INSTITUTO TECNOLGICO DE CD.

ALTAMIRANO

ASIGNATURA: GENTICA MOLECULAR

CLAVE OFICIAL: LBG1023

HORAS: 6 HORAS.

UNIDAD 2: REPLICACIN, MUTACIN Y REPARACIN DEL

MATERIAL GENTICO EN VIRUS, PROCARIOTAS Y
EUCARIOTAS

Competencia: Identificar los procesos moleculares que dan las caractersticas

especficas en organismos procariotas y eucariotas.

PORTAFOLIO DE EVIDENCIAS: UNIDAD 2

CATEDRTICO: M.C FRANCISCO JAVIER PUCHE ACOSTA

PRESENTA:
YATZIRIT ARELLANO ALBARRAN

LIC. BIOLOGA
GRUPO: 4A3

CD. ALTAMIRANO, GRO. MARZO

2017
 INTRODUCCIN
La vida de los seres vivos es muy variable, por tanto para que esta no se extinga
ha de haber un momento en se reproduzcan, lo cual lleva implcito la formacin de
copias del ADN del progenitor o progenitores.
Se dieron muchas hiptesis sobre cmo se duplicaba el ADN hasta que Watson y
Crick propusieron la hiptesis semiconservativa (posteriormente demostrada por
Meselson Y Stahl en 1957), segn la cual, las nuevas molculas de ADN formadas
a partir de otra antigua, tienen una hebra antigua y otra nueva.
Una vez que se comprob que el ADN era el material hereditario y se descifr su
estructura, lo que quedaba era determinar como el ADN copiaba su informacin y
como la misma se expresaba en el fenotipo. Matthew Meselson y Franklin W. Stahl
disearon el experimento para determinar el mtodo de la replicacin del ADN.
Tres modelos de replicacin eran plausibles.
1. Replicacin conservativa durante la cual se producira un ADN completamente
nuevo durante la replicacin.
2. En la replicacin semiconservativa se originan dos molculas de ADN, cada una
de ellas compuesta de una hebra del ADN original y de una hebra complementaria
nueva. En otras palabras el ADN se forma de una hebra vieja y otra nueva. Es
decir que las hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas.
3. La replicacin dispersiva implicara la ruptura de las hebras de origen durante la
replicacin que, de alguna manera se reordenaran en una molcula con una
mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de ADN.
El experimento de Meselson-Stahl consiste en cultivar la bacteria Escherichia
coli en un medio que contenga nitrgeno pesado ( 15Nitrgeno que es ms pesado
que el istopo ms comn: el 14Nitrgeno). La primera generacin de bacterias se
hizo crecer en un medio que nicamente contena 15Nitrgeno como fuente de N.
La bacteria se transfiri luego a un medio con 14N. Watson y Crick haban
pronosticado que la replicacin del ADN era semiconservativa, de ser as el ADN
extrado de las bacterias luego de cultivarlas por una generacin en 14N tendra un
peso intermedio entre el ADN extrado del medio con 15N y el del extrado de
medio con 14N y as fue.
La replicacin del ADN, que ocurre una sola vez en cada generacin celular,
necesita de muchos "ladrillos", enzimas, y una gran cantidad de energa en forma
de ATP (recuerde que luego de la fase S del ciclo celular las clulas pasan a una
fase G a fin de, entre otras cosas, recuperar energa para la siguiente fase de la
divisin celular). La replicacin del ADN en el ser humano a una velocidad de 50
nucletidos por segundo, en procariotas a 500/segundo. Los nucletidos tienen
que ser armados y estar disponibles en el ncleo conjuntamente con la energa
para unirlos.
La iniciacin de la replicacin siempre acontece en un cierto grupo de
nucletidos, el origen de la replicacin, requiere entre otras de las
enzimas helicasas para romper los puentes hidrgeno y las topoisomerasas para
aliviar la tensin y de las protenas de unin a cadena simple para mantener
separadas las cadenas abiertas.
Una vez que se abre la molcula, se forma una rea conocida como "burbuja de
replicacin" en ella se encuentran las "horquillas de replicacin". Por accin de la
ADN polimerasa los nuevos nucletidos entran en la horquilla y se enlazan con el
nucletido correspondiente de la cadena de origen (A con T, C con G). Los
procariotas abren una sola burbuja de replicacin, mientras que los eucariotas
mltiples. El ADN se replica en toda su longitud por confluencia de las "burbujas".
Dado que las cadenas del ADN son antiparalelas, y que la replicacin procede
solo en la direccin 5' - 3' en ambas cadenas, numerosos experimentos mostraron
que, una cadena formar una copia continua, mientras que en la otra se formarn
una serie de fragmentos cortos conocidos como fragmentos de Okazaki. La
cadena que se sintetiza de manera continua se conoce como
cadena adelantada y, la que se sintetiza en fragmentos, cadena atrasada.
Para que trabaje la ADN polimerasa es necesario la presencia, en el inicio de cada
nuevo fragmento, de pequeas unidades de ARN conocidas como cebadores, a
posteriori, cuando la polimerasa toca el extremo 5' de un cebador, se activan otras
enzimas, que remueven los fragmentos de ARN, colocan nucletidos de ADN en
su lugar y, una ADN ligasa los une a la cadena en crecimiento (Raisman &
Gonzalez, 2011).
 CONTENIDO
RESMENES
2.1. Estudio comparativo de la replicacin en los diferentes niveles evolutivos:
virus, procariotas, eucariotas simples, plantas y animales.
2.2. Control de la replicacin en sus diferentes formas: horquilla de replicacin,
replicacin semidiscontinua.
2.3. Composicin y caracterizacin del complejo replicativo. Estudio en E. coli.
Reconocimiento de secuencias consenso por parte del aparato replicativo.
2.4. Control de la fidelidad en la replicacin. Mecanismos de reconocimiento y de
correccin de errores. Exactitud en el apareamiento de bases.
2.5. Reparacin del ADN. Mutaciones y su significacin.
2.6. Bases moleculares de la mutagnesis. Tipos de mutagnesis. Agentes
mutagnicos. Mutagnesis dirigida. Utilizacin de la mutagnesis con fines
biotecnolgicos y de diagnstico.

INVESTIGACIN EN EQUIPO
2.1. 3 Replicacin del ADN en eucariotas
EXPOSICIN EN EQUIPO
2.1. 3 Replicacin del ADN en eucariotas
MAPA MENTAL
2.1.2 Replicacin del ADN en procariotas
CONCLUSIN
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
RESMENES
2.1. ESTUDIO COMPARATIVO DE LA REPLICACIN EN LOS DIFERENTES
NIVELES EVOLUTIVOS: VIRUS, PROCARIOTAS, EUCARIOTAS SIMPLES,
PLANTAS Y ANIMALES.
REPLICACIN EN VIRUS
De acuerdo a la definicin de Luria y Darnell (1967) "Los virus son entidades cuyo
genoma se replica dentro de clulas vivas usando su maquinaria de sntesis. Esto
determina la formacin de elementos especializados (partculas virales) que
permiten la transferencia del genoma viral a otras clulas.
Los virus son parsitos intracelulares obligados que no presentan sistemas
enzimticos propios productores de energa, necesarios para la sntesis de cidos
nucleicos, protenas, ribosomas, etc. No son capaces de replicarse por s solos,
requieren de clulas animales, vegetales o bacterias para cumplir su ciclo
replicativo. La replicacin viral es dependiente de las actividades metablicas de
las clulas hospederas lo que define su parasitismo celular obligatorio. Son de
tamao pequeo, de 20 a 250 nm.
MECANISMO ESPECIAL DE REPLICACIN
La replicacin viral se diferencia del proceso de divisin celular usado por clulas
procariotas y eucariotas, ya que esta replicacin no hay divisin ni aumento de
tamao. La partcula viral se desintegra y se sintetizan de novo cada uno de sus
componentes para luego ensamblarse dentro de la clula husped.
Para comprender el proceso de replicacin del material gentico es necesario
conocer que la estructura de un virus es simple, presentan cido nucleico que
puede ser ADN o ARN; una capside que es una cubierta proteica que rodea al
cido nucleico, y est formada por numerosas copias de una protena
(capsmero); un nucleocpside constituido por la cpside y el genoma; y una
envoltura que solo la presentan los virus envueltos y que est constituida por
lipoprotenas de origen celular en la que se insertan glicoprotenas.
Los virus de ADN pueden ser:
Fig. 1. Estructura del ADN en los virus.
Y los virus de ARN pueden ser:

Fig. 2. Estructura del ARN en los virus.

REPLICACIN VIRAL
La replicacin viral ocurre en el interior de una clula husped viva susceptible.

Fig. 3. Multiplicacin de los virus (Ruchansky, 2017).

Replicacin del cido nucleico
La replicacin es un fenmeno muy heterogneo porque existe mucha variedad de
cidos nucleicos de origen viral; se recordar que los hay de ADN y de ARN de
una o dos hebras, segmentados o no, etc. Siempre el genoma viral es el elemento
capaz de gobernar su autorreplicacin y de trasmitir la informacin estructural y
funcional a la progenie resultante de una infeccin. No obstante la diversidad
sealada, en la replicacin intervienen elementos comunes que vale la pena
destacar tales como la formacin de un ARNm capaz de traducir en el ribosoma
celular las protenas codificadas por el genoma viral. Adems, sea cual sea el
cido nucleico, siempre se diferencian dos conjuntos de genes, los precoces y los
tardos. Los primeros seran los encargados de codificar protenas necesarias para
la copia de la molcula de cido nucleico y, los tardos seran los encargados de
codificar las protenas estructurales y las protenas para el ensamblaje.
La replicacin puede producirse en el ncleo o en el citoplasma de la clula, eso
depender del tipo de cido nucleico que constituye el genoma viral. Los virus que
contienen ARN se replican en el citoplasma, mientras que los que tienen ADN se
replican en el ncleo; excepto el virus de la viruela que, aunque son virus ADN, su
replicacin se realiza en el citoplasma.
Los virus ADN sintetizan por medio de una polimerasa, ARNm que pasa al
citoplasma donde se producir la sntesis proteica; de estas protenas algunas
tienen funciones estructurales y formarn los capsmeros que al unirse entre s
constituirn la cpside. Otras protenas tendrn funciones enzimticas, de
polmeros y se introducirn en el cido nucleico promoviendo la replicacin del
ADN viral. El tipo de replicacin es semiconservadora y los intermediarios
replicativos, sern lineales o cclicos dependiendo si la molcula de ADN es lineal
o cclica respectivamente.
Como ejemplo de virus ADN podemos citar al grupo de los herpesvirus, quienes
pierden la cpside en el citoplasma y penetran al ncleo iniciando la replicacin
del cido nucleico. Hay sntesis de ARNm inducidos por el virus, enzimas
relacionadas a la sntesis y fragmentacin del ADN. Los pasos biosintticos
descritos pueden relacionarse con el desarrollo de cuerpos de inclusin nucleares
y la formacin de partculas virales.
Los virus ARN tienen un inters especial por la diversidad de formas de replicacin
que presentan; esto depende de que el ARN pueda actuar como mensajero,
denominado de polaridad positiva. De lo contrario, al ARN que posea la secuencia
de bases complementarias a las del ARNm se le denomina de polaridad negativa.
Cuando consideramos un ARN con polaridad positiva, ste acta como mensajero
entrando en el ribosoma celular e iniciando una traduccin de polimerasas,
necesarias para iniciar la replicacin del cido nucleico. Luego actuar la parte
tarda del ARN traduciendo protenas para la formacin de la cpside y ensamblaje
de la partcula viral. Un ejemplo de este tipo de replicacin son los poliovirus, que
tienen como genoma un ARN de hebra nica con cido poliadenlico en un
extremo. Dicho cido sirve inicialmente como molcula de ARNm para la sntesis
de replicasa de ARN, producindose el intermediario replicativo de ARN, til para
la sntesis de molculas de ARN virales de los descendientes. La replicacin del
ARN viral es independiente de las sntesis de ADN de la clula husped.
Por el contrario, si el ARN es de polaridad negativa, la molcula no tiene funcin
mensajera y por lo tanto sintetiza una molcula complementaria a la original con
funcin mensajera, que entra al ribosoma. En este grupo de virus aparece un
nuevo concepto en la estructura viral porque, para sintetizar una copia se necesita
una transcriptasa ARN dependiente que no se encuentra en las clulas. Por
consiguiente, en estos virus adems del genoma y las protenas estructurales, son
sintetizadas otras protenas que luego sern incorporadas a la partcula viral.

Fig. 4. Replicacin del genoma viral (Arbiza, 2017).

REPLICACIN EN CLULAS PROCARIOTAS

Las propiedades de la replicacin son bsicamente iguales en todos los seres
vivos, y siendo as que la mayora de los estudios se han realizado en Escherichia
coli, se describir el proceso a nivel del organismo bacteriano.
Principales caractersticas de la replicacin:
La replicacin es un proceso semiconservador.
Cada cadena de la molcula de ADN parental acta de molde para la sntesis de
una nueva cadena producindose dos nuevas molculas de ADN, cada molcula
nueva posee una cadena vieja y una nueva.
La replicacin comienza en un punto del ADN.

Fig. 5. Punto de origen y horquilla de replicacin.

