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AGRONOMA MESOAMERICANA 25(1):181-188.

2014
ISSN:2215-3608

NOTA TCNICA

USO DE WINRHIZO EN LA CUANTIFICACIN DE LAS RACES Y


SU APLICACIN EN LA PALMA ACEITERA (Elaeis guineensis JACQ.)1

Marco V. Gutirrez-Soto2, Joaqun Torres-Acua3, Jos Miguel Araya-Alfaro2

RESUMEN ABSTRACT
Uso de WinRhizo en la cuantificacin de las races Using WinRhizo to study and quantify the roots of
y su aplicacin en la palma aceitera (Elaeis guineensis the oil palm (Elaeis guineensis Jacq.). The objective of this
Jacq.). El objetivo de esta nota tcnica es introducir el uso work is to introduce the use of WinRhizo for the quanti-
de WinRhizo para el anlisis cuantitativo de muestras del tative analysis from the root system of crops in general and
sistema radical de los cultivos en general y de la palma of the oil palm in particular. The most important morpholo-
aceitera en particular. Se mencionan las caractersticas mor- gical, topological and physiological characteristics of roots
folgicas, topolgicas y funcionales de las races de impor- relevant to agronomic practices are mentioned, as well as
tancia agronmica, y la contribucin del anlisis cuantitativo the contribution of specialized software packages available
realizado por paquetes informticos especializados como for this analysis. Information on the topology, morphology,
WinRhizo. La informacin sobre la topologa, la morfolo- diameter, branching and color of roots, among other varia-
ga, el dimetro, las ramificaciones y el color de las races, bles quantified by WinRhizo, is considered as an important
entre otras variables cuantificadas por WinRhizo, es una tool for the diagnosis, prevention and treatment of stress, and
importante herramienta para el diagnstico, la prevencin for the evaluation and assessment of agronomic practices
y el tratamiento del estrs, y en la evaluacin de numerosas applied to correct and improve root and soil conditions. The
prcticas agronmicas como la aplicacin de fertilizantes, procedure for oil palm root processing and quantification
enmiendas, compostas y coberturas de diversos tipos. Se using WinRhizo is described, and the adjustments neces-
revisa el procedimiento para el procesamiento de races y se sary to quantify the root classes recognized for oil palm are
indican los ajustes necesarios para la cuantificacin de las provided.
races de la palma aceitera.
Keywords: edaphic stress, fine and thick roots, tropical
Palabras claves: estrs edfico, races finas y gruesas, palm soils.
suelos tropicales palmeros.

1
Recibido: 4 de marzo, 2013. Aceptado: 18 de marzo, 2014. Parte de un proyecto de investigacin con Agricultural Services & Development
(ASD) - Costa Rica.
2
Universidad de Costa Rica, Estacin Experimental Fabio Baudrit Moreno, Proyecto de Eco-fisiologa Vegetal. Apdo. 183-4050 Alajuela,
Costa Rica. surdo26@racsa.co.cr, araya.josecr@gmail.com
3
ASD de Costa Rica, Departamento de Agronoma de Variedades y Clones. Coto 47, Puntarenas, Costa Rica. jtorresa@numar.net
2014 Agronoma Mesoamericana es desarrollada en la Universidad de Costa Rica y se encuentra licenciada con Creative
Commons Reconocimiento-NoComercial-SinObraDerivada 3.0 Costa Rica. Para ms informacin escrbanos a pccmca@ucr.ac.cr
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INTRODUCCIN secundarias se extienden las terciarias, que pueden


