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Dpartement de Biochimie
MEMOIRE
Option
Microbiologie de lenvironnement
Par
DIRECTEUR DE MEMOIRE :
Devant le Jury:
Promotion 2004
Sommaire
Page
Introduction 1
Partie Bibliographique
Partie exprimentale
I- Matriel et mthodes
I-1- Mthodologie...57
I-1-1- Description de la station de traitement..60
I-1-2-Echantillons et frquence dchantillonnage..60
I-1-3- Choix des paramtres60
I-2- la recherche des organohalogns totaux.60
I-3- le dosage du CHCl3 et CHBr3..60
I-4- Dtermination de lactivit mutagne..61
I-4-1- Test dAmes..61
I-4-1-1- Matriel biologique...61
I-4-1-2- Confirmation des gnotypes.63
I-4-1-3- Test de mutagense...64
I-4-2- Le SOS chromotest..65
Sommaire
L eau est llment naturel qui fait lobjet dune surveillance attentive travers le monde. Son importance
pour la prservation de la sant publique dtermine de vastes programmes de surveillance tant lchelle
nationale quau plan international. Les objectifs de la surveillance de la qualit de leau destine la
consommation sont nombreux et varient en fonction des moyens et des possibilits techniques [1].
La dsinfection est depuis longtemps un objectif incontournable du traitement de leau potable.
Traditionnellement on croyait que le chlore tait un outil essentiel pour atteindre cet objectif [2]. Dans le
traitement de leau, la raction du chlore sur la matire organique conduit la formation de composs
organohalogns (les TOX). Ces produits sont indsirables cause de leur potentiel cancrigne. La prsence
de ces composs dpend certes des quantits de chlore ajoutes mais aussi de la matire organique et des
prcurseurs de TOX prsents dans leau qui sont soit dorigine naturelle (acide humique) ou artificielle (rsidus
de pesticides, phnols) [3, 4].
Lcotoxicologie sest surtout dveloppe depuis la deuxime guerre mondiale, paralllement lcologie,
entranant une prise de conscience des effets daccumulation des substances toxiques et de leur cheminement
dans la chane alimentaire. La grande question laquelle lcotoxicologie doit globalement rpondre est celle
des valeurs acceptables des facteurs potentiellement toxiques dans lenvironnement il en rsulte un ventail de
mthodes dapprciation des risques [5].
Dans la prsente tude la gnotoxicit des eaux potables de la wilaya dAnnaba obtenus diffrents points de
distribution et partir de la station de traitement grce la collaboration du laboratoire central de LEPE
Annaba, a t tudi par deux tests de dtermination de risque de gnotoxicit qui sont : le test dAmes, SOS
chromotest. Les bactries utilises dans ces tests ont t gracieusement envoyes par monsieur Philippe
Quillardet de linstitut Pasteur de Paris.
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Traitements des eaux destines la consommation
L es procds de traitement utiliser dans un cas particulier doivent tenir compte de la qualit et de la nature
I-1-1-eaux souterraines :
Les eaux souterraines ont pendant longtemps t synonymes deau propres et rpondent naturellement aux
normes de potabilit. Ces eaux sont en effet moins sensibles aux pollutions accidentelles.
Les eaux souterraines peuvent aussi contenir des lments des concentrations dpassant largement les normes
de potabilit. Ceci est d la composition du terrain e stockage on peut citer Fe, Mn, H2S, F.
Les eaux souterraines doivent tre traites avant distribution toutes les fois que la concentration dun ou de
plusieurs lments dpasse la valeur autorise par les rglements en vigueur [7, 8].
I-1-2-eaux minrales :
Sont des eaux profondes qui peuvent contenir certains lments en concentration suprieure la concentration
autorise pour une eau potable et qui sont doues de proprits thrapeutiques reconnues. Elles sont distribues
en bouteilles, avec parfois certains traitements bien dfinis comme dcantation naturelle, dfferisation par
simple aration et/ou rincorporation du CO2 [7].
I-1-3-eaux de source :
Sont des eaux qui contrairement aux eaux minrales doivent rpondre aux critres de potabilit et ne peuvent
subir aucun traitement [7].
I-1-4-eaux de surface :
Ce terme englobe toutes les eaux circulant ou stockes la surface des continents.
Les eaux de surface sont rarement potables sans aucun traitement et sont gnralement pollues
bactriologiquement. De plus elles peuvent prsenter plusieurs pollutions :
Dorigine urbaine.
Dorigine industrielle.
Dorigine agricole [7, 8].
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Traitements des eaux destines la consommation
3
Traitements des eaux destines la consommation
Virus
Adnovirus Grande ? Modre
Entrovirus Grande Longue Modre
Hpatite A Grande ? Modre
Virus de lhpatite Grande ? ?
non-A, non-B
transmis par voie
entrique et de
lhpatite E
Protozoaires
Entamoeba Grande Modre Eleve
histolytica
Giardia intestinalis Grande Modre Eleve
Cryptosporidium
parvum Grande Modre Eleve
Helminthes
dracunculus Grande Modre Modre
medinensis
a : Dure de la priode de dtection du stade infectant dans leau 20C brve, jusqu une semaine ; modre une semaine un
mois ; longue, suprieure un mois.
b : lorsque le stade infectant est en suspension dans leau traite, avec une dose normale de dsinfectant et un temps de contact
normal. Rsistance modre : lorganisme peut tre pas compltement dtruit ; Rsistance faible : lorganisme est
compltement dtruit.
c : Linfection sacquiert principalement par contact cutan, mais les patients immunodprims ou cancreux peuvent tre infects par
voie orale.
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Traitements des eaux destines la consommation
*Certains mtaux :
Le fer et le manganse peuvent provoquer une coloration et sont lorigine de dpts dans les rseaux. Des
corrosions peuvent en rsulter .Par ailleurs, ils affectent les qualits organoleptiques de leau, comme dautres
mtaux : le cuivre, laluminium, le zinc [6, 7].
*Les gaz dissous :
LH2S est rvlateur de conditions anarobies, et dun potentiel doxydorduction trop bas ; il provoque de
mauvaises odeurs et peut tre lorigine de corrosion. Il doit tre limin [6, 7].
*Lammonium NH4:
Il na pas deffet apprciable sur la sant du consommateur, mais sa prsence dans les eaux est un indicateur de
pollution. Dans les eaux profondes, la prsence de NH, peut galement tre due aux conditions rductrices
rgnant dans une nappe. Lammonium doit tre limin dans les eaux de consommations, car cest un aliment
qui peut permettre certaines bactries de prolifrer dans les rseaux de distributions [6,7].
I-2-2-2-Impurets affectant la sant :
*les nitrates :
Ces vingt dernires annes ont vu une augmentation importante de la concentration en nitrates des eaux de
surface et des eaux de nappe fortes concentrations, les nitrates peuvent tre responsable de la mthmoglobine
chez les nourrissons, syndrome consistant en une diminution de la capacit du sang transporter loxygne. La
concentration maximale admissible dans les eaux potables de 50 NO-3 /litre.
Laugmentation en nitrates est souvent lie lutilisation de techniques intensives dans lagriculture.
Quand la ressource est contamine et quaucune autre ressource nest disponible, un traitement spcifique est
ncessaire [7, 9].
*Mtaux lourds :
Le cadmium, le plomb, le mercure, le slnium, larsenic. Ils sont gnralement absorbs sur les matires en
suspension prsentes dans leau brute. Dans certains, les mtaux peuvent tre complexs soit des matires
organiques naturelles (exemple le mercure) soit des composs chimiques rejets par les industries ou les
mnages. Le traitement doit tre capable de dtruire ce complexe pour en assurer llimination [7].
*fibres damiante :
Si lamiante a t reconnue comme tant cancrigne dans lair par inhalation, leffet cancrigne des fibres
damiante contenues dans leau de boisson na pas t directement dmontr. Il est cependant souhaitable de les
liminer le mieux possible, les fibres damiante pouvant tre entranes dans la vapeur (bullition, douches). La
rduction de la turbidit permet den assurer une limination raisonnable [7].
*fluor :
Une concentration en fluor trs importante provoque la fluorose des os. Il est dans ce cas, indispensable de
rduire la concentration en fluor [7].
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Traitements des eaux destines la consommation
*duret :
La duret de leau est due la prsence de calcium dissous, et dans une moindre mesure de magnsium. On
lexprime gnralement en quantit quivalente de carbonate de calcium. Bien quun certain nombre dtudes
pidmiologiques, cologiques et analytiques aient dmontr une corrlation ngative statistiquement
significative entre la duret de leau de boisson et les maladies cardiovasculaires, les donnes disponibles sont
insuffisantes pour conclure un lien de cause effet [6].
I-2-3-Impurets organiques : (Tab. III)
De nombreuses substances organiques naturelles sont prsentes dans les eaux souterraines ou de surface.
Elles se classent en 6 groupes principaux : substances humiques, acides carboxyliques, peptides, aminoacides,
hydrates de carbone. On trouve galement des substances organiques proviennent des activits urbaines.
Les substances organiques sont caractrises analytiquement soit par la mesure dindices globaux :
loxydabilit au permanganate et le carbone organique total rendent compte de la concentration en
matires organiques.
labsorption mesure en ultraviolet 254 nm rend compte de la concentration en doubles liaisons
aliphatiques, carboxyliques, benzniques.
Le Clot : rend compte de la concentration en matires organiques chlors ou halognes [7].
7
Traitements des eaux destines la consommation
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Traitements des eaux destines la consommation
I-3-2-prtraitement au chlore :
Le prtraitement au chlore effectu avant la dcantation est recommand pour protger les conduites deau
brute, lorsque leau est riche en matire organique et en plancton doit tre amene la station principale par une
conduite de grande longueur. Le chlore ainsi que les autres oxydants (eau de javel, hypochlorite de calcium,
dioxyde de chlore) amliorent loxydation des diffrents corps retenus dans leau. Pour la pr chloration on
recommande une teneur en chlore lgrement suprieure celle du point critique [1, 7].
I-3-3-la clarification :
La clarification est lensemble des oprations permettant dliminer les matires en suspension dune eau brute
ainsi que les polluants (organiques et minraux) qui leurs sont associs par la succession des tapes suivantes :
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Traitements des eaux destines la consommation
O3 CL2 Cl O2 chloramines UV
E. bactricide +++ ++ ++ + ++
E. rmanent 0 + + ++ 0
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Traitements des eaux destines la consommation
I-4-Traitements supplmentaires :
Ces traitements sont des mthodes mises en uvre pour liminer certains lments indsirables contenus dans
leau brute. Parmi les mthodes de correction chimique les plus utilises, on distingue.
