Componente

Tecnica Fundamento s Usos

se basa en las diferencias de migracion de los
componentes de una mezcla sobre una fase
estacionaria por influencia de una fase movil, Todos
los sistemas cromatograficos constan
fundamentalmente de dos fases; una de ellas es la
fase estacionaria, que puede ser solida, liquida o una
mezcla solido-liquida inmovilizada. La segunda fase,
la fase movil, puede ser liquida o gaseosa. La
seleccion de las fases se hace de forma tal que los
Cromatograf compuestos a separar tengan distintos coeficientes
a de distribucion y de acuerdo a las diferentes tecnicas
la separacion de moleculas de distinto tamano
utilizando materiales con estructura de gel
(polimeros organicos que poseen un reticulo poroso
tridimensional)mplica una columna rellena de
particulas de gel poroso en equilibrio con un
disolvente adecuado para las moleculas que se
desean separar. Las moleculas grandes son excluidas
de los poros del gel a medida que el disolvente los
lleva a traves de la columna y pasaran por los
espacios intersticiales mientras que las moleculas
pequenas, se retardan en su paso a traves de la
misma porque van siendo retenidos por los poros del por esta tecnica se pueden separar
gel y pasan por la columna a una velocidad menor. y purificar proteinas globulares
Los materiales utilizados son geles de dextrano hasta de 800 000 Daltons, se ha
(sephadex) , agarosa (sepharosa, Bio-gel A), utilizado tambien para estudio de
poliacrilamida (Bio-gel P), poliacriloilmorfina virus acidos nucleicos y
Columna (Enzocryl-Gel) y poliestirenos (Bio-Beads S) polisacaridos.

HPLC
 la atraccion de particulas de carga opuesta. La
separacion se lleva a cabo en columnas rellenas de
una resina de intercambio ionico: la resina cationica
tiene grupos con carga negativa y la anionica grupos
con carga positiva. Los
Q. ARCADIA HERNANDEZ BELTRAN
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intercambiadores, al poseer cargas atraen a las
moleculas de carga opuesta y las van reteniendo a lo
Intercambio largo de la columna dependiendo de su carga neta,
Ionico lo cual permite su separacion.
basa en su especificidad biologica. La tecnica
consiste en llenar una columna con una resina que
lleva fijado un ligando que posee afinidad por la
macromolecula que se quiere purificar.
Posteriormente se hace pasar a traves de la columna
la macromolecula impura inmersa en un medio La tecnica sirve para purificacion de
adecuado; la macromolecula es retenida proteinas, vitaminas, hormonas,
selectivamente, todo lo demas pasa a traves de la enzimas, receptores, complejos
columna sin ser retenido. Posteriormente se eluye la poliribosomicos, complejos
macromolecula cambiando el medio ya sea de pH o multienzimaticos y sustancias
Afinidad fuerza ionica y se obtiene pura. represoras.

es un tipo de Su principal aplicacion es la

cromatografia liquida en la cual la fase estacionaria separacion de
es solida y la fase movil es liquida. Se utiliza el las moleculas en funcion de su
termino de Cromatografia de exclusion por tamano con la
tamano. Tambien se denomina cromatografia de finalidad de estudiar el peso
Exclusion permeabilidad sobre gel (GPC) o de permeacion molecular y
molecular en gel. distribucion de los polimeros).
las sustancias problema,
pueden tener diferentes coeficientes de reparto en
dos disolventes de inmiscibilidad limitada, uno
permanece fijo en la superficie del papel fase
estacionaria generalmente en agua, la fase movil
constituida generalmente por una mezcla de
disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay
varios tipos
de cromatografia, la ascendente (papel hacia arriba),
descendente (papel invertido), radial y de
Particion separacion de zonas y sectores.
 la migracion de particulas cargadas en un campo
electrico. Los requerimientos para que una mezcla
se pueda separar por electroforesis son: que los
componentes de la mezcla tengan forma ionica y que
cada componente tenga carga neta diferente.El
desplazamiento de una particula en un campo
electrico, se denomina movilidad electroforetica (m)
y se ha demostrado que para una particula esferica
cargada, no sometida a ninguna interaccion
Electroforesis electrostatica fuerte con su medio ambiente
La electroforesis es la migracion de solutos
SDS(dodecils ionicos bajo la influencia de un campo electrico;
ulfatosodico) Estas particulas migran hacia el catodo o anodo
page gel de (electrodos - y +), en dependencia de
poiacrilamida unacombinacion de su carga, peso molecular y
electroforesis estructura tridimensional.
para la medicion de la cantidad de cromofero
producido en una reaccion de coloracion. Muchas
sustancias que no poseen una absorbancia
significativa en la region visible reaccionan
cuantitativamente con algun reactivo, produciendo
un compuesto coloreado, esta propiedad, se utiliza
para analizar dichas sustancias, produciendo un color
bajo condiciones estandar a partir de cantidades
Espectrofoto conocidas de sustancias, se miden las extinciones de
metria estas muestras utilizando un blanco de reactivos
Transiciones energeticas de electrones externos, de
enlace y no enlazantes, de moleculas generalmente
UV-visioble electrones deslocalizados.
para separacion de aminoacidos,
peptidos, proteinas, nucleotidos,
acidos nucleicos y derivados de
carbohidratos que tengan carga
electrica.
Mediante la electroforesis es posible
separar moleculas biologicas en
dependencia fundamentalmente de
su carga bajo la influencia
de un campo electrico.
Analisis bioquimicos rutinarios
cualitativos y cuantitativos,
incluyendo un gran numero de
ensayos colorimetricos.
Determinaciones enzimaticas y
estudios cineticos. Espectros
diferenciales, espectros de accion,
turbidimetria y nefelometria.
Analisis bioquimicos rutinarios
cualitativos y cuantitativos,
incluyendo un gran numero de
ensayos colorimetricos.
Determinaciones enzimaticas y
estudios cineticos. Espectros
diferenciales, espectros de accion,
turbidimetria y nefelometria.

La dialisis es una forma de filtracion molecular. Es un
proceso que separa moleculas de acuerdo con su
tamano, mediante el empleo de membranas
semipermeables que contienen poros de
dimensiones inferiores a
las macromoleculares. Estos poros permiten que
moleculas pequenas, tales como las de los
disolventes,
sales y metabolitos pequenos, se difundan a traves
de la membrana pero bloqueen el transito de
moleculas
Dialisis mayores.
La dialisis se emplea rutinariamente
para cambiar el disolvente en el
que se encuentran disueltas las
macromoleculas. Una disolucion
macromolecular se introduce en el
saco de dialisis, que se sumerge en
un
volumen relativamente grande de
disolvente nuevo. Las moleculas
pequenas pasan a traves de la
membrana
al fluido externo hasta que se
alcanza el equilibrio, las
macromoleculas permaneceran en
el interior de saco
de dialisis. El proceso puede
repetirse varias veces a fin de
sustituir completamente un sistema
disolvente por otro.