UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL

DE LOS LLANOS OCCIDENTALES

EZEQUIEL ZAMORA
VICERRECTORADO DE PRODUCCIN AGRCOLA
PROGRAMA CIENCIAS DEL AGRO Y DEL MAR
SUB-PROGRAMA INGENIERA AGRONMICA
SUB-PROYECTO APLICACIN DE CONOCIMIENTOS II

EFECTO DE LA VINAZA DE CAA DE AZUCAR

(Saccharum officinarum) SOBRE LA ACTIVIDAD
FNGICA DE UN SUELO DE VIVERO.

Autores:
Guedez Emerson. C.I: 24.616.664
Reyes Angel. C.I: 21.526.896

Guanare, Abril de 2017

 UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL
DE LOS LLANOS OCCIDENTALES
EZEQUIEL ZAMORA
VICERRECTORADO DE PRODUCCIN AGRCOLA
PROGRAMA CIENCIAS DEL AGRO Y DEL MAR
SUB-PROGRAMA INGENIERA AGRONMICA
SUB-PROYECTO APLICACIN DE CONOCIMIENTOS II

EFECTO DE LA VINAZA DE CAA DE AZUCAR

(Saccharum officinarum) SOBRE LA ACTIVIDAD
FNGICA DE UN SUELO DE VIVERO.

Autores:
Guedez Emerson. C.I: 24.616.664
Reyes Angel. C.I: 21.526.896

Tutor:
Prof. MSc. Rafael Bastidas.

Guanare, Abril de 2017

 AGRADECIMIENTOS

A nuestro tutor, el profesor Rafael Bastidas por darnos la oportunidad de llevar a cabo
este trabajo de investigacin y hacer de ella nuestra Aplicacin de Conocimientos, as como
por su gran ayuda y colaboracin en cada momento de consulta y soporte en este trabajo de
investigacin.

A la profesora Claudia Prez, coordinadora del Laboratorio de Fitopatologa por

permitirnos realizar nuestra Aplicacin de Conocimientos II en el laboratorio y por su
excelente colaboracin en el marco de ste trabajo.

A los profesores Rubn Snchez y Zoraida Surez por estar involucrados en la gua
durante el desarrollo de este trabajo, as como por sus excelentes asesoras que nos fueron de
mucha ayuda en determinados aspectos de sta investigacin.

Al profesor Carlos Prraga, por su colaboracin y ayuda en el desarrollo del diseo

experimental y corrida de datos del presente trabajo.

1
 NDICE DE CONTENIDO

Pg.

Agradecimientos..... I.

ndice de Contenido.. II.

ndice de Cuadros.... III.

ndice de Figuras.. IV.

ndice de Grficos.. V.

Resumen.... VI.

Introduccin... 1.

Objetivos......... 3.

Revisin bibliogrfica............ 4.

Materiales y mtodos. 8.
- Fase de Campo. 9.
- Fase de Laboratorio.. 9.

Resultados y Discusin..... 18.

Conclusiones.......................................................................................................................... 25.

Recomendaciones.. 26.

Bibliografa 27.

Anexos 31.

2
 NDICE DE CUADROS

Pg.

1.- Concentraciones del producto usado 9.

2.- Tratamientos aplicados en funcin del tiempo... 11.

3.- Esquema del diseo de los tratamientos con sus repeticiones en el tiempo... 15.

4.- Nmero total de UFC por tratamiento 18.

5.- Anlisis de varianza (ANDEVA) aplicado la cantidad de UFC de hongos en tres perodos
de seis tratamientos.. 19.

6.- Promedio de UFC y significancia, combinando los perodos... 20.

7.- Aproximacin a F de Kruskal y Wallis y significancia, para la cantidad de UFC por

perodos 22.

3
 NDICE DE FIGURAS

Pg.

1.- Imagen satelital 8.

2.- Bandejas empleadas para incubar el sustrato con los tratamientos.................... 10.

3.- Frascos con solucin madre 12.

4.- Procedimiento de dilucin de concentraciones de la solucin madre 13.

5.- Tcnica de cuenta por dilucin en placa de agar 13.

4
 INDICE DE GRFICOS

1.- Promedio combinado de rangos o tendencias de Kruskal y Wallis de todos los perodos en
cada tratamiento... 20.

2.- Promedio de rango segn Kruskal y Wallis en cada perodo 23.

5
 RESUMEN

EFECTO DE LA VINAZA DE CAA DE AZUCAR (Saccharum officinarum)

SOBRE LA ACTIVIDAD FNGICA DE UN SUELO DE VIVERO.

EFFECT OF SUGAR CANE VINAZA (Saccharum officinarum) ON THE FUNGIC

ACTIVITY OF A LIVING SOIL.

Autores: Reyes, A. Guedez. E.

En los ltimos aos se han venido realizando investigaciones para encontrar

alternativas que reduzcan el uso de productos qumicos para la desinfeccin de suelos de
vivero. Ante esto, ha surgido la idea en el Laboratorio de Fitopatologa de la UNELLEZ-
Guanare de evaluar el efecto de la vinaza de caa de azcar (Saccharum officinarum) sobre la
actividad fngica de un suelo de vivero. Los objetivos de ste trabajo han sido medir el efecto
de 3 concentraciones de vinaza de caa (100, 50 y 25%) en 3 periodos de tiempo (7, 15 y 21
das). Se prepararon 6 tratamientos (Vinaza en las 3 concentraciones ya mencionadas,
formaldehdo, sustrato con agua y un testigo). Dichos tratamientos fueron evaluados en 3
periodos (7, 15 y 21 das), mediante anlisis microbiolgicos, para determinar la cantidad de
unidades formadoras colonias (UFC). Los anlisis se realizaron empleando la tcnica de
conteo por dilucin, donde se prepararon soluciones madres para cada muestra de cada
tratamiento y luego se realizaron 7 diluciones por muestra. Se implement un diseo
completamente aleatorizado con cuatro repeticiones y en cada una, se procesaron dos
muestras. Los resultados del anlisis estadstico de la varianza mostr diferencias generales
altamente significativas (P < 0,01), resultando los tratamientos T3 y T4 con menor
propensin al desarrollo de hongos, indicando que la vinaza al aplicarse de forma diluida en
concentraciones de 50 o 25%, presenta un mayor efecto biocida que la vinaza aplicada a una

6
concentracin del 100%. Por otro lado, cuando se evalu el comportamiento de los
tratamientos en el tiempo, el T5 (formaldehdo present diferencias altamente significativas
(P < 0,01), en comparacin con los tratamientos T3, T4 y T6, indicando mayor propensin a la
aparicin de hongos, Estos resultados sugieren que el uso de vinaza de caa de azcar logra
un efecto positivo en la disminucin de la poblaciones de hongos en un suelo de vivero,
pudiendo plantear la vinaza de caa de azcar como una alternativa en la desinfeccin de
suelos y sustratos para frenar un poco el uso desmedido de productos qumicos que causan
efectos secundarios indeseados en el ambiente.

