541

IV

EXTRACCIN DE QUINONAS

Los productos elaborados por los animales y los vegetales son com-
plejos naturales y, para la extraccin de sus componentes, deben
ser secados y disgregados antes de ser sometidos a procesos de
extraccin general no selectivos.

Las quinonas se pueden extraer empleando solventes orgnicos

voltiles, con soluciones alcalinas diluidas, con agua sola o por des-
tilacin en corriente de vapor de agua. El extracto obtenido conten-
dr los compuestos que sean solubles en el solvente empleado.

4.01 EXTRACCIN CON SOLVENTES

Las benzoquinonas y naftoquinonas no hidroxiladas se extraen por

medio de solventes orgnicos voltiles como el ter de petrleo y el
benceno. El extracto crudo obtenido es concentrado y el residuo
crudo goma cruda puede ser sometido a procedimientos de se-
paracin de sus componentes, por cristalizacin fraccionada en
solventes, por cromatografa en columna o capa, gruesa; o me-
diante un tratamiento qumico selectivo en condiciones especiales.

Debe tenerse presente cuando el compuesto quinnico tiene gru-

pos aldehido CHO, cetnico >C=O, o hidroximetilen CH2OH en
orto al grupo OH fenlico, y se emplea metanol o acetona como
solventes, estos grupos durante la extraccin pueden reaccionar y
dar acetales, cetales o dimetilcetales.

CHO + 2 CH3OH CH(O CH3 )2

>C=O + 2 CH3OH >C(OCH3 )2
 641

La eleccin del solvente ms apropiado para un proceso de extrac-

cin, depende de la naturaleza y composicin de la muestrapro-
blema.
Las benzoquinonas y naftoquinonas tambin pueden ser separadas
por destilacin en corriente de vapor de agua.
Las ortoquinonas y antraquinonas no son voltiles en corriente de
vapor de agua.

4.02 EXTRACCIN CON SOLUCIONES ALCALINAS

Las soluciones alcalinas diluidas, son solventes qumicamente ac-

tivos que se utilizan generalmente para la extraccin de quinonas
de naturaleza cida.
La fuerza cida de las quinonas hidroxiladas depende de, la posi-
cin y el nmero de los grupos OH fenlicos; y en algunos casos
del grupo carboxilo COOH.

Las quinonas ahidroxiladas son cidos dbiles, solubles en las

soluciones al 5% de hidrxido de sodio, e insolubles en las solucio-
nes al 5% de bicarbonato de sodio y de carbonato de sodio.
El comportamiento de la solubilidad de las quinonas en las solucio-
nes alcalinas diluidas permite obtener una informacin de tipo cua-
litativo importante.

Si las quinonas ahidroxiladas son tratadas con bases fuertes como

el hidrxido de sodio, se oxidan y degradan en presencia de aire.
Las quinonas bhidroxiladas son cidos ms fuertes que las
quinonas ahidroxiladas. Son solubles en las soluciones acuosas
de bicarbonato de sodio y de carbonato de sodio.

La extraccin de antronas y antranoles, con bicarbonato de sodio

se realiza en atmsfera inerte para evitar su oxidacin y transfor-
macin en antraquinonas, diantronas o poliantronas.
741

4.03 CROMATOGRAFA EN COLUMNA

La cromatografa en columna es una tcnica de separacin basa-

da en el establecimiento de un equilibrio, por adsorcin entre un
slido como fase estacionaria y un lquido, como fase mvil.
La columna cromatogrfica que contiene el adsorbente puede ser
de vidrio o de niln.
La columna de niln permite dividir los cromatogramas por corte en
tantas fracciones como bandas coloreadas o fluorescentes sean
observadas bajo luz ultravioleta. Cada fraccin es separada y so-
metida a una extraccin con metanol para recuperar el compuesto
extrado.
El xito para la separacin cromatogrfica de los componentes de
una mezcla, depender del solvente o del sistema de solventes
mezclados en la proporcin correcta, del empaquetado de la co-
lumna, del adsorbente, de la altura y dimetro de la columna; las
columnas muy cortas no dan una buena resolucin. Para la colum-
na la relacin de dimetroaltura que recomendamos, es de 0.64:10.

