir de este valor, utilizando la
curva de calibracin se determina la concentracin de P del fertilizante.

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Problemas

1. Calcular la longitud de onda () en cm y en nm correspondiente a cada una de las


siguientes frecuencias: a) 1,971091/s, b) 4,8610151/s, c) 7,3210191/s y d) 1,4210231/s
2. Calcular la frecuencia () en 1/s correspondiente a cada una de las siguientes longitudes de
onda: a) 200 nm, b)15 , c) 1,5010-6 cm y d) 6,10m
3. Calcular la absorbancia que corresponde a cada valor de transmitancia porcentual: a) 20%,
b) 35,3 %, c) 75,5 %, d) 4,5 % y e) 100%
Rta.: a) 0,69, b) 0,452; c) 0,122; d) 1,346 y e) 0,00
4. Dados los valores de absorbancia, calcular las transmitancias porcentuales correspondientes
a cada uno: a) 0,60, b) 0,177, c) 0,472 y d) 1,346
Rta: a) 25,12; b) 66,53; c) 33,73 y d) 4,51
5. En una determinacin fotomtrica, el instrumento dio una T% de 24,7 usando una cubeta
de 5 cm de camino ptico. Cul ser la T% de la misma solucin si se usan celdas de:
a)1,00 cm, b) 10,00 cm y c)1,0 mm? Rta.: a) 75,61; b) 6,10 y c) 97,24
6. Una solucin 0,0500 M, cuyo soluto tiene un peso molecular de 230, da una lectura de
transmitancia de 35 % cuando se usa una cubeta de 1 cm de camino ptico y una longitud
de onda de 270 nm. Calcular la absortividad (a). Rta.: 0,0396 g l-1cm-1
7. Calcular la molaridad de una solucin, si la absortividad molar es de 1,27 lM-1cm-1. La
absorbancia leda de la muestra es de 0,140 a 450 nm y el camino ptico de la cubeta es de
5 cm. Rta.: 0,0220M
8. Calcular la absortividad de una solucin al 0,25% m/v que da una lectura de absorbancia de
0,180 a 615 nm, el peso molecular es 60 y el espesor de la cubeta es de 2 cm. Rta.: 2,15
9. Una solucin de concentracin 0,004% m/v tiene una transmitancia del 57% cuando se lee
a 550 nm, usando una cubeta de 5 cm. El PM del soluto es 100. Calcular la absortividad
molar. Rta.: 122
10. En una cubeta de 2 cm de espesor se colocan 5 g (microgramos) de soluto en 5 ml de
solucin. La absortividad molar de 5000 LM-1cm-1, la medida se efecta a 640 nm y el peso
molecular del soluto es 22. Calcular la transmitancia porcentual a esa longitud de onda.
Rta.: 39,81
11. Un fotmetro porttil, de respuesta lineal a la radiacin registr un valor de 84,2 A con
una solucin del blanco en la trayectoria de la luz. Al reemplazar el blanco por una solucin
absorbente dio una respuesta de 23,9 A. Calcular: a) la transmitancia porcentual, b) la
absorbancia, c) la transmitancia esperada para una solucin en la que la concentracin de la
especie absorbente es la tercera parte de la correspondiente a la solucin original de
muestra y d) la transmitancia esperada para una solucin cuya concentracin es el doble de
la correspondiente a la solucin original de muestra. Rta.: 28,38; b) 0,547; c) 0,657 y d)
0,080
12. Una alcuota de 50,00 ml de agua de pozo se trata con un exceso de KSCN formndose el
complejo FeSCN+2 y luego se diluye hasta 100,00 ml. Calcular las partes por milln de Fe+3
en la muestra, si la solucin diluida tiene a 580 nm una absorbancia de 0,506 cuando se
mide en una cubeta de 1,50 cm. La absortividad molar del complejo FeSCN+2 es de 7,00
103
(lmol-1cm-1). Rta.: 5,397 ppm
13. Una serie de soluciones patrn del complejo Fe(II)-1,10-fenantrolina se midieron a 510
nm obtenindose las siguientes lecturas de absorbancia cuando se emple una cubeta de
1,00 cm.

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Concentracin de Fe(II)-1,10- 2,00 5,00 8,00 12,00 16,00 20,00


fenantrolina en ppm
Absorbancia 0,164 0,425 0,628 0,951 1,260 1,582

Construir la curva de calibracin a partir de estos datos.


El mtodo anterior se aplic a la determinacin rutinaria de hierro en alcuotas de 25,00 ml de
aguas naturales que se diluyeron a 50,00 ml antes de llevar a cabo las medidas
espectrofotomtricas a 510 nm. Determinar la concentracin (en ppm de Fe) de muestras que
dieron los siguientes datos de absorbancia: a) 0,107, b) 0,721 y c)1,538. Rta.: a) 2,36 ppm; b)
18,08 ppm y c) 38,98 ppm

Problemas adicionales

1. Usar los datos de la tabla para calcular los valores que faltan. Siempre que sea necesario
suponer que el peso molecular del analito es 250.


b (cm)
A T% a (l/g cm) (l/molcm) ppm
camino M (mol/l)
absorbancia transmitancia absortividad absortividad (mg/l)
ptico
molar
0.416 1.40 1.2510-4
45.50 2.10 8.1510-3
1.424 0.1370 0.996
19.60 5.42103 2.510-4
3.46103 2.50 3.33
1.241103 0.125 7.7710-4
48.30 0.25 6.72
76.30 0.0631 1.10
6.54 9.82102 8.6410-3
0.842 7.73103 2.00
Rta.:

b (cm)
A T% a (l/g cm) (l/molcm) ppm
camino M (mol/l)
absorbancia transmitancia absortividad absortividad (mg/l)
ptico
molar
38,37 9,508 2377 31,25
0,342 0,0799 19,98 2037,5
3,76 34,28 0,0417 10435
0,707 21,71 0,521 62,5
0,115 76,79 13,94 1,3310-5
0,1205 75,76 4,96 194,25
0,316 188,09 46989 2,6910-5
0,117 15,78 6,7410-3 1685,6
1,184 3,94 0,139
14,38 30,92 7.73103 5,4510-5 13,62

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2) Calcular la absorbancia que corresponde a cada valor de transmitancia porcentual: a)


