VALIDACIN DEL CONTROL

HIGINICO
DE PRODUCTOS FARMACUTICOS
NO OBLIGATORIAMENTE
ESTERILES
 Validacin del Control Higinico de Productos
Farmacuticos No obligatoriamente estriles

Objetivo de la validacin
Documentar, a travs de estudios de laboratorio, que el
mtodo utilizado -ensayado en condiciones claramente
establecidas- justifica su utilizacin para la cual se
propone.

Fundamento emprico de la validacin

Consiste bsicamente en desafiar el producto objeto
del control con un determinado nmero de
microorganismos -en condiciones de ensayo definidas-
y evaluar su comportamiento a travs de la
recuperacin microbiana que se obtenga.
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Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles

Desafo principal de la validacin

Demostrar que el producto controlado en esas
determinadas condiciones de ensayo no inhibe la
viabilidad de los microorganismos que pudieran estar
presentes en el mismo.

Demostrar la neutralizacin de las propiedades

antimicrobianas de un producto cualquiera sea su
origen (presencia especfica de conservadores o
simplemente su formulacin.)
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Estrategias para neutralizar propiedades

inhibitorias de un producto

* Utilizacin de Inactivantes qumicos o

biolgicos (especficos o no especficos).
* Eleccin del mtodo por filtracin.
* Realizacin de diluciones/Utilizacin de
modificadores.
* Combinacin de opciones anteriores
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Factores principales a considerar en la validacin
Microorganismos desafiantes:
- Naturaleza del inculo
- Preparacin y tamao del inculo del inculo

Condiciones especficas de ensayo estandarizadas y

reproducibles (Tpo, temp, membranas y prefiltros,
buffers, etc)

Condiciones de recuperacin
- Medio de recuperacin
- Condiciones de incubacin
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Protocolo propuesto para la validacin
Se define una secuencia de estapas -de ejecucin
sucesiva- en funcin de las recuperaciones
obtenidas para cada etapa de ensayo

Consideraciones generales a evaluar en todos las

etapas

Propiedades de crecimiento de los medios

Control negativo

Control Higinico del producto (siguiendo la

tcnica que se est validando)
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1. Etapa inicial (Metodologa directa - Sin estrategia de

neutralizacin)
Se ensaya sobe dos grupos
a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra +
Inculo

Criterios de aceptacin:
- generales para todas las etapas:
Control negativo sin crecimiento.
Evaluacin de resultados del Control higinico
(de aceptarse la etapa)
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Criterios de aceptacin (continuacin):
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse 3 ensayos independientes. Para cada
uno de ellos:

a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperacin

para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70% respecto
del Grupo viable.

b. Recuperaciones en medio lquido: debe observarse

crecimiento abundante para ambos grupos dentro de los
7 das de iniciado el desafo para cada microorganismo.
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2. Segunda etapa (Metodologa directa con

neutralizacin)
Se ensaya sobre tres grupos
a. Grupo viable (control positivo): Buffer + Inculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra +
Neutralizante + Inculo
c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inculo

Interpretacin:
Verificar el cumplimiento de la eficacia de neutralizacin
y la posible toxicidad del neutralizante a partir de la
comparacin entre grupos (a/b y a/c, respectivamente)
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Neutralizantes comunes compendiados:

Tipo de agente microbiano USP XXIV EP Supp 2000

Fenlicos Dilucin Lauril sulfato de sodio

Tween 80 + Lecitina
Yema de huevo
Organo-mercuriales Tioglicolato Tioglicolato
Halgenos Tiosulfato Tiosulfato
Comp. Amonio 4rio Lecitina Yema de huevo
Alcoholes Dilucin
Parabenos Tween
EDTA Iones Ca2+ / Mg2+
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Criterios de aceptacin:
- Generales: deben cumplirse
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse 3 ensayos independientes y para cada
uno de ellos:
a. Recuperaciones en placa: el porcentaje de recuperacin
para el Grupo ensayo no debe ser menor al 70%
respecto del Grupo viable.
b. Recuperaciones en medio lquido: debe observarse
crecimiento abundante para los tres grupos dentro de
los 7 das de iniciado el desafo para cada
microorganismo.
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Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles

