Protocolo para plaqueamento de 24 poos

o Ver se tem placa de 24 poos.

o Pegar a tripsina e o meio completo e colocar no banho maria.
o Pegar a cmara de Neubauer e limpar.

1- Verificar no microscpio se as clulas esto viveis

2- Remover meio e jogar fora
3- Colocar 3 l (na garrafa mdia) e 1 l (na garrafa pequena) de tripsina
4- Colocar na estufa e esperar ~ 5min *verificar no microscpio se j soltaram
da garrafa
5- Neutralizar com o meio completo com a mesma quantidade de tripsina
colocada
6- Colocar num tubo de 15 l, centrifugar e remover o sobrenadante
7- Colocar mesma quantidade de meio completo
8- Homogeneizar, aplicar 10 l na cmara de Neubauer e contar no microscpio

Clculo para placa de 24 poos (em 5x10/mL)

5x10 450l
X 1000 l
450 X -------------5000 l Valor fixo para um volume de 45 l de clula
suspensa
5000
X= 450

X= 11,11x10 l /mL

Pegar valor da contagem de clulas e dividir por 4. O valor obtido

ser para 1000 l

Contagen de clulas
1000 l
4

11,11 x 1 0 4 l X

Portanto:

N=N de Clulas contadas

Q= Quantidade de clulas

N 4 = N l /mL
N x 11 = Quantidade de clulas que tem que retirar.
Q 11.000 = Quantidade de meio para retirar.
9- Pegar um tubo de 15 l e colocar a quantidade de meio e clulas que foram
calculados
10-Homogeneizar, pegar 450 l e colocar em cada poo da placa de 24.
11-Guardar na estufa.