I-4-1-La dferrisation :
Dans les eaux de surface, le fer se trouve gnralement sous forme ferrique et prcipit, souvent associ aux
matires en suspension.
On le rencontre galement sous forme ferreuse dans les couches profondes de certaines rserves deau en
labsence doxygne, ou dans les eaux souterraines. Le fer rduit Fe+2 est alors dissous et souvent complex aux
acides humiques [7].
Les eaux ferrugineuses ont plusieurs inconvnients : colmatage des canalisations ou des appareils, avec risque
de corrosion par aration diffrentielle, marques jaune rougetre dans les appareils o cette eau coule et got
mtallique dsagrable dans les cas des eaux potables [8].
Pour des teneurs suprieurs 2 mg/l, il faut procder une dferrisation.
La dferrisation sera donc une oxydation par transformation du fer divalent en fer trivalent.
Loxydation du fer divalent se fait suivant une vitesse qui dpend du pH rgnant au cours de lopration, dans
ces conditions, laration dune eau ferrugineuse qui simultanment fournit loxygne ncessaire loxydation
du fer divalent tendra lever le pH par limination du gaz carbonique [11].
1-4-2 Dmanganisation :
Le manganse se rencontre moins que le fer mais les dsagrments quil procure sont sensiblement plus grands
et son limination est plus difficile.
Le manganse se trouve gnralement sous forme divalente qui doit tre mise sous une forme plus oxyde pour
tre limin par prcipitation. Le manganse complex par des matires organiques (acides humiques en
particulier) est fort rebelle la prcipitation.
Loxydation Mn++ dans les formes prcipites Mn (OH) 3 et Mn (OH) 4 par loxygne est trs lente pour des
pH < 9.5. La dmanganisation exige dans ces conditions :
-soit lutilisation de catalyseurs doxydation mais de toute faon un pH > 7,5, on emploie comme catalyseur
des zolithes naturelles ou la pyrolusite ou sable imprgn doxyde de manganse de valence leve ; la
rgnration du catalyseur sobtient par injection priodiques de permanganate (5 10 g/m3).Le fer prsent est
prcipit simultanment.
-soit lutilisation de ractifs oxydants puissants le chlore agit dune faon imparfaite et de toute faon des
doses > celles du break point loxydation complte demande plus dune heure [11].
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Traitements des eaux destines la consommation
teneur en vanadium et de mercure est abaisse de 50/ environ ; la teneur en zinc et en nickel est
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Traitements des eaux destines la consommation
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Chloration
L a chloration des eaux destines la consommation humaine a t introduite au dbut du XXme sicle et a
entran une rgression spectaculaire des maladies transmission hydrique. La chloration par sa grande
efficacit a trs faible dose et par sa facilit demploi a t peu peu gnralise travers le monde pour
assurer la dsinfection de leau de boisson.
Le procd de dsinfection de leau, le plus pratiqu et le moins coteux est sans doute la chloration ou la
javellisation.
Lutilisation du chlore pour le traitement de leau potable prsente lavantage dune action rmanente (durable)
et de prolonger la dure de la dsinfection de leau pendant plusieurs heures dans les rseaux de distribution et
de plusieurs jours pour leau de puits [1, 12].
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Chloration
100
80 Cl2
ClO-
60
HOCl
40
20
0
2 4 6 8 10 pH
Figure1 : Diffrentes formes de chlore en solution aqueuse [10].
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Chloration
La dnomination tient ce que, si lon dverse progressivement du chlore dans une eau contenant une
certaine proportion de matires organiques (courbe C3) ou dammoniaque libre (courbe C4), la quantit
de chlore rsiduel ltat libre, aprs avoir augment dabord linairement subit une chute plus ou
moins brutale en passant par un minimum avant de recommencer crotre sans limitation. Ce minimum
marque le break point ou point critique et indiquerait le taux minimum de chlore appliquer
pour obtenir en quelques minutes la destruction pratique de toutes bactries contenues dans leau. La
courbe du C4 montre un exemple du point critique.
Dans la partie OA, de la monochloramine se forme suivant lquation :
16
Chloration
Dans la partie BC, il y a destruction des chloramines dont le got de chlore est trs nettement suprieur celui
du chlore lui-mme .
Enfin dans la partie CD, le chlore nest plus consomm et la pente remente 45 c'est--dire que lon retrouve
en chlore rsiduel dans leau traite la mme quantit de chlore rajoute celle-ci
Cette mthode se propose de lutter contre les inconvnients par du chlore lui-mme doses massives tels que la
formation de chlorophnols extrmement stables et qui, mme sous de trs faibles doses, confrent leau des
mauvais gots particulirement tenaces [9, 18, 19].
Dans les installations de traitement deau potable classiques : on effectue gnralement une pr chloration de
leau brute lentre du traitement ou ltape de mlange rapide une chloration intermdiaire en amont des
filtres, une post chloration la rserve de distribution (aprs les filtres et une r chloration du rseau de
distribution) [17].
17
Chloration
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Procds doxydation
L oxydation est une opration essentielle tout traitement des eaux vise de potabilisation , elle est
caractrise par lutilisation doxydant en amont et au sein de la chane de traitement avant la filtration, est de
plus en plus frquente il sagit de la pr et de linter oxydation. Elle est toujours incluse en fin de filire au
niveau de la dsinfection. Etant donn la dgradation de la qualit des ressources superficielles.
Les ractions doxydorduction sont celles qui mettent en jeu :
Des pertes (oxydation) ou des gains (rduction) dlectrons par certains ions.
Des pertes ou des gains datomes doxygne par dautres ions
La transformation en et CO2 (parfois aussi en azote) de matires organiques indsirables.
Alors que les ractions de rduction se limitent en pratique le plus souvent llimination de loxygne dissous
et la transformation du chrome hexavalent toxique en chrome trivalent peu toxique, les ractions doxydation,
en revanche ont de nombreuses applications :
Dsinfection
Transformation de composs solubles en composs insolubles facilement liminables par filtration (fer,
manganse)
Transformation de composs indsirables en composs admissibles (phnols, nitrite, ammoniaque) [17, 20].
19
Procds doxydation
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Procds doxydation
III-1-6 Lozone :
Lozone de formule (O3) est une varit allotropique trs instable de loxygne. Lozone peut tre obtenu
partir de loxygne qui se trouve dans lair, ou doxygne pur.
La raction brute de formation scrit :
3 O2 2 O3 ( 71 Kcal).
Cette raction est ralise par action deffluces lectriques dans un air dshydrate sous haute tension.
Dans leau pure, lozone ragit de la faon suivante :
Lozone se dcompose facilement en oxygne molculaire et en oxygne naissant
O3 O2 + O
Oxygne Oxygne
molculaire naissant
Lozone peut agir et ragir en tant que tel (O3) ou encore comme oxydant par loxygne monoatomique (O).
Il peut, en troisime lieu favoriser laction de loxygne diatomique (cest--dire les habituelles molcules O2)
qui activent les formations fugitives dozone et doxygne monoatomique.
Le pouvoir oxydant trs lev de lozone est la caractristique qui rend ce produit intressant pour le traitement
des eaux. Il permet de dtruire la couleur, les gots et les odeurs, de dtruire les produits base de phnol et
doxyde. Les ions ferreux et manganeux solubles, ce qui les transforme en ions insolubles. De plus ce pouvoir
oxydant lev permet de briser les complexes organiques du fer et du manganse, qui ne le sont en gnral pas
avec les procds habituels du fer et du manganse contrairement au chlore, lozone ne ragit pas avec lazote
ammoniacal.
Le pouvoir dsinfectant de lozone est 10 100 fois suprieur celui du chlore et ce pour tous les types de
microorganismes. Il est mme efficace contre les spores et les kystes, qui sont pourtant les organismes les plus
rsistants [7, 8, 10, 16, 19, 20].
21
Procds doxydation
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Procds doxydation
Post oxydation :
La post oxydation est une dsinfection qui a pour objet linhibition des micro-organismes en sortie dusine et
qui doit assurer un rsiduel de dsinfectant dans le rseau pour garantir la protection sanitaire de leau. On
dsire donc un effet bactricide ou biocide qui consiste en un abattement des germes et effet bactriostatique
sur le rseau.
Cette dernire condition nest possible quavec lemploi dun oxydant rmanent tel que le chlore [17].
III -3- Impurets apportes suite au traitement chimique :
Lintroduction dun ractif dans leau peut conduire deux formes de pollution, Les impurets du ractif lui-
mme et les produits de raction du ractif avec les matires organiques de leau.
III-3- 1-Impurets dues au ractif :
Dans de nombreux pays, lutilisation dun ractif est soumise lagrment des autorits sanitaires. La
lgislation peut prvoir, pour chaque ractif, une concentration maximale dimpurets respecter par le
producteur. Une analyse prcise des produits doit tre effectu. Au cas o lon constate la prsence
dimpurets, il importe de vrifier que la chane de traitement prvue en permet llimination.
III-3-1-1-Coagulants minraux :
Certains coagulants sont prpars partir de minerais ou mtaux pouvant contenir des impurets en quantit
non ngligeable : attaque acide de bauxite pour prparer le sulfate daluminium, attaque de carcasses
mtalliques pour prparer le chlorure ferrique. Cette attaque dissout galement des impurets (tungstne,
manganse, arsenic).
III-3-1-2-Polylectrolytes, adjuvants :
Les polylectrolytes de synthse sont prpars par polymrisation de monomres (polyacrylamides, polyamines
en traitement deau potable, la lgislation de chaque pays peut fixer le type de monomre utilisable, la teneur
maximale en monomre utilisable dans le polymre et le taux de traitement maximal quil est possible de mettre
en uvre (0,5 % de monomre acrylamide dans le cas des polyacrylamides par exemple).
III-3-1-3-Correction de pH :
Il faut vrifier les impurets de la chaux et de la soude qui doit tre exempte de mercure (soude prpare par le
procd membrane).
III-3-1-4-Air dentranement (stripping) :
Lair utilis au cours de certaines tapes du traitement peut apporter des lments indsirables : impurets de
latmosphre, gaz dchappement, fumes, bactries [8].
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Procds doxydation
Tableau nVII : tableau comparatif des diffrents modes de dsinfection [13, 18, 20].
