Ao de la Diversificacin

Productiva y del Fortalecimiento de

la Educacin
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD
DE
INGENIERA
INGENIERA
AGROINDUST
RIAL
INFORME DE LABORATORIO N 03

DEMOSTRACIN DE LA NATURALEZA
PROTEICA DE LA ENZIMA CATALASA EN
VEGETALES

CURSO: Bioqumica.

DOCENTE: Blga. Carmen Yzsiga

Barrera.

CICLO: III.

GRUPO: B.

INTEGRANTES:
1. Anastacio Jurez Jorge Luis.
2. Huincho Aquio Sonia Marisol.
3. Vsquez Villacorta Nelly Sofa.

2015
DEMOSTRACIN DE LA NATURALEZA PROTEICA
DE LA ENZIMA CATALASA EN VEGETALES

I. INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas altamente especializadas que tienen un
papel muy importante en la vida celular, son biocatalizadores porque
aceleran la velocidad de las reacciones qumicas, actan en pequeas
cantidades y permanece inalterada despus de la reaccin donde
participa.
La actividad de algunas enzimas depende realmente de su estructura
como protenas, la especificidad de reaccin implica que una enzima
cataliza solo una de las varias modificaciones que pueden ocurrir sobre
un sustrato.
El cambio en la cantidad de moles o gramos de material inicial o de los
productos de la reaccin por unidad de tiempo es denominado como
velocidad de reaccin. Las reacciones ms simples como son la
autolisis de los tejidos animales, de considerable inters para la
industria alimenticia, en lo que se refiere al ablandamiento de la carne
durante el sazonado, son catalizadas por las catepsinas, las cuales se
liberan y activan luego de ocurrida la muerte. El efecto acelerador es uno
de los ms altos que se conocen, multiplica la velocidad de reaccin
hasta en un milln de veces.

Las enzimas se pueden clasificar segn su estructura, en simples y

compuestas. Son simples cuando estn formadas slo por protenas y
son compuestas cuando estn formadas por una parte proteica y una
prosttica.
La catalasa es una enzima que se encuentra presente en todos los
sistemas vivos, y forma parte del proceso en el cual se destruye el
perxido de hidrgeno generado durante el metabolismo celular,
precisamente, por eso realizamos los experimentos, para entender cmo
se lleva a cabo el metabolismo celular, el cual es el conjunto de
reacciones qumicas a travs de las cuales el organismo intercambia
materia y energa con el medio, un ejemplo de ellos es el proceso de la

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 respiracin aerbica.

II. MATERIALES Y MTODOS

1. Se llev un da antes de realizar la prctica: la manzana, papa y tomate
verde a refrigerar a 70C.
2. Se pelaron el tomate, la manzana y la papa verde, se elimin la cascara,
y se almaceno el pericarpio.
3. Se limo el pericarpio congelado, luego se agreg 4 ml de Buffer fosfato
0.1 M pH 6.5
4. Se filtr el extracto rudo a travs de dos capas de gasa y luego se
centrifugo a 10 000mrpm por 15 minutos y se guard las alcuotas a
18C.
5. Se separaron en 6 tubos de ensayo m1.0 ml de la muestra(enzima)
6. Se rotularon los tubos de ensayo: 1 tubo lo dejamos con el 1ml de la
enzima, al 2 tubo de ensayo le agregamos 2.4ml de NaOH 2N, 3 tubo
de ensayo se agreg 2.4 ml de HCL 0.5N, 4 tubo de ensayo se agreg
ATCA 20%,5 tubo se agreg CuSO4 20%.6 tubo de ensayo se agreg
Buffer fosfato 0.05 M pH 6,5.
7. Se dejaron en reposo los 6 tubos de ensayo durante 20 minutos a 30C.
8. Se prepararon nuevamente 6 tubos de ensayo pero cada uno con un
contenido de 2.0 ml de Buffer fosfato 0.05 M pH 6.5, NaCl 0.15 M 1.0 ml
y 1.0 ml d H2O2 3%.
9. Se pre incubaron las muestras por 2 minutos a 25C .luego se agreg 2
ml a cada uno de los tubos la enzima tratada en los tubos anteriores.
10. Se dej en incubacin por 5 minutos a 25C y se determinaron la
actividad enzimtica cualitativamente.

III. DISCUSIN
En la prctica realizada se demostr que la catalasa es una enzima que
tiene naturaleza proteica y por lo tanto es afectada por los mismos
factores de desnaturalizacin tales como el pH.
En el libro Bioqumica Ilustrada Harper, se dice que: El ndice de casi
todas las reacciones catalizadas por enzima muestra una dependencia
importante de la concentracin de ion hidrgeno. Casi todas las