36,8%, b) 22,0 %, c) 82,3 % y d) 4,2 %
Rta.: a) 0,434; b) 0,657; c) 0,084 y d) 1,376
3) Calcular la T% que corresponde a cada uno de los siguientes valores de absorbancia: a)
0,800, b) 0,115, c) 0,585 y d) 0,057.
Rta.: a) 15,84; b) 76,73; c) 26,00 y d) 4,20
4) Se hace una determinacin espectrofotomtrica de una sustancia en solucin. Se realizan
dos lecturas, la primera con una cubeta de 1 cm de espesor obtenindose una transmitancia
de 35 %; la segunda lectura se realiza usando una cubeta de 2 cm de espesor. Calcular la
transmitancia porcentual (T%) de sta ltima medida. Rta.: 12,25
5) Cul es la absorbancia de una solucin 0,0500M si la cubeta de medida tiene 1 cm de
camino ptico, el peso molecular del soluto es 130, la absortividad molar es de 1,60
lmol-1cm-1 y la lectura se efecta 280 nm? Rta.: 0,08
6) Calcular la concentracin en moles por litro de una solucin que tiene una absortividad
molar de 1,39 lmol-1cm-1 a 533 nm y que leda en cubeta de 2,00 cm da una absorbancia
de 0,167. Rta.: 0,0600 M
7) Una solucin 0,00005 % m/v de un soluto de peso molecular 120, transmite 68 % de luz
de 533 nm cuando se mide en una cubeta de 2,00 cm. Calcular la absortividad molar.
Rta.: 20072 l mol-1cm-1
8) Para una determinada longitud de onda se obtiene una lectura de absorbancia de 0,160
para una solucin 0,18 % m/v, usando una cubeta de 1,00 cm. Calcular la absortividad.
Rta.: 0,088 l g-1 cm-1
9) Una solucin de un compuesto de peso molecular 215, cuya concentracin es 0,0010 M,
se midi en una cubeta de 1,5 cm obtenindose una lectura de 18,4 % T a 470 nm.
Calcular la absortividad y la absortividad molar.Rta.: a)3,42 l g-1 cm-1 y b) 490 l mol-1
cm1
10) La absortividad molar de una sustancia es 6,22103 lmol-1cm-1. En una cubeta de 1,05
cm de espesor se colocaron 3 ml de una solucin que contena 0,2 moles. Calcular la T%
a 340 nm. Rta.: 36,67

Cuestionario
1. Cules son las caractersticas de la radiacin electromagntica?
2. Representar y definir los parmetros ondulatorios de la radiacin electromagntica.
3. Cmo estn relacionados la energa y la longitud de onda?
4. A qu se llama radiacin monocromtica?
5. La radiacin ultravioleta es de mayor o menor energa que la infrarroja?
6. Qu ocurre cuando una molcula absorbe radiacin electromagntica?
7. Cules son los principales mecanismos de desactivacin de una molcula?
8. Qu ocurre con la potencia de la luz P0 cuando incide sobre un cuerpo o sobre una
solucin absorbente?
9. Enuncie y explique la ley de Lambert-Beer
10. Cules son las limitaciones de la ley de Lambert-Beer?
11. A qu se denomina transmitancia (T) o transmisin de una solucin?
12. A qu se denomina absorbancia de una solucin?
13. Qu expresin matemtica relaciona la transmitancia y la absorbancia?
14. Qu entiende por absortividad () y la absortividad molar (a)?
15. A qu se llama espectro de absorcin?
16. Qu representa un espectro de absorcin?
17. Cmo estn compuestos los instrumentos empleados en la espectrofotometra?

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18. Qu requisito debe cumplir la fuente de radiacin?


19. Qu selectores de longitudes de onda conoce? Cul us en el trabajo prctico?
20. Represente el esquema de un monocromador. Qu rol desempean las ranuras de entrada
y salida de un monocromador?
21. Qu es un detector y qu un transductor? Qu requisitos deben cumplir para ser
empleados en un espectrofotmetro?
22. De qu material deben estar construidos los recipientes que contienen la muestra?
23. Dibuje el esquema ptico del espectrofotmetro empleado en el trabajo prctico
24. Cmo debe proceder para obtener el espectro de absorcin del permanganato de potasio?
25. Cmo procedi en el trabajo prctico para verificar el cumplimiento de la ley de
Lambert-Beer?
26. Qu criterio emplea para seleccionar la longitud de onda ptima para efectuar una
determinacin espectrofotomtrica?
27. Cmo puede determinar experimentalmente la concentracin de una solucin por
espectrofotometra?

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ESPECTROSCOPIA ATMICA
Objetivos
Comprender los fundamentos de la espectroscopia de emisin
atmica
Entender los procesos que ocurren en la llama
Aplicaciones en el campo agronmico y forestal

1. Introduccin
Mientras que la mayora de las tcnicas espectroscpicas se utilizan para el estudio y
caracterizacin de molculas o iones en su entorno cristalino, la espectroscopa de emisin y
absorcin atmica se usa casi exclusivamente para el anlisis de tomos. Por consiguiente,
la tcnica resulta casi insuperable como mtodo de anlisis elemental de metales. En
principio, la espectroscopa de emisin puede utilizarse para la identificacin y para la
determinacin cuantitativa de todos los elementos de la tabla peridica.
Cuando la transicin se produce desde el estado fundamental hasta un estado excitado del
tomo mediante la absorcin de radiacin de una determinada frecuencia (caracterstica para
cada tomo), estamos en el caso de las tcnicas de absorcin. En el caso en que los tomos se
encuentren previamente a un estado excitado y se mida la intensidad de la radiacin emitida a
la frecuencia caracterstica correspondiente a la transicin desde el estado excitado al estado
fundamental, hablamos de tcnicas espectrofotomtricas de emisin.
El estudio espectroscpico de tomos o iones elementales como el Na0, K0, Fe+, Mg+, Al+,
slo puede hacerse en fase gaseosa. Por lo tanto, en la espectroscopia atmica las muestras se
vaporizan a muy altas temperaturas y las concentraciones de los tomos se determinan
midiendo ya sea la absorcin o la emisin a las longitudes de onda caractersticas. Debido a su
alta sensibilidad y la facilidad con las que muchas muestras pueden analizarse, la
espectroscopia atmica ha llegado a ser una de las principales herramientas de la qumica
analtica. Es comn determinar cualitativa y cuantitativamente alrededor de 70 elementos. La
sensibilidad es del orden de las partes por milln (ppm) a partes por billn (ppb). Son mtodos
rpidos, muy selectivos y el instrumental puede ser desde muy sencillo hasta muy complejo.

