Hernndez Villa Norma Gabriela Microbiologa General 4IM1

CUESTIONARIO TERCER PARCIAL

Laboratorio

1.- Defina qu es actividad de agua (aw).

Es la razn entre la presin de vapor del aire en equilibrio con una sustancia o solucin
y la presin de vapor, a la misma temperatura del agua pura, es as como se expresa la
disponibilidad del agua que tenga un organismo a su disposicin para crecer, y no solo
depende del contenido de agua en el ambiente, sino tambin de la concentracin de solutos
en ella, ya que las sustancias disueltas tiene una gran afinidad por el agua, lo que hace
que sta sea inutilizable por los organismos. Es la cantidad de agua metablicamente
disponible

2.- Qu es un organismo xeroflico? Qu es un organismo xerotolerante? En qu

condiciones crece cada uno? De un ejemplo.

Organismo Definicin Ejemplo

xeroflico Organismos que crecen a altas concentraciones de Tetragenococcus shalophila
solutos (Bajas cantidades de Aw)
xerotolerante Los organismos que no requieren altas concentraciones Bacterias como
de solutos para crecer pero que pueden soportarlas. Staphylococcus aureus
Hongos
Se deberan sembrar en medios con baja actividad de agua. Si crecen, es necesario sembrar
en un medio a ms alta actividad para comprobar si son xeroflico o xerotolerantes.

3.- Qu es la presin osmtica? Qu estructura compensa y soporta la presin osmtica en

una clula bacteriana?
La presin osmtica es la presin ejercida sobre una membrana semipermeable sometida a
diferentes concentraciones de soluto hasta llegar al equilibrio. La membrana citoplsmica
se ve afectada por cambios en la concentracin osmtica fuera de la clula. Las clulas
por su alta concentracin de componentes celulares tienen una presin osmtica mayor que
el medio de cultivo. Siempre hay una tendencia natural de entrada de agua a la clula y de
mantenerse en un estado de turgencia (fenmeno por el cual las clulas al absorber agua,
se hinchan, ejerciendo presin contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas)
La pared celular la protege del choque osmtico. Para adaptarse a los ambientes con altas
concentraciones de solutos o baja actividad de agua, los organismos tienen que controlar
la prdida del agua citoplsmica debida a la elevada osmolaridad del ambiente
incrementando su concentracin de solutos internos, ya sea bombeando iones hacia el
interior de la clula o a travs de la acumulacin de un soluto compatible en su
citoplasma, el cual no debe inhibir el metabolismo celular y puede ser sintetizado por el
microorganismo (azcares, polialcoholes, etc.) o tomado del exterior y acumulados
activamente (K+, betana). La pared celular compensa y soporta la presin osmtica. Los
micoplasmas son clulas bacterianas sin pared celular.

4.- Explique en qu consisten los fenmenos de plasmlisis y plasmptisis.

plasmlisis Fenmeno en el cual el agua que se encuentra dentro de la clula sale al medio
hipertnico, por lo que la clula se deshidrata y muere.
plasmptisis Fenmeno por el cual las clulas al absorber agua, se hinchan, ejerciendo presin
contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas, se rompen y la clula
muere.

5.- Definir:

Organismo Definicin Ejemplo

Osmoflico Organismos que requieren de medios con gran osmolaridad. Se Vibrio fischeri
desarrollan en medios hipertnicos
Osmotolerante Crecen a Alta actividad de Agua (Aw). No requieren de Staphylococcus aureus
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presiones altas para su crecimiento, pero las soportan.
Haloflico Organismos que requieren altas concentraciones de sal para Halobacterium
vivir
Sacaroflico Organismo que requere altas concentraciones de azcar para Saccharomyces cerevisiae
vivir.
6.- Discuta los resultados que observ en su prctica de laboratorio.