Palabras clave: Actividad fngica, Vinaza de caa de azcar, Suelo de vivero, anlisis
microbiolgico.

7
 INTRODUCCIN

El suelo constituye un sistema complejo que alberga una gran riqueza de

microorganismos, los cuales establecen relaciones muy variadas y contribuyen a conformar las
caractersticas propias del suelo, participan en los ciclos del carbono, nitrgeno, oxgeno,
azufre, fsforo, hierro y otros metales, aportando a la fertilidad del suelo y a la degradacin de
diversos compuestos (Cordero y Arvalo, 2013).

El crecimiento de las plantas est condicionado en buena parte por muchos de los
microorganismos que viven en el suelo, debido a que hay grupos de microorganismos que
solubilizan o incrementan la absorcin de nutrientes, aumentando la fertilidad del suelo y
estimulando el crecimiento vegetal; mientras que otros microorganismos protegen a la planta o
evitan el ataque de patgenos. Sin embargo, hay grupos de microorganismos que solo causan
daos en los las plantas, como lo pueden ser hongos, bacterias, nematodos, entre otros
(DeBach y Rosen, 1991).

Muchos cultivos como lo son los hortcolas, frutales, forestales, entre otros, inician su
desarrollo en un vivero y por lo tanto es importante la seleccin de un buen sustrato que
permita el desarrollo ptimo de las plntulas durante su crecimiento. Los viveros (siempre que
se trabajen bien) permiten la produccin de plntulas sanas y bien desarrolladas para su
posterior trasplante al campo donde continuar el desarrollo del cultivo para su produccin
(Fernndez et al. 2006).

Las prdidas que pueden llegar a ocasionar los microorganismos fitopatgenos sobre
un cultivo pueden ser muy altas, llegando incluso a generar prdidas totales para el productor
si el o los fitopatgenos estn diseminados por todo el cultivo. Por esta razn, en los cultivos
que inician su ciclo en un vivero, se recomienda al productor realizar una desinfeccin del
sustrato o suelo que utilizar, para disminuir las poblaciones de microorganismos que puedan

1
causar daos a las plntulas durante su desarrollo (Fernndez et al. 2006).

Generalmente los productores realizan las desinfecciones de suelo empleando

productos qumicos como el Bromometano (Bromuro de Metilo), Basamid (Dazomet),
Formaldehido (nombre qumico metanal), entre otros, que si bien cumplen con la desinfeccin
del suelo, causan efectos secundarios y negativos en el ambiente (Gmez, 1996). Es por ello
que en los ltimos aos se han estudiado alternativas que cumplan con el objetivo de la
desinfeccin y sean ms amigables con el ambiente (como la solarizacin, biofumigacin,
entre otros).

Segn Ripanti et al. (2007), la vinaza es un lquido espeso que resulta despus de la
fermentacin y destilacin de la caa de azcar. Es un sub producto que en la actualidad es
desechado y por tanto sub utilizado. Ante esta situacin surge la iniciativa de determinar si la
vinaza de caa de azcar puede convertirse en una alternativa para la desinfeccin de suelos
de viveros, ms especficamente conocer sobre la actividad antifngica que pudiese demostrar
este producto.

Existe poca informacin sobre la actividad o potencialidad antifngica de la vinaza, la

mayor generacin de conocimiento sobre este sub producto tiene que ver con la fertilizacin,
sin embargo sobre la base de algunas observaciones hechas en el Laboratorio de Fitopatologa
de la UNELLEZ-Guanare surge la idea de generar esta investigacin.

El uso de la vinaza de caa de azcar como alternativa para el control de organismos

fngicos en suelo de vivero, puede traer grandes beneficios para produccin de plntulas
sanas, para el ambiente y para la economa, puesto que cumplira con la desinfeccin del suelo
(al menos de organismos fngicos), no causara daos ni efectos secundarios negativos al
ambiente y podra impulsar la utilizacin de la vinaza de caa de azcar de manera comercial.

2
 OBJETIVOS

General:

Evaluar el efecto de la vinaza de caa de azcar sobre actividad fngica

de un suelo.

Especficos:

Medir el efecto de tres concentraciones de vinaza sobre las poblaciones

fngicas del suelo.

Determinar el tiempo de accin ms efectivo de la vinaza sobre las

poblaciones fngicas del suelo.

Comparar el efecto de la vinaza de caa de azcar con el del producto

qumico utilizado (formaldehdo).

3
 REVISIN BIBLIOGRFICA

Segn Skipper (1994), en Covacevich y Echeverra (2003), los microorganismos del

suelo son responsables de numerosas y diversas actividades bioqumicas que pueden afectar el
crecimiento de las plantas. La eliminacin de microorganismos nativos puede ser necesaria
para evaluar las transformaciones efectuadas por ellos, o para estudiar el crecimiento o
actividad metablica de microorganismos especficos inoculados en el suelo. La esterilizacin
del suelo implica la destruccin de los microorganismos en activo crecimiento y sus
estructuras de resistencia tales como las esporas.

Las plantas en los viveros pueden ser atacadas por hongos, bacterias y nematodos.
Bauer (1987), Ripanti et al. (2009) consideran que todas las plantas son susceptibles al ataque
de por lo menos un hongo y muchas son afectadas por un gran nmero de estos organismos
que la invaden desde la semilla hasta la planta adulta. Estos microorganismos suelen estar
alojados en el sustrato de los viveros por lo que se utiliza para su control en la desinfeccin de
suelos de los viveros, tanto mtodos qumicos como fsicos; para el qumico se utilizan
productos como Formol, Vapam, Unifume, Basamid y Bromuro de Metilo, y en el control
fsico se han utilizado altas temperaturas, termoterapia, induccin de resistencia, bajas
temperaturas, regulacin de humedad y solarizacin.