Las dos cadenas de ADN se replican al mismo tiempo y comienzan en un punto
denominado origen. En dicho punto el ADN parental se desenrolla y forma una
estructura de lazo cuyos extremos se denominan horquillas de replicacin. En el
caso del cromosoma circular bacteriano, el punto inicial de la replicacin es un gen
denominado oriC.
La replicacin es bidireccional.
Comenzada en un punto de la molcula de ADN el proceso se desarrolla hacia los
dos extremos de la cadena; en cada lazo, los extremos u horquillas de replicacin
avanzan en el proceso de sntesis hasta completar la copia.
La sntesis de ADN se desarrolla en direccin 5' 3'.
La direccin en que actan las enzimas es fija y nica de 5' a 3'. Esto determina
que la cadena molde ha de tener la direccin 3'5', para que la nueva cadena en
formacin, complementaria y antiparalela tenga la direccin 5' 3' coincidente con
el sistema de trabajo de la enzima. Al ser la horquilla de replicacin bidireccional,
el sistema descrito implicara que la otra cadena parental 5'3' debera estar
siendo copiada en direccin 3'5', situacin imposible debido a la limitacin de las
enzimas sintticas. Este problema es obviado debido a que,
La sntesis de ADN es semidiscontinua.
Fig. 6. Sntesis de ADN semidiscontinua.
En una cadena, la inicialmente comentada en el punto anterior, la replicacin es
continua y en la segunda la sntesis es discontinua. Esta solucin fue descrita por
Reiji Okazaki quien encontr que en el procedimiento de copia de las dos cadenas
del ADN parental, se formaba una cadena nueva continua (tambin denominada
conductora) en la que la sntesis se desarrolla en la misma direccin de la enzima
o de la horquilla de replicacin; mientras que la otra cadena nueva era discontinua
(tambin denominada cadena rezagada o retrasada) ya que su sntesis se
realizaba en contra de la direccin de la horquilla mediante fragmentos, los
fragmentos de Okazaki, secuencias formadas por unos centenares o miles de
nucletidos dependiendo de la clula.
ENZIMAS QUE PARTICIPAN EN LA REPLICACIN
ADN polimerasas
La reaccin bsica que tiene lugar en la replicacin es una reaccin de
polimerizacin, de formacin de un enlace fosfodister entre nucletidos. En una
cadena de ADN en crecimiento se incorpora un nucletido cuya base es la
complementaria a la de la cadena molde. Los nucletidos que se incorporan han
de hacerlo en su forma activada o uncletido trifosfatados (dNTP). La reaccin que
tiene lugar es la siguiente:
ADN (n nucletidos) + dNTP ADN (n+1 nucletidos) + PPi
La reaccin de polimerizacin es termodinmicamente favorable por la hidrlisis
del pirofosfato; pero no slo por el desdoblamiento del pirofosfato, sino tambin
por las interacciones no covalentes que se establecen entre las bases. Esta
reaccin es catalizada por varias enzimas, las ADNpolimerasas, cada una con un
tipo de actividad muy especfica pero con una serie de requisitos de
funcionamiento comunes, que son:
1) Necesitan una cadena de ADN molde, el proceso de replicacin es dirigido por
la cadena de ADN molde, y sigue el principio de complementariedad de bases
fijando el nucletido que debe incorporarse a la cadena en formacin segn tal
regla.

Fig. 7. Diagrama de le extensin del ADN polimerasa.

2) Necesitan un cebador, la polimerizacin que realizan estas enzimas requiere
que exista una cadena previa inicial (cebador) ya que son incapaces de coger
sobre su centro activo dos nucletidos individuales y comenzar la sntesis. Uno de
los sustratos necesarios de la reaccin es, por tanto, una cadena preexistente, y
ninguna de estas enzimas es capaz de iniciar la sntesis de una cadena nueva
desde su primer nucletido.

3) Su direccin de sntesis es fija de 5' 3', esto significa que adicionan

nucletidos a la cadena siempre por un extremo fijo, el extremo 3'. O bien, que de
los dos extremos del nucletido libre que se va a incorporar, utilizan su grupo
fosfato o extremo 5' para aadirlo a la cadena en crecimiento.
4) La velocidad con que adicionan nucletidos, o procesividad, se mide como el
nmero de nucletidos incorporados en la unidad de tiempo y es una
caracterstica propia de cada polimerasa.

Fig. 8. Algunos de los requisitos implicados en la replicacin del ADN.

Una cualidad de todas las ADN-polimerasas es la precisin con que realizan la
replicacin, estimndose en Escherichia coli que se comete un error en uno de
cada 109 a 1010 nucletidos, lo cual en el cromosoma de Escherichia coli supone
un error cada 1.000 a 10.000 replicaciones. Estos errores son corregidos por las
mismas polimerasas mediante una actividad enzimtica independiente, la
actividad exonucleasa 3' 5'; esta actividad les permite eliminar el ltimo nucletido
incorporado si ste es errneo, para a continuacin, seguir con la polimerizacin.
Esta capacidad de correccin, mediante la discriminacin entre bases correctas e
incorrectas, mejora la precisin de la replicacin. Si se aade el hecho de que,
adems, existen otros sistemas de correccin que actan despus de acabada la
replicacin, puede observarse la fidelidad y garanta del proceso.
Existen tres polimerasas denominadas ADN polimerasa I (antes descrita), ADN
polimerasa II y ADN polimerasa III. Si se comparan algunas caractersticas
diferenciales entre ellas, se puede observar que la ADN polimerasa III es la ms
compleja. Est formada por diez subunidades diferentes y tiene una capacidad de
polimerizacin infinitamente superior a cualquiera de las otras dos, siendo, por
tanto, la principal enzima de la replicacin.
La ADN polimerasa I es importante por su tarea de correccin, capaz de realizarla
tanto en la direccin descrita como en la direccin contraria, debido a que posee la
actividad exonucleasa 5'3', careciendo de la misma el resto de polimerasas.
Otros enzimas que participan en el proceso de replicacin
Para la replicacin se necesitan, aparte de las ADN polimerasas descritas,
alrededor de 20 protenas diferentes, el conjunto de las mismas se denomina
sistema ADN replicasa o replisoma ya que aunque no formen una unidad fsica,
constituyen una unidad funcional.
Dentro de las enzimas que participan estn:
1) Helicasas, enzimas que separan las dos cadenas de la molcula de ADN
parental. Desplazndose a lo largo de la molcula de ADN eliminan los enlaces
entre las cadenas consumiendo en el proceso ATP.
2) Topoisomerasas, enzimas que desenrollan el ADN y lo relajan. Existen cuatro
topoisomerasas (I a IV) que actan eliminando superenrollamientos negativos; o
bien inducindolos, dependiendo del grado de plegamiento que tenga el ADN en
su estado natural.
3) Protenas fijadoras de ADN, protenas que estabilizan las cadenas separadas
unindose a ellas.
4) Primasas, enzimas que sintetizan el cebador, ste suele ser un corto fragmento
de ARN, necesario para que pueda comenzar la ADN polimerasa III, y que
posteriormente ser eliminado y sustituido por un fragmento de ADN por la ADN
polimerasa I.
5) ADN ligasas, enzimas que se encargan de unir trozos formados de cadenas,
realizando un enlace fosfodister entre los nucletidos pertenecientes a dos
segmentos de una cadena. Todas estas enzimas participan en el proceso de la
replicacin de forma coordinada, permitiendo que se desarrolle de una manera
secuencial y organizada.

REPLICACIN EN CLULAS EUCARIOTAS

Las molculas de ADN en clulas eucariotas son mucho mayores y ms complejas
ya que el proceso de la replicacin es bastante ms complicado. Los orgenes de
la replicacin son secuencias mayores, en levaduras de unos 400 pares de bases,
que se presentan en varios puntos de los cromosomas. La velocidad de
desplazamiento de la horquilla de replicacin es de unos 50 nucletidos por
segundo, una velocidad relativamente baja si se compara con la de los procariotas
(10 veces mayor). Para incrementar la velocidad global del proceso, en eucariotas
existen varios puntos de origen sobre la misma molcula de ADN, estando
separados entre 30.000 y 300.000 pares de bases. La presencia de mltiples
horquillas de replicacin acelera el proceso, y permite que la replicacin en
eucariotas se desarrolle a velocidades mayores que en los procariotas.
Los fragmentos de Okazaki en el ADN eucariota son ms cortos, generalmente
contienen 135 nucletidos, debido a que la horquilla de replicacin se mueve ms
despacio.
Tambin se han descrito diferencias respecto a las ADN polimerasas en
eucariotas, la ADN polimerasa es una protena oligomrica, en la que una de sus
subunidades tiene accin primasa.

Fig. 9. ADN polimerasas en eucariotas.

Por ltimo, el ADN eucariota est unido a las histonas y empaquetado en los
nucleosomas. El proceso de replicacin ha de ir acompaado por el proceso de
sntesis de histonas, ya que en cada ciclo de replicacin no slo se ha de duplicar
el ADN sino tambin las histonas. Las enzimas que desarrollan ambos procesos
son distintas pero han de ir coordinadas, ya que la velocidad debe ser igual. Las
histonas recin sintetizadas se incorporan a la molcula de ADN que lleva la hebra
retrasada, mientras que las viejas histonas permanecen en el dplex que lleva la
hebra conductora (Merino y Noriega, 2017).
 2.2. CONTROL DE LA REPLICACIN EN SUS DIFERENTES
FORMAS: HORQUILLA DE REPLICACIN, REPLICACIN
SEMIDISCONTINUA.
HORQUILLAS DE REPLICACIN EN PROCARIOTAS
La replicacin comienza en un sitio especfico en el cromosoma bacteriano
conocido como el origen. El origen de replicacin en el cromosoma de E. coli es
una secuencia especfica llamada oriC en la que diferentes protenas se unen para
iniciar el proceso de replicacin. Tras comenzar, la replicacin se aleja del origen
en ambas direcciones, es decir, en forma bidireccional. Los puntos donde el par de
segmentos replicados se unen con los segmentos no replicados se denominan
horquillas de replicacin (replication forks). Cada horquilla de replicacin
corresponde al sitio donde: 1) la doble hlice parental se separa y 2) los
nucletidos se incorporan en las cadenas complementarias resintetizadas. Las dos
horquillas de replicacin se mueven en direcciones opuestas hasta que llegan a un
punto a travs del crculo desde el origen, donde la replicacin concluye. Las dos
cadenas dplex, replicadas, nuevamente, se separan una de la otra y al final se
dividen en dos clulas diferentes.
Fig. 10. Modelo de un cromosoma circular que sufre replicacin semiconservativa
bidireccional.
HORQUILLA DE REPLICACIN EN EUCARIOTAS
En general, las actividades que ocurren en la horquilla de replicacin son muy
similares, sin importar cul sea el tipo de genoma bajo replicacin: vrica,
procariota o eucariota. Todos los sistemas de replicacin requieren helicasas,
protenas de unin con DNA monocatenario, topoisomerasas, primasa, DNA
polimerasa, pinza deslizante y cargador de la pinza, as como DNA ligasa.
Como en las bacterias, el DNA de una clula eucariota se sintetiza de una manera
semidiscontinua, pese a que los fragmentos de Okazaki de cadena retrasada son
considerablemente ms pequeos que en una bacteria, cercanos a 150
nucletidos de longitud. Como en la DNA polimerasa III de E. coli, la polimerasa
que replica el DNA eucariota est presente como un dmero, lo que sugiere que
las cadenas adelantada y retrasada se sintetizan de manera coordinada por un
solo complejo de replicacin o replisoma.
En la actualidad se han aislado las cinco DNA polimerasas tpicas de las clulas
eucariotas y se conocen como , , , , .
De estas enzimas, la polimerasa replica el DNA mitocondrial y la funciona en la
reparacin del DNA. Las otras tres polimerasas tienen funciones de replicacin. La
polimerasa est muy relacionada con la primasa y juntas inician la sntesis de
cada fragmento de Okazaki. La primasa comienza la sntesis por el ensamble de
un iniciador corto de RNA, el cual se ampla por la adicin de unos 20
desoxirribonucletidos por medio de la polimerasa . Se cree que la polimerasa
es la principal enzima sintetizadora de DNA durante la replicacin de la cadena
rezagada, mientras que la polimerasa se considera la principal enzima
sintetizadora de DNA durante la replicacin de la cadena lder. De la misma
manera que la principal enzima de replicacin de E. coli, las polimerasas y
requieren una pinza deslizante que mantiene unida la enzima al DNA y ello hace
posible a sta moverse de manera continua a lo largo de la plantilla. La pinza
deslizante de las clulas eucariotas es muy similar en estructura y funcin a la
pinza de la polimerasa III de E. coli. En eucariotas, la pinza deslizante se conoce
como PCNA. El cargador de pinza que coloca a la PCNA sobre el DNA se llama
RFC y es anlogo al complejo cebador de pinza de la polimerasa III de E. coli.
Despus de sintetizar un iniciador de RNA-DNA, la polimerasa se sustituye en la
unin de plantilla e iniciador por el complejo PCNA-polimerasa , que completa la
sntesis del fragmento de Okazaki. Cuando la polimerasa alcanza el extremo 5'
del fragmento de Okazaki recin sintetizado, la polimerasa contina a lo largo de
la plantilla de la cadena seguidora, desplazando al iniciador. Una endonucleasa
(FEN-1) corta del DNA recin sintetizado el iniciador desplazado, y una DNA ligasa
sella la muesca resultante en el DNA. Se cree que FEN-1 y la DNA ligasa se
atraen a la horquilla de replicacin mediante la interaccin con la pinza deslizante
PCNA. De hecho, se cree que PCNA tiene una participacin importante en la
orquestacin de los fenmenos que ocurren durante la replicacin, reparacin y
recombinacin del DNA. Por esta capacidad para unirse con un conjunto diverso
de protenas, PCNA se ha denominado cinturn de herramientas moleculares.
Como las polimerasas procariotas, todas las polimerasas de eucariotas construyen
cadenas de DNA en una direccin 5' 3' al agregar nucletidos a los grupos
hidroxilo 3' y ninguno de stos es capaz de iniciar la sntesis de un DNA sin un
iniciador.
Las polimerasas , y poseen una exonucleasa 3' 5', cuya actividad de
lectura y correccin garantiza que esta replicacin ocurra con una gran eficiencia.
Otras DNA polimerasas diferentes (entre ellas , y ) poseen una funcin
especializada que permite a las clulas replicar el DNA daado.

