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R$ 5,00 ano II nmero 9 julho/agosto de 1999

ESPECIAL

MELANCIA SEM SEMENTES


Modelos Animais
GENTICA DE CAMUNDONGOS

Algodo Colorido
Extrao de DNA
Doena de Chagas
NOVOS CONHECIMENTOS NA PATOGNESE DA DOENA DE CHAGAS

Biossegurana e Alimentos Transgnicos

www.biotecnologia.com.br
BIOTECNOLOGIA/KL3
BIOTECNOLOGIA/KL3
Biotecnologia e Biossegurana
ENTREVISTA
Parceria Necessria Entrevista concedida a
Fernanda Diniz
Lucas Tadeu Ferreira

Julian Kinderlerer, Diretor Assistente do Instituto de Biotecnologia, Lei e tica de Sheffield, Inglaterra

A regulamentao de pesquisas biotecnolgicas comeou a ser discutida no Reino Unido no


incio da dcada de 70, quando cientistas de vanguarda se depararam com determinados avanos da
biologia que exigiam respostas rpidas quanto a questes de segurana. Em 1975, as tcnicas de
manipulao gentica j eram vistas como instrumentos bastante rpidos e eficientes para promover
maior conhecimento sobre a ao dos genes e, assim, proporcionar benefcios substanciais e, por que
no dizer, imprevisveis. Por meio de dessas tcnicas, os cientistas vislumbravam um horizonte de
inmeras solues para a agricultura, como, por exemplo, a extenso do ciclo de vrias culturas e a
fixao natural de nitrognio nas plantas pelo ar; para a rea de sade, a possibilidade de cura de
algumas doenas causadas por deficincias genticas, como o diabetes e o cncer, entre outros avanos
inimaginveis.
Assim, o Reino Unido foi uma das primeiras naes;compreendendo Inglaterra, Esccia,
Irlanda do Norte e Pas de Gales, a desenvolver uma estratgia de regulamentao para as pesquisas de
biotecnologia. Um documento escrito por Lord Ashby, em 1975, recomendava que as tcnicas de
manipulao gentica deveriam ser permitidas, mas sob rigorosas condies de segurana. Naquela
poca, s se conseguia modificar microrganismos em laboratrio e os riscos e medidas de conteno e
precauo eram analisados sob dois aspectos: o dos cientistas e tcnicos que desenvolviam e
manipulavam os organismos modificados, e o da populao em geral. O meio ambiente, incluindo
plantas e animais, no foi considerado naquela ocasio.
Hoje, a biotecnologia avanou muito e produtos geneticamente modificados j so
comercializados em vrios pases. A biossegurana vem acompanhando essa evoluo no mesmo grau
de complexidade para evitar os riscos inerentes liberao desses novos organismos. O Reino Unido
um exemplo de pas que funciona dessa forma, por ser dotado de uma excelente estrutura de
fiscalizao e acompanhamento das pesquisas, desenvolvimento, comercializao e importao de
organismos geneticamente modificados. L, esse trabalho realizado em conjunto pelos 15 pases
integrantes da Unio Europia, que seguem as mesmas diretrizes e procedimentos tcnico-cientficos de
biossegurana.
Para falar sobre o desenvolvimento da biotecnologia e da biossegurana no Reino Unido e na
Unio Europia, a revista Biotecnologia, Cincia & Desenvolvimento entrevistou, no dia 11 de junho
de 1999, na Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia, localizada em Braslia, o Diretor Assistente
do Instituto de Biotecnologia, Lei e tica de Sheffield, Inglaterra, Julian Kinderlerer. Ele tambm
professor do Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia da Universidade de Sheffield e
membro de vrios comits no Reino Unido e na Europa relacionados com a biotecnologia, legislao e
tica, entre eles os de Biossegurana e Proteo Ambiental da Inglaterra, e vem prestando consultoria
sobre esses temas a diversos pases, como Brasil, Rssia, frica do Sul, Malsia, Tailndia e Mxico,
entre outros.

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BC&D - O senhor poderia descrever, mercado sem restries. Hoje, h pou- por questes puramente ideolgicas,
sucintamente, o estgio atual de de- cos produtos geneticamente modifica- sem nenhum embasamento tcnico-ci-
senvolvimento da biotecnologia agr- dos sendo comercializados na Unio entfico. Eu acho que os jornalistas tm
cola no Reino Unido? Europia, entre eles destacam-se milho, obrigao de apurar melhor os fatos
cana-de-acar e canola. No Reino para no divulgar notcias distorcidas,
Kinderlerer - A agricultura no Reino Unido, por enquanto, o nico produto especialmente relacionadas sade e
Unido um setor relativamente peque- transgnico desenvolvido, que est sen- alimentao para no causar pnico e
no, mas muito eficiente. As principais do cultivado comercialmente, sob forte desinformao na populao. E mais
atividades agropecurias esto voltadas monitoramento, a canola com tolern- ainda: os cientistas no esto agindo de
para o cultivo do trigo e de hortalias, cia a herbicida e, dentro em breve, maneira enftica, atravs da mdia, para
como batata, alface e outras, e para a teremos tambm variedades transgni- mostrar opinio pblica a realidade e
criao de ovelhas e gado. O desenvol- cas de batata resistentes a viroses, que os avanos das pesquisas biotecnolgi-
vimento da biotecnologia no Reino Uni- esto em fase final de desenvolvimento. cas. Diante dessa situao, o Parlamento
do acompanha as tendncias da Unio Ingls tem- se esforado no sentido de
Europia, que, no momento, em funo BC&D - Como a populao na Europa divulgar documentos tcnicos sobre os
principalmente da forte presso exerci- reage aos produtos transgnicos? Ou transgnicos, atravs da mdia, com o
da pelos movimentos ambientalistas con- seja, o senhor acha que o povo euro- objetivo de mostrar populao os
trrios aos organismos geneticamente peu est preparado para consumir benefcios que os transgnicos podem
modificados, tem aprovado poucos pro- esses produtos? proporcionar.
dutos transgnicos. As primeiras libera-
es de OGMs (organismos genetica- BC&D - A Unio Europia tem reali-
mente modificados) no Reino Unido zado campanhas de esclarecimento
aconteceram em 1996 e os produtos da populao em relao aos trans-
liberados foram: hbridos de canola com gnicos?
tolerncia a herbicida, somente para
produo de sementes; e soja tolerante Kinderlerer - Como eu j disse anteri-
ao herbicida glifosato, para importao, ormente, ns estamos tendo srios pro-
armazenamento e uso para nutrio ani- blemas na Europa, especialmente em
mal e no para cultivo. Ainda em 1996, funo do movimento das organizaes
houve consentimento, por parte do no-governamentais contrrias aos trans-
Governo, para liberao restrita de ca- gnicos. As campanhas de esclareci-
nola geneticamente modificada com to- mento devem ser conduzidas por insti-
lerncia a herbicida (glufosinate ammo- tuies de pesquisa e empresas que
nium) para importao de gros, produ- desenvolvem produtos transgnicos, que
o de rao animal e uso industrial; e de so, a rigor, os primeiros interessados.
milho resistente a insetos e a herbicida, Os cientistas precisam ser mais enfticos
somente para importao de gros. Em ao mostrar os benefcios que podem vir
1997, o Reino Unido recebeu um pedido a ser gerados pelos transgnicos; e mais
de importao de milho modificado ge- do que isso: provar que eles so equiva-
neticamente tolerante ao herbicida glifo- lentes aos produtos convencionais, s
sato somente para produo de rao e que ainda muito mais monitorados e
no para cultivo. Esse pedido ainda no Kinderlerer - A reao da populao avaliados at chegarem ao consumidor.
foi autorizado pelo Governo. europia aos produtos transgnicos Alm disso, no h 100% de segurana
muito negativa. Uma pesquisa realizada em nenhum produto alimentar, seja ele
BC&D - O senhor poderia explicar os no incio do ms de junho deste ano convencional ou transgnico. Se me
procedimentos adotados para a co- mostrou que menos de 1% da populao perguntarem, por exemplo, se seguro
mercializao de produtos transg- aceita os transgnicos. A oposio aos comer bife e batatas, eu vou responder
nicos no Reino Unido? produtos geneticamente modificados na que, possivelmente, no. Porque entre
Europa extremamente forte. Os gru- 10 mil ou mais, que so seguros, pode
Kinderlerer - A comercializao de pro- pos ambientalistas mais expressivos, es- existir pelo menos um que no seja,
dutos transgnicos no Reino Unido de- pecialmente o Greenpeace, o Friends devido a contaminaes ou a outros
pende de autorizao da Unio Euro- of the Earth e a Sociedade de Proteo fatores que a mdia aponta com freqn-
pia. As decises tomadas pela Unio dos Pssaros, entre outros, alm de cia, alis.
Europia quanto comercializao so rgos de defesa do consumidor, enfa-
automaticamente adotadas pelo Reino tizam bastante, atravs dos veculos de BC&D - Que tipo de controle o Reino
Unido e demais pases membros. As comunicao, que os transgnicos po- Unido exerce sobre as pesquisas e
liberaes so analisadas caso a caso e dem vir a causar malefcios sade produo de organismos genetica-
monitoradas quanto aos efeitos diretos e humana e ao meio ambiente. A popu- mente modificados?
indiretos ao meio ambiente, e as exign- lao torna-se presa fcil desses grupos
cias podem ser ampliadas ou no, de pelo desconhecimento generalizado da Kinderlerer - Em nvel de pesquisas,
acordo com a Unio Europia. Se as cincia e dos seus benefcios. Isso, no ns temos um conjunto de leis e vrios
anlises forem satisfatrias, os produtos fundo, uma grande irresponsabilidade comits consultivos que assessoram o
transgnicos recebem licena para co- da mdia por conceder espao a esses Governo na regulamentao e fiscaliza-
mercializao e podem ser colocados no grupos que contestam os transgnicos o dos transgnicos, de acordo com o

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nvel de segurana biolgica exigido. constitudo ainda um novo comit, que fiquei surpreso com a tcnica emprega-
Para os organismos geneticamente mo- vai analisar a liberao de produtos da por eles: as ervas so simplesmente
dificados de menor risco, com amplo transgnicos destinados alimentao arrancadas com a mo, sem uso de
histrico documentado de utilizao se- animal. herbicidas ou de qualquer outra tecnolo-
gura e sem registros de efeitos negativos gia. E essa prtica muito comum na
para o meio ambiente, podemos traba- agricultura de subsistncia em vrios
lhar livremente, seguindo, obviamente, "A populao torna-se pases no mundo. Diante disso, apesar
os procedimentos de segurana bsicos da introduo de plantas tolerantes a
para qualquer manipulao em labora- presa fcil desses grupos herbicidas levar ao uso desses produtos,
trio. Mas, para desenvolver pesquisas representa, ao mesmo tempo, melhoria
com organismos de maior risco, precisa-
ambientalistas pelo na qualidade de vida do trabalhador
mos pedir permisso antes mesmo de desconhecimento rural, alm do aumento de produo e
iniciarmos os trabalhos em laboratrios. produtividade e maiores ganhos econ-
Essa permisso solicitada ao Comit generalizado da cincia e micos. Contudo, em escala de cultivo
Consultivo de Modificao Gentica (Ad-
visory Committee on Genetic Modifica-
dos seus benefcios" comercial, eu acredito que o uso dessas
plantas levar diminuio progressiva
tion-ACGM ), que assessora o Departa- do uso desses produtos devido ao aper-
mento de Sade e Segurana na aprova- feioamento constante dessa tecnologia.
o e liberao de organismos genetica- BC&D - Se um produto transgnico
mente modificados. Esse Departamento foi liberado para comercializao nos BC&D - A clonagem da ovelha Do-
tem total autonomia e poder de polcia Estados Unidos ele automaticamen- lly suscitou muitas polmicas em
para impedir qualquer desobedincia te aprovado tambm na Europa ou todo o mundo por envolver aspectos
legislao pertinente. Os tcnicos do tem que ser submetido s autorida- legais, ticos e religiosos. O senhor
Governo podem ainda auditar a qual- des locais? acha que o avano da cincia deve
quer momento as instituies para veri- ser livre ou ter algum tipo de limita-
ficar se as pesquisas esto sendo realiza- Kinderlerer - No. Ele tem que ser o?
das de acordo com a lei, independente submetido s autoridades de um dos 15
de serem transgnicos ou no. Em pases que compem a Unio Europia. Kinderlerer - Vamos comear pelas
termos de liberao no campo, o proces- Cada um desses pases tem poder para pesquisas com animais. H muitos anos,
so muito semelhante ao do Brasil. A liberar ou negar a importao de um os cientistas vm trabalhando para aper-
Embrapa, por exemplo, quando quer produto transgnico comercializado nos feioar o padro gentico dos animais
realizar testes de campo com produtos Estados Unidos e a deciso ser respei- atravs de tcnicas de melhoramento
transgnicos, tem que ter autorizao tada e acatada pelos outros 14. Ou seja, clssico e, assim, aumentar a produo
prvia da Comisso Tcnica Nacional de na Europa no se fala em decises de carne, leite e resistncia a doenas e
Biossegurana (CTNBio) do Ministrio locais; se um dos pases diz no condies adversas. Por exemplo, as
da Cincia e Tecnologia. No Reino introduo de um produto transgnico, ovelhas que, antigamente, s tinham
Unido, o processo o mesmo: as insti- diz no por toda a Europa. uma cria por ano, em mdia, podem ter
tuies interessadas tambm tm que hoje 20 ou mais filhotes, em funo do
obter permisso do Comit Consultivo desenvolvimento de tcnicas de insemi-
em Liberaes no Meio Ambiente (Ad- nao artificial e manipulao de embri-
visory Committee on Release into the
Environment - ACRE) e a fiscalizao
"Os cientistas precisam ser es, ao longo dos anos. A clonagem
nada mais do que uma evoluo
feita por tcnicos designados pelo De- mais enfticos ao mostrar os desses mtodos e, mais do que isso, uma
partamento de Sade e Segurana. Re- imitao de um processo da natureza;
sumindo: a regulamentao das pesqui- benefcios que podem vir a ser eu, por exemplo, sou um clone natural,
sas que envolvem organismos genetica-
mente modificados est dividida em trs
gerados pelos transgnicos" tenho um irmo gmeo idntico. Na
pecuria, h uma preocupao constan-
nveis: em primeiro lugar, esto os pro- te do homem em desenvolver novas
cedimentos para as pesquisas dentro tecnologias que permitam aumentar o
dos laboratrios; em segundo, para as BC&D - Diversas instituies do agro- rebanho, de modo a atender demanda
liberaes no campo; e, em terceiro, negcio tm desenvolvido plantas crescente por carne e leite, em decorrn-
para o cultivo comercial e consumo de transgnicas com tolerncia a herbi- cia principalmente do aumento popula-
produtos transgnicos. Essa terceira cidas. O senhor acha que o cultivo cional, alm de proporcionar ganhos de
etapa depende da aprovao de um dessas plantas pode aumentar a utili- produtividade. A clonagem , sem d-
outro rgo: o Comit de Anlise de zao de defensivos agrcolas no vida, a tecnologia mais eficiente para
Novos Produtos e Processos Alimenta- mundo? atingir esses objetivos. J a clonagem
res ( Advisory Committee on Novel humana deve ser vista por dois ngulos:
Foods and Processes - ACNFP), que Kinderlerer - Vou mencionar um exem- do ponto de vista cientfico, pode ser
assessora o Ministrio da Agricultura, plo para tentar responder a essa questo considerada um grande avano, por
Pesca e Alimentao e a Secretaria de sobre o uso de herbicidas. Quando eu permitir, a longo prazo, o desenvolvi-
Estado da Sade e suas Aplicaes na participei de uma reunio no Cairo, h mento de novos rgos para transplan-
avaliao dos riscos da liberao desses alguns anos, me perguntaram se eu tes. Por outro lado, considero inaceit-
produtos para a alimentao humana. sabia como eles controlavam as plantas vel a clonagem de seres humanos. Como
Em breve, dentro de poucos meses, ser daninhas no Egito. Eu disse que no e cientista, eu considero qualquer desafio

6 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


vlido para o avano do desenvolvi- tcnica dos projetos de pesquisa. Com interessante participar desses eventos, j
mento cientfico sustentado, desde que exceo de naes desenvolvidas como que essa troca de experincias e conhe-
respeitados os limites ticos e morais cimentos muito importante para au-
da comunidade. mentar a percepo pblica acerca da
biotecnologia, que uma rea do co-
BC&D - Em que reas o senhor
No Reino Unido, temos nhecimento que pode vir a trazer inme-
acredita que a biotecnologia pode um conjunto de leis e ros benefcios para a agricultura, sade
dar respostas mais rpidas nos pr- e meio ambiente. A desinformao e a
ximos anos? vrios comits consultivos idia deturpada que a populao, por

Kinderlerer - A tcnica que eu consi-


que assessoram o vezes, tem dos transgnicos, muito por
culpa dos meios de comunicao de
dero mais promissora hoje a de Governo na massa, podem prejudicar o andamento
mapeamento gentico, que permite das pesquisas no pas. E a biotecnolo-
armazenar e formar bancos de dados regulamentao e gia, definitivamente, uma cincia que
de informaes genticas, alm de es-
tabelecer a proximidade e o distancia-
fiscalizao dos no pode parar de se desenvolver.
importante ainda que a populao, como
mento gentico entre as espcies, o transgnicos um todo, saiba que existem normas,
que facilita o desenvolvimento de pro- procedimentos e protocolos de biosse-
gramas de melhoramento gentico, gurana, que avaliam os riscos da intro-
entre outros. Na verdade, a biotecno- EUA, Canad, Reino Unido, Frana e duo e desenvolvimento de produtos
logia j vem trazendo avanos signifi- Japo, poucos pases no mundo tm transgnicos e que s permitem a sua
cativos, pois tornou possvel a pros- essas qualificaes. No que se refere liberao se eles forem absolutamente
peco de genes na diversidade biol- biossegurana, o Brasil tambm ocupa seguros para o meio ambiente e sade
gica para aplicao imediata e seu posio de vanguarda. Em uma reunio da populao. Vou aproveitar ainda a
armazenamento para uso futuro. Esses da qual participei recentemente, onde minha passagem pelo Brasil para conhe-
genes tm sido utilizados na agricultura estiveram presentes representantes de cer a regio amaznica.
para desenvolver plantas resistentes a 18 pases, incluindo Rssia, Nambia,
doenas, insetos e estresses ambientais Hungria, Egito e Malsia, entre outros, o BC&D - Os produtos transgnicos co-
e para aumentar o valor nutricional dos Brasil foi dos que mais se destacaram. mercializados no Reino Unido tm
alimentos, alm de diminuir as perdas que ser rotulados?
de armazenamento e ps-colheita; na BC&D - O que motivou essa sua vinda
sade humana e animal e na indstria ao Brasil? Kinderlerer - Sim. Todos os novos
de alimentos, entre outros. Diante de produtos alimentares lanados no Reino
todos os avanos que j vm sendo Unido tm que ser rotulados para que os
obtidos pelas tcnicas biotecnolgicas consumidores saibam o seu contedo,
e do potencial que apresentam para Como cientista, eu independentemente de serem genetica-
desenvolver a agricultura do futuro, eu mente modificados ou originrios dos
acho que deve haver um esforo maior, considero qualquer seus derivados. De uma maneira geral, o
especialmente por parte das empresas
governamentais, para repass-las
desafio vlido para o europeu s consome aquilo que ele
conhece. Os rtulos existem para isso.
agricultura familiar. No Brasil, por avano do
exemplo, empresas como a Embrapa BC&D - O senhor acha que o desen-
devem centrar suas pesquisas na pro- desenvolvimento cientfico volvimento e a introduo de orga-
duo de espcies transgnicas impor-
tantes para a agricultura de subsistn-
sustentado, desde que nismos geneticamente modificados
no meio ambiente podem causar ris-
cia e produo de alimentos acessveis respeitados os limites cos biodiversidade brasileira?
s camadas mais pobres, como a man-
dioca, que uma das principais fontes ticos e morais da Kinderlerer - Sim, podem se forem
de carboidratos. As grandes empresas comunidade introduzidos de maneira irresponsvel.
multinacionais, por razes bvias de Mas, para isso, que so feitas as
mercado, no tm interesse no desen- avaliaes de riscos dos impactos no
volvimento dessas variedades transg- Kinderlerer - Eu vim para participar, meio ambiente e os demais procedimen-
nicas, o que, alis, no mesmo papel como convidado, do Seminrio sobre tos de biossegurana para evitar que
delas. Clonagem e Transgnicos, realizado na eles ocorram. Ao mesmo tempo, a
primeira quinzena de junho, no Senado biotecnologia uma importante ferra-
BC&D - Como o senhor avalia o Federal brasileiro, no qual atuei como menta para ampliar os conhecimentos
estgio atual das pesquisas de bio- palestrante em um debate sobre o tema: sobre os recursos biolgicos da biodi-
tecnologia no Brasil? Clonagem e transgnicos: riscos e be- versidade, atravs, por exemplo, de tc-
nefcios e de uma mesa redonda sobre nicas de prospeco e formao de
Kinderlerer - Estou muito impressio- Biotica e biossegurana: limites e in- bancos de genes. Essa situao singu-
nado com o alto nvel das pesquisas no terfaces, alm de apresentar um semi- lar no Brasil devido sua megabiodiver-
Brasil, em termos de qualificao pro- nrio sobre biossegurana na Embrapa sidade, especialmente na regio amaz-
fissional dos cientistas, infra-estrutura Recursos Genticos e Biotecnologia, tam- nica, que ainda tem muito a revelar para
de laboratrios e com a abrangncia bm como convidado. Eu acho muito a cincia.

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Carta ao Leitor

Ao disponibilizarmos para os nossos leitores e comuni-


dade cientfica esta nona edio da Revista Biotecnologia
Cincia & Desenvolvimento estamos convictos de que,
mais uma vez, estaremos contribuindo para promover o
debate sadio e plural do avano da biotecnologia no Brasil.
Muitos assuntos atuais e polmicos fazem parte desta
BIOTECNOLOGIA Cincia & Desenvolvimento edio. Com certeza espertaro interesse, troca de conheci-
KL3 Comunicao mentos e experincias, provocando tambm debates acalo-
rados nos leitores, como por exemplo, a entrevista com o
Fundador
Henrique da Silva Castro cientista e especialista em biossegurana do Reino Unido,
Dr. Julian Kinderlerer, melancia sem sementes, algodo
Diretor Executivo
Mrcio Brasil colorido, extrao de DNA, modelos animais de doenas

Diretora de Pesquisa humanas, novos conhecimentos sobre doenas de chagas,


Ana Lcia de Almeida vespas como agentes no controle biolgico e muitos ou-

Diretor de Arte tros.