Pueden identificarse tres clases diferentes de procesos que permiten alcanzar el estado
excitado del tomo o ion previo a la emisin

a) Emisin a partir de una excitacin electromagntica.


b) Emisin a partir de excitacin trmica.
c) Emisin a partir de excitacin elctrica.
X energa elctrica, trmica o electromecnica X * (excitacin)
X * X h (emisin)

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Como slo se verifican transiciones definidas entre los diferentes niveles atmicos, y cada una
de estas transiciones les corresponde una energa caracterstica (E = h) y por lo tanto una
longitud de onda especfica y dado que algunas transiciones son ms probables que otras, las
intensidades de las lneas de emisin son diferentes. Cuanto mayor sea la energa suministrada
por la fuente de excitacin, ms alto ser el nivel electrnico al cual se exciten los electrones
y menores sern las longitudes de onda de la luz emitida. Por consiguiente, al aumentar la
energa de la fuente de radiacin, se
observar un mayor nmero de lneas
espectrales, especialmente a longitudes de
onda cortas. En el diagrama se muestran las
principales transiciones electrnicas
correspondientes a los tomos de sodio y
potasio, el nmero que aparece sobre la
lnea que une los distintos niveles
electrnicos es la longitud de onda
correspondiente a cada transicin. El trazo
ms grueso corresponde a la transicin ms
probable.

Recordemos

Con estas tcnicas no se analizan molculas, pues la temperatura empleada para la


atomizacin las descompone
La espectroscopia de atmica nos da informacin sobre la clase de tomos y la
concentracin de los mismos independientemente de cmo estaban combinados

2. Clasificacin de los mtodos de la espectroscopia atmica

Los mtodos de espectroscopa atmica se clasifican segn la forma en que se atomiza la


muestra y segn el fenmeno que se observe: absorcin, emisin y fluorescencia.
En la tabla estn resaltados los mtodos ms empleados para resolver problemas agronmicos
y forestales.
Clasificacin de los mtodos de espectroscopia atmica
Mtodo de Temperatura de
Base del mtodo Nombre y abreviatura del mtodo
atomizacin atomizacin C
Espectroscopa de absorcin
Absorcin
AAS
Espectroscopa de emisin atmica
Llama 1750 - 3150 Emisin
AES
Espectroscopa de fluorescencia atmica
Fluorescencia
AFS
Espectroscopa de absorcin atmica
Absorcin
electrotrmica
Electrotrmico 1200 - 3000
Espectroscopa de fluorescencia atmica
Fluorescencia
electrotrmica
Plasma de argn
Espectroscopa de plasma acoplado por
acoplado por 6000 - 8000 Emisin
induccin ICP
induccin
Plasma de argn Espectroscopa de plasma de corriente continua
6000 - 10000 Emisin
corriente continua DC
Chispa elctrica o
40000 Emisin Espectroscopia de emisin de chispa
arco

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De todas estas tcnicas centraremos nuestra discusin en la Espectroscopia de emisin


atmica

3. Espectroscopia de emisin atmica o fotometra de emisin de llama


La espectroscopia de emisin atmica es un mtodo analtico basado en la medida de la
energa radiante especficamente emitida por tomos o iones de un elemento que se encuentra
en estado vapor.
A temperatura ambiente, todos los tomos de una muestra se encuentran esencialmente en el
estado fundamental. La excitacin a orbitales de mayor energa se puede conseguir por el
calor de una llama. En el caso del tomo de sodio, este se excita desde el estado fundamental
3s al estado excitado 3p. El tiempo de vida de un tomo en el estado excitado es breve y su
vuelta al estado fundamental va acompaada de la emisin de un fotn de radiacin. Para la
transicin del sodio del estado 3p al estado 3s, se emite un fotn del longuitud de onda 589
nm. La energa est en correspondencia con la diferencia de energa entre ambos estados. Si la
emisin se produce por la transicin desde el primer estado excitado al fundamental se
obtienen las llamadas lneas de resonancia que son las ms intensas y las que se utilizan
generalmente en este mtodo.
La temperatura de trabajo en la fotometra de emisin de llama es baja en comparacin con
las otras tcnicas sealadas en el cuadro anterior, por lo tanto slo se producen lneas
espectrales que corresponden a energas de excitacin bajas. El espectro es simple y las lneas
corresponden a la regin del visible y ultravioleta cercano. Para muchos elementos la energa
disponible por la llama es suficiente para excitar alguna de sus lneas caractersticas, esto le
proporciona a la fotometra de llama una gran selectividad.

3.1 Aplicaciones

La fotometra de llama, es muy til en los anlisis de rutina de los metales alcalinos, alcalino-
trreos, que son los ms fcilmente excitables y cuya determinacin por otros mtodos es por
lo general complicada, por ejemplo la determinacin de sodio en agua.
La mayor dificultad que ofrece este mtodo est originada por el gran nmero de variables
que influyen en la intensidad de la radiacin, exigiendo, por lo tanto, un control cuidadoso de
las mismas para lograr una buena reproducibilidad y obligando al empleo de soluciones
patrones del elemento a determinar, por lo cual no constituye un mtodo de anlisis absoluto.
La correlacin entre la intensidad de la seal y la concentracin del elemento emisor en una
solucin permita la utilizacin de este fenmeno con fines cuantitativos.

Sealemisin = k C

3.2 Caractersticas de la llama

La mayor fuente de incertidumbre en este mtodo espectroscpico, lo constituyen las


variaciones en el comportamiento de la llama, de modo que es importante conocer sus
caractersticas y las variables que la afectan.
La llama debe cumplir ciertos requisitos:
poseer la temperatura adecuada para llevar a cabo satisfactoriamente los procesos
ocurridos en su seno y que su temperatura se mantenga constante
que su propio espectro no interfiera en la observacin especifica que se desea
medir.

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3.2.1 Temperatura de la llama

La llama se obtiene mediante la combinacin de un combustible y un oxidante (o


comburente) en el interior de un mechero. Segn la mezcla utilizada se alcanzan diferentes
temperaturas en la llama. En el cuadro siguiente se indican las temperaturas mximas que se
alcanzan segn las mezclas combustible - comburente empleadas:

Combustible Comburente Temperatura (C)


Gas natural aire 1700-1900
Gas natural oxgeno 2700 - 2800
Hidrgeno aire 2000 - 2050
Hidrgeno oxgeno 2550 - 2700
acetileno aire 2120 2400
acetileno oxgeno 3050 3150
acetileno oxgeno nitroso 2600 2800
ciangeno oxgeno ms de 4500

La temperatura provista por la combustin del gas natural y aire es la ms baja, pero es
suficiente para excitar a los metales alcalinos y alcalino trreos. Para obtener los espectros de
emisin de los metales pesados (Fe, Cu, Ni, etc,) se necesitan temperaturas entre 2500 a 3100
C que se consiguen empleando oxgeno u xido nitroso como oxidantes.
Para una mezcla determinada, la temperatura tambin depende de la relacin de caudales
entre combustible y comburente con que se alimenta la llama,
alcanzndose su mximo valor cuando esa relacin corresponde a la
estequiometra de la combustin (experimentalmente puede
observarse cuando se han formado correctamente los conos en el
mechero).
En la figura se muestra el perfil de temperatura de una llama. La
mxima temperatura est localizada algo por encima del cono
interior. Es importante que durante el anlisis se enfoque siempre la
misma zona de la llama sobre el sistema ptico de medida para no
perder reproducibilidad.
Los radicales presentes en la descomposicin de los gases de la
llama producen sus propios espectros de emisin, los cuales pueden
superponerse al espectro de emisin del analito. Si esto ocurre, la
concentracin del analito ser mayor que la real.