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Procds doxydation
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Procds doxydation
III-3-2- Impurets par raction du ractif sur les molcules organiques de leau : (Fig.3)
Lors des phases doxydation intervenant au long dune chane de traitement, les oxydants (chlore, dioxyde de
chlore, ozone) peuvent ragir sur les matires organiques dans leau.
En particulier le chlore ragit sur certaines de celle-ci pour donner naissance aux composs haloformes.
Cette raction peut se faire soit directement par le chlore prsent dans leau sous forme de ClO-, soit par un
autre halogne (brome ou iode) qui peut avoir t dplac par le chlore (on aura alors XO- qui ragira sur ces
matires organiques pour former des composs organohalogns).
La raction de base pour la formation des composs trihalomthanes est la suivante :
R-CO-CH3 + 3OX- R-CO-O + CHX3 +2 OH-
Compos
haloforme
Les matires organiques carbones qui peuvent donner lieu cette raction sont principalement les
mthylctones, ou, dune manire plus gnrale, tous les produits organiques, peuvent tre oxyds en
mthylctones .
La chloration des composs organiques conduit galement la formation dautres composs qui nont pas t
encore ce jour tous identifis.
Tous ces produits sont suspects dtre cancrignes. Il importe que les filires mises en place et la conduite des
installations de traitement permettent de produire une eau dont la teneur en trihalomthanes et organochlors
soit la plus faible possible [7, 9, 17, 19].
non identifis
haloformes
haloctones
trichloroctones
acides
haloaliphatiques
haloaromatiques
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Sous produits de dsinfection et sant publique
D es tudes pidmiologiques ont suggrs un lien possible entre la chloration, les sous produits de
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Sous produits de dsinfection et sant publique
Cl2
5 -
CHClBr2
Figure 4 : Cintique dapparition des trihalomthanes lors de la chloration des eaux [9].
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Sous produits de dsinfection et sant publique
0 0 0 0 0 0
b- Mtabolisme :
Les THM sont absorbs, mtaboliss et limins rapidement par les mammifres aprs ingestion ou inhalation.
Le THM inhal arrive rapidement dans le courant sanguin qui le transporte dans les tissus. Les graisses de
lorganisme sont le lieu de prdilection pour laccumulation des THM, qui est moindre dans le cerveau, les
poumons, les reins, les muscles et le sang. Le mtabolisme lieu dans le foie, la demi-vie varie de 0,5 3h. Des
autoradiographies du corps entier ont permis dobserver le transfert progressif vers le foie de la radioactivit des
dpts situs dans les graisses.
La principale voie mtabolique est dans tous les cas une oxydation par lintermdiaire du cytochrome P450
(CYP) 2E1, qui conduit la formation de drivs carbonyls halogns (le phosgne et ses drivs halogns)
qui peuvent tre leur tour hydrolyss en dioxyde de carbone ou se fixer sur des macromolcules tissulaires. Il
existe des voies mtaboliques secondaires, comme la dshalognation rductrice par lintermdiaire de
CYP2B1/2/2E1 (qui conduit la formation de radicaux libres) ou la conjugaison avec le glutathion (GSH) T1-1
qui entrane la formation dintermdiaires mutagnes.
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Sous produits de dsinfection et sant publique
Les THMs broms ont beaucoup plus de chance demprunter les voies mtaboliques secondaires que le
chloroforme, la conjugaison de ce dernier avec le GSH sous laction de GST peut seffectuer des
concentrations extrmement leves. Le chloroforme est certainement capable de traverser la barrire
placentaire puisque sa concentration est plus leve dans le sang ombilical que dans le sang maternel [6, 30,
41].
IV-1-1-2-Acides haloactiques (HAA):
a- gnralits :
Les acides halo actiques sont des produits doxydation trs polaires forms par la raction du chlore sur
certaines substances organiques prsentes dans leau comme lacide fulvique et lacide humique.
Cest la fraction la plus importante aprs les THMs et reprsentent 25% des AOX totaux.
Ces acides comprennent des acides chlors, broms et chlors/broms. Le dichloroactique acide et le
trichloractique acide (TCA) sont dtects dans les eaux chlores une concentration de 4 161 g/l. il
nexiste pas de diffrence statistiquement signifiante des concentrations des HAAs durant la saison chaude ou
froide leur concentration est plus faible plus quon sloigne de la station de traitement et plus leau est ge (le
temps de stockage est long) [6, 24, 26, 30, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 42].
b- mtabolisme :
Le mtabolisme et la cintique du DCA et TCA diffre sensiblement. Les principales ractions de lacide TCA
se produisent dans la fraction microsomique, alors que le mtabolisme de lacide DCA qui seffectue
essentiellement sous laction des glutathions transfrases, se droule plus de 90% dans le cytosol en
glyoxalate et oxalate avant dtre excrt. Le TCA a une demie vie biologique de 50h chez lHomme alors que
celle du DCA est trs courte [6, 30].
IV-1-1-3 Hydrate de chloral (trichloroactaldehyde : HC):
a- gnralits :
Cest un sous produit de chloration qui se trouve dans leau de boisson une concentration qui slve 19g/l
et peut atteindre 100 g/l. Il constitue avec les chloractones 3% des SPC. On le dtecte aussi dans les solutions
chlores dacides humiques et daminoacides. Ce produit est aussi un mtabolite du tri et du tetrachloroethylne
chez les mammifres, on le retrouve dans le plasma des individus exposs la vapeur du tetrachloroethylne
(produit chimique de lindustrie du textile). Lhydrate de chloral est en concentration leve dans les eaux
souterraines et faible en eaux superficielles. Les plus faibles niveaux dhydrate de chloral sont enregistrs
durant les mois o leau tait froide que durant les mois ou leau tait chaude. Les niveaux de HC ont t
maximaux lusine de traitement et ont baiss mesure que la distance par rapport lusine augmentait [6, 20,
24, 29, 34, 35, 36, 37, 38].
30
Sous produits de dsinfection et sant publique
b- mtabolisme :
Il existe des donnes limites sur le mtabolisme de lhydrate de chloral. Ses deux principaux mtabolites sont
le trichlorothnol et le trichloractique.
Le trichlorothanol subit une glucuronidation rapide puis il passe dans le circuit entrohpatique o il est
hydrolys et enfin oxyd en TCA. La chloration du trichlorothanol conduirait la formation de DCA, ce
dernier pourrait tre ensuite transform en monochloroactate (MCA) [29].
IV-1-1-4- Actonitriles halogns (AN) :
a- gnralits :
Les actonitriles ont t identifis dans lenvironnement uniquement comme tant des SPC des eaux de surface
et de seaux souterraines. Ils reprsentent 5% des AOX totaux. Les prcurseurs potentiels de ses sous produits
sont : les algues, les acides humiques et les protines. Les actonitriles halogns peuvent aussi se former in
vivo la suite dingestion deau chlore. Le dichloroactonitrile est lactonitrile halogn le plus abondant
dans les eaux de boisson des concentrations situes dans un intervalle de 0,3 24 g/l.
Les actonitriles broms peuvent aussi existaient si les ions bromures se trouvent dans leau brute. Les
concentrations des diffrents actonitriles dans le rseau de distribution sont gnralement faibles et diminuent
lgrement durant la saison chaude [6, 24, 33, 34, 35, 36, 37, 38].
b- mtabolisme :
Les actonitriles halogns sont facilement absorbs par la voie gastro-intestinale et rapidement mtaboliss en
composs mono carbons, notamment en cyanure, en formaldhyde ainsi que des halognures de formyle [6,
30].
IV-1-1-5- chlora ctones (CK) :
a- gnralits :
Un groupe de sous produits de chloration cit par lorganisation mondiale de la sant qui peut prsenter un
danger pour la sant publique. Ils reprsentent 3% des organohalogns totaux. LOMS na pas donne de
valeurs guides aux actonitriles vue le manque de donnes. La concentration des chloropropanones, le DCP et
le TCP est leve pendant la saison chaude plutt quen saison froide. Il nexiste pas une production nette de
CK dans le rseau de distribution [6, 24, 33, 34, 35, 36, 37, 38].
b- mtabolisme :
Il nexiste pas de donnes suffisantes sur le mtabolisme des CKs.
31
Sous produits de dsinfection et sant publique
32
Sous produits de dsinfection et sant publique
33
Sous produits de dsinfection et sant publique
Tableau X: Distribution des SPD halogns dans les eaux chlores et chloramines [24].
34
Sous produits de dsinfection et sant publique
IV-1-4-2 Chlorites :
a- gnralits :
Analogues des chlorates gnrs par la dgradation du dioxyde de chlore [6, 21, 30].
b- mtabolisme des chlorates et des chlorites :
16
Les chlorates ont un comportement analogue celui des chlorites. Le Cl provenant de lion chlorite est
rapidement absorb. La dose initiale de chlorite se retrouve moins de 50% sous forme de chlorure dans les
urines et en faible proportion sous sa forme initiale. Il est probable quune proportion sintgre la rserve de
chlorures de lorganisme [6, 30].
IV-2-1-effets toxiques :
IV-2-1-1- Anomalies du dveloppement :
Les Trihalomthanes broms provoquent des lsions de foie et des reins suite une exposition prolonge
des doses leves. Le chloroforme lui peut provoque, suite une exposition prolonge des doses suprieurs
15 mg /Kg de poids corporel par jour, des modifications dans les reins, le foie et la thyrode [6, 30, 33].
Les acides haloactiques : Dans des tudes court et long terme chez lanimal, lacide dichloractique a
provoqu des neuropathies, une rduction du poids corporel, des lsions des testicules et des changements
histopathologiques dans le cerveau. Lacide trichloractique a provoqu une prolifration des peroxysomes et
une augmentation du poids du foie.
Lacide dichloractique et lacide trichloractique provoquent des malformations cardiaques chez le rat. Le
stress oxydatif est galement une caractristique de la toxicit des drivs broms appartenant ce groupe
[6,49].
Lhydrate Chloral : des donnes relatives sa toxicit sont limits, mais des effets sur le foie ont t
constats dans des tudes de 90 jours chez la souris. Chez le rat, il entrane des anomalies hmatologiques.
Chez lHomme son effet dpresseur sur le systme nerveux central est probablement en rapport avec un
mtabolite, le trichlorothanal [6, 44].
35
Sous produits de dsinfection et sant publique
Tableau XI: Relation entre les malformations congnitales et lexposition aux sous produits de chloration
(RR et intervalles de confiance 95%) [56].