Henrique S. Castro F Importante destacar que a revista Biotecnologia Cin-
cia & Desenvolvimento s tem conseguido, a cada edi-
Departamento Comercial,
o, aumentar o nmero e a fidelidade dos leitores graas,
Redao e Edio:
acima de tudo, participao sistemtica e ao nvel tcni-
co-cientfico dos artigos, o que tem nos proporcionado
SRTV/Sul - Quadra 701 mais foras para levarmos este projeto adiante.
Ed. Palcio do Rdio II
Assim, neste momento, queremos externar nossos agra-
Sala 215 - CEP 70340-902
Braslia - DF decimentos a todos aqueles que direta ou indiretamente
Tel.: (061) 225-1512 (061) 225-0976 tm contribudo com a Revista, em especial ao Conselho
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Projeto Grfico independncia da nossa linha editorial.
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ISSN 1414-4522
8 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento
Conselho Cientfico
Dr. Henrique da Silva Castro - Sade; Dra. Johanna Dbereiner - Microbiologia de Solos; Colaboraram nesta edio:
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Dr. Srgio Costa Oliveira - Imunologia e Vacinas;
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Dr. Vasco Ariston de Carvalho Azevedo - Gentica de Microorganismos;
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Conselho Brasileiro de Fitossanidade - Cobrafi Eduardo Romano, Eleusio Curvlo Freire,
Dr. Ivan Rud de Moraes - Toxicologia; Fboi Prezoto, Flvio de Frana Souza,
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Joo Pereira Leite, Manoel Ablio de
Conselho Federal de Biologia Queirz, Rita de Cssia de Souza Dias,
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Rodrigo L. Orfice, Rbia F. Silva, Simo-
Fundao Dalmo Catauli Giacometti ne H. C. Scholze, Vera Cristina Terra-
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Dr. Jos Manuel Cabral de Sousa Dias - Controle Biolgico; Zlia P. Lobato.
Dra. Marisa de Goes - Recursos Genticos

Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares - IPEN


Dr. Jos Roberto Rogero

Novas Tecnologias
Biomateriais para Fixao de Protenas - pg 16

Agricultura
Vespas - pg 24
Algodo Colorido - pg 36
Extrao de DNA de plantas - pg 40
Melancia sem Sementes - Encarte Especial

Sade
Plasticidade Cerebral e Epileptognese - pg 10
Doena de Chagas - pg 20

Entrevista
Biotecnologia e Biossegurana - Julian Kinderlerer, Sheffield - Inglaterra - pg 04

Pesquisa
Gentica de Camundongos - Encarte Especial

Biossegurana
Biossegurana e Vacinas da Dengue - pg 28

Sociedade
Biossegurana e Alimentos Transgnicos - pg 32

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 9


Plasticidade Cerebral e
Epileptognese
Joo Pereira Leite
Professor Doutor da Faculdade de
Medicina de Ribeiro Preto USP
Departamento de Neurologia,
SADE Psiquiatria e Psicologia Mdica
Chefe do Laboratrio de Investigao em Epilepsia
jpleite@fmrp.usp.br

Evidncias a partir de estudos neuropatolgicos humanos e experimentais


Vera Cristina Terra-Bustamante
Mdica Assistente junto ao Centro de Cirurgia de
Epilepsia (CIREP) do Hospital das Clnicas da
Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto USP
vct@rnp.fmrp.usp.br

Fotos cedidas pelos autores

Introduo modelos experimentais de epilepsia e


em pacientes com epilepsia do lobo
a tentativa de explicar a temporal tm indicado que alguns ti-
recuperao de funes pos de brotamento anormais podem
aps uma injria cerebral, contribuir para a ocorrncia de crises
neurologistas levantam con- epilpticas (Babb et al., 1991, Sutula et
ceitos de reorganizao fun- al., 1989).
cional ou substituio funcional do Nos ltimos anos, o avano das
sistema nervoso central (SNC) (Rami- tcnicas de neuroimagem estrutural e
rez et al., 1996; Sabel et al., 1997). funcional, alm da avaliao prolonga-
Vrios estudos nas ltimas dcadas da por Vdeo-EEG e do refinamento
tm descrito que neurnios sobrevi- nas tcnicas cirrgicas tm proporcio-
ventes a um insulto no SNC passam por nado um aumento considervel do
um processo de brotamento de siste- nmero de centros especializados no
mas axonais, formando tratamento cirrgico da epilepsia do
contatos funcionais com lobo temporal. Esse procedimento,
regies deprivadas de embora tenha sido realizado pela pri-
suas aferncias originais. meira vez h mais de um sculo, foi
Dada a natureza univer- temporariamente esquecido com o
sal dessa resposta de bro- aparecimento das drogas antiepilpti-
tamento, existe a possi- cas. No entanto, estas tm-se mostrado
bilidade de que a forma- ineficazes no controle da maioria dos
o desses novos conta- casos de epilepsia do lobo temporal, o
tos seja o substrato neu- que levou ao reaparecimento e difuso
ral responsvel pela re- da cirurgia de epilepsia.
Figura 1: Imagem de ressonn-
organizao funcional. J em 1880, Sommer observou que
cia nuclear magntica na seqncia
Estudos lesionais em es- pacientes epilpticos apresentavam fre-
flair do paciente JMV, 35 anos, com
histria de crises parciais comple- truturas lmbicas de ani- qentemente ao exame antomo-pato-
xas que tiveram incio na adoles- mais de experimentao lgico alteraes estruturais que en-
cncia e com histria prvia de tm demonstrado que o volviam a regio interna do lobo tem-
crise febril generalizada aos dois brotamento de terminais poral, particularmente o hipocampo e
anos de idade. A investigao pr- homlogos queles des- a amgdala (Sommer, 1880; Mathern et
cirrgica evidenciou crises origina- nervados por uma inj- al., 1998), mas foi Stauder (Stauder,
das na regio temporal esquerda. ria prvia (brotamento 1936) quem fez a associao desses
Observa-se a formao hipocampal homotpico) est associ- achados com a ocorrncia de crises
assimtrica, com reduo do volu- ado recuperao de parciais complexas, dando incio
me e da diferenciao da estrutura funes de memria (Ra- descrio da sndrome que hoje co-
interna do hipocampo esquerdo, mirez et al., 1996). No nhecemos por epilepsia do lobo tem-
alm de acentuado aumento do entanto, estudos na for- poral mesial (French et al., 1993; Willi-
sinal (seta). mao hipocampal em amson et al., 1993). Desde ento, cada

10 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


vez mais essa sndrome vem sendo grama, e a um exame de neuroima-
estudada na tentativa de determinar a gem, preferencialmente a ressonncia
causa do seu aparecimento e os meca- nuclear magntica. O primeiro pode
nismos que levam ao desenvolvimento evidenciar anormalidades focais, prin-
da epilepsia. cipalmente nas regies temporais, que
podem ser unilaterais ou bilaterais. O
Epilepsia do Lobo achado tpico da ressonncia nuclear
Temporal Mesial magntica a atrofia da regio mesial
do lobo temporal, sendo esse achado
A epilepsia do lobo temporal o conhecido por esclerose mesial tem-
tipo mais comum de epilepsia intrat- poral. Essa alterao envolve princi-
vel do ponto de vista medicamentoso. palmente o hipocampo, o giro parahi-
As crises epilpticas so caracterizadas pocampal e a amgdala, sendo identifi-
por uma aura inicial em parte dos cada pela ressonncia nuclear magn-
pacientes, sendo a mais comum a aura tica como uma rea de reduo de
epigstrica (sensao de mal-estar na volume na seqncia T1 e aumento de
regio abdominal caracterizada por frio, sinal na seqncia flair (Figura 1). Em
clica ou borborigmo), que pode as- alguns pacientes, a ressonncia nucle-
cender em direo ao trax ou gar- ar magntica pode ser normal ou lim-
ganta (French et al., 1993). Outras trofe com a normalidade. Esse achado
auras bastante freqentes so as carac- ocorre com maior freqncia nos paci-
Figura 2: Representao es-
terizadas por pensamentos forados, entes em que no se observa histria
quemtica em corte coronal do
lembranas de fatos j vividos (do de crise febril na infncia antecedendo
hemisfrio cerebral direito passan-
francs, dj vu) ou nunca vividos do pelo lobo temporal. Na poro a epilepsia do lobo temporal, ou seja,
(jamais vu). Aps essa fase, a crise mesial est o hipocampo, seguido nos pacientes que no apresentam a
usualmente evolui para perda da cons- pelo giro parahipocampal, que histria tpica da sndrome da esclero-
cincia, com o aparecimento de vrios ligado ao lobo temporal, na sua se mesial temporal.
comportamentos automticos, que poro mais inferior. Para a retira- Nos casos definidos como clinica-
envolvem particularmente a muscula- da do hipocampo, faz-se uma sec- mente intratveis, realizada uma in-
tura facial e da deglutio e os mem- o da superfcie lateral do lobo vestigao pormenorizada, que inclui
bros superiores. O paciente pode ain- temporal, entre o giro temporal a monitorizao prolongada por V-
da apresentar fala e marcha automti- mdio e superior, em direo ao deo-EEG, onde so registrados os acha-
ca, ou perodos de agressividade (estes corno temporal do ventrculo late- dos interictais e ictais. Os achados
geralmente ocorrem quando o pacien- ral, como indicam as setas. Faz-se ictais so tipicamente manifestos pela
te contido a fora ou no perodo ps- a retirada da superfcie cortical presena de atividade rtmica na faixa
crise). Na fase ps-ictal pode ocorrer para, em seguida, retirar-se o hipo- teta, correspondendo ao ritmo hipo-
campo em bloco, juntamente com
confuso mental ou recuperao ime- campal, que, na grande maioria dos
o giro parahipocampal.
diata da conscincia. As crises podem casos, unilateral. Ainda fazendo parte
evoluir para generalizao tnico-cl- da avaliao pr-cirrgica so ainda
nica secundria e a sua incidncia carter assimtrico. Aps essa crise, realizados testes neuropsicolgicos que
varivel de caso para caso (Fernandes que pode se caracterizar por um epis- evidenciam dficits de memria verbal
e Sander, 1998). Ainda no h uma dio nico ou por crises repetidas no (quando as crises so originadas no
definio clara na literatura se crises decorrer de meses ou anos, surge um hemisfrio dominante) ou de conte-
epilpticas recorrentes podem ou no perodo em que o paciente permanece do vsuo-espacial (quando as crises
levar a uma piora progressiva da cog- assintomtico. Esse perodo segue at so originadas no hemisfrio no do-
nio desses pacientes ou agravar a o final da infncia ou incio da adoles- minante) e a uma avaliao psiquitri-
epilepsia (Holmes et al., 1998). cncia, quando, ento, as crises epilp- ca e social que podem identificar dis-
Os pacientes que se apresentam ticas reaparecem, sendo dos tipos par- trbios psiquitricos e familiares relaci-
com essa sndrome tm freqentemen- cial simples e/ou complexa, geralmen- onados ou no epilepsia.
te, no seu passado, histria de uma te ocorrendo controle insatisfatrio com
convulso, na vigncia de febre, na as drogas anticonvulsivantes dispon- Tratamento cirrgico
infncia (na maioria dos casos, at os veis. Estes pacientes tm como achado
trs anos de idade) (French et al., radiolgico a esclerose hipocampal O tratamento cirrgico visa cura
1993). Essa convulso geralmente (Williamson et al., 1993). da epilepsia ou reduo significativa
relatada como sendo duradoura (apro- do nmero das crises epilpticas. O
ximadamente uma hora ou, muitas Exames de Investigao intuito da cirurgia a resseco da rea
vezes, de vrias horas de durao), epileptognica, que, na epilepsia do
podendo ainda se apresentar como Assim como nos outros casos de lobo temporal, envolve as estruturas
convulses repetidas no mesmo dia. epilepsia, esses pacientes devem ser mesiais (hipocampo, giro parahipo-
As crises podem acometer preferenci- submetidos a exames de investigao campal e amgdala). Para que seja feita
almente um dimdio, assumindo um de rotina, que incluem o eletrencefalo- a resseco feita uma inciso na

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 11


Figura 3: A: Representao esquemtica de um hipocampo normal. As clulas principais do hipocampo compreendem
os neurnios piramidais (representados por tringulos) distribudos nos diversos subcampos (CA1, CA2 e CA3) do Corno
de Ammon e clulas granulares (com citoplasma arredondado) localizadas na fascia dentata (FD). A regio do hilo envol-
ta pela FD e contm, no seu interior, interneurnios dispersos (representado por clulas em forma de losango). Os axnios
das clulas granulares (fibras musgosas) se projetam para a regio CA3, constituindo o stratum lucidum (cabea de seta).
Na superfcie externa da fascia dentata, encontra-se a camada molecular com as pores interna (mais clara, indicada por
um asterisco) e externa (mais escura, indicada por uma estrela).
B: Representao esquemtica de um hipocampo com esclerose hipocampal. Observa-se uma perda celular importante
(representada por figuras em branco), particularmente neurnios piramidais e hilares. J na camada granular no h perda
significativa de neurnios, ocorrendo no entanto, uma proliferao de colaterais axnicas (reorganizao sinptica) prove-
nientes de neurnios granulares que se projetam principalmente para a camada molecular interna (indicadas pelas setas
azuis).

poro lateral do crnio, prximo ao bem menos favorvel, podendo ser mem, um modelo em que ocorressem
pavilho auricular, por onde se tem, obtido apenas 50% a 60% de casos em crises espontneas, no sendo neces-
acesso ao encfalo. As tcnicas de que ocorre a cura da epilepsia. sria a induo das crises por drogas
resseco da regio epileptognica ou leses cerebrais. Infelizmente so
variam nos diversos centros de cirurgia Modelos animais e mecanismos poucas as espcies animais que apre-
de epilepsia, podendo incluir apenas de epileptognese sentam epilepsia idioptica e menos
as estruturas mesiais do lobo temporal ainda com crises parciais complexas
ou estender-se com a resseco da Para que haja um completo enten- como as encontradas na epilepsia do
poro lateral do lobo temporal (Figu- dimento dos mecanismos que levam lobo temporal.
ra 2), sendo esta a tcnica mais comu- ao desenvolvimento das epilepsias, in- As preparaes experimentais mais
mente utilizada. cluda a epilepsia do lobo temporal, antigas, particularmente as utilizadas
vrios modelos animais vm sendo para teste de drogas antiepilpticas,
Prognstico desenvolvidos. Tenta-se, dessa forma, no reproduziam de forma fidedigna a
determinar quais so os eventos que fenomenologia encontrada em huma-
O prognstico cirrgico bastante podem induzir o aparecimento das nos (Purpura et al., 1972). As crises
favorvel, particularmente nos pacien- crises epilpticas, as estruturas envol- epilpticas eram induzidas principal-
tes com diagnstico da sndrome da vidas e o melhor tratamento a ser mente de forma aguda, no sendo
esclerose hipocampal. Nesse grupo de utilizado. Determinar o substrato ana- observada a ocorrncia de crises es-
pacientes, chega a ser observado um tmico, patolgico e funcional, inclusi- pontneas tardiamente. Nas duas lti-
ndice de cura da epilepsia em torno de ve os neurotransmissores envolvidos e mas dcadas, novos modelos foram
80% a 90% dos casos, embora alguns as suas vias nas diversas formas de desenvolvidos tendo como caracters-
pacientes continuem a apresentar as epilepsia de grande importncia para tica comum a ocorrncia de crises
auras. Nos pacientes em que essa his- o desenvolvimento de novas terapu- espontneas, em geral, como consequ-
tria no encontrada, mas, em exa- ticas clnicas ou cirrgicas e na criao ncia de um insulto cerebral decorren-
mes de neuroimagem, observa-se acha- de mecanismos de preveno das te de status epilepticus.
do tpico de esclerose hipocampal, o mesmas. Assim, o modelo animal ideal Os principais modelos utilizados
ndice de cura ligeiramente menor, seria aquele que mais se aproximasse para estudar a epilepsia do lobo tem-
mas ainda em torno de 80%. Por outro histria natural que ocorre em paci- poral com ocorrncia de crises espon-
lado, para os pacientes que apresen- entes. O ideal que se pudesse desen- tneas so obtidos com injees na
tam ressonncia nuclear magntica volver em primatas, devido maior cavidade peritoneal ou intra-hipocam-
normal, apresentam um prognstico semelhana filogentica com o ho- pal em ratos ou camundongos ou ain-

12 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


da atravs da estimulao eltrica man- sentado como substrato anatmico para as clulas principais. A hiptese afirma
tida de estruturas lmbicas (McNamara, duas hipteses propostas na literatura, que uma crise prolongada levaria, por
1994). Entre as drogas mais utilizadas na tentativa de explicar os mecanismos um mecanismo excitotxico, morte
esto a pilocarpina e o cido kainco subjacentes ao processo de epilepto- de neurnios no hilo (clulas musgo-
(Cavalheiro et al., 1982, Leite et al, gnese na epilepsia do lobo temporal sas), removendo a aferncia excitatria
1990). mesial (McNamara, 1994). desses neurnios para as clulas em
A pilocarpina um agente colinr- 1-Hiptese das clulas em cesto cesto (GABArgicas), que ficariam en-
gico que, quando injetado em ratos, dormentes: to dormentes, sem a ativao nor-
leva ocorrncia de crises epilpticas Essa hiptese foi estabelecida por mal determinada pelas clulas musgo-
semelhantes s crises parciais comple- Sloviter (1991), utilizando o modelo da sas. Uma vez iniciada a perda parcial
xas observadas em humanos. Essas estimulao eltrica mantida da via da inibio, combinada a aferncia
crises se manifestam agudamente como perfurante, a principal aferncia que se excitatria a estmulos normais, des-
um episdio de estado de mal epilp- projeta do crtex entorrinal (camadas cargas excessivas das clulas granula-
tico, que pode durar vrias horas (as- II e III) para a formao hipocampal. A res seriam geradas, levando `a morte
sim como o encontrado na infncia de estimulao eltrica dessa via determi- celular progressiva no hilo e ao apare-
crianas que desenvolvem a sndrome na a perda da inibio mediada pelo cimento de uma condio epilptica
da epilepsia do lobo temporal mesial). GABA nas clulas granulares in vivo, com o passar dos anos aps o insulto
Aps um perodo em torno de 15 dias, sendo, portanto, consistente com a inicial (McNamara, 1994).
os animais passam a apresentar crises idia de que a desinibio sinptica 2-Reorganizao sinptica das fi-
parciais com automatismos nas patas e contribui para a hiperexcitabilidade bras musgosas:
com as vibrissas, assemelhando-se s das clulas granulares. No entanto, Essa hiptese defende a idia de
parciais complexas da epilepsia do essa observao paradoxal em vista que a hiperexcitabilidade das clulas
lobo temporal. Essas crises apresentam da preservao preferencial dos neu- granulares uma consequncia de um
ento um carter recorrente de forma rnios GABArgicos, isto , os neur- rearranjo patolgico de uma circuitaria
crnica e espontnea (Leite et al., 1990, nios GABArgicos se apresentam pro- neuronal, na qual as clulas granulares
Cavalheiro et al, 1991). porcionalmente menos lesados do que emitiriam colaterais axnicas para o
O cido kanico uma aminocido
excitatrio com ao glutamatrgica.
Quando injetado na regio hipocam-
pal ou sistemicamente leva a um qua-
Figura 4: Cortes histolgicos ilustrando um hipocampo normal (A e C) e um
dro de status epilepticus lmbico. Pos-
hipocampo de um paciente com esclerose hipocampal (B e D). A e B represen-
teriormente a essa fase, so observa- tam colorao pelo mtodo de Nissl. C e D mtodo de colorao pelo neo-
das crises recorrentes espontneas (Ca- Timm, que evidencia fibras ricas em zinco. Em A nota-se a distribuio normal
valheiro et al., 1982). Estudos realiza- das clulas granulares e piramidais. Comparando com a figura B observa-se uma
dos nesses modelos animais mostram reduo significativa de todas as clulas nas camadas piramidais (entre as setas
que, se o estado de mal epilptico no curvas) e do hilo (cabea de seta), com preservao do subiculum inferiormente
ocorre ou abortado com drogas anti- (asterisco). Na figura C observa-se a representao normal da marcao pelo
epilpticas, essas alteraes neuropa- mtodo do neo-Timm, sendo a regio do hilo mais intensamente corada, se ex-
tolgicas no hipocampo no ocorrem tendendo at a transio entre a regio CA3 e CA2. Em D, esta marcao no hilo
nem se desenvolvem as crises espon- um pouco menos intensa, estendendo-se at a regio do subiculum. Na regio
tneas, mostrando que pode existir da fascia dentata observa-se uma densa marcao anormal na camada molecular
uma relao direta entre esse tipo de interna (seta).
epilepsia e as anormalidades anatmi-
cas e funcionais do hipocampo (Le-
mos e Cavalheiro, 1995).
Um achado neuropatolgico en-
contrado em vrios modelos de status
epilepticus a perda acentuada de
neurnios hilares e clulas piramidais
nos subcampos CA1 e CA3, com rela-
tiva preservao das clulas granula-
res e neurnios piramidais de CA2.
Alm desse padro desigual de vulne-
rabilidade celular, existe tambm a
ocorrncia de brotamentos axonais
no hipocampo esclertico (Figura 3).
Uma ateno maior tem sido dada a
perda de neurnios hilares, particular-
mente as clulas musgosas e aos
fenmenos plsticos de brotamentos
axonais. Essas alteraes tm-se apre-