Cromatografa en columna
 841

4.03.1 ADSORBENTES

Los adsorbentes ms empleados son: gel de slice, cido silcico

malla 100, xido de aluminio (alumina), xido de magnesio calcina-
do, carbonato de magnesioHiflo Supercel, poliamidas simples y
acetiladas, policaprolactama, celulosa en polvo, resinas
cambiadoras de iones, geles de sephadex, etc.
La cantidad de adsorbente a emplearse es de veinte partes de
adsorbente por una parte de goma cruda a ser cromatografiada.

La preparacin de la columna cromatogrfica se inicia introducien-

do en la parte inferior un tapn de lana de vidrio, el cual se cubre
con una capa de arena blanca y a continuacin se aade el solven-
te hasta la mitad de la columna.

En un erlenmeyer que contenga el solvente inicial, se dispersa el

adsorbente, lo cual se vierte en la columna poco a poco, regulando
la llave de salida para que el volumen de solvente que sale sea
proporcional al que entra con el adsorbente. Se deja en reposo y se
aade arena blanca para formar una capa.

La goma cruda se disuelve en la menor cantidad de un solvente

voltil, luego se agrega cido silcico malla 100 hasta formar una
pasta fluida, la que se deja secar al aire. Esta mezcla se coloca en
la cabeza de la columna y se inicia la elusin.

4.03.2 SOLVENTES

La eleccin de los solventes para la cromatografa es un factor im-

portante. Empleando mezcla de solventes con polaridad diferente
se puede obtener una buena resolucin para la separacin de los
componentes de la mezcla.

A continuacin se da una relacin de solventes ordenados en pola-

ridad creciente:

ter de petrleo, hexanobenceno, tetracloruro de carbono, cloro-

formo, ter etlico, acetato de etilo, acetona, isopropanol, metanol
agua piridina cidos orgnicos cidos y lcalis inorgnicos.
Sistemas de solventes que pueden emplearse:
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A) Benceno, bencenocloroformo 1:1, cloroformo, cloroformometanol

99:1, cloroformometanol 97:3, metanol.
B) Benceno, bencenoacetato de etilo 19:1, bencenoacetato de etilo
18:2, metanol.
C) Benceno, bencenoacetato de etilo 95:5, acetato de etilo, metanol.
D) Benceno, bencenoacetato de etilo 95:5, acetato de etilocido
actico 99:1.

4.03.3 ELUSIN

La elusin se inicia con un solvente de baja polaridad, como el

benceno. Si el benceno no separa bien la mancha, se ensaya una
mezcla de solventes que contenga uno que desplace bien la man-
cha y otro que no la mueva.
Cada fraccin recolectada es destilada a presin reducida. Del re-
siduo se toma una parte alicuota para determinar su comportamiento
cromatogrfico en capa delgada analtica y evaluar el desarrollo de
la elusin. Si la fraccin contiene una mezcla, debe ser recromato-
grafiada. Si slo presenta una mancha, la solucin se destila a
presin reducida y el residuo se recristaliza en metanol y registra
sus espectros.

Ejemplo:
Extracto crudo seco goma cruda 100 g
Adsorbente: cido silcico malla 100 2000 g
Sistema de solventes A

Solventes Fraccin de 2 lt c/u

Benceno 1 a 25
Bencenocloroformo 1:1 26 a 50
Cloroformo 51 a 75
Cloroformometanol 99:1 76 a 100
Cloroformometanol 97:3 101 a 102
Metanol 103

4.04 CROMATOGRAFA EN CAPA GRUESA PREPARATIVA

La cromatografa en capa gruesa se emplea para separaciones

ms rpidas de 0,5 g o menos de muestra.
Se utilizan placas de vidrio de 20 x 20, 20 x 40, o de 20 x 50 cm de
 051

lado.
Para cubrir dos placas de 20 x 20 cm se requiere de 20 g de gel de
slice Merck PF 254 + 366 y 75 mL de agua que se mezclan en un
matraz durante cuarenta segundos.
La dispersin se vierte en forma uniforme sobre las placas. Se deja
secar a la temperatura del ambiente y despus a 110C. Enfriar.

Aplicacin de la muestra:

La muestra es solubilizada en un solvente voltil, a continuacin

con una pipeta preparativa o un capilar la solucin se aplica con
cuidado a 15 mm del extremo del borde inferior de la placa y de
un extremo a otro como raya. Se deja evaporar el solvente en co-
rriente de aire.