3.3 Equipamiento

Los instrumentos que se emplean tienen partes comunes con los de las otras tcnicas
espectroscpicas: monocromadores, filtros, detectores, pero difieren en el recipiente que
contiene la muestra que en esta tcnica es la llama.
Los componentes bsicos de un espectrmetro de llama son:
a. Reguladores de presin de combustible y comburente: controlan la presin y el caudal
de cada componente de la mezcla gaseosa
b. Sistema atomizador: lo constituyen el sistema nebulizador (donde se produce la
pulverizacin) y el mechero

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c. Sistema ptico: selecciona y asla una porcin del espectro, la que resultar ms o
menos ancha segn el tipo de sistema utilizado (filtro o monocromador)
d. Sistema detector medidor: es el dispositivo que transforma la radiacin en energa
elctrica susceptible de medicin en un galvanmetro adecuado

3.4 Procesos en la llama

Los procesos que ocurren en la llama cuando se introduce la solucin con el elemento motivo
del anlisis (analito) pueden describirse en varias etapas:
1. Introduccin y pulverizacin
2. Evaporacin del solvente, se evapora el agua u otros solventes dejando como residuo
pequeas partculas de sal seca
3. Fusin y evaporacin de la sal del analito (la sal pasa al estado gaseoso)
4. Disociacin en vapor atmico (las molculas gaseosas, o una parte de ellas, se disocian
progresivamente dando lugar a tomos neutros o radicales) Estos tomos neutros son las
especies absorbentes
5. El vapor atmico puede seguir alguno de los siguientes procesos:
a. excitacin
b. ionizacin y eventual excitacin del in
c. asociacin molecular y o formacin de xidos refractarios (esto reduce la poblacin de
los tomos neutros en las llamas y constituye las llamadas interferencias qumicas que
se presentan en los mtodos de anlisis que utilizan llamas)
6. Emisin (en lneas o en bandas, segn la especie responsable de la radiacin)

Tomando como ejemplo la determinacin de sodio en agua, los procesos mencionados pueden
representarse mediante las siguientes secuencias:

(1) ( 2) ( 3)
NaCl (acuoso) NaCl (roco o nebulizado) NaCl (slido)
( 4)
NaCl ( vapor) 5 ) E
Na( vapor) Cl2 ( vapor) ( ( 6)
Na Na h

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3.4 Fuentes de error

La calidad de una medida o lectura de la intensidad de emisin est determinada por su


sensibilidad, especificidad, exactitud y precisin. Existen diversos factores que condicionan
la calidad de la medida:

I- Instrumentales
II- Interferencias

I-Factores instrumentales: son los que dependen de las caractersticas del instrumento y de
los parmetros controlables tales como: el tipo de mechero, la forma y el tamao de la llama,
la presin del comburente y el combustible, etc... En la prctica se ajustan las variables
operacionales de modo de obtener la mxima seal de una solucin del analito y se
mantienen constantes durante todo el proceso analtico.

II-Interferencias: dependen de la composicin de la solucin y de la presencia de otras


especies diferentes del analito. Constituyen un factor importante de error, pues ejercen gran
influencia sobre la intensidad de la radiacin registrada y puede causar aumento o depresin
de la seal

a) Disminucin de la seal por disminucin del grado de disociacin de la sal del


analito. Para llevar a estado gaseoso al metal, es necesario que se descomponga la sal.
Por consiguiente, los aniones presentes en la solucin tienen un papel importante en la
fotometra de llama. Las mayores intensidades se obtienen con cloruros y nitratos que
son sales fciles de disociar. Los fosfatos y sulfatos son menos adecuados, ya que son
ms difciles de disociar. La adicin de solventes orgnicos o agentes formadores de
complejos frecuentemente reducen o eliminan las interferencias.
b) Aumento de la seal debido a la presencia de otro metal fcilmente ionizable como
por ejemplo la interferencia mutua de alcalinos. Por ejemplo en la determinacin de
sodio en presencia de altas concentraciones de potasio, el K se ioniza ms fcilmente
que el sodio, por lo tanto aumenta la seal de sodio.
c) Aumento de la seal debido a la presencia de elementos que emiten a longitudes de
onda muy cercanas a la del analito y el equipo empleado no puede separarlas, estas
emisiones se suman a la emisin propia del analito. Por ejemplo, la presencia de calcio
en la determinacin de sodio.
Para evitar o corregir estas interferencias, se pueden efectuar alguna de las siguientes
operaciones:

Separar el analito de la matriz


Construir curvas de calibrado con patrones sintticos que reproduzcan la composicin
de la muestra
Aumentar la temperatura de la llama
Agregar sustancias que formen con la especie causante de la interferencia un compuesto
que no emite a la longitud de onda del analito
Utilizar otra longitud de onda de trabajo en la que emita el analito con suficiente
sensibilidad mientras que no lo haga la interferencia.

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3.5 Determinacin de la concentracin

a- Mtodo de la curva de calibracin


La concentracin del analito se puede obtener con una
curva de calibracin. Dicha curva se establece con
soluciones de concentracin conocida (patrones). Las
medidas de los patrones deben hacerse en las mismas

seal de sodio
condiciones instrumentales, incluyendo la presin del
gas, la proporcin de oxidante, etc. Con el solvente
puro se ajusta el cero de la escala y con el patrn ms
concentrado se lleva a 100% de seal. Luego se
registran las intensidades relativas de emisin de los
patrones restantes y se grafican en funcin de la
concentracin del analito.
concentracin de sodio
b- Mtodo de adicin de patrn

En este procedimiento se aaden cantidades conocidas


y crecientes de la sustancia a determinar a diferentes
alcuotas de la solucin problema. Se miden todas
estas soluciones como as tambin la solucin
problema sin agregado de patrn. Se grafica la seal
leda vs. la concentracin agregada La concentracin
de la muestra problema se obtiene por extrapolacin.
Este mtodo es muy til cuando es difcil preparar
patrones con la misma composicin de la muestra
problema

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ACTIVIDADES DE LABORATORIO
Determinacin del contenido de sodio en una muestra de agua
El sodio es uno de los seis elementos en orden de abundancia en la naturaleza y est presente
en las aguas naturales. El nivel puede variar entre 1ppm a 500ppm. Las concentraciones
relativamente altas de sodio se encuentran en aguas salobres. La determinacin de la relacin
de sodio al contenido de cationes totales es importante en la agricultura. Los suelos
permeables pueden daarse por una alta relacin de sodio.
Trazas de sodio pueden ser determinadas empleando fotometra de llama a una longitud de
onda de 589 nm. La intensidad de la luz emitida a esa longitud de onda es proporcional a la
concentracin de sodio
Las interferencias posibles:
1- grandes cantidades de sulfatos, bicarbonatos
2- potasio si se encuentra en una relacin potasio/sodio > 5:1
3- calcio si se encuentra en una relacin calcio/sodio > 10:1

Importante: todas las soluciones empleadas en el anlisis, deben guardarse en frasco de


plstico. Utilizar agua destilada o bidestilada libre de sodio para preparar todas las soluciones,
incluidas las soluciones patrn.