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 13


seu prprio campo dendrtico, resul- seletivamente, ativassem as clulas & Biobehavioral Reviews, 14:511-
tando num circuito excitatrio recor- GABArgicas inativas, podendo en- 517, 1990
rente (Tauck e Nadler, 1985). Esse to restabelecer a inibio recorrente Lemos, T. & Cavalheiro, E. A. -
rearranjo resultante da eliminao nas clulas granulares do giro dente- Supression of pilocarpine-induced sta-
sinptica em decorrncia da morte de ado. tus epilepticus and the late develop-
neurnios (clulas musgosas) que, ment of epilepsy in rats. .Exp. Brain
normalmente, projetam axnios para Referncias bibliogrficas Res. 102:423-428, 1995
o tero proximal da camada molecu- McNamara JO - Cellular and mole-
lar do giro denteado (McNamara, Babb, TL; Kupfer, WR; Pretorious, cular basis of epilepsy. Journal of
1994). As sinapses eliminadas so JK; Crandall, PH and Levesque, MF. Neuroscience, 14:3413-3425, 1994.
ento substitudas pelos axnios das Synaptic reorganization by mossy fi- Mathern G.W.; Babb, T. L. and Ar-
clulas granulares, as fibras musgo- bers in human epileptic fascia denta- mstrong, D. L. Hippocampal Sclero-
sas. Os axnios das fibras musgosas ta. Neuroscience, 42 (2): 351-363, sis. Epilepsy: a comprehensive tex-
contm altas concentraes de zinco 1991. tbook. Engel J. Jr and Pedley T.A.
e podem ser facilmente identificados Cavalheiro EA, Riche D, Le Gal La (eds.), Lippincott Raven, New York,
pelo mtodo de Timm. Uma marca- Salle G - Long-term effects of intrahi- Volume 1: 133-156, 1998.
o anormal de terminais Timm posi- ppocampal kainic acid in rats: a me- Purpura, DP; Penry JK; Tower D;
tivos na camada molecular interna thod for inducing spontaneous recur- Woodbury DM; Walter R (eds.) Experi-
tem sido observada em hipocampos rent seizures. Electroenceph. clin. mental models of epilepsy. New
de pacientes com esclerose hipocam- Neurophysiol., 53:581-589, 1982. York: Raven Press; 1972.
pal e modelos animais de epilepsia Cavalheiro EA, Leite JP, Bortolotto Ramirez, JJ; Mcquilkin M; Carrigan
temporal (Figura 4). Acredita-se que, ZA, Turski WA, Ikonomidou C and T., MacDonald K, Kelley MS Progres-
para ocorrer esse processo plstico, Turski L - Long-term effects of pilocar- sive entorhinal cortex lesions accelera-
haveria a necessidade de sntese de pine in rats: Structural damage of the te hippocampal sprouting and spare
fatores trficos que seriam respons- brain triggers kindling and sponta- spatial memory in rats. Proc Natl Acad
veis pelo brotamento e manuteno neously recurrent seizures. Epilep- Sci, 93: 15512-15517, 1996.
desses novos circuitos (Gall e Isack- sia, 32(6): 778-782, 1991. Sabel BA; Kasten E; Kreutz MR
son, 1989). Fernandes, JG e Sander, JWAS. Recovery of vision after partial visual
Epidemiologia e histria natural das system injury as a model of postlesion
Concluso epilepsias. Em: Fundamentos Neu- neuroplasticity. Advances in Neuro-
robiolgicos das Epilepsias. Costa logy, 73: 251-276, 1997.
Embora partindo de um achado da Costa J, Palmini A, Yacubian EMT Sloviter RS - Feedforward and feed-
neuropatolgico comum (perda de e Cavalheiro EA (eds.), Lemos Edito- back inhibition of hippocampal princi-
neurnios hilares), duas hipotses se rial, Vol. 1: 3-20, 1998. pal cell activity evoked by perforant
apresentam com mecanismos fisiopa- French, JA; Willianson, PD; Tha- path stimulation: GABA-mediated me-
tolgicos aparentemente antagnicos. dani, VM et al - Characteristics of chanisms that regulate excitability in
Somente com futuros experimentos medial temporal lobe epilepsy : I. vivo. Hippocampus, 1:31, 1991.
no tecido cerebral epileptognico hu- Results of history and physical exami- Sommer W. Erkrankung des am-
mano e em modelos animais, conse- nation. Annals of Neurology, 34: monshorns als aetiologisches moment
guiremos validar essas hipteses. No 774-780, 1993 der epilepsie. Arch Psychiatr Ner-
entanto, o conhecimento dos eventos Holmes, MD; Dodrill, CB; Wilkus, venkr, 10: 631-675, 1880.
moleculares que ocorrem aps a le- RJ; Ojemann, LM and Ojeman, GA. Stauder KH. Epilepsie und schlfen-
so neuronal poder, no futuro, ofe- Is partial epilepsy progressive? Ten- lappen. Arch Psychiat Neverkr, 104:
recer novas estratgias teraputicas year follow-up of EEG and neurop- 181-212, 1936.
no combate epilepsia farmacorresis- sychological changes in adults with Sutula T, Cascino G, Cavazos J, Para-
tente. O desenvolvimento de drogas partial seizures. Epilepsia, 39(11): da I, Ramirez L. Mossy fiber synaptic
que antagonizem a ao excitotxica 1189-1193, 1998. reorganization in the epileptic human
sobre os receptores do tipo NMDA Holtzman DM and Lowenstein DH temporal lobe. Annals of Neurology,
poder obviamente evitar os proces- - Selective inhibitoin of axon outgro- 26:31-330, 1989.
sos degenerativos quando emprega- wth by antibodies to NGF in a model Tauck D and Nadler JV. Evidence of
dos na fase aguda da agresso ao of temporal lobe epilepsy. Journal of functional mossy fiber sprouting in hi-
tecido cerebral. Uma vez estabelecida Neuroscience, 15:7062-7070, 1995. ppocampal formation of kainic acid-
a leso, talvez a reorganizao sinp- Gall CM and Isackson PJ - Limbic treated rats. . Journal of Neuroscien-
tica das fibras musgosas possa ser seizures increase neuronal producti- ce, 5:1016-1022, 1985.77
impedida com a modulao especfi- on of messenger RNA for nerve gro- Williamson, PD; French, JA Thadani,
ca de fatores trficos neuronais, como wth factor. Science, 245:758-761, VM et al - Characteristics of medial
foi recentemente descrita para o siste- 1989. temporal lobe epilepsy: II. Interictal and
ma colinrgico (Holtzman e Lowens- Leite J. P.; Bortolotto Z.A., Cava- ictal scalp electroencephalography, neu-
tein, 1995). Ou ainda, no caso das lheiro E.A - Spontaneous recurrent ropsychological testing, neuroimaging,
clulas em cesto dormentes, poderi- seizure in rats: AnExperimental mo- surgical results and pathology Annals
am ser desenvolvidas drogas que, del of partial epilepsy. Neuroscience of Neurology, 34:781-787, 1993.

14 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


BAYER
BIOMATERIAIS PARA

NOVAS TECNOLOGIAS
FIXAO DE PROTENAS
DESENVOLVIMENTO DE UM PROCESSO DE FABRICAO DE VIDROS POROSOS VIA SOL-GEL PARA FIXAO DE PROTENAS
Herman S. Mansur - mestre e doutor em fsico-qumica
Rodrigo L. Orfice - mestre e doutor em engenharia de materiais
Wander L. Vasconcelos - mestre e doutor em engenharia de materiais
Rbia F. Silva mestre e doutora em engenharia de materiais
Universidade Federal de Minas Gerais Escola de Engenharia
Departamento de Engenharia Metalrgica e de Materiais
hmansur@demet.ufmg.br
Zlia P. Lobato mestre em virologia e doutora em biologia molecular
Universidade Federal de Minas Gerais - Escola de Veterinria -
Departamento de Medicina Veterinria Preventiva

Fotos cedidas pelos autores

Resumo Abstract
Realizou-se um estudo para desenvolvimento de um
processo de fabricao de vidro poroso de slica via sol- In this work we report the development of a process
gel para fixao de protenas. Utilizou-se for silica porous glass production with protein
tetrametilortossilicato (TMOS) como precursor em meio fixation based on sol-gel method. The glass was
de etanlico e um tampo fosfato salino PBS, mantendo obtained using TMOS in ethanol and phosphate
o pH=7,40 0,05. O processo de polimerizao foi buffered saline (PBS) solution with pH= 7.40 0.05.
monitorado por meio de anlise FTIR, sendo observado The polymerisation of the material during the
um perodo superior a 10 dias para obteno de uma gelation process was monitored through FTIR and no
polimerizao completa temperatura ambiente. As significant change of the spectra after 10 days was
anlises dos substratos de vidros porosos incluiram observed. Porosity and surface area were analysed
medidas de porosidade e rea superficial (B.E.T). Em by B.E.T and the results have shown an increase of
seguida foram realizados testes preliminares para the average pore size when albumin protein
avaliao da eficincia de fixao da protena albumina macromolecules were added to gelation solution.
nos substratos de vidro poroso. Keywords: Biomaterials, Proteins, Sol-Gel
Palavras Chaves: Biomateriais, Protenas, Sol-gel. Glass.

1. INTRODUO processo, tais como pH, temperatura, rea (tetrametilortossilicato, TMOS), conduz
superficial, ons e agentes quelantes, agen- reao de polimerizao sob condies
A elevada eficincia apresentada pelas tes complexantes etc. certamente determi- apropriadas e a viscosidade da soluo
macromolculas biolgicas na seleo de nam os nveis de eficincia e o grau de aumenta at o gel ser obtido. O gel
reagentes e na especificidade da interao seletividade das interaes protena-subs- subseqentemente secado e aquecido para
com stios de reao tem promovido o trato. produzir os produtos desejados. Durante a
crescente interesse de pesquisa envolven- Pesquisas recentes tm demonstrado polimerizao, a evoluo da forma e do
do filmes finos de macromolculas associ- que vidros silicatos obtidos por meio da tamanho dos polmeros, que determinam
adas a materiais avanados [1-2]. As prote- tecnologia de processamento sol-gel po- a interao reolgica entre eles so os
nas, em especial, so macromolculas dem oferecer um substrato para fixao de fatores chaves que afetam a dependncia
biolgicas de elevada importncia e o macromolculas de protenas sem a perda tempo-viscosidade da soluo. Uma etapa
estudo de suas interaes com os diversos de caractersticas funcionais biolgicas das fundamental no processo sol-gel a pro-
materiais e meios qumicos fundamental mesmas [3-6]. Ao contrrio dos mtodos duo do gel poroso, preparado geralmen-
para o aprofundamento do conhecimento convencionais de fuso de slica vtrea que te atravs da hidrlise e condensao de
orgnico e funcional dos seres vivos. Os requerem elevadas temperaturas, o pro- alcxidos. Tal evoluo conduz eventual-
estudos envolvem geralmente a fixao ou cessamento sol-gel envolve baixas tempe- mente formao de um gel poroso, que
imobilizao de uma ou mais protenas em raturas nas reaes de hidrlise e conden- posteriormente pode ser convertido em
substratos, por meio de diversos mecanis- sao, ideal para a grande variedade de vidro poroso pela desidratao do materi-
mos, tais como, ligao covalente, adsor- molculas orgnicas sensveis a altas tem- al. As caractersticas de controle de poro-
o fsica, ligaes cruzadas, polarizao e peraturas, como a classe das protenas que sidade, a elevada superfcie de interao e
estereoqumica, etc. Um ou mais desses podem desnaturar e perder sua atividade estrutura amorfa dos vidros obtidos por
mecanismos citados devem estar envolvi- biolgica [7]. processamento sol-gel os qualificam como
dos no processo de fixao da protena Tipicamente, uma soluo contendo substrato ideal para a construo de siste-
com o substrato. Os vrios parmetros do um alcxido lquido, tal como Si(OCH3)4 mas biolgicos heterogneos envolvendo

16 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


materiais inorgnicos e macro- acompanhamento da evoluo
molculas de protenas. O con- durante a preparao do substrato
trole da distribuio e do tama- de gel de slica com a incorpora-
nho mdio de poros funda- o e adsoro de protenas. Fo-
mental para a propriedade de ram obtidos espectros de refle-
fixao de protenas do subs- xo, utilizando-se o acessrio
trato, oferendo um maior ou Perkin-Elmer para reflexo difusa.
menor nmero de stios de Amostras monolticas e na forma
interao, dependendo do vo- particulada foram analisadas.
lume de poros e da rea super-
ficial slido-poros da matriz 2.3. Tnica de anlise de
vtrea obtida [8]. porosidade por B.E.T.
A porosidade e a elevada
superfcie especfica intrnseca Utilizou-se o equipamento de
Figura 1. Representao esquemti-
dos vidros porosos obtidos via sol-gel anlise AUTOSORB-1 da Quantachrome.
permitem a captura de macromolculas
ca das etapas de processamento sol- Os ensaios foram realizados com susbtra-
sem a necessidade de uma ligao com os gel, com a incorporao de prote- tos de gel de silica com diferentes concen-
stios biologicamente ativos, o que portan- nas em matrizes dos vidros porosos traes de protenas para avaliao da sua
to, no compromete a eficincia da propri- obtidos influncia na rea superficial e no tamanho
edade de seletividade do sistema constru- mdio dos poros obtidos.
do.
Neste trabalho foi realizado um estudo 3. RESULTADOS
de anlise de FTIR da formao de uma b) Mtodo-2 - Com adio de albumina
matriz de slica-gel porosa com incorpora- durante a gelao 3.1. B.E.T.
o de protena BSA. Foram feitas anlises
da variao da porosidade mdia da matriz Preparou-se uma soluo de 1,0 % de Os resultados iniciais indicam uma
obtida com a adio de macromolculas albumina em tampo PBS e adicionou-se influncia significativa no tamanho mdio
de protena durante o processamento sol- mistura de TMOS-Etanol, agitando-se mo- de poros obtidos e na rea superficial com
gel e tambm aps a gelao. deradamente em banho de gelo at que a a adio de macromolculas da protena
gelao ocorresse. Manteve-se tempera- albumina bovina (BSA) no processo de
2. MATERIAIS E MTODOS tura ambiente por 14 dias para polimeriza- sntese de vidro de slica porosa via sol-gel.
o completa. A Fig.1 mostra um diagrama Utilizando-se o Mtodo-1, onde a protena
Os reagentes Na2CO3 (> 99,5%), forne- representativo do processo de incorpora- foi adicionada no oitavo dia de envelheci-
cidos pela VETEC foram utilizados sem o de macromolculas de protenas du- mento do gel, observou-se um valor mdio
purificao posterior. rante o processamento sol-gel para obten- de 75 para as amostras com concentra-
Na2HPO4 (> 99,0%), NaH2PO4 (> 99,0%) o de uma matriz vtrea de slica. o de albumina de 3% a 5 % e 50 para
e NaCl (> 99,0%), fornecidos pela VETEC, o gel de slica sem adio de protena . De
foram utilizados como reagentes para pre- 2.2. Tnica de anlise por Espectros- modo anlogo, as amostras fabricadas pelo
parao do tampo fosfato PBS (phospha- copia no Infravermelho por Trans- Mtodo-2, onde a protena foi adicionada
te buffered saline). formada de Fourier (FTIR) durante o processo de gelao, observou-
Foi preparada uma soluo 1,0 N de se um tamanho mdio de poro inferior ao
NaOH (> 99,0%), fornecido pela MERK, Utilizou-se o equipamento de anlise obtido no Mtodo-1, mas uma tendncia
para correo do pH da soluo utilizada FTIR Paragon-1000 da Perkin-Elmer, com similar de aumento do tamanho mdio de
no processo sol-gel. o software Spectrum for Windows 1.0. Os poro (50-100%) com adio de 1% de BSA.
A albumina bovina (BSA - frao V > espectros foram obtidos na faixa de nme- Essa observao est de acordo com a
99,5%), C2H5OH (absoluto >99,8%) e ro de onda de 400 a 4000 cm-1 para literatura [3] que discute o aumento do
Si(OCH3)4 (TMOS > 98%) foram adquiridos tamanho do poro com a adio de macro-
da SIGMA- ALDRICH e utilizados sem molculas orgnicas associado, principal-
purificao posterior. mente, ao encapsulamento dessas macro-
molculas nos poros, que impedem a
2.1. Preparao do Substrato Sol-Gel contrao durante o processo de envelhe-
cimento do gel de slica.
a) Mtodo-1 - Sem adio de albumina
3.2. Espectroscopia de
Preparou-se uma soluo de TMOS Infravermelho
(1,0 ml ), etanol (1,2 ml) e um tampo
fosfato salina (PBS, pH=7,4, 0,6 ml), pro- A espectroscopia de infravermelho foi
movendo agitao moderada, tempera- utilizada nesse trabalho para comprovar a
tura ambiente at ocorrncia de gelao. A eficincia do mtodo de preparao no
soluo foi mantida em temperatura ambi- que se refere incorporao de protenas
ente por 14 dias para polimerizao com- nos gis de slica. Alm disso, essa tcnica
pleta. Foram realizados espectros de FTIR foi ainda usada para monitorar os proces-
ao longo desse perodo de tempo para sos envolvidos na formao do reticulado
monitoramento da polimerizao. Aps Figura 2. Espectros de inorgnico do gel de slica.
uma semana, foi feita a adio de 250 l da infravermelho de amostras de Como salientado anteriormente, a for-
soluo de 1,0 % de albumina em tampo gis de slica em diferentes est- mao do gel de slica via sol-gel inclui o
PBS, em cada amostra de gel de slica. gios de consolidao processamento de uma srie de reaes

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 17


qumicas que envolvem os alcxidos met- tram tambm presentes no espectro do
licos e seus derivados, frutos de reaes de gel preparado com albumina, revelando,
hidrlise e condensao. O processamento assim, a capacidade do mtodo usado em
de tais reaes leva ao surgimento e cresci- incorporar macromolculas em matrizes
mento de cadeias polimricas inorgnicas, de slica.
as quais interagem entre si, culminando com
a eventual formao de um reticulado tridi- 4. CONCLUSO
mensional (gel). A espectroscopia de infra-
vermelho permite o acompanhamento da Neste trabalho foi desenvolvido um
evoluo estrutural que ocorre durante a processo de obteno de uma matriz de
transformao sol para gel e aps a forma- vidro poroso via sol-gel para incorpora-
o do gel, a partir da avaliao do ambiente o de protenas. Observou-se um au-
qumico associado s ligaes da slica. mento do tamanho mdio poro da matriz
A Fig.2 mostra os espectros de infraver- com o aumento da concentrao de pro-
melho de gis de slica em diferentes etapas tena BSA. Verificou-se ainda a incorpora-
de consolidao. Nesse caso, gis coletados Figura 3. Mudanas observadas o da protena BSA adicionada por meio
aps 11, 12 e 14 dias aps gelao foram na freqncia e intensidade de da tcnica espectroscpica de FTIR.
submetidos anlise. Os espectros exibidos bandas de absoro em gis de
na Fig.2 mostram o pico caractersticos das slica analisados em diferentes 5. AGRADECIMENTOS
ligaes Si-O-Si (modo de estiramento) en- estgios de consolidao.
tre 1100-1000 cm-1, o pico relacionado com Os autores agradecem ao CNPq/CA-
as ligaes rompidas Si-O- entre 950-900 PES/FINEP/FAPEMIG pelos recursos con-
cm-1 e, entre 450-400 cm-1, o pico associado das macromolculas. Entre essas caracte- cedidos para utilizao nesse projeto. Os
com as ligaes Si-O-Si no modo de dobra- rsticas citam-se: textura de poros, rigidez autores agradecem tambm a Wesller G.
mento. A anlise desses espectros prov da rede, concentrao de grupos silanol Schmidt pelas anlises de porosidade re-
informaes relacionadas com a estrutura (ligaes quebradas), entre outras. alizadas pelo mtodo B.E.T.
dos gis de slica no que diz respeito
formao do reticulado tridimensional. Per- 3.3. Avaliao da presena de 6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
cebe-se, atravs dos espectros, uma mudan- protenas nos gis de slica
a progressiva da freqncia dos picos rela- [1] MCLEAN, M.A.;STAYTON, P. S.;
tivos s ligaes Si-O-Si (estiramento) para A espectroscopia de infravermelha SLIGAR, S. G.,Engineering Protein Orien-
maiores nmeros de onda em gis envelhe- foi usada na determinao da eficincia tation at Surfaces to Control Macromole-
cidos por tempos mais longos. Alm disso, dos mtodos de incorporao de prote- cular Recognition Events, Anal. Chem.,
observa-se uma reduo gradual da intensi- nas nos gis. Na Figura 4, so mostrados v.65, p.2676-2678, 1993.
dade do pico relacionado com as ligaes espectros de albumina pura (Fig.4a), de [2] MURAMATSU, H.; DICKS,J.;
rompidas para maiores tempos de envelhe- gis de slica puros (Fig.4c) e de gis de TAMIYA,E.; KARUBE,I., Piezoelectric Crys-
cimento. Tais resultados esto explicitados slica com albumina (Fig.4), obtidos pelo tal Biosensor Modified with Protein-A for
na Fig.3. processo tipo (a). Determination of Immunoglobulins, Anal.
Os resultados da Fig.3 fornecem infor- Os picos caractersticos da albumina, Chem., 1987, v.59, pp.2760-2763.
maes importantes relacionadas com o que envolvem os grupamentos amida [3] DAVE,B.C.; DUNN,B.; VALENTI-
processo de consolidao da estrutura dos primria (1620 a 1680 cm-1) e amida NE, J. S.; ZINK, J. I., Sol-Gel Encapsulation
gis de slica. A mudana do pico localizado secundria (1480 a 1580 cm-1), esto Methods for Biosensors, Analytical Che-
aproximadamente em 1080 cm-1 para fre- claramente exibidos na Fig.4a. Os picos mistry, v.66, n.22, 1994.
qncias maiores uma indicao de que o observados nos espectros de FTIR de [4] BRAUN,S.; RAPPOPORT,S.;
reticulado da slica se torna mais rgido amida-I e amida-II esto de acordo com ZUSMAN,R.; AVNIR,D.; OTTOLENGHI,
medida que o tempo de envelhecimento as bandas descritas para protenas na M. Mater. Lett., 1990, v.10, pp.1.
aumenta. Quanto maior o nmero de liga- literatura [9-10]. Esses picos se encon- [5] ELLERBY, L. M.; NISHIDA, C. R.;
es cruzadas entre as cadeias polimricas NISHIDA, F.; YAMANAKA,S.A.; DUNN,B.;
inorgnicas, maior a rigidez da rede e VALENTINE, J. S.; ZINK,J.I., Science, 1992,
maior a energia necessria para a ocorrn- v.255, pp.1113.
cia das transies vibracionais das molcu- [6] WU,S.; ELLERBY,L.M.; COHAN,J.S.;
las. Ao mesmo tempo, a reduo do nmero DUNN,B.;VALENTINE,J.S.;ZINK,J.I,
de ligaes quebradas (Fig.3) uma indica- Chem. Mater., 1993, v.5, pp.115.
o do prosseguimento das reaes de con- [7] HENCH,L.L.;WEST,J.K., Chem.
densao entre grupos silanol (-SiOH) mes- Rev., 1990, v.90, pp.33.
mo aps a gelao. Tais reaes aumentam [8] HENCH, L.L.; VASCONCELOS, W.L.
a densidade de ligaes cruzadas no gel, Sol-Gel Silica Science, Annual Review of
levando a um enrijecimento da rede inorg- Materials Science, v.20, 1990, 269-298.
nica. [9] CHITTUR, K. K., FTIR and Protein
Informaes obtidas via espectroscopia Structure at Interfaces, Chemical and Ma-
de infravermelho, como as discutidas nas terials Engineering Department, Universi-
Fig.2 e Fig.3, so teis na definio do ty of Alabama in Huntsville, AL 35899;
estgio timo de consolidao dos gis para http://eb-p5.eb.uah.edu/~kchittur/
impregnao de macromolculas (proces- Figura 4. Espectros de bmreview, 11-ago-1998.
samento Mtodo 1). Tal estgio timo deve infravermelho de albumina, gel [10] MOSS, D., NABEDRYK, E., BRE-
incluir uma srie de caractersticas estrutu- de slica e gel de slica incorpo- TON, J.; MANTELE, W., Eur. J. Biochem.,
rais que possibilite a penetrao e fixao rado com albumina v.187, pp.1990, 565-572.

