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MICROBIOLOGA DEL SUELO

OBJETIVOS:

Conocer la ecologa microbiana y las principales funciones de

los hongos, algas, bacterias y otros microorganismos en el suelo.
Analizar los diferentes ciclos que cumplen los microorganismos en
el suelo.
Conocer las relaciones ecolgicas entre microorganismos y su
impacto en el ecosistema.

INTRODUCCIN.-

E xisten diferentes microorganismos que mejoran la fertilidad del suelo al fijar el

nitrgeno atmosfrico en compuestos nitrogenados utilizados por las plantas para
sintetizar protenas; convierten en el suelo sustancias orgnicas en compuestos
inorgnicos hacindolos disponibles para las plantas. Damos por supuesto que los
microorganismos descomponen plantas y animales muertos; pero por lo general no nos
damos cuenta de las reacciones bioqumicas que efectan para hacer el suelo frtil,
proporcionando materias nutritivas para el desarrollo de las plantas. Es ste un proceso
muy complejo en el que participan muchos microorganismos. Se calcula que un poco de
tierra frtil contiene cerca de 500 kilogramos de bacterias y tal vez una cantidad igual de
hongos, protozoos y algas. En trminos generales es correcta la afirmacin en el sentido
de que cuantos ms organismos hay en el suelo ste es ms productivo.

EL SUELO.- Existen 6 categoras principales de los constituyentes del suelo.

Partculas Minerales.-Predominando compuestos de silicio, aluminio y hierro; en

menor cantidad otros minerales como: calcio, magnesio, potasio, titanio, magnesio,
sodio, nitrgeno, fsforo y azufre
Residuos Orgnicos.- Los restos de plantas y animales depositados forman al suelo
con sustancias orgnicas.
Agua.- El agua se retiene como H2O libre en los espacios que quedan entre las
partculas del suelo.
Gases.- Consiste principalmente en dixido de carbono, oxgeno y nitrgeno.
Sistema biolgico.- El suelo frtil est habitado por el sistema radicular de las
plantas superiores, muchos animales (insectos, gusanos, roedores), y gran cantidad
de microorganismos.
Microbiota del suelo.- El suelo tiene una gran variedad de microorganismos como:
bacterias, hongos, protozoos y virus principalmente.

Las condiciones para el desarrollo de los microorganismos del suelo son:

Cantidad y tipo de sustancias nutritivas
Humedad disponible
Grado de aireacin
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Temperatura
pH
Prcticas y sucesos como el riego y abono del suelo.

Bacterias.- Esta poblacin sobrepasa a todos los dems en nmero como en variedad.
En el suelo podemos encontrar: auttrofas, hetertrofas, mesofilas, termfilas,
psicfilas; aerbias y anaerobias, degradadoras de celulosa y oxidantes de azufre,
fijadoras de nitrgeno y degradadoras de protenas y otros tipos.

En los suelos secos y clidos se encuentran millones de actinomiceto; los gneros

predominantes son: Nacardia, Streptomyces y Micromonospora.Estos organismos son
causantes del olor caracterstico mohoso, o a tierra, de los campos recin arados. Son
capaces de degradar muchas sustancias complejas y consecuentemente juegan un papel
muy importante en la qumica del suelo, estos tambin son notables por su capacidad
para sintetizar y excretar antibiticos. La presencia de sustancias antibiticas en el suelo
se detecta en raras ocasiones, pero esto no excluye la posibilidad de que se encuentre
activas en un micro ambiente.

Hongos.- Estos abundan ms cerca de la superficie, donde prevalecen las condiciones

de aerobiosis. Los hongos son muy activos en descomponen los principales
constituyentes de los tejidos de las plantas como celulosa, lignina y pectina. La
estructura fsica del suelo se mejora por la acumulacin de estos organismos.

Algas.- Su poblacin en el suelo generalmente es menor que la de las bacterias y los

hongos.

Los principales grupos son las verde, verdi-azuladas y las diatomeas. Se encuentran en
la superficie del suelo o debajo de la capa superficial. En los suelos ricos y frtiles, las
actividades bioqumicas de las algas son impedidas por la de las bacterias y hongos; sin
embargo desarrollan cambios prominentes y beneficiosos. En los terrenos ridos y
erosionados, inician la acumulacin de material orgnico debido a la capacidad de fijar
N2 y efectuar fotosntesis.

Las verdi-azuladas transforman la roca en tierra

Protozoos.- Su forma principal de alimentacin son las bacterias, mantienen el

equilibrio de la microbiota del suelo.

Virus.- Estos afectan a las bacterias como bacterifagos, se cree que tiene algn efecto
en la ecologa de las bacterias, pero esto an no se ha establecido con claridad.

Rizsfera.- Es la regin donde el suelo y las races hacen contacto. La poblacin

microbiana es mayor en esta zona, predominan las bacterias.

FUNCIN DE LOS MICROORGANISMOS DEL SUELO

Son agentes bioqumicos para la mineralizacin del Carbono orgnico, Nitrgeno,

Azufre, Fsforo y otros compuestos. Este proceso es esencial para el mantenimiento de
la vida en nuestro planeta.
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EL CICLO DEL NITRGENO

El nitrgeno es crucial para todos los seres vivos porque es parte esencial de las
molculas de proteinas y de cidos nucleicos. Dado que la atmsfera terrestre es
aproximadamente 80% de nitrgeno gaseoso (N2), podria parecer imposible una baja
disponibilidad de este elemento para los organismos. Sin embargo, el nitrgeno
molecular es tan estable que no se combina con facilidad con otros elenientos. As, el N2
debe ser escindido para que el nitrgeno pueda combinarse con otros elementos y
formar protenas y cidos nucleicos. La reaccin global que separa el nitrgeno
molecular y combina los tomos resultantes con oxigeno e hidrgeno requiere mucha
energia.

El ciclo del nitrgeno, en el cual dicho elemento circula entre el ambiente abitico y los
organismos, tjene cinco pasos: fijacin de nitrgeno, nitrificacin, asimilacin,
amonificacin y desnitrificacin. Todos estos pasos excepto la asimilacidn son
realizados por bacterias.

EL PRIMER PASO EN EL CICLO DEL NITRGENO, LA FIJACIN DE

NITRGENO, implica la conversin de nitrgeno gaseoso (N2) en amonaco (NH3).
Este proceso se llama fijacin de nitrgeno porque dicho elemento se fija en una forma
utilizable para los seres vivos. Aunque una cantidad considerable de nitrgeno se fija en
la forma de nitrato por combustin, vulcanismo, descargas elctricas y medios
industriales (procesos que aportan la energia suficiente para escindir nitrgeno
molecular), la mayor parte de la fijacin de nitrgeno es biolgica. La fijacin
biolgica, que produce amonaco (N3), es efectuada por bacterias y cianobacterias
fijadoras de nitrgeno presentes en el suelo y ambientes acuticos. Las bacterias
fijadoras de nitrgeno emplean la enzirna nitrogenasa para escindir nitrgeno molecular
y combinarlo con hidrgeno.

Dado que la nitrogenasa acta slo en ausencia de oxigeno, de algn modo las bacterias
que utilizan nitrgeno deben aislar del oxgeno la enzima. Algunas bacterias fijadoras
de nitrgeno viven bajo capas de cieno anxico (privado de oxgeno) en las races de
diversas plantas. Otras bacterias fijadoras de nitrgeno importantes, del gnero
Rhizobiuin, viven en masas especiales o ndulos en las races de leguminosas como
frijol y chicharo y de algunas otras plantas leosas.

En ambientes acuticos, la mayor parte de la fijacin de nitrgeno es realizada por

cianobacterias. Las cianobacterias filamentosas tienen clulas exclusivas de oxgeno
llamadas heterocistos, que participan en la fijacin de nitrgeno. Algunos helechos
acuticos tienen cavidades en las que viven cianobacterias, de modo un tanto parecido a
como ocurre en el caso de Rhizobium en los ndulos radicales de las leguminosas. Otras
cianobacterias fijan nitrgeno en asociacin simbitica con cicadceas y algunas otras
plantas terrestres, o como socio fotosinttico de ciertos lquenes.

La reduccin del nitrgeno gaseoso a amoniaco por nitrogenasa es un notable logro de

los organismos vivos, que se realiza sin los tremendos calor, presin y energa
requeridos en la manufactura de los fertilizantes comerciales. Sin embargo, las bacterias
fijadoras de nitrgeno deben consumir la energa de 12 g de glucosa o equivalente para
fijar biolgicamente un solo gramo de nitrgeno.
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EL SEGUNDO PASO EN EL CICLO DEL NITRGENO ES LA NITRIFI-

CACIN, la conversin de amonaco (NH3) en nitrato (NO3-). Es un proceso en dos
pasos realizado por bacterias del suelo. La nitrificacin es un proceso en dos pasos.
Primero, las bacterias del suelo Nitrosomonas y Nitrococcus convierten el amonaco en
nitrito (NO2-). Despus la bacteria del suelo Nitrobacter oxida el nitrito a nitrato. El
proceso de nitrificacin aporta energa a estas bacterias, llamadas bacterias nitrificantes.

EN EL TERCER PASO, LA ASIMILACIN, las races de las plantas absorben el

nitrato (NO3-) o el amoniaco (NH3) que se formaron por fijacin y nitrificacin, e
incorporan el nitrgeno en protemas y cidos nucleicos vegetales. Cuando los animales
comen tejidos de las plantas tambin asimilan nitrgeno al consumir los compuestos
vegetales y convertirlos en compuestos animales.

EL CUARTO PASO ES LA AMONIFICACIN, o conversin de compuestos

nitrogenados orgnicos en amoniaco. Comienza cuando los organismos producen
desechos nitrogenados como urea (en la orina) y cido rico (en las excretas de las
aves). Estas sustancias y los compuestos de nitrgeno contenidos en los organismos
muertos son degradados para liberar como amoniaco (NH3) el nitrgeno en el ambiente
abitico. Las bacterias que realizan este proceso tanto en el suelo como en ambientes
acuticos reciben el nombre de bacterias amonificantes. El amoniaco producido por
amonificacin queda disponible una vez ms para los procesos de nitrificacin y
asimilacin; de hecho, la mayor parte del nitrgeno disponible en el suelo proviene de la
recirculacin de nitrgeno orgnico por amonificacin.

EL QUINTO Y ULTIMO PASO DEL CICLO DEL NITROGENO ES LA

DESNITRIFICACION, la reduccin de nitrato (NO3-) a nitrgeno gaseoso (N2). Las
bacterias desnitrificantes revierten la accin de las bacterias fijadoras de nitrgeno y
nitrificantes; esto es, devuelven nitrgeno a la atmsfera en la forma de gas. Las
bacterias desnitrificantes son anaerobias, por lo que viven y prosperan ms en sitios con
poco o nada de oxgeno libre. Por ejemplo, se encuentran en capas profundas del suelo
cerca del nivel fretico, un ambiente casi anxico.

TRANSFORMACIONES MICROBIANAS DEL FOSFORO

El fsforo se cncuentra en el suelo, plantas y microorganismos en cierto nmero de

compuestos orgnicos e inorgnicos. Despus del nitrgeno, es cl segundo de los
nutrientes orgnicos e inorgnicos requeridos tanto por plantas como por
microorganismos. Su principal funcin fisiolgica radica en la acumulacin y liberacin
de energa durante el rnetabolismo celular. Este elernento puede agregarse al suelo en
forma de fertilizantes qumicos o puede ser incorporado como hojarasca, residuos
vegetales o restos animales ayudando en el crecimiento vegetal como en la biologa del
suelo.

Los microorganismos llevan a cabo varias transforrnaciones del elemento:

a) alteracin de la solubilidad de cornpuestos inorgnicos de fsforo;
b) mineralizacin de compuestos orgnicos con la liberacin da fosfato inorgnico;
c) conversin del anin inorgnico aprovechahle en componentes celulares, y
d) llevar a cabo una oxidacin o reduccin de compuestos inorgnicos del fsforo.
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Las especies activas en la conversin son: Pseudomonas, Mycobacterium, Micrococcus,

Bacillus, Flavobacterium, Penicillium, Sclerotium, Fusarium, Aspergillus y otras.
Estas bacterias y hongos crecen en medios con Ca3(P04), apatita o materiales insolubles
semejantes, como nica fuente de fosfato. Los microorganismos no slo asimilan el
elemento sino que tambin hacen soluble a una gran porcin, liberndolo en cantidades
superiores a sus propias demandas nutricionales.

El aumento en la disponibilidad del fsforo en suelos anegados puede explicar por qu

el arroz cultivado bajo el agua requiere frecuentemente una cantidad menor de
fertilizantes de fsforo que los mismos cultivos que crecen en terrenos agrcolas secos.

La presencia en el suelo de un gran depsito de fsforo orgnico que no puede ser

utilizado por las plantas enfatiza el papel de los microorganismos de convertir el fsforo
orgnico a formas inorgnicas. Por la accin de las bacterias, hongos y actinomicetos, el
elemento combinado en los restos de vegetacin y en la materia orgnica del suelo se
transforma en elemento aprovechable para las plantas.

La proporcin de C:N:P mineralizada microbiolgicamente en la condicin de

equilibrio es semejante a las proporciones de estos tres elementos en el humus.
Las enzimas que separan al fsforo de los sustratos orgnicos encontrados con ms
frecuencia son llamadas fosfatasas.

AZUFRE EN EL SUELO

Los habitantes del suelo que son capaces de oxidar compuestos inorgnicos de azufre
pueden ser tanto auttrofos como hetertrofos. Las bacterias que utilizan tales
molculas para obtener energa son principalmente miembros del gnero Thiobacillus;
este gnero contiene ocho especies. De stas, cinco han estado sujetas a considerable
investigacin:
T. thiooxidans.- es un quimioauttrofo estricto que oxida- azufre elemental y es capaz
de crecer activamente a un pH de 3 o menos
T. thioparus.- es un quimioauttrofo obligado sensible al cido
T. novellus.- no puede utilizar azufre elemental pero oxida compuestos orgnicos, as
como sales inorgnicas de azufre; la especie comn capaz de desarrollarse en ausencia
de O2.
T. denitrificans.- usa el nitrato como aceptor de electrones en condiciones anaerbicas.
T. ferrooxidans.- es su capacidad de utilizar la oxidacin de sales, tanto de hierro como
de azufre, para obtener energa.

El azufre elemental, el sulfuro, tiosulfato, tetrationato y tiocianato sirven como fuentes

de energa para uno o ms miembros del gnero mientras que el CO, o el bicarbonato
proporcionan el carbono para el crecimiento quimioauttrofo. Con la excepcin de T.
nouellus, todas las especies mencionadas anteriormente son aparentemente auttrofos
obligados.

El pH ptimo tambin sirve para distinguir las cinco especies.

Con tales oxidaciones el organismo no aprovecha nada de energa y que las
transformaciones son incidentales con relacin a las principales vas metablicas. Por
ejemplo, las especies de Arthrobacter, Bacillus, Flavobactenum y Pseualomonas,
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convierten el azufre elemental o el tiosulfato a sulfato y algunas especies de

Streptomyces son capaces de generar tiosulfato a partir del azufre elemental.

Los hongos filamentosos y las levaduras oxidan el azufre en polvo y algunas bacterias
hetertrofas convierten el tiosulfato a tetrationato en presencia de nutrientes orgnicos.
Los tiobacilos pueden tener una importancia agrcola muy grande en diferentes
aspectos, adems de su posible papel en la formacin del sulfato necesario para la
nutricin vegetal. Uno de estos aspectos es el de la alteracin de la acidez del suelo para
reducir la incidencia o severidad de la roa de la papa o del decaimiento del camote.

Estas enfermedades son causadas por actinomicetos sensibles al cido: Streptomyces

scabies para la roa y Streptomyces ipomoeae para el decaimiento. Las enfermedades
no son severas a valores de pH por debajo de 5.0; por consiguiente, los patgenos son a
menudo controlados por la adicin de azufre en cantidades suficientes para Ilevar la
reaccin a un punto inferior del nivel lmite.

Se han adaptado tratamientos similares para la restauracin de terrenos alcalinos. Si se

agrega azufre elemental a esos suelos, siempre que estn presentes los tiobacilos, el
cido sulfrico generado neutralizar la alcalinidad y conducir al suelo a una
productividad potencial.

Los microorganismos que reducen la disponibilidad del sulfato tiene una profunda
influencia en la fertilidad del suelo ya que disminuyen el abastecimiento de la principal
fuente de azufre para los cultivos agrcolas. Sin embargo, adems de este hecho, las
bacterias que reducen el sulfato pueden tener una gran influencia econmica. Las bajas
concentraciones del producto de su metabolismo son muy txicas para el arroz, los
ctricos otros cultivos y rboles de importancia prctica y, bajo ciertas condiciones
ligadas con anegamiento o un drenaje pobre, la fitotoxicidad puede causar grandes
prdidas econmicas.

El H2S libre es el que daa a las races, y el hierro ferroso que precipita al sulfuro como
FeS, reduce o previene la toxicidad.

El H2S que produce Desulfovibrio tambin puede ser el causante de la muerte de

nematodos y hongos presentes en las regiones inundadas.

