UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUA COMPONENTE PRCTICO

201504 BIOTECNOLOGA

FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDES

Director Nacional

PASTO
ENERO DE 2017
1. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

Autor Gua: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDS

Versiones: 2006-2010,2016
Actualizaciones: FEDRA LORENA ORTIZ BENAVIDES
Versiones: 2010 - 1 - 2010 2-2014-1, 2016

El presente Documento se rige por la normatividad que con base a derechos de

autor de publicaciones universitarias ha expedido la Direccin Nacional de
Derechos de Autor, de all que el presente documento se reglamente bajo la
Circular No 16 del 15 de Abril de 2002 expedida por este organismo de control
pblico a las Instituciones de educacin superior, sobre "Los Derechos de Autor
en el mbito Universitario". Al igual que los reglamentos sobre derechos de Autor
consagrados en la Ley No. 23 de 1982 sobre Derechos de Autor del congreso de
la repblica de Colombia y la Ley No. 44 de 1993 que hace adiciones a la Ley 23
del 82.

Para tales efectos se establece que el presente Documento hace parte de los
repositorios documentales y digitales la Universidad Nacional Abierta y a
Distancia UNAD de Colombia.
@CopyRight
Universidad Nacional Abierta y a Distancia
ISBN
2017
Centro Nacional de Medios para el Aprendizaje
PUNTAJE TOTAL DEL COMPONENTE PRCTICO: 100 PUNTOS.

FECHA : 20 de febrero al 7 de Mayo de 2017

2. CARACTERSTICAS GENERALES

El desarrollo de la biologa en las ltimas cuatro

dcadas, ha hecho posible el desarrollo de
sofisticados, procedimientos para el aislamiento,
Introduccin manipulacin y expresin de material gentico, lo que
ha llevado consigo al avance de una nueva disciplina:
La Biotecnologa. , la cual tiene aplicaciones tanto
en la investigacin bsica, como en la aplicada. Las
tcnicas de esta ciencia se han utilizado para estudiar
los mecanismos de la replicacin y expresin gnicas
en procariotas, eucariotas y sus virus. Algunos de los
ms importantes descubrimientos bsicos de la
gentica se han realizado utilizando tcnicas
ingenieriles. En cuanto a la investigacin aplicada, la
Biotecnologa permite el desarrollo de cultivos
microbianos capaces de fabricar productos valiosos,
tales como la insulina humana, la hormona humana
del crecimiento, interfern, vacunas y enzimas
industriales. La aplicacin industrial de la
Biotecnologa, parece tener un potencial ilimitado.
La Biotecnologa, se ha convertido en la herramienta
para un nuevo desarrollo social, basado en el
conocimiento del funcionamiento de la vida y sus
posibilidades de manipularlo y transformarlo. Su
impacto en la Medicina, la agricultura, el
mejoramiento de las especies, la evolucin, la
industria alimenticia y la farmacologa, dan muestra
de la importancia que tiene esta disciplina, que se ha
convertido sin lugar a dudas en la base de la
revolucin tecnolgica que ha acaparado la atencin
de los cientficos y gobiernos como posible estrategia
para encontrar soluciones a los problemas que
aquejan a la humanidad.
Dada la naturaleza interdisciplinaria de la
Biotecnologa, se ha desarrollado esta gua de
laboratorio con el fin de que los estudiantes
Justificacin complementen los conceptos tericos con la prctica,
al mismo tiempo que desarrollen competencias
procedimentales que les permita en un futuro prximo
llevar a cabo proyectos de investigacin pero
igualmente les permita mejorar su desempeo laboral
en la medida que sean capaces de buscar soluciones
prcticas a problemas Biotecnolgicos industriales.