La placa se coloca en la cmara cromatogrfica cuyas paredes

deben estar cubiertas con papel de filtro empapado con el solvente
que contiene la cmara. La superficie del solvente no debe tocar la
lnea de la placa que contiene el problema. Se tapa la cmara y deja
para su desarrollo. Terminada la elusin, se saca la placa de la
cmara y se deja secar. La placa se examina con una lmpara de
luz ultravioleta corta de 254 nm o larga de 366 nm, para ver si
contiene compuestos detectables bajo luz UV.

Las manchas visualizadas se sealan con una esptula, raspan,

recogen y se extraen con un solvente voltil. Se evapora el solven-
te, recristaliza si es necesario; toma su punto de fusin, y se regis-
tran sus espectros UV, IR, RMN y EM.

4.04.1 CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA ANALTICA

La cromatografa en capa delgada analtica se emplea para fines

analticos cualitativos. Se utilizan lminas de vidrio portaobjetos
de 75 x 25 mm o placas cuadradas de 20 x 20 cm.

Para cubrir 120 lminas de vidrio de 75 x 25 mm se requiere de 50

g de gel de slice Merck HF254 y 150 mL de agua los cuales se
mezclan en un matraz durante cuarenta segundos. La dispersion
se vierte en forma uniforme sobre las lminas que estn acondicio-
nadas en una plantilla de plstico. Se deja secar a temperatura
151

ambiente y despus a 110C durante sesenta minutos. Dejar en-

friar.

Aplicacin de la muestra:

La muestra se solubiliza en un solvente voltil y con un capilar la

solucin se aplica a 15 mm del extremo del borde inferior de la
lmina. Se deja evaporar el solvente en corriente de aire. A conti-
nuacin la lmina se coloca en la cmara que contiene el solvente.
Concluda la elusin se saca la lmina de la cmara y se deja se-
car.

Para localizar las manchas se emplea luz ultravioleta. Las man-

chas tambin pueden ser localizadas por carbonizacin por rocia-
do de cido sulfrico concentrado y calor. Las sustancias separa-
das se hacen visibles como manchas negras.

4.05 TCNICAS DE EXTRACCIN, AISLAMIENTO Y

PURIFICACIN

Los compuestos producidos por los seres vivos se encuentran for-

mando parte de un complejo natural organizado que contiene una
variedad de productos entre ellos los pigmentos quinnicos, con
estructuras y propiedades diversas.

Para la obtencin de las benzoquinonas, naftoquinonas y antra-

quinonas, se requiere que la muestra materia de estudio sea so-
metida a un proceso de tcnicas de extraccin, aislamiento y puri-
ficacin, para concluir con su caracterizacin.

4.05.1 BENZOQUINONAS

Las benzoquinonas se extraen con hexano en caliente o por medio

de una destilacin en corriente de vapor de agua.

Si la quinona tiene grupos OH fenlicos libres, se puede emplear

solventes orgnicos prticos voltiles, o realizar una percolacin
con una solucin al 5% de carbonato de sodio; y precipitar la quinona,
por acidulacin.
 251

Procedimiento:

De 4 a 5 kg de muestra seca y triturada se somete a extraccin con

hexano en un soxhlet hasta su agotamiento. El extracto hexnico
se destila a presin reducida en un evaporador de tipo rotatorio; y el
concentrado se deja en refrigeracin durante 48 horas. Si hay for-
macin de un precipitado cristalino, ste es separado y recristalizado
en acetato de etilohexano. Se toma su punto de fusin y registra
sus espectros UV, IR, RMN y EM.

El concentrado se vuelve a dejar en el fro, y si no hay formacin de

cristales, se lleva a seco. El residuo se solubiliza con cloroformo,
luego se mezcla con gel de slice desactivado o con cido silcico
malla 100 y se deja secar. La mezcla seca se coloca en la cabeza
de una columna cromatogrfica preparada con 1000 gr. de gel de
slice en benceno. Se eluye con el sistema de solventes (A).

4.05.2 NAFTOQUINONAS

Las naftoquinonas que no tengan un alto grado de hidroxilacin,

son extradas con benceno en caliente.

