UNIVERSIDAD VERACRUZANA

CAMPUS COATZACOALCOS
FACULTAD DE CIENCIAS
QUMICAS

ACADEMICO
Dra. Arely del Carmen Ortega
Martnez
EXPERIENCIA EDUCATIVA
Cultivo de Clulas y Tejidos
CARRERA
Ing. en biotecnologa
GRUPO
601
PRCTICA No.1
Inmovilizacin de clulas
INTEGRANTES:
Corts Pegueros Jessica
Martnez Hernndez Luis
Miguel
Ricrdez vadillo Mayra
INTRODUCCIN
Los usos de nuevos mtodos
biotecnolgicos estn centrados en la
optimizacin de un proceso, que nos
permitan obtener productos
metabolizados por microorganismos y
que a la vez sea til para el hombre.
Tal es el caso de inmovilizacin de
clulas, mtodo que est basado en
la limitacin del movimiento de
clulas vivas a cualquier parte de su
entorno (Steenson et al, 1987),
promoviendo as la efectividad de
tomar el sustrato y transformarlo en el
producto deseado, y cuyas ventajas
nos ofrecen que la clula se
encuentre protegida a sustancias
txicas y estrs ambiental, que
aumente su optimizacin y reduzca
los costos de su manejo.
Existen diferentes tcnicas para
lograr una inmovilizacin celular, que
estn basadas en el
microencapsulamiento (rodear
completamente a las clulas),
comnmente son polmeros no
txicos y biocompatibles para la
proteccin de la clula. Por ejemplo,
la inmovilizacin en alginato y la
inmovilizacin en agar, ambas
tcnicas permiten que las clulas no
pierdan su actividad metablica a
pesar de encontrarse encapsuladas
en una consistencia ms slida en
caso del alginato o a comparacin del
agar que como matriz tiene menor
rigidez.
El encapsulamiento de
microorganismos suele ser de mayor
dificultad, ya que no todos los
microorganismos responden
favorablemente a una inmovilizacin,
por lo tanto, para comenzar a
inmovilizar es recomendable el uso
de levadura, que nos asegurar la
formacin de esferas en alginato y/o
en agar, y por ende una fermentacin
deseada.
Palabras Clave: inmovilizacin, agar,
cultivo celular, alginato.
MATERIALES Y MTODOS
Preparacin de medio de cultivo
previos a la inmovilizacin
Se prepar 150 ml de medio para
crecimiento de levadura comercial la
preparacin se hizo con extracto de
levadura (10 g/L), peptona (20 g/L) y
glucosa (20 g/L), se prepar tambin
50 mL de solucin agar-agar al 1.2%
(p/v). se esterilizaron en la autoclave
a 115C y 1.5 atm. de presin durante
15 minutos.
Cultivo de levadura comercial en el
medio lquido
En condiciones aspticas se disolvi
3 g. de levadura en 10 mL de medio
de cultivo estril para su activacin,
posteriormente se transfiri al matraz
de cultivo y est se coloc en una
incubadora rotacional a 30C y 150
rpm durante 48 horas.
Centrifugacin del cultivo de levadura
Se centrifugaron 100 g del cultivo a
2000 rpm y 4C durante 5 minutos
para la obtencin del pellet que se
utiliz para la inmovilizacin.
1. Inmovilizacin en perlas de
alginato
Preparacin del alginato de sodio y
cloruro de calcio para la
inmovilizacin
Se disolvi 3 g de alginato de sodio
en 100 mL de medio (3% p/v) en un
vaso de precipitado, se agit durante
30 min posterior a esto se calent
ligeramente para poder tener una
mejor solubilizacin.
Resuspensin de clulas y su
inmovilizacin
Se resuspendi el pellet obtenido de
la centrifugacin en la solucin de
alginato de sodio, utilizando una
jeringa estril se tomaron alcuotas de
la mezcla alginato-levadura y desde
una altura de 15 cm aprox. se gote
en la solucin de cloruro de calcio
para formar las perlas de alginato-
levadura
2. Inmovilizacin en agar
Se prepar la mitad de levadura,
antes centrifugada en una solucin
que contiene 50 ml de NaCl2, agar
estril al 1.2% manteniendo a 50C.
En un vaso pp se aadi 50 ml de
aceite vegetal, utilizando una jeringa
estril, se tomaron alcuotas de
mezcla agar-levadura y desde una
altura de 15 cm se gote en el aceite
vegetal y se mantuvo en agitacin
constante.
Se obtuvieron las esferas y se llev a
bao de hielo a 0C. posterior a ello
se filtran las esferas y se lavaron con
amortiguador fosfato 0.1N a pH 5.5.
RESULTADOS

