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MINISTRIO DA PESCA E AQUICULTURA

Secretaria de Monitoramento e Controle da Pesca e Aquicultura


Departamento de Monitoramento e Controle
Coordenao-Geral de Sanidade Pesqueira

Manual do MPA para o Programa Nacional de


Controle Higinico-Sanitrio de Moluscos Bivalves
- PNCMB

2014

CGSAP/DEMOC/SEMOC/MPA
MINISTRIO DA PESCA E AQUICULTURA

SBS Qd. 2 lote 10 Bloco J


Braslia DF 70.070-120
Fone 55 (61) 2023 3531
Website: http://www.mpa.gov.br

Coordenao-Geral de Sanidade Pesqueira

Manual do MPA para o Programa Nacional de


Controle Higinico-Sanitrio de Moluscos Bivalves
- PNCMB

2 edio

2014

CGSAP/DEMOC/SEMOC/MPA

2
ndice

APRESENTAO ..................................................................................................................... 4
INTRODUO......................................................................................................................... 5
MANUAL DE COLETA E REMESSA DE AMOSTRAS OFICIAIS DO MPA PARA O PROGRAMA
NACIONAL DE CONTROLE HIGINICO-SANITRIO DE MOLUSCOS BIVALVES - PNCMB ............ 7
INSTRUES GERAIS.............................................................................................................. 7
Amostras............................................................................................................................ 7
Anlises .............................................................................................................................. 7
Local de Coleta das Amostras .......................................................................................... 10
Integridade das amostras ................................................................................................ 11
Transporte das amostras ................................................................................................. 12
No conformidade das amostras .................................................................................... 12
Material necessrio para coleta de amostras ................................................................. 12
AMOSTRAS PARA ANLISE DE MICRO-ORGANISMOS CONTAMINANTES .......................... 13
Coleta de moluscos bivalves............................................................................................ 13
AMOSTRAS PARA ANLISE DE BIOTOXINAS MARINHAS ..................................................... 15
Coleta de moluscos bivalves............................................................................................ 15
AMOSTRAS PARA ANLISE DE MICROGALGAS POTENCIALMENTE PRODUTORAS DE
BIOTOXINAS MARINHAS ...................................................................................................... 17
Coleta de amostras para anlise qualitativa (rede de fitoplncton) ............................... 17
Coleta de amostras para anlise quantitativa (gua marinha) ....................................... 19
ORIENTAES PARA A DEFINIO DA RETIRADA DE MOLUSCOS BIVALVES NAS REAS DE
EXTRAO OU CULTIVO .......................................................................................................... 22
RESULTADOS DAS ANLISES E DEFINIO DA RETIRADA DE MOLUSCOS BIVALVES .......... 22
Resultados de anlise de biotoxinas ............................................................................... 23
Resultados de anlise de biotoxinas ............................................................................... 23

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Manual do MPA para o PNCMB
Coordenao-Geral de Sanidade Pesqueira

APRESENTAO

Tendo em vista o disposto na Lei n 11.958/2009, no Decreto n 7.024/2009, no


artigo 7 da Instruo Normativa Interministerial n 07/2012 e a Portaria n 204/2012
(alterada pela Portaria n 175 de 15 de maio de 2013), considera-se importante a
correta operacionalizao do monitoramento, controle e fiscalizao de micro-
organismos contaminantes e biotoxinas marinhas, bem como o monitoramento de
espcies de microalgas potencialmente produtoras de toxinas.

A Coordenao Geral de Sanidade Pesqueira CGSAP/DEMOC/SEMOC/MPA, em


conjunto com o LAQUA-Itaja, elaboraram este Manual do MPA para o Programa
Nacional de Controle Higinico-Sanitrio de Moluscos Bivalves PNCMB, que inclui
o Manual de Coleta e Remessa de Amostras Oficiais do PNCMB e Orientaes para
a definio da retirada de moluscos bivalves nas reas de extrao ou cultivo, que
tem como objetivo orientar e padronizar os procedimentos de coleta e remessa de
amostras no mbito do PNCMB.

Este material se prope a servir como material orientativo para a adequada


operacionalizao da coleta e remessa de amostras destinadas s anlises
laboratoriais realizadas pelo PNCMB.