Segn Cordero y Arvalo (2013), la desinfeccin de suelos es una prctica que se

emplea principalmente en el cultivo de hortalizas a fin de mitigar el impacto negativo de
hongos, nemtodos, insectos, bacterias y semillas de malas hierbas que habitan en el suelo y
afectan la germinacin y desarrollo de las plantas.

En la Regin Centro Occidental, los agricultores en su mayora han venido utilizando

el control qumico como nica alternativa para controlar las plagas en sus cultivos. Sin

4
embargo, en la actualidad el control qumico ha sido deficiente lo que ha obligado a la
utilizacin de dosis mayores, numerosas aplicaciones y mezclas de diferentes productos en
forma indiscriminada. Este uso irracional de plaguicidas ha originado, entre otras, situaciones
negativas, contaminacin ambiental, intoxicacin humana y animal, e incremento de los costos
de produccin (Fernndez. et al.1982).

Diversos investigadores (Agrios 1988, Morrison 1984, Dao 1976 y Sarasola 1975)
citados por Ripanti et al. (2007), concluyeron en que el Formol es un desinfectante enrgico,
sacado del alcohol metlico. Tambin se le conoce como aldehdo frmico. Se utiliza para el
control de enfermedades del suelo.

Ripanti et al. (2007) evaluaron el comportamiento del Basamid (Dazomet) y Formol

(Formaldehdo), para el control de Fusarium sp en el vivero Santa Mara (Indefor, Mrida) en
la produccin de plantas a raz desnuda, utilizando tiempos de accin de 7 y 15 das para
ambos productos. Los mismos realizaron un diagnstico de las condiciones Fsico-Qumicas y
Fitosanitarias de los bancales, previo a la aplicacin de los mtodos de desinfeccin, y tres
evaluaciones cada 15 das. Encontraron, que existe variacin en el comportamiento de cada
producto dependiendo del tiempo de cobertura, llegando a controlar al Fusarium sp hasta de
un 90% en los bancales donde se aplic el Basamid (15 das) y Formol (15 das).

Segn Hudson y Dale (1981), para poder usar el Formaldehdo se debe mezclar 1,1
litros de formol comercial (40% de concentracin) con 50 litros de agua y se aplica al suelo a
una dosis de 1,1 litros por cada m2.

La vinaza es un material lquido resultante de la produccin de etanol, ya sea por

destilacin de la melaza fermentada o de la fermentacin directa de los jugos de la caa. Su

5
origen es, entonces, las plantas de caa de azcar por lo que su composicin elemental debe
reflejar la del material de procedencia. Se trata de un material orgnico lquido que puede
contener como impurezas sustancias procedentes del proceso de extraccin de los jugos y de la
fermentacin (Garca y Rojas, 2006).

Puesto que su origen es la planta de caa, la vinaza est compuesta por materiales
orgnicos y nutrientes minerales que hacen parte de compuestos y constituyentes vegetales
como aminocidos, protenas, lpidos, cidos diversos, enzimas, bases, cidos nucleicos,
clorofila, lignina, quinonas, ceras, azcares y hormona. La naturaleza en forma normal
descompone estos materiales en procesos microbiolgicos y recicla los elementos minerales,
lo que hace lgico pensar que el destino final de la vinaza deba ser su regreso al suelo (Garca
y Rojas, 2006).

La composicin de la vinaza depende de las caractersticas de la materia prima usada

en la produccin de alcohol, en este caso melaza, del sustrato empleado en la fermentacin,
del tipo y eficiencia de la fermentacin y destilacin y de las variedades y maduracin de la
caa. La vinaza, resultante de la destilacin de melaza fermentada, tiene una composicin
elemental interesante y contiene todos los componentes del vino que han sido arrastrados por
el vapor de agua as como cantidades de azcar residual y componentes voltiles (Garca y
Rojas, 2006).

Camargo (1960), citado por Garca y Rojas (2006), encontr que la poblacin de
bacterias en un suelo incubado con vinaza, creci rpidamente de la primera a la cuarta
semana de incubacin an con una dosis tan baja como 150 m3/ha de Vinaza diluida
(concentracin de slidos de 10% m/m) existiendo un aumento poblacional del 25.3% con
respecto al suelo sin Vinaza.

Los azcares rpidamente utilizables, como pentosas, son fcilmente descompuestas

6
por los microorganismos del suelo durante los procesos de descomposicin de materia
orgnica, al tiempo que la nitrificacin y desnitrificacin se ven alterados situacin que se
puede corregir mediante la adicin de vinaza. Por ejemplo, la fijacin de nitrgeno requiere
tericamente 1.7 g de carbono por cada gramo de nitrgeno fijado, as que si el suelo tiene
bajos contenidos de carbono, la adicin de vinaza puede mejorar este proceso (Garca y Rojas,
2006).

Vicente et al. (2008), determinaron el efecto biocida in vitro de 3 tipos de vinaza

(vino, caa de azcar y de remolacha). Para dicho estudio emplearon ensayos con
concentraciones de 1, 3, 5, 7, 10 y 15% frente a 6 hongos fitopatgenos: Fusarium oxysporum
f.sp, melonis raza 0 y 1, F. oxysporum f.sp, radicis-cucumerinum, Sclerotinia sclerotiorum,
Pythium aphanidermatum y Phytophthora parasitica.

En los resultados se encontraron con que la vinaza de vino present una capacidad de
supresin de crecimiento del alrededor del 100% en concentraciones no muy elevadas, 5% y
7%, para Fusarium oxysporum f.sp, melonis raza 0 y 1, S. sclerotiorum, P. aphanidermatum y
P. parasitica y al 10-15% para Fusarium oxysporum f.sp, radicis-cucumerinum. En cambio la
vinaza de remolacha present capacidad de supresin de crecimiento fngico del 100% solo
para algunos de los fitopatgenos fngicos ensayados. En lo que respecta a la vinaza de caa,
observaron que la misma no consigui inhibir el desarrollo micelial de los fitopatgenos
ensayados.

