MENDOZA HERNNDEZ MAIREL

MARTNEZ TORRES CRUZ MARA

LABORATORIO DE QUMICA ANALTICA 3

UNIVERSIDAD
AUTNOMA DEL
ESTADO DE MORELOS
CURVA DE CALIBRACIN POR LA
TCNICA DE
ESPECTROFOTOMETRA UV-VIS
PRCTICA N 3 (MANUAL)
OBJETIVO:

Diferenciar los componentes de un colormetro y de un

espectrofotmetro y determinar la concentracin de una muestra por
espectrofotometra UV-VIS.

ANTECEDENTES:

Qu es una curva de calibracin de EFM UV-VIS?

Una curva de calibracin es la representacin grfica de una seal que se

mide en funcin de la concentracin de un analito. La calibracin incluye la
seleccin de un modelo para estimar los parmetros que permitan
determinar la linealidad de esa curva; y en consecuencia, la capacidad de un
mtodo analtico para obtener resultados que sean directamente
proporcionales a la concentracin de un compuesto en una muestra, dentro
de un determinado intervalo de trabajo. En el procedimiento se compara una
propiedad del analito con la de estndares de concentracin conocida del
mismo analito (o de algn otro con propiedades muy similares a este). Para
realizar la comparacin se requiere utilizar mtodos y equipos apropiados
para la resolucin del problema de acuerdo al analito que se debe
determinar.

La etapa de calibracin analtica se realiza mediante un modelo de lnea

recta que consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una
serie de n puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido
por una variable x (variable independiente, generalmente concentracin
del analito de inters), y una variable y (variable dependiente,
generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se encuentra
definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la

ecuacin: y=mx +b .

Para tener una buena exactitud y confiabilidad estratgica, el mtodo ms

empleado para encontrar los parmetros de curva de calibracin es el

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mtodo de los mnimos cuadrados. Este mtodo busca la recta del calibrado
que haga que la suma de los cuadrados de las distancias verticales entre
cada punto experimental y de la recta de calibrado sea la mnima o tienda a
0. A la distancia vertical de cada punto experimental y la recta de calibrado
se le conoce como residual. En forma grfica se representa como:

Independientemente de la tcnica instrumental responsable de la seal

analtica (cuyas caractersticas se estudian en forma particular) los
parmetros que se determinan a partir de las curvas de calibracin obtenidas
con cualquiera de ellas son:

La linealidad.
La sensibilidad.
El lmite de deteccin.
El lmite de cuantificacin.
El intervalo analtico.

Entre todo ello tambin se encuentra:

Linealidad del sistema de medicin.

Sensibilidad.

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 La incertidumbre en la deteccin.
La curva del calibrado con adicin estndar.

Los factores que determinan la calidad de una calibracin son:

o Precisin de las medidas.

o Exactitud de los patrones.
o Validez de la calibracin.
o Modelos de calibracin.

EQUIPO USADO:

Celdas de plstico.
Espectrofotmetro UV-VIS.
8 matraces volumtricos de 10 mL.
2 pipetas volumtricas (1 y 5 mL).
Matraz aforado de 50 mL.
Perilla.

PROCEDIMIENTO:
1. Se pesan 0.0075 g de colorante azul de metileno y se afora a 50mL.
Cuntas partes por milln del colorante hay en la solucin? 150 ppm.
2. Qu cantidad de volumen mediras del estndar anterior para
poder preparar nuevos estndares de 15, 30, 45, 60, 75, 90, 105 y
120 ppm, si se requiere de cada una de ellas un volumen de 10 mL?
*Resultados en la parte de clculos.
3. Hacer un barrido automtico eligiendo cada uno de los estndares y
un blanco (agua destilada).
4. Una vez que esta han sido seleccionadas, medir la absorbancia de
cada uno de los estndares y elabora una curva de calibracin
graficando concentracin contra absorbancia.
5. Con los datos obtenidos, obtenga la ecuacin, saque la pendiente y
la ordenada al origen y reporte la concentracin de la muestra.