Alm disso, estabelecer os critrios a serem utilizados para a definio de retirada


de moluscos bivalves e liberao de rea suspensa, de acordo com as os valores
dispostos no artigo 6 do Anexo I da INI MPA/MAPA n 07/2012 e com as
metodologias analticas oficiais dispostas na Portaria MPA n 204/2012 (alterada
pela Portaria n 175 de 15 de maio de 2013).

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Manual do MPA para o PNCMB
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INTRODUO

O Programa Nacional de Controle Higinico-Sanitrio de Moluscos Bivalves


PNCMB, institudo pela Instruo Normativa Interministerial n 7, de 8 de maio de
2012, foi elaborado para monitorar toda a produo do setor destinada ao consumo
humano, como ostras, berbiges, vieiras e mexilhes. Este programa foi institudo
em conjunto pelo MPA e Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento
(MAPA). A Portaria MPA n 204, de 28 de junho de 2012 (alterada pela Portaria n
175 de 15 de maio de 2013), estabelece os procedimentos para coleta de amostras
para realizao de anlises de micro-organismos contaminantes e de toxinas em
moluscos bivalves e de anlises para o monitoramento de espcies de microalgas
potencialmente produtoras de toxinas.

Os moluscos bivalves se alimentam retirando partculas orgnicas por processo de


filtrao da gua. Por essa razo, alm do alimento, composto de matria orgnica e
microalgas, esses animais podem acumular substncias txicas ou organismos
patogncios que estejam presentes na gua.

No ambiente aqutico existem naturalmente alguns organismos microscpicos


capazes de produzir substncias denominadas biotoxinas marinhas. Tais
substncias so perigosas para a sade humana e de outros animais. As biotixinas
so resistentes ao calor e no so eliminadas com o cozimento, ou em outro tipo de
processamento.

O consumo de moluscos bivalves contaminados com biotoxinas pode levar a srias


complicaes sade, tais como diarria, vmitos, dores abdominais, amnsia,
distrbios cardacos, nervosos e respiratrios, convulso e, em casos extremos, a
coma e morte.

Alm de biotoxinas marinhas, outro perigo a ser monitorado a presena de micro-


organismos patognicos que eventualmente possam estar presentes na gua de
cultivo dos bivalves e que tambm podem ser acumulados. O monitoramento destes
organismos reduz o risco de transmisso de doenas e infeces ao consumidor e
garante a segurana alimentar de ostras, vieiras, mexilhes e demais bivalves.

O PNCMB abrange as etapas de retirada, trnsito, processamento e transporte de


moluscos bivalves destinados ao consumo humano. Ao MPA cabe o monitoramento
de micro-organimos e de biotoxinas marinhas, e ao MAPA cabe a fiscalizao e a
inspeo industrial dos processadores de moluscos bivalves registrados no Servio
de Inspeo Federal - SIF.

O programa foi todo estruturado para garantir o controle da produo de moluscos


bivalves desde a coleta das amostras que so encaminhadas aos laboratrios, at o
envio dos animais para o beneficiamento em estabelecimento sob superviso dos
diferentes nveis do servio oficial de inspeo.

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Manual do MPA para o PNCMB
Coordenao-Geral de Sanidade Pesqueira

O monitoramento dos bivalves realizado justamente para verificar se seguro ou


no proceder retirada ou consumo dos moluscos. Neste sentido, o MPA determina
um plano amostral no qual so realizadas coletas peridicas dos animais para a
realizao de anlises laboratoriais. A amostragem realizada em locais
georreferenciados de cultivo e/ou extrao de moluscos bivalves.

Conforme os resultados das anlises, a retirada dos moluscos poder ser suspensa
ou liberada. H ainda a possibilidade de a retirada ser liberada sob condio, o que
significa que os moluscos devero passar por um processo de depurao e/ou
tratamento trmico, conforme determinao do servio oficial de inspeo.

A execuo do monitoramento ocorre por meio de agncias ou rgos estaduais de


defesa sanitria animal.