Gmez (1996), determin el efecto de la aplicacin de diferentes dosis de vinaza

(complementada con fertilizacin mineral) en la produccin y calidad en la caa de azcar.
Los resultados que obtuvo revelaron que la vinaza increment la produccin de la caa de
azcar, sin afectar la calidad y demostrando qu puede sustituir el 55% del nitrgeno, el 72%
del fsforo (P2O5) y el 100% del potasio (K2O), provenientes de la fertilizacin mineral. Los
mejores rendimientos se encontraron en donde se usaron las dosis de 50 m 3/ha de vinaza en
plantilla y 100 m3/ha en soca I y soca II.

7
 MATERIALES Y MTODOS

El trabajo de investigacin se llevo a cabo en el laboratorio de FITOPATOLOGIA de la

UNELLEZ sede Guanare, situada en la carretera nacional va Biscucuy, exactamente en la
parroquia San Juan de Guanaguanare del municipio Guanare Estado Portuguesa, Venezuela. A
la cual le corresponden las coordenadas 4 10 91.5E y 10 02 06N UTM Huso 19 (Fig 1),
durante el perodo comprendido entre los meses de agosto del 2016 a marzo del 2017, a tal
efecto, el trabajo se dividi en dos fases descritas a continuacin:

Figura 1. Imagen satelital. Ubicacin Campus Universitario de la UNELLEZ-Guanare.

8
1-. FASE DE CAMPO.

1.1-. Obtencin de la vinaza.

La vinaza de caa de azcar fue colectada en la destilera Tiuna C.A ubicada en el

sector Las Matas del casero La Miel, en el municipio Simn Planas perteneciente al estado
Lara. La misma se envas en un recipiente de vidrio color mbar previamente desinfestado, la
muestra fue sellada, etiquetada y se traslad hasta el Laboratorio de Fitopatologa de la
UNELLEZ donde se almacen para su posterior uso.

1.2-. Obtencin del suelo.

El suelo sometido al estudio fue colectado del vivero de una plantacin de cacao
ubicada en el sector Las Guafas, en la carretera nacional va a Biscucuy, en la unidad de
produccin La Trinidad propiedad del productor Antonio Gudio. La muestra se envas e
identific y se traslad hasta el Laboratorio de Fitopatologa de la UNELLEZ donde se
almacen para su posterior procesamiento.

2-. FASE DE LABORATORIO.

2.1-. Preparacin de la vinaza.

Se emplearon tres concentraciones del producto (100,50 y 25%), a tal efecto, se

procedi a diluir con agua destilada estril (ADE) la vinaza de caa de azcar trada de la
destilera Tiuna C.A hasta obtener concentraciones deseadas (Cuadro 1)

Cuadro 1. Concentraciones del producto usado

CONCENTRACIN VINAZA (ml) ADE (ml)

100 % 100 ---
50 % 50 50
25 % 25 75

9
 2.2-. Preparacin del Formaldehdo.

Con el fin de comparar la eficacia de la vinaza como controlador de poblaciones

fngicas, se emple un producto comercial que sirvi como referencia para la aplicacin de la
vinaza en las unidades experimentales (bandejas), a tal efecto, se mezcl un litro de formol
comercial (40% de concentracin) con 50 litros de agua (Hudson y Dale, 1981). De dicha
mezcla se aplica 1,1 litros por cada m 2 de suelo, por lo tanto, para ste trabajo se emplearn
0,0726 litros (72,6 ml) ya que cada bandeja donde se colocar el sustrato mide 0,066 m 2 (30 x
22 cm).

2.3 Preparacin del sustrato.

Las unidades experimentales estuvieron representadas por bandejas de anime de 30 x

22 cm (0,066 m2), sobre estas se colocaron 250 gr de suelo y se aplicaron cada uno de los
tratamientos descritos en el Cuadro 2. Las bandejas que contenan los tratamientos de vinaza
en sus 3 concentraciones (100, 50 y 25%), se asperjaron con 72, 6 ml de dichas
concentraciones. La misma dosis (72, 6 ml) se utiliz en los tratamientos de Formaldehdo y
del sustrato + agua destilada estril. Una vez aplicados los tratamientos en las bandejas, stas
fueron cubiertas y selladas con papel envoplast, dejndolas incubadas (Fig. 2).

Figura 2. Tratamientos incubados en las bandejas.

10
Cuadro 2. Tratamientos aplicados en funcin del tiempo.

N DE TRATAMIENTO TIEMPO (DIAS)

TRATAMIENTO
TESTIGO 7
T1 TESTIGO 15
TESTIGO 21
Vinaza 100% 7
T2 Vinaza 100% 15
Vinaza 100% 21
Vinaza 50% 7
T3 Vinaza 50% 15
Vinaza 50% 21
Vinaza 25% 7
T4 Vinaza 25% 15
Vinaza 25% 21
FORMALDEHDO 7
T5 FORMALDEHDO 15
FORMALDEHDO 21
Sustrato + Agua 7
T6 Sustrato + Agua 15
Sustrato + Agua 21

2.4 Anlisis Microbiolgico.

La determinacin de los microorganismos fngicos se realiz a cada una de las

muestras una vez concluido el tiempo de incubacin y se someti a la tcnica de cuenta por
dilucin en placa de agar (Lorch et al., 1995; Bossert y Kosson, 1997 citados por Fernandez
et al, 2006).

11
 La tcnica consisti en:

a) Preparar una solucin de caldo nutritivo mas cloruro de sodio (NaCl) y dispensar 100ml en
un frasco de dilucin (N 1373), seguidamente se agregaron 10 gr del suelo en estudio y se
incubaron durante 24 hrs. a 25 2 C (Fig. 3). Al mismo tiempo se prepar una solucin
peptonizada ms cloruro de sodio (NaCl) y se dispensaron 45ml en frascos de dilucin (N
1372).

