vvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvvUNIVERSIDAD NACIONAL DEL

ALTIPLANO
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

Dx Parasitolgico y Tcas Coproparasitologicas

Docente

Uriel Santiago Marca Choque

Los parasitismos patentes se detectan mediante el diagnstico

parasitolgico, en tanto que para los no patentes se recurre
frecuentemente a la inmunologa en la bsqueda de la respuesta
celular o humoral especfica.

Algunos factores importantes que deben ser tenidos en cuenta en

el diagnstico del parasitismo y en la interpretacin de resultados
son:

La edad del hospedador .

La exposicin previa a las parasitosis (inmunidad).

El perodo del ao.

El estado fisiolgico (parto, servicio, etc.).

La localizacin geogrfica.

El uso previo de antihelmnticos

El historial de parasitosis clnicas.

DIAGNSTICO DE ENDOPARSITOS

Recuento de huevos (h.p.g.) en heces.

Cultivo y recuperacin de larvas infectivas (L3) de nematodos

gastrointestinales.

Identificacin de larvas infectivas (L3) de nematodos

gastrointestinales.

Recuperacin de larvas de nematodo de pulmn desde las heces

(Mtodo de Baermann)

Determinacin de la infectividad de las praderas.

Recuento e identificacin de parsitos adultos en aparato digestivo.

Recuperacin de formas inmaduras del cuajo e intestino delgado

Recuento de parsitos pulmonares.

Tcnica de sedimentacin para el diagnstico coprolgico de

Fasciola heptica.

Diagnstico de Resistencia a los antihelmnticos.

DIAGNSTICO DE ECTOPARSITOS

Identificacin de caros de la sarna

Identificacin de piojos

Otras observaciones

Mtodos directos

Son los que permiten visualizar directamente parsitos u hongos en

un material patolgico, o aislarlos del mismo. Los parsitos y
hongos pueden ser vistos estudiando el material en fresco o
mediante coloraciones u otros artificios. Los materiales pueden ser
tratados previamente, para concentrar y/o mejorar la visualizacin
de parsitos.

FROTIS DIRECTO EN HECES

MATERIAL Y EQUIPO:

Solucin saturada de NaCl

Lugol

Portaobjetos

Cubreobjetos

Aplicadores de madera

Microscopio ptico

Heces

MTODO:

Depositar una gota de solucin salina fisiolgica en un cubreobjetos y en el

otro extremo una gota de lugol.

Con la ayuda de un aplicador de madera se toma una muestra de

aproximadamente 1 a 4 mg de heces, se mezcla con la solucin salina y se
repite la misma accin con el lugol.

Observar al microscopio a 10x y 40x.

TCNICA DE FLOTACIN PARA LA DETERMINACIN DE PARASITOSIS

MATERIALY EQUIPO:

Vasos

Cucharas

Coladeras

Tubos de ensayo

Cubreobjetos

Portaobjetos

Aplicador de madera

Solucin saturada de sal (S.S.NaCl)

Solucin saturada de azcar

Asa de micromel

Agua

Microscopio ptico

Centrifuga

Lugol

Heces

PROCEDIMIENTO:

Depositar una muestra de 3 a 4 gramos de heces a un vaso de

plstico y homogenizar.

Administrar agua al vaso y con la ayuda de una cuchara de aluminio

o plstico disolver la muestra.

Depositar el contenido a otro vaso a travs de una coladera.

Depositar la muestra en un tubo de ensayo, y enrasar con otro tubo

para centrifugar

Centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos, colocando frente a

frente los tubos aforados.

Decantar los tubos y volver a aforar con solucin saturada de Na

Cl.
Volver a centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos.

Con la ayuda de un asa obtener unas gotas del sobrenadante,

colocarlas sobre un portaobjetos y cubrir con el cubreobjetos.

Observar al microscopio con el objetivo 10x y 40x.

