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Constructora Divecon S.A. rea de Gestin Ambiental. Cali. Colombia.
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Universidad Nacional Abierta y a Distancia (UNAD). Escuela de Ciencias Agrcolas,
Pecuarias y del Medio Ambiente (ECAPMA). Medelln. Colombia
artemisa1@gmail.com, 2juan.ramirez@unad.edu.co
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Resumen
Se revisan los procesos de Biorremediacin de de disposicin final de los mismos sin afectar los
suelos contaminados con hidrocarburos en Co- recursos suelo, agua y aire, el bajo costo en la
lombia, como una alternativa sostenible frente al operacin y experiencia tcnica de desarrollo sos-
deterioro progresivo de la calidad del medio am- tenible que puede continuar implementndose en
biente por el derrame de hidrocarburos. En la le- empresas similares donde se presenten este tipo
gislacin ambiental en Colombia y en el mundo, de residuos peligrosos.
todo residuo contaminado con hidrocarburos es
considerado un residuo peligroso; por lo tanto, no Palabras clave: bioaireacin, bioaumentacin,
puede ser dispuesto en suelo, aguas o incinerado biodegradacin, bioestimulacin, inoculacin.
a cielo abierto, lo que ha motivado a empresas del
pas en el mundo a implementar procesos de tra- Abstract
tamiento de lodos contaminados. En Colombia las This study analyzes bioremediation processes of
empresas petroleras, han venido implementando hydrocarbon contaminated soils in Colombia as a
la biorremediacin de lodos contaminados con sustainable alternative to the deterioration of envi-
hidrocarburos como alternativas, para el manejo ronmental quality by hydrocarbon spillage. Accor-
de residuos resultantes de los derrames que se ding to national and international environmental
presentan en las actividades de explotacin, re- law, all waste contaminated with hydrocarbons is
finacin, transporte y distribucin del producto. considered dangerous waste, and therefore it can-
Estas prcticas deben ser consideradas susten- not be released in the ground, water or be incine-
tables por su fcil implementacin, por los bajos rated. Such legislation has motivated companies
costos que generan la operacin y aplicacin del around the world to implement treatment proces-
proceso y por el beneficio para el medio ambiente. ses for contaminated soils. Within Colombia, oil
Entre los impactos positivos que estas prcticas companies have been implementing the bioreme-
han generado, se puede considerar las siguientes: diation of hydrocarbon contaminated soils in or-
solucin a la problemtica de generacin de lo- der to manage the waste coming from activities of
dos contaminados con hidrocarburos, alternativas oil drilling, refinement, transport and distribution.
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Revista de Investigacin Agraria y Ambiental Volumen 3 Nmero 2 julio-diciembre 2012 ISSN 2145-6097
These practices must be considered viable for affecting ground, water or air resources, the low
their ease of implementation, their low overhead cost of the operation, and the technical experien-
costs, and for the benefits they provide towards ce of sustainable development which can conti-
environmental quality. Among the positive im- nue to be implemented in companies dealing with
pacts that these practices have generated, it may dangerous waste.
consider the following: a solution for the problem
of hydrocarbon contaminated soils, alternatives Keywords: bioaugmentation, biodegradation, bios-
for the ultimate disposal of said waste without timulation, bioventing, inoculation.
Introduccin
La alta demanda energtica en el mundo moderno gresivo de la calidad del medio ambiente por el
ha determinado el uso intensivo del petrleo y sus derramamiento de crudos, ya que esta problem-
derivados como su principal fuente. Muchos de tica genera una amenaza real a la salud pblica,
sus componentes son empleados como materias as como el deterioro de los suelos, las aguas y la
primas bsicas en las industrias qumicas y petro- extincin de especies vegetales y animales.
qumicas. Este aumento en la explotacin del pe-
trleo ha determinado la aparicin de crecientes Biorremediacin
fuentes de contaminacin. Por ejemplo, derrames
accidentales desde buques petroleros, extraccin, La Biorremediacin es cualquier proceso que utili-
y procesamiento del petrleo y sus derivados, etc. za organismos vivos como microorganismos, hon-
De ah la trascendencia de encontrar herramien- gos y plantas, por medio de agentes o compues-
tas que permitan aumentar la velocidad de biode- tos derivados de cualquiera de ellos, para retornar
gradacin de este tipo de compuestos (Benavidez un medio ambiente alterado por contaminantes a
et al. 2006, Aranda, 2003). su condicin natural ya sea en el suelo o en las
aguas (Liu et al., 1989). Tambin se define como el
En la naturaleza, los hidrocarburos son eliminados proceso de aceleracin de la tasa de degradacin
del suelo por procesos de biodegradacin, volatili- natural de hidrocarburos por adicin de nutrientes
zacin, percolacin y drenaje superficial, por esto (Ercolli y Glvez, 2001).