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MANUAL DE COLETA E REMESSA DE AMOSTRAS


OFICIAIS DO MPA PARA O PROGRAMA NACIONAL
DE CONTROLE HIGINICO-SANITRIO DE
MOLUSCOS BIVALVES - PNCMB
INSTRUES GERAIS

Amostras

As amostras destinadas ao monitoramento de biotoxinas marinhas e micro-


organismos em moluscos bivalves so de dois tipos: PARTE COMESTVEL DE
MOLUSCOS BIVALVES e GUA DO MAR.

As amostras da parte comestvel de moluscos bivalves so utilizadas tanto para a


determinao da concentrao de biotoxinas marinhas, quanto para a enumerao
de micro-organismos contaminantes que eventualmente possam estar presentes
nos moluscos bivalves.

As espcies de eleio de moluscos bivalves a serem coletadas para o


monitoramento so as do grupo dos mexilhes; e, no caso de no haver mexilhes
na rea de produo, a coleta deve contemplar a espcies predominante no local,
por exemplo, ostras ou vieiras.

Recomendamos que em reas onde no haja o cultivo de mexilhes sejam


colocadas pencas destes moluscos para coleta de amostras, devendo ser
alternados os pontos para evitar a viciao da amostragem.

As amostras de gua do mar so utilizadas para identificao e quantificao das


microalgas potencialmente produtoras de toxinas, eventualmente presentes nas
reas de cultivo de moluscos, por meio de anlise qualitativa e quantitativa,
respectivamente.

Recomenda-se que seja realizada a higienizao do material a ser utilizado para


coleta, bem como das mos do responsvel pela coleta antes do incio dos
procedimentos descritos nesse manual.

Anlises

Para as anlises de micro-organismos contaminantes so necessrias, no mnimo, a


coleta de 5 (cinco) amostras de 100 (cem) gramas cada da parte comestvel de
moluscos bivalves, obtidas em um mesmo dia e de diferentes pontos de coleta em
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uma mesma rea de extrao ou cultivo (Entende-se por rea de extrao ou cultivo
uma rea que pode conter um ou mais Parques aqucolas, cada um contendo uma
ou mais reas aqucolas. Figuras 3B e 3C).

Figura 1. Cinco amostras de 100g cada da parte comestvel de moluscos


bivalves.

Nos pontos de coleta em que forem identificadas (ou haja suspeita da presena de)
fontes de contaminao da gua, a coleta de amostras para anlise de micro-
organismos contaminantes poder ser dirigida a esses locais com o intuito de
identificar possveis contaminaes. Enquanto no haver indcios de contaminao
da gua, a coleta das amostras dever permanecer aleatria.

Para as anlises de biotoxinas marinhas so necessrias, no mnimo, a coleta de 2


(duas) amostras de 500 (quinhentos) gramas cada da parte comestvel de moluscos
bivalves, obtidas em um mesmo dia e de diferentes pontos em uma mesma rea de
extrao ou cultivo.

Para as anlises de microalgas potencialmente produtoras de toxinas so


necessrias, no mnimo, a coleta de 2 (duas) amostras de 250 (duzentos e

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cinquenta) mL de gua marinha para anlise quantitativa e 2 (duas) amostras


concentradas de rede de fitoplncton para anlise qualitativa.

ETIQUETA

Figura 2. Duas amostras de 250 mL de gua marinha, e duas amostras


concentradas de rede de fitoplncton.

Os 2 (dois) pontos de coleta para anlise de biotoxinas marinhas e de microalgas


potencialmente produtoras de toxinas podero coincidir com 2 (dois) dos 5 (cinco)
pontos de coleta para anlise de micro-organismos contaminantes dentro de uma
mesma rea de extrao ou cultivo.

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As amostras para anlises de biotoxinas e de microalgas potencialmente produtoras


de toxinas devero ser remetidas ao laboratrio separadas daquelas destinadas s
anlises de micro-organismos contaminantes.

Local de Coleta das Amostras

As coletas sero realizadas em 47 (quarenta e sete) reas de extrao ou cultivo


listadas no site do MPA, sendo um total de 38 (trinta e oito) reas para anlise
microbiolgica e de biotoxinas, 8 (oito) apenas para anlise microbiolgica e 1 (uma)
apenas para anlise de biotoxinas.
As amostras devero ser coletadas em cada rea de extrao ou cultivo em pontos
a serem definidos, a cada coleta, pelo fiscal responsvel pela mesma.