Figura 3. Frascos con solucin madre.

b) Bajo condiciones de asepsia y mechero encendido, se procedi a dispensar 5ml de la solucin

madre (caldo nutritivo ms suelo) en el primer frasco con solucin peptonizada obteniendo
una concentracin de 10-1. De la primera concentracin se tomaron nuevamente 5ml y se
trasvaso a un segundo frasco con solucin peptonizada obteniendo la concentracin 10-2, y se
repiti el procedimiento hasta obtener una concentracin 10-7 (Fig 4).

12
 Figura 4. Procedimiento de dilucin de concentraciones de la solucin madre.

c) De cada una de la concentraciones preparadas con pipeta estril se tom 1ml y se dispens en
un tubo de ensayo con 15ml de medio artificial PDAa (Agar Papa Dextrosa acidificado), se
agit y seguidamente se dispens en una capsula de petri estril, en cada caso se realizaron
cuatro repeticiones por cada concentracin (Fig 5).

Figura 5. Tcnica de cuenta por dilucin en placa de agar.

13
 Es importante sealar que el anlisis microbiolgico se realizo a cada muestra de suelo
una vez concluido el tiempo de incubacin (7, 15 y 21 das).

2.5-. Caracterizacin Macro y microscpica de los gneros fngicos.

A los 5 de la dispensacin de cada uno de los tratamientos en las placas de petri, se

procedi a cuantificar y caracterizar macro y microscpicamente cada una de las especies
fngicas que se desarrollaron.

-. Caractersticas macroscpicas: Se consideraron forma, tamao, color de la colonia y

tincin del medio en la parte posterior de la capsula de petri.

-. Caractersticas microscpicas: con la ayuda del microscopio ptico se procedi a

preparar lminas semipermanentes a fin de evaluar tamao de conidios, grosor de la hifa y
tamao del conidiforo, con la finalidad de identificar el gnero presente.

3-. Diseo experimental.

La investigacin se llevo a cabo bajo un diseo completamente aleatorizado con 6

tratamientos (Vinaza 100%, 50% y 25%; Formaldehido, Sustrato + agua y Testigo), dos
repeticiones (bandejas A y B) y 4 sub-muestras (repeticiones). (Cuadro 3).

14
 Cuadro 3. Esquema del diseo de los tratamientos con sus repeticiones en el tiempo.

7 das (R1) 7 das (R2)

Bandeja Bandeja

Testigo 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

7 das (R1) 7 das (R2)

Bandeja Bandeja

Vinaza 100% 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

7 das (R1) 7 das (R2)

Bandeja Bandeja

Vinaza 50% 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

15
 7 das (R1) 7 das (R2)
Bandeja Bandeja

Vinaza 25% 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

7 das (R1) 7 das (R2)

Bandeja Bandeja

Formaldehdo 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

7 das (R1) 7 das (R2)

Bandeja Bandeja

Sustrato + agua 15 das (R1) 15 das (R2)

Bandeja Bandeja

21 das (R1) 21 das (R2)

Bandeja Bandeja

16
 3.1-. Anlisis estadstico.

Los datos obtenidos se analizaron con el Programa STATISTIX VER. 8.0, para el
procesamiento se emple la tcnica del Anlisis de la varianza con modelo simple, aplicado a
la cantidad de UFC de hongos fitopatgenos, durante 3 perodos (medidas repetidas).
Pruebas de Kruskal y Wallis, para correccin del estadstico F por exceso de variacin y
prueba MDS de rangos para clasificacin de medias de rango de tratamiento.

17
 RESULTADOS Y DISCUSIN

Finalizado el periodo de incubacin para cada uno de los tratamientos, se procedi a

contabilizar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) cuyos resultados se muestran en el
cuadro 4.

Cuadro 4. Nmero total de UFC por tratamiento

bandejajjjBANDEJA
TRATTRTTRATAMIENTO
TI TIEMPO (DAS) R1 R2 R3 R4
T1 7 157 0 0 0
15 0 0 0 0
21 35 1.714.315 28 1.460
T2 7 208 38 46 297
15 3 3 0 3
21 147 14.287 3 1
T3 7 13 7 7 7
15 144 1 857 0
A 21 6 21 0 7
T4 7 3 1.431 6 3
15 0 1 3 4
21 1 4 0 0
T5 7 143 0 1000 0
15 14.285 14.285 0 0
21 8.850 7.451 5.993 8.572
T6 7 3 7 20 14
15 3 6 0 0
21 21 0 0 0
BBBBBB T1 7 16 7 3 17
15 4 3 1 3
21 16 0 0 0
T2 7 0 0 19 23
15 1 7 4 6
B 21 0 1 0 1
T3 7 14 0 17 16
15 1 0 0 0
21 0 1 0 0
T4 7 1 0 0 0
15 1 0 0 0
21 3 0 1 0
T5 7 143 286 143 0
15 4.285 5.714 4.285 1.432.857
21 642 1.100 2.067 417
T6 7 0 4 18 0
15 0 0 0 0
21 0 1 0 0

18
1-. Efecto de tres concentraciones de vinaza sobre las poblaciones fngicas del suelo.

El anlisis estadstico de los valores de UFC, mediante la tcnica de anlisis de la

varianza, considerando los tres perodos de evaluacin como medidas repetidas y corregido
con prueba de Kruskal y Wallis (Cuadro 5), seal diferencias altamente significativas (P <
0,01) entre tratamientos, esto se traduce en que estadsticamente los tratamientos surtieron
efecto, es decir, hubo un efecto positivo en la reduccin de las poblaciones fngicas.

Cuadro 5. Anlisis de varianza (ANDEVA) aplicado la cantidad de UFC de hongos en tres

perodos de seis tratamientos.

FUENTE DE VARIACIN Valor F (UFC) Significancia

1
Tratamiento 0,84(7,86) ** (P < 0,01 )
Perodo 0,54(2,29)1 NS (P > 0,05 )
Interaccin 1,12 NS (P > 0,05 )
(Tratamiento*Perodo)
CV% 825,941

NOTA: NS; No hay diferencias significativas; *; Diferencias significativas; **: Diferencias altamente
significativas.

NOTA: ( )1; Uso de Correccin por Kruskal y Wallis debido a exceso de variacin

El cuadro 6 y el grfico 1, sealan que los tratamientos, 3, 4 y 6, presentaron mayor tendencia

a desarrollar menor cantidad de UFC, en comparacin con el testigo absoluto (T1), es decir
que los tratamientos vinaza 50% (T3), vinaza 25% (T4), y sustrato ms agua (T6) lograron
reducir significativamente el nmero de colonias formadas.