en los ltimos aos se ha prestado mucha atencin
a los mtodos biolgicos tanto para el tratamiento Biorremediacin de suelos
de residuos industriales como en la recuperacin
de sitios contaminados. Estos mtodos se conocen La Biorremediacin en suelos es empleada para
genricamente como procesos de biorremediacin atacar o sustraer agentes contaminantes espec-
y tienen como objetivo el aprovechamiento y op- ficos del suelo, se realiza por medio de degrada-
timizacin de las capacidades biodegradadoras cin o transformacin de diferentes compuestos
naturales (Vecchioli, 1998, Vecchioli et al., 1997; nocivos en otros de menor toxicidad o materia or-
Brown et al., 1983). gnica en descomposicin. Estas degradaciones
o cambios ocurren usualmente en la naturaleza y
En la presente revisin se analiza la biorremediacin una adecuada manipulacin de los sistemas bio-
como alternativa saludable frente al deterioro pro- lgicos puede aumentar la velocidad de cambio o
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Biorremediacin en suelos contaminados con hidrocarburos en Colombia
degradacin (Rojas, 1999, Crdenas et al., 1996; Biodegradacin, que se refiere al proceso natural
Menezes et. al., 2003). mediante el cual bacterias u otros microorganis-
mos alteran y convierten molculas orgnicas en
La biorremediacin, es eficiente en el momento de otras sustancias, como cidos grasos y CO2. El
la limpieza de suelos contaminados (si las condicio- segundo, es la Biorremediacin, que es la adicin
nes de biodegradacin son optimas), en contraste de materiales a ambientes contaminados para
con alternativas ms costosas, econmica y am- producir una aceleracin del proceso natural de
bientalmente como la incineracin (lvarez, 2001; biodegradacin. El tercero, es la Fertilizacin, que
Belloso, 1998; Cursi y Calleja, 2000). Este tipo de es la adicin de nutrientes, como N o P a un me-
remediacin se puede acelerar por adicin de nu- dio contaminado para estimular el crecimiento de
trientes como nitrgeno y fsforo, la modificacin microorganismos nativos. El cuarto, es la Inocu-
de variables operacionales como humedad, pH y lacin, que se da como la adicin de microorga-
oxgeno, y la inoculacin con microbiota (Ercolli y nismos a un sitio contaminado, los cuales pueden
Glvez, 2001). Con las anteriores variables se pue- adicionarse junto con nutrientes (L Chau, 2000).
de alterar la actividad de los microorganismos pre-
sentes en el suelo acelerando sus procesos meta- Proceso de biorremediacin de lodos contamina-
blicos y, de esta manera, retornar las condiciones dos con hidrocarburos
naturales de los suelos (Infante, 2001).
El principio bsico de la biorremediacin consiste
Estos mtodos tienen ventajas y desventajas. Las en aumentar la velocidad de degradacin natural
potencialidades del mtodo estn en que general- de los hidrocarburos contaminantes de los suelos,
mente solo origina cambios fsicos menores sobre puede ser mediante la mezcla del residuo con la
el medio; cuando se usa correctamente no produ- capa superficial del suelo (material orgnica en
ce efectos adversos significativos, puede ser til forma de humus) y abonos orgnicos naturales,
para retirar algunos de los compuestos txicos del los cuales contienen microorganismos facultativos
petrleo, ofrece una solucin ms simple y com- que se adaptan al consumo y degradacin de los
pleta que las tecnologas mecnicas y es menos hidrocarburos. En el proceso tambin se dan re-
costosa que otras tecnologas. Dentro de las difi- acciones fsico-qumicas, por exposicin a agen-
cultades se encuentran que para muchos tipos de tes naturales, como la radiacin solar, la humedad
vertidos su efectividad no ha sido determinada, es y viento de cada zona (Fonseca y Vargas, 2006;
de difcil aplicacin en el mar, el tiempo necesario Lugo y Mesa, 2001; Chirinos y Pereira, 1999).
para su actuacin es largo, su implementacin es
especfica para cada lugar contaminado y su op- HC saturados > aromaticos ligeros > aromaticos
timizacin requiere informacin sustancial acerca de alto peso molecular > asfaltenos, resinas.
del lugar contaminado y de las caractersticas del
vertido. (Corona e Iturbe, 2004) Las bacterias, hongos y otros microorganismos se
encargan de transformar los componentes orgni-
Dentro de este tipo de procesos en los suelos cos del hidrocarburo en: CO2, H2O y humus, de la
deben tener claros cuatro trminos: el primero, la siguiente manera:
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Bacterias Hongos
Saccharomyco-
Beneckea Spirillum Cunninghamella Sporobolomyces
pisis
La inoculacin, es el proceso de agregar o adicionar En cuanto a los niveles de oxgeno, no debe ser
microorganismos al suelo, cuando se aplica mayor limitante porque los procesos deben ser aerobios;
diversidad se puede aprovechar las especies de la biodegradacin aerobia es ms eficiente que la
microorganismos ms eficientes en la degradacin anaerobia, por esto en los suelos con alto contenido
de estos compuestos (Martn et al., 2004; Narvez de arena puede tener mayor poder de degradacin
y Martnez, 2008). El ambiente tambin modifica y volatilidad por mayor cantidad de oxgeno (Holli-
este proceso al alterarse variables como la tempe- ger y Zehnder, 1996). Respecto con los nutrientes
ratura, el oxgeno y los nutrientes; para optimizar la su disponibilidad suele ser ms limitante que la de
biodegradacin la temperaturas debe estar en un O2, para mayor eficiencia y efectividad los suelos
rango de 535 C, porque la degradacin se com- deben tener nutrientes esenciales como N, P o Fe;
porta de manera directa a la temperatura; a menor y relaciones 120:10:1 de C/N/P (Alexander, 1999,
temperatura menor degradacin, menor volatilidad Eweis et al., 1999, Atlas y Unterman 1999; Glazer y
y mayor viscosidad, por lo que es aconsejable tem- Nikaido, 1995).
peraturas de medias a altas.