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 enzimas intracelulares muestran actividad ptima a valores de pH entre
5 y 9. La relacin entre actividad y concentracin de ion hidrgeno
refleja el equilibrio entre la desnaturalizacin de enzima a pH alto o
bajo, y los efectos sobre el estado cargado de la enzima, los sustratos
o ambos. El objetivo de la prctica era demostrar que la
desnaturalizacin de la enzima se produca variando el pH. Por eso se
prepararon 6 tubos de ensayo que contenan la enzima catalasa. El
primero contena solamente la enzima, a los cinco restantes se les
agreg diferentes compuestos que alteraran su pH, tales como bases,
cidos y sales, adems de una solucin amortiguadora. Al segundo
tubo se le agreg la base NaOH, a los tubos 3 y 4 se aadieron cidos
(HCl y ATCA respectivamente), mientras que al quinto tubo se le aadi
la sal CuSO4 y por ltimo, al tubo 6 se le agreg una solucin
amortiguadora (Buffer Fosfato).
Se determin la actividad enzimtica mediante la formacin o ausencia
de gas (en forma de burbujas). El burbujeo indica la presencia de O2
que es el producto de la reaccin catalizada por la enzima catalasa. La
meta final de la prctica era demostrar que solo en los tubos 1 y 6
habra actividad enzimtica, puesto que solamente contenan catalasa
pura (el primero) y Buffer Fosfato (el ltimo), este buffer tiene un pH 6,5
y por fundamento terico se sabe que este pH era el adecuado para
que la enzima acte de manera ptima. Mientras que en los otros tubos
la enzima habran sufrido una desnaturalizacin, esto porque los cidos
y las bases provocan que el pH aumente o disminuya, y por
consiguiente la enzima pierde su actividad cataltica. Sin embargo, no
se obtuvieron del todo los resultados esperados, debido a errores en el
procedimiento.
IV. CONCLUSIONES

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V. RECOMENDACIONES
Tener siempre puesto el guardapolvo al realizar cualquier prctica de
laboratorio.
Contar con todos los materiales a usarse en la prctica, especialmente
tubos de ensayo y pipetas que se usaron ms en esta prctica.
Tener mucho cuidado al momento de pipetear las muestras, en esta
prctica se usaron sustancias no aptas para ingerir y por lo tanto se
debera de realizar con sumo cuidado y ser guiados por el docente a
cargo.
Evitar en lo posible de mover nuestro precipitado que se forma al
centrifugar, para evitar as una posible centrifugacin ms.
Manipular los equipos con la presencia de nuestra docente.
Lavar los materiales usados en la prctica y colocarlas en su respectivo
lugar.

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VI. CUESTIONARIO

7.1 Qu es un extracto crudo?

Una preparacin pura de una protena es esencial para poder
determinar sus propiedades y su actividad. La fuente de una protena
son generalmente clulas tisulares o microbianas. El primer paso en
cualquier purificacin de protenas es la rotura de estas clulas, para
libera sus protenas en una solucin denominada extracto crudo. Un
mtodo muy usado para realizar la rotura celular es la lisis celular. El
resultado de la lisis celular es un lisado u homogenado que contiene
una mezcla de protenas, membranas y clulas rotas. Esta preparacin
se somete a centrifugacin. La fase soluble constituye el extracto
crudo donde se encuentra la protena de inters.

7.2 A qu clase de enzima corresponde la catalasa? Su nombre y

su cdigo EC:
La catalasa pertenece a la clase de las oxidorreductasas. Cataliza la
descomposicin del perxido de hidrgeno (H 2O2) en oxgeno y agua.
Nombre sistemtico:
Perxido de hidrgeno: perxido de hidrgeno oxidorreductasa
Nmero EC:
1.11.1.6

7.3 Qu otros factores pueden considerarse para demostrar que

las enzimas son protenas?
La actividad biolgica de la protena depende en gran medida de su
estructura terciaria especfica, de tal manera que cuando una protena
se somete a: calor, determinadas sustancias qumicas, cambios
bruscos de pH, etc. su estructura terciaria se desorganiza y las
cadenas peptdicas adquieren una conformacin al azar que induce a
la prdida de su actividad biolgica especialmente cuando acta como
enzima. La prdida de la estructura terciaria se denomina
desnaturalizacin, y siempre se acompaa de la alteracin de las
funciones biolgicas normales de las protenas. La desnaturalizacin se
puede originar por calor o concentraciones altas de sustancias polares

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 y solventes no polares tales como la Urea que rompen los puentes de
hidrgeno que mantienen la estructura de la protena.
7.4. Indique 4 enzimas que puedan extraerse de vegetales:
1. Almidn sintasa.
2. Peroxidasa.
3. Clorofilasa.
4. Pectinmetilesterasa.

7.5. Importancia de las enzimas:

Las enzimas son polmeros biolgicos que catalizan las reacciones
qumicas que hacen posible la vida tal como la conocemos. La
presencia y el mantenimiento de un conjunto completo y equilibrado de
enzimas son esenciales para la desintegracin de nutrientes a fin de
que proporcionen energa y bloques de construccin qumicos; el
montaje de esos bloques de construccin hacia protenas, DNA,
membranas, clulas y tejidos, y la utilizacin de energa para impulsar
la motilidad celular, la funcin neural y la contraccin muscular.
Adems de servir como los catalizadores para todos los procesos
metablicos, su impresionante actividad cataltica, especificidad para
sustrato y estereoespecificidad permiten a las enzimas desempear
funciones clave en otros procesos relacionados con la salud y el
bienestar de seres humanos. Las enzimas proteolticas aumentan la
capacidad de los detergentes para eliminar suciedad y colorantes. Las
enzimas tienen importancia en la produccin de productos alimenticios
o el aumento del valor nutriente de los mismos tanto para seres
humanos como para animales.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

VII.1 Braverman, J.B. 1980. Introduccin a la Bioqumica de los

alimentos. El manual moderno. Mxico.

VII.2 Metzler, E. D. 1981. Bioqumica, Omega. Barcelona.

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VII.3 Nelson, D.L. y Coz, M.M. Lehninger. Principles of Biochemistry.
D4th ed. Barcelona: Omega S.A.; 2006

VII.4 Murray, R.K. y col Bioqumica de Harper. 13 ed. Mxico. El

Manual moderno S.A; 1995.