Fig. 11. Esquema de los componentes principales de la horquilla de replicacin en

los eucariotas.
REPLICACIN SEMIDISCONTINUA
La ausencia de actividad de polimerizacin en direccin 3' 5' tiene una
explicacin ms directa: no se pueden sintetizar cadenas de DNA en dicha
direccin.
Ambas cadenas recin sintetizadas se ensamblan en la direccin 5' 3'. Durante
la reaccin de polimerizacin, el grupo OH en el extremo 3' del iniciador lleva a
cabo un ataque nucleoflico en el fosfato 5' del trifosfato de nuclesido que entra.
Las molculas de la polimerasa encargadas de la construccin de las dos cadenas
de DNA se mueven en una direccin 3' a 5' a lo largo de la plantilla y ambas
construyen una cadena que crece desde su extremo 5' fosfato terminal. Por
consecuencia, una de las cadenas resintetizadas crece en direccin del asa de
replicacin donde las cadenas de DNA parental se separan, mientras la otra
cadena crece y se aleja de la horquilla.
Aunque esto resuelve el problema en relacin con una enzima que slo puede
sintetizar una cadena en una direccin, genera un dilema an ms difcil. Es
evidente que la cadena que crece hacia la horquilla se puede construir mediante
adicin continua de nucletidos a su extremo 3'. Pero cmo se sintetiza la otra
cadena? Pronto se obtuvo evidencia de que la cadena que crece y se aleja de la
horquilla de replicacin se sintetizaba de manera discontinua, esto es, en
fragmentos. Antes de que la sntesis de un fragmento pueda iniciarse, se debe
exponer un tramo adecuado del DNA plantilla para el desplazamiento de la
horquilla de replicacin. Una vez iniciada sta, cada fragmento crece y se aleja de
la horquilla de replicacin hacia el extremo 5' de un fragmento previamente
formado al cual se une despus. Por lo tanto, las dos cadenas hijas se sintetizan
por procesos muy diferentes. La cadena que se sintetiza de modo continuo se
conoce como cadena adelantada debido a que lo hace conforme avanza la
horquilla de replicacin. La cadena que se sintetiza de forma discontinua se llama
cadena retrasada dado que el inicio de cada fragmento debe esperar a que las
cadenas progenitoras se separen y expongan un fragmento. Ambas cadenas se
sintetizan con probabilidad de manera simultnea, as que los trminos adelantada
y retrasada no pueden ser apropiados como se pensaba al principio. En virtud de
que una cadena se sintetiza de modo continuo y la otra de manera discontinua, la
replicacin es semidiscontinua.

Reiji Okazaki de la Universidad de Nagoya en Japn descubri, despus de varios

experimentos de marcaje, que una cadena se sintetiza primero como un pequeo
fragmento; l encontr que en bacterias incubadas con timidina [ 3H] por pocos
segundos e inmediatamente cosechadas, la mayor parte de la reactividad podra
encontrarse como parte de fragmentos pequeos de DNA de unos 1 000 a 2 000
nucletidos de longitud. En cambio, si las clulas se incubaban con el DNA
marcado precursor por 1 a 2 minutos casi toda la radiactividad incorporada form
parte de molculas de DNA mucho ms grandes. Estos resultados indicaron que
una porcin del DNA se construy en pequeos segmentos (fragmentos de
Okazaki) que se ligaron con rapidez a piezas mucho ms grandes sintetizadas con
anterioridad. La enzima que une los fragmentos de Okazaki en una cadena
continua se conoce como DNA ligasa.
El descubrimiento de que la cadena retrasada se sintetiza en piezas suscit una
nueva pregunta acerca del inicio de la sntesis del DNA. De qu manera la
sntesis de cada uno de estos fragmentos comienza cuando ninguna de las DNA
polimerasas son capaces de iniciar la cadena? Estudios posteriores revelaron que
el inicio no lo lleva a cabo una DNA polimerasa sino ms bien un tipo distinto de
RNA polimerasa, la denominada primasa, que sintetiza una secuencia corta de
RNA, no de DNA. La secuencia adelantada, cuya sntesis comienza en el origen
de la replicacin, tambin la inicia una molcula de primasa. El fragmento corto de
RNA lo sintetiza una primasa en el extremo 5' de la cadena adelantada y el
extremo 5' de cada fragmento de Okazaki que sirve como el iniciador que se
requiere para la sntesis de DNA por medio de una DNA polimerasa. Los
iniciadores de RNA se eliminan despus y los espacios resultantes en la cadena
se llenan y entonces se ligan por medio de una DNA ligasa. La formacin de
iniciadores transitorios de RNA durante el proceso de replicacin del DNA es una
actividad compleja. Quiz sea mayor la probabilidad de cometer errores durante el
inicio que durante el alargamiento; por lo tanto, el empleo de un segmento de RNA
corto que puede degradarse elimina la inclusin de bases errneas.

Fig. 12. Uno de los fragmentos cortos de ARN como iniciadores removibles para
iniciar la sntesis de cada fragmento de Okazaki de la cadena retrasada.

2.3. COMPOSICIN Y CARACTERIZACIN DEL COMPLEJO

REPLICATIVO. ESTUDIO EN E. COLI. RECONOCIMIENTO DE
SECUENCIAS CONSENSO POR PARTE DEL APARATO
REPLICATIVO

Complejo postreplicativo. Protenas Orc.

Tras terminar la replicacin del ADN, en los orgenes de replicacin de S.
cerevisiae slo permanece unido el complejo ORC, formando una estructura
conocida como complejo postreplicativo (postreplicative complex, postRC;). El
complejo ORC est compuesto por seis subunidades proteicas (Orc 1 a 6), que se
acocian al origen, entre el ACS y el elemento B1 en S. cerevisiae. Slo las 5
primeras subunidades son necesarias para la asociacin al ADN, pero Orc6
tambin es esencial para la supervivencia celular. Para que se produzca la
asociacin al ADN es necesario que Orc1 y Orc5 (las nicas subunidades con
capacidad de captarlo) unan ATP, pero no que lo hidrolicen, lo que parece indicar
que el ATP unido a ORC se reserva para un paso posterior en el inicio de
replicacin, probablemente la disociacin de las protenas Cdc6, Cdt1 del ADN
tras la carga del complejo Mcm27.
Formacin del complejo prereplicativo (preRC). Licensing de orgenes.
La unin del resto de protenas del preRC a ORC (reaccin conocida como
licensing o licenciamiento de orgenes) est inhibida por actividad CDK, como se
coment en el apartado anterior de introduccin. Dos de las subunidades, Orc2 y
Orc6, son sustratos de CDK, y su fosforilacin contribuye al bloqueo del licensing,
aunque el estado de fosforilacin no afecta a la capacidad de ORC para unirse al
ADN. Cdc6 fosforilado es inestable, mientras que el complejo que forman las
protenas Mcm27Cdt1 se excluye del ncleo cuando CDK las fosforila. Una vez
que la actividad CDK decae durante G1 y ORC est desfoforilado, (como el resto
de protenas del preRC) se produce el licensing y la formacin del complejo pre
replicativo. Las protenas del preRC se unen al origen en el siguiente orden:
Cdc6, y Cdt1 junto al complejo proteico Mcm27.
Complejo de preinicio. Paso previo al inicio de replicacin.
La transicin entre complejo prereplicativo (preRC) y complejo de preinicio (Pre
IC) consiste en la activacin de la helicasa por la unin de ms protenas al pre
RC, como son Cdc45, GINS, Sld2, Sld3, Sld7 y Dpb11. La transicin preRC/pre
IC se produce ante la activacin de CDK, pero tambin es necesaria otra actividad
quinasa, conocida como DDK (Dbf4dependent kinase, quinasa dependiente de
Dbf4), cuya subunidad cataltica es Cdc7. La DDK se mantiene inactiva en G1
porque Dbf4 se degrada va APC/C. Su principal sustrato una vez activada son las
subunidades Mcm2, 4 y 6 in vitro e in vivo.
La accin de CDK sobre el preRC est mediada principalmente por dos
protenas, Sld2 y Sld3, cuya fosforilacin es necesaria y suficiente para el inicio de
replicacin. Estas dos protenas promueven la asociacin de otra, Dpb11. La
funcin del preIC es la de establecer un punto de unin de las polimerasas que se
encargarn de la replicacin.
Una vez abierta la horquilla de replicacin, el replisoma (el conjunto de protenas
que se encuentran en cada extremo de la horquilla) avanza por el ADN realizando
una copia del material gentico. No profundizaremos en este proceso, ya que no
es objeto de este trabajo.
Cuando la copia se ha realizado los orgenes de replicacin vuelven al estado
postRC y empieza el ciclo de nuevo (Ayuda, 2012)

2.4. CONTROL DE LA FIDELIDAD EN LA REPLICACIN.

MECANISMOS DE RECONOCIMIENTO Y DE CORRECCIN DE
ERRORES. EXACTITUD EN EL APAREAMIENTO DE BASES
CONTROL DE LA FIDELIDAD EN LA REPLICACIN
MECANISMOS DE FIDELIDAD
Elevada especificidad del apareamiento de bases, elevada especificidad de las
polimerasas, utilizacin del ARN iniciador y existencia de un mecanismo de
rectificacin que consiste en la actividad de exonucleasa de la ADN polimerasa
(Snchez, 2010).
CORRECCIN DE ERRORES
La actividad de la ADN polimerasa debe ser exacta, rpida y fiel, ya que la vida
entera y su continuidad de generacin en generacin dependen de la exactitud y
precisin con que se transmite la informacin, es decir de la fidelidad de la
duplicacin del ADN.
La seleccin de nucletidos por la ADN polimerasa y su actividad autocorrecctora,
constituyen mecanismos de prevencin de errores, pero aun as se comete un
error de apareamiento por cada 10 millones de bases.
Esta precisin podra resultar suficiente para una bacteria, cuyo genoma contiene
3 millones de pares de bases, pero resulta insuficiente para el genoma humano
que contiene 3.109 pares de bases.
Un error por cada 10 millones de bases supondra 300 equivocaciones en cada
duplicacin del ADN humano, y teniendo en cuenta que durante el desarrollo
embrionario a partir del zigoto el genoma humano se duplica casi mil millones de
veces, se producira una acumulacin del trescientos mil billones de errores, lo
que evidentemente, es incompatible con la vida, ya que la formacin inicial se
perdera pronto como consecuencia de las divisiones celulares.
Por ello, para aumentar todava ms la precisin de la duplicacin, existe una
maquinaria enzimtica que corrige los posibles errores cometidos por el ADN
polimerasa en ADN recin sintetizados (correccin postreplicativa), con lo que la
exactitud de la rplica alcanza la increble perfeccin de un error por cada diez mil
millones de bases (1010). Esta correccin se realiza por medio de un conjunto de
enzimas agrupados en un complejo multienzimtico que detecta el nucletido mal
emparejado, lo elimina y regenera la secuencia correcta, del siguiente modo:
 Para detectar el nucletido mal emparejado, el aparato de correccin debe
reconocer la cadena recin sintetizada, donde se encuentra el error y
diferenciarla de la cadena molde. Ambas cadenas son complementarias,
pero mientras que la cadena molde tienen metiladas las adeninas de las
secuencias GATC, existe un lapso de tiempo durante el cual las adeninas
de estas secuencias en la cadena rplica aparecen sin metilar, y es en este
intervalo cuando acta el complejo multienzimtico y detecta los posibles
errores.
La eliminacin se realiza mediante una endonucleasa que corta el
segmento en el lugar donde se encuentra el error.
Por ltimo, la secuencia correcta se regenera cuando la ADN polimerasa I rellena
el hueco utilizando como molde la cadena original, y por ltimo una ligasa unir los
fragmento (Alonzo, 2014).
Fig. 13. Correccin de errores (Alonzo, 2014).

2.5. REPARACIN DEL ADN. MUTACIONES Y SU SIGNIFICACIN

REPARACIN DEL ADN
REPARACIN DEL ADN
La vida en la Tierra est sujeta a mltiples fuerzas destructivas que se originan en
el interior y el ambiente externo de un organismo. De todas las molculas en una
clula, el ADN est colocado en la posicin ms precaria. Por un lado, es esencial
que la informacin gentica permanezca de manera primordial sin cambio
conforme sta pasa de una clula a la siguiente y de un individuo a otro. Por otra
parte, el ADN es una de las molculas celulares ms susceptible al dao
ambiental. Cuando se afecta por radiacin ionizante, el esqueleto de la molcula
de DNA sufre con frecuencia roturas; cuando se expone a diversos reactivos
qumicos, algunos de los cuales se generan por el metabolismo de la clula
misma, las bases de una molcula de ADN pueden alterarse de manera
estructural; cuando se someten a radiacin de tipo ultravioleta, las pirimidinas
adyacentes en las cadenas de DNA tienden a interactuar entre s para formar
complejos covalentes y crear un dmero. De igual forma, la absorcin de energa
trmica producida por el metabolismo es suficiente para eliminar las bases de
adenina y guanina de su unin a los azcares en el esqueleto de ADN. La
magnitud de estas alteraciones espontneas, o lesiones, puede reconocerse si se
considera que cada clula de un mamfero de sangre caliente pierde alrededor de
10 000 bases por da! La falla para reparar estas lesiones produce anomalas
permanentes, o mutaciones, en el ADN. Si la mutacin tiene lugar en una clula
destinada a ser un gameto, la alteracin gentica puede pasar de una generacin
a la prxima. Las mutaciones tambin tienen efectos en las clulas somticas (p.
ej., clulas que no pertenecen a la lnea germinal): pueden interferir con la
transcripcin y la replicacin, lo que causa la transformacin maligna de una clula
o acelera el proceso por medio del cual un organismo envejece.
Al considerar las consecuencias potencialmente lesivas de las alteraciones en las
molculas del ADN y la elevada frecuencia con que suceden, es esencial que las
clulas posean mecanismo para reparar el ADN daado. De hecho, las clulas
tienen una amplia variedad de sistemas de reparacin que corrigen casi cualquier
tipo de dao al cual una molcula de ADN es vulnerable. Se ha estimado que
menos de un cambio de base en miles escapa a los sistemas de reparacin en
una clula. La existencia de estos sistemas provee un excelente ejemplo de los
mecanismos moleculares que mantienen la homeostasis celular. La importancia de
la reparacin del ADN puede reconocerse al examinar las consecuencias que
tiene en los seres humanos el resultado de las deficiencias en la reparacin del
DNA.
Tanto las clulas procariotas como las eucariotas poseen una variedad de
protenas que recorren extensos tramos de ADN y buscan alteraciones qumicas o
distorsiones sutiles del ADN dplex. En algunos casos, el dao puede repararse
de modo directo. Por ejemplo, los seres humanos tienen enzimas que pueden
reparar de forma inmediata el dao producido por agentes alquilantes capaces de
causar cncer. Sin embargo, la mayora de los sistemas de reparacin requiere
que la seccin daada del ADN se elimine, esto es, se remueva de manera
selectiva. Una de las grandes virtudes del ADN dplex es que cada cadena
contiene la informacin necesaria para la construccin de su contraparte. En
consecuencia, si uno o ms nucletidos se eliminan de una cadena, la cadena
complementaria puede servir como plantilla para la reconstruccin del dplex. La
reparacin del dao del ADN en clulas eucariotas es complicada por la
inaccesibilidad relativa del ADN dentro de las fibras de cromatina plegadas del
ncleo. Como en el caso de la transcripcin, la reparacin del ADN requiere de
mquinas que remodelan la cromatina, como enzimas modificadoras de histonas y
complejos remodeladores de nucleosomas.