Figura 1. Inmovilizacin de perlas en alginato. Utilizando una jeringa estril se tomaron

alcuotas de la mezcla alginato-levadura y desde una altura de 15 cm aproximadamente, se gote
en la solucin de cloruro de calcio para formar las perlas de alginato-levadura.

Figura 2. Inmovilizacin de agar. Una vez obtenida la formacin de esferas en el aceite vegetal
esta se lleva a bao de hielo a 0C aproximadamente durante 15 min, esto para solidificar,posterior
a ello se filtran las esferas lavando con amortiguador fosfato 0.1 N a pH 5.5.
DISCUSIN
En la prctica anterior se llev a cabo
la inmovilizacin de clulas mediante
el uso de las matrices de alginato y
agar, que se caracterizan por no ser
txicos, por ser libres de
contaminantes y que permiten la
liberacin precisa de los
microorganismos en el sitio de inters
(van Veen y col., 1997; Cassidy y
col., 1996; Gentry y col., 2004b).
Actualmente el principal mtodo
utilizado es el alginato, cuyo objetivo
es la presencia de iones calcio para
formar una red de entrecruzamiento
con los polmeros del cido
gulurnico (Smidsrd y Skjak-Brka,
1990). Sin embargo, a nivel
laboratorio, el costo es muy elevado y
por tal motivo, la inmovilizacin de
clulas con soporte de agar, se
convierte en el ms ptimo para su
uso. Especficamente el agar se
caracteriza por su estabilidad qumica
y trmica, su capacidad de
entrecruzamiento (Guiseley, 1989),
siendo esta tcnica de inmovilizacin
la ms adecuada, sin embargo, ste
se tuvo que realizar en repetidas
ocasiones, ya que la preparacin del
medio (agar-agar) no tena las
concentraciones adecuadas, y por
ende la formacin de las esferas no
era la correcta.
En otras cuestiones, es importante
registrar los resultados del
crecimiento celular de la levadura,
(antes de ser inmovilizados y
despus), ya que de esta forma nos
permite identificar el momento en el
que se alcanza la fase estacionaria
de la clula, pero por cuestiones de
tiempo los resultados no fueron
medidos por D.O., otro motivo ms,
fue la falta de esterilizacin durante la
prctica, pues como sabemos es
indispensable mantener condiciones
aspticas para no tener resultados
alterados por causas de
contaminacin por otros
microorganismos.
CONCLUSIONES
La inmovilizacin de clulas por
alginato es un proceso que reduce el
tiempo de preparacin en
comparacin con el mtodo de agar,
adems de ser menos contaminante
que en agar ya que este ltimo utiliza
aceite vegetal como formador del
complejo para la formacin de
esferas que tiene que ser tratado de
acuerdo a las leyes de gestin
ambiental. Con esto podemos afirmar
que el mtodo de inmovilizacin con
sol. de alginato es ms eficiente.
A pesar del costo elevado que tiene el
alginato grado reactivo o industrial,
ste puede ser sustituido por grado
dental para usarlo en pruebas piloto,
adems el alginato grado dental
puede ser usado para inmovilizacin
de clulas en bioprocesos del giro
alimenticio por lo que reduce an ms
el costo en ellos, se recomienda
evaluar los efectos secundario que
pudieran causar.
REFERENCIAS
Abdel Hammed MS & H
ammouda OE. (2007).
Biotechnological potential
 uses of inmobilized algae. ambientales de
International Journal of microorganismos
Agriculture & Biology. 1: inmovilizados. [online]
183-192. Scielo.org.mx. Available at:
http://www.scielo.org.mx/s
Martnez-Trujillo, M. and cielo.php?
Garca-Rivero, M. (2017). script=sci_arttext&pid=S1
Revisin: Aplicaciones 665-27382012000100005