18 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


AGREVO

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 19


DOENA DE CHAGAS Edcio Cunha Neto
Pesquisador do Instituto do Corao (InCor)
Faculdade de Medicina da USP
SADE Ganhador do Prmio Roche (1994) e Prmio Santista Juventude
(1998) por seu trabalho na Imunologia da Doena de Chagas
edecunha@usp.br

Novos conhecimentos na patognese da Doena de Chagas

doena de Chagas, causa- representar, especialmente nas grandes


da pelo protozorio Trypa- cidades, a via mais importante no surgi-
nosoma cruzi, afeta de 16 mento de novos casos da doena de
a 18 milhes de pessoas no Chagas.
continente americano. Da-
dos da Organizao Mundial de Sade Acometimento cardaco na
revelam que cerca de 90 milhes de Doena de Chagas
pessoas esto expostas ao risco de in-
feco. Em decorrncia de migraes A causa principal de morbidade e
populacionais, a doena de Chagas, mortalidade na doena de Chagas o
classicamente considerada uma enfer- acometimento cardaco, que ocorre de
midade rural, passou a atingir centros 5 a 30 anos aps a infeco primria em
urbanos, estimando-se que, aproxima- cerca de 30% dos indivduos infectados
damente, 300.000 indivduos infectados pelo T. cruzi. Na cardiopatia chagsica
residam hoje em So Paulo e mais de crnica (CCC), ocorre uma inflamao e
200.000, no Rio de Janeiro. destruio progressiva do tecido card-
A despeito de a doena de Chagas aco, levando a alteraes da conduo
ter sido descoberta e seu ciclo elucida- dos impulsos eltricos no corao e
do h mais de oito dcadas, vrios arritmias. Paralelamente, ocorre um pro-
aspectos relacionados com o seu con- gressivo afinamento do msculo card-
trole ainda se apresentam desafiadores. aco, levando dilatao das cavidades
Os quimioterpicos anti-T. cruzi atual- do corao, tendo como conseqncia
mente disponveis apresentam baixa a incapacidade de bombear adequada-
eficcia e alta toxicidade, especialmente mente o sangue para o organismo, um
na fase crnica da doena de Chagas. O quadro chamado de insuficincia card-
conhecimento dos aspectos imunolgi- aca congestiva. Dessa forma, a CCC
cos e inflamatrios que levam ao desen- freqentemente tem um curso fatal,
volvimento das diferentes formas clni- uma vez que o tratamento apenas
cas e dos mecanismos responsveis sintomtico e a possibilidade de realiza-
pelas formas graves, como a cardiopatia o de transplantes cardacos bem
chagsica crnica, poderia permitir um menor que a demanda. Existem cerca
tratamento eficaz por meio da modula- de 2 milhes de pacientes acometidos
o desses mecanismos. de CCC em nosso pas. A CCC respon-
A via mais importante de transmis- svel por, aproximadamente, 15% dos
so de T. cruzi para humanos a casos de pacientes atendidos por insu-
vetorial, pelas fezes de insetos triatom- ficincia cardaca congestiva, em hospi-
neos (barbeiros) infectados. Graas a tais do Estado de So Paulo. Um grupo
programas de Sade Pblica, a trans- menor dos pacientes infectados por T.
misso vetorial est sendo controlada cruzi (cerca de 5% a 8%) desenvolve
em diversos pases da Amrica Latina, alteraes no tubo digestivo (os chama-
como o caso do Brasil. Em funo das dos megaesfago e megaclon), apa-
grandes correntes migratrias citadas rentemente por destruio dos neurni-
acima, a transfuso sangnea passou a os que controlam sua motilidade; esses
problemas digestivos dificilmente le- pelo T. cruzi de forma anloga ao infectados reconhecem a miosina card-
vam ao bito. J no acometimento car- corao 7, sem apresentarem sinais aca, a protena mais abundante do cora-
daco, que tratado apenas sintomati- de destruio ou dano funcional. o (Resultados revisados na ref. 8).
camente com sucesso varivel, o paci- Em conjunto, esses dados sugerem Para verificar a validade dos resultados
ente em geral vem a falecer em decor- que a simples presena do T. cruzi na doena humana, nosso grupo estu-
rncia de complicaes irreversveis da no suficiente para a induo da dou anticorpos anti-miosina cardaca
doena. A CCC a indicao mais miocardite difusa e da destruio no soro de pacientes CCC e IND. Anti-
comum para o implante de marca-pas- do tecido cardaco. corpos anti-miosina cardaca purifica-
sos cardacos artificiais em nosso pas. H algumas dcadas, foi postu- dos por afinidade a partir de soros de
Nos pacientes com insuficincia carda- lada a hiptese auto-imune da pato- pacientes CCC reconheceram especifi-
ca refratria, o nico caminho o trans- gnese da CCC, que procurava ex- camente um antgeno de T. cruzi em
plante cardaco, um procedimento dis- plicar a agresso ao tecido cardaco um imunoblot com protenas dos pa-
pendioso e inaccessvel para a grande na CCC na ausncia do T. cruzi in rasitas, apresentando-se como duas
maioria dos pacientes. Estudos com situ como um fenmeno secund- bandas de 140 e 116 kDa 9. Identificou-
animais experimentalmente infectados rio a uma resposta imunolgica se esse antgeno como a protena re-
indicaram que o tratamento com drogas contra algum antgeno do T. cruzi, combinante B13 de T. cruzi 10. Anticor-
anti-T. cruzi no parece evitar a pro- que apresentasse semelhanas anti- pos de reao cruzada estavam presen-
gresso da cardiopatia 1. gnicas, ou mimetismo molecular, tes em 100% dos soros de CCC, mas
com um componente cardaco. A somente 14% dos soros IND os apresen-
Mecanismos de tavam 9. Uma vez que so os
destruio do corao linfcitos T e no os anticor-
pos os principais envolvidos
Os mecanismos que le- na destruio ao corao, tes-
vam ao desenvolvimento da tamos clones de linfcitos T
CCC ainda so assunto de obtidos por clonagem in vitro
intenso debate. So ainda e expandidos a partir de um
desconhecidos os fatores de fragmento de bipsia do co-
suscetibilidade que levam rao de um paciente porta-
apenas 30% dos indivduos a dor de CCC. Foram identifica-
desenvolverem a CCC aps dos clones de linfcitos T
a infeco por T. cruzi, en- CD4+ obtidos de bipsia en-
quanto que os restantes 70% domiocrdica de portador de
no apresentam problemas CCC que reconheciam de for-
cardacos. A principal carac- ma cruzada a miosina carda-
terstica do tecido cardaco ca (a principal protena do
na CCC uma miocardite corao) e a protena B13 de
difusa, incluindo a destrui- T. cruzi 11. Curiosamente, ne-
o das fibras cardacas e nhum clone de clula T rea-
substituio por fibrose cica- giu a qualquer outro antge-
tricial, associada a um considervel in- esse mecanismo - reagir com um no de T. cruzi, o que poderia indicar
filtrado inflamatrio difuso, composto antgeno semelhante, porm distin- que, pelo menos nas reas estudadas, o
por linfcitos T e macrfagos. Essas to daquele que gerou a resposta desencadeador do infiltrado inflamat-
clulas inflamatrias tm sido conside- imune - chama-se reao cruzada rio era o reconhecimento cruzado da
radas como as efetivas destruidoras do imunolgica. Tanto as respostas imu- miosina cardaca e no a presena do T.
tecido cardaco, na aparente ausncia nes ao T. cruzi quanto a auto-imu- cruzi 11. Estudamos tambm a produo
do T. cruzi. J no corao de pacientes nidade a componentes cardacos j de citocinas (mediadores solveis se-
da forma indeterminada (IND), sem foram responsabilizadas como de- cretados por linfcitos modular infla-
sintomas cardacos, identifica-se uma sencadeadores do infiltrado infla- mao) por linfcitos T presentes no
inflamao bem menos intensa, chama- matrio e da destruio tecidual na corao de pacientes CCC. Quando sub-
da miocardite focal 2, que pode estar CCC 8. metidos a estmulo com a fitohemaglu-
associada com restos parcialmente des- Informaes obtidas com mo- tinina, potente ativador de linfcitos,
trudos do parasita 3(Higuchi et al. Am. delos animais freqentemente apon- essas clulas produzem quantidades sig-
J. Trop. Med. Hyg. 1997; 56: 485). Utili- tam para uma direo que pode ser nificativas de IFN- e TNF-, (citocinas
zando-se tcnicas ultra-sensveis, como confirmada por estudos com doen- inflamatrias, do tipo T1) mas no IL-4
o PCR 4 e a imuno-histoqumica 5, en- tes. Linfcitos T CD4+, ou auxilia- (citocina anti-inflamatria, do tipo T2)
contram-se indcios da presena do T. dores, de camundongos cronica- 12
. Em conjunto, esses dados indicam a
cruzi no corao de pacientes com mente infectados com T. cruzi po- presena, no infiltrado inflamtorio do
CCC; entretanto, tais indcios tambm dem transferir a inflamao carda- corao de cardiopatas chagsicos, de
so encontrados no corao de chag- ca para camundongos no-infecta- linfcitos T reagindo cruzadamente com
sicos da forma indeterminada, sem alte- dos. Tambm foi observado que componentes do corao e capazes de
raes cardacas 6. Alm disso, outros tanto anticorpos do soro quanto produzir citocinas inflamatrias, capa-
rgos, como os rins, so parasitados linfcitos T CD4+ de camundongos zes de estabelecer uma inflamao do

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 21


tipo hipersensibilidade tardia, justa- capazes de migrar para o corao. de curar a infeco crnica pelo para-
mente a observada na CCC. Entretanto, a identificao de linfci- sita.
Aps a definio das caractersticas tos T anti-B13 capazes de produzir Por outro lado, a definio do
principais dos linfcitos T presentes no citocinas tipo T1 tanto em pacientes auto-antgeno cardaco relevante para
corao de cardiopatas chagsicos, CCC como em IND, que no apresen- a patognese auto-imune da cardiopa-
possvel comparar tais caractersticas tam destruio do tecido cardaco, tia chagsica crnica o primeiro
em linfcitos do sangue perifrico de indica que a sua presena no passo para, no futuro, conceber um
pacientes CCC e IND, um material mais suficiente para causar inflamao e tratamento por supresso antgeno-
facilmente disponvel que bipsias car- destruio no corao. Assim, deve especfica da resposta imune dirigida
dacas. Embora os linfcitos perifricos haver um ponto-chave, um fen- contra esse auto-antgeno, como j
no tenham apresentado resposta con- meno imunolgico adicional, ocor- descrito na uvete auto-imune, diabe-
tra a miosina cardaca, a imunizao in rendo apenas em pacientes CCC, que tes mellitus insulino-depedente, escle-
vitro de linfcitos com a protena B13 leve ao acmulo e ativao de tais rose mltipla e na artrite reumatide 16.
leva gerao de clones de linfcitos T clulas no miocrdio levando leso. Nessas doenas, observou-se que a
com reao cruzada com a miosina 13 Estamos investigando a hiptese de administrao oral do auto-antgeno
.Isso sugere que, ao longo da infeco que a gerao de um infiltrado infla- relevante gerou diminuio dos nveis
por T. cruzi, a sensibilizao pela prote- matrio destrutivo no miocrdio pode de citocinas inflamatrias do tipo T1
na B13 in vivo possa levar quebra da somente ocorrer no subgrupo de no rgo afetado, com conseqente
tolerncia para a miosina cardaca. A indivduos infectados por T. cruzi, reduo de inflamao e destruio
resposta de linfcitos T do sangue peri- cujos linfcitos T anti-B13 apresen- tecidual. Seria possvel, ento, elimi-
frico protena B13 foi muito seme- tem reao cruzada com a miosina nar seletivamente a resposta auto-imu-
lhante entre pacientes CCC e IND. Os cardaca. ne prejudicial sem interferir na respos-
linfcitos T reconhecem B13 de forma ta de defesa contra o parasita.
restrita ao HLA, isto , apenas indivdu- Novos tratamentos: drogas
os com certas caractersticas genticas inteligentes e Referncias bibliogrficas
(portadores de determinados alelos dos imunomodulao
genes da regio HLA) podem apresen- 1. Teixeira, A.R.L. et al. J. Infect. Dis.
tar resposta, embora estas caractersti- Aparentemente, no existe imu- 162:1420, 1990
cas estejam presentes em at 85% da nidade estril ao T. cruzi, isto , o 2. Higuchi, M.L. et al. Clin. Cardiol.
populao. Entre os chagsicos, a res- parasita persiste no organismo do 1987; 10:665
posta de citocinas a B13 caracterizada paciente em baixos nmeros, ao lon- 3. Higuchi, M.L. et al. Am. J. Trop.
por grande produo de Interferon- go da fase crnica da doena, quer Med. Hyg. 1997; 56: 485
gama, uma citocina pr-inflamatria, do entre cardiopatas quer entre indeter- 4. Jones, E. et al. Am J. Trop. Med.
tipo T1, e produo quase nula de minados. Isso apoiado pelo fato de Hyg. 1993; 48:348
Interleucina 4, uma citocina anti-infla- que estados de imunossupresso (por 5. Higuchi, M.L. et al. Cardiovasc.
matria, do tipo T2. A resposta de exemplo, drogas imunossupressoras Pathol. 1993; 2:101
citocinas a estmulo com fitoemaglutini- para transplante de rgos, imuno- 6. Olivares-Villagomez, D. et al.
na foi semelhante ao da B13 e oposta deficincias) em chagsicos crnicos Parasite Immunol 1998; 20:447
encontrada em controles normais. Esses invariavelmente provocam reativa- 7. Chocair, P. et al. Rev Soc Bras Med
resultados indicaram a existncia, nos o do parasitismo. O tratamento Tropical 1985;18:43
pacientes chagsicos, de um desvio sis- com as drogas disponveis contra o T. 8. Kalil, J. & Cunha-Neto, E. Parasitol.
tmico e generalizado para a produo cruzi no leva eliminao completa Today 1996; 12:396
de citocinas do tipo T1 (IFN- e proinfla- do parasita de pacientes adultos cro- 9. Cunha-Neto, E. et al. Proc. Natl.
matrias), com supresso de produo nicamente infectados; assim, a cura Acad. Sci. USA 1995; 92:3541
das citocinas do perfil T2 (IL-4) 14. Esse parasitolgica completa difcil. Apa- 10. Gruber A. & Zingales B. Exp
desvio do perfil das citocinas provavel- rentemente, o parasita persiste no Parasitol 1993;76:1
mente est relacionado com a capacida- hospedeiro na forma intracelular, j 11. Cunha-Neto, E. et al. J. Clin.
de do T. cruzi de induzir a produo da que estudos mostraram que clulas Invest. 1996; 98:1709
Interleucina 12 (IL-12) por moncitos e intensamente parasitadas por T. cru- 12. Cunha-Neto, E. et al. Braz. J. Med.
macrfagos, que, reconhecidamente, es- zi no so danificadas pelo infiltrado Biol. Res. 1998; 31:133-137
timula a produo de citocinas do tipo inflamatrio durante a infeco 3,15. 13. Abel, L.C.J. et al. Braz. J. Med.
T1 e suprime o perfil T2. Os dados parecem indicar que as Biol. Res. 1997; 30: 1305
Em suma, nossos resultados, ilustra- formas intracelulares do parasita de- 14. Cunha-Neto, E. et al. .Mem Inst.
dos esquematicamente na Figura 1, re- senvolveram mecanismos de escape, Oswaldo Cruz 1997; 92 (Suppl I):
foram a possibilidade de que a infec- ou pelo menos de retardo, da destrui- 40-41
o pelo T. cruzi estimule a formao o das clulas infectadas pelo siste- 15. Vianna, G. Mem. Instituto Oswaldo
de linfcitos T potencialmente patog- ma imune, como acontece com al- Cruz 1911; 3:276
nicos, como postulado para outros agen- guns tipos de virus 15,16. A identifica- 16. Fruh, K et al. Nature 1995; 375:415
tes infecciosos em doenas autoimunes. o desses possveis mecanismos de 17. Meinl, E et al. Immunol. Today
A infeco gera linfcitos T maturos, escape poderia fornecer importantes 1998; 19:474
que reconhecem a protena B13 e pro- alvos para o desenvolvimento de 18. Weiner, HL. Annu.Rev.Med. 1997;
duzem IFN-, que so potencialmente drogas anti-T. cruzi efetivas, capazes 48:341

22 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


NOVARTIS

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 23


AGRICULTURA
VESPAS
A importncia das vespas como agentes no controle biolgico de pragas

Prof Fbio Prezoto


Departamento de Zoologia.
Universidade Federal de Juiz de Fora
fprezoto@icb.ufjf.br

Fotos cedidas pelos autores

s insetos so o mais nu- predadora de inmeras pragas agr-


meroso grupo de animais colas e, consequentemente, agentes
sobre a face da Terra e, valiosos no controle biolgico destas.
devido a sua influncia Mesmo em baixos nveis populacio-
nas mais diferentes ativi- nais, os predadores contribuem na
dades humanas, tm sido objeto de diminuio da quantidade de pragas,
estudo h muitos anos. Com o passar reduzindo os picos de infestao quan-
do tempo, a relao dos insetos com do muitos inimigos naturais de hos-
o homem levou-os a serem classifi- pedeiros especficos so ineficientes
cados, do ponto de vista econmico, (DeBACH, 1951).
em insetos teis ou nocivos. Dentre as vespas sociais, o gnero
Entre os insetos, a ordem Hyme- Polistes se destaca como um impor-
noptera uma das que mais chama tante agente de controle biolgico,
a ateno, com cerca de 103 mil devido principalmente facilidade
espcies conhecidas, compreenden- de manipulao e translocao de
do insetos como formigas (15 mil suas colnias para abrigos artificiais.
espcies), abelhas (20 mil espcies) Na Carolina do Norte, RABB & LAW-
e vespas (cerca de 68 mil espcies) SON (1957), verificaram que a intro-
(GILLOTT, 1995). duo de colnias de vespas desse
As vespas ou marimbondos so gnero na cultura do fumo reduziu
insetos abundantes, que apresentam em 68% o dano causado pela lagarta
um alto grau de sinantropismo, ou Protoparce sexta (Johan). Segundo
seja, de associao com o homem. MORIMOTO (1961), uma nica col-
muito comum encontrar ninhos de nia de Polistes pode predar 2.000
vespas construdos ao redor de edi- lagartas de Pieris rapae L., praga da
ficaes humanas. Embora todo o couve, durante seu ciclo de desenvol-
conhecimento popular sobre as ves- vimento.
pas gire em torno de suas dolorosas No Brasil, estudos recentes feitos
ferroadas e do seu grande nmero por PREZOTO et al. (1994) e GIAN-
de indivduos, que saem do ninho NOTTI et al. (1995) trazem um levan-
para atacar, cabe dizer que a ao tamento detalhado de presas captu-
nociva desses insetos extrema- radas pelas vespas Polistes simillimus
mente irrelevante quando levamos e P. lanio lanio, respectivamente,
em conta a contribuio deles tanto sugerindo a utilizao das mesmas no
no aspecto ecolgico quanto no eco- controle biolgico de pragas agrco-
nmico. las, uma vez que, em ambas as esp-
A grande maioria das vespas cies, a maioria das presas capturadas