Resultados de concentracin de NaCl Resultados de concentracin de sacarosa

Staphylococcus aureus Presenta una pared Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp
celular que representa el 50% del peso La tolerancia que presentan las levaduras a
molecular de la bacteria y el la presin osmtica y por lo tanto
peptidoglicano funciona como estabilizador resistencia a las altas concentraciones de
osmtico y evita la lisis de la bacteria sacarosa se debe a que algunas de estas
por al gradiente en la concentracin de levaduras como S. cerevisiae posee una
sal. Contiene Prolina como soluto familia multigenica de transportadores de
compatible. azucares.
Escherichia coli Es una bacteria Gram (-)
la cual en su pared celular consta de una En las cepas bacterianas se observa
capa muy delgada de peptidoglicana y una nicamente que algunos crecen a
membrana externa, a parte de que posee determinadas concentraciones de azcares.
Colina como soluto compatible que le ayuda
a resistir la presin osmtica
Bacillus megaterium y Bacillus subtilis
Posee una capa gruesa de peptidoglicana la
cual le proporciona rigidez y resistencia
osmtica. Contiene Betana (glicnbetana),
un derivado trimetilado de la glicocola
(contenida en cianobacterias y en algunas
Gram-positivas) como soluto compatible.
Micrococcus luteus tiene una gruesa pared
celular que puede abarcar tanto como el 50%
del materia celular. Contiene Betana
(glicnbetana), un derivado trimetilado de
la glicocola (contenida en cianobacterias y
en algunas Gram-positivas) como soluto
compatible.
Salmonella typhi. Posee una membrana
externa as como una pared delgada de
peptidoglicana
Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp A las
levaduras les resultan txicos algunos
iones lo que inhibe su crecimiento en este
caso el ion Na+.

Microorganismo Clasificacin
NaCl Sacarosa
Staphylococcus aureus Halofilico moderado Sacarotolerante
Escherichia coli Halotolerante Sacarotolerante
Bacillus megaterium Halotolerante Sacarotolerante
Bacillus subtilis Halotolerante Sacaroflico moderado
Micrococcus luteus Halotolerante Sacaroflico moderado
Salmonella typhi Halotolerante Sacarotolerante
Sacharomyces cerevisiae No soporta bajas a concentraciones Sacaroflico
Pichia sp No soporta bajas a concentraciones Sacaroflico
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7.- Cules son las temperaturas cardinales?

Para cada microorganismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no existe
crecimiento, una temperatura ptima a la cual el crecimiento es el ms rpido posible y
una temperatura mxima, rebasada la cual, no existe crecimiento. Estas tres temperaturas
son denominadas temperaturas cardinales.

8.- Mencione la clasificacin de los organismos con base en su temperatura ptima.

Mencione un ejemplo en cada caso y dnde encontrara a cada uno.

Clasificacin Caractersticas
Psicrfilos Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por debajo de los 15 C.
Ej: Polaromonas vacuolata, flavobacterium.
Mesfilos Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento entre 15 y 45 C.
Ej: E. coli, Bacillus Megaterium
Termfilos Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por arriba de los 45C.
Ej. Pyrococcus furiosus, Thermus aquaticus
Hipertermfilos Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por arriba de los 80C.
Ej. Sulfolobus acidocaldarius

9.- Qu es un organismo euritrmico? Qu es un organismo estenotrmico?

Euritrmico Organismos que crecen en intervalos de temperatura amplios.

Ejemplo: Enterococcus faecalis 0 y 44C
Estenotrmic Organismos que crecen en intervalos de temperatura estrechos.
o Ejemplo: Neisseria gonorrhoeae 30 y 38 C

10.- Cules son los mecanismos adaptativos a temperaturas bajas o elevadas extremas que
le permiten sobrevivir a los microorganismos?

Mecanismo Descripcin
Agrupacin Entre ms agrupados estn las clulas del centro pueden protegerse mejor
que los microorganismos que se encuentran aislados
Enzimas Las enzimas de los organismos termorresistentes difieren en unos cuantos
aminocidos que las de los organismos que no lo son, sin embargo, estos
cambios propician un plegamiento especial, plenamente homofbico, en la
protena que le confiere esa termorresistencia
Formacin de Los puentes salinos interpeptdicos incrementan la capacidad calorfica
puentes de sal de la protena y las hace ms resistentes al calor.
Estructura de Los organismos psicroflicos presentan cadenas de cidos grasos
la membrana insaturados en su membrana, lo que la hace ms fluda, en cambio los
citoplsmica termfilos e hipertermfilos poseen en su membrana ac. Grasos saturados
lo que le da mayor rigidez a la membrana impidiendo que se fluidice tan
fcilmente por accin de la temperatura.
En las arqueas Enlaces ter, monocapas lipdicas, y cadenas de isoprenos.