CLCULOS:
Clculo del stock en ppm:

mg
(
0.025 g 1000
g)=25 mg

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 L 25 mg mg
(
1 m3 0.1
m
3 )
=0.1 L
0.1 L
=250
L
=250 ppm

Ahora partiendo de un stock de 150 ppm:

mg 1g
x=150
L
( 0.05 L ) =7.5 mg x=7.5 mg ( 1000mg )=0.0075 g

Clculo de estndares:

15 ppm(10 mL) 75 ppm (10 mL)

=1mL =5 mL
150 ppm 150 ppm

30 ppm (10 mL) 90 ppm (10 mL)

=2mL =6 mL
150 ppm 150 ppm

45 ppm (10 mL) 105 ppm( 10 mL)

=3 mL =7 mL
150 ppm 150 ppm

60 ppm(10 mL) 120 ppm(10 mL)

=4 mL =8 mL
150 ppm 150 ppm

RESULTADOS:

Curva de calibracin del Azul de metileno; identificacin de concentracin.

Longitud de Estndar Absorcin

onda
590 15 ppm 0.019
590 30 ppm 0.044
590 45 ppm 0.109
590 60 ppm 0.154
590 75 ppm 0.243
590 90 ppm 0.264

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 590 105 ppm 0.368
590 120 ppm 0.436

Curva de calibracin
0.5

0.4 f(x) = 0.06x - 0.07

R = 0.98
0.3

0.2

0.1

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9

OBSERVACIONES:
Los clculos se ajustaron a una nueva concentracin para poder determinar
la concentracin conocida con una nueva hacha a partir de un stock de 120;
a lo que partimos de uno de 150 para determinar concentraciones mediante
la curva de calibracin.

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 CONCLUSIONES:
Es posible determinar la concentracin de una solucin de concentracin
desconocida mediante una curva de calibracin, en este caso una solucin
que tena una concentracin del 0.16 a un stock de 120 ppm. Cabe
mencionar que se debe aplicar un conocimiento tcnico y racional para
poder partir de cierto stock y estndares.

CUESTIONARIO:
1. En que se fundamenta la espectrofotometra UV-Vis?
En ocasiones las desviaciones se fundamentan de la ley de Beer y
representan limitaciones propias.
Involucra una absorcin de ultravioleta-visible.

2. Qu rangos de longitudes de onda tiene un espectrofotmetro UV-

VIS?
La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195
a 400 nm.
3. Qu origina la absorcin de la radiacin UV-Vis?
El color juega un papel importante, siendo ondas que no perciben
nuestros ojos. Por lo cual, se absorbe la luz y se pasa por un prisma en
este caso nuestras celdas.

4. Qu diferencia existe entre un colormetro y un espectrofotmetro?

Colormetro: Capaz de trabajar, no solo
Trabaja nicamente en el con la luz visible, si no que
espectro de luz visible y en otras regiones del
selecciona una longitud de espectro electromagntico
onda determinada mediante (UV e IR). Posee un
filtros fijos. monocromador para
seleccionar la longitud de
onda deseada
Espectrofotmetro:
5. Define absorbancia y transmitancia:

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 Absorbancia: Cuando un haz Transmitancia: Cantidad de
de luz incide sobre un cuerpo energa que atraviesa un
traslucido, una parte de esta cuerpo en
luz es absorbida por el determinada cantidad de
cuerpo y el haz de luz tiempo.
restante atraviesa dicho
cuerpo.
6.
7. Qu enuncia la ley de Beer?
8. Que la absorbancia est directamente relacionada con las propiedades
intrnsecas del analito, con su concentracin y con la longitud de la
trayectoria del haz de radiacin al atravesar la muestra.
9. A=C E L
10.
11. Qu nombre reciben los compuestos que absorben luz UV-Vis?
Analito. Azometino.
Tiocetona. Azo.
Acido tinico. Nitroalcano.
12.
13. Qu es una curva de calibracin?
14. Es la representacin grfica de una seal que se mide en funcin
de la concentracin del analito.
15.

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