24 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


correspondeu a lagartas de Lepidop- tura do milho (5 quadras experimen-
tera que estavam presentes nas plan- to) em relao ocorrncia natural
taes prximas aos ninhos estuda- das mesmas em uma cultura em con-
dos. O Japo e os E.U.A. possuem dies normais (2 quadras-controle).
programas de manejo de colnias de O experimento seguiu a mesma me-
vespas desse gnero para abrigos todologia da primeira etapa, com
artificiais instalados ao redor de plan- exceo da infestao com lagartas
taes, com a finalidade de controle de S. frugiperda. Pela amostragem
das pragas dessas culturas. semanal de 5 plantas em cada uma
A primeira pesquisa brasileira en- das quadras experimento e controle,
volvendo a utilizao de uma espcie estimou-se a incidncia de pragas nas
de vespa social do gnero Polistes no duas reas e, por meio da coleta
controle biolgico de pragas agrco- semanal de presas capturadas pelas
las, foi realizado por PREZOTO vespas (5 horas por semana), identi-
(1997), no Municpio de Piracicaba, ficou-se quais as pragas da cultura do
SP. Nesta pesquisa, o autor procurou milho estavam sendo predadas (Ta-
avaliar a ao predatria da vespa bela I).
social Polistes simillimus sobre as Os resultados obtidos nas 12 cole-
pragas do milho (Zea mays L.) em tas realizadas durante o ciclo da cul-
campo, verificando os efeitos dessa tura do milho (novembro de 1995 a
associao na produtividade da la- maro de 1996) revelaram que a
voura e na incidncia de pragas. predao de pragas exercida pelas 20
O trabalho de PREZOTO (1997) colnias de P. simillimus na rea
foi realizado em duas etapas: a pri- experimental, contribuiu para uma Figura 1: Vespa forrageadora de
meira durante o perodo de novem- reduo de 77,16% na incidncia de Polistes simillimus trazendo pedao
de presa para a colnia (na Seta).
bro de 1994 a maro de 1995 e a S. frugiperda e 80% na populao de
segunda de novembro de 1995 a Helicoperva zea (lagarta-da-espiga)
marco de 1996. A primeira etapa do em relao rea de controle. dantes da cultura e diminuindo o gasto
trabalho avaliou o efeito da ao Esses resultados confirmam a ex- com inseticidas, que, muitas vezes,
predatria da vespa P. simillimus na celente atuao dessa espcie de ves- no controlam com eficincia a esp-
produtividade de uma lavoura de pa no controle biolgico das pragas e cie danosa, alm de contribuir para a
milho infestada com a lagarta-do- significam uma economia para o agri- preservao do meio ambiente pela
cartucho (Spodoptera frugiperda). cultor, uma vez que acabam predan- produo de produtos sem agrotxi-
Para tanto, infestou-se uma lavoura do com sucesso as pragas mais abun- cos.
experimental de milho de 500 m2 (5 As vespas de P.simillimus encon-
quadras de 10 x 10 metros, distantes traram e predaram de maneira eficien-
8 metros entre si) na sua fase inicial Figura 2: Distribuio dos abrigos te as lagartas de S frugiperda, mesmo
com lagartas de primeiro nstar da artificiais de madeira com colnias as escondidas dentro de partes da
referida lagarta. Aps a completa de Polistes simillimus ao redor de planta, onde os produtos qumicos
infestao da lavoura, foram translo- uma quadra de milho experimental. no atuam. A lagarta-do-cartucho a
cadas 20 colnias de P. simillimus, praga mais importante e disseminada
em estgio inicial, de localidades
prximas para abrigos artificiais de
madeira, distribudos um em cada
lado das 5 quadras -experimento.
Tambm foram mantidas duas qua-
dras-controles (sem infestao e sem
vespas), distantes cerca de 750 me-
tros da rea experimental. Ao final do
ciclo da cultura, em maro de 1995, a
comparao da produo mdia das
quadras-experimento e quadras-con-
trole revelou que, devido ao das
vespas, a produtividade das quadras-
experimento foi 15,94% maior do
que a produo das quadras controle
para o peso bruto de espigas e 13,07%
maior em relao ao peso de gros.
A segunda etapa do trabalho quan-
tificou a ao predatria das vespas
P. simillimus sobre as pragas da cul-
na cultura de milho no pas, GIANNOTTI, E.; PREZOTO,
no somente pelos danos que F.; MACHADO, V.L.L. Fora-
causa, mas tambm pela difi- ging activity of Polistes lanio
culdade de control-la (CRUZ, lanio (Fabr.) (Hymenoptera,
1986). Vespidae). An. Soc. Ento-
Dessa forma, pode-se con- mol. Brasil, 24: 455-63, 1995.
cluir que o manejo de colnias GILLOTT, C. Entomology.
de vespas sociais para contro- New York, Plenium Press,
le de pragas de culturas agr- 1995. 798p.
colas muito vivel, no ape- MORIMOTO, R. Polistes
nas pelos bons resultados ob- wasps as natural enemies of
tidos, mas tambm pela facili- agricultural and forest pests.
dade e boa aceitao dessas III. (Studies on the social Hy-
vespas ao manejo e transloca- menoptera of Japan. XII). Sci.
o de suas colnias. As ves- Bull. Fac. Agric. Kyushu
pas sociais so relativamente Univ., 18: 243-52, 1961.
abundantes no ambiente e, PREZOTO, F. Ao de Po-
uma vez introduzidas, as col- listes (Aphanilopterus) si-
nias crescem, multiplicam-se millimus Zikn, 1951 (Hy-
e disseminam-se pela regio, menoptera, Vespidae) no
favorecendo sua manuteno combate s pragas de Zea
e continuada eficincia no mays L. Dissertao de
controle biolgico das pragas Mestrado apresentada ao Ins-
do local. tituto de Cincias Biolgicas/
Apesar da grande impor- UNESP. Rio Claro, 1997, 67p.
tncia ecolgica das vespas PREZOTO, F.; GIANNOTTI,
no ambiente, muitas espcies E.; MACHADO, V.L.L. Ativi-
esto ameaadas de extino dade forrageadora e material
devido, principalmente, fal- coletado pela vespa social
ta de conscincia da maior Polistes simillimus Zikn,
parte da populao que, ao encontrar 1951 (Hymenoptera, Vespidae). In-
um ninho de vespa, o destri mesmo secta, 3(1): 11-19, 1994.
sem motivo, alm do uso indiscrimina- Figura 3: Vista de uma colnia da RABB, R.L. & LAWSON, F.R. Some
do de inseticidas, que levam morte vespa social Polistes simillimus em factors influencing the predation of
vrias colnias no ambiente. um abrigo artificial de madeira. Polistes wasps on tobacco hornworm.
Ao contrrio da abelha, as tcnicas J. Econ. Ent., 50: 778-84, 1957.
para o manejo e a criao das vespas
ainda esto no incio, por isso, quando
um vespeiro destrudo, nada pode
TABELA I. Quantidade de presas capturadas por 5 colnias de Polistes simillimus
reconstru-lo. durante 5 horas semanais (60 horas) na rea experimental de uma cultura de milho.
Por se tratar de um animal silvestre,
protegido por lei, quem for pego cap-
PRESAS CAPTURADAS NMERO DE SEMANAS TOTAL %
turando ou destruindo ninhos de ves-
pas est sujeito s penas da lei.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
LEPIDOPTERA
Spodoptera frugiperda 4 - 1 1 2 1 3 2 1 1 2 3 23,07
Agradecimentos
Spodoptera sp. - - - - - - - 1 - - - - 1,09
O autor agradece a ateno da Heliothis virescens 1 3 - 2 3 1 2 - 1 - 1 - 15,38
Prof Lgia Vieira Lage, pela colabora- Helicoverpa zea - 1 2 - - - - 1 1 1 2 2 10,98
o na reviso do artigo. Mocis latipes - - 1 - - - - - - - - - 1,09
Trichoplusia ni - - 2 3 - - - - - 2 1 - 8,79
Referncias Anticarsia gemmatalis - - - - - 2 - 3 2 2 3 1 14,28
Nymphalidae - - - - - 2 - - - - - - 2,19
CRUZ, I. Manejo de pragas do milho Pieridae - - - - - - 1 - - - - - 1,09
no Brasil. In: EMBRAPA. Curso inter- LEPIDOPTERA
nacional de manejo de pragas. Sete No identificados - - 1 - - - - 3 2 2 3 - 12,08
Lagoas: EMBRAPA/CNPMS, 1986. 22p. Ninfa de HEMIPTERA - - - - - - - - - 1 - - 1,09
DeBACH, P. The necessity for na INSETOS ADULTOS
ecological approach to pest control on No identificados 1 - - 1 1 - - - - - - - 3,29
citrus in California. J. Econ. Ento- Material no identificado - - - 1 - - 2 1 - - 1 - 5,58
mol., 44: 443-7, 1951. TOTAL 6 4 7 8 6 6 8 11 7 9 13 6 100,0

26 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


SOJA ROUNDUP
Biossegurana e
BIOSSEGURANA
Vacinas da Dengue
Critrios de Biossegurana na anlise de um candidato Vacinal

dengue, hoje a mais im- (OMS) considera o controle e a pre-


portante doena viral veno da dengue uma das suas pri-
transmitida por artrop- oridades e, para atingir esse objetivo,
dos, resulta da infeco adotou, em 1995, um programa estra-
por um dos sorotipos do tgico mundial. Atualmente, o con-
vrus do dengue. Esses vrus, deno- trole dessa doena baseia-se primari-
minados dengue tipos 1, 2, 3 e 4, so amente no controle do vetor, j que
transmitidos a um hospedeiro sus- no existe ainda uma vacina licencia-
ceptvel atravs da picada da fmea da para uso humano, apesar de inten-
do mosquito Aedes aegypti previa- sa pesquisa nesse campo nos ltimos
mente infectada. O quadro clnico 30 anos.
dessa doena varia desde apresenta-
es assintomticas at quadros gra- Vacinas para a dengue
ves caracterizados por hemorragia e
choque circulatrio e associados a As primeiras tentativas de produ-
alta letalidade, denominados febre o de vacinas para os vrus da den-
hemorrgica do dengue (FHD) e sn- gue iniciaram-se alguns anos aps
drome do choque do dengue (SCD). esses vrus terem sido isolados. Inici-
Essas formas da doena esto, na almente, candidatos vacinais foram
maior parte das vezes, relacionadas atenuados pela passagem seriada em
com a infeco secundria causada crebros de camundongos e se mos-
por um sorotipo do vrus da dengue traram protetores contra os seus pro-
diferente daquele que causou a infec- ttipos selvagens. Entretanto, prote-
o primria. FHD e SCD so preva- o apenas contra um tipo de soroti-
lentes em mais de 100 pases e so po no suficiente devido hiptese
uma ameaa sade de mais de 2,5 de que a infeco sequencial por um
bilhes de pessoas, habitantes das sorotipo diferente leve a uma doena
regies tropicais e subtropicais do mais grave. Desse modo, a vacina
globo terrestre. A incidncia anual da para o dengue deve ser tetravalente,
dengue estimada em torno de deze- isto , proteger contra os 4 sorotipos.
nas de milhes, com um nmero Assim, pesquisadores comearam a
aproximado de 500.000 hospitaliza- tentar produzir vacinas atenuadas para
es de casos de FHD/SCD. Em m- o dengue, em particular grupos de
dia, o ndice de mortalidade desses vrias instituies americanas e da
casos de 5%, com, aproximadamen- Mahidol University, na Tailndia. As
Benedito Antnio Lopes da Fonseca
te, 24.000 bitos por ano. No Brasil, cepas 45AZ5 PDK-27 (dengue-1),
Departamento de Clnica Mdica da Faculdade de somente neste ano, j foram notifica- DEN-2 PR-159-S1 (dengue-2),
Medicina de Ribeiro Preto - Universidade de So dos 213.932 casos de dengue, sendo CH53489 clone 24/28 (dengue-3) e
Paulo. Mdico formado pela Faculdade de Medicina
da Universidade de So Paulo e Mestrado e
que, at a 18a semana epidemiolgi- 341750 Carib (dengue-4) foram de-
Doutorado pela Yale University (USA). ca, 50 casos foram caracterizados senvolvidas pelos grupos americanos
como FHD/SCD e resultaram em 8 enquanto que as cepas DEN-1 PDK-
bitos. 13, DEN-2 PDK-53, DEN-3 PGMK-30/
A Organizao Mundial da Sade F2 e DEN-4 PDK-48 foram desenvol-

28 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


vidas na Tailndia, sob superviso da fia lquida (HPLC). Os resultados a mundongos. Outros candidatos vaci-
OMS. Vrios ensaios clnicos foram tambm foram desapontadores e, asso- nais preparados por engenharia ge-
feitos com esses candidatos vacinais, ciada ao custo de produo, essa estra- ntica so as vacinas de subunidades
quando foram conseguidos alguns tgia tem sido abandonada. e vrus recombinantes que expres-
resultados que garantiam a possibili- Nos ltimos anos, algum progresso sem protenas dos vrus da dengue. A
dade dessas vacinas serem usadas, no desenvolvimento de vacinas tem produo de vacinas de subunidades
desde que os problemas de potncia sido alcanado por meio do uso da em baculovrus tem tido resultados
e imunogenicidade fossem resolvi- tecnologia do DNA recombinante. As conflitantes pois alguns grupos tm
dos. Em 1993, foi firmado um acordo estratgias usadas foram as de produ- encontrado proteo total em camun-
comercial entre a Mahidol University o de peptdeos sintticos, vacinas de dongos, enquanto outros encontram
e a Pasteur Merieux Serums and subunidades, vacinas de vrus recombi- apenas proteo parcial. Com vrus
Vaccines Company para optimizar a nantes, vacinas derivadas de clones recombinantes, principalmente com
produo dessas vacinas para o den- infecciosos de cDNA derivados de can- o vrus da vaccnia, esses resultados
gue. No incio deste ano, foi apresen- didatos vacinais e vacinas de DNA. no tm sido diferentes, apesar des-
tado, no First Annual Conference on Deposita-se muita esperana nos dois ses vrus recombinantes possurem a
Vaccine Research em Washington, ltimos mtodos. Um clone infeccioso reputao de induzirem melhor res-
D.C., o resultado dos testes em vo- de cDNA preparado a partir do candi- posta imune do que os outros vetores
luntrios humanos recombinantes, tais como
com esta vacina. A bactrias, por exemplo, a
concluso do traba- Salmonella typhimurium.
lho foi que, apesar
da maioria dos indi- Biossegurana e vaci-
viduos testados te- nas
rem apresentado
soroconverso, in- Desde que a vacina
teraes entre os so- para a dengue seja a nica
rotipos virais resul- chance de realmente con-
tando em viremia trolar essa doena, inten-
seletiva pelo den- sas pesquisas nessa rea
gue-3, podem afe- podero resultar na pro-
tar a infectividade e duo de candidatos vaci-
imunogenicidade nais. As normas para libe-
da vacina tetrava- rao de uma vacina deve
lente. cobrir todas as fases de
A produo de produo de uma vacina,
vacinas de vrus ina- isto , a fase de desenvol-
tivados tem sido vimento, de ensaios clni-
pouco explorada na produo de dato vacinal DEN-2, PDK-53 est sendo cos, registro nos orgos competentes
vacinas para o dengue devido ca- usado para construir vrus quimricos e vigilncia ps-liberao. Antes da
racterstica de no apresentar grande por meio da insero dos genes da fase de investigao clnica, deve-se
imunogenicidade. Recentemente, Pu- cpside viral, da pr-membrana e do investir na segurana do laboratrio
tnak e colaboradores tem investido envelope dos vrus dengue-1, 3, e 4 na em que a pesquisa est sendo desen-
nesse mtodo de produo de candi- estrutura genmica do DEN-2 PDK-53. volvida a fim de se proteger as pesso-
datos vacinais atravs da passagem Essas vacinas vm sendo desenvolvi- as que esto envolvidas na pesquisa
desses vrus em clulas Vero (rim de das com sucesso por um grupo do e que o meio ambiente no seja
macaco verde africano) e FRhL-2 National Intitutes of Heallth (NIH) e afetado pelos produtos secundrios
(pulmo fetal de macaco Rhesus) tm-se mostrado imunognicas no resultantes dessa pesquisa. Para tan-
seguido por inativao em formalina modelo animal. Alm disso, clone in- to, as condies de segurana dos
a 0.05% e formalina seguida de radi- feccioso de cDNA do vrus da febre laboratrios devem ser otimizadas,
ao (7 mRads de fonte de cobalto). amarela pode ser usado para os mes- em especial com a manipulao dos
Entretanto, somente proteo parcial mos fins. As vacinas de DNA podem vrus e o descarte do material. A infra-
foi obtida com esta tcnica o que a representar uma soluo, pois elas po- estrutura de biotrio de extrema
coloca em segundo plano em relao dem ser usadas para imunizao contra importncia, pois se a pesquisa for
s demais, principalmente pelo fato um sorotipo especfico de dengue, sem realizada em reas endmicas para a
de ser muito caro produzir esse tipo o inconveniente de induzir a resposta dengue, existe a possibilidade de
de vacina e pela pouca imunogenici- imune exacerbada responsvel pelas contaminao dos animais usados em
dade. infeces graves do dengue. Kochel e pesquisa por mosquitos infectados
Outra estratgia usada na produ- colaboradores produziram um candi- ou da contaminao de mosquitos
o de candidatos vacinais refere-se dato vacinal para o dengue-2 e de- pelo candidato vacinal. Alm disso,
purificao de protenas nativas monstraram a presena de anticorpos necessrio certificar-se de que os ma-
dos vrus da dengue por cromatogra- neutralizantes para esse vrus em ca- teriais usados na produo das vaci-

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 29


nas sejam puros e seguros, e que, ao realizados no campo, com um gran- benefcio. As vacinas de vrus atenu-
mesmo tempo, no comprometam a de nmero de pessoas e devem in- ados multivalentes, como o caso da
potncia da vacina. Testes em ani- cluir populaes com caractersticas vacina para a dengue, podem apre-
mais, inclusive em primatas no-hu- epidemiolgicas bem estudadas. A sentar a replicao preferencial de um
manos, devem ser exaustivamente re- vigilncia ps-liberao deve ser im- sorotipo viral em detrimento dos ou-
alizados para garantir que a mesma plementada e documentada. Somen- tros. Alm disso, por serem atenua-
no txica, portanto segura, po- te assim, eficcia e segurana a longo das, e portanto, vacinas de vrus vi-
tente e eficaz para uso em humanos. prazo podem ser determinadas. Ape- vos, existe a possibilidade da reverso
Aps a avaliao da eficcia dessa nas com estudos a longo prazo que de um deles cepa virulenta, aumen-
vacina no laboratrio, os critrios de se poder concluir que o candidato tando a possibilidade de causar doen-
biossegurana devem ser aplicados vacinal no tumorognico ou no a clnica aps a inoculao da vacina.
na investigao clnica. ocorre integrao no genoma do hos- As vacinas de vrus quimricos funci-
A investigao clnica para valida- pedeiro. Nessa fase, por meio de onariam como vacinas de vrus atenu-
o da vacina como imunobiolgico estudos controlados, outros aspectos ados e, portanto, com os mesmos
geralmente se faz em trs fases: os importantes na discusso de critrios problemas mencionados anteriormen-
ensaios clnicos de fase I, II e III. Na de biossegurana podero ser avalia- te para essas vacinas. Adicionalmen-
fase I, o produto administrado para dos. Entre eles esto a capacidade do te, como ocorre a produo de um
um pequeno nmero de voluntrios e candidato vacinal infectar outras es- vrus previamente inexistente, no se
visa a determinar a atividade biolgi- pcies, incluindo os vetores da den- pode prever o impacto desste novo
ca do produto, sua potncia e a sua gue, de sobreviver na natureza, de ser vrus na natureza e o resultado das
segurana. Nesse caso, um candidato disseminado no meio-ambiente e, fi- suas infeces em seres humanos.
vacinal para a dengue dever induzir nalmente, do grau de segurana des- Desde que vacinas de DNA esto
a formao de anticorpos neutralizan- se candidato vacinal a longo prazo. sendo consideradas uma alternativa
tes e, para alcanar esse objetivo, o Dessa fase sairo os resultados que promissora para o desenvolvimento
candidato vacinal deve ser adminis- sero analisados em relao ao risco de vacinas, a maior preocupao a
trado em pequenas doses e ser isento da liberao de uma vacina para uso possibilidade de integrao desstes
ou com poucos efeitos colaterais. Ain- humano e o benefcio a ser alcana- DNAs no genoma celular. Estudos
da nessa fase, pode-se certificar de do. Como exemplo, os efeitos colate- sobre esse tema tm mostrado que a
que o candidato vacinal no persiste rais do vrus da vaccnia no foram injeo de 200 mL de DNA, o que
no organismo (latncia) e que pode desprezveis durante a campanha de corresponde a 3 x 1013 molculas de
ser administrado com segurana a erradicao da varola, porm a erra- DNA, representa uma freqncia de
imunossuprimidos e imunocompro- dicao dessa doena livrou a huma- integrao 10.000 vezes inferior a even-
metidos. Ensaios de fase II destinam- nidade de um dos seus maiores flage- to oncognico, o que um evento
se a confirmar os achados dos ensaios los. Do mesmo modo, as vacinas extremamente raro. Assim, se um can-
de fase I, em particular a eficcia do contra a poliomielite e o sarampo no didato vacinal apresentasse um efeito
produto em produzir a sua atividade so incuas, mas prestam um benef- adverso indesejado a cada 100.000
farmacolgica e fisiolgica. No caso cio imensurvel s pessoas vacina- vacinaes, este seria considerado um
das vacinas da dengue, essas devero das. Quanto persistncia na nature- alto ndice de efeitos adversos. Po-
induzir resposta imune que confira za, impossvel predizer o resultado rm, se analisarmos o fato de que j
proteo contra os quatro sorotipos da liberao de um candidato vacinal foram notificados mais de 200.000
de vrus da dengue semelhante no meio-ambiente. O vrus da vacc- casos de dengue este ano no Brasil e
resposta induzida pelos prprios agen- nia , at hoje, excretado por bfalos, que houve 50 casos de dengue he-
tes. Nessa fase, o vrus selvagem pode na ndia. Isso s ocorre porque o morrgico nesse perodo, resultando
ser administrado aos voluntrios que vrus da vaccnia tem a capacidade de em 8 bitos, o benefcio da vacinao
foram vacinados ou podem ser usa- infectar outras espcies que no aquela bvio. Desse modo, importante
dos voluntrios de rea endmica e visada para a vacinao. Desse modo, determinar os critrios de biossegu-
verifica-se a capacidade protetora da ser difcil ocorrer a liberao de um rana para que se possa avaliar um
vacina. Alguns efeitos colaterais mais vrus recombinante preparado a par- candidato vacinal na sua totalidade,
raros podem ficar aparentes nessa tir de um vrus da vaccnia para uso mas, claro, que os estudos a longo
fase. Devido ao maior nmero de vacinal. Por outro lado, se a especifi- prazo so aqueles que nos daro as
voluntrios usados, pode-se determi- cidade do candidato vacinal para a maiores informaes sobre a seguran-
nar, nessa fase, se a infeco pela espcie humana for alta e os efeitos a e o benefcio do uso desses imuno-
vacinao ocorre somente na popula- da infeco aguda pouco importan- biolgicos. Desse modo, na eventua-
o alvo, se o candidato vacinal tes, a persistncia na natureza pode lidade de se produzir uma vacina para
contagioso e se induz fenmenos imu- auxiliar na imunizao de suscept- dengue, esta dever passar por uma
nolgicos que possam ser associados veis bateria imensa de testes para que seja
ao desenvolvimento de doena auto- Assim, a avaliao de critrios de cogitada a sua aprovao para uso
imune. Se o candidato vacinal um biossegurana na liberao de um humano. Infelizmente, apesar dos es-
vrus recombinante, deve-se avaliar candidato vacinal complicada pela foros e da necessidade para controle
se no ocorreu mudana de especifi- necessidade de estudos a longo pra- dessa doena, vacinas para a dengue
cidade celular ou aumento da viruln- zo, porm um dos critrios mais im- no estaro disponveis para uso hu-
cia. Na fase III, os ensaios clnicos so portantes a avaliao de risco e mano em um futuro prximo.