Tableau XII: Relation entre le taux davortements spontans ou daccouchement prmaturs et le type
deau consomme (Odds-ratio et intervalles de confiance 95%) [56].
37
Sous produits de dsinfection et sant publique
Les cellules CCRF-CEM (Human Lymphoblastic Leukemia) exposes 5-10mM de THMs broms pendant
2h montrent une augmentation dans lADN simple brin compars au cellules tmoins. En plus lexposition aux
DBCM et BF des cellules CCRF-CEM apparat compromettre la capacit de rparation de lADN ceci est
dmontr par laugmentation du taux dADN SB aprs 22h aprs exposition [58].
Des tudes pidmiologiques sont intresses, en sparant le CHCl3 des autres composs la corrlation entre
le taux dapparition de 16 cancers distincts et la concentration des THMs dans leau de boisson. Les
informations relatives lexposition provenaient de lenqute nationale sur les matires organiques et de
lenqute faite en 1975 dans la rgion V par lagence pour la protection de lenvironnement des Etats-Unis
dAmrique. Les travaux ports sur 76 comits dont la population tait desservie plus de 50% par les rseaux
de distribution qui ont t lobjet de mesures, le rsultat le plus cohrent en a t une corrlation entre le taux de
mortalit par le cancer de la vessie et la concentration de THMs, corrlation qui a t observe chez les deux
sexes et sest avre proportionnelle au pourcentage de population desservie par les rseaux tudis, elle tait
plus forte pour les composs broms que pour le chloroforme. Dautres chercheurs ont repris en grande partie
les mmes bases de donnes et leur ont fait subir diffrents traitements statistiques pour dterminer la
pertinence du modle statistique. En utilisant une analyse de rgression pondre, ils ont trouvs des rsultats
analogues ceux des tudes antrieures, une corrlation positive entre le taux de mortalit par le cancer de
vessie et par le cancer recto intestinal, dune part, et de la concentration du chloroforme de lautre [29, 59, 60,
61, 62, 63, 64, 65, 66, 67].
Dautres tudes pidmiologiques menues en Taiwan visant vrifier lexistence dun lien possible entre le
taux de mortalit dans cette ville et leau chlore. Ils ont choisis de travailler sur des municipalits aliments en
eau chlore et des municipalits alimentes avec une eau non chlore et ont observs une relation signifiante
pour le cancer de rectum, vessie et reins chez les deux sexes et le cancer du foie chez les hommes [68].
CAAs :
Dans le SOS chromotest, MCA, TCA et MBA ne montrent pas une activit gnotoxique avec ou sans activit
mtabolique. DCA est faiblement gnotoxique sans S9 (mix). DBA et TBA sont les seuls qui montrent des
proprits gnotoxiques avec et sans activit mtabolique, laddition du systme dactivation mtabolique
augmente leur gnotoxicit.
Tous les acides actiques halogns se sont montrs mutagnes dans le test Ames fluctuation sur Salmonella
typhimuriumTA100 leur toxicit est diminue par laddition du S9 (mix), au contraire les MCA et MBA
montrent une activit mutagne uniquement en prsence dactivit mtabolique[68].
Aucun des acides actiques halogns na montr une activit clastognique except le TCA qui induit une
basse frquence de formation drythrocytes micronucles.
Dans plusieurs tudes, le DCA a provoqu des tumeurs hpatiques chez la souris. Les trichloractates ont
galement provoqus des tumeurs du foie chez la souris [6].
38
Sous produits de dsinfection et sant publique
HC :
Ce compos induit des mutations dans le test dAmes avec princuubation en prsence de S9 (mix) chez
Salmonella typhimuriumTA100. Chez Saccharomyces cerevisiae, il cause une augmentation signifiante de la
frquence de la conversion des gnes D7 in vitro avec S9 (mix).
Le chloral hydrate induit une malsgrgation du fuseau miotique chez Aspergillus nidulans et cause des
aneuplodies in vitro chez ce champignon et dans les fibroblastes embryoniques primaires des Hamster chinois
(cellules V 79) et les lymphocytes humains et in vivo dans les cellules germinales des souris males.
Le chloral hydrate est positif in vitro dans les essais micronucleus dans les lymphocytes humains. Ce
compos nest pas clastognique mais a un effet direct sur le fuseau miotique, la formation de micronoyaux,
linduction daneuplodies est en gnral lie lactivit toxique du CH sur le fuseau miotique [44].
CK :
En SOS chromotest tous les propanones chlors tudis sauf le MCP montrent un effet gnotoxique le 1,1 DCP
et le 1, 1,1 TCP sont gnotoxiques sur E.coli, en absence de S9 le 1,3 DCP et le 1, 1, 3 TCP induisent un effet
gnotoxique avec et sans activation mtabolique. Les rsultats obtenus par ce test indiquent que le systme
mtabolique augmente la gnotoxicit du 1,3 DCP et dcrot celle du 1, 1,1 TCP, lordre gnotoxique des CKs
bas sur le facteur dinduction est le suivant : 1,1,3 TCP>1,3 DCP>1, 1,1 TCP>1,1 DCP.
Ces cinq chloropropanones montrent aussi une activit mutagne dans le test dAmes fluctuation avec et sans
activation mtabolique et seul le MCP induit une activit mutagne en absence de S9 (mix).
Le test micronoyau triton est positif pour le 1,3DCP et 1,1,3 TCP, prsence dactivit clastognique sur les
rythrocytes priphriques [70, 71].
AN :
Lors dune tude, trois des actonitriles halogns ont montr un effet gnotoxique. Le DCAN gnotoxique en
prsence de S9 (mix). Le BDAN et le DBAN produisent un effet gnotoxique en absence de S9 (mix).
Tous les actonitriles lexception du DBAN dmontrent une activit mutagne chez Salmonella
typhimuriumTA100 sans ou avec activation mtabolique. Laddition du systme enzymatique dcrot la
mutagnicit du MCAN et limine lactivit mutagne du TCAN et MCAN qui est prsente en son absence. Le
MBAN induit des effets mutagnes en prsence de S9 et non pas en son absence. Le DCAN est le seul qui
prsente une activit mutagne sans et avec activation mtabolique. Lordre de mutagnicit est donc
DCAN>BCAN>MBAN>TCAN>MCAN.
Ces actonitriles tudis exposent des effets clastogniques sur les rythrocytes priphriques des larves de
triton. Les rsultats montrent aussi que la toxicit des actonitriles chlors saccrot avec le nombre de
substituant chlors. [71, 72]
39
Sous produits de dsinfection et sant publique
CP :
Selon certains rapports, le 2,4,6 TCP provoquerait lapparition de lymphomes et de leucmies chez le rat mle
et de tumeurs hpatiques chez les souris des deux sexes, il ne sest rvl pas mutagne dans lpreuve dAmes
mais il a manifest une faible activit mutagne dans dautres preuves in vivo et in vitro [6].
CPi :
La littrature concernant la chloropicrine est plutt pauvre. Des tudes ont dmontrs sa mutagnicit dans le
test dAmes avec S9 (mix) chez Salmonella typhimuriumTA100et une faible activit sur la souche Salmonella
typhimuriumTA98 et E.coli (WP2 MCR). La chloropicrine induit lchange de chromatides surs dans une
culture de cellules lymphocytaires humaines. La plus faible concentration de CPi induisant une activit
gnotoxique signifiante est dtecte dans le SOS chromotest (0,3g/ml). Concernant le test dAmes fluctuation,
il est intressant de noter que 3g/ml de CPi apparat gnotoxique [44].
CHFs :
Dans lessai de micronoyau sur des cellules lymphatiques de souris L5178Y (souche TK+/- 3.7.2.C), tous les
CHFs montrent des effets gnotoxiques signifiantes. MCA induit la formation de micronoyaux des
concentrations fortes (25M), CMCF, MX et MCF augmentent la frquence de micronoyaux des
concentrations de 6,25-25, 50-100 et 100-200 M respectivement. Ils sont aussi gnotoxiques dans les
hpatocytes des rats (lessai UDS). De nombreuses tudes in vitro ont dmontrs que le MX cause un rang
de dommages chromosomial dans les cellules mammifres (sans activation mtabolique). Le MX accrot la
frquence dchanges de chromatides surs dans les lymphocytes priphriques des rats et provoque des
dommages lADN dans les cellules V79 dHamster chinois, dans le foie des rats et dans les cellules
testiculaires, il induit galement des cassures des brins de lADN dans les lymphoblastes humains et les
globules Blancs [45, 46, 73].
Les bromates :
Les bromates provoqueraient une leucmie trs leve de tumeurs rnales chez les rats des deux sexes et de
mosothliomes du pritoine chez les rats mles. Lion bromate est mutagne dans le test dAmes et provoque
des cassures chromosomiques in vivo et in vitro et lapparition de micronoyaux [6].
Le formaldhyde :
Le formaldhyde administr par inhalation des rats et des souris sest rvl cancrigne des doses qui
provoquaient une irritation de lpithlium nasal, lingestion pendant 2ans deau de boisson contenait du
formaldhyde a provoqu des papillomes de lestomac associs une forte irritation ont t observs [6].
40
Sous produits de dsinfection et sant publique
Tableau XIII: Principaux composs organiques gnotoxiques ou cancrignes identifies ou doss dans
leau potable [74].
a c
Selon IARC(1991), sauf b BRUCHET et al.(1985) et KRONBERG(1994) et SMEDS et al.(1997).
d p *
Valeurs guides de lOrganisation mondiale de la sant (OMS, 1994), provisoire, En cours dlaboration (informations disponibles
42
Mutations et Cancer
Carcinogne
90% (157/175)
87%
(94/108)
Non carcinogne
43
Mutations et Cancer
44
Mutations et Cancer
Agents alkylants : Sont des mutagnes qui ne sincorporent pas lADN mais altrent une base en une
forme qui provoque le mauvais appariement. Il sagit de ractifs capables dentraner des mthylations,
thylations ou alkylations suprieures au niveau des bases mais aussi celui des groupements phosphate[83,
88,89].
Lthyl-mthane sulfonate (EMS) : il ajoute un groupe thyle en de nombreuses positions sur les
quatre bases, le pouvoir mutagne provient surtout de laddition sur loxygne en position 6 de la
guanine, qui forme la O-6-alkylguanine. Celle-ci sapparie de manire illgitime avec la thymine, ce qui
donne surtout des transitions GC AT [83].