Algunos ejemplos de las funciones de microorganismos del suelo

BACTERIAS

En el suelo se encuentran varios organismos patgenos que atacan humanos, ganado,

plantas cultivadas y otras especies de plantas y animales. Algunas veces, su presencia se
nota por la aparicin de sntomas en el hospedero adecuado que se pone en contacto con
el suelo o con plantas que crecen en el mismo, pero otras veces se requiere de medios y
tcnicas altamente selectivos para demostrar su existencia en una localidad especfica o
para enumerarlos. Por estos mtodos, se han encontrado en diversas regiones especies
de Agrobacterium, Erwinia y Pseudomonas que causan enfermedades en plantas,
algunas de las especies son nativas del suelo y otras se encuentran por breves perodos
como resultado de contaminacin reciente con tejidos, o fluidos de plantas enfermas.
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El orden Actinomycetales ha despertado especial inters debido a que muchas cepas

tienen la capacidad de sintetizar metabolitos txicos. Tres cuartas partes de los
estreptomicetos aislados pueden producir agentes antimicrobianos conocidos como
antibiticos. El porcentaje de actinomicetos que producen antibiticos vara con el tipo
de suelo y la estacin del ano; algunos organismos de prueba son sensibles a los
compuestos producidos, por muchos actinomicetos y algunos otros son inhibidos por los
metabolitos excretadas por unos cuantos actinomicetos. A pesar de la gran importancia
industrial y teraputica de estas sustancias qumicas, an no est claro, el significado de
tales compuestos en los procesos naturales. Adems de producir metabolitos
antimicrobianos, muchas especies de Streptomyces liberan enzimas extracelulares que
provocan lisis bacteriana. La presencia de este tipo de enzimas puede ser importante en
el equilibrio microbiolgico del suelo.

HONGOS

El comportamiento de la clamidospora ha atrado bastante inters debido a que la

existencia de varios patgenos vegetales en el suelo, donde existen independientemente
de sus hospederos, se atribuye a tales estructuras. Muchas de estas especies no son
capaces de competir en forma efectiva por los nutrientes, con los organismos
permanentes del suelo, de modo que, a no ser por la resistencia de la clamidospora, la
poblacin podra ser destruida, por ejemplo, las especies patgenas de Fusarium, as
como las de Phytophthora y Thielaviopsis son capaces de sobrevivir despus de la
muerte de su hospedero, en forma de clamidospora, aunque pase mucho tiempo para
poder infectar nuevos hospederos. Es de considerable importancia para la supervivencia
del organismo y su potencial para invadir vegetales el hecho de que las clamidosiporas
de muchos gneros no germinan en el suelo aunque muchos lo hacen en el agua, pero
germinan cuando estn cerca de races o cuando se agrega materia orgnica. Este tipo de
comportamiento permite a un hongo, que compite en forma deficiente por los
constituyentes orgnicos del suelo, permanecer latente en forma de clamidospora para
luego dar lugar a hifas capaces de invadir las races de hospederos susceptibles o de
metabolizar nutrientes por los cuales puede competir eficientemente.

Los esclerotes desempean una funcin similar, permitiendo a las poblaciones de

algunos hongos soportar circunstancias ambientales desfavorables. Un gran nmero de
patgenos produce estas masas de hifas cubiertas por una envoltura dura; tales
estructuras resistentes permiten que gneros como Botrytis, Phymototrichum,
Rhizoctonia, Sclerotinia y Sclerotium subsistan durante meses, y aun aos, esperando
las condiciones que permitan su germinacin y su penetracin en tejidos vegetales
disponibles. En algunas especies los esclerotes son viables durante largos perodos sin
ser descompuestos tanto en condiciones de humedad como de sequa pero en otras
especies, los esclerotes estn sujetos al ataque microbiano cuando se rehidratan y de este
modo quedan sin proteccin contra la comunidad de suelos hmedos

Como consecuencia de su capacidad para utilizar las sustancias proteicas, los hongos
participan activamente en la formacin de amonio y compuestos nitrogenados simples.
Muchos gneros y especies participan en el proceso de descomposicin de las complejas
molculas que contienen nitrgeno. Los microorganismos se benefician con esta
transformacin debido a que el material proteico les proporciona carbono y nitrgeno.
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Los hongos participan en la formacin de humus a. partir de restos orgnicos frescos al

degradar residuos vegetales y animales. Algunas especies Alternaria,

Aspergillus, Cladosporium, Dematium, Gliocladium, Helminthosporium, Humicola,

Metarrhizum y otros gneros sintetizan sustancias que se asemejan a los constituyentes
de la fraccin orgnica del suelo. Algunos hongos pueden tambin producir sustancias
con estructura qumica semejante a la de varios carbohidratos que se extraen de la
materia orgnica del suelo. Adems este grupo realiza gran nmero de transformaciones
inorgnicas e influye sobre la formacin de agregados estables mediante la penetracin
de sus hifas y uniendo mecnicamente las partculas del suelo.

Una relacin nica de los hongos con las plantas superiores se observa en la estructura
conocida como micorriza u hongo de la raz, relacin entre dos elementos, que consiste
en un tejido radicular y un hongo micorricico especializado. El microorganismo est
bastante limitado en cuanto a su hbitat y por lo general se encuentra solamente en la
vecindad de o directamente dentro de las races. El hongo no es un microorganismo del
suelo en el sentido estricto y su nicho ecolgico est propiamente en la asociacin con
la raz. En la asociacin ectotrfica el hongo forma un manto alrededor de la superficie
exterior de las races, una red constituida por una masa de hifas que penetran en Ios
espacios que existen entre clulas vegetales individuales. Muchos rboles, incluyendo
algunos de importancia econmica, establecen este tipo de estructuras subterrneas. Por
otra parte, en la micorriza endotrfica el hongo penetra en las clulas del hospedero.

Esta ltima asociacin es bastante comn entre las Ericaceae y las Orchidaceae, as
como en los rboles frutales, los ctricos, caf y varias leguminosa. Las especies de
hongos que se encuentran haciendo placas de diluciones, raramente son capaces de
formar mieomzas ectotrficas.

Los gneros Boletus, Lactanus, Amanita y Elaphomyces son activos sobre los rboles.

Los hongos micorrcicos endotrfieos incluyen a Rhizoctonia, Phoma y Armillaria.

La formacin de micorrizas es particularmente pronunciada en terrenos con bajo

contenido de fsforo y nitrgeno, y una concentracin elevada de nutrientes
correlaciona con un ligero desarrollo micorrcico. Adems, la produccin de estas
estructuras es ms intensa cuando las races tienen gran reserva de carbohidratos,
particularmente despus de una intensa fotosntesis. Esto puede indicar que el hospedero
proporciona al invasor los carbohidratos necesaria para su metabolismo hetertrofo,
aunque tampoco pueden excluirse a los aminocidos, vitaminas B u otros factores de
crecimiento. La micorriza ejerce un efecto benfico sobre muchas plantaciones; sin
embargo con frecuencia, no puede atribuirse ninguna funcin a esta asociacin y en
ocasiones tiene efectos perjudiciales.

ALGAS

En un sentido general, no se puede considerar que las algas contribuyan

apreciablemente a muchas transformaciones bioqumicas necesarias para la fertilidad
del suelo, excepto en suelos inundados con cultivos de arroz. Bajo las presiones de
competencia de las bacterias, hongos y actinomicetos, particularmente bajo la
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superficie, un grupo pobremente adaptado a la heterotrofa slo puede causar un

pequeo efecto en muchas de las reacciones biolgicas.

Sin embargo, la microflora es capaz de ejercer una influencia definitiva en ciertos

ambientes en los que ocupa una posicin nica.

Una de las principales funciones de las algas en hbitats terrestres es un resultado de su

nutricin fotoautotrfica. Esta funcin es la generacin de materia orgnica a partir de
sustancias inorgnicas. Estas algas que viven en la superficie del suelo convierten al
CO2 en materiales carbonados; Consecuentemente, la microflora fotosinttica en
algunos hbitats es responsable de incremento de la cantidad de carbono orgnico. La
magnitud de estas adiciones en suelos de cultivo se ha estimado con precisin, pero el
papel de las algas de crear carbono orgnico nuevo, al colonizar reas desnudas,
estriles o erosionadas est por encima de cualquier discusin.

La microflora fotosinttica de los suelos de arrozales inundados tiene una influencia

particular. En las algas, as como en plantas superiores, el proceso fotosinttico libera
oxgeno molecular. A travs de la evolucin de este gas, las algas pueden afectar
benficamente el crecimiento del arroz, proveyendo parte del oxigeno, requerido por las
races sumergidas. La abundancia de las algas en campos inundados en los trpicos es
de tal magnitud que la contribucin de O2 no puede ignorarse.

En aos recientes ha surgido inters respecto a la principal contribucin de ciertas algas:

su capacidad de utilizar N, como fuente de nitrgeno para el crecimiento; este proceso
produce en ltima instancia el enriquecimiento del medio ambiente con formas
combinadas de nitrgeno, ya que los constituyentes protoplsmicos formados a partir
de N, son liberados y descompuestos una vez que las clulas se deterioran. La capacidad
para la asimilacin de N, est asociada slo a la clase Cyanophyta, pero no todas las
algas verdes azules pueden utilizar nitrgeno molecular. Los gneros predominantes
involucrados en las actividades de enriquecimiento con nitrgeno son: Anabaena,
Calothrix, Chroococcus, Nostoc, Oscillatoria, Scyronema y Tolypothrix. Las clulas de
vida libre, as como aquellas algas verde-azules que participan en la simbiosis de los
lquenes son capaces de utilizar N,. Tales actividades de asimilacin de N se han
observado en pastizales de zonas templadas, los trpicos, la tundra, en cortezas
desrticas formadas despus de precipitacin pluvial y en rocas colonizadas por
lquenes.

Conclusiones:

Existen infinitas especies de microorganismos cuyo hbitat es el

suelo as como son muchas tambin las funciones que estos cumplen
favorable o desfavorablemente con relacin a la produccin agropecuaria.
Como parte de las funciones de los microorganismos sabemos que, cumplen ciclos
que afectan positiva o negativamente a los dems organismos que habitan en el
suelo.
Los microorganismos que viven en el suelo son muy importantes para la vida y
desarrollo de otros organismos superiores como las plantas y animales, por ende su
estudio es esencial y ms aun si se lo enfoca directamente a buscar mejores
mtodos que ayuden y aumenten la produccin agropecuaria.
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MICROBIOLOGA DEL AIRE

OBJETIVOS:

Determinar como influye el aire en el desarrollo de los microorganismos.

Determinar los diferentes tipos de entrampamiento para medios de cultivos de
micrororganismos suspendidos en el aire.
Determinar algunas tcnicas para reducir la flora microbiana del aire.

L os microorganismos del aire son transitorios y variables. El aire no es un medio

en el que los microorganismos pueden desarrollarse pero es portador de materia
particulada, polvo y gotas, que pueden estar cargados de microbios. El nmero de
microorganismos en el aire estn determinados por las fuentes de contaminacin del
ambiente; como los rganos que son expelidos del aparato respiratorio al toser o
estornudar, y las partculas de polvo que circulan al ser levantadas de la tierra por el
viento. Los microorganismos transmitidos por el aire son transportados en las partculas
de polvo, en las gotas grandes de quedan suspendidas brevemente y en el ncleo de las
gotas, que se forman cuando las pequeas gotas se evaporan.

Se a hablado mucho de la importancia que tienen los microorganismos patgenos

transmitidos por el aire, desde el punto de vista de los mecanismos de la transmisin de
enfermedades. Tambin los microorganismos transmitidos por el aire, de otras
variedades, constituyen un peligro de contaminacin en el laboratorio, el hogar, en las
industrias que manufacturan productos estriles o aquellas cuyos productos dependen
del desarrollo y metabolismo de algunos microorganismos. En este captulo
comentaremos algunos aspectos de la aerobiologa como:

a) Mtodos microbiolgicos para muestra de aire.

b) Contenido microbiano del aire.
c) Control de la flora microbiana en reas cerradas.

TCNICAS PARA EL ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AIRE

El muestreo del aire para determinar su contenido microbiano necesita de aparatos

especiales.
Los denominados dispositivos de trampa lquida han sido diseados para este propsito.
En los filtros de trampa slida, los microorganismos son colectados, o "atrapados",
directamente sobre la superficie slida por un medio de agar o disco filtrante. La
subsecuente incubacin de la muestra da como resultado el desarrollo de colonias donde
quedaron atrapadas los microorganismos. En los aparatos de muestreo con lquidos, la
muestra de aire se hace pasar en forma de pequeas burbujas a travs del caldo de
cultivo u otro lquido donde los microorganismos quedan atrapados. Despus se
siembran muestras de lquido en placas que se cultivan para determinar su contenido
microbiano.
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Adelante sern descritos algunos aparatos y tcnicas que se emplean en el anlisis

microbiolgico del aire.

LA TCNICA DE SEDIMENTACIN EN PLACA

Si se quita la tapa a una caja de Petri que contiene agar, de manera que la superficie del
agar quede expuesta al aire durante varios minutos y se incuba la placa, se desarrolla
cierto nmero de colonias. Cada colonia representa una partcula portadora de
microorganismos que ha cado sobre el agar. Es una tcnica de muestreo tosca, ya que
solo las partculas de ciertas dimensiones caern sobre la placa durante un lapso y no
hay manera de conocer el volumen de aire hecho un muestreo; sin embargo, los
microorganismos transmitidos por el aire pueden ser aislados por este procedimiento.
Repitiendo la exposicin de placas a intervalos es posible obtener una estimacin gruesa
del grado de contaminacin del aire y saber la clase de microorganismos transmitidos
por el polvo en un rea.

TCNICAS DEL CEDAZO Y RANURA

Los muestreadores de aire por cedazo se operan haciendo pasar un volumen de aire
medido a travs de una cubierta de metal que tiene gran cantidad de hoyos y bajo la cual
est una caja de Petri que contiene agar.
La materia particulada en el aire queda atrapada sobre la superficie del agar. Las placas
se incuban para observar el desarrollo de las colonias.
El muestreador por ranura opera bajo el mismo principio que el muestreador por cedazo
(atrapado de partculas sobre la superficie del agar), pero es ms elaborado. En
operacin, el aire se hace pasar a gran velocidad a travs de una pequea abertura que
est sobre la caja de Petri que contiene el agar. La caja est rotando a velocidad
uniforme bajo la abertura, la cual es aproximadamente igual al radio de la caja.
Durante la operacin de muestreo se hace una relacin completa.

El muestreador por ranura tiene muchas aplicaciones para tomar muestra de aire. La
rotacin de la caja de Petri debajo de la ranura durante el muestreo disemina los
microorganismos de manera uniforme sobre la superficie del agar. La velocidad de
rotacin se ajusta d acuerdo con la densidad de la poblacin microbiana; as las
muestras de aire con alto contenido bacteriano se colectan en la placa rotatoria a mayor
velocidad que la que se emplea para muestras con relativamente pocos
microorganismos. Como el muestreo se efectan en un lapso es posible determinar
cualquier cambio que suceda en cualquier momento del procedimiento. Las pruebas han
demostrado que el muestreador de ranura es ms eficiente para atrapar microorganismo
trasmitidos por el aire; prcticamente todas las bacterias transportadas por partculas que
pasan a travs de la abertura son atrapadas en la superficie del agar.

FILTROS DE MEMBRANA

Los aparatos son filtros de membrana para hacer un muestreo aire son similares en
principio a los descritos para hacer un muestreo agua.
 96

El aire se hace pasar a travs de un tipo especial de membrana sostenida por un

dispositivo de filtracin y las partculas que contienen los microorganismos quedan
detenidas sobre estas membranas. Despus se pone la membrana sobre un disco de
papel absorbente saturado de un medio apropiado y se incuba. Tambin es posible hacer
observacin microscpica directa para ver microorganismos sobre la membrana del
filtro.

DISPOSITIVOS DE TRAMPA LIQUIDA

Los muestreadores de trampa lquida se han diseado para forzar el paso del aire a
travs de lquidos
Las partculas transmitidas por el aire quedan atrapadas en el lquido colector, que
despus se siembran en placas, se inocula en animales, o se cultiva de alguna otra
manera, dependiendo del tipo de examen que se est realizando.

EL CONTENIDO MICROBIANO DEL AIRE

Aunque ningn microorganismo es natural del aire, el de nuestro ambiente inmediato y

el que est a varios kilmetros rodeando la superficie del globo terrqueo contiene
varias especies de microorganismos en numero variable.