30 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


CARGILL
Biossegurana e Simone H. C. Scholze
A autora analista de C&T do Minist-
rio da Cincia e Tecnologia, tem
mestrado em Direito pela UnB e
membro da CTNBio.

SOCIEDADE
Alimentos Transgnicos
O papel da CTNBio

intenso avano da pesquisa bio- Nacional, foi sancionada, em 1995, a Lei de la comercial, a soja roudup ready. Embora
tecnolgica provoca hoje uma Biossegurana e foi criada a Comisso se verifique um processo cada vez maior de
crescente mobilizao da socie- Tcnica Nacional de Biossegurana (CTN- conscientizao, muitas instituies ainda
dade e dos Poderes Pblicos Bio), instituio norteadora do desenvolvi- atuam com organismos transgnicos sem
quanto absoro dos seus resultados - mento da moderna biotecnologia no Bra- autorizao legal da CTNBio. A fiscalizao
reaes positivas com relao aos benefci- sil. Operacionalmente vinculada ao Minis- dessas atividades incumbncia dos rgos
os aportados pela biotecnologia e reaes trio da Cincia e Tecnologia, a CTNBio fiscalizadores do Ministrio da Agricultura,
negativas quanto aos riscos tecnolgicos. comeou suas atividades em junho de do Ministrio da Sade e do Ministrio do
Quando se trata de riscos tecnolgicos, 1996. composta por 36 membros, titula- Meio Ambiente, em suas respectivas reas de
no se est lidando apenas com a incerteza res e suplentes, especialistas de notrio competncia.
econmica ou cientfica e tecnolgica, mas saber cientfico, das reas humana, animal,
tambm com a incerteza tica e moral. vegetal e ambiental, representantes dos Procedimentos da CTNBio
primeira ordem de incertezas, a sociedade Ministrios da Cincia e Tecnologia, da
responde com o estabelecimento de regula- Sade, da Agricultura, do Meio Ambiente, A Comisso analisa, caso a caso, as
o tcnica mais estrita, por exemplo, no da Educao e das Relaes Exteriores, solicitaes que lhe so encaminhadas, ja-
campo da biossegurana, do uso de animais alm de representantes de rgo de defesa mais emitindo pareceres genricos sobre,
para pesquisa e da propriedade e comrcio do consumidor, de proteo sade do por exemplo, soja transgnica ou milho
de bens de alto contedo tecnolgico. Rela- trabalhador e do setor empresarial de transgnico em geral, mas, unicamente,
tivamente segunda categoria de incerte- biotecnologia. sobre determinada linhagem de soja modifi-
zas, alm do debate no campo da biossegu- Compete CTNBio estabelecer nor- cada para expressar determinadas caracters-
rana, verifica-se a legtima intensificao mas e regulamentos relativos s atividades ticas. Cabe ao solicitante o nus de demons-
do debate tico. O Brasil chega hoje exata- e projetos que envolvam construo, cul- trar a biossegurana do OGM, fornecendo
mente a essa era de transformaes cientfi- tivo, manipulao, uso, transporte, arma- todos os dados necessrios para a avaliao
cas e de debates ticos e legais. zenamento, comercializao, consumo, da CTNBio, podendo a Comisso exigir in-
A aprovao de um plantio em escala liberao e descarte relacionados a orga- formaes e testes adicionais. exigncia
comercial de uma linhagem transgnica nismos geneticamente modificados, visan- legal para realizao de experimentos com
comea com muitos anos de trabalho de do a proteger a vida e a sade do homem, OGMs que a instituio interessada disponha
laboratrio. Uma vez que uma planta poten- dos animais e das plantas, bem como o da autorizao especfica da CTNBio para a
cialmente til tenha sido desenvolvida e meio ambiente. A Comisso vem-se reu- realizao do experimento, de Certificado de
testada em laboratrio, um programa de nindo regularmente desde a sua criao Qualidade em Biossegurana, ambos publi-
testes de campo essencial para avaliar seu para certificar a segurana de laboratrios cados no Dirio Oficial da Unio, e que
desempenho, antes da comercializao. A e experimentos relativos liberao de constitua Comisso Interna de Biosseguran-
biossegurana visa precisamente ao estabe- organismos geneticamente modificados no a de acordo com os critrios das Instrues
lecimento dos mecanismos de proteo para meio ambiente e para julgar pedidos de Normativas.
o uso da biotecnologia moderna, tanto no comercializao de produtos que conte- A elaborao de parecer tcnico prvio
que tange a experimentos laboratoriais, como nham OGMs. Ao longo de seus trs anos conclusivo pela CTNBio regulada pela Lei
a testes de campo que possam implicar risco de funcionamento, foram emitidas 18 Ins- 8.974/95, Decreto 1.752/95, Regimento In-
biolgico, provocando impactos ambientais trues Normativas que regulamentam di- terno da CTNBio, alm dos procedimentos
favorveis ou indesejveis ou conseqnci- versos aspectos da biotecnologia moderna estabelecidos nas Instrues Normativas. De
as para a sade humana. Desde a dcada de no Pas. acordo com esses procedimentos, o pedido
1970, fatores associados ao desenvolvimen- Atualmente, existem 120 instituies de liberao de OGMs no meio ambiente
to cientfico e tecnolgico dos pases, a pblicas e privadas credenciadas pela distribudo s Comisses Setoriais Especfi-
interesses econmicos e a presses dos CTNBio, por meio da concesso de Certi- cas da reas da Sade, Vegetal, Animal e
prprios cientistas e de grupos ambientalis- ficado de Qualidade em Biossegurana Ambiental, que emitem pareceres tcnicos
tas vm delineando as normas do que se (CQB), para desenvolver atividades com nas reas de sua competncia, determinando
convencionou denominar biossegurana. organismos transgnicos, das quais 20 efe- os critrios e recomendaes para a sua
tivamente conduzem liberaes planeja- liberao ou a indeferindo.
A Lei de Biossegurana das no meio ambiente. A Comisso j O Parecer Tcnico Conclusivo emitido
autorizou e vem acompanhando cerca de pela CTNBio contempla necessariamente os
Como conseqncia de projeto de lei de 700 processos de liberaes planejadas no seguintes aspectos da segurana do OGM: a)
iniciativa do ento Senador Marco Maciel, meio ambiente, em plantios agrcolas em riscos ao meio ambiente, examinados com
aps 5 anos de tramitao no Congresso escala experimental e apenas um em esca- especial ateno pela Comisso Setorial Es-

32 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


pecfica da rea Ambiental, presidida pelo o e de proteo dos direitos de proprie- ervas daninhas a ele resistentes. A introdu-
representante do Ministrio do Meio Ambien- dade intelectual, nos termos da Lei 9.456/ o, para plantio, do cultivar soja transgni-
te; b) riscos do ponto de vista agrcola e 97 e do Decreto 2.366/98. ca round up ready no aumentar a pres-
animal, examinados atentamente pelas Co- Apesar de o ato da CTNBio constituir so de seleo sobre as espcies daninhas
misses Setoriais Especficas das reas Vege- parecer conclusivo de carter tcnico do em termos de concentrao de produto/
tal e Animal, presididas pelo representante ponto de vista da biossegurana, no , rea.
do Ministrio da Agricultura; c) riscos para a entretanto, autorizvel para determinar o c) A soja uma espcie domesticada,
sade humana, para produo de alimentos plantio de um vegetal transgnico, cuja cuja sobrevivncia depende em alto grau do
com vistas ao consumo humano, examinados responsabilidade fundamentalmente da ser humano. No h razes cientficas para
com especial ateno pela Comisso Setorial competncia do Ministrio da Agricultura. se prever a sobrevivncia de plantas deriva-
Especfica da rea de Sade, presidida pelo Vale ainda ressaltar que, segundo as das da linhagem em questo fora de ambien-
representante do Ministrio da Sade. normas gerais contidas na Lei de Biossegu- tes agrcolas. Alm disso, na ausncia de
Esse parecer vinculado a todos os atos rana (art. 16), compete exclusivamente presso seletiva - no caso, o uso do herbicida
administrativos posteriores dos Ministrios, CTNBio determinar a paralisao de quais- glifosato - a expresso do gene inserido no
seja quanto ao registro e fiscalizao de quer atividades envolvendo OGMs, uma confere planta vantagem adaptativa.
sementes e gros, na Secretaria de Defesa vez constatada a existncia de riscos gra- d) A utilizao do herbicida glifosato, de
Agropecuria do Ministrio da Agricultura, ves para a sade do homem e dos animais, uso rotineiro nas lavouras de soja no Brasil,
seja quanto ao registro e fiscalizao de para as plantas e para o meio ambiente. no teve efeito negativo no processo de
produtos alimentcios, na Agncia de Vigiln- Assim, a interdio de experimentos e de fixao biolgica de nitrognio, seja quanto
cia Sanitria do Ministrio da Sade. Endossa, plantios de vegetais geneticamente modifi- ao comportamento dos cultivares de soja
por fim, o carter vinculativo do Parecer cados, mediante determinao da CTNBio expostos ao herbicida, seja com respeito ao
Tcnico Conclusivo quanto segurana am- publicada em comunicado no Dirio Ofici- comportamento dos microrganismos fixa-
biental e alimentar dos organismos transgni- al da Unio prerrogativa dos rgos de dores de nitrognio. Alm disso, o gene
cos, o disposto no inciso II do art. 2 do fiscalizao do Ministrio da Sade, do marcador nptii, de resistncia a antibitico,
Decreto 1.752/95, que atribui competncia Ministrio da Agricultura e do Ministrio do no foi transferido para a espcie transgni-
ampla CTNBio para acompanhar o desen- Meio Ambiente. ca.
volvimento e o progresso tcnico e cientfico Alm da interdio e tambm mediante e) Finalmente, ainda quanto questo
na biossegurana e em reas afins, objetivan- determinao da CTNBio, infraes Lei ambiental, no h nenhum efeito documen-
do a segurana dos consumidores e da popu- 8.974/95 podero ser passveis de multas tado de variaes de comportamento popu-
lao em geral, com permanente cuidado em valores superiores a 16.110,80 UFIR, lacional de insetos benficos ou de insetos
proteo do meio ambiente. que sero aplicadas pelos rgos de fisca- pragas decorrente do uso do herbicida cita-
lizao dos Ministrio citados. do.
Competncias Especficas dos Alm do exame da segurana ambiental,
Ministrios da Sade, da Soja Transgnica Roundup Ready a CTNBio concluiu que, fora os riscos ine-
Agricultura e do Meio Ambiente rentes ao consumo da soja para a parcela da
Com relao ao caso especfico da populao que apresenta reaes adversas
Emitido o parecer tcnico prvio conclu- utilizao em escala comercial da cultivar ingesto da soja em geral, o consumo da soja
sivo da CTNBio, cabe aos Ministrios da da soja geneticamente modificada round transgnica no consiste risco para a segu-
Agricultura, da Sade e do Meio Ambiente, up ready resistente ao herbicida glifosato, rana alimentar, tanto na dieta de humanos,
no limite de sua competncia especfica, a requerida pela empresa Monsanto, a CTN- quanto na dieta de animais.
atribuio de monitorar e fiscalizar as ativida- Bio regulamentou, por meio da Instruo
des relacionadas aos OGMs - e no se trata Normativa n 18, de 15/12/98, os procedi- Monitoramento
aqui de conceder aprovao prvia, que mentos a serem observados para sua libe-
responsabilidade da CTNBio, onde esses rao planejada no meio ambiente e seu A par de todas as consideraes tcnicas
Ministrios tm assento. plantio comercial, por ter entendido que, e com o objetivo de assegurar contnuo
Por ocasio do registro e da fiscalizao do ponto de vista da biossegurana, no h acompanhamento do produto, a CTNBio,
de sementes e gros, pela Secretaria de risco ambiental ou para a sade humana e nos termos da melhor conduta de gerencia-
Defesa Agropecuria do Ministrio da Agri- animal na utilizao da soja em questo. mento de risco do ponto de vista da biosse-
cultura, e do registro e da fiscalizao de Aps trs anos de estudos experimen- gurana, decidiu que o uso comercial da soja
produtos alimentcios pela Agncia de Vigi- tais realizados pela empresa interessada, transgnica em questo ser realizado medi-
lncia Sanitria do Ministrio da Sade, ob- com o acompanhamento da CTNBio, e um ante monitoramento cientfico pelo perodo
servar-se-, para efeitos de biossegurana, o ano de exaustiva avaliao pela CTNBio, a de cinco anos, procedendo-se a anlises e
Parecer Tcnico Conclusivo da CTNBio. O concluso favorvel acerca da ausncia de estudos em plantios comerciais a serem
registro e outras autorizaes desses Minist- risco para a segurana ambiental decorren- disponibilizados pela empresa Monsanto. O
rios so medidas administrativas para fins de te do uso dessa soja pautou-se nos seguin- monitoramento compreender os seguintes
fiscalizao e monitoramento do uso, trans- tes elementos: aspectos:
porte, armazenamento, comercializao, con- a) A soja uma espcie predominante- a) avaliao da variao da composio
sumo, liberao e descarte de produtos que mente autopolinizvel, cuja taxa de polini- especfica da comunidade de plantas dani-
contenham OGMs. zao cruzada da ordem de 1%. Por tratar- nhas da rea.
Aplicam-se, ainda, as legislaes gerais se de espcie extica, sem parentes silves- b) avaliao de eventual incidncia de
de competncia de cada Ministrio. Em par- tres no Brasil, no se verifica a possibilida- plantas daninhas escape, determinando se
ticular, nos termos da Lei 6.507/77 e do de de ocorrncia de polinizao cruzada a resistncia ao herbicida glifosato resultaria
Decreto 81.771/78, cabe ao Ministrio da da soja transgnica com espcies silvestres da transferncia do transgene.
Agricultura promover a fiscalizao da pro- no meio ambiente. c) avaliao peridica da dinmica po-
duo e do comrcio de sementes e mudas, b) Existem no Brasil pelo menos trs pulacional de organismos indicadores: inse-
e proceder ao registro de sementes e gros, espcies conhecidas de ervas daninhas tos, patgenos e microorganismos fixadores
com o objetivo de garantir a qualidade do naturalmente resistentes ao herbicida gli- de nitrognio e solubilizadores de fosfato.
material produzido e comercializado. Acres- fosato. A utilizao do glifosato no Pas, ao d) a empresa enviar relatrio anual
ce competncia desse Ministrio o registro longo das ltimas duas dcadas, no ense- CTNBio, at o dia 15 de junho seguinte ao
de novas cultivares para fins de comercializa- jou o aparecimento de outras espcies de ano agrcola especfico.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 33
e) as reas de monitoramento sero material gentico; e controlar a produo, considerar que a liberao proposta provo-
franqueadas auditoria cientfica pela soci- a comercializao e o emprego de tcni- car efeito negativo no meio ambiente, a
edade civil organizada interessada, medi- cas, mtodos e substncias que compor- encaminhar ao Ministrio do Meio Ambi-
ante autorizao prvia da CTNBio e com a tem riscos para a vida, a qualidade de vida ente, que poder exigir impacto ambiental
presena de fiscais do Ministrio da Agricul- e o meio ambiente. Uma vez que essa lei (EIA/RIMA). Mais uma vez evidencia-se o
tura. cria a Comisso Tcnica de Biossegurana, poder discricionrio do Poder Pblico -
f) a empresa informar na embalagem na qual tm assento diversos ministrios e representado pela CTNBio - que, com base
do produto que, eventualmente, os usuri- organizaes, e lhe confere competncia em evidncias e estudos cientficos, avaliar
os da tecnologia podero receber visitas especial no campo ambiental, torna-se cla- se cabe ou no exigir do interessado a
tcnicas da CTNBio. ro que a questo ambiental na legislao realizao de EIA/RIMA. Logo, se, na avali-
O monitoramento, que, na prtica, veri- brasileira no se circunscreve exclusiva- ao cientfica de risco da CTNBio, o rgo
ficar qualquer possvel efeito adverso de mente esfera de atribuies do Ministrio pblico sobre o qual recai esse poder discri-
carter ambiental decorrente do uso do do Meio Ambiente, ou aos rgos do cionrio ,e se no constatar que no h risco
produto transgnico, consiste, de fato, em Sistema Nacional do Meio Ambiente ou ao de dano significativo ao meio ambiente que
gerenciamento de risco e visa a permitir CONAMA. justifique a elaborao de um EIA/RIMA,
que, a qualquer momento, a CTNBio possa Outra considerao diz respeito deci- este no ser exigido do interessado.
retirar o produto do Sistema Nacional de so da CTNBio de dispensar a exigncia de Cabe ainda observar que, luz do 4,
Registro de Cultivares e, por conseguinte, EIA/RIMA - e no de estudos e avaliaes do art. 24 da Constituio Federal, segundo
do mercado de sementes e da indstria de de risco ambiental - para a soja roundup o qual a supervenincia de lei federal
alimentos, por meio da ao dos rgos de ready. Do ponto de vista cientfico e dos suspende a eficcia da lei estadual no que
fiscalizao e controle do Ministrio da estudos de risco ambiental examinados e lhe for contrrio, uma vez que esse estudo
Agricultura. acompanhados ao longo de trs anos pela seja dispensado pela instncia federal com-
CTNBio, no apenas luz das condies petente, a CTNBio, no poder uma lei
Anlise de Risco do OGM especficas brasileiras, mas ao longo dos estadual requer-lo.
para o Meio Ambiente e anos em que esse produto j vem sendo
Licenciamento Ambiental avaliado, testado, produzido e utilizado, Consideraes finais
no apenas no Brasil, mas tambm nos
Paralelamente discusso sobre o m- Estados Unidos, na Unio Europia, na A CTNBio foi criada em 1995 por uma lei
rito tcnico-cientfico da deciso tomada Argentina, no Canad e no Japo, no se democraticamente aprovada pelo Congresso
pela CTNBio de dispensar a EIA/RIMA para constatou qualquer indcio de que haja Nacional e, desde sua instalao, em junho de
a soja transgnica roundup ready, devida- potencial de significativa degradao 1996, pauta sua ao pelo estrito cumprimen-
mente consubstanciada na Instruo Nor- do meio ambiente. S isso j afastaria a to da Lei de Biossegurana. Toda a ao que
mativa n 18, de 15/12/98, e no Comunica- exigncia de estudo prvio de impacto a CTNBio se prope a realizar est calcada no
do n 54, publicado no D.O.U. de 1/10/98, ambiental contida no mencionado art. 225, entendimento de que o Estado moderno no
Seo 3, pg. 56, tem sido questionada inciso IV, da Constituio Federal. Ade- pode prescindir da transferncia do conheci-
alguns aspectos da constitucionalidade da mais, vale ressaltar que os estudos prvios mento e do seu uso em benefcio do homem
aplicao da Lei de Biossegurana e de seu de impacto ambiental a que se refere o e da sociedade, mediante processos adequa-
decreto regulamentador, especificamente texto constitucional no se limitam unica- dos de biossegurana. Esse princpio da pre-
quanto dispensa de EIA/RIMA pela CTN- mente ao EIA/RIMA regulado pela Reso- cauo - concretizado entre ns pela prpria
Bio, que passamos a examinar. luo 237/97 do CONAMA. existncia da Lei de Biossegurana e da CTN-
O art. 225, inciso V, da Constituio Uma ltima considerao quanto ao Bio - reflete-se hoje na postura que a socieda-
determina que incumbe ao Poder Pblico aspecto ambiental deve ser finalmente de brasileira adotar doravante em face da
exigir, na forma da lei, estudo prvio de examinada. O processo de avaliao e tecnologia transgnica.
impacto ambiental para instalao de obra controle de risco ambiental do ponto de Nesse contexto, quando a biotecnologia
ou atividade potencialmente causadora vista da biossegurana de OGMs, que deve vem-se tornando, cada vez mais, instrumento
de significativa degradao do meio ser rigorosamente seguido pelo solicitante para soluo de problemas relacionados, so-
ambiente. Por outro lado, quanto anlise de autorizao para experimentos com bretudo, com sade e alimentao humana,
de risco ambiental, facultado CTNBio, organismos transgnicos, minuciosamente fundamental que a legislao brasileira de
nos termos do inciso XIV, do art. 2 do definido nas Instrues Normativas n3/96 biossegurana seja adequadamente implemen-
Decreto 1.752/95, exigir como documen- e n10/98 da CTNBio. Essa regulamentao tada e que a CTNBio continue a orientar
to adicional, se entender necessrio, a contm normas detalhadas para avaliao instituies de pesquisa e empresas quanto aos
realizao de Estudo de Impacto e controle de risco ambiental, bem como critrios e procedimentos de biossegurana,
Ambiental(EIA) e o respectivo Relatrio de de riscos para a sade humana e animal como tambm a a esclarecer a preocupao da
Impacto no Meio Ambiente (RIMA) de pro- pelo uso de organismos transgnicos, cujo populao brasileira acerca de eventuais riscos
jetos e aplicao que envolvam a liberao contedo e critrios so substancialmente associados a OGMs.
de OGM no meio ambiente. O confronto equivalentes a um estudo de impacto am- Ao presenciarmos o debate acirrado acerca
dessas duas disposies da legislao brasi- biental, embora no tenham essa denomi- da convenincia ou no de permitirmos a
leira permite avaliar a questo da biossegu- nao. entrada de produtos transgnicos no Brasil,
rana dos OGMs para o meio ambiente sob Esses procedimentos de verificao pr- preciso ter-se discernimento quanto s ques-
a tica de algumas consideraes legais. via de riscos dos transgnicos para a sade tes econmicas, as questes legais, as ques-
A primeira reflexo diz respeito ao fato e o meio ambiente, tradicionalmente deno- tes polticas e as questes cientficas, de modo
de que a Lei de Biossegurana insere-se no minados avaliao de risco e controle de que no se permita que os aspectos polticos e
Captulo VI da Constituio Federal de risco - e no Estudo de Impacto Ambiental econmicos venham a obscurecer ou deturpar
1988 - Do Meio Ambiente, regulando os e Relatrio de Impacto no Meio Ambiente a legalidade e a legitimidade da Comisso
incisos II e V do 1, segundo os quais (EIA/RIMA) - contm elementos e procedi- Tcnica Nacional de Biossegurana, refletida
incumbe ao Poder Pblico preservar a di- mentos similares e a mesma finalidade de na transparncia de seus procedimentos, na
versidade e a integridade do patrimnio proteo e preservao ambiental. competncia de seus cientistas, na correo e
gentico do Pas e fiscalizar as entidades Alm disso, a Instruo Normativa n3/ seriedade com que as questes de segurana
dedicadas pesquisa e manipulao de 96 determina que, no caso de a CTNBio cientficas so por ela abordadas.