Propsitos: Fomentar las bases conceptuales y

procedimentales que le permitan al estudiante hacer
uso de nuestros recursos biolgicos de forma
Intencionalidades sustentable y de esta forma contribuya con el
desarrollo tecnolgico y cientfico de nuestro pas
formativas
Objetivos:
gunos procedimientos empleados para la
obtencin de producto utilizando los fundamentos
biotecnolgicos.

un determinado productos y su aplicacin industrial.

los
procedimientos tcnicos utilizados en Biotecnologa.
Metas: El estudiante identificar y resolver las
diferentes actividades de aplicacin donde demuestre
suficiente dominio de los conceptos cientficos y
tcnicos en el campo de la Biotecnologa
El estudiante describir diferentes procedimientos
biotecnolgicos vistos en las prcticas de laboratorio y
presentara un informe en el que analizara los
resultados con suficientes argumentos tcnicos y
cientficos.
Competencias: El estudiante describe y analiza y
aplica de manera suficiente las condiciones tcnicas
para el desarrollo de las biotecnologas de
fermentacin en sus diversas modalidades y usos, as
Intencionalidades como en el modelamiento de procesos a cargo de
formativas enzimas y microorganismos, apoyado en el estudio de
protocolos de manejo de los insumos biotecnolgicos
los descubrimientos y avances de la microbiologa en
la historia de la humanidad.
 Prctica 1: Normas generales de Bioseguridad
Prctica 2: Determinacin de la curva de crecimiento
en organismos unicelulares
Denominacin de Practica 3: Cuantificacin de azucares
Practica 4:Aislamiento de microorganismos
practicas
productores de amilasa

Prctica 5: Aislamiento de ADN Bacteriano

3. DESCRIPCIN DE PRCTICAS

PRACTICA No. 1 NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD

Propsito:

Conocer los principales equipos con los cuales se trabaja en un laboratorio de

microbiologa y conocer y aplicar las normas de bioseguridad que se deben tener
en un laboratorio.

Objetivo:

Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.

Fundamentacin Terica

La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir

el riesgo de transmisin de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena,
las especies exticas invasoras, organismos vivos modificados.

Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en

prctica varias normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir
enfermedades.

Descripcin de la prctica

A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier

laboratorio y los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por
favor realice una buena lectura pero principalmente ponga en prctica todas las
recomendaciones.

Normas generales de bioseguridad.

Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar,

correr o gritar.
No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no
porten sus implementos de bioseguridad adecuados.
No se permitir el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohlicas
o sustancias psicoactivas.
Para el ingreso a los laboratorios, prstamo de material o equipo se debe
presentar el carnet vigente.
Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente
y siempre que se produzca un derrame.
Usar bata de manga larga con puos, la cual debe estar completamente
cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los
elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas,
manillas, reloj o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los
materiales o equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el
laboratorio.
Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias
qumicas o biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en
diluciones, agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente
responsable del laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie
corra peligro de quemarse.
 Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a
ser incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin
en autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para
el medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los
elementos y materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar
cerrado el gas, agua y lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes
destinados para este fin siguiendo las indicaciones del docente
responsable del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.
Trabajo con material de vidrio
No se debe calentar recipientes de vidrio comn.
No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de
vidrio vacos o hmedos por fuera en la parrilla elctrica.
Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que
queden sobre ellos.
Comprobar la temperatura del material de vidrio.
No forzar el cierre del material.
Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan
estado sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.
No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que
al rayar la superficie debilitan el vidrio.
Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.
Al lavar la vidriera de laboratorios no se debe someter a cambios brusco
de temperatura.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Folleto de normas de bioseguridad, folleto de disposicin de residuos slidos.

Metodologa

Deben llevar al laboratorio un pre informe donde resuelvan las siguientes

preguntas:

Qu es bioseguridad?

Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de

microbiologa?

En el laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.

PRACTICA No. 2 CURVA DE CRECIMIENTO MICRIBIANO.

Propsito:
Ejercitar de la determinacin de la curva de crecimiento de organismos
unicelulares (levaduras), determinando los parmetros principales que la
caracterizan.

Objetivo:

Realizar una curva patrn para la determinacin de crecimiento en levaduras.

Fundamentacin Terica

El crecimiento microbiano est definido como el aumento armnico e irreversible

de masa y estructura. Esto puede estar acompaado o no de la divisin celular,
ya que sta no es un obligatorio requerimiento.