AIRE INTERIOR: AIRE DE LAS HABITACIONES

El grado de contaminacin microbiana del aire interior est influida por factores como
tiempo de ventilacin, hacinamiento, as como por la naturaleza y grado de actividad de
los individuos que ocupan las habitaciones. Los microorganismos son expelidos en
pequeas gotas de la nariz y boca al estornudar, toser e inclusive al hablar. Esas gotitas
expulsadas del aparato respiratorio varan de tamao; desde algunos macrmetro, a
milmetros. Las que miden pocos micrmetros suelen permanecer en el aire durante
mucho tiempo, pero las grandes, como el polvo, se sedimentan rpidamente sobre las
superficies. Este polvo es transportado por el aire durante los periodos de actividad en la
habitacin.
Las ropas de cama estn fuertemente contaminadas con microorganismos; lo
cual explica que las recamareras agregan muchos microorganismos al aire circulante. La
supervivencia de los microorganismos en el polvo durante largos perodos, crea grandes
riesgos particularmente en los hospitales. Esto, sin duda, contribuye a la propagacin de
las enfermedades que generalmente aparecen durante una hospitalizacin. Se ha aislado
al bacilo diftrico y estreptococos hemolticos han sido encontrados en el polvo del
suelo cercano a los pacientes o portadores de estos microorganismos. El contenido
bacteriano del aire en las habitaciones cuyas condiciones varan, se muestra el efecto
que ejercen los ocupantes de una habitacin sobre los microorganismos transmitidos por
el aire. Cuando la habitacin est vaca, se precipitan las gotas que estn suspendidas en
el aire con los microorganismos.
Los microbilogos han estudiado mucho el hecho de que muchas tcnicas de
laboratorio de rutina producen aerosoles (roco fino que permanece suspendida en el
aire durante un tiempo) con los microorganismos involucrados. Ciertas manipulaciones
tcnicas producen mayores cantidades de aerosoles que otras; como por ejemplo al
 97

introducir una asa de siembra caliente en un cultivo, abrir un cultivo liofilizado, sembrar
una muestra sobre una superficie rugosa de agar o centrifugar. Si el microorganismo en
estudio es patgeno, estas operaciones representan un riesgo para las ersonas que
trabajan en laboratorios pues muchas han adquirido infecciones durante las
investigaciones durante las investigaciones microbiolgicas. Se ha estudiado mucho la
produccin de aerosoles microbianos durante las operaciones de rutina en los
laboratorios. Se presenta un dispositivo experimental en el cual se est mostrando una
tcnica microbiolgica (resiembra de un cultivo) para determinar la produccin de
aerosoles mediante muestreadores de cedazo.
Han sido diseados muchos dispositivos de seguridad para proteger a las
personas que trabajan en los laboratorios contra los aerosoles infectantes. Campanas o
cabinas de seguridad para siembra bacteriolgicas, se obtiene fcilmente en la
actualidad.

El aire entra a la campana por un sistema de filtros y sale a una unidad de

incineracin que destruye cualquier microorganismo. Este sistema de flujo del aire no
permite que los microorganismos lleguen al operador.

AIRE EXTERIOR: LA ATMSFERA

La superficie de la tierra-mar y tierra es la fuente de microorganismos en la atmsfera.

Los vientos levantan el polvo del suelo y las partculas de ste transporta los
microorganismos. Grandes cantidades de agua en forma de goteo son arrastradas de la
superficie de los ocanos bahas y otros depsitos naturales de agua.
Muchas de esas gotitas se producen al reventar las burbujas de la superficie del agua.
Muy importante es que la capa superficial del agua, la micro capa-menos de un dcimo
de milmetro de espesor-, contiene muchos ms microorganismos que las capas
profundas. La cual explica que las gotas que emergen de esta microcapa constituyan a
los microorganismos de la atmsfera que estn inmediatamente encima del agua.
Adems de este origen global de los microorganismos que se encuentran en la
atmsfera, hay muchos procesos industriales, agrcolas y municipales, locales o
regionales, a consecuencia de los cuales se producen aerosoles de microorganismos.
Algunos ejemplos son:
1. Irrigacin por aspersin, con aguas negras, de campo agrcolas o tierras boscosas.
2. Labranza y desmenuzamiento de granos a gran escala.
3. Escurrimiento de los lechos de filtrado en las plantas de tratamiento de aguas negras.
4. Mataderos y plantas de elaboracin.
Se han aislado algas, protozoos, levaduras, hongos y bacterias del aire cercano a la
superficie de la tierra. Unas muestras fueron tomadas de un rea industrial durante
varios meses. Las esporas de hongos constituyen la mayor parte de la microflora
suspendida en el aire y las predominantes fueron los bacilos grampositivos y bacilos
gramnegativos.
Algunos investigadores han estudiado la relacin entre las masas de aire y la
concentracin microbiana durante vuelos entre Montreal y Canad, y Londres,
Inglaterra. Las muestras se tomaron a altitudes que oscilaron entre 2700 y 3000m.
Fueron encontradas bacterias y hongos a 3000m, en las masas de aire que estn a todo
lo largo de la ruta del Atlntico Norte. Las bacterias encontradas son especies del
gnero Microccociaa Sarcina., Bacilos gramnegativos, pleomorficos, grampositivos, y
grmenes esporulados aerbicos.
 98

Los hongos encontrados son especies de Cladiosporium, Alternaria, Pullularia,

Penicillum. Retrytis y Stemphylium. El ms abundante cladosporium, tanto sobre la
tierra como el mar. Nuestros conocimientos de la microbiologa del aire de las capas
superiores se limitan a los resultados obtenidos de investigaciones ocasionales como la
mencionada, pero es evidente que los microorganismos estn difundidos en toda la
atmsfera.
La turbulencia del aire disemina los microorganismos y el viento los lleva a grandes
distancias. La frecuencia con que esto sucede esta influida por muchas condiciones,
empezando por la dispersin de los microorganismos en la superficie de la tierra y la
atmsfera, la hora, estacin y condiciones climticas que intervienen tanto en la
diseminacin como en la supervivencia.

CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS DEL AIRE

Los mtodos para controlar la poblacin microbiana en una habitacin o edificio

dependern de las circunstancias asociadas a la actividad que se realiza en la habitacin
o edificio. Por ejemplo, el aire de una sala de operaciones es probable que no este estril
en el sentido estricto de la palabra, pero el contenido microbiano deber ser mantenido a
tan bajo nivel que las infecciones por microorganismos transmitidos por el aire sea
prcticamente imposible. Lgicamente, no es practico mantener el mismo nivel bajo de
microorganismos en el aire de una sala de hospital que en un quirfano. Sin embargo,
para que una sala de hospital est en buenas condiciones debern observarse
precauciones y practicas que reduzcan el nmero de microorganismos en el aire.
La reduccin del tamao y la complejidad de los modernos aparatos electrnicos, y la
precisin de los actuales equipos que son usados en la industria aeroespacial han
originado el desarrollo de "cuartos limpios" que reducen la posibilidad de
contaminacin con partculas suspendidas en el aire. Dichos cuartos han sido diseados
especialmente para excluir microorganismos.
Los microorganismos transmitidos por el aire se controlan mediante tcnicas fsicas o
agentes qumicos. El aire simplemente representa un ambiente especial para su
aplicacin. En los siguientes prrafos se describe algunas medidas efectivas para reducir
o eliminar los microorganismos del aire.

RADIACIONES ULTRAVIOLETA

Las radiaciones ultravioleta tienen gran valor potencial para reducir la flora microbiana
del aire. Actualmente se dispone de muchos tipos de lmparas que emiten elevados
porcentajes de radiaciones en la regin de 250 - a 260nm, que es la zona bactericida,
que dichas radiaciones tienen muy poco poder de penetracin; son eficaces slo cuando
hacen contacto directo con las partculas que transportan los microorganismos.
Esto requiere que las lmparas sean instaladas convencionalmente para que el aire haga
contacto directo con las radiaciones intensas. Como el ojo humano y en menor grado la
piel se irrita fcilmente por la accin de estos rayos, se deben tomar precauciones para
prevenir el dao en las personas que usen habitaciones donde se han instalado lmparas
emisoras de rayos ultravioletas para sanear el ambiente se puede hacer tres maneras:

1. La irradiacin directa es permisible en cuartos que estn desocupados u ocupados

durante cortos lapsos. En esos casos, el personal estar debidamente protegido (todo
el cuerpo, incluyendo la cabeza, el cuello y la cara; adems se cubrir con una
 99

mscara y los ojos debern protegerse con lentes especiales). Ejemplos de esto, son
los cuartos o salas aspticas de llenado donde se envasan preparados farmacuticos
estriles para almacenar alimentos y los llamados "cuartos estriles En estos cuartos
las luces ultravioletas se dejan prendidas cuando el cuarto no se est usando.

2. Radiacin indirecta en los cuartos ocupados; los ocupantes debern ser protegidos
de las radiaciones. Estos lugares incluyen salones de escuela, enfermeras de
hospitales y guarderas y oficinas.
3. Algunas veces el aire se trata aparte del cuarto o espacio al que deber entrar, como
en los sistemas de ventilacin, en los cuales las lmparas ultravioletas se instalan en
los conductos.

AGENTES QUMICOS

Algunas sustancias qumicas vaporizadas o dispersadas en el aire de una habitacin son

efectivas para reducir la flora bacteriana. En efecto, los agentes qumicos se dispersan
como aerosoles y manifiestan su accin antimicrobiana al establecer contacto con las
partculas suspendidas que llevan los microorganismos. Las caractersticas que deben
reunir los agentes qumicos que se emplean como germicidas del aire son:
1. Ser bactericida poderoso.
2. Dispersarse fcil y conveniente como aerosol, y permanecer en ese estado el tiempo
suficiente para ejercer su actividad antimicrobiana.
3. Ser efectivo a la temperatura y humedad de la habitacin.
4. No tener efectos txicos e irritantes para los hombres a concentraciones mucho ms
elevadas que la necesaria para lograr la accin antimicrobiana.
5. No teir, decolorar o causar similares daos a los objetos.

Algunos de los agentes qumicos sealados como efectivos para estos propsitos
incluyen trietilenglicol, cido lctico, resorcinol, cido hipocloroso y betapropiolactina.
El uso seguro y eficiente de estos agentes requieren grn cuidado; cuando se necesita
saneamiento rpido, el mejor mtodo es el qumico.

FILTRACIN

El tapn de algodn, que se usa rutinariamente en los laboratorios de microbiologa para

tapar tubos de ensayo y matraces que contienen medios de cultivo de soluciones
estriles es un ejemplo de la remocin de organismos por medio de la filtracin.
Equipos de fermentacin usados en el laboratorio que necesitan suplemento de aire
estril, utilizan filtros para quitar los microorganismos.
Los filtros para aire generalmente estn hechos de algodn de vidrio u otros materiales
fibrosos. Su eficiencia bacteriolgica depende de:
1. El tiempo que tarda en pasar el aire por el filtro.
2. El tamao de las partculas que se va a filtrar.
3. La naturaleza del material con que se construy el filtro, as como el espesor del
mismo.
Una de las dificultades en el uso de los filtros es la rapidez con que se tapona si el aire
contiene mucho polvo. Esto se supera usando dos filtros o serie de filtros, gruesos (de
fibra de vidrio) seguido de filtros delgados (fibras de algodn).

SISTEMA DE FLUJO LAMINAR (FLUJO UNIDIRECCIONAL DEL AIRE)

 100

Una nueva clase de tecnologa para controlar la flora microbiana en espacios o cuartos,
se conoce como sistema de flujo laminar. En este sistema el aire pasa a travs de filtros
particulados muy eficaces (HEPA) de acetato de celulosa (el filtro), en forma de placas
rodeadas de arillo de aluminio. Este sistema es bastante til para quitar partculas tan
pequeas como 0.3 um. El aire se hace pasar a travs de varios de estos filtros al
espacio cerrado, de manera que toda la masa de aire se mueve con velocidad uniforme a
lo largo de las lneas de flujo. Este sistema se est usando actualmente en gran variedad
de diseos, tanto verticales como horizontales, para limpiar habitaciones, cabinas y
campanas para siembras estriles o de seguridad.
Una de las aplicaciones principales de esta tcnica est en las industrias electrnica y
del espacio, en las cuales se necesitan condiciones extremas de limpieza para
manufacturar sus productos. Se predice que el sistema de flujo laminar ser de uso
comn en los laboratorios y la industria.

OTROS METODOS Y PRACTICAS

Hay muchos otros mtodos y prcticas tiles para controlar los microorganismos del
aire. La ventilacin natural o mecnica de las habitaciones disminuye la flora
microbiana pues el aire contaminado de las habitaciones es reemplazado por aire limpio
o menos contaminado. El control del polvo en las operaciones de limpieza de las
habitaciones es muy importante.
Si no se cuenta con facilidades de limpieza por extractores al vaco, algunos materiales
como el aserrn engrasado se deben aplicar antes de barrer o golpear para prevenir la
diseminacin de polvo. Un investigador inform varios millones de estreptococos
hemolticos por gramo de polvo, obtenidos cuando se haca la limpieza de una sala de
hospital donde se trataba a enfermos de la garganta.
ltimamente se ha renovado el inters en la aerobiologa; sobre todo la higiene del aire,
por haberse entendido mejor la transmisin y supervivencia de los microorganismos en
el aire la disponibilidad de aparatos para tomar muestras del aire y los avances
derivados de la microbiologa especial.
La calidad sanitaria del agua se basa presencia o ausencia de Escherichia coli, ya que su
presencia representa contaminacin. Algunos investigadores han sugerido una
apreciacin similar para el anlisis microbiolgico del que seale su calidad sanitaria.
Por ejemplo aire puede ser examinado para determinar algunos microorganismos no
patgenos que se encuentran normalmente en el aparato respiratorio humano. Aunque
todava no hay aprobacin general en este mtodo.

CONCLUSIONES:

Se concluy que el aire es uno de los medios de alta contaminacin de

microorganismos.
Tambin se concluy que uno de los sistemas de ms fcil aplicacin para reducir el
nmero de microorganismos que estn en el aire es por medio de la filtracin, y del
uso de exposiciones de salas con rayos ultravioletas.
Se lleg a la conclusin de que existen tcnicas para reducir la flora microbiana o
eliminarla por completo, sean estos por medio de agentes qumicos dispersos por
aerosoles, o eliminndolos, a travs del sistema de flujo laminar.
 101

MICROBIOLOGA ACUTICA
OBJETIVOS:
Determinar los microorganismos que se encuentran en la regin acutica.
Analizar cual es el papel de los microorganismos acuticos y su utilidad.

L os ocanos cubren aproximadamente el 71% de la superficie de la Tierra,

proporcionando a las poblaciones microbianas hbitat muy extensos. Los
ocanos contienen casi cualquier elemento qumico natural, pero la mayora de
esos elementos se encuentran presentes en cantidades extremadamente bajas.
La microbiologa acutica se ocupa del estudio de virus, bacterias, algas, protozoos y
hongos microscpicos que habitan las en estuarios, mares, manantiales, lagos y ros.
Algunos de stos son habitantes naturales de las aguas; otros son transitorios que
penetran en ese medio llevados por el aire o tierra o como resultado de procesos
industriales y domsticos. La microbiologa acutica que en las primeras dcadas fue
estudiada por relativamente pocos, ha surgido como una de las ms importantes ramas
de la microbiologa aplicada.

DISTRIBUCIN DE MICROORGANISMOS EN EL MEDlO ACUTICO

En todo el medio acutico hay microorganismos, desde las regiones superficiales hasta
el fondo de las fosas ocenicas. Las capas superficiales y los sedimentos contienen las
mayores concentraciones de microorganismos, sobre todo las regiones de aguas
profundas.

EL MAR
En el agua de mar hay microorganismos a todas las profundidades y latitudes. Estn en
el plancton y en el sedimento del ocano. El gran volumen del mar abierto es un medio
que tienen menos variaciones en sus condiciones.

PLANCTON (FITOPLANCTON, ZOOPLANCTON)

El conglomerado de vida microbiana que flota y se mueve en la regin superficial de un

ecosistema acutico se le denomina plancton. Est formado principalmente por algas
(fitoplancton), o pueden predominar los protozoos y otros tipos de vida animal pequea
(zooplancton). La mayora de los organismos planctnicos son mviles por presentar
algn diseo estructural o contener gotas de aceite que les hacen flotar; caractersticas
como stas les permite mantenerse en la zona fotosinttica.
La poblacin del fitoplancton rene muchas especies de diatomeas, algas verdi-
azuladas, dinoflagelados, cocolitoforas, silicoflagelados, crisomonas, criptomonas y
clamidomonas . Este grupo de microorganismos es el principal convertidor de la energa
radiante en qumica, energa acumulada en las sustancias qumicas que contiene el mar.
La magnitud de esto s revela por el siguiente clculo: se necesitan 50 mil millones de
toneladas mtricas de fitoplancton para permitir el desarrollo de los peces que se pescan
en todo el mundo, estimados en 50 millones de toneladas mtricas.
Las algas planctnicas, en ciertas condiciones ambientales, forman enormes poblaciones
que transmiten su coloracin a las aguas, condicin conocida como floracin. El color
caracterstico del Mar Rojo est relacionado con la floracin masiva de las algas verdi-
 102

azuladas, Oscillatoria erythraca, las cuales contienen los pigmentos ficoeritrina y

ficocianina. La "marea roja" se debe al gran desarrollo de ciertas especies del plancton y
la coloracin caf, o verde amarillenta de extensas reas acuticas a la floracin de
otras.
La poblacin bacteriana de la zona fotosinttica esta muy relacionada con la
distribucin del fitoplancton. Los efectos benficos del plancton se atribuyen tanto a las
sustancias orgnicas que elaboran, como a las superficies slidas que proporcionan a los
conglomerados de bacterias. La poblacin bacteriana vara mucho segn las condiciones
predominantes. La temperatura del ambiente marino y el grado de salinidad son
decisivos para el desarrollo de los tipos fisiolgicos, psicrfilos y halfilos. La mayor
parte de las bacterias marinas, sin embargo, son halotolerantes o moderadamente
halfilas. Entre las formas psicrfilas hay bacterias, que producen luz en presencia de
oxgeno. Estas bacterias viven asociadas simbiticamente con otras especies marinas y
comnmente se encuentran los siguientes gneros: Pseudomonas, Vibrio,
Flavobacterium y Achromobacter. Las bacterias de la regin superficial frecuentemente
son pigmentadas, caracterstica que las protege del efecto letal de la radiacin solar. En
la zona fotosinttica del agua de mar hay tambin esporas de hongos y fragmentos de
micelio. Del ambiente marino se han aislado especies de Phycomicetes, Myxomicetes y
Deuteromicetes. Aunque las levaduras no han sido estudiadas detalladamente, quizs
tienen un papel similar al de las bacterias.
En la regin habitada por el fitoplancton viven muchos protozoos (especies de
Foraminifera y Radiodaria, lo mismo que de flagelados y ciliados). Estos animales del
zooplancton se alimentan ("apacentan") del fitoplancton, bacterias y detritos. Se ha
observado que muchos organismos del zooplancton evitan la luz y muestran
migraciones diversas. Durante la noche, los animales se apacentan del fitoplancton en la
superficie del agua y en el da se sumergen en la zona aftica.
La poblacin microbiana es escasa cerca de la superficie del mar porque la intensidad de
la iluminacin es inhibitoria. El rea que queda entre estos estratos superiores y la zona
que estn justamente encima del piso marino es relativamente estril, o sea una vasta
regin ocenica desierta de microbios.

