UNIVERSIDAD DEL QUINDO

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS Y

TECNOLOGAS

Lab N2: Febrero 27 de 2017

CUANTIFICACIN DE PROTENAS 2
Tema: Cuantificacin de
protenas
Docentes: Clara Mara Meja Doria. Qca, M.Sc.
Alejandro Lozano B. Qco.

OBJETIVOS

Introducir al estudiante en los diferentes mtodos para la cuantificacin de

protenas, su fundamento, sus ventajas y sus inconvenientes.
Construir una curva de calibracin.
Repasar la preparacin de diluciones.

MATERIALES Y REACTIVOS

MATERIALES Y EQUIPOS

Balones aforados de 10 mL Gradilla

Vaso de precipitado de 10 mL, 25 mL Tubos de ensayo

Pera de succin Cubeta de cuarzo
Pipetas de 5mL, 10mL Espectrofotmetro
REACTIVOS

Agua destilada Reactivo de Bradford

Solucin estndar de BSA (2

Reactivo de Biuret
mg/mL)

Muestras de protenas a analizar

PROCEDIMIENTO

Para la determinacin de la concentracin de una protena se utilizarn dos mtodos:

A. Mtodo de Bradford y B. Mtodo de Biuret

Mtodo A
Aada 2 mL del reactivo de Bradford a los tubos estndar y muestras problemas
preparadas como se indica en la Tabla 4.

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Lab N2: Febrero

Deje 27 de 2017 ambiente y leer Absorbancia a 595 nm frente al blanco. El color es
a temperatura
estable 1 hora.

Tabla 2. Protocolo para la cuantificacin de protenas por el mtodo de Bradford.

Reactivos Resultados
Estndar Rvo.
Agua [protena
Tubo BSA (2 Bradford A545 nm
(mL) s]
mg/mL) (mL) (mL)
Blanco 0 10 2
1 2 8 2
2 4 6 2
3 5 5 2
4 6 4 2
5 8 2 2
6 10 0 2
Muestras
M1 5 0 2
M2 5 0 2

- Represente la curva estndar.

- Calcule el coeficiente de extincin.
- Realice dos diluciones de las muestras problema (1:10 y 1:20).
- Calcule las concentraciones de protenas de las muestras M1, M2 y sus diluciones.

Mtodo B
Aada 2 mL del reactivo de Biuret a los tubos estndar y muestras problemas
preparadas como se indica en la Tabla 2.

Deje a temperatura ambiente y leer la Absorbancia a 545 nm frente al blanco. El color

es estable 1 hora.

Tabla 3. Protocolo para la cuantificacin de protenas por el mtodo de Biuret.

Reactivos Resultados
Estndar Rvo.
[proten
Tubo BSA (2 Agua (mL) Biuret A595 nm
as]
mg/mL) (mL) (mL)
Blanco 0 10 2
1 2 8 2
2 4 6 2
3 5 5 2
4 6 4 2
5 8 2 2
6 10 0 2
Muestras
M1 5 0 2
M2 5 0 2

- Represente la curva estndar.

- Calcule el coeficiente de extincin.
- Realice dos diluciones de las muestras problema (1:10 y 1:20).
- Calcule las concentraciones de protenas de las muestras M1, M2 y sus diluciones.

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CUESTIONARIO

1. Para qu se realiza la cuantificacin de protenas?

2. Mencione las diferencias y semejanzas de los mtodos empleados.
3. Consulte las reacciones que se presentan en cada uno de los mtodos.

BIBLIOGRAFA
Bradford, M. (1976). A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram
quantities of protein utilizing the principle of protein-dye inding. Anal Biochem. 72: 248-
254.

Suelter, C. (1985). A practical guide to enzymology. New York: Editorial John Wiley and
Sons.

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