11.- Cul es la importancia biotecnolgica de los productos de los organismos

extremfilos?
Las enzimas de estos microorganismos son ms resistentes y que las enzimas de los
organismos mesfilos,lo que prolonga su vida til. Esto nos permite utilizarlas en
procesos biotecnolgicos, catalizando reacciones a temperaturas extremas, como lo es el
caso de la DNApol de Thermus acuaticus, que vive en aguas termales entre 55-88C. Esta
plimerasa, llamada Taq polismerasa, ha permitido que la PCR (Protein Chain Reaction) pueda
llevarse a cabo ms eficientemente, utilizando actualmente lo que se conoce como
termocicladores, en donde sta tcnica para la amplificacin de secuencias especficas de
DNA puede llevarse a cabo en ciclos repetitivos con una sola muestra de enzima. Tambin en
procesos industriales se reduce la contaminacin, al hacer ms eficientes los procesos.
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12.- Qu es el tiempo trmico mortal y el punto trmico mortal?

Tiempo trmico mortal Tiempo en el cual mueren todas las clulas a una temperatura dada
Punto trmico mortal Mnima temperatura para que todos los organismos de una poblacin
mueran en 10 minutos de exposicin.

13.- Qu evalu en la prctica de tiempo trmico mortal y punto trmico mortal?

Yo? Nada. Pero en esa prctica se evala el punto trmico mortal y el tiempo trmico
mortal de diferentes microorganismos en diferentes soportes o medios de suspensin: agua,
jugo de naranja, leche y sacarosa.

14.- Qu soporte protegi ms a las bacterias a temperatura elevada: leche, agua o jugo?
La proteccin de las bacterias depende del medio. En este caso, por las altas
concentraciones de protenas y cidos grasos, la leche result protegerlos ms, el jugo
tiene un pH elevado, es el siguiente y por ltimo el agua.

15.- Qu es pasteurizacin? Cul es el fundamento? Descrbalo ampliamente.

Es un proceso que reduce las poblaciones microbianas en los alimentos que son sensibles al
calor, debe su nombre a su descubridor, Louis Pasteur. El procedimiento no es una forma de
esterilizacin puesto que existen numerosos microorganismos capaces de resistir a estos
tratamientos, denominados termodricos, por ello, la pasteurizacin slo es un tratamiento
trmico cuyo objetivo es la destruccin de la mayor parte de las clulas vegetativas de
los microorganismos patgenos que alteran los alimentos, conducindolos a procesos de
fermentacin indeseables o al dao de las personas que los consumen. Actualmente se
consigue haciendo pasar el alimento por un intercambiador de calor, con una velocidad de
flujo y una temperatura determinadas (que no excede los 100 C), y luego se enfra
rpidamente (4C) para producir un choque trmico que evita que el DNA y las protenas
desnaturalizadas por el calor se renaturalicen. Las bacterias gram (-) son ms
susceptibles a este cambio brusco, porque su pared celular de peptidoglicana es ms
delgada, sin embargo es en este grupo donde se encuentran la mayor parte de patgenos
entricos.

16.- Cmo se llaman los microorganismos que resisten la pasteurizacin? Mencione tres
ejemplos.
Termodricos. Streptococcus, Micrococcus y Lactobacillus, Lysteria Monocitogenes.

17.- Explique ampliamente cmo realiz la pasteurizacin en el laboratorio, en qu medios

sembr y cmo interpret los resultados; cmo obtuvo el porcentaje de sobrevivencia y cmo
evalu que el procedimiento fue eficiente.

De un tubo de ensaye que contena leche a la que se le adicionaron las cepas Escherichia
coli y Bacillus subtillis se hicieron dos series de diluciones decimales. La primera, se
realiz con la leche sin someterse a un proceso de calentamiento a 63c, 30 minutos y
rpido enfriamiento en un bao de hielo, la segunda se realiz con la leche que ya haba
sido sometida a este proceso de pasteurizacin.