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Biorremediacin en suelos contaminados con hidrocarburos en Colombia
La biorremediacin puede llevarse a cabo In Situ: ex- La fitorremediacin constituye una variacin de
cavando el terreno y tratndolo a pie de excavacin, las tcnicas de biorremediacin, que se basa en
o bien Ex Situ, en instalaciones aparte. La tcnica el uso de plantas y los microorganismos asocia-
apropiada para llevar a cabo este proceso, debe ser dos a ellas as como las enmiendas del suelo y
el resultado de la valoracin de una serie de varia- tcnicas agronmicas dirigidas a liberar, contener,
bles y de caractersticas del sitio o del contaminante o transformar en compuestos inocuos a los conta-
por tratar (Torres y Zuluaga, 2009; Morelli, 1999). minantes del suelo (Torres y Zuluaga, 2009). Hoy,
las investigaciones en fitorremediacin se enca-
Biorremediacin in situ minan no slo al tratamiento de contaminantes
inorgnicos (metales, metaloides, haluros y radio-
Este tipo de tratamiento normalmente es la op- nucleidos), sino tambin al tratamiento de conta-
cin ms adecuada para la recuperacin de sue- minantes orgnicos; algunas especies de plan-
los, ya que no es necesaria la preparacin y ex- tas probadas con xito en la fitorremediacin de
cavacin del material contaminado. No obstante, suelos contaminados con hidrocarburos del pe-
antes de decidir el tipo de tratamiento deben va- trleo son Zea mays L., Panicum maximun Jacq.,
lorarse numerosos factores entre los que se des- Paspalum virgatum L., Echinochloa polystachya
tacan el impacto ambiental en la zona, las activi- H.B.K., Sorghum vulgare L., Phaseolus vulgaris
dades industriales que pueden verse afectadas, L., Phaseolus coccineus L., Chamaecrista nicti-
los costos comparativos con otros tratamientos, tans (L.) Moench., Brachiaria brizantha (Hochst.
las dificultades de acceso a la zona contaminada ex A. Rich) Stapf., Triticum aestivum L., Hordeum
para proveer de oxgeno y nutrientes, la determi- vulgare L., entre otras (Vasquez et al., 2010; Mes-
nacin del porcentaje de tratamiento, la veloci- sarch y Messarch, 1997).
dad del proceso y, por ltimo, el potencial peli-
gro de extensin de la contaminacin. Entre las Otros agentes biorremediadores
tcnicas ms utilizadas se tienen: bioaireacin o
bioventeo, inyeccin de aire a presin, atenua- Otros agentes biorremediadores son los anima-
cin natural, bioestimulacin, bioaumentacin. les que actan como agentes descontaminan-
(Torres y Zuluaga, 2009; Atlas y Unterman 1999; tes, ya que pueden desarrollarse en medios con
Heider et al., 1999; Alexander, 1999; Walter, 1997; fuerte toxicidad y poseen en su interior microor-
Matthews, 1993). ganismos capaces de retener metales pesados;
tal es el caso de la lombriz de tierra (lumbricus
Biorremediacin ex situ terrestris) que absorbe los contaminantes a
travs de los tejidos y los acumula en las vas
Se lleva a cabo cuando el procedimiento se realiza digestivas. Por ltimo, como se describe en el
fuera del lugar donde est la contaminacin (Torres numeral 2.3, se encuentran las bacterias, que
y Zuluaga, 2009; Atlas y Bartha, 2006). Entre las tc- son las ms empleadas en el proceso de biorre-
nicas ms utilizadas se tienen la disposicin sobre mediacin, otros microorganismos como hon-
el suelo (Landfarming), Bioceldas o biopilas, Trata- gos, algas, Cianobacterias y Actinomicetes son
miento de biosuspensin (Torres y Zuluaga, 2009; tambin empleados en la degradacin de com-
Atlas y Bartha, 2006; Torres, 2003; Plaza, 2001; Poz- puestos txicos en el suelo (Sutherland, 1992;
zo, 2000; Romero, 2000; Ercoli, 1998, 1999). Bossert y Compeau, 1995).
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El 16 de diciembre de 2005 fue aprobada por el Las limitantes frente a estas estrategias se en-
Consejo Nacional Ambiental, la Poltica Ambiental cuentran en la falta de recursos, dado que llevar
para la Gestin Integral de los Residuos o Dese- experiencias piloto demostrativas de tcnicas y
chos Peligrosos. El 30 de diciembre de 2005 entr tecnologas suelen ser costosas y los nodos de
en vigencia el Decreto 4741: Por el cual se regla- produccin ms limpia cuentan con recursos li-
menta parcialmente la prevencin y el manejo de mitados. Sin embargo, ya se tienen empresas
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Biorremediacin en suelos contaminados con hidrocarburos en Colombia
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Riquezas culturales Establece la obligacin del Estado y de las personas para con la
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y naturales de la Nacin conservacin de las riquezas naturales y culturales de la Nacin.
Funcin ecolgica Establece que la propiedad es una funcin social que implica obliga-
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de la propiedad privada ciones y que, como tal, le es inherente una funcin ecolgica.
