Un nmero de modificaciones al parachoques de PCR, cartillas, y polimerasas de

ADN han permitido mejoras del funcionamiento de PCR en los ltimos aos. Estas
modificaciones tambin han permitido la amplificacin directa de PCR en manchas
de sangre as como la amplificacin ms rpida de PCR como ser hablado ms
tarde en el captulo.

Cartillas de mejoramiento

Otra fuente de mejora potencial de reacciones PCR es la cartilla de oligonucletido

s mismo. La figura 4.4 ilustra algunas modificaciones potenciales que han sido
hechas en cartillas de PCR usadas en STR la mecanografa de revisiones. Estas
modificaciones incluyen el empleo de etiquetas de tinte fluorescentes (incluyendo
cartillas de transferencia de energa), enlazadores de no nucletidos para cambiar
la movilidad del producto PCR, extra expiden o invierten cartillas para cubrir
mltiples cartillas que ata posibilidades de sitio, y anlogos de estabilidad alta
como cidos nucleicos cerrados (tabla 4.5)

Trabajo con otras polimerasa de dna

En un esfuerzo para mejorar el xito con muestras de ADN forenses, las polimerasas
alternativas tienen que ser exploradas. Johannes Hedman y sus colegas
Encontraron que el uso de Bio-X-Act Short, ExTaq Hot Start, or PicoMaxx High Fidelity
aporta un mejoramiento significativo en el exito de aplificacin de las muestras de
AmpliTaq Gold-inhibido. Adems, una mezcla de ExTaq Hot Start y PicoMaxx High
Fidelity y la Alta Fidelidad PicoMaxx permiti a 34 de 42 muestras de escena de crimen
"inhibidas" ceder mejores perfiles de ADN que podran ser obtenidos con el estndar
AmpliTaq Gold aplificaciones, las mezclas de polimeras tienen tambin esfuerzos
satisfactorios ayudados de esfuerzos rpidos de PCR.

Efectos estocsticos

Especmenes de ADN forense a menudo poseen bajos niveles de ADN. Cuando se

amplifican son muy bajos los niveles en la plantilla de ADN, un fenmeno conocido como
la fluctuacin estocstica puede ocurrir. Efectos Estocsticos son un muestreo desigual de
los alelos presentes en un individuo cuando slo las molculas de ADN son usadas para
iniciar la PCR. Bajo las condiciones de una plantilla limitada, las cartillas PCR solan
amplificar una regin especfica coherentemente no puede encontrar
y hybridize al juego entero de molculas de ADN presenta en la reaccin de amplificacin
PCR.
Con un lugar heterozygous, donde dos alelos estn presentes, el muestreo desigual de
alelos puede causar el fracaso de descubrir un o ambos ellos. La prdida de alelos solo
se menciona como" el abandono escolar " mientras la prdida de ambos alelos es llamada
" el abandono escolar de lugar. "

Reacciones de PCR que implican niveles de plantilla de ADN debajo de aproximadamente

100 " pg de ADN, o aproximadamente 15 copias de diploid de ADN genmico, han
mostrado para exponer a la salida de alelos. Homozygosity falso pasa si uno del alelos
falla en ser descubierto.

La variacin estocstica (arbitraria) es una ley fundamental fsica del proceso de

amplificacin PCR examinando bajo las cantidades de ADN. Los efectos
estocsticos son la manifestacin como una fluctuacin de resultados entre el
anlisis realizado. En otras palabras, la amplificacin de PCR del mismo extracto
de ADN dos veces puede causar alelos diferentes siendo descubiertos en un lugar.

Alta estabilidad de cidos nucleicos Cartilla de aumentos que templa

anlogos.
Cartilla degenerada (suplementaria)
estabilidad para ayudar con la
amplificacin de ADN en la presencia
de potencial inhibidores de PCR.
Asegura/ prev la amplificacin de
una muestra de ADN, conteniendo
una cartilla, atando la mutacin de
sitio que normalmente causara la
cartilla y no desertando los alelos

Posicin / Ubicacin a lo largo de la Cambia el tamao de producto total

secuencia del ADN objetivo
PCR - si est ms cerca a la regin de
repeticin de STR, entonces un
"miniSTR" amplicons puede mejorar el
xito de amplificacin con muestras de
ADN degradadas o inhibidas - si ms
cerca o ms lejos de la regin de
repeticin de STR, entonces las gamas
de tamao de amplicon pueden caber
ms ptimamente en otro equipo STR o
el examen "interno"