Fig. 14. Dmero de pirimidina formado dentro del ADN dplex despus de la
radiacin con luz ultravioleta.
Escisin de nucletidos y reparacin
La reparacin de la escisin nucleotdica (NER, nucleotide excision repair) opera
por un mecanismo de corte y pegado que elimina diversas lesiones voluminosas,
incluidos los dmeros de pirimidina y los nucletidos en los cuales distintos grupos
qumicos se unen. Se conocen dos vas de NER:
1. Una va acoplada a la transcripcin en la cual las cadenas de ADN plantilla de
los genes que se transcriben de forma activa se reparan de manera preferencial.
La reparacin de una cadena plantilla ocurre al parecer a medida que el ADN se
transcribe y la presencia de la lesin puede sealarla una ARN polimerasa
atorada. Esta va de reparacin preferencial garantiza que estos genes de gran
importancia para la clula, que son los genes que la clula transcribe de manera
activa, reciban la prioridad ms alta en la lista de reparacin.
2. Un mecanismo lento y menos eficiente es la va genmica global que corrige las
cadenas de ADN en el resto del genoma.
A pesar de que el reconocimiento de la lesin lo realizan quiz diferentes protenas
en las dos vas de NER, los pasos que suceden durante la reparacin de la lesin
son muy similares. Un componente clave de la maquinaria de reparacin NER es
el factor TFIIH, una gran protena que tambin participa en el inicio de la
transcripcin. El descubrimiento de la participacin de TFIIH estableci un nexo
crucial entre la transcripcin y la reparacin del ADN, dos procesos que antes ya
se asuma que eran independientes el uno del otro. Incluidas dentro de las
diferentes subunidades de TFIIH estn dos subunidades (XPB y XPD) que poseen
actividad de helicasa; estas enzimas separan las dos cadenas del dplex (paso 2)
en la preparacin para la eliminacin de las lesiones. Un par de endonucleasas
(paso 3) corta entonces la cadena daada en ambos lados de la lesin y el
segmento de ADN se elimina (paso 4). Una vez suprimido, el espacio se reocupa
por medio de una ADN polimerasa (paso 5) y la cadena se liga por medio de una
ADN ligasa (paso 6).

Fig. 15. Reparacin de la escisin de nucletido.

Reparacin por escisin de bases
Un sistema de reparacin por escisin elimina los nucletidos alterados generados
por los reactivos qumicos presentes en la dieta o por el metabolismo. Los pasos
en esta va de reparacin en eucariotas recibe el nombre de reparacin por
escisin de bases (BER, base excision repair). El proceso de BER lo inicia una
ADN glucosilasa que reconoce la alteracin (paso 1) y remueve la base por medio
del corte del enlace glucosdico que une la base al azcar de desoxirribosa (paso
2). Se han identificado diferentes glucosilasas de ADN, cada una de ellas ms o
menos especfica para un tipo en particular de base alterada, incluidos el uracilo
(formado por la remocin hidroltica del grupo amino de la citosina), la 8-
oxoguanina (secundaria al dao de radicales libres del oxgeno) y la 3-
metiladenina (generada por la transferencia de un grupo metilo de un donador de
metilo).
Los estudios estructurales de la ADN glucosilasa que retira la 8-oxoguanina
(oxoG) mutgena indican que esta enzima difunde con rapidez por el ADN e
inspecciona cada uno de los pares de bases G-C en el ADN dplex (paso 1). En
el paso 2, la enzima pas por un par de bases oxoG-C. Cuando esto ocurre, la
enzima inserta una cadena lateral de aminocido especfica en la hlice de ADN,
lo que hace que el nucletido rote (se voltee) 180 grados fuera de la hlice de
ADN y quede dentro del cuerpo de la enzima (paso 2). Si en realidad el nucletido
contiene una oxoG, la base se ajusta en el sitio activo de la enzima (paso 3) y se
divide de su azcar relacionado. En cambio, si la base extruida es una guanina
normal, que slo difiere en estructura de la oxoG por dos tomos, es incapaz de
embonar en el sitio activo de la enzima (paso 4) y es devuelta a su posicin
apropiada dentro de la pila de bases. Una vez que la purina o pirimidina alteradas
se eliminan, el remanente decapitado de la desoxirribosa de fosfato en el sitio se
suprime por la accin combinada de una endonucleasa especializada (AP) y una
ADN polimerasa. La AP corta el esqueleto de ADN (paso 3) y la actividad de
fosfodiesterasa de la polimerasa elimina el azcar-fosfato remanente que estaba
unido a la base eliminada (paso 4). La polimerasa ocupa entonces el espacio al
insertar un nucletido complementario a la cadena no daada (paso 5) y la cadena
se liga por medio de una ADN ligasa III (paso 6).
El hecho de que la citosina pueda convertirse en uracilo puede explicar por qu la
seleccin natural favoreci el uso de la timina, ms que el uracilo, como una base
del ADN, a pesar de que el uracilo estuvo al parecer presente en ARN cuando ste
sirvi como material gentico durante la evolucin temprana de la vida. Si el
uracilo se hubiera retenido como una base de ADN habra causado dificultades en
los sistemas de reparacin para distinguir entre un uracilo relacionado con un
sitio particular y uno que se gener a partir de una alteracin de la citosina.
Fig. 16. Reparacin de la escisin de bases.
Reparacin de la unin deficiente
Ya se mencion que las clulas pueden eliminar bases mal unidas incorporadas
por la ADN polimerasa y las que se escapan de la lectura y correccin por medio
de la enzima exonucleasa. Este proceso se conoce como reparacin de la unin
deficiente. Un apareamiento errneo de pares de bases causa una distorsin en la
geometra de la doble hlice que puede reconocer una enzima de reparacin.
Empero, de qu forma la enzima par reconoce qu miembro del apareamiento
errneo es el nucletido incorrecto? Si se eliminara uno de los nucletidos al azar,
debera haber una probabilidad de cometer error en el 50% de las veces, lo que
creara una mutacin permanente en el sitio. Por lo tanto, para reparar el problema
del apareamiento errneo luego que la ADN polimerasa pasa por el sitio, es
indispensable que el sistema de reparacin pueda distinguir la cadena recin
sintetizada que contiene nucletido incorrecto de la cadena progenitora que posee
el nucletido correcto. En E. coli, las dos cadenas se distinguen por la presencia
de residuos de adenosina metilados en la cadena parental. Parece que el sistema
MMR de los eucariotas no utiliza la metilacin de ADN y an no se conoce el
mecanismo de identificacin de la cadena recin sintetizada.

Fig. 17. Deteccin de daos de bases durante la BER.

Reparacin de la rotura de doble cadena
Los rayos X, los rayos gamma y las partculas liberadas por los tomos radiactivos
se describen como radiacin ionizante porque generan iones que atraviesan la
materia. Millones de rayos gamma pasan a travs del cuerpo cada minuto.
Cuando estas formas de radiacin colisionan con una molcula frgil, como el
ADN, provocan a menudo roturas en ambas cadenas de la doble hlice. Las
roturas de la doble cadena (DSB) tambin pueden deberse a ciertos qumicos,
incluidos los utilizados en la quimioterapia del cncer (p. ej., bleomicina) y
radicales libres generados por el metabolismo normal de la clula. Las DSB
tambin se inducen durante el dao al ADN en la replicacin. Una sola rotura de la
doble cadena puede causar anomalas cromosmicas serias y, al final, letales para
las clulas. Las DSB pueden repararse por medio de diferentes vas alternas. La
va principal en las clulas de mamferos se llama unin de extremos no
homlogos (NHEJ), en la cual un complejo de protenas se une a los extremos
rotos del ADN dplex y cataliza una serie de reacciones que de nueva cuenta
unen las cadenas rotas. Otra va de reparacin DSB incluye la recombinacin
gentica y es considerablemente ms compleja (Karp, 2010).
Fig. 18. Reparacin de la rotura de doble cadena por medio de la unin de
extremos no homlogos.

MUTACIONES Y SU SIGNIFICACIN
La definicin que dio De Vries en 1901 de la mutacin era la de cualquier cambio
heredable en el material hereditario que no se puede explicar mediante
segregacin o recombinacin.
La definicin de mutacin a partir del conocimiento de que el material hereditario
es el ADN y de la propuesta de la Doble Hlice para explicar la estructura del
material hereditario (Watson y Crick, 1953), sera que una mutacin es cualquier
cambio en la secuencia de nucletidos del ADN (Snchez, 2012).
La mutacin es la fuente primaria de variabilidad gentica en las poblaciones,
mientras que la recombinacin al crear nuevas combinaciones a partir de las
generadas por la mutacin, es la fuente secundaria de variabilidad gentica.
Una mutacin es cualquier cambio que se produce en el genotipo de un individuo.
Se refiere, por tanto, a cualquier cambio que se produzca en el material hereditario
del individuo que en la inmensa mayora de los seres vivos es ADN.
Segn la hiptesis de colinearidad de Crick, una secuencia concreta de
nucletidos del ADN se corresponde con una secuencia especfica de aminocido
en la cadena polipeptdica que se forma puesto que segn el cdigo gentico a
cada triplete de bases le corresponde un aminocido determinado. Por tanto,
cualquier cambio que altere la secuencia de bases de un fragmento de ADN podr
producir un cambio en la secuencia de aminocido de una cadena polipeptdica y
por tanto, podr originarse una protena diferente que puede dar origen a un
fenotipo distinto en el individuo que porta la mutacin. El nuevo fenotipo aparecido,
en general es menos favorable para el individuo que el fenotipo original, aunque
no siempre es as.
Casi todas las mutaciones son perjudiciales para el individuo que las porta
(Barrios, 2014).
Muchas veces provoca la no viabilidad del zigoto que la porta y otras veces suelen
producir enfermedades o malformaciones (mutaciones letales, subletales y
patgenas). Algunas mutaciones son neutras porque en el instante en el que se
producen, no proporcionan al individuo que las porta ningn perjuicio ni beneficio.
Estas mutaciones que se van acumulando sin tener una presin selectiva, si en un
momento concreto cambian las condiciones ambientales, pueden favorecer al
individuo que las porta y perjudicarle, segn sea la presin selectiva frente a las
nuevas condiciones. Finalmente, hay muy pocas mutaciones favorables, porque lo
normal es que cada especie est bien adaptada al medio en el que vive y por tanto
es difcil que una mutacin confiera una ventaja que proporcione una mayor
capacidad de supervivencia al individuo. Pero en cualquier caso, a nivel de una
poblacin, la mutacin es un proceso muy importante porque permite introducir
variabilidad gentica en las poblaciones. La seleccin natural podr actuar de
forma distinta sobre las distintas combinaciones genticas lo cual es el mecanismo
fundamental de la evolucin (Aparicio, 2008).
La mutacin es la fuente ltima de toda variacin gentica, pues genera
variacin de novo. La mutacin es un factor que aumenta la diversidad gentica.
Una mutacin es un cambio estable y heredable en el material gentico.
Las mutaciones alteran la secuencia del ADN y por tanto introducen nuevas
variantes. Muchas de estas variantes suelen ser eliminadas, pero ocasionalmente
algunas de estas variantes pueden tener xito e incorporarse en todos los
individuos de la especie.
Las mutaciones no tienen ninguna direccin (son aleatorias, no dirigidas) respecto
a la adaptacin o funcin del gen, son como un cambio al azar de una letra por
otra en un texto. Este cambio suele producir una falta de significado, y por eso una
gran mayora de mutaciones que afectan a la funcin son deletreas. Pero a veces
ciertos cambios pueden introducir nuevos significados, permitiendo nuevas
funciones.
La tasa de mutacin de un gen o una secuencia de ADN es la frecuencia en la que
se producen nuevas mutaciones en ese gen o la secuencia en cada generacin.
Una alta tasa de mutacin implica un mayor potencial de adaptacin. Una alta tasa
de mutacin aumenta el nmero de mutaciones perjudiciales o deletreas de los
individuos. Cada especie tiene un tasa de mutacin propia que ha sido modulada
por la seleccin natural para que la especie pueda enfrentarse de un modo ms o
menos ptimo a los compromisos contrapuestos de estabilidad-cambio que le
impone su ambiente (Snchez, 2012).
CLASIFICACIN DE LAS MUTACIONES
Las mutaciones pueden afectar a las clulas somticas (mutaciones somticas) o
a las clulas germinales (mutaciones germinales). En el primer caso, la mutacin
no suele tener repercusiones para el individuo a no ser que tal mutacin provoque
la transformacin de la clula en cancerosa. Si este no es el caso, puede ocurrir
que la clula mutada no sea viable y entonces ser sustituida por otra normal o
bien si es viable, al dividirse por mitosis dar lugar a un clon de clulas mutadas
sin ms complicaciones. Las mutaciones germinales s son trascendentales ya
que son heredables y todas las clulas del nuevo organismo tendrn la misma
informacin que la clula zigoto (Aparicio, 2008).
Las mutaciones pueden producirse de forma espontnea (mutaciones
espontneas o naturales) o pueden ser provocadas por diversos agentes fsicos,
qumicos o biolgicos a los que genricamente se les llama agentes mutgenos o
mutagnicos. En este caso se habla de mutaciones inducidas.
En el ser humano, la tasa de mutacin espontnea es de un gen mutado por cada
100.000 genes lo que resulta por trmino medio un gen mutado por cada gameto
que se forma. Puesto que en la formacin del zigoto intervienen dos gametos,
deducimos que en cada generacin se incorporan dos genes mutados por
individuo y por tanto, millones de genes mutados si se considera la poblacin
mundial. Esto es lo que se denomina carga gentica de efectos negativos. En las
poblaciones de seres vivos "silvestres" las mutaciones que producen efectos
negativos en los individuos, tienden a desparecer con el paso de las generaciones,
pero debido a la proteccin sanitaria y social, en el ser humano la carga gentica
de efectos negativos va aumentando generacin tras generacin.
Las mutaciones pueden producirse a varios niveles:
1.- Mutaciones a nivel molecular, llamadas mutaciones gnicas. Son los cambios
que se producen en la molcula de ADN y por tanto afectan a una o varias bases
nitrogenadas.
2.- Mutaciones a nivel cromosmico, son llamadas mutaciones cromosmicas o
estructurales.- Son aquellas que afectan a la estructura de los cromosomas. Son
observables a microscopio.
3.- Mutaciones a nivel genmico, llamadas mutaciones genmicas, o numricas o
cariotpicas. Son las que afectan a la dotacin cromosmica del individuo, es decir
que aparecen cromosomas de ms o de menos o incluso que aparece un nmero
de series haploides distinto del normal.
Aunque las mutaciones espontneas son muy frecuentes, su manifestacin
externa es mucho menor debido a varias razones:
a) En muchas ocasiones, los mecanismos de reparacin del ADN actan
adecuadamente y eliminan la mutacin.
b) A veces, la alteracin de la secuencia de bases nitrogenadas no afecta a la
secuencia de aa de la protena codificada. Suele ocurrir esto cuando el cambio
afecta a la tercera base de una codon gracias a la propiedad de degeneracin del
cdigo gentico.
c) Muchas veces, queda alterada la secuencia de aa de la protena, pero no afecta
a su funcionalidad porque se trata de aa que no intervienen en la estabilizacin de
la estructura secundaria, terciaria o cuaternaria de la protena ni a ningn aa que
sea imprescindible para que la protena realice su funcin correctamente.
d) Algunas veces se producen mutaciones inversas, que vuelve a un gen mutado
en su forma silvestre anterior a la mutacin.
e) Los genes mutados, en muchas ocasiones, son recesivos frente al gen no
mutado o silvestre. Por ello slo se manifiestan cuando se encuentran en
homocigosis.
f) Las mutaciones slo se manifiestan en las clulas hijas de la que ha padecido la
mutacin. Por ello, si la clula es somtica y no germinal, slo el grupo de clulas
hijas manifestar la mutacin (Snchez, 2012).