ser superficiales o profundas, y las cuaternarias ms
Las races desempean funciones esenciales para finas, consideradas las ms importantes para la absor-
el crecimiento y la sobrevivencia de las plantas en cin de agua y nutrientes (Jourdan et al., 2000). Las
los ecosistemas naturales y en los agro-ecosistemas palmas aceiteras tambin producen numerosas races
por igual. Estas funciones incluyen el anclaje en el adventicias que pueden diferenciarse en races de las
sustrato y el soporte estructural, la absorcin de agua, categoras citadas arriba, y la anoxia puede generar la
minerales, compuestos orgnicos, xenobiticos y otras produccin de numerosos pneumtodos (Yampolsky,
sustancias del suelo, la generacin de presin de raz 1924). A pesar de su abundante aernquima, la sucu-
capaz de reparar la cavitacin, el almacenamiento de lencia y la distribucin de las races de las palmas las
agua, minerales, carbohidratos y actividades biosin- hace muy susceptibles al exceso de agua y a la falta de
tticas como la produccin de hormonas, vitaminas, oxgeno en el suelo (Tinker, 1976).
enzimas, metabolitos secundarios y de numerosas Desde el punto de vista del diagnstico, la pre-
seales radicales involucradas en la respuesta al estrs vencin y el control del estrs originado en el suelo, es
(Stokes, 2000; Marschner, 2012). En torno a las races importante contar con informacin obtenida de forma
se desarrollan la rizovaina, la rizosfera y las simbiosis peridica y sistemtica sobre la abundancia y la cali-
con hongos micorrzicos importantes para la captura dad de las races. Para este propsito, WinRhizo (R -
de agua y minerales, y otras interacciones biticas gent Instrument Inc., 2001) es un paquete informtico
tales como la fijacin biolgica de N2, alelopata, fun- diseado para el anlisis de la abundancia y la distri-
gistasis, etc. (Stokes, 2000; Cheeke et al., 2013). bucin de las races en el suelo, extradas por mtodos
El estudio de los sistemas radicales de las plantas destructivos de muestreo sistemtico y lavadas antes
enfrenta dificultades conceptuales y tcnicas debidas de su procesamiento. El programa provee informacin
a la naturaleza subterrnea de estos rganos, adems sobre diversos parmetros de la morfologa, topologa,
de la complejidad de los procesos biogeoqumicos densidad, apariencia, arquitectura, ramificacin, color,
que ocurren en el suelo (Gliessman, 2002; Cheeke et presencia de relaciones simbiticas y estado sanitario,
al., 2013), y a la laboriosidad y el costo involucrados entre otros.
en el muestreo, la observacin y la evaluacin de las El objetivo de esta nota tcnica es introducir el
races (Kolesnikov, 1971; Bhm, 1979). Se dispone de uso de WinRhizo para el anlisis cuantitativo del
mtodos destructivos para su examen y cuantificacin, sistema radical de los cultivos en general y de la
que incluyen las excavaciones, los muestreos sistem- palma aceitera en particular. Se hace una descripcin
ticos con barrenos a travs del increment coring, la del procedimiento adecuado para la obtencin, el
utilizacin de mesh bags o in-growth cores dise- procesamiento y el lavado de muestras de las races
ados para facilitar el crecimiento de las races en su de la palma aceitera, y recomendaciones para ajustar
interior y su muestreo subsecuente, y de mtodos me- el procedimiento para la clasificacin y la cuantifica-
nos invasivos como los rizotrones, que solo perturban cin de la races de este cultivo, especialmente en los
peridicamente el ambiente de las races durante su ob- referente a sus categoras morfo-fisiolgicas, su color
servacin y filmacin (Bhm, 1979; Smit et al., 2000). y su calidad.
El sistema radical de la palma de aceite es fibroso,
suculento y polimrfico, con componentes tanto super-
ficiales como profundos, aunque la mayor cantidad de SISTEMA DE ANLISIS DE
races absorbentes se localiza en los primeros 30-50 IMGENES DE RACES WINRHIZO
cm del perfil del suelo y se extiende horizontalmente
(Wright, 1951; Jourdan y Rey, 1997; Jourdan et al., WinRhizo (Rgent Instrument Inc., Canad,
2000; Nodichao et al., 2011). Las races primarias www.regent.qc.ca) es un sistema de anlisis computa-
pueden ser horizontales o verticales (de anclaje) y cional de imgenes, diseado para realizar mediciones
emergen de la base de la planta, mientras que las races de las races de las plantas en trminos de su morfolo-
secundarias tienen dos formas gravitrpicas y pueden ga, topologa, arquitectura y color. El producto (out-
crecer hacia arriba o hacia abajo. A partir de las races put) final despliega un histograma con la distribucin

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de la longitud de las races e informacin cuantitativa


sobre el rea, volumen y nmero de puntas (tips)
como una funcin del dimetro de las races o de su
color (Bouma et al., 2000; Rgent Instrument Inc.,
2001; Pang et al., 2011; Tracy et al., 2012).
Estos atributos estructurales y funcionales son de
importancia para evaluar la cantidad y la calidad de
las races de los cultivos porque determinan en gran
medida la capacidad de absorcin de agua y nutrientes,
y la competencia entre las plantas vecinas. El nmero
y las clases diamtricas de las races pueden ser de-
finidas por el usuario, lo que otorga flexibilidad para
adaptar el software al estudio de sistemas radicales
para los que ya existen metodologas de observacin y
clasificacin. WinRhizo ha sido evaluado en sistemas
modelo (Pang et al., 2011) que garantizan la veracidad
de los resultados cuantitativos producidos.

