ESTERILIZACIÓN

Mercedes Fernández Arévalo

 ESTERILIDAD
DEFINICIÓN:
• Ausencia de todas las formas de vida
viables
• Imposible en términos absolutos
(Probabilidad matemática)
• En la práctica: no se detecta ningún
microorganismo en cultivo
 Esterilización
PROCESO DINÁNICO:
Depende de:
• Producto (naturaleza, cantidad, grado
inicial de contaminación)
• Equipo
• Condiciones de trabajo

POSIBILIDAD DE DAÑOS
IRREVERSIBLES EN DETERMINADAS
ESTRUCTURAS MOLECULARES
¡¡PRECAUCIÓN¡¡
 Modos de actuación
 PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA:
Daños en proteínas y lípidos, provocando
extravasación del contenido
 DAÑOS EN PROTEÍNAS Y ÁCIDOS
NUCLEICOS:
El calor y las radiaciones afecta a la
estructura 3-D de las proteínas, dañando
DNA y RNA.
Técnicas de esterilización
 AGENTES FÍSICOS
 Calor (húmedo, seco)
 Radiaciones (UV, ionizantes)
 Filtración y manipulación aséptica

 AGENTES QUÍMICOS
 Gaseosos

Se selecciona en función de
la estabilidad del material
Técnicas de esterilización
 AGENTES FÍSICOS
 Calor (húmedo, seco)
 Radiaciones (UV, ionizantes)
 Filtración y manipulación aséptica

 AGENTES QUÍMICOS
 Gaseosos

Se selecciona en función de
la estabilidad del material
 Esterilización por calor:
Conceptos
La resistencia al calor varía según el
microorganismo
Š Tiempo de reducción decimal (D): una reducción
del 10 % de la población a una T determinada
Š Thermal Death Point (TDP): T menor a la que
mueren todos los microorganismos en 10
minutos
Š Thermal Death Time (TDT): tiempo al que
mueren todos los microorganismos a una T
determinada
 Esterilización por calor: cinética
• El proceso es exponencial
Log Células # • La velocidad depende de la T

10
500C
9
600C
8 800C

0 t
10 20 30 40
 Esterilización por calor: cinética
• Si la velocidad (-T-) es la misma, se necesitará más tiempo en
esterilizar un producto con mayor grado de contaminación

Log Células #
10
500C
9
600C
8 600C
0
10 20 30 40 t
 Esterilización por calor

• El calor produce modificaciones estructurales de

componentes celulares no compatibles con la vida
• Eficacia = f(Q, t, presencia de agua)
• Calor húmedo (coagulación y desnaturalización
de proteína esenciales)
<t - <T
• Calor seco (procesos de oxidación)
>t - >T
 S¡¡¡
Ó G E NO Calor húmedo
PIR
MI NA
E LI
NO
• AGUA HIRVIENDO:
Uso domiciliario (¡¡¡condiciones¡¡¡) T = 100 ºC P = 1 atm
Son sensibles numerosos patógenos, bacterias, virus y hongos
No se destruyen algunas endosporas y virus de hepatitis

• TINDALIZACIÓN: Elimina esporas

T = 100 ºC P = 1 atm
t = 20 – 45 min / día * 3 días

• BAJO P y T
(AUTOCLAVE)
Calor húmedo: AUTOCLAVE
En esencia, un autoclave es un recipiente en el
que se consigue exponer el material a esterilizar
a temperaturas superiores a la de ebullición del
agua, gracias a aumentar la presión.

• Cámara de autoclave
• Instalaciones periféricas
• Elementos de control (registro de P y T)

FASES DEL PROCESO:

1. Calentamiento
2. Esterilización
3. Enfriamiento
 Calor húmedo: AUTOCLAVE
1. FASE DE CALENTAMIENTO:
A medida que la resistencia calienta el agua del fondo de la cámara, se va
produciendo vapor que desplaza el aire, haciéndolo salir por la válvula de
purgado que está abierta.
Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de esterilización y se
cierra la válvula.

