UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

PRCTICA N6. LABORATORIO DE BIOQUMICA

DETERMINACIN
ESPECTROFOTOMTRICA DE
CREATININA.

PROFESORA: Mg. Paola Jorge Montalvo.

INTEGRANTES:

Rodrguez Santilln, Lesly. 20131322

Huaman Lenes, Flor Reyna. 20131307
Capuay Sanchez, Katherine. 20131205
Huatuco Mendoza, Katherine. 20131310

HORARIO:
GRUPO G*: Martes 2.00 4.00 p.m. MESA 2

FECHA DE ENTREGA:
26/05/2015
 INTRODUCCIN:

La relacin de proporcionalidad entre coloracin y concentracin de una sustancia existe

cuando se ajustan a la ley de Lambert y Beer. As, a mayor concentracin, mayor
absorbancia, pero muchos compuestos, entre ellos los lquidos biolgicos no son
coloreados, y si lo son, su coloracin interfiere en el anlisis.

La creatinina en la sangre esta mesclada con varios compuestos proteicos entre otros, su
determinacin se fundamentara con la formacin de un compuesto coloreado rojizo de
cido picrmico el cual se formara por reduccin, al poner en contacto la creatinina con el
cido pcrico en medio alcalino (reaccin de Jaff). La intensidad de la coloracin es
directamente proporcional al contenido de creatinina cumpliendo con la ley de Lambert y
Beer.

Esta creatinina esta presenten musculo, cerebro y sangre, se sintetiza a partir de los
aminocidos glicina, arginina y metionina y Mg+ y aporte de energa. Se elimina
diariamente como un constituyente normal de la orina en cantidad constante para cada
sujeto.

La determinacin de creatinina en sangre es una de las principales pruebas que nos

habla de la buena operatividad del rin que es encargado de su depuracin.

OBJETIVOS

1. Observar aplicacin directa y til de la Ley de Lambert y Beer en los mtodos

espectrofotomtricos con uso de un nico estndar, particularmente para la
cuantificacin de Creatinina.
2. Ejercitarse en el concepto de factor de calibracin para clculos de
concentraciones en espectrofotometra.
 RESULTADOS

1. TRATAMIENTO:

H2O 14ml
Sangre 2ml
Na2WO4 2ml
H2SO4 2ml
TOTAL 20ml

2. FILTRADO:

3. PREPARACIN DE PICRATO:

+ .

4. REACCIN DE JAFF: ( ptimo = 520 nm.)

+ .

PREPARACION DE PICRATO:

3ml 3ml 6ml

+ .

REACCIN DE JAFF:

Rvo. Exceso Rojo Naranja - Amarillo

+ .
 BLANCO SOL. ESTNDAR MUESTRA
H2O (ml) 3 - -
Sol. Estndar - 3 -
Filtrado - - 3
PICRATO 1.5 1.5 1.5

AGITAR Y REPOSAR (10 minutos).

MEDICIN DE LA ABSORVANCIA POR LAS MESAS DE TRABAJO:

BLANCO SOL. ESTNDAR MUESTRA
0.074 0.203 0.114
0.073 0.223 0.120
0.073 0.221 0.120
0.042 0.215 0.142
0.069 0.216 0.129
0.070 0.229 0.134

ABSORVANCIA PROMEDIO:

BLANCO SOL. ESTNDAR MUESTRA

ABSORVANCIA 0.0668 0.2178 0.126

SOLUCIN STOCK:

() ()

. < .

. () ( )

. () <

. . ( + )

<

FRMULA: ()
() = ()
()
REEMPLAZAMOS:
18
102
45
() = (
(0.21780.0668)
) (0.126 0.0668)

103
() = 1.5682

PARA LA MUESTRA:

1.5682103 () 1

7.0569103 () < 4.5 3 ()