Muestreo y procesamiento de las races


Figura 1. Muestreo de las races de la palma aceitera uti-
El muestreo sistemtico es un componente del lizando un barreno de barril semejante a los de
Eijkelkamp. Coto 47, Buenos Aires, Puntarenas,
diseo experimental implementado a menudo en los
Costa Rica. Agosto del 2012.
estudios de las races, y su complejidad depende en gran
medida del tipo de suelo o sustrato, y de la edad y el
tamao del sistema radical bajo estudio (Bledsoe et al.,
1999). En el caso de la palma aceitera, el muestreo se para el muestreo de races, equipado con un barril de
puede realizar sistemticamente alrededor del tallo de volumen conocido (125-150 cm3) y un manubrio que
la planta, utilizando el polgono de Voronoi (Nodichao facilita la extraccin de la muestra (Figura 1), al menos
et al., 2011), definido por la distancia media entre una hasta 30-50 cm de profundidad, aunque se recomienda
palma y sus vecinas plantadas en un patrn hexagonal, hacer muestreos secuenciales a lo largo del perfil del
disponindose de doce posibles tringulos elementales suelo (increment coring), que reflejen la extensin y
para el muestreo espacial y vertical. Segn los objetivos la profundidad del sistema radical de las palmas. Las
del estudio, el muestreo puede ser organizado en anillos muestras de suelo que contienen las races se colocan
concntricos a travs de la rodaja, y extendido al espacio en bolsas plsticas cerradas hermticamente dentro de
entre plantas vecinas (8-9 m) y a localidades donde se una hielera y se mantienen frescas y en la oscuridad
puede dar el crecimiento preferencial de las races (como hasta su procesamiento en el laboratorio. Una vez
el arrumen, montculos formados por las hojas podadas). en las instalaciones de procesamiento de races, las
El muestreo puede ajustarse a la variabilidad ge- muestras pueden ser sumergidas en agua y dejadas
notpica de los sistemas radicales de las palmas acei- en remojo para facilitar el desprendimiento de los
teras cultivadas a distancias de siembra comerciales terrones y otras adherencias. Las races se separan del
(Nodichao et al., 2011) y a la heterogeneidad espacial suelo y se limpian utilizando lavado a presin sobre
de los suelos (Covarrubias-Aguirre y Mata-Beltrn, un colador o criba, brochas y una manguera equipada
1979). Los muestreos con barrenos (Figura 1) pueden con un regulador de presin. Puede ser conveniente
ser combinados con otras tcnicas de estudio, como establecer un tiempo de lavado y recoleccin de las
la excavacin y la observacin peridica de las races races estndar para cada muestra (i.e. 2 h) para lograr
utilizando varias modalidades de rizotrones (Bhm, mayor uniformidad en el procesamiento de las mismas.
1979; Nodichao et al., 2011). Convencionalmente, las races se separan en finas
Las muestras pueden ser obtenidas con un barreno y gruesas de acuerdo a su dimetro. Con dimetros
semejante a los producidos por Eijkelkamp, diseado 2 mm son consideradas races gruesas. Diversas