3. Tercera etapa (Metodologa por filtracin con o sin

neutralizacin)
Se ensaya sobre cuatro grupos (Diseo con neutralizador)
a. Grupo viable (control positivo): Buffer x Memb + Inculo
b. Grupo ensayo (muestra desafiada): Muestra x Memb +
Neutralizante + Inculo
c. Grupo control toxicidad: Neutralizante + Inculo
d. Grupo control de la tcnica por filtracin: Inculo
directamente en placa

Interpretacin: Verificar la inhibicin que genera la

membrana y el vaso de filtracin sobre el microorganismo
inoculado, a partir de la comparacin entre grupos (a/d)
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Criterios de aceptacin:
- Generales: deben cumplirse
- Particulares de esta etapa:
Deben realizarse al menos 3 ensayos independientes y
para cada uno de ellos:
Los porcentajes de recuperacin para metodologa por
filtracin para los diferentes grupos deben resultar
similares.

Aclaracin: El mtodo por Filtracin podr realizarse si la

muestra puede ser aceptablemente filtrada. De ser
necesario un tratamiento de muestra adicional, su accin
sobre la viabilidad de los microorganismos debe ser
evaluada (por ejemplo, ciertas suspensiones, cremas,
ungentos, etc)
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Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles
4. Cuarta etapa (Metodologa por Dilucin/Combinaciones)

La Tcnica de dilucin puede utilizarse en forma

complementaria a una metodologa directa o una metodologa
por filtracin (considerndose como una preparacin de
muestra especial).
Tambin podr realizarse conjuntamente a la utilizacin de
agentes de neutralizacin.
Cualquiera sea la situacin los lmites de aceptacin dependern
del protocolo seguido.
Inconveniente de la metodologa: Las recuperaciones por unidad
de muestra de ciertas determinaciones no podrn satisfacer los
lmites establecidos por la Autoridad Sanitaria.
 Validacin del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles

Ciertos productos No Obligatoriamente Estriles deben

asegurar -por su actividad antimicrobiana per se gracias al
agregado de ciertos conservadores- condiciones protectoras
frente a una contaminacin microbiana desfavorables para
su proliferacin durante el almacenamiento y/o la utilizacin
del producto.

As el Ensayo para determinar la efectividad antimicrobiana

debe realizarse para todo aquel producto que contenga un
conservador, para presentaciones multidosis tpicas y orales,
como as tambin para aquellas formas oftlmicas, ticas,
nasales -entre otras- que presenten agua en su formulacin.
Validacin del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles

Fundamento del Ensayo de Efectividad antimicrobiana

Desafiar el producto con un inculo determinado de diferentes
microorganismos, almacenar las muestras inoculadas en
condiciones claramente establecidas y a partir de las mismas,
recoger y procesar en condiciones de ensayo definidas
muestras a diferentes tiempos.

Los lmites de aceptacin del Ensayo se establecen en funcin

de las recuperaciones logradas a lo largo del tiempo
(disminucin o mantenimiento de la carga microbiana -segn
corresponda-) y de acuerdo al grado de proteccin deseado
para el tipo de producto que est siendo desafiado
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
Esquema General

MICROORGANISMOS DESAFIANTES
INOCULO
CONCENTRACIN

TIPO

INCUBACIN DE LAS MUESTRAS

INOCULADAS
PERIODICIDAD DEL MUESTREO
CRITERIOS DE ACEPTACIN
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

MICROORGANISMOS DESAFIANTES
USP 24
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
Escherichia coli ATCC 8739
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Opcionales: contaminantes del producto
BP 2000
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404
Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Staphylococcus aureus ATCC 6538
Opcionales: contaminantes del producto
Escherichia coli ATCC 8739
Zigosaccharomyces rouxii NCYC 381
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

INOCULO
CONCENTRACIN

USP 24: 105 106 UFC/g o mL producto

BP 2000: 105 106 UFC/g o mL producto

TIPO
Uso 24: nico
BP 2000: nico
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

INCUBACIN DE LAS MUESTRAS

INOCULADAS
20 C - 25 C,

Protegidas de la luz

PERIODICIDAD DEL MUESTREO

USP 24: 0, 7, 14, 28 das
BP 2000: 0, 6h, 24h, 2 d, 7d, 14d, 28das
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