En el cultivo de microorganismos en condiciones artificiales, es muy empleado

el cultivo batch, discontinuo o en lote. Generalmente se trata de un cultivo en
medio lquido, aireado o esttico y a temperatura constante, y en el cual se parte
de una pequea poblacin inicial o inoculo. En este no se adiciona medio fresco
ni se extrae material exhausto, por lo cual todos los parmetros varan con el
tiempo, es decir, es un proceso en estado transiente. Bajo estas condiciones, si
determinamos el comportamiento de una poblacin de organismos unicelulares
en funcin del tiempo (log del # de clulas o de viables o de absorbancia vs
tiempo) podremos al menos observar cuatro etapas o estadios fisiolgicos
conocidos en su conjunto como curva de crecimiento. Existen muchos mtodos
para la medicin del crecimiento. Entre los ms utilizados se encuentran:
recuento total de clulas, conteo de viables, peso seco y turbidimetra. Este
ltimo es el ms empleado para organismos unicelulares por la rapidez y
facilidad con que se logran los resultados, midiendo la densidad del cultivo a
medida que este crece. Para ello se utilizan los fotocolormetros o
espectrofotmetro.

El aspecto de la curva de crecimiento vara de acuerdo con las condiciones del

cultivo, el medio empleado y caractersticas del inculo (edad del cultivo y
medio de donde proceda) entre otros aspectos.

Descripcin de la prctica

Esta prctica consiste en que los estudiantes a partir de un mtodo fotomtrico

midan la curva de crecimiento de un microorganismo, ya que dentro de la
Biotecnologa de las fermentaciones es necesario conocer las caractersticas
metablicas del microorganismo con el fin de optimizar las condiciones de
rendimiento y obtencin del producto deseado. De esta manera los estudiantes
estarn en capacidad de emprender estudio de optimizacin de crecimiento
microbiano en las empresas alimentarias o biotecnolgicas que requieran de
estos procedimientos.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Material
Curva de crecimiento.-
-cua de c/u de las cepas de Saccharomyces cerevisiae en medio malta-
agarizado (18 h)
-erlenmeyers de 100 ml con 20 ml de medio extracto de malta, estriles (2)
-erlenmeyers de 250 ml con 48 ml de medio extracto de malta, estriles (9)
-placas de medio extracto de malta-agar (10)
-tubos de ensayo con 9 ml de solucin salina estril (80)
-reactivo 3,5-dns 500 ml o reactivos del fenol sulfrico 500 ml
-puntas estriles para las pipetas automticas. en su defecto
-pipetas de 1 y 5 ml, estriles. (35 de c/u)
-placas de medio extracto de malta-agar (80)
-tubos de ensayos de 15 x 150 mm (30)
-fotocolormetro
-centrfuga
-zaranda orbital (shaker)
-vortex
-microscopios.

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el

desarrollo de la prctica: Los datos se los puede ingresar a Excel con el fin
de obtener la curva de crecimiento, pero esto no es un requisito necesario para
la prctica

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Crecimiento microbiano,

modelos matemticos aplicados al crecimiento microbiano, espectrofotometra.
Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes, mximo
cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los implementos
de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern entregar al tutor
que dirija la prctica.
Procedimiento: 1. Preparacin del inoculo

1.1. Prepare una suspensin de microorganismos a cultivar por lavado de un

tubo con agar inclinado de 18 h de incubacin con 5 ml de agua destilada estril.

1.2. De la suspensin, inocule aspticamente 1 ml en erlenmeyer de 100 ml que

conteniendo 19 ml de medio lquido apropiado (caldo nutritivo).

1.3 incube por 18-20 h con agitacin. Este ser el inoculo.

2. Determinacin de la Cintica de crecimiento

Transfiera 10 ml de inculo a frascos erlenmeyers de 250 ml con 50 ml del

mismo medio estril, e incube con agitacin a 37 c. (Agitacin magntica).Tome
aspticamente 2 ml de cultivo a las 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; y 3 horas y lea la
D.O. a 600 nm en un espectrofotmetro y consigne los datos. Grafique la
absorbancia en funcin del tiempo.

Tabla 1. Resultados de la curva de crecimiento

Tiempo Absorbancia 600 nm

0
0.5
1
1.5
2
2.5
 3

La muestra debe desecharse en un frasco conteniendo fenol al 5 % y la cubeta

lavada con solucin de fenol en cada medicin. Emplee como blanco medio sin
inocular.

Sistema de evaluacin. De acuerdo a lo acordado con el tutor de prctica.

PRACTICA No. 3 Cuantificacin de azucares

Propsito:

El estudiante comprender la importancia de conocer el metabolismo de los

microorganismos promisorios a nivel industrial
.