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discusiones tcnicas claman por una ampliacin de agua destilada, dentro de la que se separan las races por
sus calidades que consideren su diversidad, plasticidad tamao y color cuidadosamente, reduciendo los trasla-
fenotpica, patrones de desarrollo, longevidad y pes, facilitando el ajuste del pixelaje para la interpreta-
fenologa, tamaos y funciones morfogenticas y cin por parte del software y evitando que las races se
fisiolgicas (Fahey et al., 1999; Pregitzer, 2002; Zobel, localicen cerca del borde de la bandeja. Se usan pinzas
2003). Se usan placas de Petri con agua destilada para plsticas y pisetas para colocar las races y as reducir
colocar luego de su extraccin, y se descartan las las marcas y rayas en la bandeja. Esta debe estar equi-
races de otras especies. pada con una cubierta plstica liza. Las races oscuras se
En el caso de la palma aceitera, el sistema radical escanean mejor con cubierta de fondo blanco y las blan-
ha sido bien caracterizado (Jourdan y Rey, 1997; No- cas con cubiertas negras que permiten mayor contraste.
dichao et al., 2011) y las races se clasifican en orden Estas races blancas tambin se pueden teir como se
de mayor a menor dimetro en primarias (>5 mm di- indic anteriormente. Se debe evitar la formacin de
metro), secundarias (1,5 mm-5mm), terciarias (0,5-1,5 burbujas cuando la cubierta se coloca sobre la bandeja
mm) y cuaternarias (dimetro<0,5 mm), estas ltimas con agua. En caso de que el escner sea genrico es con-
consideradas las ms importantes en la adquisicin veniente realizar una calibracin utilizando un objeto de
de los recursos del suelo. Tambin se clasifican como dimensiones conocidas, y alimentando el escner con la
vivas y muertas (Fahey et al., 1999). Las races vivas localizacin exacta del objeto en referencia a ejes X y Y.
son firmes y flexibles, blancas, ramificadas; hay vivas Este archivo de calibracin es especfico para el scanner
oscuras que se distinguen por tener una estela blanca o utilizado en el anlisis de las races y se carga cada vez
rojiza y puntas blancas. El color de la estela se puede que se procese una nueva muestra.
observar realizando un raspado leve que remueva la
peridermis u observando un corte transversal de la Anlisis de las races de la palma aceitera
raz. Las races muertas son huecas, blancas o rojizas,
quebradizas, y carecen de estela, por lo que se puede - Abrir el programa Winrhizo y cargar el archivo
separar la peridermis suberizada (corchosa) del tejido de calibracin
vascular central con suma facilidad. Una raz se puede - Hacer click en la base del histograma de la parte
distinguir de una ramita porque el corte transversal de superior de la ventana para establecer los rangos
los tallos y ramas muestra rayos que van del centro al de variacin en los dimetros de las races de la
borde externo, mientras que el de la raz no tiene rayos. especie en estudio, en este caso la palma aceitera.
- Escoger el color de cada rango de clasificacin
Escaneo y calibracin del software y el escner segn el dimetro de las races.
- Cargar o escanear la imagen, seleccionar el rea de
Las races pueden ser teidas antes del escaneo anlisis, identificar la muestra e ingresar el volumen
sumergindolas en una solucin de rojo neutro natural obtenido con el barreno empleado en el muestreo.
(0,16 g/l), luego sometindolas a enjuague por 30 min - Seleccionar si se desea que el programa reporte
y almacenndolas en el refrigerador en el comparti- meristemos, ramificaciones y bifurcaciones de
mento de los vegetales hasta el escaneo. Es preferible forma automtica.
utilizar WinRhizo con un escner doble para la adqui- - Ingresar a la pestaa anlisis, opcin races y
sicin de la imagen, porque ilumina las races desde seleccionar el color del fondo. Para las races de
arriba y abajo y se reduce la formacin de sombras en palmas aceiteras es recomendable utilizar ambos
las imgenes. En los manuales de WinRhizo esto se fondos claro y oscuro en vista de que se presentan
denota como Dual Scan. Adems, el Rgent Posi- ambos tipos de races blancas y oscuras.
tioning System permite la colocacin consistente de - Seleccionar el rea de la bandeja que se desea
las bandejas, lo que evita tener que hacer una prevista analizar arrastrando el ratn en la imagen. El pro-
de cada imagen antes del escaneo. Las races deben ser grama realiza una interpretacin automtica que
escaneadas a color utilizando una resolucin de 200 no es necesariamente definitiva, ya que se pueden
ppi y archivadas en formato jpg. realizar ajustes y correcciones. El programa indica
Para esto, se debe disponer de una bandeja (de un ajuste de la resolucin de la ventana de pixeles
plexigls) del tamao de la pantalla del escner, con (Figura 2). WinRhizo puede escoger estos valores

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automticamente, pero es mejor ajustar estos para - Para la correccin de errores, se debe ingresar a
obtener mejores resultados. Para analizar una ima- la pestaa anlisis, opcin de filtrar, donde
gen, el usuario selecciona la regin (o regiones) de se pueden definir estndares para excluir areas
inters, y WinRhizo la analiza. Para lograr esto, el pequeas ocupadas por sombras o por burbujas
programa decide si cada pixel es raz o no, y las (Figura 3).
sombras pueden causar problemas. Algunas regio- - Finalmente, WinRhizo pide al usuario crear un
nes de la imagen podran ser excluidas del anlisis archivo para grabar los resultados. Es un archivo
si es necesario y se incluyen herramientas bsicas de texto, que se puede abrir en Excel u otro pro-
para la edicin de las imgenes. grama semejante.