T
 Calor húmedo: AUTOCLAVE
2. FASE DE ESTERILIZACIÓN:
Una vez cerrada la válvula de purgado y alcanzada la temperatura de
esterilización previamente seleccionada se inicia el proceso de esterilización.
T = 120 ºC P = 2 atm t ≈ 20 ‘

t de esterilización (cepa control) al

que se añade un t de seguridad

T-P
 Calor húmedo: AUTOCLAVE
3. FASE DE DESCARGA:
DESCARGA
Terminado el proceso de esterilización, deja de funcionar la resistencia
calefactora, con lo que deja de producirse vapor y la presión y temperatura de
la cámara empiezan a bajar poco a poco.

DURACIÓN TOTAL DE PROCESO = 2 - 3 h

 Calor húmedo: AUTOCLAVE
Algunas normas a tener en cuenta:
• Para que la esterilización sea eficaz, la temperatura y el tiempo
seleccionados deben alcanzarse en todo el líquido. Como la
transmisión del calor en el líquido de los recipientes se realiza de
fuera hacia dentro, es evidente que la eficacia del proceso
dependerá del volumen de líquido.
• En general, no conviene esterilizar juntos recipientes grandes y
pequeños.
• En todo caso la selección de la temperatura y tiempo se efectuará
según sea el volumen de los recipientes.
• Los recipientes vacíos precisan de un tiempo de esterilización mayor
que los recipientes con líquido en su interior.
• Hay que tener en cuenta que algunos productos son termolábiles a
las temperaturas de esterilización con autoclave.
• En esos casos es preciso utilizar otros sistemas de esterilización,
como el filtrado.
 Calor húmedo: AUTOCLAVE
VENTAJAS:
• Económico
• Alta eficacia de destrucción
• No deja resíduos tóxicos
• Proceso fácilmente monitorizado

APLICACIONES:
• Materiales porosos
• Materiales quirúrgicos
• Productos líquidos
• Materiales plásticos (propileno, polietileno de alta densidad...)

NO VÁLIDO PARA PRODUCTOS TERMOLÁBILES

NO VÁLIDO PARA FLUÍDOS NO ACUOSOS (ej.: emulsiones)
Calor húmedo: AUTOCLAVE
Autoclave portátil Modelo 0080 Marca Autoclean.
Fabricada especialmente para Tattoomania. 6 Meses de
Garantia en todos sus componentes. Esteriliza a 121°
Centigrados. Con 4 ciclos de esterilización : 15, 20, 30 y 60
minutos. Su sistema comienza a contar el tiempo a partir
de que alcanza la temperatura necesaria y apaga
automaticamente, incluye aditamento para enfirado rapido
(sic). www.tattoomaniastudio.com/ ta2
 Pasteurización
) Pasteurización clásica:
– Calentamiento de un producto (leche) a 63 ºC
durante 30’
) High temperature short time
pasteurization (HTST):
– Calentamiento a 72 ºC durante 15’’
) Ultra high temperature treatment (UHTT):
– Calentamiento a 140 ºC durante 1’’
 S¡¡¡
NO
R ÓG E Calor seco
A PI
IN
IM
EL
Válido para productos termoestables e inestables
(o no sensibles) a la humedad).
>t >T
• Flameado (microbiología)
• Estufas de aire circulante (proceso discontinuo)
• Túneles de aire circulante (proceso continuo)

FILTROS HEPA (Ø 0.3μm)

Eficacia de retención > 99.97 %)
 Calor seco
Estufas de aire circulante (proceso discontinuo)

FASES DEL PROCESO:

• Secado y calentamiento
• Esterilización (30’ a 250 - 350 ºC)
• Enfriamiento

DISPOSICIÓN DE LOS
MATERIALES
(circulación del aire)
 Calor seco
Túneles de aire circulante (proceso continuo, industrial)