MICROORGANISMOS BENTONICOS

Los habitantes microbianos de las regiones del fondo de los depsitos de agua se
conocen como organismos bentnicos. La regin ms rica del sistema estuario, en
trminos de nmero y clases de microorganismos, es la regin bentnica que empieza
en el nivel de la marea alta y s extiende muy abajo, donde 1as plantas no se desarrollan
abundantemente.
Los sedimentos de la costa estn habitados por bacterias y protozoos. Grandes
cantidades se encuentran en la entrecara entre lodo y agua; la poblacin bacteriana vara
desde unos cuantos cientos de millones por cada mililitro Las bacterias de los depsitos
del fondo marino son muchas variedades de tipos fisiolgicos. La mayora son
anaerobios facultativos o estrictos.

ESTUARIOS
Estuario es un cuerpo de agua semicerrado conectado con mar abierto. Dicho de otra
manera es la regin costera del ecosistema marino. Comparadas sus aguas con las del
ocano, resultan con menos caractersticas constantes. Los estuarios son sistemas
complejos que reciben gran variedad de fuentes. La temperatura, salinidad, turbidez,
 103

carga nutritiva y otras condiciones fluctan sobre un gradiente amplio en espacio y

tiempo.
De estas observaciones se deduce que la flora microbiana de los estuarios est sujeta a
fluctuaciones considerables. Algunas especies son naturales de nichos ecolgicos
propios del estuario; otras son transitorias, que se han agregado de fuentes domsticas,
industriales, agrcolas o atmosfricas. En las reas que reciben contaminacin domstica
y son ricas en nutrientes orgnicos, predominan las bacterias coliformes, estreptococos
fecales, especies de Bacillus, Proteus, Clostridium, Sphaerotilus, Beggiatoa, Thiothrix,
Thiobacillus y muchas otras. Tambin hay virus del grupo entrico.

En las regiones del estuario, pobres en alimentos, s encuentran las bacterias gemantes o
las bacterias apendiculares como Hyphomicrobium, Caulobacter y Gallionella adems
de Pseudomonas. Tambin hay bacterias del suelo, como Azotobacter, Nitrosomonas y
Nitrobacter. En varias regiones de los estuarios existen muchos hongos (ascomicetos,
fcomicetos y deuteromicetos).

MEZCLA DE AGUAS (CORRIENTES ASCENDENTES)

El movimiento de las aguas por el viento, mareas, o corrientes, trae como consecuencia
alguna redistribucin de la flora microbiana. El fenmeno conocido como ascendente
sucede en un ocano cuando el agua sube hasta zonas poco profundas, generalmente
como resultado de las diferencias de corrientes o por los vientos. En este proceso, el
agua del fondo lleva ricos nutrientes a la superficie. El fenmeno ascendente ocurre
cerca de las costas de California y Per, y hace que esas regiones tengan alta
productividad.

LAGOS Y LAGUNAS

La poblacin microbiana de estas reas deriva en gran parte del suelo. Los lagos y
lagunas tienen zonas y estratificacin caractersticas Casi siempre existe una zona
litoral relativamente amplia que tiene considerable vegetacin de raz y regiones donde
la luz penetra hasta el fondo. En reas abiertas, la Zona limntica est determinada por
el nivel de compensacin de la luz. La actividad fotosinttica desciende
progresivamente en las regiones profundas en aguas abiertas. La zona bentnica est
compuesta de lodo blando o fango. Lo mismo que la zona profunda, la bentnica est
muy poblada por organismos hetertrofos. La naturaleza qumica de la cuenca y la de
los materiales que llegan con la corriente y ros afectan, por supuesto, esa productividad.
Los lagos y lagunas de las zonas templadas muestran cambios interesantes en su
contenido de poblacin microbiana con las estaciones, debido a la estratificacin del
agua como resultado de la diferencia de temperaturas. Tal estratificacin acta como
barrera a los nutrientes y al intercambio de oxgeno, especialmente en las aguas
estancadas. En verano, las capas superiores tienden a ser ms calientes que las
inferiores, pero en invierno, el hielo, que es menos denso, se junta en la parte superior;
as, la temperatura se invierte y durante la primavera y verano ocurren mezclas de esas
capas lo cual favorece el crecimiento masivo de las algas (floracin). Los lagos o
lagunas enriquecidos con nutrientes, particularmente nitrgeno v fsforo, proceso
conocido como eutrofizacin, son propicios para el desarrollo de las algas.
Proceso de eutrofizacin
 104

Muchas actividades humanas causan vertidos que contienen nutrientes, tales como
fosfatos y nitratos, en ros y lagos; este proceso conocido como eutrofizacin
provoca el crecimiento de algas y de otros componentes del plancton, de tal forma
que reduce el contenido de oxgeno en el agua y, por tanto, dificulta la
supervivencia de los peces. Adems esto hace que las aguas resulten muy
desagradables.

RIOS

Los ros obtienen la mayora de los elementos nutritivos orgnicos e inorgnicos de los
terrenos por los que pasan o de los lagos y lagunas.
Para explicarlo mejor, la microbiota refleja las condiciones del terreno inmediato,
inclusive los efectos de las maniobras agrcolas e industriales. Los cambios drsticos en
el ambiente de corrientes y ros creados por la rpida expansin urbanstica hacen
imposible generalizar sobre la microbiota tpica o tipos caractersticos de sta.

EL MEDIO ACUATICO

La poblacin microbiana en un depsito de agua natural esta, en gran parte, determinada

por las condiciones fsicas y qumicas que prevalezcan en ese hbitat. Salta a la vista
que dichas condiciones varan mucho cuando se comparan corrientes, estuarios y mar
abierto. Algunas de estas condiciones sern descritas a continuacin:

TEMPERATURA

La temperatura de las aguas superficiales oscila de 0 C en las regiones polares y a 30 o

40 C en las ecuatoriales. Ms del 90 % del ambiente marino (de hecho el mayor
acutico) tiene temperatura menor a 5 C, condicin favorable para el desarrollo de los
microorganismos psicroflicos. En los manantiales termales en los que las temperaturas
alcanzan hasta 75-80 C, prevalecen microorganismos como Thermus aquaticus,
bacteria cuya temperatura ptima es 70-72 C. La temperatura de los lagos y estuarios
esta definida por las estaciones, y por lo mismo, estas repercuten en las variaciones de la
microbiota.

PRESION HIDROSTATICA

Hay marcadas diferencias de presin en las aguas superficiales y las de las

profundidades ocenicas. Esta presin hidrosttica afecta el equilibrio qumico, el que, a
su vez, reduce el pH del agua de mar, lo que trae como consecuencia un cambio en la
solubilidad de los nutrientes como el bicarbonato, -HCO3. Como est comprobado, la
presin hidrosttica aumenta con la profundidad a razn de 1 atm/10m. En algunas
fosas ocenicas del Pacfico (profundidad > 1 000 m y una presin hidrosttica > 100
atm), se han aislado microorganismos basfilos que se desarrollan a la presin
atmosfrica normal. La presin hidrosttica en esas profundidades es un factor muy
importante para la existencia y desarrollo de los microorganismos marinos.

LUZ

Todas las formas de vida acutica dependen, directa o indirectamente, de los

organismos que sintetizan material orgnico y dixido de carbono con la luz del sol. En
 105

la mayora de los habitantes acuticos, estos productos primarios son algas cuya
ubicacin est restringida a las capas superiores del agua, en las que penetra la luz solar.
La profundidad de la zona ftica vara, dependiendo de las condiciones locales como
latitud, estacin del ao turbidez del agua. Generalmente la actividad fotosinttica est
limitada a los primeros 60 a 125 m. El dixido de carbono se encuentra profusamente
disponible apartar del HCO3, aunque tambin hay algo de CO2 gaseoso.

SALINIDAD

El grado de salinidad de las aguas naturales vara desde casi cero en las dulces, hasta la
saturacin en algunos lagos. Una de las caractersticas del agua de mar es su alto
contenido de sales, el cual es muy constante pues slo vara entre 33 y 37 g/Kg. de
agua. Las sales principales son los cloruros, sulfatos y carbonatos de sodio, potasio,
calcio y magnesio. La concentracin de sales generalmente es menor en los bajos, corta
distancia de la costa y cerca de las desembocaduras de los ros. La mayora de los
microorganismos marinos son halfilos; crecen mejor en concentraciones salinas de 2.5
a 4.0 %, aunque los de los lagos y ros son halfobos v no se desarrollan en
concentraciones de sal mayores a 1 %. La respuesta de tres tipos de bacterias al
crecimiento en diferentes niveles de salinidad se muestra en la figura.

TURBIDEZ

Existen marcadas variaciones en la claridad de las aguas, el mar Adritico es bastante

claro a grandes profundidades; en cambio muchas desembocaduras generalmente estn
muy turbias. El material suspendido que causa la turbidez incluye:
a) Partculas de material mineral que se origina en la tierra;
b) Detritos, predominantemente material orgnico particulado como celulosa,
hemicelulosa y fragmentos de quitina; y
c) Microorganismos suspendidos. Como se mencion, la turbidez impide la
penetracin de la luz que a su vez afecta la zona fotosinttica. La materia particulada
tambin sirve como sustrato al que se adhieren los microorganismos, al cual
metabolizan.
Muchas especies de bacterias marinas, llamadas perifitas, se desarrollan en forma
caracterstica cuando se adhieren a las superficies slidas.

CONCENTRACIN DE HIDROGENIONES (pH)

En general, los microorganismos acuticos, se desarrollan a pH 6.5 a 8.5. El pH del mar

es de 7.5 a 8.5. El desarrollo ptimo de la mayor parte de las especies marinas se
obtiene en medios cuyo pH est ajustado entre 7. 2 a 7.6. Los ros y lagos muestran
grandes variaciones en el pH dependiendo de las condiciones locales.

CONSTITUYENTES ORGNICOS E INORGNICOS

La cantidad y tipo de los materiales orgnicos e inorgnicos en el medio acutico son

muy importantes en la determinacin de la microbiota.
Para el buen desarrollo de las algas, los nitratos y fosfatos son elementos muy
Importantes. Se necesitan compuestos orgnicos para que se desarrollen las bacterias
saprfitas y los hongos. Las aguas cercanas a la costa, que reciben el agua domstica de
desecho estn sujetas a notables variaciones en la carga de nutrientes, mientras que esta
 106

carga en mar abierto es muy baja y estable. Los desperdicios industriales llevan
sustancias antimicrobianas a los estuarios y aguas costeras. El mercurio y otros metales
pesados en pequeas concentraciones inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos.

TCNICAS PARA EL ESTUDIO DE MICROORGANISMOS ACUTICOS

Cuando se trata de tomar muestras en mar abierto. Las principales dificultades son:
1. Muchos de los microorganismos acuticos se desarrollan en los medios de
laboratorio comunes como agar o caldo nutritivo y consecuentemente, no se pueden
aislar. Es del dominio general que los estuarios y ocanos contienen gran nmero de
especies microbianas an no descubiertas.
2. Gran porcentaje de bacterias de los estuarios y del mar tiene afinidad natural para
desarrollarse fijas a superficies slidas, a material particulado, o a organismos ms
grandes.
3. En el tiempo que transcurre entre la toma de la muestra y su transportacin hasta el
laboratorio, muchos organismos pierden viabilidad. Por esto, lo mejor es tener bar-
cos equipados con laboratorios para estudiar las muestras donde se tomaron pero
esto es muy costoso.
4. La toma de muestras del fondo de los estuarios y ocanos requiere equipos de
muestreo especializado
5. No se dispone todava de tcnicas para aislar los virus marinos.
6. Aunque se utilizan muchsimos procedimientos para examinar biolgicamente las
aguas, la seleccin del mejor est determinada por el propsito del examen, como:
1. Examen microscpico para identificar y enumerar algas, protozoos Y muchos
hongos. La tcnica del portaobjetos sumergido es una modificacin que da buen
resultado.
2. Tcnicas de cultivo en placa para aislar o contar ciertos grupos de bacterias, como
Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus y muchas otras cultivables en
los medios bacteriolgicos usuales. La tcnica de filtros de membrana o moleculares
se aplica para examinar y cultivar muchas bacterias del medio acutico.
3. Tcnicas de cultivos enriquecidos para aislar tipos metablicos y fisiolgicos
especficos de microorganismos.
4. Medida de la biomasa total o de la actividad bioqumica.
a) Determinacin de la biomasa: determinacin del peso seco de las algas y
medicin de la clorofila.
b) Consumo de carbono-14: suplementando el CO2 del agua con C14O2
radiactivo en la forma de bicarbonato de sodio NaHC14O3 y midiendo el C14
asimilado por las clulas.
c) Sntesis de ATP: midiendo la cantidad de ATP como funcin del ndice de
actividad microbiana o biomasa total.

PAPEL E IMPORTANCIA DEL ECOSISTEMA MICROBIANO ACUTICO

La vida acutica es un complejo muy amplio de interacciones de los microorganismos y

de stos con los macroorganismos, tanto plantas como animales. Los microorganismos,
particularmente 1as algas, ocupan un lugar clave en la cadena alimentaria del medio
acutico. Muchas especies bacterianas realizan cambios bioqumicos en distintos
sustratos, cambios que permiten la reutilizacin cclica de elementos y nutrientes
 107

PRODUCTIVIDAD DE LOS ECOSISTEMAS ACUATICOS

Los productores primarios en los sistemas marinos son las algas verdi-azuladas y las
eucariticas, las cuales predominan en el fitoplancton y por medio de la fotosntesis son
capaces de transformar la energa radiante en qumica. La actividad biolgica de un
ecosistema acutico depende, sin duda, del monto de la produccin primaria realizada
por los microorganismos fotosintticos, pero en los estuarios poco profundos el papel de
estos organismos como productores primarios est muy reducido. Las plantas que
crecen en la costa aportan hojas, tallos y otros detritos.

FERTILIDAD DE LOS OCANOS

El plancton, particularmente el fitoplancton, ha sido sealado como la "pastura de los

ocanos". Peces, ballenas, calamares se alimentan directamente del plancton o de
animales mayores que lo consumen. El trmino fertilidad del ocano se usa para
expresar la capacidad de producir material orgnico a partir de los organismos presentes
en esas aguas. El medio terrestre produce de 1 a 10 g de materia orgnica seca por metro
cuadrado por da; en cambio las zonas profundas de los ocanos producen 0.5 g. Sin
embargo, el rea de los ocanos, es mucho ms grande que el rea productiva terrestre
la que hace que la diferencia no sea importante ya que la productividad total de los
ocanos sobrepasa mucho a la de la tierra. Esta fertilidad del ocano depende en primer
lugar de la cantidad de fitoplancton y el desarrollo de estos organismos de la energa
radiante, dixido de carbono, agua, nitrgeno inorgnico, compuestos de fsforo y
pequeas cantidades de varios elementos. Los factores que generalmente limitan su
desarrollo son la energa radiante, el nitrgeno, fsforo, y pequeas cantidades de otros
elementos; el nitrgeno, fsforo y esos elementos en cantidades pequeas, se hacen
disponibles para las reacciones de mineralizacin que efectan algunos
microorganismos, particularmente las bacterias. Como ya se mencion, esto implica el
catabolismo de los sustratos orgnicos que derivan del metabolismo de los organismos
marinos o de los tejidos de esos organismos despus de su muerte. As, notamos que
hay un ciclo de hechos que se conjugan para satisfacer los requerimientos nutritivos de
varios niveles de la vida marina y en la cual, los microorganismos son parte
indispensable.
Se considera que el ocano Antrtico es l ms frtil que los dems, en especial en el
sector donde se unen y se revuelven sus aguas con los ocanos Atlntico, Pacfico e
indico. Aqu se localiza un movimiento continuo por las corrientes heladas del fondo
que provienen de la porcin continental antrtica.

TRANSFORMACIONES BIOGEOQUMICAS

La actividad bioqumica principal de la flora bacteriana es el catabolismo y la

mineralizacin de la materia orgnica; es decir, el catabolismo de los compuestos
orgnicos hasta dixido de carbono, agua, sales inorgnicas.
Los microorganismos liberan los elementos (como el nitrgeno) a partir de compuestos
orgnicos y a lo largo de varias series de reacciones en las que participan muchas
bacterias. El elemento, en la forma de compuesto inorgnico, queda nuevamente
disponible como alimento para las plantas.
 108

En los ciclos biogeoqumicos mencionados poco antes, muchos materiales complejos

son catabolizados por los microorganismos. Por ejemplo, los materiales celulosos
abundan en las aguas dulces y son importantes en el mar. Las bacterias aerobias
celulticas degradan la celulosa hasta celobiosa o incluso glucosa. Estos azcares son
rpidamente metabolizados por muchas otras bacterias. En forma similar, los
microorganismos proteolticos degradan las protenas a pptidos y aminocidos; mayor
catabolismo da como resultado liberacin de nitrgeno en forma de amoniaco.