La nitroguanidine (NG) : elle ajoute un groupe mthyle joue un rle identique que celui de lEMS
[83].
Lhydroxylamine (HA) : est un inducteur spcifique de transitions GC AT. Il est plus que
vraisemblable que la spcificit de lHA soit due ce quelle hydroxyle essentiellement lazote du
groupe amino en C-4 de la cytosine pour produire la N-4-hydroxy-cytosine, qui sapparie comme la
thymine [83].
Agents dsaminants : constituent dautres exemples de mutagnes qui agissent en induisant des
modifications spcifiques de bases.
Acide nitreux (AN : HNO2) : Ce compos instable produit des mutations ponctuelles en particulier des
dsaminations, il dsamine la cytosine en uracile. Le rsidu uracile, sil nest pas remplac, sappariera
ladnine et non la guanine, induisant une transition C-T. lAN dsamine ladnine pour donner de
lhypoxanthine qui sapparie avec la cytosine.
Les ions bisulfite : Sont aussi des agents dsaminants [83, 88, 89].
45
Mutations et Cancer
Agents intercalants : constituent une autre classe de substances qui modifient lADN. Il sagit de produits
qui se placent entre les plateaux de bases de la double hlice ou qui stabilisent les glissements survenus la
suite de cassures. Ce sont des molcules planes, qui imitent une paire de bases et peuvent, par un processus
appel intercalation, se glisser entre les bases empiles de la double hlice dADN. Dans cette position
intercale, lagent peut provoquer laddition ou la dltion dune paire de bases. Ce groupe comprend :
La proflavine.
Lacridine orange.
Une famille de composs appels ICR [83, 88].
Les mutations gniques : Elles sont rencontres aussi bien chez les organismes procaryotes queucaryotes.
Ce sont des mutations touchant un seul gne (mutation intra gnique), elles peuvent tre plus au moins tendues
et on distingue les mutations ponctuelles et les non ponctuelles.
Substitution : Une paire de bases est remplace par une autre. Si une base purique est remplace par une
autre base purique ou une base pyrimidique est remplace par une autre base pyrimidique, il y a transition,
sinon il y a transversion.
Dltion : une paire de bases est perdue. Il en rsulte une modification de la lecture, qui, cause du
dcalage produit, interprtera des codons diffrents : une telle mutation est dcalante ou frame-shift .
46
Mutations et Cancer
Insertion : une paire de bases est ajoute. Linsertion a les mmes consquences que la dltion sur la
lecture de linformation gntique.
Modification : Une paire de bases est modifie. Les principales modifications sont la formation de
formes tautomres (imino et nol), la dsamination de la cytosine, les dpurinations, la formation de dimres
[88].
Les mutations chromosomiques : Elles sont inter (organismes eucaryotes) ou intra chromosomiques
(organismes eucaryotes et procaryotes). Les mutations inter chromosomiques consistent en des remaniements
entre deux chromosomes et les mutations intra chromosomiques affectent la structure dun chromosome.
Dltion : il sagit de la perte dun segment : lorsque ce segment est court, on parle de microdltion. La
dltion peut tre interne (endochromosomique) ou externe (terminale, exochromosomique). A ltat haplode
ou diplode homozygote (gnes identiques sur les deux chromosomes), la plupart des dltions sont ltales.
Chez un htrozygote (allles diffrents sur les deux chromosomes), les dltions peuvent tre conserves et
peuvent conduire lune expression phnotypique nouvelle par limination de lallle dominant (pseudo
dominance).
Inversion : il sagit du retournement dun segment. Ce retournement peut tre conscutif la formation
dune boucle. Linversion peut rendre un gne inapte la transcription, la lecture ne pouvant se faire dans le
bon sens. Chez un diplode htrozygote, linversion va tendre diminuer les possibilits de recombinaison
gntique dans les segments inverss.
Translocation : La translocation est le passage dun segment dune position une autre sur le mme
chromosome ou sur un autre. Sil y a change de segments entre de chromosomes non homologues, la
translocation est dite rciproque : elle est homozygote si elle touche en mme temps les deux chromosomes
dune paire et htrozygote si elle touche un seul des chromosomes dune paire et un dune autre paire.
Duplication : Il y a rptition dune squence. Il en rsulte une localisation modifie des gnes
dupliqus, ce changement de position peut modifier lexpression du gne [88, 89].
47
Mutations et Cancer
lumire visible
Fixation de lenzyme
De la photo ractivation
sur le dimre.
ADN rpar
48
Mutations et Cancer
Dans la BER, les bases modifies sont relativement reconnues par des ADN glucosylases relativement
spcifiques qui clivent la liaison N-glycosylique entre la base altre et le sucre, en produisant un site
apurinique ou apyrimidique (AP). Une endonuclase AP clive ensuite lADN ce site et une brche peut tre
cre par lactivit exonuclasique. La brche est gnralement plus considrable dans la NER et peut tre petite
quun seul nuclotide dans la BER. Dans E.coli La brche est remplie par lADN polymrase I et la liaison
phosphodiester finale forme par lADN ligase. Chez les eucaryotes, la rparation par excision est associe la
transcription de sorte que les rgions (gntiquement actives) transcrites de lADN soient rpares plus
rapidement que lADN non transcrit ; ce qui limite la production de gnes dfectueux [87].
49
Mutations et Cancer
50
Mutations et Cancer
51
Mutations et Cancer
Rparation de msappariement :
Cest une forme spcialise de la rparation par excision qui traite les mauvaises paires de bases produites
durant la rplication et celles qui ont chapp la correction. Dans le msappariement de rplication, la fausse
base se trouve dans le brin rsultant. Ce systme doit donc pouvoir distinguer les brins parents des brins
rsultants aprs le passage de la fourche de rplication, pour sassurer que la base msapparie est supprime
uniquement du brin rsultant. Chez les procaryotes, certains rsidus de ladnine sont normalement mthyls
dans la squence GATC sur les deux brins. La mthylation des brins rsultants dure plusieurs minutes aprs la
rplication. Ainsi, lADN nouvellement rpliqu est hmi-mthyl. Les brins parents sont mthyls alors que
les brins rsultants ne le sont pas, donc ils peuvent tre aisment distingus. Le mcanisme discriminatoire chez
les eucaryotes nest pas encore connu, cependant il est vident que la rparation du msappariement est
importante : le cancer hrditaire sans polypes du clon est caus par une perte dune de rparation
dappariement [87].
52
Mutations et Cancer
53
Mutations et Cancer
54
Mutations et Cancer
Dautres tests :
Le Comet Assay : permet de dtecter les cassures dans brin dADN. Dans ce test, les cassures de brin
sont mesures dans des cellules incluses au sein dun gel dagar. Aprs lyse des cellules, la migration
des brins dADN (placs dans un champ lectrique) vers lanode est dautant plus importante que le
nombre de cassures est lev.
Le test de postmarquage au 32
P : permet de dtecter des adduits lADN est lheure actuelle la
technique la plus sensible pour dtecter une grande diversit de composs modifiant la structure de
lADN. Les principales tapes sont : hydrolyse enzymatique de lADN, enrichissement en nuclotides
32
portant des adduits, marquage enzymatique des nuclotides au P, sparation des adduits marqus au
32
P par chromatographie en couche mince bi-dimentionnelle et autoradiographie.
Test miconucleus : test in vivo, montre la formation de micronoyaux dans les rythrocytes et utilis chez
les amphibiens, les souris et mmes dans les lymphocytes humains [73].
55
Matriel et Mthodes
L tude bibliographique qui prcde a fort bien soulign la grande variabilit des caractres
physicochimiques de leau brute au cours de lanne et ainsi les sous produits de chloration de leau.
Notre contribution a donc t :
1. le suivi des paramtres physicochimiques de leau brute et de leau traite pendant les quatre saisons.
2. dosage des organohalogns totaux.
3. Dosage du chloroforme et du bromoforme.
4. le suivi du chlore rsiduel lors de la distribution.
5. Enfin, ltude des effets mutagnes engendrs par les chantillons deau prlevs aux diffrents points de
prlvement.
56
Matriel et Mthodes
I-1-Mthodologie :
I-1-1-Description de la station de traitement : (Tab. XIV) et (Fig. 13)
La station de traitement traite :
- les eaux de surface qui proviennent du barrage sur loued Bou-Namoussa
-Les eaux de forages du pont Bouchet et Hnichet et les eaux des salines.
Les caractristiques des eaux traites sont prsentes dans le tableau suivant :
Tableau XIV: PRINCIPALES DONNEES CHIMIQUES DES EAUX
DES RESSOURCES GEREES PAR LE. P. E. A [98].
57
Matriel et Mthodes
Arrive
barrage
1000 m3
Eau traite
EAU
*AOX POSTE
Traite
*mutagnese PRECHLORATION 3
3600 m
Eau brute
POSTE CHLORE *AOX
strilisation
Strilisation *Mutagnse
Dbimtre
FILTRATION RAPIDE ultra_sons
Adjuvant
TRAITEMENT
Traitement d brute
de leau EAU
BRUTE
58
Matriel et Mthodes
Rservoir
1000m3 O930 R R Rservoir
Consommateur
0,2 0,5mg/l de chlore
A : arrive.
D : dpart.
CR : chlore rsiduel (mg/l).
type danalyse effectu au prlvement.
* lajout de lacide ascorbique ou thiosulfate de sodium.
60
Matriel et Mthodes
Mode opratoire :
Le dosage de ces deux sous produits de chloration volatils (CHCl3 et CHBr3) seffectue par lajout dun solvant
organique trs polaire qui est lther pour permettre leur passage de la phase liquide (leau prleve) la phase
organique (lther) sous leffet de lagitation [99].
Lidentification se fait laide de la chromatographie en phase gaz (CPG) avec dtecteur ionisation de flamme
(FID) utilisant lappareil de marque SHIMADZU GAS CHROMATOGRAPH GC-17A en utilisant la colonne
capillaire FS-SE 30-CB de 25mtre de longueur et de 0,25mm de diamtre par comparaison des temps de
rtention des standards, les rfrences CHCl3 et CHBr3, dans les conditions exprimentales suivantes :
Four : 40C pendant 3 minutes puis chauffage raison de 10C/min.
Temprature de linjecteur, 220-350.
Temprature du dtecteur, 250-340.
Le dosage a t ralis au sein du laboratoire de chimie organique lUniversit BADJI MOKHTAR,
ANNABA.