Fig. 19. Tabla de mutaciones de acuerdo a determinados criterios.

MUTACIONES GNICAS O PUNTUALES
Una mutacin gnica es aquella que afecta a la composicin qumica de un gen,
es decir que se produce una alteracin en la secuencia de nucletidos del ADN
que constituye ese gen. Las mutaciones gnicas pueden ser de varios tipos:
SUSTITUCIN DE BASES
Se cambia una base por otra en el sistema de replicacin. Las enzimas al copiar
sobre el ADN molde, cometen un error y colocan una base equivocada. Las
mutaciones gnicas por sustitucin de bases suelen clasificarse en dos grupos:
transiciones, cuando se cambia una base prica por otra base prica o una
pirimidnica por otra pirimidnica; y las transversiones en las que se sustituye una
prica por una pirimidnica o viceversa.
Las sustituciones provocan la alteracin de un slo triplete, no suelen ser
perjudiciales a no ser que se forme un codon sin sentido o afecte a un aa del
centro activo de la protena. Ejemplo de sustitucin es la que origina la anemia
falciforme.
ADICIN O INSERCIN DE BASES
Se produce la insercin de un nucletido. Enfermedades debidas a este tipo de
mutaciones son la fenilcetonuria, alcaptonuria, tirosinosis, cretinismo y albinismo,
todas ellas relacionadas con el metabolismo de la tirosina. (Transparencia).
DELECIN PRDIDA DE
Se suprime una base. Las mutaciones de adicin y delecin son ms graves que
las sustituciones porque todos los tripletes de bases estarn cambiados a partir
del punto en el que se ha producido la mutacin y por tanto el mensaje codificado
ser totalmente distinto.
Las mutaciones por prdida o adicin suelen producirse por un emparejamiento
anmalo durante la replicacin entre la hebra molde y la que se est sintetizando.
A este fenmeno se le llama cambio de fase. Se trata de un deslizamiento de la
hebra que se est formando sobre la hebra molde de forma que se originan bucles
al volverse a emparejar. El crecimiento contina y la mutacin se manifiesta en la
siguiente replicacin.
Las secuencias repetidas suelen provocar cambios de fase y con ello adiciones o
deleciones. Estas secuencias repetidas se suelen conocer con el nombre de
"puntos calientes" por ser lugares mucho ms mutables que otros.
TRANSPOSICION O TRANSLOCACION DE BASES
Un segmento del ADN cambia de lugar. Es decir, se rompe un fragmento de
molcula y se une despus, pero en otro lugar. El desplazamiento de secuencias
de la cadena nucleotdica provoca la aparicin de nuevos tripletes lo que
modificar el mensaje gentico.
Fig. 20. Mutacin gnica.
Fig. 21. Mutaciones gnicas por sustitucin: transicin y transversin.

Fig. 22. Consecuencias de una sustitucin.

Fig. 23. Consecuencias de una adicin.
Tabla 1. Tipos de mutaciones gnicas en el ADN y en sus consecuencias en las
protenas (Barrios, 2014).
SISTEMAS DE REPARACIN DE LAS MUTACIONES GNICAS
Las clulas cuentan con diversos mecanismos para reparar las alteraciones
ocasionadas en su ADN por mutacin. Los procesos ms importantes mediante
los cuales se reparan los errores de replicacin son:
a) ADN-polimerasa posee una funcin exonucleasa o correctora de errores que
reduce el nmero de equivocaciones. Consiste en que cada vez que aade un
nuevo nucletido, puede reconocer si el anterior est correctamente puesto o no.
En caso de haber equivocacin, puede retirarlo y poner el correcto.
b) Reparacin con rotura de un fragmento de ADN. Son llevados a cabo por
varias enzimas con funcin endonucleasa pueden ir leyendo sobre el ADN molde y
la cadena recin formada. Pueden detectar errores y en tal caso producen dos
cortes a ambos lados del error. Posteriormente, acta una enzima exonucleasa
que elimina todos los nucletidos del segmento cortado. A continuacin la ADN
polimerasa II sintetiza el segmento correcto y finalmente una ADN ligasa une el
segmento a la hebra de ADN que se ha formado.
c) Enzimas fotorreactivas. Debido a la accin de ciertos agentes mutgenos, por
ejemplo la luz ultravioleta, se forman dmeros de timina, es decir se crean enlaces
entre dos nucletidos de timina consecutivos. Las enzimas fotorreactivas (por
ejemplo la ADN-fotoliasa) se unen al lugar daado en la oscuridad y cuando la
clula recibe la luz y son capaces de romper los enlaces de los dmeros.
 MUTACIONES CROMOSMICAS O ESTRUCTURALES
Son aquellas en las que el cambio del genotipo afecta a algn segmento
cromosmico que incluya ms de un gen. Son por tanto, cambios en la disposicin
de los genes de los cromosomas, a veces con prdida, otras con ganancia y otras
sin variacin en el contenido total de informacin gentica, pero s en el orden de
los loci.
La mayora de estas mutaciones son observables a microscopio gracias a la
tcnica del bandeado. Segn esta tcnica cada cromosoma est formado por una
sucesin de bandas claras y oscuras. Cuando se observa que se ha cambiado o
aadido o falta alguna banda se puede deducir que ha ocurrido una mutacin
cromosmica.
Las mutaciones cormosmicas se originan por la rotura espontnea de los
cromosomas. Este fenmeno a veces se incrementa por las condiciones
ambientales o por agentes mutgenos. Pueden ser de varios tipos:
DELECIONES
Consisten en la prdida de un segmento cromosmico y por tanto la prdida de la
parte de informacin gentica contenida en l. Normalmente si la delecin es
grande se pierden muchos genes y tiene consecuencias patolgicas o incluso
letales para el individuo que la sufre. En la especie humana se conocen varias
deleciones, por ejemplo la enfermedad llamada grito de gato, se debe a una
delecin que afecta al brazo corto del cromosoma 5. Acarrea deficiencia mental y
mltiples malformaciones; se llama as porque los nios que lo padecen tienen un
llanto dbil y quejumbroso que recuerda el maullido de un gato. El cncer de retina
(retinoblastoma) se debe a una delecin del brazo largo del cromosoma 13.
DUPLICACIONES
Consisten en la repeticin de un segmento cromosmico de mayor o menor
extensin. La rplica puede encontrarse en el mismo cromosoma o en otro
distinto. En la especie humana no se conocen mutaciones de este tipo, esto no
quiere decir que no se produzcan sino ms bien que los individuos afectados no
llegan a nacer (abortos espontneos). Desde el punto de vista evolutivo, las
duplicaciones son de extraordinaria importancia porque permiten aumentar la
cantidad de genes y posteriores mutaciones permitiran la aparicin de nuevos
genes y caracteres.
INVERSIONES
Suponen la ruptura del cromosoma por dos puntos y el cambio de sentido del
fragmento dentro del propio cromosoma. No suelen tener repercusiones negativas
ni positivas para el individuo que la sufre puesto que no se pierde informacin
gentica, slo cambia de orden. Pero s puede provocar la aparicin de
mutaciones en los gametos formados por el individuo portador.
TRANSLOCACIONES
Un segmento cromosmico cambia de posicin trasladndose a otro lugar del
mismo cromosoma, a su homlogo o a otro cromosoma cualquiera. Puede
producirse a nivel de un solo cromosoma, es decir, un fragmento de un
cromosoma concreto pasa a ocupar otro lugar, pero dentro del propio cromosoma.
Tambin puede producirse entre dos cromosomas, homlogos o no homlogos, de
manera que un segmento de un cromosoma pasa a situarse en otro diferente.
Este tipo de translocaciones se llaman transposiciones.
Las translocaciones ms frecuentes son las llamadas translocaciones recprocas
en las que se intercambia un fragmento cromosmico entre dos cromosomas
homlogos o no homlogos. Este tipo de mutaciones no afectanal individuo que la
porta, pero puede afectar gravemente a su descendencia.

Fig. 24. Mutaciones cromosmicas.

ORIGEN DE ALGUNAS MUTACIONES CROMOSMICAS ESTRUCTURALES
Todos los cambios estructurales que se producen en los cromosomas pueden
explicarse por la rotura y reunin de sus fragmentos.
Podemos considerar 3 casos posibles, el primero se refiere a un solo cromosoma
y los dos ltimos a parejas de cromosomas.
a) Roturas que afectan a un cromosoma:
1er caso.- Si la rotura se produce dentro de un brazo del cromosoma los
fragmentos pueden reunirse dando lugar a una delecin o a una inversin ms un
fragmento sin centrmero (acntrico) que se pierde.
b) Roturas que afectan a cromosomas distintos:
2do caso.- Si la rotura afecta a dos cromosomas homlogos simultneamente.
Despus de la rotura la reunin de los fragmentos puede producir una duplicacin
ms una delecin.
3er caso.- Afecta a dos cromosomas no homlogos. Despus de la rotura se
produce un intercambio de fragmentos dando lugar a una translocacin entre
cromosomas no homlogos: translocacin recproca.
EFECTO FENOTPICO DE LAS MUTACIONES CROMOSMICAS
ESTRUCTURALES:
Las deleciones y duplicaciones producen un cambio en la cantidad de genes y por
tanto tienen efectos fenotpicos, por lo general deletreos. Sin embargo las
inversiones y translocaciones no suelen tener efecto fenotpico, pues el individuo
tiene los genes correctos, aunque de las translocaciones pueden derivarse
problemas de fertilidad por apareamiento defectuoso de los cromosomas durante
la gametognesis o la aparicin de descendientes con anomalas.

Fig. 25. 1er caso.

Fig. 26. 2 caso.

Fig. 27. 3 caso.