Para determinar el % de sobreviviencia, se sembr 0.1 mL de muestra en cajas de gelosa

simple de cada una de las diluciones y se extendi con varilla acodada, para despus
incubarse a 37C. Se realiz la cuenta de colonias en las placas que tuvieran entre 25 y
250 colonias, tanto para la serie de placas sembradas con leche antes de la pasteurizacin
como despus de la pasteurizacin y se determin el nmero de UFC/mL de muestra,
reportndose como UFC/mL antes de pasteurizar y UFC/mL despus de pasteurizar. De aqu se
dijo que las UFC/mL antes de pasteurizar son equivalentes al 100% de sobrevivencia, y por
lo tanto, por una relacin se obtiene el % de sobrevivencia para UFC/mL despus de
pasteurizar.
La eficiencia se considera como la unidad menos el % de sobrevivencia.
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Tambin se realiz una prueba cualitativa, sembrando en placas de gelosa simple y medio
EMB por estra cruzada a partir de las muestras de leche antes y despus de la
pasteurizacin, en ambas placas pudo identificarse la presencia de ambos microorganismos
para la siembra de la muestra antes de la pasteurizacin: E. coli era identificable en el
medio EMB como colonias oscuras con brillo metlico, ya que E. coli es una bacteria gram
(-) y Bacillus subtillis se observaba en medio EMB como una colonia opaca, blanca y de
bordes irregulares y sabemos que es una gram (+), en el medio gelosa simple no era tan
apreciable la diferencia salvo que E. coli presentaba aspecto hmedo a diferencia de B.
subtillis y bordes definidos. Sin embargo en las placas sembradas despus de la
pasteurizacin solo el gram (+) creci, E. coli haba sido eliminada, por lo cual sabemos
que la pasteurizacin se llev a cabo de manera eficiente.

18.- Cmo evalu el efecto del pH sobre el crecimiento microbiano? Mencione la

clasificacin de los organismos con base en su pH ptimo. Qu mecanismos tienen los
organismos para poder resistir los bajos y altos de pH?

El efecto del pH se evalu sembrando cada cepa en tubos de ensaye con caldo nutritivo y
extracto de levadura al 0.25% con el pH ajustado a 3, 5, 7, 9 y 11; posteriormente se
realiz la lectura de crecimiento despus de incubar a 37 C. El crecimiento se evalu por
el mtodo de las cruces, al realizar las grficas correspondientes (Crecimiento-pH) se
obtuvieron las curvas de crecimiento para cada microorganismo, con las cuales fue posible
clasificarlos con base en su pH ptimo de crecimiento:

Clasificacin pH ptimo
Acidfilos* Aquellos que crecen en pH 0-5.5
Neutrfilos Aquellos que crecen en pH 5.5-7
Alcalfilos* Aquellos que crecen en pH 8.5-11.5
*** Obligados: cuando son incapaces de crecer o mueren en pHs cercanos a la
neutralidad

Los organismos pueden resistir a los altos y bajos de pH gracias a que sus enzimas se han
adaptado a los pH extremos. El pH intracelular debe ser neutro, para ello algunas
bacterias como Helicobater pylori tienen enzimas ureasas que degradan la urea hasta
amoniaco, que es un compuesto que alcaliniza el medio, as puede neutralizar el medio
cido del estmago.

19.- Defina microbicida y Microbiosttico.

Microbicida Agente qumico capaz de eliminar a un microorganismo

Microbiosttico Agente qumico que inhibe a un microorganismo pero que si deja de estar
presente,el microorganismo puede crecer.

20.- Qu es un colorante? Cules son sus usos en microbiologa? Qu colorantes us en

la prctica de colorantes y a qu familia pertenecen? Qu colorantes son ms efectivos
contra los organismos?

Los colorantes son compuestos orgnicos que tienen varios usos en la microbiologa:
Tincin, agentes selectivos (MaC, cristal violeta), indicadores de pH [rojo neutro, vire:
6.4 (rosa) a 8.0 (amarillo)] y xido-reduccin.