34 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


AGROCERES
ALGODO COLORIDO Elusio Curvelo Freire
Pesquisador da Embrapa Algodo-Campina Grande, PB

Fotos: Eleusio Curvlo Freire


AGRICULTURA

O ALGODO COLORIDO NO BRASIL

ORIGEM
Tabela 1 - Herana de cor da fibra do algodo.
O algodo colorido foi desenvolvido Smbolo do gene Colorao da fibra Espcie de Gossypium Regio
pelos incas e astecas h 4.500 anos, bem
como por outros povos antigos das Am-
ricas, sia, frica e Austrlia. J foram Ld1k Caqui Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
identificadas 39 espcies silvestres de al- Lc2B Marrom claro Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
godo com fibras coloridas. Na maioria
dessas espcies primitivas, o algodo pos-
Lc2k caqui Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
sui fibras coloridas, principalmente na to- Lc2M Marrom mdio Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
nalidade marrom. Porm, j foram descri- Lc2v Marrom muito claro Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
tos algodes coloridos em tonalidades
verde, amarela, azul e cinza. Esss algo- Lc3B Marrom claro Arboreum e herbaceum frica e Afrosia
des, por longos perodos, foram descarta- Lc4k Caqui Arboreum Afrosia
dos pela indstria txtil mundial e at Dw Branco sujo Raimondii Amrica
mesmo foi proibida sua explorao em
vrios pases por serem considerados como Lg1 Verde Hirsutum Amrica
contaminao indesejvel dos algodes de Lc2 Marrom Hirsutum Amrica
tonalidade branca normal. Esses tipos co- Lc Marrom Barbadense, Darwinii e Amrica
loridos foram preservados pelos povos
nativos e nas colees de algodo em Tomentosum
vrios pases. No Brasil, foram coletadas FONTE: Endrizzi et al (1984)
plantas de algodoeiros asselvajados, nas
tonalidades creme e marrom, em misturas
com algodoeiros brancos cultivados, das raa, marie galante Hutch, conhecidos rom em suas vrias tonalidades encontra-
espcies G. barbadense L. e G. hirsutum L. como algodes arbreos. Esses algodes do nos algodes do velho e do novo
coloridos tinham uso apenas artesanal ou mundo, com vrios alelos identificados.
ornamental, principalmente nos Estados (Tabela 1). Sendo a cor do algodo contro-
Miscelnia de cores do algodo da Bahia e Minas Gerais. Inicialmente lada por genes maiores, o melhoramento
trabalhado na Embrapa passaram a ser preservados em bancos de dessa caracterstica simples, porm no
germoplasma da Embrapa Algodo, em prescinde de autofecundao controlada
Patos-PB, desde 1984. A partir de 1989, foi pelo melhorista, para evitar segregaes
iniciado o trabalho de melhoramento ge- ou contaminaes indesejveis. Por outro
ntico, aps uma visita de empresrios lado, algumas tonalidades de cores so
txteis japoneses, que demonstraram inte- fortemente influenciadas pelo ambiente
resse em adquirir aquele tipo de fibra. (luz solar, tipo de solo, ano). Entre as
tonalidades de cores, a verde a mais
A HERANA DA COR DA FIBRA influenciada pelo ambiente, enquanto a
creme e a marrom so as mais estveis.
A herana da colorao da fibra nor-
malmente controlada por um gene domi- O PROCESSO DE MELHORAMENTO
nante, mas com alelos em locus diferentes.
O gene verde controlado pelos alelos de Inicialmente foi efetuada uma avalia-
um nico locus Lg, encontrado no cromos- o da produtividade e das caractersticas
somo 15 do genoma D do algodo ameri- das fibras dos 11 acessos de algodo arb-
cano (G. hirsutum). reo colorido existentes no Banco de Ger-
O gene que controla a colorao mar- moplasma. Constatou-se que o compri-
Tabela 2 - Caractersticas mdias das novas linhagens de algodo colorido. Touros, RN - 1998.
Linhagem Rendimento 1 1 P. 100 % P. 1 Comprimento Uniformidade Resistncia Finura Elongao
kg/ha Flor Capulho Sementes de Capulho S.L. 2,5 % (%) gf/tex (Micronaire) (%)
(dias) (dias) (g) Fribra (g)
CNPA 95-3B 1.982 ab 60 ab 111 b 9,2 abc 38,4 3,7 25,8 ab 45,8 ab 22,1 abc 4,0 ab 5,3
CNPA 96-713 2.510 a 61 ab 116 ab 9,0 abc 38,6 3,4 25,7 ab 45,6 ab 21,5 abc 4,3 a 5,1
CNPA 96-871 1.268 b 61 a 114 ab 8,0 c 38,0 3,4 24,8 b 46,5 ab 21,5 abc 4,3 a 5,4
CNPA 96-426 1.841 ab 59 b 112 ab 10,0 a 38,2 4,2 27,6 ab 48,3 a 24,2 a 4,1 ab 5,5
CNPA 96-703 1.715 ab 61 a 113 ab 8,5 bc 39,9 3,3 25,9 ab 46,8 a 23,0 abc 3,9 ab 5,3
CNPA 96-729 1.425 b 60 ab 115 ab 9,9 a 37,9 3,7 28,3 a 42,3 b 18,0 bc 3,5 b 4,8
CNPA 96-802 1.755 ab 59 ab 113 ab 9,5 ab 39,8 4,0 26,4 ab 46,4 ab 23,9 ab 3,9 ab 5,7
CNPA 96-816 1.377 b 60 ab 118 a 8,7 abc 39,5 3,4 26,1 ab 46,6 ab 22,0 abc 4,1 ab 5,2
CNPA 96-974 1.488 b 60 ab 115 ab 9,1 abc 38,6 3,2 25,1 ab 46,7 ab 21,8 abc 4,3 ab 5,1
CNPA 96-1016 1.754 ab 61 ab 112 ab 9,3 abc 38,6 3,6 24,9 b 46,7 a 17,7 c 4,2 ab 5,1
CNPA 96-1029 1.470 b 60 ab 112 ab 8,1 c 39,3 3,5 26,6 ab 46,4 ab 19,3 abc 3,9 ab 5,2
Mdia 1.689 60 114 9,0 38,8 3,6 26,1 46,2 21,4 4,1 5,3
F. 3,0* 2,4* 1,9ns 5,6** 0,7ns 1,3ns 2,6* 2,7** 3,1** 2,5* 1,5ns
CV% 24,1 1,7 2,3 6,1 4,5 14,1 5,1 3,8 11,6 7,8 7,6

mento das fibras dos acessos coloridos de cores. A partir de 1996, foram includos intenso). Esses cruzamentos esto nas
variou de 25,9 a 31,6mm; a resistncia era nas pesquisas algodes de colorao ver- geraes F2 e F3 e iro resultar cultivares
muito fraca, com 60% dos materiais varian- de e procuradas novas combinaes de com tonalidades de cores mais variadas
do de 19,5 a 21,7 gf/tex, o que impossibi- cores, por meio de cruzamentos dos algo- em futuro prximo.
litaria sua industrializao em fiaes mo- des marrom, creme e verde. O mtodo de Outra opo que foi utilizada pela
dernas, que exigem algodes de alta resis- seleo individual com teste de prognies Embrapa para a obteno de cultivares de
tncia. As fibras eram tambm excessiva- consistiu em separar plantas coloridas nas algodo colorido foi a introduo dos
mente finas e de baixa uniformidade. A 11 entradas originais que constituiam o genes que controlam a colorao verde,
produtividade, no campo variou de 294 a Banco de Germoplasma, de modo que na cultivar comercial mais plantada no
1.246 kg/ha. propiciasse a anlise das caractersticas Nordeste (CNPA 7H), por meio da tcnica
Foi determinado como objetivo do agronmicas e das fibras de cada uma das de retrocruzamentos. Para isso, foram
programa de melhoramento elevar a resis- plantas eleitas. Por meio desse mtodo efetuados trs ciclos de retrocruzamentos
tncia das fibras, a finura, o comprimento foram obtidas e estudadas 1.085 plantas, utilizando-se a cultivar Arkansas Green
e a uniformidade, bem como estabilizar a que resultaram em 217 linhas de prognies como progenitor doador e a CNPA 7H
colorao das fibras nas tonalidades creme de tonalidades creme a marrom. O mtodo como progenitor recorrente.
e marrom e elevar a sua produtividade no de hibridao foi utilizado para obter nova Nos ltimos trs anos, foram estuda-
campo. Utilizou-se primeiramente, o m- variedade e combinao de cores diferen- das 217 prognies, 35 novas linhagens e
todo de seleo individual com teste de tes, pelo do cruzamento dos algodoeiros 22 linhagens avanadas de algodo colo-
prognies, e, posteriormente, o mtodo de nativos do Brasil, de colorao creme e rido, nos municpios de Patos e Monteiro,
hibridao seguido de seleo genealgi- marrom, com as cultivares americanas na Paraba e Touros, no Rio Grande do
ca, para se obter variaes nas tonalidades Arkansas Green (verde) e Texas (marrom Norte.

Tabela 3 - Caractersticas mdias das linhagens avanadas de algodo colorido. Touros, RN - 1998.
Linhagem Rendimento 1 1 P. 100 % P. 1 Comprimento Uniformidade Resistncia Finura Elongao
kg/ha Flor Capulho Sementes de Capulho S.L. 2,5 % (%) gf/tex (Micronaire) (%)
(dias) (dias) (g) Fribra (g)
Bulk CNPA 95-3B 2.912 ab 59 112 ab 10,1 ab 35,1 4,0 ab 25,6 48,1 ab 19,3 3,8 7,0
CNPA 95-130 3.534 a 59 110 b 10,4 a 33,5 4,2 ab 28,6 48,3 ab 21,5 3,6 7,2
CNPA 95-653 2.398 bc 59 113 ab 8,8 b 37,2 3,6 ab 26,5 50,9 a 20,3 3,5 7,7
CNPA 95-709 2.142 bc 58 113 ab 9,2 ab 35,8 3,9 ab 27,9 49,8 ab 19,5 4,1 7,1
CNPA 95-813 1.904 c 58 112 ab 10,0 ab 33,8 4,5 a 28,8 48,7 ab 20,2 4,0 6,2
CNPA 95-816 2.191 bc 58 113 ab 9,4 ab 34,0 4,0 ab 28,1 45,0 b 20,0 3,5 6,5
Bulk Creme ENL 789 2.629 bc 59 111 b 9,7 ab 34,8 3,7 ab 26,9 47,9 ab 18,7 4,2 7,5
CNPA 771/92-1139M 2.688 bc 57 111 ab 8,9 b 33,6 3,7 ab 25,5 49,6 ab 21,8 3,9 7,4
CNPA 95-4B 2.302 bc 58 111 b 8,9 b 37,4 3,4 b 26,3 48,8 ab 18,0 3,7 7,2
CNPA 92-127 2.396 bc 58 114 a 9,2 ab 37,6 4,3 ab 26,9 47,1 ab 19,1 3,8 7,1
Mdia 2.509 58 112 9,4 35,6 3,9 27,1 48,4 19,8 3,8 7,1
F. 7,2** 7,0ns 3,2** 3,9** 2,5* 3,0** 1,6ns 1,8ns 2,0ns 1,9ns 16ns
CV% 13,7 7,8 1,3 6,0 5,5 9,8 7,1 4,9 8,5 8,9 9,9

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 37


Tabela 4 - Caractersticas tecnolgicas de fibras das linhagens de algodo colorido eleitas para multiplicao. Touros-RN. 1998.
Fio Singelo - 27 Tex
Linhagem Comprimento Uniformidade Resistncia Alongamento Finura Fiabilidade Resistncia Alongamento Coeficiente
S.L. 2,5 % (%) gf/tex % CSP gf/tex % Toro
Variedades Coloridas:
CNPA 95-653 1 27,6 44,1 20,5 5,3 3,9 1806 14,1 4,8 3,31
CNPA 92-1139 2 28,7 46,6 22,6 5,8 4,0 1881 14,04 5,0 3,51
Variedades Comerciais brancas:
ITA 90 29,9 51,3 27,0 5,8 3,8 2307 14,92 6,5 3,47
CNPA 8H 29,1 47,1 26,0 5,7 3,6 2212 14,32 5,3 3,49
1
- Produtividade de 2.400 kg/ha e rendimento de fibra de 37,2%, sob condies irrigadas.
2
- Produtividade de 2.690 kg/ha e rendimento de fibra de 36,6%, sob condies irrigadas.

RESULTADOS OBTIDOS COM A ractersticas mdias das novas linhagens e confeccionados tecido de malha e 50
PESQUISA DE ALGODO COLORIDO estudadas esto apresentadas na Tabela 2, camisetas para avaliao da qualidade do
onde podem ser observadas as caracters- tecido produzido a partir do algodo colo-
AVALIAO AGRCOLA ticas mdias das 4 linhagens eleitas (CNPA rido nordestino. A malha e os testes indus-
96-713, CNPA 96-426, CNPA 96-703 e CNPA triais foram processadas no CERTTEX/
Com o processo de melhoramento 96-802) para continuidade das pesquisas. SENAI em Paulista, Pernambuco. Foram
contnuo, as linhagens avaliadas em Essas linhagens apresentaram resistncia efetuados ensaios de solidez de cor; esta-
1997,em Patos e Monteiro, PB, apresenta- que variam de 21,5 a 24,2 gf/tex, finura de bilidade dimensional da malha (encolhi-
ram produtividade em torno de 1.500 kg/ 3,9 a 4,3, comprimento comercial na faixa mento) e resistncia do tecido ao Pilling.
ha, resistncia de fibras na faixa de 23 a 25 28-30mm a 30-32mm, alta produtividade Os resultados obtidos comprovaram que a
gf/tex, finura fina (I.M.) de 3,4 , compri- (1.715 a 2.510 kg/ha) e alto rendimento de malha colorida apresentou boa solidez de
mento de fibra (S.L. 2,5%) de 29,5mm e fibras (38,2 a 39,8%). cor nos nveis de cloro de 0,01% e 0,1%,
uniformidade de 48,0%. A produtividade Os resultados do ensaio de linhagens com grau 4; boa solidez de cor a frico,
mdia no campo supera a de cultivares de avanadas, onde esto sendo avaliados os com graus 4 a 5; boa solidez de cor ao suor,
algodoeiro moc precoce em mais de 50%. materiais em fase pr-comercial, esto grau 4-5; boa solidez da cor a lavagem,
Por outro lado, com essas caractersticas apresentados na Tabela 3. Nesse ensaio, grau 3-4; e alta resistncia do tecido ao
de fibras, os algodes coloridos melhora- foram escolhidas as linhagens CNPA 95- Pilling, grau 5. Esses dados so uma evi-
dos podem ser processados por indstrias 653 e CNPA 92-1139 M para aumento de dncia de que o tecido obtido com esse
txteis modernas. Nas avaliaes de fios sementes, com vistas a um possvel lana- algodo possui qualidade e estabilidade
do algodo colorido de ttulos 16Ne e mento delas como novas cultivares, devi- de colorao, semelhante aos tecidos colo-
20Ne, obteve-se resistncia do fio de 13,5 do ao equilbrio das caractersticas agron- ridos artificialmente.
e 12,3 gf/tex, respectivamente; alonga- micas e tecnolgicas das fibras dessas Neste ano de 1999, esto sendo efetu-
mento de 6,9; e 56 pontos finos/km e 112 linhagens. Esses dados confirmaram resul- ados testes de desempenho industrial do
pontos grossos/km; ndices que confir- tados semelhantes obtidos nos anos de algodo colorido na indstria EMBRATEX;
mam a boa qualidade do fio. 1996 e 1997 com essas linhagens e so do Grupo Coteminas, sediada em Campina
Em 1998, para fugir da seca que afetou indicadores de que elas podem ser planta- Grande, na Paraba. Para isso, foram forne-
todo o Nordeste, a pesquisa foi conduzida das comercialmente. cidos dois fardos de pluma, os quais esto
sob condies irrigadas, utilizando-se piv sendo processados em equipamentos in-
central, no municpio de Touros-RN. Nes- AVALIAO INDUSTRIAL dustriais de srie para produo de fio de
sas condies, foram avaliadas 46 progni- ttulo Nec 25,25; confeco de malha e de
es, 11 novas linhagens e 10 linhagens Com as fibras coloridas obtidas em camisetas. A produo industrial do fio
avanadas de algodes coloridos. As ca- 1997 foram produzidos fios de ttulo 20Ne colorido na fiao da EMBRATEX apresen-
tou resultados considerados satisfatrios insumos qumicos artificiais), bem como R$ 100.000,00 da Embrapa, num montante
pelos engenheiros txteis da empresa. O industrializao sem o uso de corantes total de R$ 160.000,00, referentes ao cus-
fio de algodo colorido apresentou tenaci- sintticos, para resultar num produto eco- teio de pesquisa. A esses recursos devem
dade de 11,4 CN/Tex, elongao de 3,9% logicamente limpo, sem agresses ao ho- ser acrescentadas as despesas referentes
e fora mxima de 2,66 N, 10 pontos finos/ mem e ao ambiente. aos salrios do pessoal envolvido, o que
km e 18 pontos grossos/km. eleva o custo total da pesquisa para R$
ALGODO COLORIDO VERDE 355.000,00, no perodo de 10 anos da
PERSPECTIVAS DO pesquisa.
ALGODO COLORIDO Simultaneamente ao desenvolvimento
do algodo colorido marrom, foram pro- REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
A pesquisa encontra-se na fase de duzidos retrocruzamentos para incorpora-
escolha final de uma das linhagens para o da colorao verde na cultivar de ENDRIZZI, J.E.; TURCOTTE, E.L. e
aumento de sementes e lanamento de algodo anual mais cultivada no Nordeste KOHEL, R.J. Quantitative genetics, cytolo-
uma cultivar de fibras coloridas, o que (CNPA 7H). Aps a srie de trs retrocru- gy and cytogenetics. In: Cotton. Ed. R.J.
dever ocorrer em um ou dois anos. As zamentos, foram retiradas prognies que KOHEL e C.F. LEWIS. Madison: American
sementes foram aumentadas em reas irri- esto em fase de seleo e avaliao tecno- Society of Agronomy, 1984. p.82-131.
gadas no municpio de Touros e Ipangua- lgica de fibras e fios. Pretende-se at o EMBRAPA. O algodo colorido no Bra-
u, no Rio Grande do Norte, com colheita final do ano 2000, colocar disposio dos sil. Campina Grande: EMBRAPA-CNPA,
em novembro de 1998. Entre as dez linha- produtores sementes de uma cultivar de 1998 (folder).
gens avanadas coloridas estudadas, fo- algodoeiro anual de fibra verde, derivada FREIRE, E.C.; SANTANA, J.C.F. de;
ram escolhidas uma de colorao marrom da CNPA 7H. GUSMO, J.L. de e SILVA, J.A. da. Caracte-
para plantio no Campo Expe- rsticas e potencialidades do
rimental de Patos,-PB, com algodo colorido do Nor-
vistas a apresent-la aos pro- deste do Brasil. In: Confe-
dutores em julho, e uma de rncia internacional Txtil/
colorao creme para plantio Confeco, I, 1995. Rio de
sob condies irrigadas, em Janeiro. Anais... Rio de Ja-
Touros-RN, para apresent-la neiro, SENAI/CETIQT, 1995.
aos produtores em novem- p. 16-22..
bro/99. As caractersticas tec- FREIRE, E.C.; ANDRA-
nolgicas das duas linhagens DE, F.P. de; FARIAS, F.J.C.;
escolhidas esto apresentadas COSTA, J.N. de; MOREIRA,
na Tabela 4. J. de A.N.; VIEIRA, R. de M.;
Pretende-se concluir os FARIAS, R.H. de. Melhora-
testes de avaliao do desem- mento do algodo colorido
penho industrial at o final de no Nordeste do Brasil. Cam-
1999, com divulgao dos re- pina Grande: EMBRAPA-
sultados em conferncia tx- CNPA, 1997. 6p. (EMBRA-
til programada para o ano PA-CNPA, Pesquisa em An-
2000. damento, 49).
A regio indicada para plantio de algo- UTILIZAO DA BIOTECNOLOGIA FREIRE, E.C. Brasil j produz algodo
do arbreo colorido inicialmente ser PARA A PRODUO DO orgnico. Textilia, v. 5, n 18, 1995. p. 68.
aquela zoneada para cultivo do algodoeiro ALGODO COLORIDO ICAC RECORDER. Washington: Inter-
arbreo no Nordeste, podendo, no futuro, national Cotton Advisory Committee. v.10,
a produo desse algodoeiro se expandir Os avanos obtidos at ento com o n 4, 1992.
para outras regies. algodo colorido decorreram da explora- ICAC RECORDER. Washington: Inter-
O mercado para o algodo colorido o do germoplasma natural do algodo, national Cotton Advisory Committee, v.11,
ainda restrito, sendo o produto consumi- por meio de mtodos tradicionais de me- n 4, 1993.
do por pessoas alrgicas a corantes sint- lhoramento gentico. O uso da biotecno- INTERNATIONAL COTTON ADVI-
ticos, grupos ambientalistas e ONGs que logia de transferncia de genes que con- SORY COMMITEE. Cultivo del algodon
desenvolvem trabalhos com agricultura trolam a expresso de vrias tonalidades organico: ICAC Recorder, Washington, v.14,
orgnica. Os preos obtidos com o algo- de cores, das espcies selvagens de algo- n 4, p. 55-81, 1996.
do colorido no mercado internacional do para as cultivares modernas, j consti- WANDERLEY, M.J.R.; SANTANA, J.C.F.
variam de US$ 3,79 a US$ 5,00 / kg de fibra tui um dos objetivos das empresas de de; LIMA, M. do S.N.; FREIRE, A. de F.
verde e de US$ 1,84 a US$ 3,35/kg de fibra biotecnologia que trabalham com algo- Fiabilidade das novas linhagens do algo-
marrom, o que propicia alta margem de do, no mundo, o que pode resultar em doeiro arbreo de fibra colorida em fun-
lucro aos produtores, quando comparado avanos tecnolgicos e em economia de o de suas caractersticas fsicas. In: Con-
com o algodo de fibra branca, que alcan- tempo e recursos na obteno das futuras gresso Brasileiro de Algodo, I. 1997. For-
a preos mdios de US$ 1,65/kg de fibra. cultivares de algodo colorido. taleza. Anais.. Fortaleza: MA/SDR/EMBRA-
Por outro lado, o desenvolvimento PA, 1997. p.608-612.
gentico de outras tonalidades de cores e RECURSOS APLICADOS KATZ, D.; BOONE, N.; UREELAND,
os testes industriais processados com os NA PESQUISA J.M. Jr. Organically grown and naturally
algodes coloridos podem abrir novos colored cotton: A global overview. In:
mercados, inclusive para o algodo colori- No perodo de desenvolvimento desta Beltwide cotton conferences, 1997. New
do orgnico (algodo produzido sem utili- pesquisa, foram aplicados, aproximada- orleans. Proceeddings... New Orleans:
zao de fertilizantes, inseticidas ou outros mente, R$ 60.000,00 oriundos do CNPq e National Cotton Council, 1997. p. 293-297.