19
 Cuadro 6. Promedio de UFC y significancia, combinando los perodos.

TRATAMIENTO Promedio ( UFC ) Significancia

T1 (Testigo) 71.503,0 (109) A
T2 (Vinaza 100%) 629,0 (77) AB
T3 (Vinaza 50%) 47,0 (70) B
T4 (Vinaza 25%) 61,0 (70) B
T5 (Formaldehdo) 63.022,0 (102) B
T6 (Sustrato + Agua) 3,0 (51) B
NOTA: Letras distintas en la misma columna indican promedios diferentes.
NOTA: ( ); Promedio de rangos segn Kruskal y Wallis

Grfico 1. Promedio combinado de rangos o tendencias de Kruskal y Wallis de todos

los perodos en cada tratamiento.

Los tratamientos con vinaza T3 y T4, lograron una reduccin del nmero de UFC, esto
puede ser explicado sobre la base de la composicin qumica de la vinaza, diversos autores
tales como Garca y Rojas (2006), Chvez (1985), Lezcano y Mora (2005), Rodella et al
(1981) citado por Santos et al (2009) han sealado que en los anlisis qumicos de vinazas de

20
caa de azcar los principales componentes son nitrgeno (N), Fsforo (como P2O5) Potasio
(como K2O) Calcio (como CaO) Magnesio (como MgO) Sulfatos (como SO4), elementos
menores como el Manganeso (Mn) Cobre (Cu) Zinc (Zn) Boro (B). Es importante sealar que
en el presente ensayo no se logro determinar la composicin qumica de la vinaza empleada.

Existe suficiente informacin sobre las bondades de la vinaza como fertilizante, sin
embargo, no existe mayor informacin de su uso como desinfectante, en base a los resultados
obtenidos en el presente estudio se puede inferir que alguno de los elementos qumicos
presentes en la vinaza est ejerciendo un efecto inhibidor en el desarrollo de especies fngicas.
A tal efecto Mondino (2000) seala que productos a base del ion zinc son capaces de interferir
con la produccin de energa dentro de la clula fngica, de igual manera Rondn et al (2006)
sealan que el producto comercial Mancozeb (Dithane M-45), present un efecto inhibidor
del 100% en su concentracin a 1.000 ppm sobre la especie Colletotrichum spp , otros autores
sealan que productos a base de Cobre tambin ejercen un efecto sobre especies fngicas, tal
es el caso del producto comercial Kocide 101(hidrxido de cobre) que logro inhibir en un
100% el crecimiento del hongo Colletotrichum spp (Gaviria et al, 2013)

Para el caso del tratamiento vinaza 100% (T2) se observ que tuvo una menor
disminucin las UFC con respecto a los tratamientos de vinaza al 50% (T3) y 25% (T4)
respetivamente. Recordemos que este producto es un lquido espeso que resulta de de la
produccin de etanol, ya sea por destilacin de la melaza fermentada o de la fermentacin
directa de los jugos de la caa, la vinaza est compuesta por materiales orgnicos y nutrientes
minerales que hacen parte de compuestos y constituyentes vegetales como aminocidos,
protenas, lpidos, cidos diversos, enzimas, bases, cidos nucleicos, clorofila, lignina,
quinonas, ceras, azcares y hormona (Garca y Rojas 2006; Chvez, 1985), en base a la gran
cantidad de elementos que posee, podemos inferir que en este caso la disminucin de las UFC
fue menor debido a la alta concentracin de compuestos, situacin que conlleva a una difcil
absorcin por parte del suelo y microorganismos presentes en el, pensamos que quizs en el
tiempo y con mayor presencia de humedad la vinaza pueda ser absorbida y en consecuencia

21
 ejercer el efecto inhibidor mostrado en los tratamientos T3 y T4.

2-. Determinacin del tiempo de accin ms efectivo de la vinaza sobre las poblaciones
fngicas del suelo.

Cuando se consideraron las evaluaciones individuales, segn los resultados mostrados

en el cuadro 7, no hubo diferencias significativas (P > 0,05) entre tratamientos en el primer
perodo, pero a partir del segundo perodo, el T5 presenta mayores valores de UFC (Rangos) y
al respecto, el grfico 2 nos permite observar que el T5 supera a los tratamientos T3, T4 y T6
en la cantidad de UFC

Cuadro 7. Aproximacin a F de Kruskal y Wallis y significancia, para la cantidad de UFC

por perodos.

TRATAMIENTO Promedio rango ( UFC1 ) Promedio rango (UFC2) Promedio rango (UFC3)

T1 (Testigo) 21,3 A 21,6 AB 28,1 AB

T2 (Vinaza 100%) 31,8 A 27,7 AB 25,7 AB

T3 (Vinaza 50%) 24,8 A 22,5 AB 20,4 B

T4 (Vinaza 25%) 17,7 A 20,8 AB 18,6 B

T5 (Formaldehdo ) 29,7 A 37,0 A 42,1 A

T6 (Sustrato + Agua) 21,9 A 17,5 B 12,2 B

Aprox. a F 1,23 NS(P>0,05) 2,57 * (P<0,05) 8,28 **(P<0,01)

NOTA: Letras distintas en la misma columna indican promedios diferentes.

22
 Grfico 2. Promedio de rango segn Kruskal y Wallis en cada perodo.

El grfico 2 nos muestra el comportamiento de las UFC por tratamientos durante los
tres periodos de tiempo evaluados (7, 15 y 21 das). Se puede apreciar que el tratamiento T1
mantuvo un comportamiento similar en los dos primeros periodos pero se incremento durante
el tercer estadio. Los tratamientos T2, T3 y T6 muestran una disminucin promedio de las
UFC en la medida que pasa el tiempo, por su parte el T4 aumenta las UFC durante el segundo
periodo pero disminuye al final del ensayo y observamos como el T5 tiende a incrementar las
UFC en la medida que pasa el tiempo (periodos)

Es importante destacar que de manera general el tratamiento T5 logr una reduccin

significativa de las UFC, sin embargo, cuando apreciamos el grafico 2, observamos que al
final del ensayo mostr un mayor promedio de UFC, esto se puede explicar debido a que el
producto formaldehido es altamente voltil y tiende a perderse su efectividad en el tiempo, es
decir una vez que pasa su efecto las especies fngicas con estructuras de sobrevivencia tienden
a aumentar las poblaciones.