Con el apoyo de imgenes de huevecillos, realizar la identificacin

de los parsitos que pudieran estar presentes en las muestras

TCNICA DE SEDIMENTACIN PARA LA DETERMINACIN DE

PARASITOSIS

MATERIAL Y EQUIPO:

Agua tibia, 37 C

Lugol o azul de metileno

Cuchara

Vaso

Vidrio de reloj o caja Petri cuadriculada

Coladera

Heces

Tamices de diferentes calibres

Microscopio estereoscpico

Microscopio compuesto

MTODO:

Depositar una muestra de 3 a 4 gramos de heces en un vaso y

homogenizar.

Agregar agua tibia, con la ayuda de una cuchara de aluminio o

plstico disolver la muestra homogenizndola.

Depositar el contenido a otro vaso a travs de la coladera de malla

fina.

Dejar reposar la muestra hasta que exista una clara separacin

entre la parte lquida y el sedimento (5 minutos aproximadamente).

Verter el lquido sobrenadante, dejando el sedimento solamente.

Volver a repetir esta accin hasta que la solucin o muestra se

encuentre lo ms posible libre de partculas que obstaculicen su
observacin.
Decantar el lquido sobrenadante y el sedimento, depositarlo en
una caja Petri vidrio de reloj, agregar dos a tres gotas de lugol
para hacer resaltar los huevos, y observar en el microscopio
estereoscpico o en el compuesto con el objetivo seco dbil (10x)

Registrar los resultados.

TCNICA DE COPROCULTIVO

MATERIAL Y EQUIPO:

Caja Petri

Agua tibia

Aserrn estril y limpio

Pipeta Pasteur

Cuchara de aluminio

Aparato Baermann

Microscopio compuesto (ptico)

Microscopio estereoscpico

Pinza Mhr

Vidrio de reloj

MTODO:

En una caja Petri depositar 5 gramos de materia fecal positiva a

nematodos gastrointestinales.

Agregar una cucharada de aserrn estril, adicionar unas gotas de

agua y mezclar con la ayuda de una cuchara, agregar pequeas
cantidades de agua, hasta que el contenido de la caja se observe
con suficiente humedad.

Etiquetar la caja Petri con los siguientes datos: (nombre del animal,
fecha de entrada y fecha de salida del coprocultivo).

Meter a la estufa de cultivo a una temperatura de 27C durante 10

o 12 das o el tiempo suficiente para que se desarrollen a L. Se
deber checar diario la humedad presente y remover la muestra
para favorecer una adecuada oxigenacin del cultivo.

Transcurrido los 10 a 12 das sacar el cultivo y todo su contenido y

colocarlo en el aparato de Baermann, en el que se deja reposar
durante ocho horas.
Transcurrido el tiempo se retira la pinza Mhr y se obtiene la
muestra (lquido) depositndola en un vidrio de reloj y se observa
con el microscopio estereoscpico para identificar las L.

La identificacin de las larvas es de acuerdo a sus caractersticas

morfolgicas; siguiendo el proceso realizado para la tcnica de
Baermann

TCNICA DE MIGRACIN LARVARIA (BAERMANN)

MATERIAL Y EQUIPO:

Agua tibia

Lugol

Heces

Gasas

Manguera de hule ltex

Coladera de plstico

Embudo de plstico

Cuchara de aluminio

Pipeta Pasteur

Pinzas Mhr

Portaobjetos y cubreobjetos

Soporte Universal

Microscopio compuesto (ptico)

Microscopio estereoscpico

Vidrio de reloj

MTODO:

Estructurar el aparato Baermann, que consiste en un soporte

universal, un aro metlico, un embudo, una manguera de hule
ltex, una coladera y una pinza Mhr.

Envolver de 3 a 5 gramos de heces con una gasa y colocarla sobre

la coladera.

Agregar agua tibia (25C), por las paredes del embudo hasta que
cubra la mitad de la muestra, dejar reposar de 8 a 12 horas.
Obtener en un vidrio de reloj o caja Petri, de 0.5 a 1 mL del
contenido, aflojando la pinza Mhr y observar en el microscopio
estereoscpico.

Extraer con la pipeta Pasteur las larvas y depositarlas en un

portaobjetos, agregar una gota de lugol para su fijacin y colocar
un cubre objetos.

Observar en el microscopio compuesto con el objetivo (10x y 40x).