MUTACIONES GENMICAS O NUMRICAS
Son las que provocan alteraciones en el nmero de cromosomas caracterstico de
la especie (cariotipo). Producen siempre alteraciones graves ya que cada
cromosoma es portador de numerosos genes. Las ms tolerables son las que
afectan a cromosomas de pequeo tamao. Pueden ser de dos tipos:
EUPLOIDA
La mutacin afecta al nmero de juegos cromosmicos completos, es decir al
nmero haploide de la especie. De esta manera se produce un aumento o
disminucin del nmero de juegos cromosmicos.
El aumento de juegos cromosmicos se llama poliploida. La mayora de los
organismos son diploides, tienen por tanto dos juegos de cromosomas, pero
tambin hay organismos que tienen 3 juegos completos (triploides) o 4 juegos
(tetraploides), o en general n juegos o poliploides. En los animales hay algunos
insectos que pueden tener individuos triploides o tetraploides, pero donde esto es
ms frecuente es entre los vegetales. Por ejemplo existen helechos que son
poliploides y tienen hasta 250 juegos de cromosomas.
En algunos casos se induce artificialmente la aparicin de individuos poliploides,
por ejemplo el centeno tetraploide presenta una semilla ms grande que el
centeno diploide por lo que comercialmente es ms rentable. Para inducir este tipo
de mutaciones se emplea una sustancia llamada colchicina que impide la
formacin del huso acromtico y as se forman gametos 2n que tras la
fecundacin darn lugar a zigotos 4n.
La disminucin del nmero de juegos cromosmicos se denomina haploida. Son
mutaciones prcticamente inexistentes entre los animales pues la posibilidad de
que un animal haploide llegue adulto es mnima, pero pueden existir animales que
presenten determinados tejidos haploides. En vegetales la haploida es ms
frecuente aunque no tanto como la poliploida.
Es conocido el caso de las abejas y avispas en las que los machos son haploides
pues proceden de vulos sin fecundar.
CLASIFICACIN
Las euploidas se pueden clasificar por el nmero de cromosomas que se tengan
en:
-Monoploida o haploida: Si las clulas presentan un solo juego (n) de
cromosomas.
-Poliploida: Si presentan ms de dos juegos; pudiendo ser: triploides (3n),
tetraploides (4n), etc.
Tambin se pueden clasificar por la procedencia de los cromosomas en:
-Autopoliploida. Si todos los juegos proceden de la misma especie.
-Alopoliploida. Si los juegos proceden de la hibridacin de dos especies.
ORIGEN DE LAS EUPLOIDAS.
Si durante la meiosis se produce en algunas clulas la no disyuncin de todos los
cromosomas homlogos se originarn dos gametos con 2n cromosomas y dos
gametos sin cromosomas (0). La unin de estos gametos entre s o con gametos
n, puede producir zigotos haploides, triploides o tetraploides (n+0, n+2n, 2n+2n).
En las plantas pueden conseguirse tetraploides, experimentalmente, por
tratamientos con colchicina.
EFECTOS FENOTPICOS DE LAS EUPLOIDAS
En general, las anomalas en los euploides son menores que en los aneuploides,
en los que los efectos fenotpicos son mayores al no mantenerse equilibradas las
dosis relativas de genes.

Fig. 28. Autopoliploidas en una especie con 2n = 8 cromosomas

ANEUPLOIDA
Son mutaciones que afectan al nmero de cromosomas de un individuo, pero no a
la serie completa de cromosomas, sino a cromosomas individuales, es decir que
existen cromosomas de ms o de menos. Se conocen como nulisomas si falta la
pareja de cromosomas homlogos, monosomas, con un slo cromosoma,
trisomas con tres cromosomas homlogos, tetrasomas (cuatro cromosomas
homlogos) y polisomas.
En el caso de la especie humana la aneuploida ms conocida es la trisoma del
cromosoma 21 que produce el Sndrome de Down. Tambin se conoce, aunque es
muy rara, la monosoma del cromosoma 23. Se denomina Sndrome de Turner y
los individuos afectados presentan un nico cromosoma X. (mujeres X0, con
retraso en el crecimiento, infantilismo sexual y esterilidad). El Sndrome Klinefelter
o trisoma del 23 XXX) Son hombres con genitales pequeos. Ausencia de
espermatognesis y retraso mental.
No se conocen casos en la especie humana de tetrasomas, pero se ha
comprobado que muchos de los abortos espontneos de 1 o 2 meses se deben
precisamente a la presencia de este tipo de mutacin.
CAUSAS
Las causas de las mutaciones genmicas pueden ser varias:
Fusin cntrica: consiste en la unin de dos cromosomas no homlogos
con prdida del centrmero de uno de ellos. Algunos autores suponen que
un proceso importante en la evolucin humana fue la fusin de dos
cromosomas de un primate antecesor, originndose as el par nmero de
de su cariotipo. La especie humana tiene 23 pares de cromosomas,
mientras que los primates ms prximos en la evolucin (chimpancs)
tienen 24 pares de cromosomas.
Fisin cntrica: Se trata de la escisin de un cromosoma en dos.
No disyuncin de los cromosomas en la meiosis. Durante la primera divisin
meitica deben separarse los cromosomas homlogos y durante la
segunda se separan cromtidas. Un defecto en la separacin de
cromosomas o de cromtidas puede dar lugar a gametos con tres
cromosomas de un tipo a otros con ningn cromosoma.
DENOMINACIN
Estas alteraciones se denominan:
Monosomas: si falta uno de los cromosomas de la pareja de
homlogos.
Trisomas: si se tienen tres cromosomas en lugar de los dos normales.
Tetrasomas: si se tienen 4. Etc.
EJEMPLO DE TRISOMA: EL SNDROME DE DOWN O TRISOMA 21.
Existe un tipo de trisoma particularmente corriente en la especie humana, es la
llamada trisoma 21 o sndrome de Down (tambin conocida como mongolismo).
Las personas que presentan este sndrome se caracterizan por tener retraso
mental, cuerpo corto, dedos cortos y gruesos, lengua hinchada yun pliegue en el
prpado parecido al de las razas monglicas. Est demostrada la relacin entre el
sndrome de Down y una avanzada edad en la madre. En ciertos casos de
mongolismo el individuo presenta una placa metafsica normal con 46
cromosomas, pero uno de los cromosomas del grupo 13-15 es mayor, por lo que
se cree que lo que ha sucedido es una translocacin de uno de los cromosomas
21 en exceso a uno de los cromosomas del grupo 13-15.
Fig. 29. Ideograma del cariotipo de una clula de una persona con trisoma 21.
Fig. 30. Las aneuploidas y sus consecuencias en la meiosis.
MUTACIONES ESPONTNEAS
Las principales causas de las mutaciones que se producen de forma natural o
normal en las poblaciones son tres:
Errores durante la replicacin.
Lesiones o daos fortuitos en el ADN.
Los elementos genticos transponibles.
ERRORES EN LA REPLICACIN
Se consideran tres tipos de errores durante la replicacin del ADN:
1. La tautomera: las bases nitorgenadas se encuentran habitualmente en su
forma cetnica y con menos frecuencia aparecen en su forma tautomrica
enlica o imino. Las formas tautomricas o enlicas de las bases
nitrogenadas (A*, T*, G* y C*) muestran relaciones de apareamiento
distintas: A*-C, T*-G, G*-T y C*-A. El cambio de la forma normal cetnica a
la forma enlica produce transiciones. Los errores en el apareamiento
 incorrecto de las bases nitrogenadas pueden ser detectados por la funcin
correctora de pruebas de la ADN polimerasa III.
2. Las mutaciones de cambio de fase o pauta de lectura: se trata de
inserciones o deleciones de uno o muy pocos nucletidos. Segn un
modelo propuesto por Streisinger, estas mutaciones se producen con
frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En las regiones con
secuencias repetidas, por ejemplo, AAAAAAAAAAA..., o por ejemplo,
ATATATATATATATAT..., durante la replicacin se puede producir el
deslizamiento de una de las dos hlices (la hlice molde o la de nueva
sntesis) dando lugar a lo que se llama el "apareamiento errneo deslizado".
El deslizamiento de la hlice de nueva sntesis da lugar a una adicin,
mientras que el deslizamiento de la hlice molde origina una delecin. En el
gen lac I (gen estructural de la protena represora) de E. coli se han
encontrado puntos calientes (regiones en las que la mutacin es muy
frecuente) que coinciden con secuencias repetidas: un ejemplo es el punto
caliente CTGG CTGG CTGG.
3. Deleciones y duplicaciones grandes: las deleciones y duplicaciones de
regiones relativamente grandes tambin se han detectado con bastante
frecuencia en regiones con secuencias repetidas. En el gen lac I de E. coli
se han detectado deleciones grandes que tienen lugar entre secuencias
repetidas. Se cree que estas mutaciones podran producirse por un sistema
semejante al propuesto por Streisinger ("Apareamiento errneo deslizado")
o bien por sobrecruzamiento desigual.

MUTACIN INDUCIDA
Existen diferentes agentes fsicos y qumicos que producen mutaciones en el ADN.
Durante los primeros tiempos de la Gentica (1900 a 1930) los investigadores
trataron de producir artificialmente mutaciones sin conseguirlo, hasta que Muller
en 1927 y Stadler en 1928 demostraron los efectos mutagnicos de los rayos X en
Drosophila, maz y cedbada. H. J. Muller recibi el Premio Nobel en 1946 por su
descubrimiento de la induccin de mutaciones mediante radiacin con rayos X.
Entre los agentes fsicos que producen mutaciones, estn las radiaciones
ionizantes (por ejemplo los Rayos X) y las radiaciones no ionizantes (la luz
ultravioleta).
EFECTOS
Las radiaciones ionizantes producen los siguientes efectos a nivel celular:
Efectos genticos: alteraciones en los genes.
Efectos citogenticos: alteraciones en los cromosomas: roturas cromosmicas y
translocaciones.
Efectos fisiolgicos: alteraciones en las enzimas y hormonas.
Posteriormente, se demostr que otros agentes fsicos y qumicos producan
mutaciones.
ESPECIFICIDAD MUTACIONAL
La especificidad mutacional significa que muchos agentes mutgenos tienden a
producir un determinado tipo de mutacin, por ejemplo:
Etilmetanosulfonato (EMS): produce fundamentalmente transiciones
GCAT.
Nitrosoguanidina (NG): produce esencialmente transversiones GCTA.
Luz ultravioleta (UV): produce transiciones y transversiones.

MUTACIN DE LA LNEA GERMINAL

Si la mutacin se produce en una de las clulas sexuales inevitablemente pasar
a la descendencia (en tanto sta participe de la fecundacin). Un fenotipo
completamente normal puede tener clulas mutantes en su lnea germinal y solo
se detectar en su descendencia.
Casos especiales: recuerde que algunas mutaciones pueden afectar al
cromosoma X y este se encuentra inactivado al azar en las hembras de
mamferos, por lo que pueden no expresar el fenotipo. Ej: hemofilia ligada al
cromosoma X (Snchez, 2012).

2.6. BASES MOLECULARES DE LA MUTAGNESIS. TIPOS DE

MUTAGNESIS. AGENTES MUTAGNICOS. MUTAGNESIS
DIRIGIDA. UTILIZACIN DE LA MUTAGNESIS CON FINES
BIOTECNOLGICOS Y DE DIAGNSTICO

BASES MOLECULARES DE LA MUTAGNESIS

BASE MOLECULAR DE LAS MUTACIONES PUNTUALES
Base molecular de las transiciones
Se deben, en esencia, a la ocurrencia espontnea, durante la replicacin, de
formas raras tautomricas de las bases nitrogenadas. Los desplazamientos
tautomricos del protn cambian las propiedades de formacin de puentes de H,
de tal modo que:
 forma tautomrica Se comporta como

A* (imino) G

G* (enol) A

C* (imino) T

T* (enol) C

Por lo tanto, los emparejamientos propiciados por las formas tautomricas seran:
A* : C
C* : A
T* : G
G* : T

Base molecular de las transversiones

(Modelo de Topal & Fresco:observen en el grfico los emparejamientos de las
formas sin y anti)
El modelo predice que la frecuencia de mutaciones puntuales en un par de bases
depender de: constante de equilibrio (k) de tautomerizacin del par de bases
(unos 10-4 - 10-5); frecuencia de dNTPs en forma sin. (G sin aparece con frec. de 10 -
1
, A, con 510-2).
De este modo, tericamente deberan darse las siguientes frecuencias de
mutaciones puntuales:
frec. prevista de transiciones: 10-4 - 10-5
frec. prevista de transversiones: 10-5 - 10-6 (para la G) y 510-6 - 510-7 (para la A)
Sin embargo, en la realidad, las frecuencias observadas son mucho ms
bajas (del orden de 10-10). Esto implica que debe de existir un sistema que corrija
los emparejamientos errneos: como ya sabemos, las ADN polimerasas poseen
una capacidad correctora de pruebas ("editing"): cada paso de elongacin es
seguido inmediatamente por una comprobacin del emparejamiento. Si este
emparejamiento es errneo, la polimerasa usa su actividad exonucleasa
3' 5' para elimininar la base mal emparejada, y a continuacin vuelve a
polimerizar en el mismo lugar (por su actividad polimerasa 5' 3').
Ejemplo: Durante la replicacin puede ocurrir que la citosina pase a su forma
imino, que se empareja con la adenina:
C Cimino : A (la A es incorporada por la ADN polimerasa)
Ahora la Cimino vuelve rpidamente a su forma normal, con lo que queda
C : A (este emparejamiento anmalo es detectado por la polimerasa)
La actividad exonucleasa 3' 5' elimina la A recin incorporada
Vuelve a intervenir la actividad polimerasa 5' 3', que incorpora G
El resultado final es el emparejamiento correcto C G
De esta forma, la tasa real de transiciones a partir de una C es aproximadamente
equivalente al cuadrado de la correspondiente cte. (k) de tautomerizacin.
Parece ser que en la naturaleza existe una seleccin natural que propicia
una frecuencia baja, pero no nula, de errores durante la replicacin. El significado
biolgico es que de esta forma se combina una alta tasa de fidelidad en la
replicacin, pero con suficiente flexibilidad (oportunidad de errores) como para
generar innovaciones sobre las que pueda actuar la presin selectiva, lo cual
permite evolucin.
Puntos calientes de mutacin ("hot-spots"): son puntos o zonas dentro del
genomio donde se concentran mutaciones con una frecuencia mayor que la
esperada si se distribuyeran al azar.
Explicacin: algunas bases, dentro de un determinado contexto de secuencia, son
modificadas qumicamente por accin de alguna enzima (normalmente una
metilasa), y ello provoca una mayor susceptibilidad a la aparicin de mutaciones
puntuales:
La citosina (C), dentro del contexto de secuencia siguiente:
CCAGG
GGTCC
Es metilada por una metilasa especfica (que reconoce precisamente a esas dos
citosinas dentro de esa secuencia), para dar 5-metilcitosina. La 5-metil citosina
experimenta espontneamente una desaminacin oxidativa, que la convierte en
timina, de manera que se produce finalmente una transicin:
C:G 5-metil-C:G T:G (emparejamiento anmalo) T:A
Base molecular de las mutaciones de desplazamiento de la fase (del marco o
pauta) de lectura ["frameshifts"]
Suelen ocurrir en zonas del ADN con secuencias repetitivas. En este tipo de
secuencias, durante la replicacin o la recombinacin, se pueden producir malos
alineamientos por desplazamiento de una o varias copias de la secuencia
repetitiva.