Figura 2. Muestras de races de la palma aceitera analizadas mediante el software WinRhizo y con ajuste del pi-
xelaje. A. Imagen escaneada en blanco y negro de la bandeja completa de una muestra de races sujeta
a anlisis. El crculo rojo representa la seccin a la cual se le ajusta el pixelaje debido a la presencia de
sombras y traslapes. B. El histograma muestra el rango dinmico de la imagen bajo anlisis. C. Magnifica-
cin de la seccin localizada dentro del crculo rojo mostrado en A, a colores, mostrando las sombras que
se quiere eliminar. D. Imagen con errores debido a las sombras interpretadas por WinRhizo como races.
E. Resultado del ajuste al solicitar menos races con la barra de ajuste del pixelaje. Estacin Experimental
Fabio Baudrit Moreno, Universidad de Costa Rica, Alajuela, Costa Rica. 2013.

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Figura 3. Correccin de errores en el escaneo realizado por WinRhizo. A. Imagen de WinRhizo analizada como si
la sombra fuese una raz. B. Imagen de WinRhizo corregida mediante la exclusin de la regin sombreada.
C. Imagen de WinRhizo analizada como si el borde de la burbuja fuese una raz. D. Imagen de WinRhizo
corregida mediante la exclusin de la regin que contiene la burbuja. Estacin Experimental Fabio Baudrit
Moreno, Universidad de Costa Rica, Alajuela, Costa Rica. 2013.

DISCUSIN WinRhizo produce un resultado (output)


compuesto de parmetros morfo-fisiolgicos de las
Adems de la longitud de las races cuaternarias, races, de gran utilidad para diagnosticar su estado
terciarias, secundarias y primarias mostradas en la funcional, su calidad y su capacidad para absorber agua
Figura 4, los datos provedos por WinRhizo incluyen y minerales y establecer relaciones saludables con los
rea, volumen y nmero de puntas (tips), como una simbiontes y otros microorganismos del suelo. Adems,
funcin del dimetro de las races o de su color. El pro- estos atributos determinan parcialmente la respuesta a
grama puede proveer informacin sobre parmetros de los patgenos y los herbvoros y la habilidad competitiva
la morfologa, topologa, densidad, apariencia, arqui- de los cultivos, son importantes para comprender los
tectura, ramificacin, color, presencia de relaciones efectos del ambiente sobre las plantas (Tracy et al.,
simbiticas, y estado sanitario, entre otros. 2012) y hacer recomendaciones fundamentadas acerca

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Figura 4. Resultado simplificado del anlisis de muestras de races de palmas aceiteras sanas (izquierda) y
afectadas por la pudricin del cogollo (PC) (derecha) utilizando WinRhizo. Estacin Experimen-
tal Fabio Baudrit Moreno, Universidad de Costa Rica, Alajuela, Costa Rica. 2013.

de la efectividad de diversas prcticas de mejoramiento El uso de WinRhizo puede ser una importante
de las races y de los suelos como el subsolado, la herramienta para el diagnstico acertado de los
fertilizacin, el compostaje, y el tratamiento de diversos problemas biticos y abiticos que afectan las races
desrdenes fisiolgicos originados en el suelo. y la evaluacin de las soluciones propuestas. Entre
Las imgenes de WinRhizo permiten verificar el estos desrdenes sobresalen los problemas edficos
diagnstico visual del estado de las races realizado de varios tipos (nutricionales como deficiencias y
en el campo y cuantificar el nmero, dimetro, toxicidad), los desrdenes morfo-fisiolgicos como
longitud, superficie, volumen, densidad (cm/cm3) y la corchosis y la prdida de dominancia apical, la
orden topolgico (ramificacin, ngulo de insercin, compactacin, el exceso de agua, y los efectos de las
longitud inter-lateral, direccin del crecimiento, plagas y las enfermedades causadas por organismos
nmero de puntas o tips) de las races. El output de del suelo. Adems, las evaluaciones peridicas
WinRhizo complementa parmetros como el peso pueden proveer informacin indirecta acerca de la
fresco y seco de las races y otras observaciones como fenologa y la longevidad de los sistemas radicales,
el color, firmeza, flexibilidad, consistencia, porosidad, que permitiran coordinar mejor la planificacin de las
deciduosidad y longevidad. labores agrcolas con los complejos ciclos fenolgicos

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