SEDIMENTOS MARINOS

Las diatomeas se caracterizan por tener pared celular de slice. El grosor de esa pared
vara mucho, desde muy fina en ciertas especies del plancton a muy gruesa en algunas
especies bentnicas. Los silicoflagelados y Radiolaria tambin tienen esqueletos
silicosos. Foraminfera y los cocolitforos producen esqueletos calcreos. Estos
organismos son miembros importantes del plancton. Cuando mueren, gradualmente
caen al fondo donde se cumulan. En varias regiones ocenicas hay grandes bancos de
este material algunas veces de varios miles de metros de espesor. Los bancos calcreos
de Inglaterra y Francia estn formados principalmente por remanentes de foraminfera,
y gran parte de los de Monterrey, en Lompoc, California, son esqueletos de diatomeas.
Las bacterias y algas verdi-azuladas estn relacionadas con la precipitacin carbonato
de calcio que a su vez es importante en la formacin de piedra caliza.

La acumulacin y transformacin del hierro y manganeso en los sedimentos y depsitos

sulfurosos, como los que existen en las costas deTexas y Luisiana, estn ntimamente
relacionados con la actividad microbiana.

CONCLUSIONES:

En la regin superficial acutica encontramos microorganismos como el

fitoplancton entre las que tenemos a las diatomeas, algas verdi-azules,
dinoflagelados, etc., as como tambin protozoos de las especies Foraminfera, y
Radiolaria. En las grandes profundidades se pueden encontrar diferentes tipos de
bacterias que son la mayora anaerobios facultativos o estrictos.
Estos microorganismos cumplen un papel muy importante en el equilibrio biolgico
marino. La poblacin bacteriana de la zona fotosinttica est muy relacionada con
la distribucin del fitoplancton. El fitoplancton sirve como alimento de peces,
ballenas, calamares, etc., los cuales se alimenta directamente de este o ya sea de
animales mayores que lo consumen.
 109

MICROBIOLOGA DEL AGUA DE USO

DOMSTICO Y DE AGUAS NEGRAS
Objetivos:

Conocer que diferencias existe entre agua de uso domstico y agua negra.
Saber cules son los microorganismos ms comunes que afectan la calidad del agua.
Comprender que el agua debe ser pura para utilizarla en hbitos diarios de humanos,
de animales y vegetales.
Conocer las pruebas de laboratorio que nos permiten conocer que calidad de agua
estamos consumiendo.

E l agua es un recurso vital para la vida tanto de animales como de vegetales, es por
eso que sin agua existira una alta mortandad. El agua ocupa las tres cuartas
partes del globo terrestre y esta debe ser cuidada para que no suframos
consecuencias nefastas por carencia de este elemento vital.

Para consumo debemos definir dos trminos, uno es el agua potable; que es el
libre de microorganismo patgenos y sustancias qumicas perjudiciales para la salud.
Por otro lado el agua que contiene desperdicios domsticos o industriales se denomina
agua no potable, y no es apta para el consumo. Para lograr la purificacin de este tipo de
agua lo esencial es eliminar los microorganismos perjudiciales y las sustancias qumicas
no deseables, y una vez purificada podemos decir que el agua es potable.

Toda planta de purificacin municipal de agua se somete a ciertas operaciones

que se resumen a continuacin: sedimentacin, filtracin y cloracin. La sedimentacin
se realiza en grandes depsitos, en los cuales el agua permanece en reposo y las
partculas grandes se sedimentan. Esta precipitacin resulta ms rpida si se le agrega
sulfato de aluminio que forma folculos pesados. Muchos microorganismos y materiales
finalmente suspendidos, se separan al descender el sedimento, y despus el agua
atraviesa filtros de arena, en donde se elimina el 99% de las bacterias contaminantes.

Todo proceso de potabilizacin de agua debe estar sujeto a una investigacin

sanitaria, que esta a cargo de ingenieros calificados. Esta investigacin incluye la
inspeccin, y esta consta de:

La fuente sin tratar y las condiciones que influyen en su calidad.

Las operaciones de la planta purificadora o la construccin de pozos.
El mecanismo de la distribucin del lquido a los consumidores.

Ya en el anlisis de laboratorio, si nosotros encontramos presencia de E. coli,

debemos asegurar que el agua es contaminada, puesto que este microorganismo es un
patgeno que proviene de descargas intestinales de hombre y animales. As mismos los
Streptococcus faecalis, son habitantes normales del intestino grueso de hombres y
animales que se encuentra en materias fecales, por lo tanto si esta especie se encuentra
en el agua, el agua est contaminada. Existe una prueba que determina que E. coli,
prueba la fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas. La prueba es la
siguiente:
 110

Primero la prueba presuntiva, consiste en la inoculacin de caldo lactosado; esta nos

puede arrojar dos datos: si no hay produccin de gas, se detiene el examen, mientras
que si hay produccin de gas, se determina la existencia de coliformes y se contina.
Para la confirmacin de la prueba se resiembra a partir de los tubos de caldo
lactosado y gas a:
1. Caldo con verde brillante, lactosa y bilis (BGLB), este medio inhibe el desarrollo de
los fermentadores de la lactosa diferentes a los coliformes; as la formacin de gas
en este medio constituye la confirmacin de la prueba.

2. Agar con eosina-azul de metileno (EMB), los microorganismos coliaerogenes

producen colonias caractersticas; E. coli, produce colonias oscuras con el centro
negro y brillo verde metlico. Por lo tanto la presencia de colonias caractersticas
confirma la prueba.

Los miembros del grupo coliforme se pueden diferenciar de la siguiente manera:

La capacidad para producir indor. E. coli lo produce y Enterobacter aerogenes no.
La cantidad de cido producida en medio de caldo glucosado adicionando el
indicador rojo de metilo. E. coli produce pH ms bajo.
La capacidad de producir acetilmetilcarbinol en un medio de peptona glucosado. E.
coli, no lo produce.
La utilizacin de citrato de sodio. E. coli, no lo puede utilizar.
Gran cantidad de bacilos aerobio y anaerobios facultativos, gram negativos, no
esporulados que producen cido y gas al fermentar la lactosa; tienen presencia en aguas
contaminadas. Ejemplos de estos son: E. coli, Enterobacter aerogenes, Proteus vulgaris,
Salmonella typhi y Shigella dysenterias.

Otra tcnica es la de filtracin por membrana o filtros moleculares para el

anlisis microbiolgico del agua, y esta presenta las siguientes ventajas:
Se pueden examinar grandes volmenes de agua.
La membrana se puede pasar de un medio a otro.
Se obtienen resultados ms rpidos.
Se logran estimaciones cuantitativas de ciertos tipos de bacterias.

Las aguas negras o aguas de albaal tienen una composicin que siempre vara, y as
mismo, vara la concentracin de microorganismos que en estas se encuentren, lo
mismo de hongos, protozoos, bacterias y virus. Las aguas de albaal contienen millones
de bacterias por ml como coliformes, estreptococos, bacilos esporulados anaerobios, del
grupo Proteus, y otros tipos que se originan en el tracto digestivo humano y animal. El
virus de la poliomielitis, de la hepatitis infecciosa y los Coxaccke son eliminados con
las materias fecales de los huspedes infectados y as llegan hasta las aguas de albaal.

Las agua de albaal que han sido usadas por una comunidad incluyen:
Los desechos domsticos.
Los desechos industriales.
Las aguas profundas, superficiales y atmosfricas que entran al sistema de drenaje.
La cantidad de BOD se relaciona con la cantidad de materia orgnica en las aguas
de albaal.

Los diversos factores que contribuyen a la naturaleza cuantitativa de la flora microbiana

de las aguas negras son: el predominio de algunos tipos fisiolgicos de bacteria que
 111

cambia el curso de la digestin de las aguas negras. En un aparato de tratamiento de

anaerobios, durante los estudios iniciales de la digestin predominan las tipos
anaerobios facultativos (Enterobacter, Alcaligenes, Escherichia, Pseudomonas), a los
cuales siguen en frecuencia los productores de metano (Methanobacterium,
Methanosarcina, Methanococcus). Los cido orgnicos producidos por las bacterias
facultativas son metabolizados por las formadoras de metano, los productos finales son
metano y dixido de carbono.

La fosa sptica es un tanque de sedimentacin fabricado para retener el material

slido de las aguas de albaal que entran al tanque el tiempo suficiente para que se
efecte la descomposicin del sedimento. En la fosa sptica se realizan dos procesos:
sedimentacin y degradacin de la misma. Una vez que las aguas negras penetran en
este tipo de fosa se inicia la sedimentacin en la parte superior, permitiendo que las
descargas de la parte lquida con pocos slidos en suspensin salgan de la fosa. Los
slidos sedimentados estn sujetos a degradacin por bacterias anaerobias, razn por la
cual los productos finales todava son muy inestables. El lquido no sale de la fosa, se
difunde bajo la superficie de la tierra por los dispositivos de desecho.

Las fosas spticas son las ms adecuadas para desechar las aguas negras de
instalaciones pequeas, sobre todo de las habitaciones rurales donde no existen servicios
pblicos de drenaje. Sin embargo con este mtodo no se puede estar seguro de eliminar
los microorganismo patgenos que estn en esas aguas. Por lo tanto, es importante que
el lquido que drene de la fosa sptica no fluya en las fuentes de agua potable. Hay que
diferenciar dos trminos: efluente, que es la parte lquida de las aguas negras; y
sedimento, que es el material particulado que se deposita en los tanques.
El proceso de activacin del sedimento:

La aireacin vigorosa de las aguas negras da como resultado la formacin de

nata.

Si se permite que la nata se sedimente y se aaden aguas negras frescas que son
nuevamente aireadas vigorosamente ocurre la floculacin en un tiempo menor.

Repitiendo este procedimiento es decir, aireacin, adicin de nata sedimentada

en aguas negras frescas, sedimentacin, adicin del sedimento a aguas frescas, se
alcanza un estado de floculacin completa de las aguas negras en muy poco tiempo. Las
partculas de la nata, como sedimento activado contienen gran cantidad de tipos de
bacterias muy activas, lo mismo que levaduras, hongos y protozoos.

En este proceso generalmente se emplea un periodo de 4-8 horas de la cual, la

mezcla pasa en un estanque de sedimentacin. Lo que sale de estos estanques son aguas
negras completamente tratadas. Hay una considerable reduccin de los slidos en
suspensin y del BOD. Algunas de las ventajas de este mtodo de tratamiento son el
espacio relativamente pequeo que ocupan y la calidad del lquido efluente es tal que no
necesitan grandes diluciones para desecharlo.

La Federal Water Pollution Control Act Amendments de 1972 (Ley pblica 92-
500), cre un nuevo programa llamado The National Pollutant Discharge Eliminations
System. Este sistema proporciona un mecanismo para asegurar que se obedecen los
patrones establecidos, que se aplica la tecnologa necesaria y que todas las disposiciones
 112

contenidas en esa ley de 1972 para controlar los desechos y cumplir con los patrones de
calidad del agua, se siguen al pie de la letra.

CONCLUSIONES:

El correcto manejo de la purificacin y el adecuado proceso de potabilizacin del

agua, brindar a la comunidad una mejor calidad de agua y se reducir el margen de
enfermedades causadas por microorganismo patgenos que no son eliminados del
agua.
El correcto empleo de plantas de tratamiento de aguas negras, tambin permitir una
mejor calidad de agua potable.
El control por parte de las autoridades pertinentes de la contaminacin excesiva del
agua por parte de grandes industrias, permitir gozar a la gente de agua sana que no
perjudique a la naturaleza.
 113

MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS

OBJETIVOS:

Conocer cmo se conservan los alimentos.

Ver cmo influyen los microorganismos en el deterioro de los alimentos.
Conocer el proceso de fermentacin.

INTRODUCCION:

L os productos alimenticios no solo sirven como fuente de nutricin para seres

humanos y otros animales, sino tambin como substrato para el desarrollo de
microorganismos. El desarrollo desenfrenado de microorganismos en los
alimentos causa su deterioro, problema que causa prdidas considerables en los
productos alimenticios. Es entonces el inters de la microbiologa de los alimentos de
ver los procesos que intervienen en su deterioro y las medidas apropiadas para lograr la
conservacin de los productos alimenticios con el fin de controlar a los
microorganismos indeseables que puedan producir su descomposicin.

DETERIORO DE LOS ALIMENTOS

Se define como toda alteracin en un alimento que lo hace indeseable o peligroso
para el consumo humano. Los alimentos se clasifican de acuerdo a su susceptibilidad al
deterioro microbiano en:
No perdurables, como: carnes, pescados, aves, mayora de frutas y verduras, huevos,
leche.
Semiperdurables, como: papas y manzanas.
Perdurables, como: azcar, harinas, productos secos.

Las alteraciones que ocurren en un alimento durante el deterioro microbiano dependen

de las poblaciones microbianas particulares que participan, sus actividades enzimticas,
condiciones ambientales y la naturaleza del alimento. Varios factores que controlan la
descomposicin de los alimentos son intrnsecos a estos, pero otros son parmetros
extrnsecos ambientales como: temperatura de almacenamiento, humedad relativa,
concentracin de oxgeno.

Deterioro de frutas y verduras:

Estos estn sujetos a putrefaccin por descomposicin microbiana de la pectina, que es
la sustancia que proporciona firmeza y textura a las mismas.

Deterioro de carnes:
Las carnes y otros productos protenicos pueden ser descompuestos por bacterias
anaerobias, lo cual da lugar a la putrefaccin por desintegracin de las protenas,
produciendo olor desagradable. En condiciones aerobias hay acumulacin de sustancias
limosas, sin olor desagradable.

Deterioro de otros alimentos:

El deterioro por degradacin microbiana de grasas y aceites produce el enranciamiento,
causado por oxidacin o hidrlisis de lpidos.
 114

MTODOS DE CONSERVACIN DE LOS ALIMENTOS

Los mtodos para la conservacin de los alimentos van dirigidos a prevenir el

deterioro microbiano de los productos alimenticios y evitar el desarrollo de agentes
patgenos transmitidos por alimentos. Es as que hay dos objetivos:
1. Aumentar la vida de anaquel del alimento.
2. Asegurar la inocuidad (no-peligrosidad) del alimento cuando se consume.

Principios de la conservacin de alimentos:

1. Prevencin o retraso de la descomposicin microbiana

a) por apartarlos de los microorganismos (asepsia)
b) por eliminacin de los microorganismos (filtracin)
c) por reducir la velocidad del desarrollo microbiano (baja temperatura, desecacin,
condiciones anaerbicas, inhibidores qumicos)
d) por la destruccin de los microorganismos (calor o radiacin)
2. Prevencin o retraso de la auto descomposicin del alimento
a) por in activacin de las enzimas del alimento (limpieza)
b) por prevencin de reacciones qumicas (uso de antioxidantes)

Mtodos principales de la conservacin de los alimentos:

Asepsia o mantenerlos al abrigo de los microorganismos

Eliminacin de los microorganismos
Mantenimiento de las condiciones de anaerobiosis
Uso de temperaturas altas
Uso de temperaturas bajas
Desecacin
Irradiacin
Uso de conservadores qumicos

Asepsia: Algo importante para la conservacin de los alimentos es evitar con mtodos
sanitarios, ya sea: limpieza, manejo comercial, lavado de producto, empaquetacin y
control de calidad, preparacin; la contaminacin con microorganismos.

Filtracin y centrifugacin: Se pueden usar tambin para eliminar microorganismos de

algunos productos alimenticios. La filtracin se usa para esterilizar microorganismos en
el agua de beber cerveza, vino, bebidas dulces y jugos de frutas. La centrifugacin solo
se puede usar para clarificar un lquido antes de la filtracin.

Temperaturas altas: Es un medio muy efectivo para matar los microorganismos; esto
depende de la sensibilidad a tal temperatura de un alimento pues si se destruye, no se
puede utilizar este mtodo. Este mtodo implica: esterilizacin, exposicin del alimento
a alta temperatura, y seguido por asepsia.

Interior de una fbrica de cerveza

Estas grandes calderas se emplean en una fase vital del proceso. En este punto se
aade lpulo al lquido previamente obtenido por malteado del grano (germinacin y
tostado), que sirve para convertir el almidn en azcar. El lpulo, flores de forma
 115

cnica que se obtienen de la planta del lpulo, da a la cerveza su sabor amargo y

ayuda a inhibir el crecimiento de ciertas bacterias.

Pasteurizacin: Este mtodo aplica exposiciones a temperaturas moderadas, altas, para

reducir el nmero de microorganismos viables y eliminar a los patgenos humanos. Este
proceso va normalmente seguido por refrigeracin, para reducir la velocidad de
desarrollo de los microorganismos sobrevivientes.

Enlatado: El enlatado de los alimentos, comprende la exposicin del alimento por largo
tiempo a temperaturas ms altas para destruir las endosporas y matar los
microorganismos esporulados. Se considera necesaria una exposicin a 115C durante
15 minutos en el enlatado casero para asegurar la muerte de los formadores de
endosporas en medio cido (pH 4,5 5,3) a los alimentos de poca acidez (pH mayor a
5,3).