Procedimiento:
1- Preparar 500,00 ml de una solucin madre de NaCl de 100,00 ppm en Na.
2- Patrones para la curva de calibracin de Na
Se utilizarn patrones de 2,00; 4,00; 8,00 y 10,00 ppm de Na+. Las mismas se prepararn
tomando el volumen correspondiente de la solucin madre anterior y llevndolo a 100,00 ml.
3- Medida:
a) encender el equipo
b) Colocar el filtro para sodio
c) Abrir el paso de gas
d) encender la llama
e) abrir el paso de aire
f) regula el caudal de aire y gas hasta observar los conos azules en el mechero
g) con agua bidestilada ajustar el cero
h) con la solucin patrn ms concentrada llevar la seal a 100%
i) registrar la lectura de las soluciones patrn. Antes de cada solucin colocar
agua bidestilada en el capilar para limpiar todo el conducto.

4- Determinacin de sodio en una muestra de agua


Tomar una alcuota de 10,00 ml de la muestra de agua y diluir a 250,00 ml con agua
bidestilada, leer su seal y determinar la concentracin de sodio.
5- Grfico de la curva de calibracin: a partir de las seales obtenidas con cada una de las
soluciones patrn de sodio construir la grfica seal (eje Y) vs. concentracin de sodio en
ppm (eje X), el grfico debe dar una recta. A partir del grfico y del valor de la seal de la
muestra desconocida encontrar la concentracin de sodio en la muestra.
Aplicaciones de esta tcnica en el campo agronmico
Determinacin del contenido de sodio, potasio y calcio en aguas, suelo, anlisis foliar y
alimentos.

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Cuestionario y problemas

1. En qu se basa la espectroscopia de emisin atmica?


2. Indicar las diferencias entre la espectroscopia atmica de emisin y la espectroscopia de
absorcin.
3. Qu procesos ocurren en la llama cuando se introduce la solucin con el analito?
4. Qu tipo de tomos pueden analizarse por fotometra de llama? Por qu?
5. Cules son los componentes instrumentales comunes a las tcnicas de espectroscopia de
absorcin y fotometra de llama?
6. Qu caractersticas debe tener la llama?
7. Cules son las posibles fuentes de error en la fotometra de llama?
8. Qu mtodos puede emplear para determinar la concentracin del analito por fotometra
de llama?
9. Una serie de soluciones patrn de K se midieron en un fotmetro de llama. Las lecturas
obtenidas a 404,3 nm fueron las siguientes:

g/ml de K 0,00 5,00 10,00 20,00 30,00

Lectura de emisin 0,00 12,4 24,3 48,6 71,2

Determinar la concentracin de K en una muestra si la lectura de emisin fue de 41,7.


Rta.: 17,37 g/ml

10. Se determin el contenido de sodio en agua de ro por espectroscopia de emisin de llama.


Se prepararon una serie de soluciones patrn cuyas lecturas de emisin fueron las
siguientes:
g/ml de Na 0,0 0,20 0,40 0,60 0,80

Lectura de emisin 0,0 21,5 40,9 57,7 77,3

a) representar los datos


b) 25,00 ml de la muestra de agua de ro se diluy con agua bidestilada hasta un volumen
final de 100,00 ml. La lectura obtenida fue de 41,2. Calcular la concentracin de sodio
en la muestra. Rta.: 1,64

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OTROS MTODOS ESPECTROFOTOMTRICOS DE


EMISIN: FLUORESCENCIA, FOSFORESCENCIA Y
QUIMIOLUMINISCENCIA
1. Introducin
La fluorescencia, fosforescencia y quimioluminiscencia molecular son tres mtodos
espectroscpicos relacionados entre s. En todos ellos, las molculas del analito son excitadas
dando una especie cuyo espectro de emisin suministra informacin tanto para el anlisis
cualitativo y como cuantitativo. Estos mtodos se conocen como luminiscentes.
La fluorescencia y fosforescencia se parecen entre s, ya que la excitacin tiene lugar por
absorcin de fotones. En consecuencia, los dos fenmenos a menudo se conocen por el
trmino ms general de fotoluminiscencia. El tercer tipo de luminiscencia, la
quimioluminiscencia, se basa en el espectro de emisin de una especie excitada que se ha
formado en el curso de una reaccin qumica. En algunos casos, las partculas excitadas son
producto de una reaccin entre el analito y un reactivo adecuado (generalmente un oxidante
fuerte como el ozono O3 o el perxido de hidrgeno H2O2) el resultado es un espectro
caracterstico de un producto de oxidacin del analito ms que el propio analito. En otros
casos, el analito no interviene directamente en la reaccin de quimiolumniscencia y es el
efecto de inhibicin del analito lo que sirve como parmetro analtico.
De todos los mtodos luminiscentes, es la fluorescencia el ms empleado en los anlisis
qumicos cuantitativos. La fluorescencia es un proceso de emisin en el cual las molculas
son excitadas por la absorcin de radiacin electromagntica, las especies excitadas se relajan
al estado fundamental, liberando su exceso de energa en forma de fotones. Una de las
caractersticas ms atractivas de los mtodos de fluorescencia es su gran sensibilidad, la cual
es, con frecuencia uno a tres rdenes de magnitud mayor que las de la espectroscopa de
absorcin. No obstante, los mtodos de fluorescencia se aplican mucho menos que los
mtodos de absorcin debido al nmero relativamente limitado de sistemas qumicos que se
pueden hacer fluorescer.