61
Matriel et Mthodes
Mutation hisD 3052 : mutation dans TA1538 et TA98, ces bactries sont dficientes lenzyme
histidinol dshydrognase. La TA1538 et sa drive r-factor TA98, dtectent des mutagnes de type
-CGCGCGCG -
frameshift . Cette mutation la squence , est rverte par les frameshift
-GCGCGCGC-
mutagnes tel que 2-nitrosofluorne et le daunomycin ce qui conduit la restauration du cadre de lecture
correct pour la synthse de lhistidine.
Mutation hisG 46 : mutation prsente dans TA100 et TA1535, ces bactries sont dficientes la
premire enzyme qui entre dans la synthse de lhistidine. Elle est dtermine par la squence -GGG-
- CCC-
La TA1535 et sa drive r-factor TA100, dtectent les mutagnes qui causent des substituant de pairs de
bases.
Mutation hisC 3076 : Cest une mutation frameshift dans TA1537, elle nest pas squence mais il est
connu quelle contient une cytosine de plus dans une srie dau moins 4 cytosines.
Mutation rfa : cette mutation cause la perte partielle des polysaccharides la surface de la barrire
cellulaire de la bactrie ce qui augmente sa permabilit aux grandes molcules qui sont incapables de
pntrer dans la cellule normale.
Mutation uvrB : cest une dltion du gne codant pour le systme de rparation excision
resynthse , confrant une augmentation de la sensibilit la dtection des mutagnes. Pour des
raisons techniques la dltion du gne uvrB stend jusquau gne bio et par consquent, la
bactrie est aussi auxotrophe la biotine pour crotre.
Plasmide pKM 101 : Ce plasmide porte le gne de rsistance lampicilline (R Factor), il est prsent
dans les souches TA98 et TA100. ces souches portant le facteur de rsistance se rvrtent par des
mutagnes qui sont faiblement dtects par les autres souches. pKM 101qui contient deux gnes
amplifiant le processus SOS de rparation responsable de la mutagense induite [93].
Tableau XV: Diffrents mutations des souches utilises [93, 101].
mutation Histidine
LPS Rparation R-factor
hisC 3076 hisD 3052 hisG 46
62
Matriel et Mthodes
63
Matriel et Mthodes
1-Rclamation de lHistidine :
La mutation his- rend les bactries auxotrophes cet acide amin dans un milieu slectif contient
obligatoirement la biotine.
Avec un couvillon ou une anse de platine faire un seul strie de chaque souche sur
1. des boites de contrle contenant uniquement 100l dune solution (0,5mM) strile de biotine par boite
applique la surface de la glose minimal agar, avec un rteau.
2. des boites his / bio.
Lincubation se fait 37pendant 24h.
2-La sensibilit aux UV :
Le but de ce test est de vrifier lexistence de la mutation uvrB.
Les souches testes et la bactrie sauvage sont dposes en stries sur des boites de glose nutritive.
Le moiti de la boite est couvrit par une plaque en verre ensuite irradier par une lampe UV une distance de
30cm. Lincubation dura 24h 37.
Pendant 8secondes:TA98R et TA100R.
Pendant 6secondes:TA1535, TA1537 et TA1538.
3-La rsistance lampicilline et la sensibilit au cristal violet :
Il faut sassurer de la rsistance lampicilline pour vrifier la prsence du plasmide pKM101 chez la TA98 et
TA100 qui est instable. La sensibilit au cristal violet est le rsultat de la mutation rfa.
Ces deux caractristiques sont testes simultanment. On prpare 3disqus de papier Wattman, chaque disque est
dpos sur boite de glose nutritive imbib de 10l dune des solutions suivantes :
Solution 1mg/ml de cristal violet.
Solution 10 mg/ml dampicilline.
Leau distille strile est utilise comme tmoin.
64
Matriel et Mthodes
Procdure :
Dans des tubes en verre de 20ml, 100l de la culture de nuit mis en contact avec 100l de lchantillon a test
placs en incubation (37,20minutes) avec agitation dans le bain mari. Ensuite 2,5ml de Top agar (glose
molle) sont ajouts au mlange puis verser sur le milieu minimum, laisser se solidifier quelques minutes et enfin
mettre en incubation 48h 37 [93].
65
Matriel et Mthodes
GC4436 sfiA ::Mud(Ap lac) cts F-,thr, leu, his, pyrD, thi,
lacU169 trp::Muc+,srl300::Tn10
malB, uvrB
PQ37 sfiA ::Mud(Ap lac) cts F-,thr, leu, his, pyrD, thi,
lacU169 trp::Muc+,srl300::Tn10
mal+B, uvrA, galE, galY, PhoC, rfa. rpoB.
Pculture de nuit :
A partir de souche conserve dans la glose de conservation, on cultive 50l dans 5ml de milieu La.
Lincubation se fait 37 pendant une nuit avec agitation dans le bain mari.
En parallle avec la souche PQ37, une souche tmoin E.coli sauvage est maintenue dans les mmes conditions
que souche mute mais dans un milieu L.
Le r isolement des souches tests :
A partir de la culture de nuit des souches PQ37 et E.coli sauvage, faire des stries avec une anse de platine dans
des boites de La solide. Les boites sont ensuite incubes 37 pendant 24h et conserves au froid et servirons
comme source de bactries pour des tests ultrieurs. Cette conservation dura jusqu 2 mois.
Le stockage des souches :
Le stockage se fait dans des Eppendorf de 1,2ml. Pour750l de la culture est mlang 750l de glycrol 90%,
la conservation se fait -20. Le mlange est renouveler chaque 6mois.
Vrification des caractres gntiques :
o La culture :
Le but de cette culture est darriver la phase exponentielle de croissance cest dire 2.108 et qui correspond
une DO= 0,4 une longueur donde gale 600nm.
A partir de la culture de nuit on prlve 150l quand dilue dans 5mlde milieu L. On les incube nouveau 37
pendant 2 heures avec agitation. Les bactries sont couvrit de papier Aluminium pour les protger de la lumire
[97].
66
Matriel et Mthodes
2-Mutation rfa :
Cette mutation peut tre vrifi en cultivant les souches PQ37 et E.coli sauvage dans le milieu Mac Conkey
solide qui contient les sels de deoxycholate.
3- La sensibilit aux UV :
Le but de ce test est de vrifier lexistence de la mutation uvrA.
La souche PQ37 et la bactrie sauvage sont dposes en stries parallles sur des boites de milieu La solide.
Le moiti de la boite est couvrit par une plaque en verre ensuite irradier par une lampe UV une distance de
30cm pendant 8secondes.
67
Matriel et Mthodes
Procdure :
*On prlve 100l de la culture de nuit dilue dans 5ml de milieu La liquide, la culture est ensuite incube
37pendant 2h dans un bain mari agitateur pour arriver une concentration de 2.108bactrie/ml.
*Des fractions de 100l de cette culture sont distribues dans des tubes essai strile de 20ml.
*2,5ml de glose molle 45-50 sont additionns dans les tubes.
*Le mlange (culture bactrienne+agar molle) est agit et vers immdiatement sur milieu STA solide (annexe).
*On ajoute lchantillon tester sur la glose molle dj solidifie.
*Incubation 37 pendant 24h.
68
Matriel et Mthodes
1000xA420
Unit denzyme =
T
O :
A420 : La densit optique 420nmde lchantillon.
T : est le temps dincubation en prsence du substrat (ONPG ou PNPP) en minutes (1090 minutes).
-Linduction de -gal par lchantillon test la concentration (c) est obtenue en calculant le rapport R(c) de
lactivit -galactosidase sur lactivit de la phosphatase alcaline.
-gal
R(c)=
PAL
-On en dduit le coefficient dinduction SOS, I pour la concentration (c) par le rapport :
R(c)
I(c)=
R (0)
O :
R (0) : reprsente linduction de -gal du tmoin ngatif en absence de compos.
-Un produit ne sera considr comme tant gnotoxique que :
Si le coefficient dinduction I est suprieur 2 et dans la mesure o cette augmentation provient
seulement dun accroissement significatif de lactivit -galactosidase et non dune inhibition dactivit
de la PAL.
Sil existe une relation dose effet [97].
69
Rsultats et discussion
*Le tableau suivant indique les diffrences saisonnires des paramtres physicochimiques entre leau brute et
leau traite, obtenues par application du test t de Student pour donnes associes par paires .
_ : La plupart des donnes sont infrieurs la gamme (< 0.06), non valable ltude statistique.
/ : Donnes insuffisantes ltude statistique.
P>0.05, il nexiste pas de diffrences statistiques.
P0.05 *, il existe des diffrences significatives.
P0.01**, il existe des diffrences hautement significatives.
P0.001***, il existe des diffrences trs hautement significatives.
Les valeurs de P obtenues IC=95% pour chaque paramtre pendant les quatre saisons exposent la variabilit
de ces paramtres entre leau brute et leau traite c'est--dire de leau destine la consommation avant et
aprs traitement. On observe donc leffet du traitement sur la qualit de leau.
Les rsultats montrent que :
Pour le pH, la diffrence entre leau brute et traite est significative en printemps en hiver et en automne
et trs hautement significative en t.
Pour la matire organique, leffet du traitement est significatif en t et trs hautement significatif en
automne.
Pour la turbidit, leffet du traitement est significatif en t et trs hautement significatif en automne.
La diffrence dans le paramtre couleur est significative en automne.
Rsultats et discussion
Le traitement de leau destine la consommation naboutit pas un changement statistiquement
significatif dans les autres paramtres physicochimiques entre leau brute et leau traite au cours de
lanne.
Comme dans le tableau prcdent, le tableau ci-dessous expose les rsultats de lanalyse de variance deux
critres de classification (eaux, saisons).
_ : La plupart des donnes sont infrieurs la gamme (< 0.06), non valable ltude statistique.
/ : Donnes insuffisantes ltude statistique.
P>0.05, il nexiste pas de diffrences statistiques.
P0.05 *, il existe des diffrences significatives.
P0.01**, il existe des diffrences hautement significatives.
P0.001***, il existe des diffrences trs hautement significatives.
-Les rsultats de lanalyse de variance permettent de montrer linfluence des saisons sur le changement de la
qualit de leau. Linterprtation de ces rsultats indique que le changement saisonnier une influence trs
hautement significative sur le paramtre temprature qui change entre la saison chaude et la saison froide, cette
influence est hautement significative sur la variation de la turbidit qui change en fonction de la pluviomtrie et
le contenu de leau brute en matire organique.