Figura 3 A. Localizao de uma rea de extrao ou cultivo.

rea de Extrao ou
Cultivo

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Figura 3 B. Delimitao de uma rea de Extrao ou Cultivo.

Fonte: Map data @2012 Google, MapLink

Figura 3 C. Exemplo de Parques Aqucolas, reas Aqucolas e de pontos de


coleta.

Integridade das amostras

As amostras devero ser preservadas em embalagem identificada por lacre


numerado ou similar que garanta sua inviolabilidade.
As amostras de moluscos bivalves devero ser embaladas individualmente e
posteriormente reunidas em uma embalagem nica que dever ser lacrada.
Quanto s amostras de gua marinha e de rede de fitoplncton, estas devero ser
lacradas individualmente em garrafas destinadas ao armazenamento da amostra.
As amostras devero ser remetidas ao laboratrio com formulrio padro anexo.

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Transporte das amostras

As amostras destinadas s anlises de biotoxinas e s anlises de microalgas


devero ser transportadas at o laboratrio da rede RENAQUA - LAQUA-Itaja sob
refrigerao constante, assegurando a manuteno da temperatura inferior a 5C.
O intervalo entre a coleta e o processamento das amostras no laboratrio no
dever exceder 72 (setenta e duas) horas.
As amostras destinadas s anlises de micro-organismos contaminantes devero
ser transportadas at o laboratrio de rede oficial do governo brasileiro sob
refrigerao constante, assegurando a manuteno da temperatura inferior a 5C
durante o transporte e evitando seu congelamento.
O intervalo entre a coleta e o processamento das amostras no laboratrio no
dever exceder 48 (quarenta e oito) horas.

No conformidade das amostras

Durante a recepo pelo laboratrio, caso detectado que as amostras esto inaptas
ou com no conformidade elas sero descartadas adequadamente.

Em seguida, o laboratrio comunicar ao rgo ou entidade estadual de defesa


animal sobre a necessidade de realizao de nova coleta, por motivo de no
conformidade.

Material necessrio para coleta de amostras

- Balde plstico
- Caixa trmica para transporte
- Caneta permanente para identificao
- Lpis
- Etiquetas
- Formulrio Padro
- Funil
- Garrafas (250mL e 500mL)
- Gelo
- Lacres numerados
- Mangueira com vlvula
- Rede de fitoplncton de 20 m de abertura de malha
- Sacos plsticos transparentes (Esterilizados)
- Soluo de lugol*
- Rgua
- Balana digital porttil
- Prancheta
*Soluo de lugol neutro (100%), 20 g de iodeto de potssio (IK), 10 g de iodo (I2), 200 ml de gua
destilada

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AMOSTRAS PARA ANLISE DE MICRO-ORGANISMOS


CONTAMINANTES
Coleta de moluscos bivalves

Passo 1 Trazer a bordo da embarcao uma penca de mexilhes em cada ponto


de coleta.

Passo 2 Coletar aleatoriamente de diferentes partes da penca, para compor 100g


de parte comestvel dos moluscos, aproximadamente 12 unidades de mexilhes
com mdia de 7cm de comprimento, conforme Tabela 1.

Tabela 1. Quantidade aproximada de moluscos necessrios para compor 100


gramas da parte comestvel.

Mdia de comprimento Quantidade Peso aproximado da parte comestvel

5 6cm 14 unidades de mexilhes 100g

6 7cm 12 unidades de mexilhes 100g

7 8cm 10 unidades de mexilhes 100g

- 500g de berbiges 100g

Passo 3 Lavar os moluscos com gua do mar limpa, retirando o mximo possvel
do material aderido s conchas.

Passo 4 Embalar em saco plstico devidamente etiquetado e fechado (embalagem


primria).

Passo 5 - Embalar novamente em saco plstico e lacrar o pacote (embalagem


secundria)

Passo 6 - Reunir as cinco amostras de diferentes pontos de coleta, embaladas


separadamente na embalagem secundria e acondicion-las em caixa trmica com
gelo (at 5C).