Planificacin del manejo Establece como deber del Estado la planificacin del manejo y apro-
80 y aprovechamiento de vechamiento de los recursos naturales, para garantizar su desarrollo
los recursos naturales sostenible, su conservacin, restauracin o sustitucin.
Proteccin de los recursos Establece como deber de las personas, la proteccin de los recursos
95 culturales y naturales culturales y naturales del pas, y de velar por la conservacin de un
del pas ambiente sano.
Fuente: Trujillo y Ramrez (2011)
En general, se usan como referencia los par- vamente, se puede considerar una legislacin exi-
metros consignados en las distintas normas, le- gente en cuanto a parmetros de limpieza y bio-
yes o decretos, y se generalizan para el territorio rremediacin. Otras normatividades en la que se
Colombiano, soportados en legislacin nacional y basa la aplicacin, proteccin y manejo ambiental
tratados internacionales vigentes y que comparati- hidrocarburos son: (Tabla 3).
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Biorremediacin en suelos contaminados con hidrocarburos en Colombia
A continuacin se ve la normatividad ambiental, que deben cumplir las empresas que contaminan con
hidrocarburos: (Tabla 4)
Ley 388 de 1997 Ley de ordenamiento territorial, que reglamenta los usos del suelo
Decreto 969 de 1995 Crea la Red nacional de reservas para el caso de desastres
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Protocolo de Louisiana 29 B
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con hidrocarburos (1969) y protocolo CLC 69/76 (1976).
Convenio para la proteccin del patrimonio mundial, cultural y natural. Pars, 1972.
Convenio Internacional para prevenir la contaminacin por buques, 1973.
Protocolo relativo a la contaminacin del mar (MARPOL) por buques 1978.
Convenio sobre la constitucin de un fondo internacional de indemnizacin de daos causados
por la contaminacin del mar con hidrocarburos (1971) y su protocolo El Fondo 71/76 (1976).
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por hidrocarburos y otras sustancias nocivas, en caso de emergencia. Lima, 1981.
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Protocolo de cooperacin para combatir derrames de hidrocarburos en la regin del Gran Caribe.
Cartagena, 1983.
Protocolo complementario del Acuerdo sobre la cooperacin regional para el combate de la contami-
nacin del Pacfico Sudeste por hidrocarburos y otras sustancias nocivas, en caso de emergencia.
Quito, 1983.
Protocolo relativo a las zonas protegidas del Convenio para la proteccin y desarrollo del medio marino de
la regin del Gran Caribe. 1990.
Convenio relativa a los humedales de importancia internacional especialmente como hbitat de aves acu-
ticas - RAMSAR (acogido por Colombia en 1997).
Fuente: Trujillo y Ramrez (2011).
Conclusiones
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Biorremediacin en suelos contaminados con hidrocarburos en Colombia
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Sustancias utilizadas como agente gelificante
alternativas al agar en medios de cultivo para
propagacin in vitro
Substances used as gelling agent alternative to the
agar in culture media for in vitro propagation
Daro Alonso Martin Gordo1, Oswaldo Crdenas Gonzalez 2 y Jos Constantino Pacheco3
Qumico de Alimentos. 2Licenciado en Qumica y Biologa, MSc en Ciencias Qumicas,
1
1
Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia, Tunja, Colombia
Universidad Pedaggica y Tecnolgica de Colombia. Facultad de Ciencias. Escuela de Ciencias Qu-
2
1
dario.martin@uptc.edu.co, 2oe.cardenas10@gmail.com, 3jocpach@gmail.com
Resumen Abstract
El cultivo de tejidos vegetales comprende un con- The cultivation of plant fibers is achieved through
junto tcnicas ampliamente usadas para propaga- the implementation of a group of techniques widely
cin vegetal in vitro; sin embargo, una desventaja used for the propagation of plants in vitro. However,
es el alto costo de componentes utilizados para el one disadvantage of these techniques is the high
medio de cultivo, entre stos, el agar (solidifican- cost of components used for the crops medium,
te ms utilizado), pues la demanda ha elevado su among these, the agar (primary gelling agent), has
precio. En este artculo se recopilan algunas in- seen a price increase due to high demand. This ar-
vestigaciones sobre sustancias que se han utiliza- ticle consults several studies regarding substances
do como agentes solidificantes alternativos, entre that have been utilized as alternative gelling agents,
los que se resaltan los almidones (nativos o modi- among which highlight starches (native or modified)
ficados) y algunas gomas de plantas y exudados and several plant gums and bacterial excretions
bacterianos, que han sido empleados en procesos that have been used in processes of organogene-
de organognesis, embriognesis y proliferacin sis, embryogenesis and vegetative proliferation.
vegetativa. Los almidones y las gomas reportadas The starches and gums studied showed favorable
presentaron resultados favorables en el cultivo in results in the in vitro cultivation of some plant spe-
vitro de algunas especies vegetales. Se concluye cies. The study demonstrates that both gums and
que tanto las gomas como los almidones pueden starches may be potential substitutes (either partial
ser potenciales sustitutos, parciales o totales del or total) for agar, achieve a decrease in costs asso-
agar y logran una disminucin de los costos con ciated with starches, and have an ability to be che-
los almidones, y su posibilidad de modificarse qu- mically modified to improve gelling capacity.
micamente para mejorar su capacidad gelificante.