Procedimiento-1:

2 kg de la raz seca y triturada de una especie del gnero Plumbago,

se extrae con benceno en un soxhlet hasta su agotamiento. El ex-
tracto bencnico se somete a destilacin a presin reducida; y el
concentrado se deja en refrigeracin. Si hay formacin de un preci-
pitado cristalino, ste es separado y recristalizado en alcohol. Se
toma el punto de fusin de los cristales y registra sus espectros
UV, IR, RMN y EM.

El concentrado se lleva a seco y se cromatografa en una columna

preparada con gel de slice. Para la elusin se puede emplear el
sistema de solventes (A) o (C).

Procedimiento-2:

Dos kg de pas y caparazones de erizos de mar son tratados con

una solucin acuosa 5N de cido clorhdrico durante 24 horas; a
continuacin se filtra y la solucin cida se extrae con ter etlico.
351

Se separa el extracto etreo al cual se aade una solucin de bicar-

bonato de sodio en cantidad suficiente; se mezcla bien y se deja en
reposo. Se toma la fase acuosa, acidula con cido clorhdrico y
luego se sacude con ter etlico en atmsfera de nitrgeno. Se
separa la fase etrea que es desecada con sulfato de sodio anhidro.
El extracto etreo seco se pasa por una columna empacada con
gel de slice, para la separacin de los pigmentos naftoquinnicos
(1).

4.05.3 ANTRAQUINONAS

Para la extraccin de las antraquinonas se emplea metanol o

acetona caliente. Si las antraquinonas estn al estado de glicsidos,
la extraccin se realiza, en caliente, con agua o con soluciones
alcalinas.

Procedimiento -1:

La muestra seca y triturada se extrae con metanol en un soxhlet

hasta agotamiento. El extracto metanlico se somete a destilacin
a presin reducida; y el concentrado se deja en refrigeracin duran-
te 48 horas. Si hay formacin de cristales, stos son separados y
recristalizados en metanol. El residuo que no forma materia crista-
lizada se trata varias veces con agua y la fase insoluble es separa-
da y sometida a extraccin en un soxhlet primero con ter y luego
con metanol.

Al extracto etreo se aade una solucin 2N de carbonato de sodio,

se sacude y deja en reposo. Se toma la fase acuosa y acidula con
una solucin 2N de cido clorhdrico. El precipitado es separado,
lavado y secado; es la fraccin soluble en carbnato de sodio.

La fase etrea se trata con una solucin 2N de hidrxido de sodio,

en atmsfera de nitrgeno y deja en reposo. Se toma la fase acuo-
sa y acidula con una solucin 2N de cido clorhdrico. El precipita-
do es separado, lavado y secado; es la fraccin soluble en hidrxi-
do de sodio.

La fase etrea que contiene la fraccin insoluble en alcal, se seca

con sulfato de sodio, deja en reposo, filtra y se evapora el solvente;
es la fraccin insoluble en lcali.
 451

La fraccin soluble en carbnato de sodio se pasa por una colum-

na empacada con gel de slice, luego se eluye con bencenoacetato
de etilo 95:5.

La fraccin soluble en hidrxido de sodio es cromatografiada so-

bre gel de slice y se eluye con benceno.

La fraccin insoluble en lcali se cromatografa por una columna

empacada con gel de slice, eluyndose en forma sucesiva con
ter de petrleo, ter de petrleobenceno, benceno y benceno
acetato de etilo.

Procedimiento-2:

La muestra seca y triturada se extrae con etanol en un soxhlet has-

ta su agotamiento. El extracto etanlico se destila a presin reduci-
da.
Al residuo se aade acetato de etilo y se mezcla con gel de slice en
suficiente cantidad, a continuacin se deja secar. El producto seco
se percola en forma sucesiva con ter de petrleo, benceno y clo-
roformo, dando tres extractos.

Con los extractos se realiza una evaluacin cromatogrfica en capa

delgada cualitativa para determinar si contienen productos de inte-
rs.

Los extractos obtenidos con ter de petrleo y benceno son croma-

tografados en una columna empacada con gel de slice y se eluyen
con los sistemas de solventes (B) y (D) respectivamente.