Objetivos:

Establecer los mtodos para cuantificar el consumo de diferentes tipos

de sustrato por diferentes microorganismos

Fundamentacin Terica

Los microorganismos consumen diferentes tipos de sustratos, pero poseen

preferencia por un tipo particular de sustrato y algunos resultan no consumibles
para algunas cepas de una especie en particular. Cuando dos o ms sustratos
estn presentes en el medio de cultivo, los microorganismos no los consumen
por igual, sino que consumen preferencialmente uno de ellos hasta agotarlo.
Solo en este punto inician el consumo del siguiente sustrato preferido. Este
fenmeno se conoce como diauxia.
Esa preferencia por un sustrato en particular es diferente para cada una de las
cepas de un organismo, y puede ser medida como la variacin en la velocidad
de crecimiento, consumo de sustrato o generacin de producto.

Descripcin de la prctica

Para que un microorganismo produzca el metabolito deseado es necesario

proporcionarle un sustrato que garantice un mayor rendimiento. Para ello, es
necesario realizar diferentes ensayos que nos permita saber las diferencias en
preferencia de diferentes tipos de sustrato. En este ejercicio de laboratorio
analizaras estadsticamente las diferencias existentes en el consumo de
diferentes tipos de azcar por diferentes cepas comerciales de levaduras.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos/Materiales).

8 x 2 g de levadura seca o hmeda de cerveza o de panadera. Preferiblemente

3 grupos de laboratorio deben trabajar con el mismo tipo de levadura.
200 cm3 de solucin de fructosa 0.2M
200 cm3 de solucin de galactosa 0.2M
200 cm3 de solucin de glucosa 0.2M
200 cm3 de solucin de lactosa 0.2M
200 cm3 de solucin de maltosa 0.2M
200 cm3 de solucin de rafinosa 0.2M
200 cm3 de solucin de sucrosa 0.2M
8 x 0.5g de ortofosfato dihidrogeno de amonio
8 x 0.5g de sulfato de amonio
(Alternativamente puede emplearse 1g de nutriente de levadura disponible
comercialmente, para reemplazar las dos sales de amonio)
8 x 250 cm3 erlenmeyers
8 x tapones de caucho con dos orificios
Varillas de vidrios
Bureta de 50 cm3
Jeringas aforadas de 25 cm3 o equivalentes para muestreo
8 x 100 cm3 erlenmeyers para titulacin
Solucin de hidrxido de sodio 0.1M (alrededor de
400cm3) So lucin indicadora de fenolftaleina y gotero.

Metodologa
Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Nutricin y
metabolismo microbiano,
Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes,
mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los
implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern
entregar al tutor que dirija la prctica.
Procedimiento: 3.2 Curva patrn (Concentracin de azucares totales)
A partir de caldo estril (5 g/l = 5000 mg/l = 5.000.000 ug/l) obtenga una
solucin de 150 ug/l (solucin estndar)
A partir de la solucin estndar prepare diluciones de 100 ug/l, 70 ug/l, 50 ug/l,
25 ug/l, 10 ug/l, y 5ug/l.

En un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin de fenol al 5 %,

mezclndolos bien. Se aade entonces 5 ml de cido sulfrico al 95% se esperan
30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm.
Consigne los datos de absorbancia como se muestra en la siguiente tabla para
cada uno de los azucares.
Tabla 1. Resultado de cuantificacin de azucares

Azcar 100mg/k 70 mg/k 50 mg/k 25mg/k 10mg/k 5mg/k

mg/k
absorvancia

En Excel obtenga la ecuacin de regresin lineal que relaciona la

Concentracin de azcar con la absorbancia, con punto de corte en 0,0
y = ax
y= absorbancia,
x = concentracin de azcar

3.3 Cuantificacin de azcar consumido

De los tiempos 0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; y 3 horas colecte muestras para
cuantificar azucares totales. Colecte 100mlts y dilyalos hasta 3ml de esta
muestra tome 1ml en un erlenmeyer de 50 ml y se le aade 1 ml de solucin de
fenol al 5 %, mezclndolos bien. Aada 5 ml de cido sulfrico al 95%. Se
esperan 30 minutos y se lee la absorbancia a 489 nm.

Aplique la ecuacin (x= y/a). y el resultado divdalo por 0.33 (factor de

Disolucin) elabore una grfica en donde relacione produccin de biomas y
consumo de sustrato.