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 39


Extrao de DNA de plantas
Eduardo Romano, Bilogo Molecular, M.Sc.
AGRICULTURA
Ana Cristina Miranda Brasileiro, Biloga Molecular, Ph.D.
CENARGEN/Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia.
romano@cenargen.embrapa.br

SOLUES PARA PROBLEMAS COMUMENTE ENCONTRADOS

isolamento de DNA de
plantas e de material ve-
getal proveniente de cul-
tura de tecidos uma
etapa importante na anlise da estru-
tura e organizao do genoma de
plantas. Essas anlises necessitam,
freqentemente,usar enzimas de res-
trio, que cortam o DNA em frag-
mentos, para ser que utilizado em
Southern blot ou em construo de
bibliotecas genmicas. Preparaes
de DNA vegetal tambm so, comu-
mente, utilizadas como substratos Figura 1: Esquema representativo das etapas de extrao de
em reaes de PCR para estudos DNA pelo mtodo CTAB.
filogenticos ou no desenvolvimen-
to de marcadores moleculares como de microcentrfuga. Nesse caso, as de DNAses, que usam esses metais
os microsatlites e os gerados por preparaes freqentemente se des- como cofatores (Sambrook et al.,
RAPD. Independente do tipo de es- tinam a reaes de PCR e podem ser 1989).
tudo molecular, as preparaes de realizadas somente na presena de 4) cidos nuclicos devem ser
DNA devem produzir amostras pu- tampo de extrao, sem a adio de separados das protenas. Para tanto,
ras suficientes para no inibir os nitrognio lquido. realiza-se de uma a vrias extraes
tratamentos enzimticos ou causar 2) As membranas celulares de- com fenol e/ou clorofrmio, que des-
interferncias nos padres de migra- vem ser rompidas para liberao do naturam as protenas tornando-as in-
o em gel de eletroforese. DNA. Essa etapa realizada pela solveis fase aquosa, onde se en-
Algumas consideraes so im- ao de um detergente como SDS contram os cidos nuclicos.
portantes na obteno de DNA de (dodecil sulfato de sdio) ou CTAB 5) O DNA deve ser protegido da
boa qualidade e devem ser atendidas (brometo de cetiltrimetilamnio). ao de compostos fenlicos, que
independente do mtodo utilizado. 3) Deve-se evitar a ao de DNA- oxidam o DNA irreversivelmente, tor-
1) As paredes celulares devem ses, que podem degradar o DNA. nando este inacessvel s enzimas de
ser rompidas com o objetivo de libe- Com esse propsito, os tampes de restrio. A contaminao por com-
rar os constituintes celulares. Essa extrao possuem pH por volta de postos fenlicos pode ser evidencia-
etapa realizada geralmente pelo 8,0, enquanto o pH timo para ao da pela colorao do DNA que tende
congelamento do tecido vegetal em de DNAses endgenas fica por volta a ficar marrom. Para evitar o efeito
nitrognio lquido e posterior que- de 7,0. Outro expediente emprega- oxidativo dos polifenis, deve ser
bra mecnica, com o auxlio de um do a adio de EDTA (cido etileno adicionado ao tampo de extrao
pilo e de um almofariz, no caso de diamono tetractico) no tampo de agentes anti-oxidantes, como PVP
extrao em larga escala. Para extra- extrao. O EDTA uma substncia (polivinilpirrolidona), BSA (albumi-
o em pequena escala, utiliza-se um quelante de ctions divalentes, como na de soro bovino) ou -mercaptoe-
pequeno basto de vidro e um tubo Mg+2 e Ca+2 e, portanto, inibe a ao tanol.

40 Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento


6) Os cidos nuclicos devem ser Vrios autores descrevem proble- protocolos descritos na literatura uti-
separados de polissacardeos. Esses mas no isolamento e purificao de lizam o protocolo CTAB padro, com
inibem a ao de enzimas de restrio DNA vegetal de boa qualidade (para algumas modificaes, com vistas a
(Shioda & Marakami-Muofushi, 1987) uma reviso ver: Rogers & Bendich, resolver problemas especficos da
e tornam a amostra de DNA excessi- 1994). Esses problemas so resultantes espcie em estudo. Outros protoco-
vamente viscosa, interferindo na mi- principalmente do co-isolamento de los freqentemente empregados so
grao do DNA em corridas eletrofo- polissacardeos, substncias fenlicas e variaes do descrito por Dellaporta
rticas. O detergente CTAB utiliza- compostos secundrios. e colaboradores (Dellaporta et al,
do com essa finalidade, j que polis- O mtodo mais utilizado com su- 1983). Esses mtodos se fundamen-
sacardeos e cidos nuclicos possu- cesso para diferentes espcies o base- tam na precipitao simultnea de
em solubilidade diferenciada na pre- ado no uso do detergente CTAB. Esse protenas e polissacardeos na pre-
sena desse detergente. Polissacar- detergente solubiliza as membranas, sena de SDS e altas concentraes
deos tambm podem ser removidos formando com o DNA um complexo de acetato de potssio. Outro mto-
pelo emprego de gradiente de cloreto que facilita uma posterior precipitao do utilizado a extrao de DNA por
de csio (CsCl). (Weising et al., 1995). A maioria dos meio de ncleos celulares. Essa es-
tratgia baseada em uma prvia
separao dos ncleos dos outros
Tabela 1: Problemas comumente encontrados durante o isolamento de DNA de plantas; constituintes celulares. Esse procedi-
possveis causas e solues. mento pode resolver o problema de
co-isolamento de constituintes inde-
Problema encontrado Causa Soluo sejveis, como os polissacardeos e
Amostra de DNA marrom ou Contaminao por polifenis. Adio de PVP-40 e/ou BSA no tampo polifenis citoplasmticos. A princi-
muito escura. de extrao, a concentrao de 1 a 2%. pal desvantagem deste mtodo
que a extrao de ncleos a partir de
Aumento da concentrao de -
material congelado muito inefici-
mercaptoetanol para at 5%.
ente. Outra desvantagem que esse
Amostra de DNA com aspecto Contaminao por
mtodo mais laborioso do que os
gelatinoso e excessivamente polissacardeos. Purificao da amostra em gradiente previamente mencionados. As pre-
viscoso. de CsCI ou por precipitao com paraes de DNA obtidas por qual-
acetato de amnio. quer um desses mtodos podem so-
Extrato de DNA via ncleos celulares. frer uma posterior purificao por
O DNA, antes da digesto com DNA degradado por contamina- centrifugao em gradiente de den-
enzimas de restrio, apresenta o por DNAses ou por quebra Verificar o pH do tampo de extrao. sidade de CsCl. Essa purificao,
arraste vertical no gel. mecnica durante a extrao com Este deve estar por volta de 8,0. Se o apesar de laboriosa, eficiente na
clorofrmio. pH estiver por volta de 7,0 facilitar a remoo de RNA, polissacardeos,
ao de DNAses durante a extrao protenas e outros contaminantes da
Mistura das fases aquosa e de amostra de DNA. Outra estratgia
clorofrmio menos vigorosamente. para purificao do DNA isolado a
precipitao com acetato de amnio.
O DNA apresenta forma cnica no Excesso de DNA aplicado no gel. Essa estratgia mais rpida, porm
gel, em direo ao plo positivo. Contaminao por Aplicar menos DNA no gel. o DNA purificado de menor quali-
polissacardeos. Purificao da amostra em gradiente dade.
de CsCI ou por precipitao com Nesse artigo descrevemos um pro-
tocolo CTAB padro utilizado com
acetato de amnio;
sucesso em nosso laboratrio, em
Extrao de DNA via ncleos celulares.
diferentes espcies, e dois protoco-
Aps a corrida, muito DNA retido Contaminao por
los de purificao (gradiente de CsCl
no poo do gel. polissacardeos. Purificao da amostra em gradiente e acetato de amnio). Apresentamos
de CsCI ou por precipitao com tambm uma tabela (tabela 1), onde
acetato de amnio; so identificados os problemas co-
Extrao de DNA via ncleos celulares. mumente encontrados na extrao
Aps digesto com enzima de Contaminao por de DNA por meio do protocolo CTAB.
restrio, a amostra apresenta polissacardeos. Purificao da amostra em gradiente Dessa forma, o leitor poder identi-
uma corrida com muito DNA nas Excesso de DNA aplicado no gel. de CsCI ou por precipitao com ficar o problema e tentar fazer as
laterais e pouco DNA no centro. acetato de amnio; modificaes necessrias para me-
Extrao de DNA via ncleos celulares; lhorar a qualidade do DNA. Na tabela
Aplicao de menos DNA no gel. 2, esto listadas algumas espcies
O DNA no gel apresenta Contaminao por RNA. vegetais para as quais foram neces-
contaminao com RNA. Adicionar RNAse A, a uma concentra- srias adaptaes de protocolos b-
o final de 100g/mL e incubar a sicos, visando resoluo de proble-
37C por 20 minutos. mas especficos.

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 41


Tabela 2 - Principais espcies vegetais para as quais foram necessrias adaptaes de protocolos ml. Evite pegar qualquer protena
bsicos, visando resoluo de problemas especficos (adaptado de Weising et al. 1995). desnaturada presente na interface.
7. Repita a extrao com
Espcie vegetal Protocolos Protocolos baseados na Protocolos Protocolos clorofrmio:lcool isoamlico mais
utilizando precipitao de envolvendo o mistos uma ou duas vezes (etapas de 4 a 6),
tampes CTAB protenas e isolamento de levando em considerao que mais
polissacardeos com ncleo extraes podem tornar a amostra
aceato de potssio/SDS mais pura, porm com maiores per-
(Dellaporta) das de DNA.
8. Adicione RNAse A a uma con-
Abies alba (abeto) X centrao final de 100 g/ml e incube
Betula alba (btula) X a 37oC por 30 minutos. Essa etapa
Glycine max (soja) X X opcional e contribui para aumentar a
Gossypium hirsutum (algodo) X X X pureza da sua amostra.
Fragaria x ananassa (morango) X 9. Adicione 0,6 volume de isopro-
panol ou 2,5 volumes de etanol abso-
Helianthus annus (girassol) X
luto, ambos a -20oC. Misture suave-
Hordeum vulgare (cevada) X
mente at formar um precipitado.
Ipomoea batatas (batata-doce) X X
10. Se o complexo DNA-CTAB
Linum usitatissimum (linho) X obtido formar uma rede de filamen-
Lycopersicon esculentum (tomate) X X tos visveis, recupere o DNA com o
Musa acuminata (bananeira) X auxlio de uma pipeta. Caso o DNA
Nelumbo spp. (ltus) X no forme uma rede visvel, centrifu-
Nicotiana tabacum (fumo) X X gue a amostra a 10.000 g por 20
Oryza sativa (arroz) X minutos. Em uma boa preparao, o
Picea abies (aberto) X DNA no deve estar escuro. Sempre
Pisium sativum (ervilha) X que possvel, evite a etapa da centri-
Prunus persica (pessegueiro) X fugao para no co-precipitar o DNA
Saccharum spp. (cana-de-acar) X X e polissacardeos.
Solanum tuberosum (batata) X X 11. Descarte o sobrenadante e
Theobroma cacao (cacaueiro) X lave o precipitado com 5 ml de etanol
Vicia faba (fava) X X 70% (v/v). Caso o precipitado se solte
Vitis vinifera (videira) X durante a lavagem, repita a etapa da
Zea mays (milho) X centrifugao por 3 minutos(etapa
10).
12. Descarte o sobrenadante e
Protocolos pulverize o material at se obter um seque o precipitado invertendo o tubo
p fino. em um papel-toalha.
Isolamento de DNA total de plan- 2. Transfira rapidamente o p ob- 13. Dissolva o precipitado em 500
tas utilizando-se o mtodo CTAB tido para um tubo de polipropileno l de tampo TE (Tris-HCl 10 mM, pH
(Figura 1) de 50 ml que contenha 15 ml de 8,0; EDTA 1 mM) e incube a 4oC por
tampo CTAB [CTAB 2% (p/v); NaCl meia hora ou mais. A amostra pode
1. Pese 3 g do material vegetal a ser 1,4 M; Tris-HCl 100 mM, pH 8,0; EDTA ser ento armazenada a -20oC.
analisado (calos, folhas, plntulas etc.), 20 mM; -mercaptoetanol 0,2% (v/v)] 14. Uma purificao posterior pode
de preferncia fresco, e transfira para pr-aquecido a 65oC. Feche o tubo e ser realizada por tratamento com ace-
um almofariz contendo com nitrognio misture gentilmente at o p ficar tato de amnio ou por gradiente de
lquido. Com o auxlio de um pilo, homogeneamente distribudo. cloreto de csio .
3. Incube as amostras em banho-
maria a 60oC por 30 minutos, agitan- Purificao de DNA total de
do ocasionalmente o tubo para man- plantas por tratamento
Para maiores informaes sobre tcni- ter o extrato ressuspendido. com acetato de amnio
cas de isolamento e anlise de DNA de 4. Retire o tubo do banho-maria e
plantas, consulte o "Manual de Trans- espere que a mistura atinja a tempe- 1. Dissolva o DNA isolado em 1,0
formao Gentica de Plantas" (Brasi- ratura ambiente. Adicione 15 ml de ml de tampo TE (Tris-HCl 10 mM, pH
leiro & Carneiro, 1998). Nele so apre- clorofrmio:lcool isoamlico (24:1; 8,0; EDTA 1 mM) e adicione 500 l de
sentadas diferentes tcnicas utilizadas v/v). Feche o tubo e misture manual- acetato de amnio a 7,5 M.
na transformao de plantas, assim mente por 10 minutos. 2. Feche o tubo e misture suave-
como experimentos para a deteco 5. Centrifugue a 5.000 g por 10 mente por inverso para homogenei-
de genes reprteres e anlise molecu- minutos a temperatura ambiente, para zar a soluo. Incube no gelo por 15
lares da integrao de genes em plan- separar a fase orgnica da aquosa. minutos.
tas. Para adquirir o manual, acessar via 6. Remova a fase aquosa (fase 3. Centrifugue por 30 minutos a
Internet a home page da Embrapa no superior) para um tubo novo de 50 10.000 g a 4oC. Transfira o sobrena-
endereo:
http://www.spi.embrapa.br
dante para um novo tubo. der danificar o DNA na presena do 11. Quantifique a amostra de DNA
4. Adicione 2 volumes de etanol brometo de etdio. atravs de leitura espectrofotomtrica,
absoluto ao sobrenadante e misture 4. Centrifugue a 45.000 rpm (rotor medindo a absorbncia da soluo no
suavemente por inverso. Incube Vti65) por 16 horas, em uma ultracen- comprimento de onda de 260 nm. A
por 1 hora a -20oC. trfuga, a 20oC. concentrao de DNA da amostra ser
5. Centrifugue por 10 minutos a 5. Aps a formao do gradiente, dada pela seguinte frmula:
5.000 g a 4oC. visualize a banda correspondente ao
6. Lave o precipitado com etanol DNA sob luz ultravioleta (320 nm). [DNA] = 50 g/ml x D x A260;
70% (v/v) e centrifugue novamente Colete cuidadosamente a banda com o
nas mesmas condies por 3 minu- auxlio de uma pipeta Pasteur e transfi- onde: D o fator de diluio usado
tos. ra para um novo tubo de vidro de 15 ml. para fazer a leitura espectrofotomtri-
7. Seque o precipitado e dissolva 6. Remova o brometo de etdio ca e A260 a leitura obtida no com-
em 500 l de tampo TE (Tris-HCl 10 adicionando soluo que contm DNA primento de onda de 260 nm.
mM, pH 8,0; EDTA 1 mM). Conserve 1 volume de 1-butanol ou lcool isoa-
a soluo a -20oC. mlico, ambos saturados em gua. Fe- Referncias
8. Caso seja necessrio, proceda che o tubo e misture gentilmente por
a uma repurificao por gradiente inverso at que uma nica fase se Brasileiro ACM, Carneiro VTC (eds)
de cloreto de csio. forme. (1998) Manual de Transformao Gen-
7. Centrifugue por 3 minutos a 1.500 tica de Plantas. Braslia, Embrapa-SPI/
rpm (rotor SS34) a temperatura ambi- Embrapa-Cenargen. 309 p.
Purificao de DNA total de ente, para separar a fase orgnica da Dellaporta SL, Wood J, Hicks JB
plantas por gradiente de cloreto aquosa. Descarte a fase orgnica (fase (1983) A plant DNA minipreparation:
de csio (CsCl) (Figura 2) superior), que contm o brometo de version II. Plant Mol Biol Rep 1: 19-21.
etdio, com o auxlio de uma pipeta Rogers SO, Bendich AJ (1994) Ex-
1. Dissolva o DNA isolado em 6,5 Pasteur. traction of total cellular DNA from plants,
ml de tampo TE (Tris-HCl 10 mM, 8. Repita a extrao por quantas algae and fungi. In: Gelvin SB, Schilpe-
pH 8,0; EDTA 1 mM) e transfira a vezes forem necessrias para eliminar roort RA (eds) Plant molecular biology
soluo para um tubo de ultracentr- qualquer vestgio de brometo de etdio manual. Kluwer Academic Publishers,
fuga de 10 ml. (a cor rosa deve desaparecer completa- Dordrecht.
2. Adicione 7 g de CsCl, feche o mente das fases orgnica e aquosa). Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T
tubo e misture a soluo por inver- 9. Remova o cloreto de csio preci- (1989) Molecular cloning: a labaratory
so. Caso necessrio, aquea a solu- pitando o DNA pela adio de 2 volu- manual. 2nd Edition. Cold Spring Harbor
o em um banho-maria a 30oC para mes de gua destilada e 6 volumes de Laboratory Press, New York.
facilitar a dissoluo. etanol absoluto. Incube por 30 minutos Shioda M, Marakami-Muofushi K
3. Adicione 700 l de brometo de a 4oC. (1987) Selective inhibition of DNA poly-
etdio a 0,1% (p/v). Feche o tubo e 10. Centrifugue a 12.000 rpm (rotor merase by a polysaccharide purified from
misture gentilmente por inverso SS34) durante 30 minutos, a 4oC. Des- slime of Phisarum polycephalum. Bio-
para homogeneizar a soluo. A carte o sobrenadante e dissolva o pre- cem Biophys Res Commum 146:61-66.
partir dessa etapa, proteja seu tubo cipitado em 500 l de tampo TE (Tris- Weising K, Nybom H, Wolff K, Meyer
com um papel-alumnio para evitar HCl 10 mM, pH 8,0; EDTA 1 mM). W (1995) DNA fingerprinting in plants
exposio luz ambiente, que po- Conserve a soluo a -20oC. and fungi. CRC Press, Boca Raton.

A B

Figura 2: Purificao de DNA


total de plantas por meio de
gradiente de cloreto de csio.
(A) Separao dos diferentes
componentes presentes na
soluo aps o isolamento do
DNA total e ultracentrifugao
em rotor de ngulo fixo. (B)
Eliminao do brometo de
etdio da soluo de DNA.

Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento 43


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sidade Federal do Par e lendo a repor- sobre Seleo de Embries. Os Senho-
tagem Clones Tecnolgicos, a Salvao Meu nome Isabel Cristina, sou estu- res tem alguma informao a respeito?
da Lavoura do Cacau, da edio nme- dante do curso de biologia. Adorei a Poderiam indicar algum consultor no
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municao) 021.73.214-3015; Raul
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gem foi feita por Lucas Tadeu Ferreira e virtual da Embrapa, no site www.spi.embrapa.br, ou pelos telefones (021)
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dar uma dica: onde posso encontrar empresa Biotecnal denominado O Fantstico Mundo dos Probiticos.

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