Rsultats et discussion
-leau de consommation change dune saison une autre du point de vue pH, turbidit et matire organique, ce
changement est statistiquement trs hautement significatif, le changement dans le paramtre couleur qui est en
relation avec la prsence dacides humiques et fluviques est aussi significatif au cours des saisons.
La turbidit, la matire organique et la couleur prsentent les paramtres lis la prsence des prcurseurs
potentiels des SPC et la temprature tant le paramtre cls dans la raction chlore - prcurseurs organiques.
Ce mme rsultat a t rapport par LAFFERRIERE M. et al. (1999) [25], qui ont montr par des analyses de
corrlation limportance des paramtres couleur et temprature de leau brute dans la formation des THMs
(Classe de SPC volatils), de mme que la concentration du chlore rsiduel dans leau traite.
*Dans le tableau suivant figurent les rsultats du suivi du chlore rsiduel partir de la sortie de la station de
traitement (SST) et au cours de la distribution.
On remarque qu partir de la sortie de la station de traitement le chlore rsiduel est maintenu au dessus de
1mg/l presque au cours des diffrents points de la chane de distribution pendant le printemps et lt cependant
en automne il se dgrade ou ragit dans la conduite.
En hiver, la faible temprature nexige pas un traitement intensif.
Cette technique est suivie pour prvenir leau traite dune ventuelle contamination dans le rseau de
distribution et viter toute pidmie accidentelle, sachant que pour assurer une bonne dsinfection et empcher
la formation de toute molcule biologique dans les canalisations, la dose de chlore applique doit tre
lgrement suprieure au break point, ce qui explique la concentration du chlore rsiduel 1mg/l. Ce mme
protocole est le mme procd pour les eaux potables dAlger, BIRANE Z. et BOUZID B. (1998) [31], qui
mentionnent aussi que la production de THM est dautant plus importante que ltape de chloration seffectue
plusieurs reprises pendant le traitement et la distribution.
Rsultats et discussion
*La figure 15 reprsente les concentrations des organohalogns (AOX) aux diffrents points de prlvement.
Lanalyse des histogrammes reprsentatifs des taux des organohalogns adsorbables sur charbon actif fait
clairement ressortir que lautomne est la saison critique pour la formation des organohalogns.
Ces rsultats concordent avec ceux obtenues par Le Curieux et al. (1996), qui ont observs des teneurs en
automne suprieurs de 75% 110% ceux rencontrs au printemps, ils expliquent cette teneur leve par la
dcomposition des matires organiques notamment aprs la chute des feuilles. Lhiver est une priode peu
propice la formation des A.O.X. cause de la temprature basse et des faibles doses de chlore ajoutes.
30
25
20
g/litre
15
10
5
0
printemps t automne hiver
Saisons
*Les rsultats du dosage du chloroforme et du bromoforme sont reprsents dans les figures 16-18.
Linterprtation des chromatographes de la CPG montre :
labsence de ces deux composs dans leau brute au cours des saisons.
Lomniprsence du chloroforme dans leau dcante dans toutes les saisons, alors que le bromoforme
na pas pu tre repr en printemps.
Labsence de ces deux composs la sortie de la station de traitement qui probablement nont pas pu
tre dtects par cette technique de dosage.
La prsence du chloroforme et du bromoforme au niveau du dernier point de prlvement en automne
et en t.
La prsence du chloroforme et du bromoforme dans leau traite et leur absence dans leau brute renforce
lhypothse quils sont issus suite au traitement de chloration et la raction du chlore avec les composants
organiques de leau brute.
Rsultats et discussion
Figure 16 : chromatographe du dosage des rfrences CHCl3 et CHBr3.
Rsultats et discussion
Figure 17 : chromatographe du dosage CHCl3 et CHBr3 dans leau brute.
Rsultats et discussion
Ce mme rsultat a t report par de nombreux travaux, YRIEN F. (1986) [26], GIBBBONS J. and LAHA S.
(1994) [33], CHEN W.J and WEISEL C.P. (1998) [35], WILLIAMS D. T. et al. (1998) [36, 37, 38] et
ESPIGARES M. Et al. (2003) [104], ports sur ltude des organohalogns volatils et principalement les
trihalomthanes dont le chloroforme et le bromoforme qui augmentent en fonction du temps de rsidence, de
lloignement par rapport la station de traitement et du taux de chlore applique pour le traitement ds
lentre de leau la station de traitement et jusqu larrive au robinet du consommateur.
1 3
4
2 5
La sensibilit aux UV :
PC
3 PC
4 1
2
5 S
Aprs incubation les bactries mutes poussent uniquement dans la partie cache tandis que la souche sauvage
pousse tout au long de la boite mme dans la partie expose au UV gre la possession du systme de
rparation par excision (uvrA, uvrB et uvrC) ce qui nest pas le cas des autres souches du test dAmes.
1 3 2
1 2
2
3 31
2 1 3 3 1
3 1 2 2
H2O : 1
Ampi : 2
CV : 3
Rsultats et discussion
Test de mutagense: Les rsultats du test dAmes par princubation sont reprsents par des graphes si
dessous en fonction des saisons.
200 40
Printemps Et
180 35
160
nombre de rvertants
nombre de rvertants
30
140
25
120
100 20
80 15
60
10
40
20 5
0 (1) 0
(3) (1) (3)
Tmoin tmoin sst point6 Tmoin tmoin sst point6
positif ngatif positif ngatif
chantillon test chantillon test
TA98 TA100 TA1535 TA98 TA100 TA1535
TA1537 TA1538 TA1537 TA1538
70 800
Hiver
Automne 700
60
nombre de rvertants
50 600
nombre de rvertants
500
40
400
30
300
20
200
10
100
0 (1) 0
Tmoin tmoin sst point6 (2) (3)
Tmoin tmoin E. Brute sst point6
positif ngatif
chantillon test positif ngatif
chantillon test
TA98 TA100 TA1535 TA98 TA100 TA1535
TA1537 TA1538 TA1537 TA1538
Rsultats et discussion
-Ces rsultats du test dAmes sans activation mtabolique montrent que les chantillons deaux prlevs la
sortie de station de traitement ont une activit mutagne directe sur Salmonella typhymurium TA100, qui
dtecte des mutations de type substitution de bases [93], le nombre de rvertants diminue pour les chantillons
prlevs avant distribution finale, au cours des saisons : printemps, t et automne, mais ce nest pas le cas en
hiver. La souche Salmonella typhymurium TA98, qui dtecte des mutations de type frameshift [93], prsente
une cintique inverse celle obtenue avec la TA100, le nombre de rvertants de lchantillon du dernier point
avant distribution est suprieur au nombre des rvertants calcul dans lchantillon prlev la sortie de la
station de traitement.
Pour expliquer ce rsultat on propose deux hypothses :
1. que les mutagnes diffrent au cours de la distribution et pratiquement entre le premier point sortie
station de traitement et le dernier point avant distribution finale. Cette diffrence est aussi en fonction du
changement saisonnier (saison chaude et froide). Cette hypothse est confirme par de nombreux
travaux tudiant la variation spatio-temporelle des diffrents sous produits de dsinfection et non
seulement les sous produits de chloration [35, 36, 37, 38].
2. que la souche TA98 soit beaucoup plus sensible aux organohalogns volatiles (THM) dont la
concentration augmente en fonction de la distance de la station de traitement. tandis que la TA100 est
plus sensible aux organohalogns non volatils (acides actiques, chlorophnols) qui prsentent des
concentrations dcroissantes en fonction de lloignement de la sortie de la station de traitement et de
leffet de stockage [26, 105, 106].
-En ce qui concerne les autres souches :
La TA1535, qui dtecte des mutations de type substitution de bases [93], prsente la mme
cintique que la TA100 en printemps mais non pas au cours des autres saisons.
La TA1537 et la TA1538, qui dtectent des mutations de type frameshift [93, 101], la TA1537
expose la mme cintique que la TA98 quant la TA1538, elle prsente la mme cintique de
sensibilit et de dtection de la TA100 au cours de trois saisons sauf en hiver sa cintique la
mme allure que celle de la TA98.
Ces souches sont moins sensibles que les deux autres TA98 et TA100 [93,101].
Rsultats et discussion
1 1
32
2 2
1 3 3
1 : H2O distille
2 : Ampi
3 : CV
PQ37
E.coli S.
- Sur glose nutritive on remarque que la souche E.coli PQ37 ne pousse pas autour du disque du CV formant
une zone dinhibition claire mais pousse autour du disque de lAmpi et de lH2O. La souche sauvage dE.coli
quant elle prsente une large zone dinhibition autour du disque de lAmpi, tandis quelle pousse
normalement autour du disque de CV et de l H2O.
Rsultats et discussion
La sensibilit de la PQ37 au CV est due au passage de ce compos lintrieur de la cellule bactrienne par
absence de lipopolysaccharides membranaire suite la mutation rfa- et la rsistance de la souche sauvage ce
compos est la consquence de la possession de gne rfa+.
La rsistance de la PQ37 lAmpi est due sa possession du plasmide PKM101. La souche sauvage tant
sensible cet antibiotique.
- on peut confirmer la mutation rfa- aussi par culture sur milieu Mac Conkey qui suite sa composition (la
prsence des sels de deoxycholate) qui empche la pousse de souche mute [97].
La sensibilit aux UV :
PC
1
2
PC : Partie cache
1 : PQ37
2 : E.coli sauvage
- la souche sauvage pousse sur les deux parties cache et expose aux UV gre sa disposition du systme de
rparation uvrA qui rpare les mutations provoques par laction des rayons UV.
- La PQ37 est incapable de pousse sur la partie expose suite labsence du systme de rparation par excision
provoque par la mutation uvrA.
Rsultats et discussion
Test de mutagense :
1. Spot test :
Les rsultats obtenus sont prsents dans la figure 26.
1 1
2
3 2 3
Hiver Printemps
2 1
3
3 1
2
Et Automne
1: eau brute.
2 : eau sortie station de traitement.
3 : eau dernier point dchantillonnage.
Figure 26 : rsultat du spot test.