2. Teora de la fluorescencia y fosforescencia


La fluorescencia tiene lugar en sistemas qumicos gaseosos, lquidos y slidos tanto simples
como complejos. El tipo ms simple de fluorescencia es la que presentan los tomos en estado
vapor. Por ejemplo los electrones 3s de los tomos
de sodio pueden ser excitados al estado 3p por
absorcin de la radiacin de longitud de onda 589,6
y 589,0 nm. Despus de 10-5 a 10-8 s los electrones
vuelven al estado fundamental emitiendo radiacin
de estas dos mismas longitudes de onda en todas las
direcciones. Este tipo de fluorescencia, en la cual la
radiacin absorbida es reemitida sin cambios de
frecuencia se llama resonancia fluorescente (es la
que empleamos en la espectroscopa de emisin de
llama). Las especies moleculares tambin pueden
presentarla, sin embargo, mucho ms a menudo
presentan bandas de fluorescencia o fosforescencia
centrada en longitudes de onda ms larga que la correspondiente a la de absorcin.

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Las caractersticas de los espectros de fluorescencia y fosforescencia se pueden entender


mediante las sencillas consideraciones de los orbitales moleculares.

La Figura muestra un diagrama parcial de los niveles de energa para una molcula
fotoluminiscente. La lnea horizontal So representa la energa del estado fundamental de la
molcula, el cual normalmente es un estado singulete (S0), en este nivel electrnico al igual
que en los otros estados excitados se encuentran asociados varios niveles vibracionales de la
molcula. A temperatura ambiente la energa electrnica de prcticamente todas las molculas
es So (todas las molculas se hallan en el estado de menor energa). S1 y S2 corresponden
respectivamente al primero y segundo estado singulete excitado. El de la derecha T1
corresponde al primer estado triplete excitado. Hay que sealar que el estado triplete es menos
energtico que el correspondiente estado excitado singulete (S1).
Normalmente, el tiempo de vida media de una especie excitada es breve porque hay diversas
formas en las cuales un tomo o una molcula excitada liberan su exceso de energa y se
relajan a su estado fundamental. Dos de las ms importantes de estos mecanismos son la
relajacin no radiativa y la relajacin fluorescente. La relajacin no radiativa comprende la
relajacin vibracional (entre estados vibracionales del mismo nivel energtico) y conversin
interna (entre niveles excitados diferentes)
La relajacin vibracional , sealada por las flechas onduladas cortas entre los niveles de
energa vibracionales, tiene lugar durante las colisiones entre molculas excitadas y las
molculas del solvente. Durante estas colisiones el exceso de energa vibracional se transfiere
a las molculas del solvente. La ganancia de energa vibracional del solvente se refleja en un
ligero incremento de la temperatura del medio. La relajacin vibracional es un proceso tan
eficiente que el tiempo de vida promedio de un estado vibracional excitado es de 10-15 s
aproximadamente.
Tambin puede ocurrir el relajamiento no radiante entre el nivel vibracional inferior de un
estado electrnico excitado y el nivel vibracional superior de otro estado electrnico. Este tipo
de relajacin es llamado conversin interna.
En la figura se ilustran otros procesos de relajacin: la fluorescencia y la fluorescencia.
La florescencia se puede observar cuando las molculas electrnicamente excitadas se relajan
desde el primer estado vibracional del estado excitado a cualquiera de los niveles
vibracionales de estado fundamental. Mientras que para observar la fosforescencia, luego de
la excitacin debe existir un cruce intersistemas (entre dos estados excitados S1y T1) llevando
a la molcula a un estado excitado de menor energa y desde ese estado la molcula emite un
fotn de fosforescencia.
Recordemos que el camino ms probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza
el tiempo de vida media del estado excitado. Por tanto, si la desactivacin por fluorescencia es
rpida con respecto a los procesos sin radiacin, se observa tal emisin. Por otro lado, si un
camino sin radiacin tiene una constante de velocidad favorable, la fluorescencia no tiene
lugar o es menos intensa.
La fluorescencia y fosforescencia estn limitadas a un nmero relativamente pequeo de
sistemas o molculas que incorporan caractersticas estructurales y ambientales que hacen que
la velocidad de los procesos de desactivacin sin radiacin se reduzcan hasta el punto que la
reaccin de emisin puede competir cinticamente.
Una vez que la especie ha sido excitada a niveles energticos superiores, la desactivacin o
prdida de la energa en exceso se puede efectuar a travs de diferentes procesos, el camino
ms probable hacia el estado fundamental es aquel que minimiza el tiempo de vida del estado
excitado (es decir el tiempo en que permanece la molcula en el estado excitado).

178
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2.1 Diferencias y semejanzas entre la fluorescencia y fosforescencia

La fluorescencia se presenta ms comnmente y en forma ms intensa en los compuestos que


tienen grupos funcionales aromticos. Algunos compuestos que tienen estructuras de
carbonilos alifticos y alicclicos o de dobles enlaces conjugados con un alto grado de
estabilidad de resonancia tambin pueden presentar fluorescencia, pero el nmero de estos es
relativamente pequeo comparado con el nmero de sistemas aromticos fluorescentes. Para
que exista la fosforescencia generalmente los compuestos deben tener una estructura an ms
rgida que en la fluorescencia.
La fluorescencia y la fosforescencia se ven inhibida por aumento en la temperatura,
disminucin en la viscosidad de solvente, aumento de la concentracin del analito, ya que
todas ellas aumentan la posibilidad de desactivacin no radiativa (aumento de choques).
La fluorescencia puede aparecer en muestras en estado gaseoso, lquido o slido, mientras que
la fosforescencia slo puede darse en estado lquido y mejor an slido.
El estado excitado donde se produce la emisin fluorescente tiene un tiempo de vida media
corta ms corto (10-8 s) que el correspondiente a la fosforescencia (varios segundos o ms),
entonces, la emisin fluorescente cesa casi inmediatamente (< 10-5 s) luego de que desaparece
la fuente de excitacin. Por el contrario, las emisiones de fosforescencia pueden tardar desde
varios minutos a horas luego de que ha desaparecido la fuente de exciatcin.
Tanto la fluorescencia como la fosforescencia, tiene una longitud de onda ms larga que la
radiacin utilizada para su excitacin. Si comparamos las longitudes de onda entre la
fluorescencia y la fosforescencia, esta ltima, tiene siempre longitudes de ondas ms largas
que la fluorescencia.
La fluorescencia es un fenmeno no muy comn, pero la fosforescencia es an menos
frecuente de presentarse en sistemas qumicos. Este ltimo fenmeno est confinado a
compuestos qumicos muy especficos y bajo condiciones extraordinarias. Para que los
procesos de desactivacin por fosforescencia puedan competir con los procesos de
desactivacin por fluorescencia y por relajaciones no radiativas, el medio debe ser altamente
viscoso y la temperatura del sistema debe ser del orden de la temperatura del nitrgeno
lquido aunque hay excepciones sobre todo en slidos en las cuales la fosforescencia se
presenta en condiciones normales, por ejemplo, el mineral wilmenita (ZnSiO4) cuando es
excitado con radiacin ultravioleta, fosforesce en condiciones ordinarias y el tiempo que dura
la fosforescencia es alrededor de 340 horas despus de que ha cesado la excitacin.
Ambas tcnicas son muy tiles en el estudio terico de estructura qumica, enlaces,
configuracin electrnica en molculas, niveles de energa en teora de orbitales moleculares,
etc., sin embargo debido a las limitaciones fsicas que impone la fosforescencia, en qumica
analtica la aplicacin de estos fenmenos est restringida a la fluorometra, que consiste en la
cuantificacin de la radiacin emitida por fluorescencia de una especie qumica que posee
estas caractersticas y que es directamente proporcional a su concentracin.