Radiacin: La radiacin ionizante se usa para pasteurizar o esterilizar algunos

productos alimenticios. La exposicin a la luz ultravioleta, por ejemplo, se usa a veces
para esterilizar las superficies de los pasteles de frutas antes de envolverlos. La
exposicin a la radiacin gamma se usa tambin, pues mata directamente las clulas y
los virus quedan inactivos. Se utiliza tambin radiacin de Co60 o Ce137 (cesio). El
tocino por ejemplo, se puede esterilizar por radapertizacin, que es un proceso de
esterilizacin usando dosis de radiacin medidos en krads. La radurizacin, es un
mtodo equivalente a la pasteurizacin, que mata a microorganismos patgenos.

Desecacin:Es un medio muy efectivo para conservacin dado que el alimento no se

humedece durante su almacenamiento. La desecacin no mata necesariamente a los
microorganismos en los productos alimenticios, pero el desarrollo microbiano requiere
agua. Las bacterias no se desarrollan por un valor de actividad acutica de 0,9 a w; y los
hongos generalmente por debajo de un valor de 0,65 aw. La desecacin se logra por
diferentes mtodos, como la desecacin al sol, por evaporacin del agua usando un
cilindro desecador caliente o por congelacin.

Anaerobiosis: Este proceso es efectivo para prevenir el deterioro de los alimentos. El

empaque al vaco se aplica para eliminar el aire; el caf molido, por ejemplo, conserva
sus propiedades si se conserva por este mtodo de empacado. La falta de oxgeno no
solo impide el desarrollo de microorganismos aerobios sino tambin evita la
autooxidacin del alimento, alargando la vida del alimento en el anaquel.

Temperaturas bajas: La refrigeracin y la congelacin se usan ampliamente para la

conservacin de alimentos. Las temperaturas bajas restringen la velocidad de desarrollo
y las actividades enzimticas. Los alimentos congelados comercialmente son preparados
por congelacin rpida, para evitar un mayor dao en el alimento; se logra en 30
minutos, por inmersin directa del alimento en un refrigerante, como la congelacin del
 116

pescado en salmuera; por una rfaga de aire congelante, o con el contacto indirecto con
el refrigerante.

PRODUCCIN DE ALIMENTOS POR MTODOS MICROBIOLGICOS

El metabolismo fermentativo de los microorganismos, es que se aprovecha con

frecuencia en la produccin de productos alimenticios. La produccin de alimentos
fermentados requiere el substrato, las poblaciones microbianas y las condiciones
ambientales adecuadas para obtener el producto final deseado.
El proceso microbiano en la produccin de alimentos emplea tradicionalmente la
actividad enzimtica microbiana para transformar un alimento en otro. Aqu tenemos
algunos ejemplos de produccin de alimentos fermentados, como:

Mantequilla, crema agria, quesos: con el uso de cepas diferentes de bacterias del
cido lctico como cultivos iniciales se producen
productos lcteos con diferente fermentacin.

En la fermentacin del pan: al pan se aaden levaduras para fermentar el azcar,

produciendo bixido de carbono, formando la levadura de pan para la industria
panadera.

En las bebidas alcohlicas: ya sea en la cerveza: es una fermentacin microbiana

con cebada germinada y su respectiva malteada, gracias a la levadura
Saccharomyces carlsbergencis.

El vino y el vinagre: el vino es un producto de la fermentacin primaria de las uvas,

o tambin de otras frutas; el vinagre implica una fermentacin anaerobia inicial para
convertir los carbohidratos en alcohol por Saccharomyces cerevisiae.

En vegetales fermentados: como en la col agria, que se produce por una

fermentacin lctica de col marchita y picada, con ayuda de bacterias coliformes
como Enterobacter cloacae; para pepinillos, se utiliza la microbiota natural del
pepinillo, una temperatura apropiada y concentraciones de sal para regular el
proceso de fermentacin, con ayuda de la inoculacin con Lactobacillus plantarum y
Pediococcus cerevisiae.

Existen gran cantidad de microorganismos relacionados con la microbiologa de los

alimentos pero los ms comunes son :

Escherichia coli .- Pertenece al grupo de BACILOS ENTERICOS ANAEROBIOS

FACULTATIVOS GRAMNEGATIVOS, se caracteriza desde el punto de vista
bioqumico, por la capacidad de reducir los nitratos a nitritos y para fermentar la
glucosa con produccin de cido o cido y gas.

La mayor parte de las bacterias gram negativas poseen lipopolisacaridos complejos en

las paredes celulares. Estas sustancias, endotoxinas, tienen diversos efectos
fisiopatolgicos.
 117

E. coli tiene antgenos de tipo O (termoestables lipopolisacridos) constituyen la parte

ms externa de los lipopolisacaridos de la pared celular, y consisten en unidades
repetidas de polisacridos. Algunos polisacridos O especficos contienen azcares
nicos. Los antgenos O son resistentes al calor y al alcohol, y suelen identificarse
mediante aglutinacin bacteriana.

Aunque cada gnero de Enterobacteriaceae se relacionan con grupos O especficos,

un solo microorganismo puede tener varios antgenos O. En ocaciones los antgenos O
se relacionan con enfermedades humanas especficas como las diarreas e infecciones de
vas urinarias .

CONCLUSIONES:

El campo de la microbiologa de los alimentos puede ser contemplado como una

aplicacin de sus principios para controlar el desarrollo microbiano y prevenir el
deterioro de los alimentos y la transmisin de enfermedades humanas por conducto
de los alimentos, junto con el aprovechamiento de sus actividades para producir
productos alimenticios para el consumo del hombre.
Se emplean varios mtodos de conservacin para aumentar la duracin de
numerosos productos. Varios mtodos de conservacin modernos como el enlatado
y la congelacin, prolongan indefinidamente las propiedades naturales del producto.
El uso de microorganismos para obtener productos alimenticios es tambin
importante para llenar las demandas alimenticias de una poblacin mundial en
expansin.
 118

MICROBIOLOGA DE LA LECHE

ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE LA LECHE

Dr. Carlos E. Chiriboga N., MSc.

Laboratorio de Biologa y Microbiologa, Facultad de Ciencias Agropecuarias, ESPE IASA,

carchiri@hotmail.com telf.099 586723

Introduccin

No hace falta recordar que en la vida moderna es esencial el suministro abundante de

leche de vaca, pura y limpia. Sin embargo, la leche y los productos lcteos son en
potencia los alimentos ms peligrosos. La leche es un excelente medio de cultivo para
una gran variedad de microorganismos, pues las bacterias, tanto patgenas como
saprofitas, se pueden multiplicar en ella. La leche en las grandes ciudades procede de
mucho establos diferentes y se transporta generalmente a largas distancias, antes de
entregarla al consumidor.

La leche recin ordeada contiene normalmente una pequea cantidad de

bacterias de entre 1000 y 2000 CBP/cc (mtodo estndar de cmputo bacterial en placas
por cc). Las vas de entrada de estos organismos a la glndula mamaria son el canal del
pezn o la va sangunea.

El nmero de bacterias en los primeros chorros de leche obtenidos de una vaca

sana es generalmente mayor que el nmero de bacterias de cualquier otra porcin
durante el mismo ordeo. Por esta razn es recomendable eliminar los primeros chorros
de leche de cada cuarto, pues aunque esto no afecta en forma considerable el contenido
total de bacterias de la leche, s ayuda a eliminar unas pocas.

En casos de mastitis, el cmputo bacterial aumenta considerablemente, aunque

en el momento en que se manifiesta los sntomas, el cmputo es un poco menor que los
hechos antes de presentarse los sntomas.
 119

Las partculas de excrementos, tierra, vegetales, pelos y clulas epiteliales

adheridas a los flancos, superficie de la ubre y cola, pueden caer a la leche durante el
ordeo manual y, mayor es la contaminacin si el recipiente con que se ordea es de
boca amplia, por esto los flancos y la ubre de las vacas deben ser lavados y secados
antes del ordeo.

En condiciones ordinarias el cuerpo del animal no debe contribuir a la leche con

ms de 10000 en el CBP/cc.

La contaminacin de la leche por el cuerpo del animal es muy delicada por las
enfermedades que puede transmitir al hombre, de estas, las ms frecuentes son la
tuberculosis, brucelosis, leptospirosis, ntrax, fiebre aftosa, fiebre de montaa y
enfermedades que causan trastornos entricos.

Objetivos

Determinar las causas de la proliferacin de microorganismos en la leche y

productos lcteos.
Determinar que microorganismos causan beneficios y cules causan dao en la
produccin de leche y produccin lctea.
Conocer los mtodos de prevencin de contaminacin de la leche con
microorganismos no beneficiosos.

Fuentes de contaminacin

Utensilios y equipos.- Todas las superficies que entran en contacto con la leche, desde el
momento del ordeo hasta el envase en que llega al consumidor, suman varios cientos
de metros cuadrados y es por ello que los utensilios y el equipo son considerados las
fuentes ms importantes de contaminacin de la leche desde el punto de vista
cuantitativo, o sea que cuanto mayor es la superficie que entra en contacto con la leche
mayor es la probabilidad de un cmputo bacterial elevado. Cualquier utensilio mal
lavado o desinfectado contribuye con millones de bacterias por centmetro cbico de
leche.
 120

Personal.- La contaminacin de la leche por el hombre es la ms delicada dado el tipo

de microorganismos que puede introducir en sta.

El personal es la clave para la obtencin de un producto altamente higinico, y sin su

colaboracin no es posible controlar medios de contaminacin.

Existen varias enfermedades que pueden ser transmitidas del hombre a la leche y de sta
al consumidor; por ejemplo tuberculosis, tifoidea, difteria, escarlata y varias otras. Por
ello no es recomendable que personas enfermas o portadoras del germen que causa la
enfermedad, ni personas con hbitos sucios, sean admitidas en los locales donde la leche
es obtenida o procesada, y mucho menos permitirles trabajar con ella.

Insectos.- las moscas son uno de los principales vectores de las enfermedades
gastrointestinales, por lo que se les debe controlar constantemente. Cada mosca que cae
en la leche representa miles de bacterias en el cmputo bacterial y por eso se dice que
en una planta lechera donde se pueda contar 20 moscas hay que dudar de su higiene y
de la sanidad de sus productos.

Medio Ambiente.- la atmsfera de los establos casi siempre contiene gran cantidad de
microorganismos provenientes de los excrementos, alimentos y polvo. Los forrajes
como el heno y la paja son fuentes ricas de esporas de mohos y bacilos, los ensilajes
aportan bacterias butricas y los excrementos, principalmente, enterobacterias.

Es aconsejable tomar algunas precauciones durante el ordeo para evitar o reducir la

contaminacin de la leche; entre stas se puede mencionar las siguientes: en das secos
iniciar el ordeo 15 minutos despus de que las vacas hayan entrado al establo, no dar
de comer heno u otro forraje seco antes ni durante el ordeo, no barrer el establo
inmediatamente antes ni durante el ordeo, no cepillar las vacas inmediatamente antes
ni durante el ordeo y mantener completamente limpio el local donde se ordea.

El agua.- si el agua no es potable debe evitarse contacto con la leche o sus productos.
El agua contaminada es un constante peligro para la calidad del producto y salud del
consumidor. Entre los factores que afectan el crecimiento bacterial estn:
 121

Reaccin inica o pH.- el grado de acidez o alcalinidad de los medios de cultivos es de

suma importancia porque la mayora de las bacterias son sensibles al pH. Cada especie
prefiere el pH o reaccin qumica del medio natural en que normalmente vive.

La mayora de las bacterias crece mejor en medios con pH 7.0 pH de 7.2 a 7.4.

Algunos crecen con pH 5.5, como los microorganismos acidricos que se encuentras
alrededor de los dientes, y otros se multiplican mejor a pH de 8.0 como el espirilo que
del clera o a pH 9.6 como el Streptococcus faecalis.

Temperatura.- Para cada especie bacterial hay una temperatura de crecimiento ptimo y
segn esta se clasifican en sicrfilas, mesfilas y termfilas. Tambin existen grupos de
bacterias que resisten altas temperaturas llamadas termodricas, a bajas temperaturas o
sicrotolerantes.

La mayora de los organismos saprfitos requiere una temperatura de 25 a 30oC y los

organismos parsitos del hombre u otros animales de sangre caliente requieren de 35 a
37oC de temperatura, con excepcin de las bacterias patgenas de las aves, que crecen
mejor a temperaturas de 41 a 45oC.

Oxgeno.- la mayora de las bacterias utiliza el oxgeno del aire y se les denomina
aerbicas; otras utilizan el oxgeno de los compuestos que contienen oxgeno en el
medio de cultivo y son conocidas como anaerbicas. Hay tambin un grupo de
bacterias que puede usar ambas fuentes y se les denomina anaerbicas facultativas; por
ltimo hay un grupo que requiere de la presencia de pequeas cantidades de oxgeno
libre y se les clasifica como microaeroflicas.

Presin osmtica.- el agua entra y sale de las bacterias por smosis. Si la

concentracin de sales en la clula es mayor que en el medio en que se encuentra, se
difundir tanto que puede hacer reventar el microorganismo; a este fenmeno se le
llama turgencia. Si sucede la contrario, o sea que el agua de la clula sale, se causa una
plasmlisis, que es utilizada en la preservacin de alimentos en soluciones salinas de 25
a 30% de concentracin o con soluciones concentradas de azcar.
 122

Humedad.- el agua es un medio esencial para el crecimiento de los microorganismos

pero no para mantener la vida, por eso mediante el proceso de liofilizacin, o sea de
conversin del cultivo lquido en forma de polvo por medio de la congelacin rpida y
evaporacin al vaco, se puede mantener vivos varios microorganismos por muchos
aos.

Por otro lado, el hecho de que el agua sea necesaria para el crecimiento bacterial
permite conservar los alimentos reduciendo su contenido de humedad a cantidades que
fluctan entre 5 y 10%.

Influencia de los microorganismos vecinos.- la vida de cualquier microorganismo en

su medio natural est ntimamente relacionada con los cambios que le rodean. Cuando
dos organismos se relacionan entre si se dice que viven en simbiosis; cuando uno de
ellos es el beneficiado sin perjudicar al otro es una forma de comensalismo; y cuando la
presencia de unos impide la presencia de otros se dice que hay antagonismo bacteriano
y la sustancia responsable de esto es conocida con el nombre de antibitico.

La luz.- la mayora de las bacterias son quimiosintticas, por lo que no tienen clorofila
ni pigmento fotosinttico y la luz les puede ocasionar la muerte. Sin embargo, hay
algunas especies de bacterias saprfitas que son fotosintticas y requieren de la luz solar
para obtener energa.

Infecciones causadas por la leche

Dos enfermedades importantes de las vacas pueden transmitirse al hombre a

travs de la leche cruda son la tuberculosis bovina y la brucelosis. Los programas que
se llevan a cabo con buenos resultados en muchos pases para eliminar la tuberculosis
bovina han reducido considerablemente el peligro de contraer la tuberculosis bovina.
Las medidas contra la brucelosis no han sido tan han efectivas hasta la fecha, por lo
que la pasteurizacin de toda la leche es la nica garanta segura. La fiebre Q es otra
infeccin animal a la que el hombre es tambin susceptible. El ganado infectado pasa a
la leche la Rickettsia causal durante largos perodos de tiempo y estos organismos
pueden no ser destruidos por pasteurizacin. Sin embargo, en la actualidad no podemos
 123

precisar la importancia que tiene la leche contaminada en la transmisin de la

enfermedad al hombre.

Algunas veces las ubres de la vaca se infectan con organismos de origen

humano, introducidos accidentalmente por el ordeador . En tal caso la leche cruda
puede infectar la parte superior del tracto respiratorio del hombre con los estreptococos
de la faringitis sptica de la escarlatina o con los bacilos diftricos

Las enfermedades humanas ms frecuentes transmitidas por la leche o productos

lcteos contaminados son: fiebre tifoidea y disentera bacilar.

Fermentaciones de la leche

La fermentacin de la leche es un proceso por el cual ocurren cambios qumicos

en ella a causa de la actividad de enzimas de tipo lcteo y microbial.

Si se deja la leche, recin ordeada, a temperatura ambiente, se pueden observar

los cuatro perodos del proceso de fermentacin natural, que son: germicida,
acidificacin neutralizacin y putrefaccin.

Perodo germicida.- Los cmputos bacteriales de una leche recin ordeada

disminuyen durante cierto tiempo, para luego iniciar su aumento. Este proceso es
atribuido a la presencia de ciertos germicidas como la lactoperoxidasa y lizozima o al
cambio de la leche de la ubre al medio ambiente. La accin germicida dura poco
tiempo, pudiendo variar de dos minutos a dos horas, segn la temperatura del ambiente;
cuanto ms alta menor el tiempo.

Perodo de acidificacin.- En esta etapa el crecimiento bacterial llega a su mxima

concentracin, siendo los productos de cido lctico los que predominan. La
produccin de cido lctico, se realiza a partir de la lactosa y llega a formar cerca del
1% de acidez titulable; esta concentracin de cido lctico, inhibe el crecimiento de sus
productores.
 124

Periodo de neutralizacin.- Cuando las bacterias acidificadoras, ya no pueden crecer

lo hacen los mohos y las levaduras, utilizando el cido como alimento y produciendo
algunos compuestos de desecho que terminan por neutralizar el medio.

Perodo de putrefaccin.- Los microorganismos que intervienen en esta fase son

aquellos que tienen la habilidad de descomponer las protenas; los cuales estuvieron
latentes en las fases anteriores debido al pH.