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Figura 4. Procedimento de coleta de moluscos para pesquisa de micro-organismos contaminantes. 14


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AMOSTRAS PARA ANLISE DE BIOTOXINAS MARINHAS

Coleta de moluscos bivalves

Passo 1 Trazer a bordo da embarcao uma penca de mexilhes.

Passo 2 Coletar aleatoriamente de diferentes partes da penca, para compor 500g


de parte comestvel dos moluscos, aproximadamente 60 unidades de mexilhes
com mdia de 7cm de comprimento, conforme Tabela 2.

Tabela 2. Quantidade aproximada de moluscos necessrios para compor 500


gramas da parte comestvel.

Mdia de comprimento Quantidade Peso aproximado da parte comestvel

5 6cm 70 unidades de mexilhes 500g

6 7cm 60 unidades de mexilhes 500g

7 8cm 50 unidades de mexilhes 500g

- 2,5kg de berbiges 500g

Obs.1: No caso de reas de extrao de moluscos de fundo, como os berbiges,


coletar 2,5 Kg de moluscos, considerando o peso total com concha.

Passo 3 Lavar os moluscos retirando o mximo possvel do material aderido s


conchas.

Passo 4 Embalar em saco plstico devidamente etiquetado e fechado (embalagem


primria).

Passo 5 - Embalar novamente em saco plstico e lacrar o pacote (embalagem


secundria)

Passo 6 - Reunir as duas amostras de diferentes pontos de coleta, embaladas


separadamente na embalagem secundria e acondicion-las em caixa trmica com
gelo para resfriamento.

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Figura 5. Procedimento de coleta de moluscos para pesquisa de biotoxinas marinhas.

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AMOSTRAS PARA ANLISE DE MICROGALGAS POTENCIALMENTE


PRODUTORAS DE BIOTOXINAS MARINHAS

Coleta de amostras para anlise qualitativa (rede de fitoplncton)

Passo 1 Lanar na gua a rede de fitoplncton previamente limpa e deixar afundar


sem que toque o fundo.

Passo 2 Recolher a rede lentamente na vertical para que filtre a gua,


concentrando o material em suspenso. Repetir esse procedimento por duas ou
trs vezes, dependendo da profundidade do local at que seja visvel a
concentrao do material. Drenar o excesso de gua para que o material filtrado
seja retido no copo.

Passo 3 Passar o contedo do copo para garrafa (embalagem primria) de


amostra devidamente identificada com o termo REDE.

Passo 4 - Caso necessrio, completar o volume da garrafa com gua do local.

Passo 5 Lavar a rede com gua do local em fluxo contrrio ao de filtrao.

Obs.1: Caso a previso de intervalo entre a coleta e a chegada ao laboratrio seja


superior a 24h, a amostra dever ser fixada com lugol 1%, sendo considerada
amostra fixada (adicionar 2,5mL de lugol na garrafa de 250ml de gua para alcanar
a concentrao de 1%).

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Figura 6. Procedimento de coleta de amostras de fitoplncton para pesquisa de biotoxinas.

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Coleta de amostras para anlise quantitativa (gua marinha)

Passo 1 Lanar lentamente na gua a mangueira previamente limpa com a vlvula


superior aberta e deixar afundar sem que toque o fundo.

Passo 2 Com o espao interno da mangueira preenchido com gua, fechar a


vlvula superior e recolher a mangueira.

Passo 3 Drenar o contedo da mangueira em balde, previamente limpo.

Passo 4 - Realizar os passos de 1 a 3, pelo menos trs vezes.

Passo 5 Passar uma parte do contedo do balde para garrafa (embalagem


primria) de amostra de 250mL devidamente identificada com o termo MANGUEIRA
com o auxlio de um funil.

Passo 6 - Fixar a amostra com soluo de lugol neutro a 1%. (ex: 2,5 ml em 250 de
amostra)

Passo 6 Lavar a mangueira e demais utenslios com gua do local.

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Figura 7. Procedimento de coleta de amostras de gua para anlises de microalgas .

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Figura 8. Acondicionamento e identificao das amostras de gua e algas.