Para el caso de los tratamientos con vinaza T2, T3 y T4, se puede observar que en la

23
medida que el tiempo transcurre el promedio de UFC tiende a disminuir, recordemos que la
vinaza contiene una gran cantidad de elementos y que la accin de uno o la combinacin de
varios de estos compuestos ejercen su accin en el tiempo.

Autores tales como Vicente et al, 2007 sealan que relacionar el hecho concreto de que
la vinaza consiga una supresin del crecimiento fngico en los ensayos realizados in vitro es
un hecho difcil de explicar y contrastar debido a la escasa bibliografa. Ante este hecho hay
que destacar las diferencias existentes entre un caso y otro, ya que las condiciones de cada
ensayo son diferentes, no siendo fcil de correlacionar los resultados de un anlisis in vitro con
un anlisis de suelo, principalmente debido a que en el suelo existen una gran diversidad de
microorganismos cuyo desarrollo puede verse favorecido o desfavorecido por la adicin del
extracto durante el periodo de incubacin existente estableciendo relaciones de antagonismo o
simbiosis entre ellos.

Rosero et al (2013) seala que los estudios sobre utilizacin de vinazas para el control
de hongos fitopatgenos son escasos

Segn Garelo, 2012, los resultados obtenidos de su investigacin indican que la vinaza
genera efectos diferentes sobre diferentes tipos de microorganismos, a su vez, los efectos
dependen de la dosis y el tipo de suelo en la que es aplicada

24
 CONCLUSIONES

Las tres concentraciones de vinaza utilizadas en este trabajo (vinaza al 100%, 50% y
25%) mostraron efectos diferentes entre s, ya que se pudo observar que las concentraciones
de vinaza al 50% y 25% lograron una mayor disminucin de unidades formadoras de colonias
(UFC) con respecto a la concentracin vinaza 100%. As mismo, gracias a los promedios
obtenidos, la vinaza diluida al 25% mostr una reduccin superior de UFC con respecto a la
vinaza diluida al 50%.

Por otro lado, los resultados obtenidos con respecto al tiempo de accin ms efectivo
sealan que a los 21 das de haberse realizado la aplicacin de la vinaza (en las 3
concentraciones utilizadas) se produjo una mayor reduccin de las poblaciones fngicas en
comparacin a los resultados obtenidos de los anlisis que se llevaron a cabo a los 7 y 15 das
de la aplicacin.

Al comparar el efecto de la vinaza de caa con el efecto del producto qumico utilizado
(formaldehdo), determinamos que la vinaza tiene un mayor efecto en la disminucin de
poblaciones fngicas a medida que transcurre el tiempo, mientras que el formaldehdo va
perdiendo su accin con el paso de las semanas.

Con todos los datos obtenidos en ste trabajo, hemos podido demostrar que la vinaza
de caa de azcar tiene un efecto positivo sobre la actividad fngica de un suelo y que puede
llegar a ser una alternativa viable para la desinfeccin de suelos y sustratos utilizados en
vivero. Para ello, deben realizarse ms estudios de investigacin, ya que la vinaza de caa es
un producto cuyas propiedades qumicas son extremadamente variables y por lo tanto su
efecto de carcter biocida tambin puede llegar a serlo.
RECOMENDACIONES

Repetir el ensayo.

25
 Determinar la composicin qumica de la vinaza de caa de azcar, ya que
con ello se pueden dar explicaciones ms veraces a los resultados que se
obtengan durante la investigacin.

Realizar un anlisis fsico-qumico al suelo o sustrato donde se aplicarn los

tratamientos.

Evaluar el pH de los tratamientos en cada uno de los tiempos donde se realice

anlisis microbiolgico.

BIBLIOGRAFA

26
Chvez, M. 1985. LAS VINAZAS EN LA FERTILIZACION DE LA CAA DE AZUCAR.
Direccin de Investigacin y Extensin de la Caa de Azcar (DIECA). Boletn
Informativo No. 21. Ao 3. 1985 y El Agricultor Costarricense. 43 (3-4): 59-61. 1985.
[Documento en lnea]. En: http://www LAS%20VINAZAS%20EN%20LA
%20FERTILIZACION%20DE%20LA%20CAA%20DE%20AZUCAR1%20(1).pdf.
[Consultado en: Marzo 25 de 2017].

Cordero, M., Arvalo, M. 2013. Tcnicas Agroecolgicas para la desinfeccin de suelos

agrcolas. [Documento en lnea]. En http://asociacionelbalsamo.org/Balsamo%201.pdf.
[Consultado: Junio 14, 2016].

Covacevich, F. Echeverra, H. 2003. UTILIZACION DE FORMALDEHIDO PARA LA

ERRADICACION DE HONGOS MICORRITICOS ARBUSCULARES DE
MUESTRAS DE SUELO. Ciencia del Suelo 21 (1) 2003. [Documento en lnea]. En:
https://www.suelos.org.ar/publicaciones/vol_21n1/covacevich_9-17.pdf. [Consultado
en: Marzo 22 de 2017].

DeBach, P. And D. Rosen. 1991. Biological control by natural enemies. Cambridge

University Press, Cambridge. 440 p. [Documento en lnea]. En
http://www.agroeco.org/doc/chap7_control_biologico1.htm. 01/07/2015. [Consultado:
Junio 13, 2016].

Fernndez, S., Salas, J., Navarro., R. 1982. Nueva alternativa en control biolgico de plagas
en la regin centro occidental. FONAIAP divulga n2. [Revista en lnea]. En
http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_tec/FonaiapDivulga/fd02/texto/plagas.htm.
[Consultado: Junio 9, 2016].