2.2 Relacin entre intensidad de fluorescencia y concentracin.

La relacin que existe entre la seal de fluorescencia y la concentracin es directamente


proporcional: a mayor concentracin mayor seal de fluorescencia y viceversa, por lo que una
grfica de intensidad o seal de fluorescencia contra concentracin es una lnea recta.

Sfluorescencia = kfluorescencia C

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2.3 Instrumentacin para fluorescencia

Los componentes de un fluormetro o


espectrofluormetro son muy similares
a los de un espectrmetro Visible- UV.
Un diagrama simplificado de los
componentes de un fluormetro son los
que aparecen en la Figura. El haz de
radiacin dirigido al recipiente de
muestra pasa por un filtro
(fluormetro) o por un monocromador
(espectrofluormetro), donde se
selecciona la longitud de onda de la
radiacin que va ha incidir en la
muestra. La radiacin fluorescente
emitida por la muestra es en todas
direcciones pero es ms
convenientemente medida a un ngulo
de 90 con respecto al haz incidente ya
que la radiacin dispersada por la solucin y por la celda misma puede interferir con la
radiacin emitida por la especie fluorescente.

2.4 Ventajas de las tcnicas fluorescentes y fosforescentes respecto a los mtodos de


absorcin

Uno de los aspectos ms atractivos de la fotoluminiscencia es su sensibilidad, con lmites de


deteccin que son a menudo de tres rdenes de magnitud ms pequeos que los encontrados
en espectroscopa de absorcin. Los lmites de deteccin tpicos son del orden de las partes
por billn. Otra ventaja de los mtodos fotoluminiscentes es su gran intervalo de lineal de
concentracin, que es a menudo significativamente mayor que los encontrados en los mtodos
de absorcin. Finalmente, la selectividad de los procedimientos de fotoluminiscencia es a
menudo mejor que la de los mtodos de absorcin. Los mtodos de fotoluminiscencia sin
embargo son mucho menos aplicables que los de absorcin debido al nmero de sistemas
qumicos que pueden producir fotoluminiscencia.

2.5 Aplicaciones de la fluorescencia

Durante un tiempo y no hace muchos aos, la espectroscopia de fluorescencia molecular


estuvo restringida en sus aplicaciones cuantitativas a unos cuantos compuestos qumicos
raros. Hoy da la fluorescencia es de primordial importancia en la qumica analtica. Una de
sus ms espectaculares aplicaciones ha sido en la deteccin y cuantificacin de substancias
que son separadas a travs del uso de la cromatografa de lquidos. Muchos sistemas
bioqumicos tienen una estructura tal que frecuentemente presentan fluorescencia o pueden
ser trasformados a especies de este tipo si originalmente no lo son. Por otro lado, especies
inorgnicas que son difciles de detectar y cuantificar por espectroscopia UV-Visible o por
Absorcin Atmica se analizan por fluorescencia. Adicionalmente a esto los niveles de
deteccin son del orden de partes por billn, cantidades que por otras tcnicas son difciles
de detectar. Estas entre otras son las razones de la importancia creciente de la fluorescencia

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molecular. Algunas de las especies que pueden ser analizadas por fluorescencia son las
siguientes:

Compuestos Orgnicos y Bioqumicos: adenina, cido antranlico, cistena, hidrocarburos


aromticos policclicos, indol, naftol, protenas, cido saliclico, escatol, triptfano, cido
rico, adrenalina, alquilmorfina, LSD, penicilina, fenobarbital, procana, reserpina, clorofila,
alcaloides, flavonoides, esteroides, cido ascrbico, cido flico, nicotinamida, piridoxal,
corticoesteroides, estrgenos, progesterona, andrgenos, cidos biliares, colesterol,
triglicridos, creatinina, deshidrogenasas, transaminasas, fosfatasas, perioxidasas, ATP,
luciferina, luciferasa, vitaminas: A, B1, B2, B6, C y la E, etc.

Compuestos Inorgnicos: cianuro, fluoruro, sulfatos, fosfatos, aluminio, arsnico, berilio,


boro, calcio, magnesio, tierras raras, selenio, uranio, etc.
Sin duda alguna las aplicaciones ms importantes en la fluoromtria son en anlisis de
alimentos, de productos farmacuticos, de productos naturales y en anlisis clnicos.

Cuestionario
1. Cul es el fundamento de los mtodos de fluorescencia y fosforescencia?
2. En qu se diferencian los dos mtodos anteriores con la quimioluminiscencia?
3. En qu se diferencian la fluorescencia de la fluorescencia?
4. Cules son las ventajas de los mtodos fotoluminiscentes respectos de os mtodos de
absorcin?
5. Cules son las partes que constituyen un instrumento empleado en las mediciones de
fluorescencia?

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MTODOS NO ESPECTROSCPICOS
1. Introduccin

Recordemos que los mtodos no espectroscpicos no involucran transiciones entre estados


energticos, sino que la interaccin entre la radiacin electromagntica y la materia ocasiona
cambios en la direccin o en las propiedades fsicas de la radiacin electromagntica. En estos
mtodos no se miden espectros. Los ms frecuentemente utilizados son: la turbidimetra y la
nefelometra, ambos mtodos se basan en la dispersin de la luz.