Key words: agar, gelling agent, starch, gums, mi-
Palabras clave: agar, agente gelificante, almidn, cro-propagation
gomas, micropropagacin
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Introduccin
Las tcnicas de cultivo de tejidos tienen muchas Debido a sus propiedades funcionales se ha reporta-
aplicaciones prcticas y comerciales, principal- do el uso de almidones y gomas como agentes geli-
mente en los sectores hortofrutcola, biotecnolgi- ficantes, polmeros naturales como almidones y go-
co, de produccin de especies libres de patgenos mas, que sintetizan las plantas y algunas bacterias.
y agrcola, y constituyen una alternativa interesan- Los almidones estn formados por 2 polmeros: la
te a los mtodos tradicionales de propagacin, ya amilosa, compuesta de cadenas lineales de mon-
que permiten obtener una gran cantidad de mate- meros de D-glucosa unidos por enlaces glicosidicos
rial vegetal en un corto perodo de tiempo (Fasolo 1-4, y la amilopectina, compuesta de cadenas con
& Predieri, 1988). ramificaciones cada 7 o 10 unidades de D-glucosa. La
amilopectina posee tambin enlaces glicosidicos 1-4
A pesar de que las metodologas de cultivo de en las cadenas lineales y las ramificaciones se unen
tejidos vegetales tienen ms de cinco dcadas mediante enlaces 1-6 (Salinas et al., 2003).
desde que fueron desarrolladas, sus beneficios
an no llegan a los agricultores, especialmente En trminos generales, los almidones nativos se uti-
a los pases ms necesitados, lugares donde la lizan ampliamente en la industria alimentaria, ya que
mayor parte de la poblacin tiene dficit nutri- son sustancias inocuas capaces de regular y estabi-
cional por lo que se requiere la optimizacin de lizar la textura de los alimentos y por sus propieda-
la produccin agrcola para mejorar la alimenta- des espesantes y gelificantes. Algunas dispersiones
cin y los ingresos del ncleo familiar. El princi- de almidn nativo, como aquellas obtenidas a partir
pal problema es la complejidad que presentan de races y tubrculos, producen una textura gomo-
algunas de estas tecnologas y el alto costo de sa y cohesiva en aquellos alimentos donde se utili-
su implementacin. mayoritariamente ocasio- zan como agentes espesantes (Pacheco de Delaha-
nado por el alto precio del agente gelificante, ye & Techeira, 2009). Todos los almidones tienen los
comnmente agar. Al parecer, la causa del alto mismos constituyentes (Tabla 1), aunque difieren en
precio de este ltimo insumo es su sobrexplo- el porcentaje de cada uno de ellos, dependiendo de
tacin, consecuencia de una alta demanda, la la planta de la cual son extrados (Daud et al., 2011),
cual ha hecho que sea cada vez ms difcil su por lo cual tienen distintas propiedades funcionales
obtencin, elevando as los precios (Romay et (Hernndez et al., 2008).
al., 2006 y Mohamed et al., 2010).
Por otra parte, las gomas, coloides hidroflicos (o
Durante los ltimos 30 aos se han efectuado es- hidrocoloides), muclagos, o an polisacridos so-
fuerzos para buscar sustitutos adecuados para el lubles en agua, son algunas denominaciones da-
agar; en consecuencia, un gran nmero de sus- das a las sustancias que tienen la capacidad de
tancias han sido probadas por su capacidad de formar con agua geles o soluciones viscosas, esto
gelificacin (Ozel et al., 2008). es, que tienen la funcin de agentes espesantes o
gelificantes, estabilizantes de emulsiones (Bobbio
y Bobbio, 1992; Dziezak, 1991).
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Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo para propagacion in vitro
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Revista de Investigacin Agraria y Ambiental Volumen 3 Nmero 2 julio-diciembre 2012 ISSN 2145-6097
Tabla 2. Algunas gomas utilizadas como agentes gelificantes en medios de cultivo de propagacin in-vitro.
Algunos almidones han sido utilizados como de violeta africana (Saintpaulia ionantha) (tabla
gelificantes en medios de cultivo para organo- 3). La mayor frecuencia de regeneracin se en-
gnesis de plantas. Daud et al. (2011 a y 2011 contr en medios que contienen agar (0,8%),
b) cultivaron segmentos de tallos de Celosia sp. combinacin de almidn: smola, polvo de pa-
en medios de cultivo con la mitad de concentra- tata (2:1:1) en 9 y el 12% y la combinacin de
cin de los componentes del medio Murashige y almidn (6%) ms agar (0,4%), pero el mximo
Skoog (1962) y otro sin tales suplementos, gelifi- nmero brotes se produjeron en medios que
cados con harina de yuca, harina de arroz, harina contenan agar (0,8%), combinacin de almidn
de maz y almidn de papa. No se encontraron (6%) ms agar (0,4%) y medio lquido con sus-
diferencias significativas en la regeneracin por trato de algodn. La mejor proliferacin de bro-
va de organognesis directa en ninguno de los tes tuvo lugar en medio lquido con sustrato de
solidificantes probados. algodn. Los resultados mostraron que la com-
binacin de almidn: smola, polvo de patata
En un estudio realizado en Irn, se probaron un (2:1:1) en 9% y almidn (6%) ms de agar (0,4%)
medio lquido con sustrato de algodn y diferen- pueden ser alternativas, para sustituir al almi-
tes combinaciones de almidn, smola o harina, dn, adecuadas en etapa de regeneracin, pero
polvo de patata y agar en dos etapas de la micro- el nmero de brotes es menor que en medios
propagacin (induccin de brotes y proliferacin) gelificados con solo agar (Sharifi et al., 2011).