4: Variables de respuesta

2,3 (log x2 - log x1)

-----------------------------
t2 - t 1
yx/s = - (x2 x1) / (s2 s1)

PRACTICA No. 4 Aislamiento de microorganismos productores de

amilasa
Propsitos: Que los estudiantes identifiquen las caractersticas metablicas de
microorganismos productores de enzimas amilolticas.

Objetivo: Aislar y seleccionar microorganismos productores de enzimas amilolticas

a partir de muestras de suelo.

Metas: El estudiante entregar un informe de laboratorio dnde describir

claramente el procedimiento de aislamiento de microorganismos productores de
enzimas amilolticas, as como sus caractersticas morfolgicas.
Competencias: El estudiante durante el laboratorio podra ejecutar con desenvoltura
y propiedad cada una de las actividades propuestas durante la prctica; cmo
tambin demostrar fluidez en la escritura del informe de laboratorio demostrando
coherencia cientfica entre la metodologa desarrollada, los resultados y las
conclusiones

Fundamentacin Terica

El almidn est conformado por un polmero lineal de glucosa llamado amilosa

y por un polmero ramificado tambin de glucosa llamado amilopectina; lo que
hace, que sea considerado como un polmero natural con una alta riqueza
calrica, la degradacin del mismo en las molculas de glucosa que
representan energa para las clulas se realiza a partir de enzimas
extracelulares como la amilasa, la cual es segregada por una gran variedad
de microorganismos en ambientes naturales. Uno de los objetivos de la
biotecnologa es encontrar microorganismos productores de enzimas, que
bajo condiciones ptimas produzcan enzimas a nivel industrial.

Descripcin de la prctica

En esta prctica se identificaran microorganismos aislados del suelo capaces

de producir amilasa.

Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las
paredes del tubo. Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Para un grupo:
50 ml de agua destilada previamente esterilizada agua peptonada 0.1%
(p/v)
- Pipeta de 10 ml
- Pipetas de vidrio 1 ml estril
- 1 gr de tierra seca recogida 1 cm por debajo de la superficie, de diferentes
sitios tambin a diferentes alturas se pueden tomar muestras de diferentes
tipos de suelo (Se debe colocar en bolsas estriles y rotular). Mnimo utilizar
tres muestras
- Una solucin de yodo
- Bastoncillos de algodn estril
- Cajas de petri estril con 15 a 20 mm con nutriente de agar preparado con
0,2 de almidn soluble
- Rotulador
Metodologa

Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes,

mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los
implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern
entregar al tutor que dirija la prctica.
Procedimiento:
1. Mezclar un gramo de tierra seca y diluirlo con 15 ml de agua esterilizada
2. Sembrar en superficie en una placa de agar nutriente / almidn y extender la
muestra uniformemente por toda la superficie
3. Rotular la caja petri con el nombre del grupo, fecha y sitio de muestra
4. Incubar a 30 grados durante 48 horas.
5. Realizar el recuento de todas las colonias, de cada uno de los sitios
6. Vierta con mucho cuidado la dilucin de yodo sobre las placas inoculadas hasta
cubrir completamente la superficie del agar. Las zonas en que todava quede
almidn se teirn de un color entre azul y negro. S los microorganismos han
degradado el almidn aparecern zonas de color marrn claro
7. Realice el recuento de aquellas colonias que presenten halos de hidrlisis
alrededor de las mismas. Este recuento corresponder a las colonias con
actividad amilo ltica.
8. Mida con una regla el dimetro en milmetros (mm) de cada uno de los halos.
Teniendo en cuenta la siguiente frmula: C= A-B en donde:
A. Dimetro de la colonia ms el halo de hidrlisis en mm
B. Dimetro de la colonia en mm
C. Dimetro del halo de la hidrlisis en mm
9. Escriba los resultados de los puntos 5, 7 y 8 en la siguiente tabla.
 Sitio de N. de N. de colonias Dimetro del halo de Hidrlisis
muestreo colonias con halos de colonias ms
totales amilo lticos representativas
Col 1
Col 2
Col 3
Col 4

PRACTICA No. 5 Tcnicas de ingeniera gentica aplicada a la Biotecnologa

Propsitos: Que los estudiantes reconozcan la importancia de las tcnicas de

ingeniera gentica aplicadas al desarrollo Biotecnolgico.