Al extracto clorofrmico se aade una solucin 2N de carbonato de

sodio, se sacude y deja en reposo. Se toma la fase acuosa y acidula
con cido clorhdrico; y el precipitado que se forma es separado y
recristalizado en acetato de etilo. Se toma su punto de fusin y se
registra sus espectros UV, IR, RMN y EM.

Procedimiento-3:

300 gr. de talos secos y triturados del liquen Teloschistes flavicans

(Sw) Norm se extraen con acetona(2) en un soxhlet hasta su ago-
tamiento. Si el extracto acetnico al enfriar forma un precipitado
cristalizado, ste es separado y recristalizado en acetato de etilo
551

metanol y acetonametanol. Los cristales son sometidos a un en-

sayo de comportamiento cromatogrfico en capa fina, se toma su
punto de fusin y registra sus espectros UV, IR, RMN y EM.

El concentrado del cual fueron separados los cristales se lleva a

seco y luego se pasa por una columna empacada con gel de slice
y se eluye en forma sucesiva con los solventes: benceno, benceno
acetona 9:1, bencenoacetona 1:1 y acetona acidulada con cido
actico.

Procedimiento- 4:

100 gr. del insecto Dactylopius coccus Costa cochinilla seco y

triturado es sometido a ebullicin con 1000 mL de agua destilada
durante 15 minutos(3). Se deja en reposo, decanta el lquido y filtra.
Al extracto se aade una solucin de acetato de plomo, deja en
reposo y decanta el lquido. El remanente se filtra y lava.

El complejo obtenido se deja expuesto al ambiente hasta que se

cubra de una pelusa blanquecina.
El complejo se trata con una solucin de metanolcido sulfrico y
se deja en reposo 48 horas. Se filtra y la solucin metanlica se
concentra a un volumen aproximado de 100 mL.
El concentrado se deja en un ambiente seco hasta la formacin de
cristales de color rojo brillante de cido carmnico.

4.06 EXTRACTORES

Para la extraccin de slidos se dispone a nivel de laboratorio de

aparatos simples para la extraccin continua, que utilizan una mni-
ma cantidad de solvente con el mximo de rendimiento en la ex-
traccin y la recuperacin del solvente.
El extractor clsico de este tipo es el aparato de Soxhlet que consta
de tres partes: el matraz, la cmara de extraccin y el refrigerante
de reflujo.
La cmara de extraccin en su parte inferior tiene un tubo estrecho
doblado en U que funciona como sifn. En la cmara de extraccin
se introduce la sustanciaproblema, dentro de un cartucho de pa-
pel de filtro o en una bolsita de tela tupida.
El solvente se aade a la cmara de extraccin en cantidad sufi-
ciente para que funcione el sifn, y cuando el lquido ha terminado
 651

de trasegar, se aade ms solvente hasta cubrir las 2/3 partes de la

cmara de extraccin. Se pasa agua por el refrigerante y se empie-
za a calentar el matraz hasta que la extraccin est agotada, es
decir, que el lquido pase incoloro por el tubosifn.
751

Extractor de Soxhlet

Extractor de Soxhlet
A) Extractor mediano de vidrio
B) Micro extractor
C) Extractor mediano de acero inoxidable

Extractores
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Extractor tipo Soxhlet

8. Vidriosobservacin 1. Evaporador
9. Entrada de solvente 2. Cmara de calefaccin
10. Condensador de tubos 3. Nivel
11. Entradaagua de enfriamiento 4. Llave de purgaextracto
11a. Salidaagua de enfriamiento 4a. Llavesolvente recuperado
12. Enfriadorsolvente recuperado 5. Cmara de extraccin
13. Salida de gases 6. Cestos
14. Soportes. 7. Sifn

Destilador para extraccin

en corriente de vapor

Evaporador rotatorio

Decantadores y filtracin al vaco

Desecadores
951

REFERENCIAS

1. FARINA, F. y HEILMLICH, W. 1969: Anal de Qumica (julio

agosto), 713-715.
2. GIBAJA OVIEDO, S., y MONTES, R. 1979: Bol. Soc. Quim. Per.
Vol. XLV, Jun. N 2, 102-106
3. GIBAJA OVIEDO, S., y TERRY, D. 1984: Bol. Soc. Quim. Per. Vol.
1, Mar. N.1,83-87.