La identificacin se realiza de acuerdo a las caractersticas
morfolgicas.

TCNICA DE MC MASTER.

MATERIAL Y EQUIPO:

Solucin saturada de glucosa

Gotero

Gasas

Heces

Microscopio ptico

Equipo de Mc Master (tubo, tapa, cmara, gotero, portaobjeto y

cubreobjetos).

PROCEDIMIENTO:

En un tubo Mc Master depositar solucin saturada glucosada hasta

la primera lnea.

Depositar una muestra de heces hasta la segunda lnea del tubo.

Depositar solucin saturada hasta la tercera lnea del tubo, cerrar y

agitar hasta lograr un homogenizado completo.

Introducir una gasa para que cumpla la funcin de filtro o colador.

Con la ayuda de un gotero obtener el lquido que se encuentra

dentro de la gasa y depositarlo en la cmara Mc Master cuidando
que no se formen burbujas

Colocar la cmara de Mc Master en el microscopio compuesto y

enfocar las cuadriculas con el objetivo seco dbil (10x).

Para realizar la lectura e interpretacin, enfocar el ngulo superior

derecho del cuadro e ir subiendo y bajando entre cada carril hasta
completar el recorrido en las seis divisiones de la primera cmara,
registrar el nmero de ooquistes, quistes de protozoarios y
huevecillos de helmintos encontrados, realizar el mismo
procedimiento con la siguiente cmara y al terminar el conteo
sumar el total de ooquistes, quiste y huevecillos encontrados en
ambas cmaras, multiplicar por 100 y dividir entre dos; el resultado
ser el nmero de quistes, ooquistes o huevecillos por gramo de
heces de la materia fecal.

Interpretar los resultados.

RESULTADOS OBTENIDOS EN LAS DIFERENTES TCNICAS

COPROPARASITOLOGICAS

MTODOS INDIRECTOS

Este mtodo implica la deteccin indirecta del parasito, ya sea por

la respuesta humoral que desencadena el paciente o por la captura
de los antgenos que el parasito libera. Debido a que el diagnostico
de varias parsitos incluso las intestinales pueden resultar
desalentador mediante pruebas habituales en heces fecales, se
recomienda realizar pruebas indirectas especialmente para
aquellos parsitos cuya identificacin es difcil, para aquellos que
pueden tener ubicacin tisular ya sea en la pared intestinal o en
otros sitios de difcil acceso incluso en biopsias.

Utilizados tanto en la fase aguda como en la fase crnica, pero por

tratarse de ensayos que pretenden encontrar parsitos, su
sensibilidad en la fase crnica no es muy alta.

Inoculacin en animales sensibles

Xenodiagnstico

Hemocultivos:

La mayora de las pruebas serolgicas estn basadas en la

deteccin de la respuesta especifica de anticuerpos ante la
presencia del parasito.

Estas incluyen aglutinacin clsica, fijacin de complemento,

mtodos de fijacin en gel, inmunofluorescencia, Western blot.

ELISA (coproantgenos)

Se utilizan para E. Histolytica, Tripanosoma cruzi, Plasmodium sp,

etc.

DIAGNSTICO MEDIANTE
DETECCIN DE ANTICUERPOS
ESPECFICOS

FUENTE DE ANTGENOS

Antgenos nativos.- Obtenidos directamente de los parsitos.

 Extractos complejos

Protenas ms o menos purificadas

Antgenos recombinantes.- Obtenidos clonando genes de los

parsitos.

Pptidos sintticos.- Una vez obtenida la secuencia proteica,

sntesis de fracciones que hipotticamente conforman eptopos.

MTODOS MOLECULARES

El diagnostico de las enfermedades parasitarias ha logrado un

avance significativo gracias a la aplicacin de mtodos de
diagnostico molecular basados en la hibridacin del acido nucleico.
Son utilizadas por laboratorios de referencia para los parsitos de
inters prioritario, centrndose en el anlisis de dos tipos de
molculas:

Protenas y cidos nucleicos (ADN y ARNm)

Entre ellas esta PCR, Southern blot

MUCHAS GRACIAS