0.047046 () < 20 2

. <

Por lo tanto en 100ml de sangre del

vacuno, encontraremos tambin
2.3523mg de Creatinina.
 DISCUSIONES

La creatinina es el resultado de la degradacin de la creatina, un residuo nitrogenado elaborado

por el hgado el rin y almacenado en el msculo donde se utiliza como reserva de energa
celular. A medida que el musculo utiliza creatina, se forma creatinina que, al ser soluble, pasa al
torrente circulatorio y se filtra en el glomrulo junto con la proveniente de la dieta. La creatinina
no se absorbe en los tbulos y se secreta en escasa cantidad (10 % a 15%) por lo que resulta el
candidato ideal para calcular la filtracin glomerular para no tener que usar el de inulina. Debido a
que el mayor productor de creatinina es el musculo, existe una relacin entre los niveles de
creatinina con la edad y el gnero. Por otro lado el balance de creatinina (entre aporte y
excrecin) puede alterarse por causa de una dieta con alto consumo de carne y situaciones con
dao o consumo muscular endgeno. (Dvorkin, 2010).

Como el nivel de creatinina esta relacionando con la masa muscular el valor de la creatinina en
vacunos ser mayor que en humanos, alcanzando 1.5 mg/dl en la prctica de laboratorio tras la
evaluacin de la sangre se obtuvo como 2.3523 mg/dl de concentracin de creatinina. Como se
puede observar el valor obtenido difiere bastante del valor normal.

Creatinina, nivel sanguneo (creatinina srica)

Resultados normales

Adultos:

Mujeres: 0.5-1.1mg/dl o 44-97 mmol/1 (unidades del SI)

Varones: 0.6-1.2 mg/dl o 53-106 mmol/1 (unidades del SI)

Ancianos:

La disminucin de la masa muscula puede producir niveles bajos

Adolescentes: 0.5-1.0 mg/dl

Nios: 0.3-0.7 mg/dl
Lactantes: 0.2-0.4 mg/dl
Recin nacidos: 0.3-1.2 mg/dl

Valores crticos posibles >4mg/dl (indican disfuncin renal grave)

La creatinina, al igual que en el caso del nitrgeno ureico en sangre (BUN, v, pg. 720), se elimina
por completo por los riones, y por tanto es directamente proporcional a la funcin renal
excretora. Por consiguiente, si la funcin excretora renal es normal, el nivel srico de creatinina
debe permanecer constante y normal. (Deska, 2008).

Entonces si la persona tendra una concentracin de 2.3523 mg/dl de creatinina. Entonces se

estara dando el caso de severos trastornos renales como la glomerulonefritis, pielonefritis,
necrosis tubular aguda y obstruccin urinaria.
 CONCLUSIONES:

La ley explica que hay una relacin exponencial entre la transmisin de luz a
travs de una sustancia y la concentracin de la sustancia.As a mayor
concentracin, mayor absorbancia, pero muchos compuestos biolgicos no
presentan color o su coloracin interfiere en el anlisis, para obtener
compuestos coloreados estables se emplean reacciones directas muy
sensibles para la medicin de sustancias.
Cuando se preparan dos soluciones de una misma sustancia a
concentraciones diferentes y se miden sus absorbancias a la misma longitud
y al igual espesor de la cubeta la relacin
A1= E.L.C1 Y A2=E.L.C2 dividiendo A1/A2=C1/C2 .
Si la A1 y C1 corresponden a una solucin estndar de una concentracin
conocida y A2 y C2 corresponden a una solucin problema tendramos:
Cmp= (Cst/Ast) x Amp donde el factor de calibracin (Fc) relaciona la
concentracin de una sustancia con su absorbancia.
Cmp=Fc x Amp
 REFERENCIA BIBLIOGRFICA:

Harris, Daniel. 2007. Anlisis Qumico Cualitativo. Sexta edicin.

Editorial Revert S.A. Barcelona. Espaa. pg. 89-93.
Manual de diagnstico rpido de medicina veterinaria de especies de
granja .Fennen.W.1997.edit.LIMUSA.pag535, 536.
Patologa clnica veterinaria. Merwey, W.Prien, J.1973.Primera
edicin. Per .pg. 44.
Mario A. Dvrokin, Daniel P. Cardinali, 2010, Bases Fisiolgicas de la
Practica Medica, 14va edicin, editorial Panamericana, Espaa, pg.
31.
Kathleen Deska Pagana, 2008, Gua de pruebas diagnsticas y de
laboratorio, 8va edicin, editorial pagana, Espaa, pg. 313-314.