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Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo para propagacion in vitro
Tabla 3. Combinaciones de agentes gelificantes en medios de cultivo para propagacin de violeta africana
(S. ionantha)
Medio Composicin
K 9% almidn
N 9g/L agar
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almidn de yuca (Kuria et al., 2008), sag (Naik mezclada con agar o adicionada sola. Maliro y
y Sarkar, 2001); banana (Musa) en medios con Lameck (2004) cultivaron plntulas de F. albida y
almidn de papa y yuca (Kodyn y Zapata, 2001); Uapaca kirkiana. Encontraron que en las 2 prime-
manzana (Malus domestica Borkh) en medios so- ras semanas no se presentaban diferencias signi-
lidificados con almidn de maz (Zimmerman et ficativas en nmero de brotes generados y altura
al., 1995). de las plntulas en ninguna de las especies es-
tudiadas, pero en las semanas 4 y 5 de incuba-
En un estudio hecho por Romay y colaboradores cin, se observaron resultados estadsticamente
(2006) se sugiere la utilizacin de almidones mo- significativos. Los medios preparados solo con ha-
dificados de yuca como sustitutos del agar. En el rina de yuca, despus de 5 semanas perdieron la
estudio cultivaron micro-esquejes de yuca (Mahi- consistencia, lo que afect el crecimiento y peso
not esculenta Crantz) en medios solidificados con de los explantes en ambas especies.
tres almidones modificados comparados con un
blanco de Phytagel. De igual manera, analizaron La micropropagacin de nodos de papa (Solanum
el nmero de nudos y races para todos los tra- tuberosum) se realiz en medio MS (Murashige y
tamientos, y peso seco y hmedo para el mejor Skoog, 1962) gelificado con mezclas de agar-al-
tratamiento con almidn y el blanco de Phytagel midn de maz (CS) y agar-almidn de papa (PS).
y encontraron diferencias significativas en los Mohamed et al. (2010) no encontraron diferencias
tratamientos AIM TF-352 y AIM TP-212 con res- significativas en la altura de las plntulas, pero si
pecto al control, pues disminuyeron el nmero de un aumento significativo en el nmero de brotes/
nudos y races. mientras el AIM TF-351 no. En el explante. El aumento ms notable se encontr en
estudio se concluy que el almidn AIM TF-351 medios solidificados con 60 g/L de PS + 1g/L de
no tuvo efectos significativos en ninguna de las agar. Las plntulas desarrolladas en los medios
variables analizadas y, por tanto, puede ser un de cultivo con 40 g/L de CS o PS tuvieron un ma-
sustituto del agar. yor peso fresco y seco en comparacin con los
del control de agar. El medio con 50, 60 g /L de
Mbanaso (2008) estudi el efecto de subculti- PS o 60 g /L de CS y 50 g /L de agar a CS + 1g/L
vos consecutivos de 2 genotipos de Musa, cul- aumentaron significativamente el porcentaje de
tivados en medios solidificados con almidn de peso seco. Se sugiere que la utilizacin de agar
yuca (cassava). No se encontraron diferencias en bajas concentraciones mezclado con almidn
significativas con el testigo de agar, en cuanto al de papa o de maz puede disminuir los costos de
porcentaje de brotes producidos, mientras que los medios de cultivo para micropropagacin in-
s se presentaron diferencias en la robustez de vitro (Mohamed et al., 2010).
las plntulas, mayoritariamente en los medios de
cultivo con mayor concentracin de almidn, po- Rodrguez y Hechevarra (2006), cultivaron
siblemente porque aumentaba la dureza del me- segmentos nodales de Orthosiphon arista-
dio, lo que impidi la difusin de los nutrientes. tus Blumey Artemisia absinthium L., dos es-
Tambin afect la absorcin de agua y algunos pecies de plantas altamente demandadas por
nutrientes que potenciaban la dureza de las pln- sus propiedades medicinales. Utilizaron harina
tulas. Pero al igual que Romay et al., recomend de sag (Maranta arundinacea L.) y un gel de
el almidn de yuca (cassava) como sustituto ms Aloe vera (L.) N.L. Burm como solidificantes del
econmico del agar. medio de Murashige y Skoog (1962). Los re-
sultados mostraron que medios solidificados
La harina de yuca es rica en almidn; por tal con 0,8% (p/v) de agar (tratamiento 1), 0,4%
razn, se ha utilizado como agente gelificante (p/v) de agar ms 0,4% (p/v) de harina de sag
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Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo para propagacion in vitro
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Gomas como solidificantes en procesos En los resultados encontrados fue evidente que la
de embriognesis respuesta morfognica fue apoyada por toda la mez-
cla de gelificacin, en la mezcla que contena 2,6%
Jain-Raina y Babbar (2011) utilizaron mezclas isubgol y 0,4% de agar. El porcentaje de germinacin
de varios agentes gelificantes goma guar (2,6 a de semillas mejor significativamente cuando el agar
2,9%) + Agar (0,1-0,4%); goma xantana (0,6-0,9%) se mezcl con goma xantana o goma guar, ya que
+ Agar (0,1-0,4%); Isubgol (2,6 a 2,9%) + Agar (0,1- cuando se utilizaron solas, los resultados no fueron
0,4%); goma guar (1,5 a 2,9%) + goma xantana tan exitosos (tabla 4). La otra caracterstica comn es
(0,1-1,5%); Isubgol (1,6 a 2,9%) + goma xantana la reduccin en la respuesta callognica con un au-
(0,1-1,4%) y goma guar (2,6 a 2,9%) + Agar (0,1- mento de agar al 0,4% en mezclas de gelificacin con
0,4%). La concentracin total de los agentes ge- la goma de guar e isubgol. Jain-Raina y Babbar con-
lificantes mezclados con goma xantana fue 1%, cluyeron que las mezclas de goma xantana y guar,
mientras que en los dems fue 3%. Utilizaron es- con agar, pueden ser sustitutos en los medios de cul-
tos medios para geminar e inducir embriognesis tivo, como agente gelificante, lo que disminuyo costos
somtica en Albizzia lebbeck. y mejor resultados de crecimiento en las plntulas.