Trifenilmetano: Moderadamente bactericidas, no tienen efecto sobre las esporas, mejor

accin contra Gram positivas. Posiblemente actan interfiriendo la oxidacin celular o en
la biosintesis de la pared celular. Dentro de esta Cristal violeta y verde de malaquita.

Acridina: Semejante a los compuesto con anilina, efecto mayor en Gram positivo pero no
tiene efecto contra Psudomonas aeruginosa, Mycobacterium y las esporas bacterianas.
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Algunos compuesto actan sobre el DNA alterando su estructura y modificando sus
propiedades biolgicas al ser molculas planas. Dentro de sta Bromuro de etidio y
acriflavina.

Colorantes se adhieren a la pared celular y impiden su ntesis, o intervienen en las

reacciones redox de la clula fungiendo como ltimo aceptor de electrones de la cadena
respiratoria.

21.- Mencione la clasificacin de los detergentes segn su carga y de un ejemplo de cada

uno. Mencione su mecanismo de accin. Cules fueron sus observaciones experimentales?

Clasificacin Mecanismo de accin Ejemplo

Disuelven molculas hidrofbicas,

disminuyen la tensin superficial y
desestabilizan la membrana.
Catinicos En solucin se ionizan, pero considerando Cetil trimetil amonio.
el comportamiento de sus grupos en Cloruro de benzalconio.
solucin, el grupo hidrfobo queda cargado
negativamente. Estn constituidos por una
cadena alqulica lineal o ramificada que va
de 10 a 14 tomos de carbono, y en su
extremo polar de la molcula se encuentra
un anin.
Aninicos En solucin forman iones, resultando SDS
cargado positivamente el grupo hidrfobo de
la molcula. Son compuestos cuaternarios de
amonio o una amina grasa en medio cido.
No-inicos Al ionizarse, se solubilizan mediante un Brij36T
efecto combinado de un cierto nmero de
grupos solubilizantes dbiles (hidrfilos)
tales como enlace tipo ter grupos
hidroxilos en su molcula.

22.- Cul es el mecanismo de accin de los metales? De tres ejemplos de metales y sus
usos en microbiologa.
Por su alta electropositividad, los metales pesados pueden reaccionar con grupos cargados
negativamente de las protena (carboxilo libres o sulfhidrilo) causando la inactivacin,
mediante una coagulacin o precipitacin, y pueden causar el efecto microbicida o
Microbiosttico.

Ejemplos: Ag, Cu, Hg, en forma de sales y disueltos en agua.

23.- Mencione cinco gneros microbianos productores de antibiticos.

Antibitico Organismo productor Organismos blanco Sitio o modo de accin

Penicilina Penicillium chrysogenum(H) BacteriasGram + Sntesis de la pared
Cefalosporina Cephalosporium acremonium (H) Bacterias Gram + y - Sntesis de la pared
Bacitracina Bacillus subtilis(B) BacteriasGram + Sntesis de la pared
Polimixina B Bacillus polymyxa (B) BacteriasGram + Membrana celular
Anfotericina B Streptomyces nodosus (B) Hongos Membrana celular
Eritromicina Streptomyces erythreus (B) BacteriasGram + Sntesis proteica
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Neomicina Streptomyces fradiae (B) Bacterias Gram + y - Sntesis proteica
Streptomycin Streptomyces griseus (B) BacteriasGram - Sntesis proteica
Tetraciclina Streptomyces rimosus (B) Bacterias Gram + y - Sntesis proteica
Vancomicina Streptomyces orientalis (B) BacteriasGram + Sntesis proteica
Gentamicina Micromonospora purpurea (B) Bacterias Gram + y - Sntesis proteica
Rifampicina Streptomyces mediterranei(B) M. tuberculosis Sntesis proteica
Griseofulvina Penicillium griseofulvum(H) Hongos dermatfitos Microtbulos

24.- Qu es un antibitico?
Sustancia qumica (metabolito secundario) producida por ciertos organismos que a bajas
concentraciones tiene la capacidad de inhibir el crecimiento o producir la muerte de
microorganismos. Cabe mencionar que aquellos compuestos que se sintetizan en un
laboratorio no pueden ser llamados antibiticos, por la definicin, stos se llaman
quimioteraputicos.