Ejemplo:

GTCCGTCCGTCCGTCC

C AG G C AG G C AG G C AC C

Se produce un cambio total en el sentido del mensaje gentico, a partir del sitio de
la mutacin se sintetiza una protena inactiva, a menudo truncada (debido a que al
cambiar la pauta de lectura, pueden aparecer tripletas sin sentido).
Si la prdida es de 3 nucletidos (o mltiplo de 3), y la pequea deleccin no
afecta a una zona importante de la protena, se puede producir un producto que
an tenga actividad biolgica.

Base molecular de mutaciones de grandes deleciones (borraduras)

Formacin de grandes bucles intracatenarios, con posterior escisin de dichos

bucles. Normalmente en los extremos del material que se va a delecionar existen
secuencias de ADN que son repeticiones directas una de otra, lo que facilita algn
fenmeno de recombinacin que lleva a la eliminacin del material (bucle)
intercalado entre esas secuencias.

Consecuencias: Mutacin irreversible e inactivadora total de uno o varios genes.

TIPOS DE MUTAGNESIS
La mutgenesis se puede dividir en dos tipos principalmente, al azar o dirigida.
Mutagnesis aleatoria: son mutaciones puntuales introducidas en posiciones
aleatorias en un gen de inters, tpicamente a travs de PCR utilizando una
polimerasa de ADN propensa a errores con agentes mutagnicos.
Mutagnesis dirigida: mtodo de eleccin para la alteracin de un gen o secuencia
de vectores en un lugar determinado, las mutaciones puntuales, inserciones o
deleciones se introducen con la incorporacin primers que contienen la
modificacin deseada con una ADN polimerada en una reaccin de amplificacin.
AGENTES MUTGENICOS
Un agente mutgeno es todo factor capaz de aumentar la frecuencia de mutacin
natural.
Existen diversos factores, tanto fsicos como qumicos, capaces de actuar como
agentes mutgenos. En realidad, actuarn como agentes mutgenos todos
aquellos agentes capaces de alterar el material gentico y en particular, aquellos
que alteren la secuencia del ADN. Los principales agentes mutgenos son:
AGENTES MUTAGNICOS FSICOS
Radiaciones ionizantes. Son radiaciones que tienen longitud de onda muy
corta y son por tanto muy energticas. Estas radiaciones son rayos X, rayos
ganma y la emisin de partculas alfa y beta que se producen en las
explosiones nucleares. Las radiaciones provocan la prdida de electrones
en algunos tomos del ADN que quedan en forma de iones muy reactivos.
Pueden provocar la rotura de los cromosomas favoreciendo la aparicin de
mutaciones cromosmicas y tambin producir modificaciones en las bases que
conlleva a la formacin de mutaciones puntuales.
Radiaciones no ionizantes. Son, fundamentalmente, las radiaciones
ultravioleta. No provocan ionizacin, pero los electrones pasan a niveles
orbitales superiores lo que provoca la aparicin de mutaciones puntuales.

Radiacin UV: es el mutgeno fsico ms empleado en el laboratorio para

obtener mutaciones en las bacterias. Como ya estudiamos en su momento,
su efecto principal es originar dmeros de pirimidina intracatenarios (con
creacin de una anillo ciclobutano entre dos Py consecutivas). Las
proporciones de lesiones son las siguientes:
50% T-T
40% T-C
10% C-C
Las mutaciones aparecen principalmente como consecuencia del mecanismo
posreplicativo de reparacin propenso a error (o sea, el sistema SOS). Con menor
frecuencia la luz UV ocasiona hidratacin de la C, lo que da origen a transiciones.
- Las radiaciones electromagnticas como los rayos X y los rayos gamma.
- Las radiaciones corpusculares como los rayos , los rayos y los flujos de
protones, neutrones que generan los reactores nucleares u otras fuentes de
radiactividad natural o artificial.
-Ciertos factores fsicos como los ultrasonidos, los choques trmicos, la
centrifugacin, etc.
AGENTES MUTAGNICOS QUMICOS
Numerosas sustancias tienen accin mutgena: la mayora de las drogas como el
LSD, la cafena, la nicotina, el opio, la morfina, quinina y muchos edulcorantes.
Segn el tipo de sustancia que sea, pueden provocar distintos efectos:
Modificaciones de las bases nitrogenadas por ejemplo, el cido nitroso provoca
la desaminacin de las bases y el gas mostaza aade grupos metilo o etilo en las
bases. Todo ello provoca produce mutaciones puntuales.
Sustituciones de bases. Algunas sustancias se parecen a las bases y provocan
un emparejamiento errneo durante la replicacin al cambiar una base por otra.
(Por ejemplo el 5-bromouracilo puede incorporarse en vez de timina y la 2
aminopurina puede sustituir a la adenina).
Intercalacin de molculas. Ciertas molculas se intercalan en la cadena
polinucleotdica del ADN y provocan mutaciones por insercin o delecin. Son por
ejemplo la acridina y la proflavina que son dos colorantes. Otra sustancia, el
benzopireno, que se encuentra en el humo del tabaco y en los alquitranes,
provoca mutaciones al intercalarse entre las dos cadenas del ADN.
Se pueden agrupar en varias categoras:
Anlogos de bases, que se incorporan durante la replicacin del ADN.
Agentes hidroxilantes o desaminantes de las bases nitrogenadas.
Agentes alquilantes.
Agentes intercalantes, que se introducen en la doble hlice del ADN, entre
pares de bases consecutivas.
Bloqueadores del emparejamiento de las bases.
ANLOGOS DE BASES
Son sustancias con una estructura en anillo similar a las bases naturales de los
cidos nucleicos, pero con propiedades qumicas diferentes. Como ejemplos
tenemos:
5-bromouracilo (5-BrU)
2-aminopurina (2AP).
Estas molculas entran a las clulas y son convertidas a los correspondientes
"dNTP", de modo que su estructura les permite ser incorporados durante la
replicacin del ADN.
1) El 5-BrU es anlogo de la T. Propicia transiciones T: A G:C debido a que
experimenta frecuentes cambios tautomricos desde su forma ceto a su forma
enol:
BUceto:A BUenol:G
Si partimos de una pareja A=T y en la 1 ronda de replicacin la ADN-polimerasa
introducen un BUceto frente a la adenina, los acontecimientos hasta llegar a la
mutacin se pueden resumir as:
A:T (la primera replicacin incorpora BU) A:BUceto (tautomerizacin y 2
replicacin) G:BUenol (3 replicacin) G:C
2) La 2-AP es un anlogo de la A. Provoca transiciones A:T C:G debido a sus
frecuentes tautomerizaciones (APamino APimino). Veamos el proceso:
A:T (primera replicacin) APamino:T (tautemerizacin y 2
replicacin) APimino:C (3 replicacin) G:C
AGENTES DESAMINANTES O HIDROXILANTES
Alteran las Pu o las Py, de modo que: causan errores en el emparejamiento, o bien
labilizan las bases, de modo que stas espontneamente se modifican
qumicamente con gran frecuencia.
1) cido nitroso: provoca una desaminacin oxidativa de A y C, lo que origina
transiciones sobre C a dU, que se empareja con la A. sobre A (6-
aminopurina) hipoxantina (HX) (6-oxopurina), que en su forma ceto se empareja
con la citosina:
A:T HXceto:C a G:C
El nitroso tambin desamina oxidativamente a la G, pero en este caso no hay
mutacin:
G a xantina, que al igual que la G, se empareja con la C.
2) Hidroxilamina (NH2OH): acta especficamente sobre la citosina, aadindole
un hidroxilo a su grupo -NH2:
AGENTES ALQUILANTES
Introducen radicales alqulicos en una cadena (los alquilantes monofuncionales) o
en las dos cadenas (los bifuncionales) del ADN, produciendo efectos letales y
mutagnicos.
Los efectos mutagnicos dependen sobre todo de la reaccin con el O6 de la G.
Algunos agentes alquilantes empleados en laboratorio:
Gas mostaza: mostazas nitrogenadas y sulfuradas, como por ejemplo:
Cl-CH2-CH2-S-CH2-CH2-Cl : di-(2-cloroetil)-sulfuro.
etil-etano-sulfonato (EES): CH3-CH2-SO2-O-CH2-CH3
etil-metano-sulfonato (EMS): CH3-SO2-O-CH2-CH3
nitrosoguanidina (NTG), que es la N-metil, N'-nitro, N-nitrosoguanidina:
Todos estos agentes, excepto la NTG, actan tanto in vivo como in vitro. La NTG
slo acta in vivo, ya que su efecto lo ejerce sobre la horquilla de replicacin del
ADN. La NTG es uno de los mutgenos ms potentes que se conocen, pero es un
agente "sucio", en el sentido de que genera varias mutaciones en la misma clula.
Induce reparacin SOS propensa a error, dando origen a transiciones,
transversiones y desfases del marco original de lectura.
Como hemos dicho, estos agentes originan un dao premutagnico principal
consistente en alquilacin del O6 de la G. Ello provoca una gran distorsin en la
doble hlice, que posteriormente se plasma en transiciones del tipo G:C A:T.
Sin embargo, muchas bacterias poseen un sistema especfico para reparar las
lesiones de la O6-alquil-guanina, que funciona de la siguiente manera:
La bacteria posee una O6-alquil-glucosilasa, que rompe el enlace N-glucosdico
entre la O6-alquil-guanina y la desoxirribosa. Esto provoca la creacin de un sitio
apurnico (sitio AP).
El sitio AP es reconocido por una endonucleasa correctora (apurinasa), que rompe
el enlace fosfodister del lado 5' del sitio apurnico.
Se produce una reparacin por escisin-resntesis de un pequeo n1 de
nucletidos, pero si el dao es muy grande se produce una situacin SOS que
tiende a ser reparada por el sistema propenso a error ya estudiado, lo que provoca
introduccin de errores, que conducen a transiciones y transversiones.
SUSTANCIAS INTERCALANTES
Se introducen entre los pares de bases del ADN, dando origen a prdida o
ganancia de nucletidos (o sea, generan mutaciones de cambio de la pauta de
lectura del mensaje gentico).
Estas sustancias son molculas planares con 3 o 4 anillos conjugados, que
presentan un cierto parecido con los pares de bases del ADN, pero no se pueden
incorporar covalentemente al esqueleto de ste, sino que se intercalan entre dos
pares de bases consecutivas, con lo que provocan distorsiones de la doble hlice.
Algunos ejemplos:
derivados de la acridina, como el naranja de acridina
bromuro de etidio
derivados de la flavina (como la proflavina).
Estabilizan emparejamientos errneos durante la replicacin y la recombinacin
del ADN, dando origen a desplazamientos de la pauta de lectura.
Aplicaciones: Algunos se estn ensayando en cuanto a su capacidad de inhibir
tumores cancergenos, o como antivirsicos, o contra el protozoo causante de la
malaria.
AGENTES QUE BLOQUEAN TOTALMENTE EL EMPAREJAMIENTO DE BASES
Este grupo incluye potentes carcingenos como:
benzo-a-pireno
aflatoxina-B1.
Modifican purinas, provocando grandes lesiones en el ADN, que inducen el
sistema SOS de reparacin, lo que finalmente implica reparacin propensa a error.
AGENTES MUTAGNICOS BIOLGICOS
Transposones: son segmentos mviles de ADN que pueden cambiar de
posicin, trasladndose a otro lugar dentro del mismo u otro cromosoma.
Pueden originar mutaciones cuando causan una activacin o inactivacin gnica
no deseada al insertarse en los genes estructurales o en los reguladores.
Virus. Pueden producir cambios en la expresin de algunos genes. Se cree
que los virus mutagnicos podran realizar su accin al llevar en su genoma
fragmentos de ADN tomados de una clula previamente infectada que
incorporaran a la nueva clula parasitada (Iez, 2014).
MUTAGNESIS DIRIGIDA
Mutaciones inducidas, son las provocadas por un agente exgeno (fsicos,
qumicos y biolgicos). La mutagnesis inducida se utiliza desde mediados del
siglo XX, como sustancias qumicas o radiaciones; cambios al azar, diversas
mejoras en un aproximado de 3088 nuevas variedades vegetales, es decir, un
70% rea de cultivo. Bsicamente son cambios semejantes a los que ocurren
naturalmente de manera espontnea.
La mutagnesis de sitio dirigido (mutagnesis inducida) es una tcnica de biologa
molecular utilizada para crear mutaciones puntuales en una cadena de ADN. Cabe
mencionar que los productos de esta tcnica son considerados Organismos
Genticamente Modificados (OGMs).
La tcnica fue desarrollada por primera vez en 1978 por el cientfico Michael
Smith, al cual le concedieron el Premio Nobel de Qumica en octubre
de 1993 junto a Kary B. Mullis, el creador de la reaccin en cadena de la
polimerasa (PCR, acrnimo del ingls polimerase chain reaction). Un requisito
indispensable para el uso de esta tcnica es que se debe conocer la secuencia de
ADN que se quiere mutar.
El proceso, en primer lugar, requiere sintetizar un fragmento corto de ADN,
el cebador, que contenga la mutacin. El cebador debe hibridar con la molcula
simple (unicatenaria) de ADN que contiene el gen de inters. Utilizando una ADN
polimerasa, se elonga la cadena (el fragmento unicatenario ms el cebador)
incorporando la mutacin al ADN y formando una molcula de ADN completa
bicatenaria. Dicha doble cadena de ADN puede ser introducida en
una clula hospedadora y clonada. Tras esto, se escogen los mutantes.
Esta tcnica no solo hace posible crear mutaciones puntuales en una molcula de
ADN, sino que tambin se pueden producir deleciones e inserciones. Se consigue
controlar el tipo de mutacin que se pretende realizar en el ADN modificando el
cebador. Para las deleciones se utilizan cebadores que contengan la delecin pero
que tengan la capacidad de hibridacin en la cadena de ADN en el sitio correcto;
por el contrario, para una insercin el cebador deber llevar el fragmento extra de
ADN adems de hibridar correctamente con la cadena molde.
La primera vez que se introdujeron cambios predefinidos en una secuencia
conocida del ADN, se utilizaron bacterifagos X174 am3. Se utilizaron dos tipos
de oligodesoxirribonucletidos[1] complementarios con el ADN vrico desde las
posiciones 582 hasta la 593: Uno de ellos era perfectamente complementario con
la hebra de ADN del bacterifago silvestre y la otra posea una mutacin puntual
(una A por una G en la posicin 587). Tras la hibridacin de las cadenas y la
elongacin con la ADN polimerasa, se transformaron las bacterias y se vieron los
resultados, con un 15% de xito.
Mtodos de la mutagnesis dirigida
Mutagnesis dirigida por PCR
Para realizar mutagnesis de sitio dirigido, tambin se puede utilizar
la PCR obteniendo el mismo resultado. Generalmente, se suelen utilizar 4
cebadores: dos de ellos presentan la mutacin; y los otros dos nicamente se
utilizan para amplificar la cadena. Puesto que con la PCR obtendremos una
amplificacin exponencial, el fragmento mutado se amplificar de tal manera que
superar mayoritariamente al nmero de cadenas silvestres sin la mutacin. Tras
la PCR, podemos despreciar el nmero de cadenas de ADN silvestre en
comparacin con las que han sido mutadas.
Mutagnesis dirigida por PCR inversa en un plsmido
La PCR inversa utiliza cebadores orientados al revs (el forward hacia la izquierda
y el reverse hacia la derecha, saliendo del mismo punto para que amplifiquen el
plasmido entero) para amplificar el plsmido con un insercin, delecin o
sustitucin. El tipo de mutacin depende en el diseo de los cebadores. En el caso
de insercin los cebadores estn ubicados a ambos lados del sitio de mutacin y
uno de los cebadores contiene el pedazo de secuencia para insertar. Se realiza
sustituciones por el uso de un cebador con la sustitucin en el medio. Los
cebadores para los delaciones estn ubicados en ambos lados del sitio de
delecin en tal manera que tal regin no est incluido en el amplicn.
Los cebadores vienen fosforilado en los extremos 5para facilitar la ligacin del
amplicn.
UTILIZACIN DE LA MUTAGNESIS CON FINES BIOTECNOLGICOS Y DE
DIAGNSTICO
UTILIZACIN DE LA MUTAGNESIS CON FINES BIOTECNOLGICOS
Nuevas Tcnicas de Mejoramiento Gentico
Mutagnesis de Nucleasas Sitio Dirigidas (SDN)
Mutagnesis Dirigida por Oligonucletidos (ODM)
Ambas mutagnesis producen alteraciones en la secuencia de nucletidos de un
gen, estas alteraciones pueden ser por:
Prdidas
Inserciones
Sustituciones
Mutagnesis Dirigida por Oligonucletidos (ODM)
Principio
En una protena, pequeos cambios especficos en la secuencia de aminocidos
dentro de un sitio crtico son, en muchos casos, responsables de las diferencias en
el desempeo de la protena y del fenotipo del organismo.