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ORIENTAES PARA A DEFINIO DA RETIRADA


DE MOLUSCOS BIVALVES NAS REAS DE
EXTRAO OU CULTIVO
RESULTADOS DAS ANLISES E DEFINIO DA RETIRADA DE
MOLUSCOS BIVALVES

Os resultados do monitoramento de micro-organismos contaminantes e de


biotoxinas produzidas por microalgas marinhas sero utilizados para a definio da
retirada de moluscos bivalves, definida como:
I - liberada;
II - liberada sob condio; ou
III - suspensa.

Para a definio de retirada de moluscos bivalves sero considerados os seguintes


valores da Tabela 3.

Tabela 3. Critrio para a definio de retirada de moluscos bivalves


NMP para E.coli
em 100 gramas
Retirada liberada

(g) da parte Limites de biotoxinas produzidas por microalgas em 1


comestvel quilograma (Kg) da parte comestvel dos moluscos bivalves
dos moluscos
bivalves
E.coli PSP DSP DSP ASP AZP
<0,8mg <0,16mg <1mg <20mg <0,16mg
< 230
(eq-STX) (eq-AO) (eq-YTX) (AD) (eq-AZA1)
Retirada liberada
sob condio

230 NMP <0,8mg <0,16mg <1mg <20mg <0,16mg


46.000 (eq-STX) (eq-AO) (eq-YTX) (AD) (eq-AZA1)
Retirada suspensa

0,8mg 0,16mg 1mg 20mg 0,16mg


> 46.000
(eq-STX) (eq-AO) (eq-YTX) (AD) (eq-AZA1)

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Resultados de anlise de biotoxinas

Para a anlise de biotoxinas, o plano de amostragem ser de 2 classes, com n


(nmero de unidades de amostra) igual a 2 e c (nmero mximo de resultados
positivos permitidos) igual a 0, m (limite entre contagem satisfatria e no
satisfatria) igual ao limite estabelecido para cada biotoxina monitorada.

Nenhuma amostra deve conter mais que o limite estabelecido para cada biotoxina
monitorada e a definio de retirada de moluscos bivalves das reas de extrao ou
cultivo ser feita de acordo com o disposto na tabela 4.

Tabela 4. Definio de retirada de moluscos bivalves de acordo com os


resultados de anlise de biotoxinas.
N
N amostras N amostras N amostras Resultado de
amostras N amostras
DSP DSP 1mg AZP retirada de
PSP ASP 20mg
0,16mg (eq- 0,16mg moluscos
0,8mg (AD)
(eq-AO) YTX) (eq- AZA1) bivalves
(eq-STX)
=0 =0 =0 =0 =0 Liberada
1 1 1 1 1 Suspensa

A liberao de retirada de moluscos bivalves para rea de extrao ou cultivo


definida com retirada suspensa, ser realizada aps 2 (dois) resultados
consecutivos das anlises de biotoxinas marinhas dentro dos limites aceitveis

Resultados de anlise de biotoxinas

Para a anlise microbiolgica, o plano de amostragem ser de 3 classes, com n


(nmero de unidades da amostra) igual a 5 e c (nmero mximo de resultados
positivos permitidos) igual a 1, m (limite entre contagens satisfatrias e aceitveis)
igual a 230 e M(limite entre contagens aceitveis e no satisfatrias) igual a
46.000.

Nenhuma das amostras deve conter um NMP maior que 46.000 e no mais que uma
das cinco amostras deve conter NMP entre 230 e 46.000. A definio de retirada de
moluscos bivalves das reas de extrao ou cultivo ser feita de acordo com o
disposto na tabela 5.

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Tabela 5. Definio de retirada de moluscos bivalves de acordo com os


resultados de anlise microbiolgica em cada classe de NMP prevista.
N amostras N amostras N amostras Resultado de retirada de
NMP<230 230NMP46.000 NMP>46.000 moluscos bivalves
=5 =0 =0 Liberada
=4 =1 =0 Liberada
=4 =0 =1 Suspensa
3 2 =0 Liberada sob condio
4 1 1 Suspensa

A liberao de retirada de moluscos bivalves para rea de extrao ou cultivo


definida com retirada suspensa, ser realizada aps 2 (dois) resultados
consecutivos com NMP menor ou igual a 46.000 nas anlises micro-organismos
contaminantes.

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