La prsence dun cercle bleu qui est rsultat de linduction du produit du gne sfiA::lacZ suite un dommage
provoqu lADN bactrien apparat pour :
lchantillon prlev la sortie de la station de traitement au cours de diffrentes saisons, cette induction est la
consquence de leffet gnotoxique provoqu par un ou plusieurs composs prsents dans lchantillon. Ce
rsultat renforce celui obtenu par le test dAmes est support par les travaux YRIEN F. (1986) [26], qui
mentionnent que lactivit mutagne dtecte est due principalement aux composs non volatils, puisque la
lyophilisation qui saccompagne de la perte de la plupart es composs volatils, se traduit par une diminution de
seulement 20% de lactivit mutagne, ce rsultat est aussi support par les tudes tudiant la variation
spatiotemporelle des SPC [35].
Rsultats et discussion
Leau brute stocke pendant des mois. Ce rsultat peut sexpliquer par laugmentation de lactivit
gnotoxique des composs prsents dans leau brute qui sont probablement de nature diffrente aux
sous produits de chloration.
lchantillon prlev au dernier point dchantillonnage avant distribution finale ne montre pas un effet
gotoxique peut tre du au fait de la diminution de la plupart des sous produits de dsinfection
organohalogns savoir les acides chloractiques, les chloractones, les actonitriles et la
chloropicrine en fonction de lloignement par rapport la station de traitement, par leffet du stockage
et de la dgradation possible au cours de la distribution, et par laccroissement de la concentration des
THMs (SPC volatils). Ces rsultats sont montrs dans les travaux de WILLIAMS D. T et al. (1998) [36,
37, 38].
70
Rsultats et discussion
Hiver Automne
2,5 4
3,5
2
3
Zone gnotoxique 2,5 Zone gnotoxique
1,5
I (C)
I (C)
I (C) 2 I ( C)
1 1,5
1
0,5
0,5
0 0
T- T+ E.B S.S.T St T- T+ E.B S.S.T St
chantillons chantilllons
Printemps Et
2,5
4
3,5
2
Zone gnotoxique 3
Zone gnotoxique
1,5 2,5
I (C )
I (C )
2
1 I ( C) I ( C)
1,5
0,5 1
0,5
0 0
T- T+ E.B S.S.T St T- T+ E.B S.S.T St
chantillons chantillons
71
Conclusion
D ans ce travail nous avons mis en uvre deux tests, le SOS chromotest (mthode standard et le SOS spot
test) et le test dAmes (avec pincubation) pour voluer lactivit gnotoxique et / ou mutagne dchantillons
deau prlevs partir de la station de traitement (Chaiba) et au cours de distribution sur diffrents points du
rseau (ville dAnnaba) pendant les quatre saisons.
Ces deux tests ont bien montr lexistence dune variation qualitative des diffrents chantillons au ours des
saisons.
Le mutatest (test dAmes) a t de grande efficacit quant la sensibilit vis--vis le changement
qualitative en sous produits de dsinfection dou on remarque le comportement diffrent des bactries utilises
dans le test, la TA 100 (qui dtecte des mutations de type substitution de bases) est plus sensible aux sous
produits de chloration prsents la sortie de la station de traitement parmi lesquels ceux qui sont de caractre
non volatil sont les plus abondants. La TA 98 (qui dtecte des mutations de type frameshift) est beaucoup plus
sensible aux sous produits qui prdominent plus loin de la sortie de la station de traitement et qui sont
majoritairement de nature volatils.
Le SOS chromotest a renforc les rsultats obtenus par le test dAmes et a aussi montr leffet
gnotoxique provoqu par lchantillon de sortie station de traitement.
Ces rsultats concordent ceux obtenues par plusieurs travaux tudiant les effets gnotoxiques et mutagnes
des chantillons deau concentrs et non concentrs ainsi que ceux dmontrs par des sous produits isols et
tests sparment.
La dtermination des paramtres physicochimiques et le dosage des organohalogns adsorbables sur charbon
actif (A.O.X.) ont servi de support pour lexplication et linterprtation de lactivit mutagne et/ ou
gnotoxique exprime par les chantillons deau potable.
le dosage de deux sous produits volatils les plus tudis et les plus documents lchelle mondiale (CHCl3 et
CHBr3), nous a montr quils sont originaire de leffet de chloration sur les composants organiques
naturellement prsents dans leau brute par leur prsence dans leau traite partir du premier stade de laction
du chlore (prchloration) et aprs dsinfection finale dans le rseau de distribution et leur absence dans leau
brute pendant toutes les saisons.
Ltude de la gnotoxicit dune eau de boisson constitue une approche nouvelle du problme de la
contamination des eaux potables. Lintroduction de la gnotoxicit des eaux comme nouveau critre de qualit
pour les eaux de boisson, en complment des critres physicochimiques et microbiologiques dj en vigueur,
pourrait savrer profitable.
72
Conclusion
Perspectives :
Nous prvoyons didentifier les sous produits de chloration et de tester in vivo le degr gnotoxique sur des
cellules de mammifres et de rechercher leurs effets au niveau de lADN.
73
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Rsum
Toute eau naturelle contient des centaines de substances polluantes, y compris les lments organiques
La chloration diminue considrablement le risque dinfection aigue mme ltale mais entrane en mme
temps la formation de sous produits qui pourraient tre nocifs long terme, le risque de cancer et plus
prcisment le cancer du rectum et de la vessie sont les plus rencontrs. De ce fait la chloration est
sujette plusieurs critiques en vue de mieux grer ce processus important et indispensable qui est le
traitement de leau tout en essayons de minimiser le risque dexposition de la population aux agents
Mots cls : eau potable, chloration, trihalomthanes, mutagense, gnotoxicit, test dAmes, SOS
chromotest.
Summary
Every kind of natural water contains a numerous pollutant substances, like organic elements, salts,
microorganisms and so on ..
Chlorine treatment decrease considerably hazard but involve at the same time the formation of disinfection
by products which can be harmful in long- term, bladder and rectum cancer are the most happen.
Actually, chlorination is subject of many investigations in order to minimize exposition hazard of mutagen
Key word: drinking water, chlorination, trihamethanes, mutagenic, genotoxic, Ames test, SOS chromotest.
1 Test Ames Annexes
Acide citrique............................100g
H2O distille670 ml
D-Biotine...30,9 mg
L-histidine-HCl...............................................24,0mg
H2O distille.....................................................250 ml
Top agar
Agar......................................................................6g
H2O distille..................................................................1000 ml
Ampicilline trihydrat1g
H2O distille100ml
2 Test Ames Annexes
Ampicilline trihydrat0,1g
H2O distille1000ml
H2O distille.100ml
Agar ..15g
H2O distille.930ml
50X VB sels................................................................................................................20ml
40% Glucose................................................................................................................50ml
note: lagar dans leau distille est autoclave 120 pendant 20 minutes, une fois refroidie, nous ajoutons
Agar ..15g
H2O distille.914ml
50X VB sels................................................................................................................20ml
40% Glucose................................................................................................................50ml
strile histidine-HCl-H2O..................................................100mg
Milieu L
Tryptone................................................................................................................................. 10g
Extrait de levure........................................................................................................................5g
NaCl........................................................................................................................................ 10g
Milieu La
Tryptone.................................................................................................................................... 10g
Extrait de levure.......................................................................................................................... 5g
NaCl...................................................................................................................................... 10g
Milieu L solide
Tryptone............................................................................................................................ 10g
Extrait de levure...............................................................................................................5g
Na Cl....................................................................................................................................5g
H2O distille..1000ml
Milieu La solide
Agar............................................................................................................................. 15g
Tryptone............................................................................................................................10g
Extrait de levure..................................................................................................................5g
Na Cl....................................................................................................................................5g
H2O distille................................................................................................................1000ml
Top agar
Agar.................................................................................................................................8g
Na Cl................................................................................................................................8g
H2O distille................................................................................................................1000ml
Milieu M63
Agar................................................................................................................15g
KH2PO4 .......................................................................................................................13,6g
(NH4)2SO4........................................................................................................................2g
FeSO4.........................................................................................................................0,5 mg
Mg.SO4. 7H2O..................................................................................................................0,2g
Milieu STA
Lactose 20%.......................................................................................................................2ml
Glucose 20%......................................................................................................................2ml
Tryptophane 1%................................................................................................................2ml
Thronine 1%....................................................................................................................2ml
Histidine 1%......................................................................................................................2ml
Uracil 1%...........................................................................................................................2ml
Thiamine 1%.....................................................................................................................2ml
M63 qsq...1000ml
6 SOS chromotest Annexes
ONPG400 mg
Tampon phosphate
Na2HPO4.7H2O (0,1M)..61 ml
NaH2PO4.H2O (0,1M)..39 ml
Solution de PNPP
PNPP..400 mg
Tampon P qsq.100 ml
Tampon P
Tris.121 g
SDS1 g
H2O distille..........1000 ml
Tampon B
Na2HPO4................. .16,1 g
NaH2PO4.H2O.....5,5 g
KCl.......................................................................................................................0,75g
Mg SO40,25 g
SDS.2,7 ml
Ajuster le pH 7.
Liste des Tableaux
utilises.
27 La variation spatio-temporelle de 85
lactivit gnotoxique de la PQ37
(SOS chromotest standard).
Liste des abrviations
AN : actonitriles.
BCAN : bromochloroactonitrile.
BDCM : bromodichloromthane.
BDAN : dibromoactonitrile.
BF : bromoforme.
CAA : acides haloactiques.
CDBM : dichlorobromomthane.
CF : chloroforme.
CHBr3 : bromoforme.
CHCl3 : chloroforme.
CHF : Chlorohydroxyfurnones.
CK : chloactones.
CMCF : 3-chloro-4-chloromethyl-5-hydroxy -2(5H) furanone.
CNCl : chlorure de cyanogne
CP : chlorophnols.
CPi : chloropicrine.
DBA : acide dibromoactique.
DBAN : dibromoactonitrile.
DBCM : dibromochloromthane.
DCA : acide dichloroactique.
DCAN : dichloroactonitrile.
DCP : dichloropropanone.
HC : hydrate chloral.
MBA : acide monobromoactique.
MCA : acide monochloroactique.
MCA: 3-chloro-4-methyl-5 hydroxy-2(5H) furanone (MCF) et 3,4 - dichloro 5-hydroxy -2(5H)- furanone.
MCAN : mono chloroactonitrile.
MCP : monochloropropanone.
MX: 3-chloro-4-dichloromethyl-5-hydroxy-2(5H)-furanone.
SPC : sous produits de chloration.
SPD : sous produits de dsinfection.
TBA : acide bromoactique.
TCA : acide chloroactique.
TCAN : trichloroactonitrile.
TCP : trichloropropanone.
THM : trihalomthanes.