CRITERIOS DE ACEPTACIN
USP 24:
Categora 1A Inyectables, otros parenterales, ticos,
estriles nasales, oftlmicos, todos con
vehculos acuosos
Categora 1B Tpicos con vehculos acuosos, nasales no
estriles y emulsiones, a aplicar sobre
mucosas
Categora 1C Orales con vehculos acuosos

Categora 2 Todos los de categora 1 con vehculos no

acuosos
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

CRITERIOS DE ACEPTACIN
Categora 1A Bacterias: reduccin de al menos 1 log en 7
das, 2 log en 14 das y sin incremento a 28
das. Hongos sin incremento hasta el da 28.
Categora 1B Bacterias: reduccin de al menos 2 log en
14 das y sin incremento a da 28.
Hongos: sin incremento hasta el da 28.
Categora 1C Bacterias: reduccin de al menos 1 log rn
14 das, sin incremento hasta el da 28.
Hongos: sin incremento hasta el da 28
Categora 2 Sin incremento en los das 14 y 28.
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
CRITERIOS DE ACEPTACIN
BP 2000: Preparaciones oftlmicas y parenterales

Reduccin en log

6h 24 h 7d 14 d 28 d

Bacterias A 2 3 - - NR

B - 1 3 - SI

Hongos y A - - 2 - SI
levaduras
B - - - 1 SI

NR: sin crecimiento; SI: sin incremento

 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

CRITERIOS DE ACEPTACIN
BP 2000: Preparaciones orales

Reduccin en log

14 d 28 d

Bacterias 3 Si

Hongos y levaduras 1 SI
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana
CRITERIOS DE ACEPTACIN
BP 2000: Preparaciones tpicas

Reduccin en log

2d 7d 14 d 28 d

Bacterias A 2 3 - SI

B - - 3 SI

Hongos y A - - 2 SI
levaduras
B - - 1 SI
 Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

CRITERIOS DE ACEPTACIN
BP 2000: Preparaciones ticas

Reduccin en log

6h 24 h 7d 14 d 28 d

Bacterias 2 3 - - NR

Hongos y - - 2 - SI
levaduras
 Validacin del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana en
Productos Farmacuticos No Obligatoriamente Estriles

Validacin del Ensayo de Efectividad Antimicrobiana

Evidenciar y documentar la adecuabilidad del procedimiento

para demostrar la reduccin ( mantenimiento) deseada en las
recuperaciones obtenidas a travs del tiempo para cada
microorganismo.

Nuevamente identificar las condiciones de ensayo establecidas

para neutralizar la actividad antimicrobiana del producto (de
manera de lograr que no interfieran en la interpretacin de los
recuentos reducidos hallados) ser el desafo principal de las
tareas de validacin para esta metodologa.
 ARBOL DE DECISION ATRIBUTOS DE CALIDAD MICROBIOLOGICA DE LOS
SI PRODUCTOS NO OBLIGATORIAMENTE ESTRILES

Contiene el producto conservadores antimicrobianos?

NO SI

Establecer criterios de aceptabilidad para el conservador

El producto, inherentemente, puede soportar el y llevar a cabo la validacin de la efectividad del mismo
crecimiento de microorganismos de prueba, superar sobre el producto, usando una concentracin del conservador
los lmites de aceptabilidad (criterios de farmacopeas) menor igual a la mnima especificada.
durante su desarrollo?

NO SI
Establecer criterios microbianos
Es el producto una forma farmacutica slida, NO de aceptabilidad
seca, por ejemplo: oral en polvo?

SI

Proveer evidencia cientfica que Efectuar el control higinico lote a lote

demuestre las propiedades inhibitorias del
producto NO

Todos los lotes cumplen en forma consistente con

los lmites microbianos de aceptacin?
SI
Los lmites y criterios de aceptabilidad
microbiolgica y su prueba pueden no ser
Realizar pruebas de los lmites microbianos en lotes no
necesarios.
consecutivos proveer informacin cientfica para no
realizar el control higinico en forma rutinaria.