Objetivo: Aislar los cidos nucleicos de la Bacteria Scherichia colli

Metas: El estudiante entregar un informe de laboratorio dnde describir
claramente el procedimiento de aislamiento de cidos nucleicos en bacterias y
la importancia de la tcnica en el desarrollo de la Biotecnologa
Competencias: El estudiante durante el laboratorio podr ejecutar con
desenvoltura y propiedad cada una de las actividades propuestas durante la
prctica; cmo tambin demostrar fluidez en la escritura del informe de
laboratorio demostrando coherencia cientfica entre la metodologa desarrollada,
los resultados y las conclusiones presentadas.

Fundamentacin Terica

Sin lugar a dudas con el descubrimiento de la doble estructura axial del cido
"Desoxi-ribonucleico" (ADN) por Crick y Watson en 1953, seguido por los
procesos que permiten la inmovilizacin de las enzimas, los primeros
experimentos de ingeniera gentica realizados por Cohen y Boyer en 1973 y
aplicacin en 1975 de la tcnica del "hibridoma" para la produccin de
anticuerpos "monoclonales", gracias a los trabajos de Milstein y Kohler.
(1983). Han constituido un avance sin precedentes en el desarrollo de la
Biotecnologa. Estos importantes descubrimientos han dado lugar a
numerosos trabajos de mejoramiento gentico tanto en plantas como
animales; el cultivo de tejidos vegetales y animales a partir de clulas madre,
y el importante acontecimiento de la aparicin de la oveja Dolli en el contexto
cientfico, que dio un vuelco total al concepto de Biotecnologa.
Descripcin de la prctica

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Cultivo previamente preparado de Scherichia colli

- Lizozima en polvo
- 6 ml de etanol frio
- 0, 5 ml de detergente domstico
- Sistema de inoculacin
- 3 ml de agua destilada
- Tubos de ensayo
- Pipetas de 1 ml Pasteur
- Bao Mara a 60C
- Incubadora a 37C

Metodologa

Conocimiento previo para el desarrollo de la prctica: Conocimiento

previo para el desarrollo de la prctica: Estructura de los cidos nucleicos.

Forma de trabajo: Los estudiantes formarn grupos de tres estudiantes,

mximo cinco, quienes sern responsables de la ejecucin de la prctica, los
implementos de laboratorio y la elaboracin del informe final que debern
entregar al tutor que dirija la prctica.

Procedimiento:
1. Preparar un cultivo de E. Colli en un caldo nutritivo y dejarlo madurar por lo
menos durante 4 das
2. Aadir 10 mg de lisozima a 5 ml de suspensin bacteriana y agitarla durante
2 minutos
3. Incubar la mezcla durante 30 minutos a 37 C
4. Aadir a la suspensin bacteriana 5 ml de detergente domstico
5. Llevar la mezcla a bao mara a 60C durante 2 minutos
6. Enfriar la mezcla en agua fra
7. Lentamente y con mucho cuidado verter etanol frio sobre la superficie de la
mezcla de manera que forme una capa
8. Los cidos nucleicos precipitarn en la capa superior de etanol de la cual se
extraern utilizando una pipeta
9. Se puede aadir unas gotas de azul de metileno con el fin de teir el ADN y
volverlo ms visible.

7. FUENTES DOCUMENTALES

1. AYALA FRANCISCO. Evolucin molecular, Edicin Omega, Barcelona 1980

2. BURGES A. Biologa del suelo. Edicin Omega S.A. Barcelona 1971

3. BYONG H. Lee Fundamentos de Biotecnologa de los alimentos Editorial

Acribia, Zaragoza. (1996).

4. CAMACHO RUBIO y otros, Hidrolizados enzimticos de inters en la I.A.A.(II)

Hidrolizados enzimticos de protenas. Alimentos, Equipos y Tecnologa.
XI.10.1992

5. CRUGER Y CRUGER. Biotecnologa: Manual de Microbiologa Industrial.

Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa. 1989

6. CRUZ L. Revista Ciencia. Impacto social de la Biotecnologa. El desafio cubano.

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7. DE CHISTI y MOO-YOUNG, in Biotecnologie di Base, Ratledge, C., Kristiansen,

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8. GALINDO FENTANES, E. Seleccin y diseo de fermentadores a varias escalas.

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