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Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo para propagacion in vitro
Van Ark et al. (1991) no obtuvieron diferencias es- de brotes hiperhidratados en los medios de cultivo
tadsticas en los resultados obtenidos, empleando gelificados con gomas y agar. Las mezclas utiliza-
medios de cultivo gelificados con agar y gelrite en das para sustituir al agar no afectaron significati-
procesos de embriognesis somtica indirecta en vamente ndices de crecimiento como cantidad y
Poa pratensis L. longitud de los brotes regenerados.
Saglam y Cifici (2010) utilizando isubgol como Posteriormente, Lucyszyn et al. (2006) tambin pro-
agente gelificante en medios para embriognesis baron la eficacia de la sustitucin parcial de agar
de hipoctilos de Woad (Isatis tinctoria), compara- por galactomananos (GMS), obtenidos a partir de
dos con un blanco de agar, encontraron mejor res- diferentes fuentes. Se ensay la micropropagacin
puesta en los medios solidificados con agar. Moon de fresa (Fragaria x ananassa Duchesne) en los
et al. (2004) reportaron la siembra de proembrio- medios modificados. Las gomas guar y cassia se
nes somticos de Ceratozamia hildae en medios mezclaron con agar en la proporcin de 0.3/0.3%
gelificados con phytagar, Gel-Ro, Agar TC, agar- (w / v) en medio MS (ao), y el rendimiento se com-
gel y consideraron mejor gelificante el agente de par con comportamiento de medio de agar que
prueba al Gel-Ro. contena slo (0,6%, w / v) como agente gelifican-
te. Los resultados obtenidos indicaron que el agar
Jain-Raina y Babbar en 2002 utilizaron la goma puede ser parcialmente remplazado por galacto-
katira como agente gelificante en medios para in- mananos, puesto que las mediciones reolgicas
ducir embriognesis somtica en A. labbeck. No confirmaron una buena interaccin entre los poli-
encontraron diferencias significativas con el trata- sacridos. Tambin se observaron un mejor ren-
miento control gelificado con agar. Posteriormen- dimiento y mayor proliferacin de brotes de fresa;
te, en 2006 estudiaron el efecto de la goma xanta- se evidenci que las races fueron ms largas en
na como agente gelificante en medios para inducir los medios modificados. As, el comportamiento del
embriognesis somtica indirecta de Calliandra gel de galactomananos y la rentabilidad comercial,
tweedii, encontrando mejores resultados en los que es menor para el medio modificado en compa-
medios en los que la concentracin de goma xan- racin con el sistema solidificado con agar, mostr
tana fue del 1%, en variables como respuesta ca- el uso potencial de estos galactomananos para su
llognica y porcentaje de germinacin. Babbar et aplicacin en cultivo de tejidos vegetales.
al. (2005) encontraron diferencias significativas en
el nmero de embriones formados de C. tweedii Chacn et al. (2000), utilizaron Phytagel para so-
y el porcentaje de germinacin de semillas de Li- lidificar medios de cultivo para la propagacin in-
num usitatissimum, con goma guar y agar como vitro de yampi (Dioscorea trfida) y ame (Dios-
agente solidificante de los medios utilizados. corea alata). Ellos utilizaron un blanco que fue
gelificado con agar, para comparar el comporta-
Gomas en procesos de micropropagacin miento de los ndices de crecimiento. Encontraron
o proliferacin diferencias significativas en ambas especies entre
los resultados obtenidos en altura, peso fresco y
En ensayos de micropropagacin de brotes de peso seco, que fueron superiores cuando los me-
manzano (Malus prunifolia Borkh) realizados por dios se gelificaron con phytagel, y porcentaje de
Lucyszyn et al. (2005) en medios de cultivo geli- materia seca obtenidos en los medios en donde
ficados con mezclas de goma guar-agar y goma se utiliz agar como solidificante. Adems reporta-
cassia-agar en proporcin 3/3 g/L, comparadas ron que al aumentar la concentracin de agente
con un testigo de agar de 6g/L, los resultados ob- gelificante, por encima del valor que confiri una
tenidos indicaron una mayor proliferacin de los consistencia ptima en los medios, los ndices de
brotes de manzano, as como una menor aparicin crecimiento se afectaron negativamente, pues una
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mayor consistencia y dureza de los medios impide la De acuerdo con los costos mostrados en la ta-
mejor absorcin y movilidad de los nutrientes dentro bla 5 se recomienda como agentes gelificantes
de estos. la goma guar y los almidones de papa y yuca,
pues con ellos se han hecho un mayor nmero
Capote Rodrguez et al. (2002) evaluaron el efec- de investigaciones y se han cultivado una mayor
to de un agente gelificante cubano, Natugel, en cantidad de especies vegetales. En el caso co-
el crecimiento de cultivos in vitro de plntulas de lombiano, los almidones de papa, yuca y maz
tomate (Solanum lycopersicum L.) de la variedad son de fcil adquisicin, pues el pas produce
Cuba C-2781. Utilizaron como explantes pices y estas materias primas de forma permanente.