Fermentacin cida.- La fermentacin que normalmente ocurre en la leche es la

fermentacin lctica, cuando la leche aumenta su grado de acidez es considerada como
leche alterada y no puede ser aceptada en las plantas procesadoras de leche, s su
acidez pasa el lmite aceptable; sin embargo, este mismo fenmeno de acidificacin es
utilizado en la produccin de leches fermentadas y quesos, aunque naturalmente en
estos ltimos casos, la fermentacin es controlada por la inoculacin de cultivos
lcticos.

Los microorganismos ms deseables que producen principalmente cido lctico

son: Streptococus lactis, S. cremoris, Lactobacillus casei, Lactobacillus acidophillus,
Lactobacillus vulgaricus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermenti,
Lactobacillus thermophilus.

Algunos organismos indeseables que producen fermentos pertenecen a las

micobacterias, micrococos coliformes como la Escherichia coli y el Aerobacter
aerogenes, Clostridium butyricum, Candida pseudotropicalis, Torulopsis sphaerica.

Fermentacin proteolitica.- Esta fermentacin es tambin conocida como protelisis o

peptonizacin. En este proceso las protenas de la leche son transformadas en
compuestos solubles en agua por la accin de los microorganismos proteolticos. El
grado de la descomposicin de la protena puede ser parcial (maduracin de quesos) o
total, segn el tipo de microorganismos que la causa.
La presencia de peptonas y sus derivados en la leche o subproductos causa el
sabor amarga caracterstico de las fermentaciones proteolticas y en casos avanzados de
protelisis se presenta el olor ftido de putrefaccin debido a liberacin de indol, cido
 125

sulfhdrico y otros compuestos mal olientes. Ningn microorganismo puede

descomponer la protena en forma total; esto se lleva a cabo mediante la accin sucesiva
de varios grupos.

Los principales microorganismos indeseables que causan esta putrefaccin son:

Streptococus liquefaciens, Pseudomonas viscosa, Pseudomonas
putrefaciens,Clostridium butyricum, Clostridium sporogenes, Clostridium
lentoputrescens, Bacterium proteolyticum, Bacillus cereus var. Mycoides, Serratia
marcescens, Micrococcus caseolyticus, Torula amara.

Fermentacion lipolitica.- Muchos microorganismos tienen la capacidad de producir

liplisis por medio de enzimas que desdoblan las grasas de la leche en cidos grasos y
glicerol.

Esta fermentacin es de mucha importancia en la industria lechera porque la

liberacin de algunos cidos grasos, especialmente el cido butrico, causa un olor
caracterstico en los productos lcteos que es conocido como rancio. Adems de este,
tambin los cidos caprico, caprlico y cprico contribuyen a la rancidez.

Entre los microorganismos que causan la liplisis podemos citar a:

Pseudomonas fluorescens, P. fragi, Achromobacter lipolyticum, Candida lipolytica,
Geotrichum candidum, Penicillium roqueforti.

Fermentaciones que producen sabor y olor.- Los sabores y olores producidos por las
fermentaciones, pueden ser deseables o indeseables, segn el tipo de microorganismo
que intervenga en el proceso y asimismo la calidad de un producto est ntimamente
ligada al sabor y aroma que ste tenga; por ejemplo, el queso suizo tiene un sabor
ligeramente dulce debido a la accin de Propionibacter shermanii sobre los citratos de
la leche.

Otros sabores deseables son los proporcionados por la presencia del cido
actico, la acetona (acetil-metil-carbinol y el diacetilo, asociados con los
microorganismos que generalmente se encuentran asociados con Streptococus lactis y
 126

los que son capaces de usar el cido ctrico de la leche, como por ejemplo: Leuconostac
citrovorum, Streptococcus paracitrovorus, S. diacetilactis.

Tambin hay sabores indeseables, como el sabor a malta producido por

Streptococcus lactis var. maltigenes, el sabor a papas debido a la Pseudomonas
graveolens, entre otros.

Cultivos lcticos

Las bacterias ms usadas en la industria lechera producen cido lctico y que

son capaces de fermentar el cido ctrico. Entre las primeras estn: Streptococcus lactis
y S. cremoris, y entre los que fermentan el cido ctrico estn los Leuconostoc
citrovorum, Leuconostoc dextranicum o Streptococcus diacetilactis. La mayora de las
casas comerciales venden este producto en forma lquida, liofiliza o secado al
o o
vaco y congelado a 196 C (-321 F).

Mtodos para la produccin higinica de leche, pasteurizacin

La primera condicin para producir leche buena es que las vacas lecheras sean sanas
(tuberculino negativas y libres de brucelosis, mastitis y otras enfermedades). Tambin
es esencial la higiene rigurosa en el ordeo y manipulacin de la leche y de los
productos lcteos y el uso de mtodos adecuados para reducir al mnimo la posibilidad
de contaminacin. Es indispensable la garanta de la pasteurizacin, proceso de
desinfeccin por calor.

Actualmente la pasteurizacin de la leche se realiza por el mtodo de elevada

temperatura en corto tiempo que consiste en elevar la temperatura de la leche a 71,6 oC
por un periodo no menor de 15 segundos, con lo que se mata a todas las formas
vegetativas de bacterias. Afortunadamente, hay una prueba de laboratorio rigurosa para
comprobar si la pasteurizacin es completa, la misma que es a base de fosfatasa.

Se ha demostrado que la pasteurizacin de toda la leche suministrada a una poblacin es

la medida ms eficaz y simple para prevenir las enfermedades provenientes de la leche.
La mayora de las operaciones, en la pausterizacin, son automticas y nunca exponen
 127

la leche al medio ambiente o al contacto con operarios para evitar la contaminacin.

Entre estas se incluyen la cantidad total de bacterias, pruebas de reduccin de azul de
metileno, pruebas de la fosfatasa, cultivos para bacilos coliformes y estafilococos de la
intoxicacin alimenticia y pruebas para descubrir sustancias conservadoras, adicin de
agua, penicilina y otros antibiticos y pruebas de la presencia de residuos radiactivos.

Tipo estndar de leche

El tipo de leche se basa en condiciones en las que se encuentran las granjas lecheras y,
en los resultados de anlisis qumicos y bacteriolgicos de la leche. La leche
pasteurizada ms acepatada es el tipo A, la misma que se define generalmente como
leche de vacas libre de grmenes patgenos y con un recuento total de bacterias que no
exceda en ningn momento de 3`000.000 por mililitro. La leche no debe contener
indicios perceptibles de los antibiticos que se hubieran administrado a las vacas.
Despus de la pasteurizacin y en el momento de la entrega, no debe contener mas de
20000 bacterias ni ms de 10 bacilos coliformes por mililitro.

Leches fermentadas

La accin incontrolada de las mezclas de organismos que probablemente se encuentran

en la leche del mercado, dar por resultado las alteraciones indeseables descritas, pero la
fermentacin controlada de la leche por el desarrollo de determinados microbios
acidfilos especiales, producen uno de nuestros alimentos ms conocidos y de los ms
apreciados. La leche acidificadas, que se preparan inoculando deliberadamente leche
fresca con un cultivo iniciador adecuado se utiliza como bebida en todo el mundo y en
muchos casos se prefieren a la leche dulce.
.
La leche agria,puede contener hasta 500 millones de bacterias vivas por mililitro e
incluso es alimento nutritivo y sano en condiciones de no conter grmenes patgenos.
Cuando la leche se fermenta de la manera habitual los nicos tipos de organismos que
permanecen en la leche completamente cuajada son las bacterias acidfilas inocuas,
Streptococcus lactis. El suero de leche se obtiene de crema pasteurizada o de leche
entera acidificada principalmente por Streptococcus lactis y por Leuconostoc
citrovorum, organismos del tipo Streptococcus. Tambin son muy importantes para
 128

acidificar la leche o para elaborar productos lcteos diversos, las bacterias acidfilas
productoras de cido lctico del gnero Lactobacillus. La leche acidificada se conserva
bien, porque las bacterias putrefactivas que de otra forma podran contaminarla, no
pueden desarrollarse en presencia de tanto cido.

La leche acidificada por la inoculacin de Lactobacillus acidophylus, (llamada leche

acidofila), se puede suministrar a adultos que sufren de putrefaccin intestinal
excesiva. El yogurt se prepara con leche pasteurizada que se espesa por la adicin de
slidos de leche desecada y fermentada por especies del genero Lactobacillus.

La mantequilla es esencialmente un proceso bacteriolgico. Depende de la maduracin

o fermentacin de crema, seguida de un batido mecnico de la crema acidificada. El
primer proceso, la fermentacin bacteriolgica de la crema es el ms importante por el
sabor y el aroma de la mantequilla. El batido es simplemente un proceso mecnico
mediante el cual se logra que los diminutos glbulos de grasa que se unen y forman una
masa slida.

Conclusiones

La proliferacin de microorganismos en la leche y productos lcticos es un proceso que

se presenta luego de que sta pierde sus caractersticas germicidas, las cuales estn
dadas por enzimas como la lisozoma y lactoperoxidasa ; y pasa a un perodo de
acidificacin, el cual es inducido por alta temperatura, condiciones de insalubridad y
contaminacin en el manejo, en este perodo predominan los productos de cido lctico
a partir de la lactosa mediante bacterias acidificadoras.

En las industrias lcticas no todos los microorganismos son perjudiciales con frecuencia
se adicionan cepas bacterianas en sus productos, ya que estas ayudan a cierto tipo de
fermentaciones para la produccin de yogurt, queso leche agra, etc. Entre las bacterias
perjudiciales estn: Micrococos, Coliformes, Estreptococos, Escherichia coli,
Aerobacter aerogenes, Clostridium butyriam, Streptococus liquetaciens, Pseudomonas
viscosa, P. putrefasciens, Clostridium lentoputrescens, entre otras.
 129

Los microorganismos beneficiosos presentes son: Streptococcus lactis, Pseudomonas

fluorescens, P. fragi, Achromobacter lipolyticum, Candida lipolytica, Geotrichum
candidum, Penicillium roqueforti, entre otros.

La contaminacin de la leche por agentes patgenos se da por diversos factores. Los

mtodos de prevencin consisten en tomar medidas de higiene desde el momento del
ordeo hasta su pasteurizacin as como el cuidado y sanidad respectiva al hato
ganadero. No hay mejor forma de evitar contaminacin que el tener excesiva
salubridad con todos los equipos y utensilios utilizados en el ordeo. Se debe tener
bioseguridad en todo momento hasta transportarla a la pasteurizadora y an despus de
ella.
 130

CAPITULO VII
BIBLIOGRAFA

ALEXANDER, M., 1980, Introduccin a la Microbiologa del Suelo, AGT Editor,

Primera edicin, Mxico, Pg. 41, 42, 59, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 97, 98, 99,
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ATLAS RONALD M. 1990. Microbiologa fundamentos y aplicaciones. S.N. Ed.

Mxico D.F. Mxico. Editorial Continental S.A.

AYRES, J. C, J. O. MUNDT, Y W. E. SANDINE. 1980. Microbiologa de los

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WEISER, H. H., G. J. MOUNTNEY, Y W. A. GOULD. 1971. Tecnologa y

Microbiologa de los Alimentos Prctica, AVI Publicaciones Co., Wesport,
Connecticut.
 131

INDICE
Pg.
CAPITULO I
INTRODUCCIN A LA MICROBIOLOGA 3
DISTRIBUCIN Y LUGAR DE LOS MICROORGANISMOS EN LA 7
NATURALEZA
HISTORIA DE LA CLASIFICACIN MICROBIANA 8
BASES DE CLASIFICACION SISTEMATICA 8
ASOCIACIONES MICROBIANAS 10
NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS 12
RESPIRACIN DE LOS MICROORGANISMOS 15
CRECIMIENTO Y MULTIPLICACIN 17
EJERCICIOS DE CRECIMIENTO Y MULTIPLICACIN 18
ACCION DE AGENTES FISICOS 21
ACCION DE AGENTES QUMICOS 26
AGENTES INORGNICOS 28
ENZIMAS MICROBIANAS 30
MICROORGANISMOS PATGENOS 34
MECANISMOS DE DEFENSA 36

CAPITULO II
VIROLOGIA 39
CICLO REPRODUCTIVO VIRAL 41
VIRUS DE PLANTAS Y VIRIONES 42
INMUNIDAD 44
REACCION ANTIGENO - ANTICUERPO 45
TIPOS DE VACUNAS 45
CLASIFICACION DE LOS VIRUS 46

CAPITULO III
REINO MONERA 48
REPRODUCCIN BACTERIANA 50
TAXONOMIA BACTERIANA 52
CLASIFICACION DE LAS BACTERIAS 53

CAPITULO IV
HONGOS 60
MORFOLOGA 61
REPRODUCCIN 62
CLASES DE ESPORAS 62
FISIOLOGA 64

CAPITULO V
LISTADO DE MICROORGANISMOS DE ACUERDO A SUS FUNCIONES Y 66
LOCALIZACIN
LISTADO DE GENEROS DE ACUERDO A SUS FUNCIONES Y
LOCALIZACIN 68
 132

CAPITULO VI MICROBIOLOGIA APLICADA

ECOLOGA MICROBIANA Y EL ECOSISTEMA 70

ADAPTACIN EVOLUTIVA 72
INTERRACIONES ENTRE LAS POBLACIONES 72
TCNICAS PARA EL ESTUDIO DE LOS ECOSISTEMAS MICROBIANOS 81
CONCLUSIONES 84

MICROBIOLOGIA DEL SUELO

CATEGORAS CONSTITUYENTES DEL SUELO 85
CICLO DEL NITROGENO 87
TRANSFORMACIONES MICROBIANAS DEL FOSFORO 88
AZUFRE EN EL SUELO 89
BACTERIAS 90
HONGOS 91
ALGAS 92
CONCLUSIONES 93

MICROBIOLOGIA DEL AIRE

TCNICAS PARA EL ANLISIS MICROBIOLOGICO DEL AIRE 94
CONTROL DE MICROORGANISMOS EN EL AIRE 98
OTROS METODOS Y PRACTICAS 100
CONCLUSIONES 100

MICROBIOLOGIA ACUATICA
DISTRIBUCIN DE MICROORGANISMOS EN EL MEDIO ACUATICO 101
EL MEDIO ACUATICO
TCNICAS PARA EL ESTUDIO DE MICROORGANISMOS ACUTICOS 106
PAPEL E IMPORTANCIA 106
CONCLUSIONES 108

MICROBIOLOGIA DE AGUAS DE USO DOMESTICO Y RESIDUALES

MARCO TEORICO 109
CONCLUSIONES 112

MICROBIOLOGIA DE LOS ALIMENTOS

DETERIORO DE LOS ALIMENTOS 113
METODOS DE CONSERVACIN DE ALIMENTOS 114
PRODUCCIN DE ALIMENTOS POR METODOS MICROBIOLOGICOS 116
CONCLUSIONES 117
 133

MICROBIOLOGIA DE LA LECHE
INTRODUCCION 118
FUENTES DE CONTAMINACION 119
INFECCIONES CAUSADAS POR LA LECHE 122
FERMENTACIONES DE LA LECHE 123
METODOS PARA LA PRODUCCION HIGIENICA DE LA LECHE 126
TIPOS ESTANDAR DE LECHE 127
CONCLUSIONES 128

CAPITULO VII
BIBLIOGRAFIA

Escuela Politcnica Del Ejrcito

Facultad De Ciencias Agropecuarias IASA
Prof. Dr. Carlos E. Chiriboga N., MSc.
P.O.BOX. 231 -B Sangolqu - Ecuador
Telf. 099 586723 (CLARO) 098 098577 (MOVI) e-mail: carchiri@hotmail.com

DERECHOS RESERVADOS DEL AUTOR PROHIBIDA LA REPRODUCCIN

PARCIAL O TOTAL DEL DOCUMENTO

AMIGO LECTOR.- La obra que posee en sus manos posee gran valor, al fotocopiar el
documento el autor deja de percibir lo que corresponde a la inversin que ha realizado
y se desalienta a la creacin de nuevas obras, por lo que le pido por favor rechace
cualquier obra PIRATA. Muchas gracias.
 134

ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS IASA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

PRLOGO

La Microbiologa es una ciencias eminentemente prctica debido a

que todos los fenmenos que se suscitan en la naturaleza pueden ser
observados, hipotetizados, experimentados para luego llegar a una o varias
conclusiones que a la vez pueden convertirse en una teora o ley.

Es por esto que las prcticas de laboratorio, son actividades

prioritarias en el proceso enseanza aprendizaje en la ctedra
Microbiologa, debido a que , aqu es donde el catedrtico tiene la
oportunidad de demostrar los conocimientos impartidos en las aulas.

Esta gua de laboratorio se ha elaborado para los seores estudiantes

del tercer nivel del I.A.S.A tomando en cuenta la planificacin curricular,
tiene por objeto encaminar a nuestro educando a alcanzar las metas del
mtodo cientfico que a la larga le ayudar a crear una conciencia y espritu
investigativo para cumplir uno de los muchos objetivos de nuestra
Facultad.

Dr. CARLOS E. CHIRIBOGA N.

 135

EL LABORATORIO

El laboratorio es un lugar especfico de investigacin en donde

puede actuar un grupo humano que tiene conciencia y pensamiento
cientfico por lo que en este lugar se debe guardar una correcta disciplina
y una mstica de trabajo que nos ayude a cumplir los objetivos que nos
planteamos.