Fernndez, L., Linares, N., Rojas, A., Roldn, T., Ramrez, M., Zegarra, H., Martnez, R.,

27
 Uribe, R; Reyes, J., Flores, D., Arce, J. 2006. Manual de tcnicas de anlisis de suelos
aplicadas a la remediacin de sitios contaminados. Instituto Mexicano del Petrleo,
Secretara de Medio Ambiente y Recursos Naturales Instituto Nacional de Ecologa.
[Documento en lnea]. En http://www.inecc.gob.mx/descargas/publicaciones/509.pdf.
[Consultado: Junio 22, 2016].

Garca, A., Rojas, C. 2006. Posibilidades de Uso de la Vinaza en la Agricultura de Acuerdo

con su Modo de Accin en los Suelos. [Documento en lnea]. En
http://www.tecnicana.org/pdf/2006/tec_v10_no17_2006_p3-13.pdf. [Consultado: Junio
13, 2016].

Garello, P. 2012. Efectos de la aplicacin de vinaza en cultivos de caa de azcar sobre la

comunidad microbiana del suelo. Tesis de grado. Instituto de Investigaciones
Biologicas Clemente Estable. [Documento en lnea]. En:
https://www.colibri.udelar.edu.uy/bitstream/123456789/1403/1/uy24-15771.pdf-
[Consultado en: Abril 11 de 2017].

Gaviria, V. Patio, L. Saldarriaga, A. 2013. Evaluacin in vitro de fungicidas comerciales para

el control de Colletotrichum spp., en mora de castilla. [Documento en lnea]. En:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0122-
87062013000100008. [Consultado en: Abril 2 de 2017].

Gmez, J. M. 1996. Efecto de la aplicacin de vinaza en la produccin y calidad de la caa de

azcar. [Revista en lnea]. En
http://sian.inia.gob.ve/repositorio/revistas_ci/canadeazucar/cana1401/texto/efecto.htm.
[Consultado: Junio 14, 2016].

Hudson, T., Dale, E. 1981. Propagacin de Plantas principios y prcticas. Compaa Editorial
Continental, S.A., Mxico. 771 pp.

28
Lezcano, P. Mora, L. 2005. LAS VINAZAS DE DESTILERA DE ALCOHOL.
CONTAMINACIN AMBIENTAL O TRATAMIENTO PARA EVITARLO. VIII
Encuentro de Nutricin y Produccin de Animales Monogstricos. [Documento en
lnea]. En:
http://avpa.ula.ve/eventos/viii_encuentro_monogastricos/memorias/conferencia-7.pdf.
[Consultado en: Marzo 22 de 2017].

Marcano, C. Palacios, G. Vivas, C. 1985. Resistencia de algunos hongos patgenos a los

vapores del formol. Seccin de Micologa, Instituto de Medicina Tropical, Universidad
Central de Venezuela. Revista sociedad venezolana de dermatologa. [Revista en lnea].
En: revista.svderma.org/index.php/ojs/article/download/996/966. [Consultado en:
Marzo 22 de 2017].

Mondino, P. 2000. APUNTES SOBRE FUNGICIDAS. Universidad de la Repblica Facultad

de Agronoma Departamento de Proteccin Vegetal Unidad de Fitopatologa.
[Documento en lnea]. En:
http://www.pv.fagro.edu.uy/cursos/pvh/DocsPVH/Apuntes_Fungicidas.pdf.
[Consultado en: Abril 1 de 2017].

Ripanti, F., Marquina, A., Ovalles Y., Len, J., Ramrez, G., Petit, J. 2009. Evaluacin del
mtodo fsico (solarizacin) y qumico (Basamid) en desinfeccin de viveros de la
estacin experimental El Irel edo. Barinas. [Documento en lnea]. En
http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/29377/1/articulo2.pdf. [Consultado:
Junio 10, 2016].

Ripanti, F., Caldern, G., Viloria, M., y Perrin, R. 2007. Basamid y formol en el control de
fusarium sp en viveros forestales. [Documento en lnea]. En

29
 http://ecotropicos.saber.ula.ve/db/ssaber/Edocs/pubelectronicas/agricultura_andina/vol
11/articulo7.pdf. [Consultado: Junio 10, 2016].

Rondn, O. Sanabria de Albarracn, N. Rondn, A. 2006. RESPUESTA in vitro A LA

ACCIN DE FUNGICIDAS PARA EL CONTROL DE
ANTRACNOSIS, Colletotrichum gloeosporioides PENZ, EN FRUTOS DE MANGO
Agronoma Trop. v.56 n.2. [Documento en lnea].
En: http://www.scielo.org.ve/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0002-
192X2006000200005. [Consultado en: Abril 1 de 2017].

Rosero, M. Vargas, W. Menjivar J. 2013. Efectos de vinazas sobre bacterias rizosfricas y en

la actividad-CO2 y biomasa-C microbiana de un suelo Pachic Haplustoll. Acta
Agronmica. 62 (2) 2013, p 165-173. [Consultado en: Abril 11 de 2017].

Santos, M. Martn, F. Dinez, F. Carretero, F; Garca, M. De Cara, J. 2009. EFECTO DE LA

APLICACIN DE VINAZA DE VINO COMO BIOFERTILIZANTE Y EN EL
CONTROL DE ENFERMEDADES EN EL CULTIVO DE PEPINO. Departamento de
Produccin Vegetal. Universidad de Almera. [Documento en lnea]. En:
https://www.agroecologia.net/recursos/publicaciones/publicaciones.../S4C8.pdf.
[Consultado en: Abril 6 de 2017].

Vicente, N. Santos, M. Dinez, F. De Cara, M. Tello, J. VINAZAS Y HONGOS DEL SUELO.

Departamento de Produccin Vegetal, Escuela Politcnica Superior, Universidad de
Almera. Agroecologa 2: 39-45, 2007. [Revista en lnea]. En:
revistas.um.es/agroecologia/article/view/1207. [Consultado en: Abril 6 de 2017].

ANEXOS

30
Capsulas en con PDAa (agar papa dextrosa acidificado) y diluciones de las muestras
(izquierda). Bandejas que contenan los tratamientos (derecha).

Preparacin de medio de cultivo PDA (Agar Papa Dextrosa) (izquierda). Tubos de ensayo con
medio de cultivo PDA (derecha).

31
 Ejecucin del anlisis microbiolgico

Conidios del gnero Cylindrocladium sp (izquierda). Conidiforo de Aspergillus sp (derecha).

32
33