nudos cultivados in vitro en medio MS con saca- Las gomas son ms caras que los almidones,
rosa, y Natugel en dos formulaciones: I y II que se pero al usarse en cantidades menores, tienen
diferenciaron en la granulometra y en la densidad un precio equivalente por litro.
aparente. Compararon con cultivos control en las
mismas condiciones anteriores pero con la adi- Los mejores resultados, ya sean fisiolgicos y
cin de agar en sustitucin del agente gelificante. fsicos, se han reportado con las mezclas en-
La respuesta de los cultivos se evalu en funcin tre agentes gelificantes, como mezclas de agar
del nmero de nudos y la altura de las plntulas en con algunas gomas y almidones. Estas mezclas
sucesivos subcultivos y no se encontraron diferen- presentan una menor disminucin en el costo
cias significativas entre la respuesta obtenida en de los medios de cultivo, pero pueden ser ms
medio solidificado con agar y la obtenida en medio eficientes que los agentes alternativos. Con el
solidificado con la mezcla Natugel I/II. uso de almidones y gomas como gelificantes
se obtienes reducciones aproximadas desde el
Aunque se ha hecho ya un recuento de las sustan- 30% al 70% en los costos, basados en el precio
cias que han sido utilizadas como agentes gelifi- del solidificante, lo que permite una alternativa
cantes alternativos, lo ms importante es conocer vlida econmicamente para implementar es-
el costo que tiene cada una de estas. En la tabla tas tcnicas, as como la oportunidad de mejo-
5 se muestra una relacin de las sustancias utili- rar los mercados de productos como la papa,
zadas, haciendo nfasis en las concentraciones yuca, arroz, que tendran una nueva lnea de
empleadas, as como su costo. Se observa que comercio, como materia prima para extraccin
el agar es el gelificante, que a pesar de que se de almidones, ayudando al sector agrcola co-
usa en baja concentracin, es el que ms eleva el lombiano.
costo de un litro de medio de cultivo.
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Sustancias utilizadas como agente gelificante alternativas al agar en medios de cultivo para propagacion in vitro
Costo Costo
Concentracion Especie
Sustancia kg sustancia solidificante
(g/l) cultivada (co$) por litro (co$)
S. tuberosum L. (MP)
100 936.6
M. esculenta (MP)
Almidn de yuca
Musa (MP)
60-70 9326 560-653
U. kirkiana (MP)
80 Celosia sp (OR) 746.08
Almidn de sag 80 S.tuberosum L. (MP) 7000 560
60 S. tuberosum L. (MP) 341,1864
Almidn de maiz 5686,44
40-80 Celosia sp (OR) 227,45-454,92
Musa (MP) 840-1120
60-80
Almidn de papa Celosia sp (OR) 14000
90 S. ionantha (OR) 1260
Almidn de arroz 40-80 T.cacao L. (EC) 15400 616-1232
Almidn de ensete 80 y 100 V. planifolia (MP) 5980 478,4-598
Goma karaya 30 Citrus jambhiri Lush. (MP) 16608 498,24
20
M. domestica Borkh (MP) 10354,62
750,1824
2,4 C. hildae (ES)
2500,608
Goma gellan
(Gelrite) 8 P. pratensis L. (ES) 312576
Aloe polyphylla (MP)
3,4 1062,7584
S. Yoshimurae (MP)
C. tweedii (ES) 843,18
20
Crataeva nurvala (MP)
Chlorophytum borivilianum
Goma guar 10 42159 421,59
(MP)
30 A. Labbeck (ES) 1264,77
40 L. usitatissimum (EC) 1686,36
Goma katira 30 S. cuminii 70400 2112
P. communis L.
Goma cassia/agar 30 cv.Durondeau (MP) 54550 1636,5
F. ananassa Duchesne (MP)
C. tweedii (ES)
Goma xantana 10 34998 349,98
A. labbeck (ES)
7 N. tabacum L. (OR) 47000-68000 402,5
Isubgol 15 I. tinctoria (ES) (MP) 862,5
30 A. labbeck (ES) 1725
487664-
Agar agar 6-9 Todas las anteriores 2925-4515
585600
ES: embriognesis somtica MP: micropropagacin OR: organognesis CO$: pesos colombianos
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