FILTRO HEPA

Secado y Esterilización Enfriamiento

calentamiento
 Calor seco

APLICACIONES:
• Fluidos no acuosos estables al calor (ceras,
aceites, parafinas, glicerol, ...)
• Material de vidrio (ampollas, viales, frascos)
• Algodón, gasas
• Sólidos sensibles a la humedad
• SÍ ELIMINA PIRÓGENOS (>T por >t)
• PRIONES (agentes infecciosos más resistentes
al Q, resisten T = 134 - 138 ºC / 1 h)
Técnicas de esterilización
 AGENTES FÍSICOS
 Calor (húmedo, seco)
 Radiaciones (UV, ionizantes)
 Filtración y manipulación aséptica

 AGENTES QUÍMICOS
 Gaseosos

Se selecciona en función de
la estabilidad del material
 Esterilización por radiaciones
RADIACIONES UV
226 – 328 nm
Alteran estructuras del ADN y del ARN
Aplicaciones:
• Disminuir contaminación aire y superficies de trabajo
• Quirófanos
• Mantener esterilidad zonas de trabajo
• Agua (concentración de solutos)
DESVENTAJAS
• Escaso poder de penetración
• No válido para medicamentos

PROTECCIÓN TOTAL DE USUARIOS

Esterilización por radiaciones
RADIACIONES UV
Mail sterilization equipment. ICU
Corp. is now able to offer corporate
America the equipment necessary to
conduct business through the US mail,
regardless of the possibilities of
contamination. All possible biological
warfare agents are rendered harmless.
All of ICU Corp's mail sterilization
equipment utilizes Ultra-violet light to
kill any bacteria, viruses and any other
pathogens, that may have come into
contact with your mail (sic).
 Esterilización por radiaciones
RADIACIONES IONIZANTES
Radiaciones con menores longitudes de ondas (R-γ y R- x)
 Mayores contenido energético y potencial de penetración
 Mayor rapidez de acción
 Producen radicales OH•, H• que reaccionan con
estructuras proteicas, lípídicas y ácidos nucleicos
Aplicaciones:
• Fármacos termolábiles (vitaminas, hormonas,
antibióticos,…)
• Material médico termolábil (jeringas, sondas, catéteres,
implantes, prótesis,…)
COSTE: EMPRESAS ESPECIALIZADAS
NORMAS DE SEGURIDAD
 Esterilización por filtración
ESTERILIZACIÓN POR ELIMINACIÓN FÍSICA
DE LOS CONTAMINANTES PRESENTES
EN UN FLUIDO, SIN PRODUCIR NI LA
INACTIVACIÓN NI LA MUERTE DE LOS
MICRORGANISMOS

Aplicaciones:
• Soluciones de productos termolábiles
• Filtración de aire en zonas límpias y cabinas
de flujo laminar
• Farmacia Hospitalaria: Preparados
extemporáneos
 Esterilización por filtración

NO ES UNA ETAPA DE
ESTERILIZACIÓN TERMINAL

PROCESAMIENTO POSTERIOR
Condiciones asépticas (personal, zona)

(No suele aceptarse por las autoridades

sanitarias)
 Esterilización por filtración
FILTROS DE MEMBRANA
HEPA: high-efficiency particulate air filters (0.3 μm,
usados en hospitales)
0.22 μm -0.45 μm (0.1 μm)
Composición: acetato/nitrato de celulosa, teflón, nylon,…
Compatibilidad, cesión de aditivos, integridad,
esterilizables (mejor desechables,…)
Técnicas de esterilización
 AGENTES FÍSICOS
 Calor (húmedo, seco)
 Radiaciones (UV, ionizantes)
 Filtración y manipulación aséptica

 AGENTES QUÍMICOS
 Gaseosos

Se selecciona en función de
la estabilidad del material
 Esterilización por agentes
químicos

• Óxido de etileno (C2H4O)

• Óxido de propileno (C3H6O)
• Cloro (Cl2)
• Dióxido de cloro (ClO2)
• Ozono (O3)
 Esterilización por agentes químicos