Fig. 31. cambio especfico en la secuencia de aminocidos

Definicin
Es la introduccin a la clula de oligonucletidos homlogos a un ADN blanco y
que inducen, en nucletidos sitio-especficos, sustituciones, inserciones o
deleciones a travs de los Mecanismos de Reparacin.
Usos
Es una tcnica empleada para corregir o introducir cambios especficos en sitios
definidos del genoma.
Cambios
Inhibir la expresin de genes no deseados.
Aumentar la expresin de genes benficos.
Producir cambios en las protenas para hacerlas ms eficientes y efectivas.

APLICACIONES DE LA MUTAGNESIS DIRIGIDA EN EL DIAGNSTICO

La mutagnesis dirigida es una potente tcnica con la que se puede realizar
diagnsticos claros y seguros de una manera muy econmica. Con esta tcnica,
es posible detectar mutaciones especficas o repeticiones de nucletidos.
Generalmente, el diagnstico de algunas enfermedades poco frecuentes, como las
del MERRF y la fibrosis qustica, se lleva a cabo en los laboratorios mediante el
uso de esta tcnica.
La manera de detectar dichas enfermedades es simple. Normalmente el objetivo
de mutar el ADN en un solo nucletido se debe a que es necesario dicho cambio
para que una enzima de restriccin pueda actuar en ese punto. De tal manera, en
el caso de padecer una enfermedad gentica caracteriza por la ganancia o prdida
de material gentico (en baja proporcin, unas cuantas pares de bases, no
cromosomas completos), se podr detectar dicha enfermedad. El mtodo consiste
en realizar una PCR mutagnica y amplificar as el ADN, seguidamente se
aadira la enzima de restriccin que cortar dichos segmentos amplificados y
mediante una electroforesis podremos observar si este fragmento gentico que
debera tener una longitud concreta, la tiene o no. De no ser as nos encontramos
ante una variacin de material gentico y por tanto ante una posible enfermedad.
Por ejemplo, en la fibrosis qustica, que en su forma ms comn, se manifiesta
como una mutacin en la posicin 508 del gen CFTR ubicado en el cromosoma
7q31.2, se aprovecha dicha mutacin para diferenciar el gen mutado del que no lo
est. La estrategia consiste en utilizar un cebador 5' con un cambio puntual en una
base que linda con la mutacin en el aminocido 508. Este cambio introduce un
sitio para la enzima Mbol (5' GATC 3') en el alelo sano, que no estara presente en
el alelo con la delecin por no completarse la secuencia de corte. Para el extremo
3' se utiliza un cebador que permita abarcar en el producto de amplificacin un
sitio de corte constitutivo para que sirva como control interno de la actividad de la
enzima de restriccin.
En concreto, en el caso del diagnstico de la fibrosis qustica por este mtodo, se
muta un aminocido y a su vez se aprovecha En su forma ms comn, una
mutacin de un aminocido (falta una fenilalanina en la posicin 508) (Montiel,
2011).
INVESTIGACIN EN EQUIPO
2.1. 3 REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS
 INSTITUTO TECNOLGICO DE CD. ALTAMIRANO

ASIGNATURA: GENTICA MOLECULAR

UNIDAD 2: REPLICACIN, MUTACIN Y REPARACIN DEL

MATERIAL GENTICO EN VIRUS, PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

INVESTIGACIN: REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIONTES

CATEDRTICO: M.C FRANCISCO JAVIER PUCHE ACOSTA

PRESENTA:
YATZIRIT ARELLANO ALBARRAN
YOCELI CRISOL GARCA BANDERAS
EMMANUEL ALEJANDRO GUTIERREZ RENTERIA
BRENDA ISABEL MIRANDA DAZ

LIC. BIOLOGA

GRUPO: 4A 3

CD. ALTAMIRANO, GRO. FEBRERO 2017

INTRODUCCION
Diversas investigaciones han demostrado que el ADN eucaritico se replica de
manera parecida al de las bacterias. En ambos sistemas, el ADN de doble cadena
se desenrolla en los orgenes de replicacin, se forman horquillas de replicacin y
la sntesis bidireccional de ADN genera cadenas adelantadas y retrasadas a partir
de ADN molde, bajo la direccin de ADN polimerasa. Las polimerasas eucariticas
tienen los mismos requisitos funcionales para sintetizar ADN que las bacterias:
cuatro desoxirribonucleotidos trifosfato, un molde y un cebador sin embargo,
debido a que las clulas eucariticas contienen mucho ms ADN en cada clula, a
que su cromosoma es linear en vez de circular y a que este ADN esta
acomplejado con protenas, los eucariotas se enfrentan con muchos problemas
con los que las bacterias no se encuentran. Por eso el proceso de sntesis de ADN
en eucariotas es mucho ms complejo y ms difcil de estudiar en eucariotas. No
obstante, actualmente se conoce mucho sobre este proceso (Klug et al., 2006).

REPLICACIN DE ADN EN EUCARIOTAS

Las helicasas son enzimas que rompen los puentes de hidrgeno que mantienen
unidas en la doble hlice a las dos cadenas de ADN. El ADN desenrollado es
estabilizado por la protena SSB que se une a la cadena sencilla e impide la
regeneracin dela doble hlice. La accin de las helicasas durante la replicacin
genera retorcimientos del ADN que deben ser eliminados para que contine la
replicacin los superenrollamiento son generados y eliminados por enzimas
denominadas topoisomerasas, una de las cuales es llamada girasa de ADN.
POL y son las principales formas dela enzima implicadas en la iniciacin y la
elongacin durante la sintesisde ADN nuclear, por lo que nos centraremos en
estas dos. Dos de las cuatro subunidades de la enzima polimerasa participan en
la sntesis de los cebadores de ARN durante la iniciacin de la sntesis de las
cadenas adelantada y retrasada. Tras la adicin de unos 10 ribonucleotidos, otra
subunidad alargada el primer de ARN aadiendo de 20 a 30
desoxirribonucleotidos complementarios. Se dice que la polimerasa posee una
baja progresividad, un trmino que refleja la longitud del trecho de ADN que esta
enzima sintetiza antes de separarse del molde. Cuando el cebador est en su
sitio, se produce un suceso llamado cambio de polimerasa, porque Pol se separa
del molde siendo reemplazada por Pol . Esta forma de la enzima posee una alta
progresividad, y elonga las cadenas adelantada y retrasada. Tambin posee
actividad exonucleasa 3- 5, lo que le proporciona el potencial para la correccin
de pruebas. Pol , la tercera forma imprescindible, poseen las mismas
caractersticas generales que Pol , pero se piensa que funciona bajo condiciones
celulares diferentes, o que est restringida a la sntesis de cadena retrasada.
El proceso descrito sirve para la sntesis de cadena adelantada y para la
retrasada. En ambas cadenas los cebadores de ARN deben ser reemplazados por
ADN. En la cadena retrasada deben unirse los fragmentos de Okazaki, que en
eucariotas son unas veces ms pequeas que en eucariotas.
Para satisfacer el mayor nmero de replicones, las clulas eucariotas contienen
mucho ms molculas de polimerasa que las bacterias.
Como se ha dicho, la presencia de un nmero mayor de replicones ms pequeos
en los eucariotas en comparacin con las bacterias compensa la menor velocidad
de sntesis de ADN en los primeros.
La exonucleasa MFl elimina los cebadores de ARN de los fragmentos de Okazaki.
La enzima ligasa ADNi se requiere de manera especfica para sellarlas hendiduras
entre los fragmentos de Okazaki concluidos (Griffiths, et al. 2008).

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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edicin. Ed. MvGRAW-HILL/ INTERAMERICANA.
Klug W., Cummings M. y Spencer C. (2006). Conceptos de Gentica. 8a edicin.
Ed. PEARSON EDUCACI.

EXPOSICIN EN EQUIPO
2.1. 3 REPLICACIN DEL ADN EN EUCARIOTAS

MAPA MENTAL
2.1. 2 REPLICACIN DEL ADN EN PROCARIOTAS
 CONCLUSIN
El material gentico engloba el dogma central de la vida, es decir que todos los
seres considerados como vivos deben de poseer material gentico tanta es la
importancia del mismo que tambin se le puede encontrar en organismos
actualmente considerados como no vivos (virus). De hecho las diversas formas de
vida que han existido, existen y existirn mantienen una estrecha relacin con el
material gentico, cabe mencionar que esta relacin se vincula con la diversidad
de genomas presentes en la vida.
El ADN sufre uno de los procesos ms interesantes de la naturaleza gentica, la
replicacin, aunque es un proceso muy estudiado hasta el da de hoy se
desconocen muchos de los factores que intervienen en ella, sobretodo no se sabe
mucho a cerca de las funciones de algunas enzimas. Este proceso aparentemente
sencillo, resulta ser un proceso complejo donde interviene una gran cantidad de
enzimas, protenas as como energa. A grandes rasgos se puede decir que la
replicacin consta de tres fases, que son la iniciacin, la elongacin y
terminacin. Para las cuales entran en funcionamiento enzimas y protenas
especficas, y algunas que otras que participan en todo el proceso.
Todos los organismos por ms pequeos que estos sean o por lo contrario, muy
grandes, mantienen ADN (material gentico) el cual constantemente sufre algunas
modificaciones (mutaciones). Estos cambios pueden ser causados por factores
muy diversos que pueden ser agentes biolgicos como bacterias o virus; agentes
fsicos con los cuales estamos en contacto muy a menudo como es la radiacin
UV; o sustancias con las cuales interactuamos directa o indirectamente, tales
como algunos pesticidas, estas sustancias son consideradas como agentes
mutagnicos qumicos.
Por desgracia el tema de las mutaciones ha tenido un enfoque desventajoso,
resaltando principalmente las enfermedades que pueden derivar de estas
anomalas en material gentico. Muchas de las anomalas se presentan durante la
replicacin del ADN (en el caso de los seres vivos) y algunas otras son
provocadas por el ambiente. Las mutaciones pueden afectar a los seres vivos de
manera favorable o desfavorable, ya que un cambio puede representar el triunfo
de una especie si las condiciones ambientales les favorecen.
Actualmente estos cambios son utilizados como un nuevo mtodo de
mejoramiento tanto en plantas como animales, resaltando las caractersticas que
los hacen ms apetitosos, vistosos y/o nutritivos para los consumidores, ya que
este mtodo tiene gran auge en la industria (biotecnologa industrial).
A veces ser diferente hace la diferencia
 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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