2. Turbidimetra
Cuando una solucin turbia, esto es, una suspensin de partculas slidas en un lquido, se
interpone en la trayectoria de la luz, la potencia radiante que llega al detector es menor que la
que llegara si se tratara de un lquido transparente (no absorbente). Esta reduccin es el
resultado de la dispersin causada por reflexin y refraccin en las partculas suspendidas. La
luz se dispersa en todas direcciones y por consiguiente el poder de radiacin del haz que llega
al detector disminuye de modo considerable. Una determinacin turbidimtrica se efecta de
la misma forma que las medidas espectrofotomtricas de absorcin y el resultado puede
expresarse en unidades de absorbancia. Anlogamente a la ley de Beer, es posible obtener
una relacin entre la absorbancia y la concentracin del material suspendido.
Sin embargo, esta expresin (A = k C) slo es aplicable para un grado de turbidez bajo y
longitudes de camino ptico cortas, pues la relacin entre el nmero, el tamao y la cantidad
de luz dispersada es bastante compleja. Debido a esto, las curvas de calibracin de las
determinaciones turbidimtricas estn lejos de ser lineales.
Es sencillo comprender que, para una cierta cantidad de material suspendido en un
determinado volumen de un lquido, la dispersin causada por efectos de reflexin aumenta al
disminuir el tamao de partcula. Este razonamiento slo resulta vlido para un cierto tamao
de partcula, por debajo del cual no ocurre reflexin alguna. Recordemos que un cuerpo puede
reflejar la luz nicamente cuando su tamao es al menos la mitad de la longitud de onda de la
luz incidente. Por lo tanto, la luz azul se dispersa en mayor grado que la amarilla o la roja, por
lo que proporciona una sensibilidad ms alta en la turbidimetra. Estos hechos, aunados al
conocimiento de que rara vez se obtiene un tamao de partcula uniforme, sugieren que la
situacin es bastante compleja.
Generalmente es difcil ajustar las condiciones de una determinacin turbidimtrica, de tal
manera que el tamao de partcula sea reproducible. Algunos factores de mayor influencia son
la forma, el orden y la velocidad de mezclado de los reactantes, la agitacin, la temperatura, la
presencia o ausencia de electrolitos inertes y las concentraciones de las soluciones. Las
partculas grandes son indeseables pues causan heterogeneidades al sedimentarse.
Frecuentemente se aaden coloides protectores del tipo de la goma arbiga o de la gelatina
para reducir la floculacin y la sedimentacin. En las determinaciones turbidimtricas se
aceptan exactitudes y precisiones bajas a cambio de rapidez y simplicidad
El equipo que se emplea en estas determinaciones se denomina turbidmetro. Los
componentes y la distribucin de los mismos es igual a la de espectrofotmetro de absorcin,
de hecho cualquier espectrofotmetro puede funcionar como turbidmetro. Aunque es
deseable contar con un haz de luz monocromtico, no es un factor indispensable.
En la figura se muestra un turbidmetro para medidas rpidas en campo y un turbidmetro
convencional

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Turbidmetro de campo Turbidmetro convencional

Las aplicaciones ms comunes de los mtodos turbidimtricos en el anlisis de especies


inorgnicas son quiz las determinaciones de cloruro y sulfato en agua, por medio de la
formacin de cloruro de plata y sulfato de bario, respectivamente.

2.1 Ejemplo de algunas aplicaciones turbidimtricas

2.1.1 Anlisis de concentracin bacteriana por turbidimetra

Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos
de bacterias, independientemente del tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por
unidad de concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la
absorbancia es directamente proporcional al peso seco, independientemente del tamao
celular del microorganismo. Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por
partcula o por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las clulas
bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el nmero de microorganismos totales
o el nmero de microorganismos viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una
"curva de calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es posible
relacionar Absorbancia con el nmero de microorganismos totales

Absorbancia en funcin del Peso


Seco

Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que vara con


la longitud de onda utilizada
y representa la inversa del
peso seco del
microorganismo que
produce un aumento de 10
veces en el valor de la
absorbancia (1/W0).

Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (g/ml-
mg/ml).

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La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica para suspensiones
diluidas de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que
valores mayores producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de
utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor
sensibilidad por el bajo nivel de absorcin.

2.1.2 Determinacin de sulfato en aguas

La determinacin de sulfato en aguas puede llevarse a cabo por turbidimetra. En esta tcnica
se trata la muestra con suficiente cantidad de cloruro de bario de modo que el sulfato presente
en la muestra precipite como sulfato de bario insoluble, de color blanco. La reaccin es la
siguiente:

SO 42 Ba 2 BaSO 4 precipitad o blanco

Luego se agrega a la solucin un estabilizante que impida la decantacin del precipitado del
medio lquido en el cual se encuentra por su mayor densidad y permita mantener las partculas
de sulfato de bario uniformemente distribuidas en el recipiente. En estas condiciones si se
hace incidir un haz de luz sobre la muestra se producir una dispersin del haz. La
disminucin de la radiacin que llega al detector debida a la dispersin estar directamente
relacionada a la concentracin de sulfato en la muestra. Al igual que en las determinaciones
espectrofotomtricas, debe construirse una curva de calibracin empleando soluciones patrn
de concentracin conocida de sulfato.

3. Nefelometra
La nefelometra es un procedimiento analtico que se basa en la dispersin de la radiacin que
atraviesan las partculas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que
existe una suspensin de partculas slidas, se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia. La dispersin no supone la prdida neta de potencia radiante,
solo es afectada la direccin de la propagacin, porque la intensidad de la radiacin es la
misma en cualquier ngulo. La intensidad depende de: el nmero de partculas suspendidas,
su tamao, su forma, los ndices refractivos de la partcula y del medio dispersante, y la
longitud de onda de la radiacin dispersada
El instrumento empleado es un nefelmetro. Los componentes principales son muy similares
a los del instrumental empleado en las mediciones especpectrofluorimtricas. El detector
generalmente forma un ngulo de 90 con el haz incidente.
La mayor parte de los requerimientos sealados para la turbidimetra se aplican tambin en la
nefelometra y las dificultades que se presentan son similares. Las curvas de calibracin estn
lejos de ser lineales, a menos que la sustancia a determinar est presente en concentraciones
muy bajas. Una determinacin nefelomtrica de cantidades pequeas de una especie,
normalmente produce mejores resultados que la correspondiente tcnica turbidimtrica, pues
la medicin de una baja intensidad de luz es ms exacta y precisa que la medida de una
pequea variacin de la intensidad de una luz intensa.
Sin embargo esta ventaja no suele ser suficiente para justificar la adquisicin de un
instrumento especial. Por consiguiente la tcnica no tiene un papel preponderante en las
determinaciones de rutina, aunque es de gran importancia para la evaluacin del tamao y de
la forma de las macromolculas y para la determinacin de sus pesos moleculares.

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Cuestionario
1. Cul es el fundamento de las mediciones turbidimtricas y nefelomtricas?
2. En qu se diferencian cada una de ellas?
3. Qu equipos pueden utilizarse en una determinacin turbidimtrica?
4. Qu equipos pueden emplearse en una determinacin nefelomtrica?

BIBLIOGRAFIA

1. Rubinson, J.; Rubinson,K.: Qumica Analtica Contempornea, Prentice-Hall


Hispanoamericana 2000
2. Harris, D.C. Analisis Qumico cuantitativo, Iberoamericana, 1992
3. Skoog, D.A., West, D.M. y Holler, F.J., Qumica Analtica, McGraw-Hill, Mjico,
1995
4. Skoog, D.A., West, D.M. y Holler, F.J., Fundamentos de Qumica Analtica,
Revert, 1996.

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