Óxido de etileno (C2H4O) • Alquilación de moléculas nucleofílicas

• Altamente inflamable (se mezcla con
gases inertes: CO2, N2, Freones)
• Alta capacidad de penetración
• Manipulación peligrosa
(MUTAGÉNICO, CARCINOGENÉTICO)
• Gas: irritación, náuseas, vómitos…
• Líquido: irritación y lesiones oculares,
quemaduras por congeláción
• Toxicidad ambiental y residual
• Ciclos de esterilización largos y
complejos (T, HR, t, [ ])
 Esterilización por agentes químicos
Óxido de etileno (C2H4O)

APLICACIONES
Materiales plásticos
Acero inoxidable
Instrumental delicado

No existen condiciones estándares

Concentración: 450 – 1000 mg/l
Temperatura: 30 – 60 ºC
Humedad relativa: 20 – 65 %
Presión
Tiempo exposición: 1 – 30 h
Tiempo aireación: 20 – 500 h (t legislados)
Esterilización por agentes químicos
 CONTROLES DE ESTERILIZACIÓN

CONTROLES BIOLÓGICOS Bacilus stearothermophilus

Bacilus subtilis

Cultivos Inoculación Incubación Chequeo

En cabinas (Usando la (7 días) diario
de FL (no técnica de
esterilizan) esterilización)
 MANIPULACIÓN ASÉPTICA

RECINTOS CON FLUJO DE AIRE LAMINAR

• Filtros HEPA
• Desplazamiento del aire dentro de un recinto a
velocidad uniforme y a lo largo de líneas paralelas
• Se transportan las partículas suspendidas en el aire
• Velocidad: 0.45 m/s – partículas < 15 μm
• Cabinas (menos costosas que salas completas con
flujo de aire laminar
• Flujo de aire laminar horizontal
• Flujo de aire laminar vertical
MANIPULACIÓN ASÉPTICA
CABINAS DE FLUJO LAMINAR
VERTICALES
MANIPULACIÓN ASÉPTICA
CABINAS DE FLUJO LAMINAR
HORIZONTALES
 MANIPULACIÓN ASÉPTICA
ZONAS LIMPIAS (Cleanroms)

Cualquier recinto cerrado en donde

entra aire filtrado por filtros HEPA y
en donde se trabaja bajo presión
positiva.

Zonas que proporcionan protección

al producto con el que se está
trabajando permitiendo flexibilidad
durante la manipulación.

(i.e., Class 10 = 10 particles per cubic foot; Class 1,000 = 1,000 particles per
cubic foot, etc.). Counts may be as high as 100,000 particles per cubic foot of
air. The class of cleanrooms required will determine the quantity and type of
HEPA or other filters needed.
 PLASTIC HARDWALL CLEAN ROOM

Acrylic, Lexan®
(polycarbonate) or
dissipative PVC rigid panels
are internally mounted to
powder-coated steel frame to
create smooth, easy-clean
surfaces

http://www.terrauniversal.com/products/cleanrooms/biosafe.php
PLASTIC SOFTWALL CLEAN ROOM
 MANIPULACIÓN ASÉPTICA
CABINAS DE BIOSEGURIDAD

Class I. Biosafety cabinet is a ventilated cabinet with an inward

airflow and outlet HEPA filters (protects personnel and the
environment, no product protection) (obsolete).
Class II. Laminar Flow Biological Safety Cabinets that protect
personnel, product and environment. They provide inward airflow to
protect personnel, downflow HEPA filtered air to the work area to
protect the product and exhaust HEPA filtered air to protect the
environment from particulate and aerosol hazards.
Class III. Glovebox. This is a gas-tight chamber operated through
sealed gloves which provide a complete barrier between the worker
and hazardous material. The Glovebox is maintained under negative
pressure with HEPA filtered supply air and double HEPA filtered
exhaust air.
CABINAS DE BIOSEGURIDAD
www.germfree.com
 CABINAS DE BIOSEGURIDAD
ALL-STEEL BIOSAFE ROOM

• 304/316 stainless steel or powder-

coated steel panels can be cleaned and
sterilized with industry-standard
disinfectants
• Rounded corners and ultra-smooth
interior surfaces eliminate germ traps
• Anti-microbial coatings available

http://www.terrauniversal.com/products/cleanrooms/biosafe.php