25.- Qu antibitico us en la prctica de laboratorio? Cul es su mecanismo de accin?

Discuta si sus resultados experimentales fueron congruentes con lo esperado.

Ampicilina. Acta sobre la sntesis de la pared celular. Es un -lactmico al igual que la

penicilina, y acta en ltima fase de la sntesis de la peptidoglicana de la pared
celular, unindose a una enzima transpeptidasa llamada protena fijadora de penicilina,
responsable de producir una serie de enlaces cruzados entre las cadenas de pptidos
(aminocido D-alanina). La formacin de estos enlaces o puentes es la que confiere,
precisamente, la mayor rigidez a la pared bacteriana. Por lo tanto, las bacterias sin su
pared celular estallan o son ms fcilmente fagocitadas por los granulocitos.

Los resultados coinciden con lo esperado, pues resultaron ser mayormente inhibidos los
microorganismos geam (+) aunque la presencia de la cpsula de Klebsiella Pneumoniae es un
factor que le confiere a sta cierta resistencia, a pesar de ser un gram (-).

26.- Qu mtodo us para la determinacin de la sensibilidad de antibiticos en su

prctica? Discuta las ventajas y desventajas de ellos.

Mtodo de Kirby-Bauer (multidiscos), el mtodo de dilucion en tubos y el mtodo de

dilucin en agar o vaciado en placa.

Mtodo Ventajas Desventajas

Kirby-Bauer Se pueden evaluar distintos
(multidiscos) antibiticos a la vez, y a
distintas concentraciones
Vaciado en Se puede determinar la CMI.
placa Pueden evaluarse varios
microorganismos distintos en una
sola placa.
Dilucin en Puede determinarse la CMI y la
tubo actividad bactericida o
bacteriosttica del antibitico.
El antibitico se encuentra de
manera ms homognea.
Traslape de los halos
Solo se puede trabajar con un
microorganismo a la vez
Slo se puede evaluar un
antibitico a la vez.
Es un mtodo laborioso y requiere
tiempo.
El antibitico no se encuentra lo
suficientemente homogneo.
Slo se puede evaluar una bacteria
por vez.
Utiliza mucho material.
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27.- Cmo se determina la Concentracin Mnima Inhibitoria? Qu significa? Cmo se

reporta?
Es la ms baja concentracin de antibitico capaz de inhibir la multiplicacin de una
cantidad determinada de bacterias, puede determinarse haciendo diluciones en tubo del
antibitico, y sembrando determinada cantidad de microorganismo en ellos. Incubar y
verificar hasta qu dilucin se encuentra que ya no crece microorganismo, la concentracin
de antibitico presente en esa dilucin es la CMI. Y se reporta en g/mL de antibitico.

28.- Cul es la importancia de evaluar la sensibilidad antimicrobiana?

Como medio para encontrar un tratamiento para un individuo que presenta una patologa
causada por una bacteria, para seleccionar el antibitico ms adecuado. En investigacin
para hacer anlisis rutinarios de verificacin de generacin de resistencia en especies
bacterianas.

29.- Problema: Usted aisl un actinomiceto en su prctica de laboratorio, los qumicos

orgnicos extrajeron lo que parece ser un nuevo antibitico. Usted tiene qu evaluar su
sensibilidad con bacterias, as que prepar la solucin de su antibitico a 1.5 g/mL e
hizo diluciones seriadas de la siguiente manera: 1:4, 2(1:10), 3(1:13), 2(1:5). Una vez
que hizo la dilucin en tubo, transfiri 2.5 mL a cajas de petri estriles y adicion 230
mL de agar fundido. En las cajas sembr Escherichia coli, Staphylococcus aureus,
Klebsiella pneumoniae. E. coli creci hasta el tubo 5, S. aureus creci en todas las
diluciones y K. pneumoniae creci hasta el tubo 2. Calcule la dilucin acumulada, la
concentracin en g/mL de los tubos y las cajas. Indique cul fue la C.M.I. para cada
bacteria. Con los resultados obtenidos cree que su nueva molcula es buen candidato para
ser usado como un antibitico? Qu otras pruebas deber hacer para evaluar su
antibitico?