Es por esto que, tanto el alumno como el profesor debe guardar

ciertos preceptos los cuales nos ayuden a cumplir nuestro trabajo de una
forma sincronizada, ordenada y as poder comprender los fenmenos que se
realizan en la naturaleza.

Para estar trabajando en el laboratorio debemos tomar en cuenta las

siguientes normas:

- Orden y limpieza.
- Cuidado y respeto a las especies vivas de laboratorio.
- Cuidado de los materiales de laboratorio.
- Trabajo serio que permita elaborar un informe correcto.

Por esto se debe descartar la idea que el laboratorio es hora libre, ya

que se debe anotar que este trabajo es mucho ms serio que la misma
teora.
 136

Prctica N 1
Tema: ESTERILIZACION DE MATERIAL DE LABORATORIO

Objetivo: Capacitar a los estudiantes en la esterilizacin del material de laboratorio.

Introduccin :

La esterilizacin es un proceso mediante el cual un objeto o sustancia se

libera de estructuras vivas de toda ndole; es un trmino absoluto, un objeto est o no
estril y no se puede decir que est prcticamente o mas o menos estril.

La autoclave es uno de los muchos aparatos de laboratorio que sirve para

alcanzar este objetivo en el cual se combinan algunos aspectos como la presin, la
temperatura y el tiempo.

Materiales:
- Mandil para todas las prcticas
- Autoclave
- Material para esterilizar
- Papel indicador de esterilizacin
- Hojas de papel pluma limpias (estudiantes)

Procedimiento:

Lavar el material con detergente o desinfectante.

En la autoclave verificar que contenga agua.
Empaquetar correctamente los materiales a esterilizar.
Colocar la cinta indicadora.
Verificar que est tapada la autoclave.
Prender la autoclave a lo mximo y esperar.
Una vez esterilizado sacar el material.
Poner en lugar limpio.
Repetir el procedimiento para los otros materiales.

PARA EL INFORME
- Plantese dos objetivos.
- Observaciones.
- Grficos.
- Conclusiones.
- Cuestionario:
* Describa al autoclave.
* A qu presin se comienza y se termina de esterilizar?
* A qu presin se debe tener mucho cuidado?
* Por qu no es muy aconsejable sacar el vapor de golpe?
* Cuales son los otros equipos que sirven para esterilizar materiales en el laboratorio ?
descrbalos y grafquelos.
- BIBLIOGRAFA
GRACIAS POR SU COLABORACIN
 137

Prctica # 2
Tema : METODO PRARA PREPARAR MEDIOS DE CULTIVO (AGAR)

Objetivo : Adiestrar al estudiante para que pueda preparar los agares.

Introduccin :

El medio de cultivo es el lugar donde crecen, desarrollan y multiplican

los microorganismos en el laboratorio . Los medios de cultivo microbiolgicos constan
de varias sustancias nutritivas que sustenta la existencia de los microorganismos.
Algunos medios contienen sales orgnicas en solucin y se complementan con uno o
ms compuestos orgnicos, en cambio, otros se preparan con ingredientes complejos
como extractos o los productos digeribles de tejidos animales y vegetales. La
propagacin de las rickettsias y los virus requieren clulas vivas para cumplir su
metabolismo.

Materiales :

- Medio de cultivo PDA.20 gr

- Un erlenmeyer de 1000 cc.
- Agua destilada.1000 cc
- 1 Trpode.
- 1 Mechero de gas.
- 1 Balanza
- 1 Malla de amianto
- 1 Varilla de agitacin.
- 1 Franela.
- Cajas petri.10
- Parafilm

Procedimiento:

- Pese 20 gramos de PDA y disuelva en un 500cc de agua destilada que

est caliente, esperar a que todo el sustrato est completamente diluido.

- Esterilice en el autoclave con una temperatura de 121c - 124C por 15

minutos.

- Saque el agar del autoclave y deje que se enfre de 5 a 10 minutos para

luego dispensar en las cajas petri y homogenizarlas.

- Colocar las cajas listas en el refrigerador para luego utilizarlas.

 138

PARA EL INFORME

- Plantese dos objetivos.

- Observaciones.
- Grficos.
- Conclusiones.
- Cuestionario:
* Explique de qu estn constituidos el PDA, el agar sangre y para que sirven?
* Explique los tipos de medios de cultivo y para qu sirven cada uno.
* Explique por qu no todos los medios de cultivo son especficos ?.
* Explique las caractersticas microscpicas que exige un medio de cultivo.
* Explique las caractersticas metablicas (Bioqumicas) del medio de cultivo .
* Explique las caractersticas antignicas del medio de cultivo.

- BIBLIOGRAFA

GRACIAS POR SU COLABORACIN

 139

PRCTICA # 3
Tema : SIEMBRA Y TRANSFERENCIA DE MIROORGANISMOS

Ojetivo: Adiestrar a los estudiantes para que manipulen los microorganismos.

Introduccin:

El manejo de los microorganismos en el laboratorio es una actividad que

todo investigador debe dominar ya que de este factor depende el xito del trabajo con
los microorganismos, es por esto que en esta prctica los alumnos se entrenarn en las
diferentes tcnicas de siembra y transferencia de microorganismos.

Materiales:
- Material preparado la prctica anterior (medios)
- Asas de inoculacin.
- Mechero a gas.
- Cmara de inoculacin.
- Etanol 500 cc.
- Cultivo de microorganismos (hongos, bacterias)
- Parafilm
- Dermo o etiquetas
Procedimiento:

- Cuando el agar se encuentre listo siembre sus muestras con las asas de
inoculacin transfiera los microorganismos de una caja a otra de acuerdo con la tcnica
que indique el profesor luego pngalos en la incubadora.

PARA EL INFORME

- Plantese dos objetivos.

-Observaciones.
-Grficos.
-Conclusiones.
Cuestionario
* Explique cuales son las tcnicas de siembra ms comunes, cual es el objetivo y
grafquelas.

GRACIAS POR SU COLABORACIN

 140

PRCTICA # 4

Tema : COLORACION GRAM

Introduccin .- La reaccin de Tincin Gram fue descubierta en 1883 por Christian

Gram, quien la encontr por accidente mientras trataba de teir especimenes de
biopsias para poder diferenciar los microorganismos del tejido circundante. Su
procedimiento tena una desventaja grave : algunas bacterias se podan distinguir con
suma facilidad mientras que otras no se vean en absoluto. En 1886 comprendi que su
tcnica usarse para dividir a las bacterias en dos grupos principales. Las bacterias
resistentes a la decoloracin conservan una tonalidad azul o morada y no toman la
coloracin de contraste clasificndose estos organismos como gram positivos. Los
microorganismos que no pueden retener la tincin con cristal violeta toman la
coloracin de contraste y por ende, presentan la coloracin rosa o roja: a estos
microorganismos se los denomina gram negativos.

Objetivos.- Diferenciar los tipos de bacterias de acuerdo a la coloracin.

- Diferenciar las bacterias de acuerdo a su forma y tipo de agrupacin.

Materiales
- MICROSCOPIO
- Cultivos de bacterias (muetsras).
- Portaobjetos.
- Cristal violeta.
- Lugol.
- Alcohol cetona.
- Safranina.
- Agua destilada
- Aceite de inmersin.
- Mechero de alcohol.

Procedimiento.-

- Preparar un frotis delgado.

- Fijar a la llama.
- Cubrir el frotis con violeta durante un minuto.
- Lavar con agua destilada.
- Cubrir el frotis con lugol durante un minuto.
- Lavar con agua destilada.
- Aplicar lentamente el reactivo alcohol cetona.
- Lavar con agua destilada.
- Cubrir el frotis con Safranina durante 30 segundos.
- Lavar con agua destilada.
- Deje secar completamente .
-Aada una gota de aceite de inmersin.
- Con el lente de 100 X observe.
 141

PARA EL INFORME

- PLANTEESE DOS OBJETIVOS.

- OBSERVACIONES.
- GRFICOS.
- CONCLUSIONES.

- Cuestionario
* Explique las diferencias qumicas entre bacterias gram positivas y gram negativas.
* Afecta la edad del cultivo a la reaccin de tincin Gram? Por qu?
* Explique en qu consiste el Tes. de KOH y para qu sirve?

- BIBLIOGRAFA.

ANEXO

GRACIAS POR SU COLABORACIN

BACTERIAS GRAM VARIABLES

TEST DE K (OH) PARA BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y NEGATIVAS

Este tes fue descubierto por primera vez en Japn pero recientemente se est
utilizando; al respecto, Gregersen (1978) ha realizado una evaluacin detallada de el a
travs de trabajos bacteriolgicos rutinarios de laboratorio, particularmente en los
casos que la tensin Gram. es dudosa como en el caso de Bacillus sp. Que es Gram
variable.

La tcnica consiste en 1 o 2 gotas de K (OH) al 3% sobre un portaobjetos; con

el asa de platino, se saca de un medio de cultivo slido, una o varias colonias (no ms
de 24 horas de edad) del laboratorio; estos se agitan en el K (OH) de 5 a 10 segundos.
Si la solucin de K (OH) se pone viscosa al levantar el asa , un hilo de viscosidad
sigue a esta a una distancia de 0.5 a 2 cm. O ms, esto significa que la reaccin es
positiva y ocurre que las bacterias son gram negativas. Si no hay viscosidad se produce
una suspensin que no sigue al asa, la reaccin es negativa y ocurre que las bacterias
son gram positivas.

La produccin de esta sustancia, viscosa despus del tratamiento con K(OH) en

las bacterias gram negativas, probablemente se debe a la destruccin de la pared de la
clula y a la liberacin de ADN que es un compuesto viscoso.
 142

PRCTICA # 5
Tema : OBSERACIN DE HONGOS

Introduccin .- El tema de los hongos nos resulta familiar ya que todos, hemos visto su
crecimiento azul y verde sobre naranjas, limones y quesos; el desarrollo de filamentos
blancos sobre el pan y la mermelada las setas en campos y bosques. Estos son cuerpos
de varios hongos.

Los hongos poseen una gran variedad de aspectos que dependen de las especies, su
estudio se denomina micologa, incluyendo a los mohos y las levaduras.

Los hongos son organismos hetertrofos requieren compuestos orgnicos para su

nutricin. Cuando se alimentan de materia orgnica muerta se conocen como saprfitos.

As pueden ser ms beneficiosos para los seres humanos. Pero tambin pueden
resultarnos dainos cuando pudren la madera, tejidos alimentos y otros materiales.

Los hongos saprfitos son tambin importantes en las fermentaciones industriales,

por ejemplo la fabricacin de cerveza y del vino, y en la produccin de antibiticos tales
como la penicilina. El esponjamiento de la masa y la maduracin de algunos quesos
tambin depende de la actividad fngica.

Algunos hongos, a pesar de ser saprfitos, tambin pueden invadir a sus hospederos
vivos y prosperar como parsitos, causando enfermedades en plantas y animales.

Muchos hongos patgenos presentan dimorfismo es decir que pueden existir tanto en
forma unicelular, como la de una levadura, como en forma filamentosa. Adoptan la
forma levaduriforme cuando el organismo es un parsito o un patgeno de un tejido y la
forma filamentosa cuando el organismo es un parsito del suelo o en un medio de
laboratorio. La identificacin en el laboratorio de estos patgenos fngicos depende con
frecuencia de la demostracin del dimorfismo.

Objetivos.- - Ensear a los estudiantes la forma de preparar placas de hongos.

- Ensear a los alumnos las caractersticas de los hongos.

Materiales
- Microscopio.
- Estreo microscopio.
- Placas porta y cubreobjetos.
- Lacto fenol.
- Muestras de hongos. (Estudiantes)
- Un gotero de suero fisiolgico. (Estudiantes)
- Agujas de diseccin. (Estudiantes)
- Guantes quirrgicos. (Estudiantes)
 143

Procedimiento.-
- Ponga una gota de agua o lacto fenol en el portaobjetos.
- Con la aguja de diseccin seleccione las mejores muestras.
- Coloque la muestra seleccionada sobre la gota de agua o lacto fenol
a manera de frotis.
- Cubra el preparado con el cubreobjetos.
- Observe con los lentes 4X, 10X, 40X.

PARA EL INFORME

- PLANTEESE DOS OBJETIVOS.

- OBSERVACIONES.
- GRFICOS.
- CONCLUSIONES.

- Cuestionario

Realice una comparacin morfolgica y procesos de reproduccin de las

levaduras, mohos, y bacterias.
Analice la importancia de las mitocondrias en las levaduras. Donde se
encuentran estas estructuras?
Mencione y describa las estructuras de las levaduras. Cual es la funcin de
cada una?
Cules son las condiciones fsicas ptimas para el desarrollo de la mayor parte
de las levaduras?

BIBLIOGRAFA.

GRACIAS POR SU COLABORACIN

 144

PRCTICA # 6
Tema: USO DEL HEMATOCITOMETRO

Profundidad Neubawer
0.100mm improved

0.0025mm3

Cmara de recuento sin pinzas

Introduccin .- El hematocitmetro o cmara de Neubauer es un aparato que sirve

calcular mediante el microscopio el nmero de partculas (leucocitos, hemates,
bacterias, esporas) por unidad de volumen .

La cmara esta constituida por una placa base de vidrio especial de tamao
semejante a un portaobjetos; su parte central se encuentra separada de los extremos
por unas ranuras esmeriladas y pulidas. En ella se encuentra la superficie
cuadriculada de recuento.

Este aparato se utiliza entre otras cosas para realizar la preparacin y por ende la
dosificacin en la fabricacin de biopreparados.

Objetivos.- - Ensear al estudiante a manipular correctamente el hematocitmetro.

- Ensear al estudiante a preparar biopreparados.

Materiales
- Microscopio.
- Hematocitmetro
- Cultivos de hongos.
- Cubreobjetos.
- Agua destilada 1000 cm3
- Tween 20
- Gradilla.
- Tubos de ensayo 5.
- Pipeta 1ml.
- Baso de precipitacin de 500 ml.
- Guantes quirrgicos (estudiante).
- Mascarilla (estudiante).
Procedimiento.-
- Saque los cultivos de la incubadora.
- En el baso de precipitacin lave con agua destilada los cultivos.
- Mida el volumen del producto.
- Ponga una gota del preparado en el hematocitmetro.
- Observe.
 145

USO DEL HEMATOCITOMETRO

Es el sistema de recuento ms utilizado en la actualidad. La profundidad es de

0.1 mm., La cuadrcula de recuento muestra 9 cuadros grandes cada uno de 1mm2 .

Los cuatro cuadrados que se encuentran en las esquinas con la letra L estn
divididos en 16 cuadrados con lados de 0,25 mm. Estos cuadrados se utiliza para el
recuento de leucocitos.

Cmara de Neubauer. La figura de la derecha es la ampliacin

del recuadro central de la figura de la izquierda.

El cuadro central grande se encuentra dividido en 25 cuadrados medianos con

lados de 0,2 mm. Cada uno de estos cuadrados est subdividido en 16 cuadrados
pequeos con lados de 0.05 mm y superficie de 0,0025 mm2. Se utiliza para recuento de
glbulos rojos los 5 cuadrados medianos sealados con la letra E

Todos los cuadrados medianos presentan en todos los lados lneas lmite triple.
La lnea central es la frontera y decide si las clulas de ese lugar deben contarse o no.

La cmara Neubauer improved, lneas claras es idntica a la anterior; solo se

diferencia en que el fondo de la cmara se encuentra recubierto con radio, actuando de
espejo. La modificacin del contraste del microscopio permite que la cuadrcula, segn
necesidades, aparezca con lneas claras u obscuras.

VOLUMEN DE CADA CUADRANTE

El volumen de cada cuadrante es el siguiente:

Volumen (V) = largo X ancho X profundidad

V= 1mm2 X 1mm2 X 0.1 mm3
 146

Como el nmero de elementos se obtiene en ml, se debe realizar la conversin de mm3 a

ml.

1ml 103 mm3

X 0.1mm = 1ml X 0.1mm3 = 0.1ml = 0.1ml
103 mm3 103
Normalmente se deben contar 25 cuadrados centrales, pero si hay muchos
elementos se contarn de la forma como indica la figura de las letras E o en cada
ngulo mas el central. La concentracin de las esporas se calcula multiplicando el
nmero de esporas por el inverso de la dilucin empleada. Ejemplo si la dilucin fue
10-5 el inverso ser 105 y por el inverso del factor de la cmara 104 .

Cmara de Thoma. El recuadro de la derecha es la ampliacin

' de cualquiera de los recuadros centrales de la izquierda.

Cmara de Fuchs-Rosenthal. El recuadro de la derecha es la

ampliacin de cualquiera de los recuadros de la izquierda.

- De la solucin madre se toma 10 cc y se aade 90 cc de agua 1X10-1 .

- De la solucin anterior se toma 10 cc y se aade 90 cc de agua 1X 10-2
 147

- De la solucin anterior se toma 10 cc y se aade 90 cc de agua 1X10-3

- De la solucin anterior se toma 10 cc y se aade 90 cc de agua 1X10-4

N= Nmero de esporas por cuadrante.

C= Concentracin que se desea conocer.

C= N X Dilucin empleada X Factor de la cmara.

PARA EL INFORME

- PLANTEESE DOS OBJETIVOS.

- OBSERVACIONES.
- GRFICOS.
- CONCLUSIONES.

- DEBER

- Plantese 5 ejercicios relacionados al tema.

- BIBLIOGRAFA.

GRACIAS POR SU COLABORACIN